專利名稱：：一種具有抗腫瘤活性的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥物組合物，特別是涉及一種化合物5,6-二甲咕噸酮-4-乙酸(DMXAA)或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種的協(xié)同組合，它們具有更強(qiáng)的抗腫瘤活性。
背景技術(shù)：
：腫瘤的生長(zhǎng)依賴腫瘤內(nèi)部血管網(wǎng)絡(luò)的形成，在癌細(xì)胞和相關(guān)巨噬細(xì)胞釋放的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子促進(jìn)下，大量新生血管形成，癌細(xì)胞持續(xù)增生，氧氣和葡萄糖大量消耗，酸性代謝產(chǎn)物堆積，刺激新生血管形成，新血管又促進(jìn)癌細(xì)胞群體的迅速膨脹，循環(huán)往復(fù)，腫瘤不斷擴(kuò)大。因此，阻止血管的形成和功能將是腫瘤治療的重要途徑。血管生成抑制劑是一類能夠破壞或抑制血管生成，有效地阻止腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的藥物，是目前抗腫瘤靶向治療研究的一個(gè)新靶點(diǎn)，它為腫瘤的治療開辟了一條新的途徑。以腫瘤血管作為靶向的成敗關(guān)鍵在于找出腫瘤血管與正常組織內(nèi)部血管之間的差異?，F(xiàn)有資料表明，與正常組織血管相比，腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增生迅速，新生血管多；對(duì)低氧環(huán)境和酸性代謝產(chǎn)物更加敏感。由于與癌細(xì)胞相互靠近，癌細(xì)胞又可能改變其血管內(nèi)皮細(xì)胞的特性，從而制備以腫瘤血管為特異攻擊目標(biāo)的化學(xué)和生物制劑成為可能。DMXAA作為一種新型的腫瘤血管生成抑制劑，能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞及宿主細(xì)胞內(nèi)部激活的巨噬細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子(TNF-cO、干擾素等免疫因子的產(chǎn)生。當(dāng)TNF-a以及干擾素等免疫因子的含量達(dá)到一定水平后.既能夠直接殺死癌細(xì)胞，抑制人表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞和人毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，還能夠引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，產(chǎn)生出血性和凝固性壞死，使腫瘤組織中心性壞死，從而達(dá)到腫瘤治療的目的。5，6-二甲基咕噸酮-4-乙酸(DMXAA)由下式表示目前已完成DMXAA化合物的I期臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)表明它在人體可耐受劑量下不可逆地抑制腫瘤血流效果顯著。作為第一批抗血管藥物之一，其抗血管活性產(chǎn)生長(zhǎng)時(shí)間的抑制腫瘤血流作用，導(dǎo)致廣泛的出血性壞死區(qū)域。但是，有研究表明由充分灌注的外周中的存活細(xì)胞快速再生出腫瘤，顯然DMXAA不太可能具有作為單一試劑或藥物的臨床用途。因此，尋求DMXAA與其它抗腫瘤藥物的組合應(yīng)用更為重要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明就是為了解決上述技術(shù)問題，而提供一種具有抗腫瘤活性的藥物組合物，目的是增強(qiáng)DMXAA抗腫瘤活性。為了達(dá)到上述目的本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明一方面提供了一種具有抗腫瘤活性的藥物組合物的組合方法，所述方法包括給需要這種治療的哺乳動(dòng)物，包括人同時(shí)或順序的施用有效量的DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和有效量的選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種藥物。另一方面，本發(fā)明提供了一種DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯用于制備與選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物同時(shí)或順序給藥以治療癌癥的藥物的應(yīng)用。另一方面，本發(fā)明提供了一種選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、'芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物用于制備與DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯同時(shí)或順序給藥以治療癌癥的藥物的應(yīng)用。另一方面，本發(fā)明提供了DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯用于制備與選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物的組合。優(yōu)選的糖肽類抗生素為平陽(yáng)霉素。優(yōu)選的放線菌素類為放線菌素D。優(yōu)選的絲裂霉素類為絲裂霉素C。優(yōu)選的糖苷抗生素為光輝霉素。優(yōu)選的秋水仙屬生物堿為秋水仙堿。優(yōu)選的欖香烯類為欖香烯。優(yōu)選的芳香化酶抑制劑為來曲唑。優(yōu)選的LH-RH受體拮抗劑為亮丙瑞林。優(yōu)選的動(dòng)物類抗腫瘤藥為去甲斑蝥素。優(yōu)選的生長(zhǎng)抑素類似物為生長(zhǎng)抑素。因此，在本發(fā)明中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物可以是例如選自平陽(yáng)霉素、放線菌素D、絲裂霉素C、光輝霉素、秋水仙堿、欖香烯、來曲唑、亮丙瑞林、去甲斑蝥素、生長(zhǎng)抑素的藥物。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物可以是例如選自平陽(yáng)霉素、放線菌素D、絲裂霉素C、光輝霉素、秋水仙堿、來曲唑、亮丙瑞林、去甲斑蝥素、生長(zhǎng)抑素的藥物。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果如下通過大量實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)，順序或同時(shí)地組合DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種，優(yōu)選選自平陽(yáng)霉素、放線菌素D、絲裂霉素C、光輝霉素、秋水仙堿、欖香烯、來曲唑、亮丙瑞林、去甲斑蝥素或生長(zhǎng)抑素的藥物中的任意一種，實(shí)現(xiàn)了DMXAA抗腫瘤活性的增強(qiáng)。下面通過實(shí)施例及試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。具體實(shí)施例方式DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物可以同時(shí)或順序給藥。優(yōu)選DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種以增效比率存在。