組合物及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥是對(duì)人類生命健康危害最大的疾病之一，每年都有大量的人死于癌癥?？拱?藥物的研發(fā)一直是藥學(xué)研究的熱點(diǎn)?？鼓[瘤藥物中有74%是天然產(chǎn)物或其衍生物，如紫杉 醇及其衍生物就是目前臨床上應(yīng)用效果比較好的抗腫瘤藥物。因此，從天然產(chǎn)物中尋找化 合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最有重要 價(jià)值。
[0003] 本發(fā)明設(shè)及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表（AntonellaMaggioetal. , 2011. Artalbicacid,asesquiterpenewithanunusualskeletonfromArtemisia a化a(Asteraceae)f;romSicily.Tetr址e化onLetters, 52(2011)4543 - 4545)的化合物， 我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物HI和化合物IV，并用化 合物HI和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物抗腫瘤活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗腫瘤活 性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為40%和60%。 陽0化]
[0006] 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗腫瘤作用。
[0007] W下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加W限定。
【具體實(shí)施方式】
[0008] 實(shí)施例1化合物Arta化icacid的制備
[0009] 化合物Arta化icacid(I)的制備方法參照AntonellaMaggio等人發(fā)表的 文南犬(AntonellaMaggioetal. , 2011.Artalbicacid,asesquiterpenewithan unusualskeletonfromArtemisiaalba(Asteraceae)fromSicily.Tetrahedron Letters, 52(2011)4543 - 4545)的方法。
[0010]
W11] 實(shí)施例2Arta化icacid的O-漠乙基衍生物（n)的合成 陽01引將化合物I(266mg，1.OOmmol)溶于10血苯，向溶液中加入四下基漠化錠燈BAB) (0. 08g)，1，2-二漠乙燒化760g，20.OOmmol)和6血的50 %氨氧化鋼溶液?；旌衔镌?0 攝氏度攬拌16h。1化之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲燒萃取兩次，合并有機(jī)相 溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗涂5次，再用無水硫酸鋼干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油酸/丙酬 =100:1.0,v/v)，收集棟色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棟色粉末（272mg， 73% )O
[0013] 咱NMR巧OOMHz,DMSO-de) 5 11. 41 (S, 1H)，6. 06 (S, 1H)，5. 76 (S, 1H)，4. 99 (S, 1H)，4 .71 (s, 1H), 4. 56 (s, 1H), 3.86(s, 2H), 3. 54 (s, 2H), 2. 65 (s, 1H), 2. 43 (s, 2H), 2. 33 (s, 2H), 2 .10 (S, 1H)，1. 64 (S, 3H)，1. 54 (S, 1H)，1. 44 (S, 2H)，0. 95 (S, 3H).
[0014] "CNMR(125MHz,DMS0-d6) 5 201. 95 (S), 175. 93 (S), 149. 13 (S), 148. 15 (S), 117. 0 5 (S)，109. 43 (S)，81.86(S)，70. 27 (S)，57.68(S)，41. 26 (S)，39. 07 (S)，38.86(S)，35. 69 (S) ，33. 36 (S)，30. 72 (S)，20. 44 (S)，18. 42 (S).
[0015] HRMS(ESUm/z[M+H]+calcdforC口H2sBr〇4:373. 1014;found373. 1017.
[0017] 實(shí)施例3Arta化icacid的0-(贓嗦基）乙基衍生物（III)的合成
[00化]將化合物II(187mg，0. 5mmol)溶于25血乙臘當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鐘 (345mg，2. 5mmol)，艦化鐘（84mg，0. 5mmol)和無水贓嗦（3446mg，40mmol)，混合物加熱回流4h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲燒萃取2次，合并有機(jī)相。依次 用水和飽和食鹽水洗涂合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到 產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油酸/丙酬=100:1. 5, v/v)，收集 淡棟色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的棟色粉末（124. 7mg，66%)。 陽019] Ih NMR(500MHz，DMS0-d6)5ll.56(s，lH)，6.22(dt，J = 3. 9, 1.8Hz, 1H) , 5. 92 (dt, J = 4. 0, 1. 9Hz, IH) , 4. 9 I - 4. 80 (m, 2H) , 4. 76 - 4. 67 (m, IH)，3. 65 (t, J = 7.6Hz, 2H)，2. 80 (m, 5H)，2. 70-2. 62 (m,6H)，2. 45 (td, J = 12. 2, 0.6Hz, 4H)，2. 23 (dd, J = 24. 7, 17. 4Hz, IH)，I. 79 (t, J = 2. OHz, 3H)，I. 72 - I. 51 (m, 3 H), I. 20 (s, IH), I. 10 (s, 3H).
[0020] "c NMR (125MHz, DMS0-d6) 5 202. 02 (S)，176. 02 (S)，149. 24 (S)，148. 28 (S)，117. 2 0 (S)，109. 50 (S)，81. 95 (S)，67. 17 (S)，57. 81 (S)，54.66(S)，54. 31 (S)，45. 42 (S)，41. 39 (S) ，39. 17 (S)，38. 98 (S)，35. 78 (S)，30. 84 (S)，20. 53 (S)，18. 53 (S).