其中"增效比率"用于表示DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物進(jìn)行組合時(shí)，組合的抗腫瘤活性大于單獨(dú)的DMXAA或單獨(dú)的選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物的抗腫瘤活性。因此，如果各組分以增效比率存在，則它們的組合發(fā)生協(xié)同作用?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和糖肽類抗生素如平陽(yáng)霉素的增效比率范圍為100:11:20的DMXAA:糖肽類抗生素，適宜的增效比率范圍為25:11:10，優(yōu)選的比例范圍為10:11:5?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和放線菌素類如放線菌素D的增效比率范圍為1000:11:1的DMXAA:放線菌素類，適宜的增效比率范圍為1000:11:1，優(yōu)選的比例范圍為500:11:1?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和絲裂霉素類如絲裂霉素C的增效比率范圍為200:11:1的DMXAA:絲裂霉素類，適宜的增效比率范圍為100:11:1，優(yōu)選的比例范圍為50:15:1?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和糖苷類抗生素如光輝霉素的增效比率范圍為100:11:5的DMXAA:糖苷類抗生素，適宜的增效比率范圍為80:11:3，優(yōu)選的比例范圍為50:11:1?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和秋水仙屬生物堿如秋水仙堿的增效比率范圍為20:11:10的DMXAA:秋水仙屬生物堿，適宜的增效比率范圍為10:11:5，優(yōu)選的比例范圍為5:11:2?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和欖香烯類如欖香烯的增效比率范圍為10:11:5的DMXAA:欖香烯類，適宜的增效比率范圍為5:11:3，優(yōu)選的比例范圍為3:11:2?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和芳香化酶抑制劑如來曲唑的增效比率范圍為20:11:10的DMXAA:芳香化酶抑制劑，適宜的增效比率范圍為10:11:5，優(yōu)選的比例范圍為5:11:3?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和LH-RH受體拮抗劑如亮丙瑞林的增效比率范圍為10:11:10的DMXAA:LH-RH受體拮抗劑，適宜的增效比率范圍為5:11:3，優(yōu)選的比例范圍為2:11:2?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和生長(zhǎng)抑素類似物如生長(zhǎng)抑素的增效比率范圍為200:11:1的DMXAA:生長(zhǎng)抑素類似物，適宜的增效比率范圍為100:11:1，優(yōu)選的比例范圍為50:15:1?？梢猿晒Φ匾种颇[瘤的DMXAA和動(dòng)物類抗腫瘤藥如去甲斑蝥素的增效比率范圍為100:11:1的DMXAA:動(dòng)物類抗腫瘤藥，適宜的增效比率范圍為50:11:1，優(yōu)選的比例范圍為20:12:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是平陽(yáng)霉素。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是放線菌素D。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是絲裂霉素C。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是光輝霉素。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是秋水仙堿。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是欖香烯。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是來曲唑。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是亮丙瑞林。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是生長(zhǎng)抑素。在一個(gè)實(shí)施方案中，選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是去甲斑蟊素。作為抗腫瘤藥劑所需的DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物的組合數(shù)量，最終由臨床醫(yī)生根據(jù)病情實(shí)際情況決定其變化。DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物可以任何適宜的形式給藥。DMXAA可以根據(jù)JournalofMedicinalChemistry34(1):217-22，1991年1月所述的方法進(jìn)行制備。糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物是已知的藥物。本發(fā)明包含了上述的適宜和優(yōu)選的所有組合。下面將通過以下實(shí)施例說明本發(fā)明，而不是用于對(duì)其進(jìn)行限定。實(shí)施例lDMXAA與平陽(yáng)霉素的協(xié)同組合材料細(xì)胞株人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞試驗(yàn)用藥的配制:DMXAA臨用前用5%的碳酸氫鈉溶解，然后用RPM1640培養(yǎng)液配成需要濃度；平陽(yáng)霉素(PYM)臨用前生理鹽水溶解，然后用RPMI1640培養(yǎng)液配成需要濃度。細(xì)胞培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞接種于無菌培養(yǎng)瓶中，加入適量RPMI1640培養(yǎng)液，于37X:、5%C02及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單純貼壁生長(zhǎng)，每2-3天傳代1次。傳代時(shí)用3g/L胰蛋白酶消化1min，用培養(yǎng)液吹打制成細(xì)胞懸液，按需要的濃度接種。方法1、DMXAA與平陽(yáng)霉素(PYM)聯(lián)合用藥協(xié)同抑制人肺癌A549細(xì)胞將DMXAA和平陽(yáng)霉素(PYM)以單藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50[ig/mL)，平陽(yáng)霉素(PYM)(100、10、lpg/mL),聯(lián)合組(DMXAA:50pg/mL與PYM:100、10、ljig/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肺癌A549細(xì)胞，以5xl()3個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積100^iL，培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入DMXAA和新鮮培養(yǎng)液50pL/孔，對(duì)照組加入50^L新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入平陽(yáng)霉素50pL/孔，在37'C、5%C02條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用RPMI1640培養(yǎng)液lOOpL清洗細(xì)胞，除去RPMI1640培養(yǎng)液后，每孔加入20MLMTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150pLDMSO溶解，振蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀492'nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫坐標(biāo)、抑制率為縱坐標(biāo)繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算。抑制率(。/。)-[A492(對(duì)照)一A492(給藥組)]/[A492(對(duì)照)一A492(空白對(duì)照)]xl00X2、DMXAA與平陽(yáng)霉素(PYM)聯(lián)合用藥協(xié)同抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞將DMXAA和平陽(yáng)霉素(PYM)以單藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50pg/mL)，平陽(yáng)霉素(PYM)(IO、5、2.5pg/mL),聯(lián)合組(DMXAA:5(Hig/mL與PYM:10、5、2.5pg/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌SMMC-7721細(xì)胞，以5xl()3個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積100nL，培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入DMXAA和新鮮培養(yǎng)液50nL/孔，對(duì)照組加入50pL新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入細(xì)胞毒類抗癌藥50pL/孔，37°C，5%<:02條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用RPMI1640培養(yǎng)液100清洗細(xì)胞，除去RPM1640培養(yǎng)液后，每孔加入20pLMTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150^L的DMSO溶解，振蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀492nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫坐標(biāo)、抑制率為縱坐標(biāo)繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算。抑制率(％)=[A92(對(duì)照)一A92(給藥組)]/[A92(對(duì)照)_A92(空白對(duì)照)]x100%3、Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法計(jì)算公式(fa)2=1_[1—(fa)l][l—(fa)2](fa)l、(fa)2分別表示兩藥的抑制率(fa)1，2表示計(jì)算的理論相加效應(yīng)。如果聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)，則表示協(xié)同。結(jié)果1、DMXAA與平陽(yáng)霉素(PYM)聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制作用表1為DMXAA，平陽(yáng)霉素(PYM)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞幾乎沒有抑制作用(抑制率^).54Q^)，平陽(yáng)霉素與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制率升高。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算合并用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(即實(shí)際抑制率〉(fa)1，2)，DMXAA與平陽(yáng)霉素(PYM)聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。表1.DMXAA,平陽(yáng)霉素(PYM)單獨(dú)給藥與聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用G士》<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>2、DMXAA與平陽(yáng)霉素(PYM)聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制作用表2為DMXAA，平陽(yáng)霉素(PYM)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞抑制作用很小(抑制率^10^)，平陽(yáng)霉素(PYM)與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制率顯著升高，抑制率最高可增加36.82%。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算聯(lián)合用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(S卩實(shí)際抑制率〉(fa)1,2)，DMXAA與平陽(yáng)霉素聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。表2.DMXAA,平陽(yáng)霉素單獨(dú)給藥與聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用(^士力<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實(shí)施例2DMXAA與放線菌素D的協(xié)同組合材料細(xì)胞株人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞試驗(yàn)用藥的配制:DMXAA臨用前用5%的碳酸氫鈉溶解，然后用RPM1640培養(yǎng)液配成需要濃度；放線菌素D臨用前生理鹽水溶解，然后用RPMI1640培養(yǎng)液配成需要濃度。細(xì)胞培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞接種于無菌培養(yǎng)瓶中，加入適量RPMI1640培養(yǎng)液，于37。C、5%C02及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單純貼壁生長(zhǎng)，每2-3天傳代1次。傳代時(shí)用3g/L胰蛋白酶消化lmin,用培養(yǎng)液吹打制成細(xì)胞懸液，按需要的濃度接種。