[0021] HRMS(ESI) :m/z[M+田+calcd for Cs化5N2O4:379. 2597 ;found:379. 2592。
[0022]
陽02引實(shí)施例4 Arta化ic acid的0-(咪挫基）乙基衍生物（IV)的合成[0024]將化合物II (187mg，0. 5mmol)溶于25血乙臘當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鐘 (345mg，2. Smmol)，艦化鐘（84mg，0. Smmol)和咪挫（870mg，IOmmol)，混合物加熱回流地。反 應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入35mL冰水中，用等量二氯甲燒萃取S次，合并有機(jī)相。依次用水和 飽和食鹽水洗涂合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗 品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油酸/丙酬=100:0.6, v/v)，收集褐色集 中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物IV的棟色粉末（109. 8mg，61 %)。 陽0巧]電NMR巧00MHz，DMS0-d6) 5 19. 91(s, 1H)，8. 07(s, 1H)，7.：M(s，1H)，6. 95(s, 1H)，6 .28 (s, IH)，5. 93 (s, IH)，4.86(d, J = 12. OHz, 2H)，4. 77 (s, IH)，4. 19 (d, J = 16. 7Hz, 2H)，4. 04 (s, 2H), 2. 81 (s, IH), 2. 71 (s, 2H), 2. 64 (s, 2H), 2. 14 (s, IH), I. 83 (d, J = 12. OHz, 5H), I. 66(s, IH), I. 14(s, 3H).
[0026] "c NMR (125MHz, DMS0-d6) 5 202. 12 (S)，176. 12 (S)，149. ：M (S)，148. 38 (S)，139. 96(S)，128. 96 (S)，119. 59 (S)，117. 28 (S)，109. 63(s)，82. 08 (S) ,67. 99 (S) ,57. 89 (S) ,44. 05 (S)，41. 50 (S)，39. 28 (S)，39. 04 (S)，35. 89 (S)，30. 95 (S)，20. 64 (S)，18. 64 (S).
[0027] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC20H29N204:361. 2127 ;found:361. 2122。
[0028]
[0029] 實(shí)施例5體外抗腫瘤活性篩選
[0030] 篩選細(xì)胞株為化pG2(人肝癌細(xì)胞），PANC-I(人膜腺癌），MCF-7(人乳腺癌細(xì)胞）， SW620(人結(jié)腸癌細(xì)胞），A549(人肺癌細(xì)胞），HGC-27(人胃癌細(xì)胞），L02(人正常肝實(shí)質(zhì)細(xì) 胞）。 陽03U 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的40mg化合物III的粉末和研磨之后過 200目網(wǎng)的60mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用滿輪攬拌儀混合即得到IOOmg組 合物，使用時(shí)用水溶解運(yùn)IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0032] 實(shí)驗(yàn)方法：
[0033] 取對(duì)數(shù)生長期狀態(tài)良好的細(xì)胞，膜蛋白酶消化，制成5XIO4細(xì)胞/mL的懸液。將 細(xì)胞懸液移入96孔培養(yǎng)板，每孔100y以置37°C、5%C〇2條件下培養(yǎng)2地。
[0034] 將受試化合物III、化合物IV和組合物分別用DMSO配制成一定濃度的母液，再用 RPMI1640培養(yǎng)基將衍生物母液稀釋成不同作用濃度的稀釋液。移去舊培養(yǎng)基，加入不同濃 度的含藥培養(yǎng)基，每孔lOOyL。另設(shè)空白對(duì)照組。藥物作用4化后，吸棄含藥培養(yǎng)基，于每 孔加入無血清、無酪紅1640培養(yǎng)基100yL再加入MlT溶液巧mg/mL) 10yL繼續(xù)溫育地。
[0035] 吸去各孔內(nèi)上清液，每孔加入DMSO150化，暗處振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解， 酶標(biāo)儀測定490nm處各孔的光吸收值（OD值），計(jì)算細(xì)胞的增殖抑制率：抑制率（％ )= (1-用藥組平均OD值/空白對(duì)照組平均OD值）X100 %。應(yīng)用SPSS16. 0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處 理并計(jì)算癌細(xì)胞增殖的半數(shù)抑制濃度（ICJ，結(jié)果見表1。
[0036] 表1化合物或組合物對(duì)7種癌細(xì)胞的體外增殖抑制作用
[0037]
[0038] 如表I結(jié)果所示，組合物對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞均具有一定的增殖抑制作用；而對(duì)于 正常的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞L02的ICs。非常大（MOiiM)、沒有增殖抑制作用，說明安全性非常高?；?合物III和化合物IV對(duì)于所有腫瘤細(xì)胞沒有增殖抑制作用。組合物表現(xiàn)出較好的抗癌活 性，具有開發(fā)抗癌藥物的潛力。
[0039] 實(shí)施例6本發(fā)明所設(shè)及組合物片劑的制備
[0040] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0041] 實(shí)施例7本發(fā)明所設(shè)及組合物膠囊的制備
[0042] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100 粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為40%和60%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為：將化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為40%和60%充分混合。3. 如權(quán)利要求1所述的組合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述腫瘤為消化系 統(tǒng)腫瘤。5. 如權(quán)利要求4所述的組合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述消化系統(tǒng)腫瘤 為肝癌、胰腺癌、結(jié)腸癌或者胃癌。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述腫瘤為乳腺癌 或者肺癌。
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有抗腫瘤的作用，具有開發(fā)抗腫瘤藥物的價(jià)值。
【IPC分類】A61P35/00, A61K31/4164, A61K31/495, C07D295/088, C07D233/60
【公開號(hào)】CN105343079
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510888090
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請(qǐng)人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請(qǐng)日】2015年12月7日