方法1、DMXAA與放線菌素D(AMD)聯(lián)合用藥協(xié)同抑制人肺癌A549細(xì)胞將DMXAA和放線菌素D(AMD)以單藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50pg/mL)，放線菌素D(10、1、0.1pg/mL)，聯(lián)合組(DMXAA:50pg/mL與AMD:10、1、0.1^ig/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肺癌A549細(xì)胞，以5xl(^個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積100^iL，培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入DMXAA和新鮮培養(yǎng)液50mL/孔，對(duì)照組加入50pL新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入放線菌素D(AMD)50nL/孔，于37°C、5XC02條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用RPMI1640培養(yǎng)液lOO^L清洗細(xì)胞，除去RPMI1640培養(yǎng)液后每孔加入20nLMTT(5g/L),繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150pLDMSO溶解，振蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀492nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫坐標(biāo)、抑制率為縱坐標(biāo)繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算。抑制率(％)=[夂92(對(duì)照)—A492(給藥組)]/[A492(對(duì)照)一A492(空白對(duì)照)]x100x2、DMXAA與放線菌素D(AMD)聯(lián)合用藥協(xié)同抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞將DMXAA和放線菌素D(AMD)以單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50i^ig/mL)，放線菌素D(O.l、0,05、0.025pg/mL),聯(lián)合組(DMXAA:50pg/mL與AMD:0.1、0.05、0.025ng/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌SMMC-7721細(xì)胞，以5xl()S個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積100nL，培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入DMXAA和新鮮培養(yǎng)液50pL/孔，對(duì)照組加入50pL新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入放線菌素D(AMD)50pL/孔，于37°C、5%032條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用RPM1640培養(yǎng)液IOOmL清洗細(xì)胞，除去RPMI1640培養(yǎng)液后每孔加入20mLMTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150jaLDMSO溶解，振蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀492nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫軸、抑制率為縱軸繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>3、Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法計(jì)算公式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>其中(fa)l、(fa)2分別表示兩藥的抑制率(fa)1,2表示計(jì)算的理論相加效應(yīng)。如果聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)，則表示協(xié)同。結(jié)果1、DMXAA與放線菌素D(AMD)聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制表3為DMXAA,放線菌素D(AMD)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞幾乎沒有抑制作用(抑制率^).54%)，放線菌素D(AMD)與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制率升高。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算聯(lián)合用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(即實(shí)際抑制率〉(fa)1，2)，DMXAA與放線菌素D(AMD)聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。表3.DMXAA,放線菌素D(AMD)單獨(dú)給藥與聯(lián)合用藥給藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用(;士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>2、DMXAA與放線菌素D(AMD)聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制表4為DMXAA，放線菌素D(AMD)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞抑制作用很小(抑制率^0%)，放線菌素D(AMD)與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制率顯著升高，抑制率最高可增加66.21%。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算聯(lián)合用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(即實(shí)際抑制率〉(fa)1,2)，DMXAA與放線菌素D(AMD)聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。表4.DMXAA,放線菌素D(AMD)單獨(dú)給藥與聯(lián)合用藥給藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用(;切)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實(shí)施例3DMXAA與絲裂霉素(MMC)的協(xié)同組合材料細(xì)胞株人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞試驗(yàn)用藥的配制:DMXAA臨用前用5%的碳酸氫鈉溶解，然后用RPM1640培養(yǎng)液配成需要濃度；絲裂霉素(MMC)臨用前生理鹽水溶解，然后用RPMI1640培養(yǎng)液配成需要濃度。細(xì)胞培養(yǎng)-人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞接種于無菌培養(yǎng)瓶中，加入適量RPMI1640培養(yǎng)液，于37'C，5%C02及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單純貼壁生長(zhǎng)，每2-3天傳代l次。傳代時(shí)用3g/L胰蛋白酶消化lmin，用培養(yǎng)液吹打制成細(xì)胞懸液，按需要的濃度接種。方法1、DMXAA與絲裂霉素(MMC)聯(lián)合用藥協(xié)同抑制人肺癌A549細(xì)胞將DMXAA和絲裂霉素(MMC)以單獨(dú)藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50ng/mL)，絲裂霉素(MMC)(2、1、0.5|xg/mL)，聯(lián)合組(DMXAA:50pg/mL與MMC:2、1、0.5|xg/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肺癌A549細(xì)胞，以5xl()3個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積100ML,培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入DMXAA和新鮮培養(yǎng)液50nL/孔，對(duì)照組加入50pL新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入絲裂霉素(MMC)50^iL/孔，在37°C、5XC02條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用RPMI1640培養(yǎng)液100nL清洗細(xì)胞，除去RPMI1640培養(yǎng)液后，每孔加入20MLMTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150pLDMSO溶解，振蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀492nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫坐標(biāo)、抑制率為縱坐標(biāo)繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算。抑制率(％)=[^92(對(duì)照)一~92(給藥組)]/[A492(對(duì)照)一A492(空白對(duì)照)]x100x2、DMXAA與絲裂霉素(MMC)協(xié)同抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞將DMXAA和絲裂霉素(MMC)以單藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50^ig/mL)，絲裂霉素(MMC)(2、1、0.5|xg/mL)，聯(lián)合組(DMXAA:50^ig/mL與MMC:2、1、0.5pg/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌SMMC-7721細(xì)胞，以5xl()3個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積100nL，培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入DMXAA和新鮮培養(yǎng)液50mL/孔，對(duì)照組加入50pL新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入絲裂霉素(MMC)50pL/孔，在37°C、5XC02條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用RPMI1640培養(yǎng)液lOO^iL清洗細(xì)胞，除去RPMI1640培養(yǎng)液后，每孔加入20MLMTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150^LDMSO溶解，振蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀492nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫坐標(biāo)、抑制率為縱坐標(biāo)繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算。抑制率(％)=[~92(對(duì)照)一~92(給藥組)]/[A492(對(duì)照)一A492(空白對(duì)照)]X100%3、Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法計(jì)算公式(fa)l，2=l—[1—(fa)l][l—(fa)2]其中(fa)l、(fa)2分別表示兩藥的抑制率(fa)1，2表示計(jì)算的理論相加效應(yīng)。如果聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)，則表示協(xié)同。結(jié)果1、DMXAA與絲裂霉素(MMC)聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制表5為DMXAA，絲裂霉素(MMC)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞幾乎沒有抑制作用(抑制率^).54%)，絲裂霉素(MMC)與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制率升高。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算聯(lián)合用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(即實(shí)際抑制率〉(fa)1，2)，DMXAA與絲裂霉素(MMC)聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。表5.DMXAA,絲裂霉素(MMC)單獨(dú)給藥與聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用(&力<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>2、DMXAA與絲裂霉素(MMC))聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制作用表6為DMXAA，絲裂霉素(MMC)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞抑制作用很小(抑制率^10^)，絲裂霉素(MMC)與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制率顯著升高，抑制率最高可增加60.38%。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算聯(lián)合用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(即實(shí)際抑制率〉(fa)1，2)，DMXAA與絲裂霉素(MMC)聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。表6.DMXAA,絲裂霉素(MMC)單獨(dú)給藥與聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用G士》實(shí)施例4DMXAA與欖香烯(EE)的協(xié)同組合材料細(xì)胞株人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞試驗(yàn)用藥的配制:DMXAA臨用前用5%的碳酸氫鈉溶解，然后用RPM1640培養(yǎng)液配成需要濃度；欖香烯(EE)臨用前生理鹽水溶解，然后用RPMI1640培養(yǎng)液配成需要濃度。細(xì)胞培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞接種于無菌培養(yǎng)瓶中，加入適量RPMI1640培養(yǎng)液，于37"C、5%C02及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單純貼壁生長(zhǎng)，每2-3天傳代l次。傳代時(shí)用3g/L胰蛋白酶消化lmin，用培養(yǎng)液吹打制成細(xì)胞懸液，按需要的濃度接種。方法1、DMXAA與欖香烯(EE)聯(lián)合用藥協(xié)同抑制人肺癌A549細(xì)胞抑制率(％)DMXAA(50pg/mL)MMC(2.5|ig/mL)DMXAA(50ng/mL)+MMC(2.5ng/mL)MMC(5pg/mL)DMXAA(50pg/mL)+MMC(5|ig/mL)MMC(10ng/mL)DMXAA(50ng/mL)+MMC(10pg/mL)細(xì)胞對(duì)照空白對(duì)照將DMXAA和欖香烯(EE)以單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50pg/mL)，欖香烯(EE)(80、40、20|_ig/mL)，聯(lián)合組(DMXAA:50pg/mL與EE:80、40、20pg/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肺癌A549細(xì)胞，以5xl(^個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積100ml,培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入DMXAA和新鮮培養(yǎng)液50(iL/孔，對(duì)照組加入50^iL新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入欖香烯(ee)50ml/孔，在37'c、5%<302條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用RPMI1640培養(yǎng)液IO(VL清洗細(xì)胞，除去RPMI1640培養(yǎng)液后，每孔加入2(VLMTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150^LDMSO溶解，振蕩IO分鐘，于酶標(biāo)儀492nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫坐標(biāo)、抑制率為縱坐標(biāo)繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算。抑制率(％)=[~92(對(duì)照)一A啦(給藥組)]/[A492(對(duì)照)一A492(空白對(duì)照)]X100X2、DMXAA與欖香烯(EE)聯(lián)合用藥協(xié)同抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞將DMXAA和欖香烯(EE)以單藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50pg/mL)，欖香烯(EE)(20、10、5pg/mL)，聯(lián)合組(DMXAA:50pg/mL與EE:20、10、5pg/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌SMMC-7721細(xì)胞，以5xl(^個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積100nL，培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入DMXAA和新鮮培養(yǎng)液5(HiL/孔，對(duì)照組加入50ML新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入欖香烯(EE)50mL/孔，在37-c、5%c02條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用RPMI1640培養(yǎng)液100pL清洗細(xì)胞，除去RPMI1640培養(yǎng)液后，每孔加入20^LMTT(5g/L),繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150^LDMSO溶解，振蕩IO分鐘，于酶標(biāo)儀492nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫坐標(biāo)、抑制率為縱坐標(biāo)繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算。抑制率(％)=[夂92(對(duì)照)—A492(給藥組)]/[A492(對(duì)照)一A492(空白對(duì)照)]X100X3、Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法計(jì)算公式(<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>其中(fa)l、(fa)2分別表示兩藥的抑制率(fa)1,2表示計(jì)算的理論相加效應(yīng)。如果聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)，則表示協(xié)同。結(jié)果1、DMXAA與欖香烯(EE)聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制表為DMXAA，欖香烯(EE)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞幾乎沒有抑制作用(抑制率^).54%)，欖香烯(EE)與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制率升高。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算聯(lián)合用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(即實(shí)際抑制率〉(fa)1，2，DMXAA與欖香烯(EE)聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>DMXAA(50ng/mL)+NCTD(80ng/mL)0.377±0.02243.74細(xì)胞對(duì)照0.600±0.05—空白對(duì)照_0.098±0.005_一2、DMXAA與欖香烯(EE))聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制表8為DMXAA，欖香烯(EE)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞抑制作用很小(抑制率^10%)，欖香烯(EE)與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制率顯著升高，抑制率最高可增加40%。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算聯(lián)合用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(即實(shí)際抑制率>(fa)1，2)，DMXAA與欖香烯(EE)聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。表8.DMXAA,欖香烯(EE)單獨(dú)給藥與聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用(;^)。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>實(shí)施例5DMXAA與去甲斑蝥素的協(xié)同組合材料.*細(xì)胞株人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞試驗(yàn)用藥的配制:DMXAA臨用前用5%的碳酸氫鈉溶解，然后用RPM1640培養(yǎng)液配成需要濃度；去甲斑蝥素臨用前生理鹽水溶解，然后用RPMI1640培養(yǎng)液配成需要濃度。細(xì)胞培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞和肝癌SMMC-7721細(xì)胞接種于無菌培養(yǎng)瓶中，加入適量RPMI1640培養(yǎng)液，于37-C、5Q%C02及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單純貼壁生長(zhǎng)，每2-3天傳代1次。傳代時(shí)用3g/L胰蛋白酶消化lmin，用培養(yǎng)液吹打制成細(xì)胞懸液，按需要的濃度接種。方法1、DMXAA與去甲斑蟊素(NCTD)聯(lián)合用藥協(xié)同抑制人肺癌A549細(xì)胞將DMXAA和去甲斑蟊素(NCTD)以單藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50^ig/mL)，去甲斑蟊素(NCTD)(IO、5、2.5pg/mL)，聯(lián)合組(DMXAA:50|ig/mL與NCTD:10、5、2.5ng/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肺癌A549細(xì)胞，以5xl()3個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積100pL,培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入DMXAA和新鮮培養(yǎng)液50^iL/孔，對(duì)照組加入50^iL新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入去甲斑蟊素(NCTD)50nL/孔，在37°C、5XC02條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用RPMI1640培養(yǎng)液lOOpL清洗細(xì)胞，除去RPMI1640培養(yǎng)液后每孔加入20^LMTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150ixLDMSO溶解，振蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀492nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算。抑制率(％)=[八492(對(duì)照)一A492(給藥組)]/[A492(對(duì)照)一A492(空白對(duì)照)]X100X2、DMXAA與去甲斑蟊素(NCTD)聯(lián)合用藥協(xié)同抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞將DMXAA和去甲斑蟊素(NCTD)以單藥和聯(lián)合用藥的形式分為DMXAA組(50pg/mL)，去甲斑蟊素(NCTD)(O.l、0.05、0.025|xg/mL)，聯(lián)合組(DMXAA:50pg/mL與NCTD:20、10、5pg/mL)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌SMMC-7721細(xì)胞，以5><103個(gè)/孔接種于兩塊96孔培養(yǎng)板中，每孔體積IOOmL，培養(yǎng)16小時(shí)后棄原液，按上面分組所示加入dmxaa和新鮮培養(yǎng)液50ml/孔，對(duì)照組加入50mL新鮮培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后加入細(xì)胞毒類抗癌藥50mL/孑L，37°C，5XC02條件下培養(yǎng)24h后棄去上清，用100pL1640清洗細(xì)胞，除去1640后每孔加入20nLMTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入150DMSO溶解，振蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀492nm處檢測(cè)，計(jì)算抑制率，并以濃度為橫軸，抑制率為縱軸繪制抑制曲線，其聯(lián)合用藥的效應(yīng)采用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)抑制率(％)=[92(對(duì)照)一A492(給藥組)]/[A492(對(duì)照)一A492(空白對(duì)照)]X100%3、Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法計(jì)算公式(fa)l，2=l—[1—(fa)l][l—(fa)2]其中(fa)l、(fa)2分別表示兩藥的抑制率(fa)1,2表示計(jì)算的理論相加效應(yīng)。如果聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)，則表示協(xié)同。結(jié)果DMXAA與去甲斑蟊素(NCTD)聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制表9為DMXAA，去甲斑蟊素(NCTD)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞幾乎沒有抑制作用(抑制率^).54%)，、去甲斑蟊素(NCTD)與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制率升高。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算聯(lián)合用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(即實(shí)際抑制率〉(fa)l,2)，DMXAA與去甲斑蟊素(NCTD)聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。表9.DMXAA，去甲斑蟊素(NCTD)單獨(dú)給藥與聯(lián)合用藥對(duì)人肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用(;:t0組別OD值抑制率(％)DMXAA(50pg/mL)0.598±0.1030.54NCTD(2.5pg/mL)0.575±0.0854.65DMXAA(50ng/mL)+NCTD(2.5ng/mL)0.562±0,0747.15NCTD(5ng/mL)0.509±0.03617,23DMXAA(50ng/mL)+NCTD(5jig/mL)0.471±0.04419.96NCTD(10ng/mL)0.313±0.08754.37DMXAA(50|ig/mL)+NCTD(lOpg/mL)0.27U0.08362.94細(xì)胞對(duì)照0.600±0.105空白對(duì)照0.098±0.005—2、DMXAA與去甲斑蟊素(NCTD))聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制表10為DMXAA，去甲斑蟊素(NCTD)單獨(dú)給藥和聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的作用結(jié)果(OD值和抑制率)。從表中可以看出DMXAA單獨(dú)給藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞抑制作用很小(抑制率^10%)，去甲斑蟊素(NCTD)與DMXAA聯(lián)合用藥后對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制率顯著升高，抑制率最高可增加37.12%。用Webb氏分?jǐn)?shù)乘積法進(jìn)行計(jì)算聯(lián)合用藥的效應(yīng)，聯(lián)合用藥的效應(yīng)大于理論相加效應(yīng)(即實(shí)際抑制率〉(fa)1，2，DMXAA與去甲斑蟊素(NCTD)聯(lián)合用藥具有協(xié)同效應(yīng)。表10.DMXAA,去甲斑蟊素(NCTD)單獨(dú)給藥與聯(lián)合用藥對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用(;士》組別OD值抑制率(0/0)DMXAA(50ng/mL)0.398±0.1356.94NCTD(5ng/mL)0.392±0.15610.43DMXAA(50ng/mL)+NCTD(5ng/mL)NCTD(10ng/mL)DMXAA(50ng/mL)+NCTD(10ng/mL)NCTD(20ng/mL)DMXAA(50ng/mL)+NCTD(2。ng/mL)細(xì)胞對(duì)照空白對(duì)照0.323±0.09330.400.361±0.15421.630.318±0.11734,070.352±0.14624.460.318±0.15437.120.419±0.146—0.111±0.009—權(quán)利要求1、一種具有抗腫瘤活性的藥物組合物的制備方法，其特征在于它是由DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物中的任意一種制備而成。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的藥物組合物的制備方法，其特征在于其中DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物中的任意一種是以增效比率構(gòu)成。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的藥物組合物的制備方法，其特征在于所述的DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化ii抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物中的任意一種的藥物是同時(shí)給藥或順序給藥。4、根據(jù)權(quán)利要求13中的任一項(xiàng)所述的具有抗腫瘤活性的藥物組合物的制備方法，其特征在于選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物是選自平陽(yáng)霉素、放線菌素D、絲裂霉素C、光輝霉素、秋水仙堿、欖香烯、來曲唑、亮丙瑞林、生長(zhǎng)抑素或去甲斑蝥素。5、一種DMXAA及其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種以治療癌癥的藥物的應(yīng)用。6、選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種用于制備與DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯以治療癌癥的藥物的應(yīng)用。7、根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其特征在于DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種是以增效比率構(gòu)成。8、根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其特征在于DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種是同時(shí)給藥或順序給藥。9、根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其特征在于選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種是選自平陽(yáng)霉素、放線菌素D、絲裂霉素C、光輝霉素、秋水仙堿、欖香烯、來曲唑、亮丙瑞林或去甲斑蝥素的藥物中的任意一種。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種是選自平陽(yáng)霉素、放線菌素D、絲裂霉素C、光輝霉素、秋水仙堿、欖香烯、來曲唑、亮丙瑞林、去甲斑蝥素或生長(zhǎng)抑素的藥物中的任意一種。11、一種具有抗腫瘤活性的藥物組合物，其特征在于它是由DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥、生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種組成。12、根據(jù)權(quán)利要求11所述的具有抗腫瘤活性的藥物組合物，其特征在于DMXAA或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種是以增效比率組成。13、根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的具有抗腫瘤活性的藥物組合物，其特征在于選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種是選自平陽(yáng)霉素、放線菌素D、絲裂霉素C、光輝霉素、秋水仙堿、欖香烯、來曲唑、亮丙瑞林或去甲斑蝥素或生長(zhǎng)抑素的藥物中的任意一種。全文摘要本發(fā)明涉及一種藥物組合物，特別是涉及一種具有抗腫瘤活性的藥物組合物。具有抗腫瘤活性的藥物組合物，它是由化合物5，6-二甲基呫噸酮-4-乙酸(DMXAA)或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯和選自糖肽類抗生素、放線菌素類、絲裂霉素類、糖苷類抗生素、秋水仙屬生物堿、欖香烯類、芳香化酶抑制劑、LH-RH受體拮抗劑、動(dòng)物類抗腫瘤藥或生長(zhǎng)抑素類似物的藥物中的任意一種組成。這樣的協(xié)同組合，使組合后的藥物具有更好的抗腫瘤活性。更具體地說，本發(fā)明提供了這種組合在腫瘤治療中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K45/00GK101336915SQ20081001275公開日2009年1月7日申請(qǐng)日期2008年8月12日優(yōu)先權(quán)日2008年8月12日發(fā)明者孟凡英,莉李,光王,鄭劍峰申請(qǐng)人:沈陽(yáng)斯佳科技發(fā)展有限公司