專利名稱：紫杉烷前體抗癌藥及其藥物組合物和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于抗癌藥物或其它增殖性疾病藥物的領(lǐng)域，具體涉及一種新型的紫杉烷前 體藥及其藥物組合物和用途。
背景技術(shù)：
腫瘤的進(jìn)行性發(fā)展和不良的預(yù)后與腫瘤的缺氧生長(zhǎng)有直接關(guān)系。腫瘤生長(zhǎng)快速，在 瘤體內(nèi)部不斷地建立新生的血管，依靠血液的流通供應(yīng)氧氣、養(yǎng)分和進(jìn)行代謝維持腫瘤 的快速生長(zhǎng)。但腫瘤內(nèi)部的新生血管是不成熟又不完整的，因此血液流動(dòng)不正規(guī)而造成 部分腫瘤細(xì)胞缺氧，最后瘤細(xì)胞對(duì)缺氧的條件發(fā)生耐受。此類缺氧細(xì)胞對(duì)化療藥和放療 有很大的耐受性，使各種化療和放療失效，所以這些細(xì)胞是腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移和惡化的根本 原因。當(dāng)腫瘤大于直徑1毫米時(shí)就會(huì)形成缺氧細(xì)胞。(Coleman， 1988， J. Nat. Cane. Inst. 80: 310; and Vaupel et al.， Cancer Res. 49:6449)，缺氧不但是瘤細(xì)胞的基本特色，也在其它一 些增殖性疾病例如類風(fēng)濕或腸道炎等疾病中發(fā)生。由于缺氧和瘤細(xì)胞抗化療和放療有關(guān)， 因此瘤細(xì)胞缺氧的程度與惡性程度和用藥的效果有直接的關(guān)系。紫杉垸系列藥(Taxoids)是著名的抗癌藥物?，F(xiàn)在已知紫杉烷類藥物的抗癌作用是 阻止細(xì)胞分裂過(guò)程中的微管解聚，從而干擾癌細(xì)胞在G2相的分裂。(Wani et at, J Am Chem Soc, 1971， 93: 2325-2327; Schiff et al.， Nature (Lond), 1979, 277: 665-667)。其中紫 杉醇是一個(gè)天然化合物，是從紅豆杉的樹皮和樹葉中分離得到的。由于紅豆杉來(lái)源十分 有限而且破壞生態(tài)，于是尋找替代品，這導(dǎo)致發(fā)明了多烯紫杉醇(Taxotere)。多烯紫杉醇 是一個(gè)從10-deacetylbaccatinin開始的半合成品，它和細(xì)胞微管的親和力比紫杉醇大二倍 (Ringel et al.， J Natl Cancer Inst.， 1991, 83: 288-291)。紫杉醇和多烯紫杉醇都是已經(jīng)廣泛 地在臨床使用的廣譜抗癌藥，尤其對(duì)卵巢癌、乳腺癌、肺癌等(Rowinskieta1., Semin Oncol., 1992,19:646-662)。紫杉醇和多烯紫杉醇的水溶性很差，也不溶于其它常規(guī)溶劑。所以 是使用聚氧乙烯篦麻油等特殊的溶劑進(jìn)行靜脈輸液。但是溶劑聚氧乙烯篦麻油本身會(huì)引 起很大的副作用，包括影響造血、引起外周神經(jīng)毒和過(guò)敏等。由于使用了這種特殊溶劑，在給病人用藥的時(shí)候還需事先給其它藥物緩沖而降低其副作用而且要非常緩慢地輸液， 于是病人輸液的時(shí)候往往需在醫(yī)院過(guò)夜，負(fù)擔(dān)額外的費(fèi)用。對(duì)紫杉醇結(jié)構(gòu)的研究發(fā)現(xiàn)自由的2'位羥基是重要的活性中心(Kingston J. Nat. Prod. 2000,63,726-734)。于是通過(guò)在2'位羥基上接各種基團(tuán)來(lái)檢驗(yàn)其失去活性的情況，包括 合成了 2'-叔丁基二甲基硅烷基紫杉醇等，發(fā)現(xiàn)其活性基本失去。這在一方面證明2'位 羥基的重要性，也為改造紫杉醇分子創(chuàng)造了條件。更進(jìn)一步的證明是合成了 2' —乙酰紫 杉醇和2'， 7—雙乙酰紫杉醇，發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)可以被水解，在細(xì)胞培養(yǎng)條件下顯出了活性。在2'位和7位羥基上做過(guò)的研究很多，不完全的統(tǒng)計(jì)有羥基的鹽、胺、磺酸、氨基 酸、磷酸、以及其它功能基團(tuán)等(Deutsch et al, J. Med. Chem. 1989, 32， 788-792， Mathew et al， J. Med. Chem. 1992， 35， 145-151, U.S. Pat. No. 5,059,699)，可惜這些化合物都不夠穩(wěn) 定。有人試圖用3 — 5個(gè)碳原子的化合物來(lái)修飾紫杉醇，像美國(guó)專利號(hào)U.S. Pat. No. 4,942,184、 U.S. Pat. No. 20030203961 Al等公開的紫杉醇衍生物，但是以上發(fā)明的化合物 的可溶性較差。專利W094/13324公開了一種水溶性的前體紫杉醇，但保留一定的疏水性才更容易 地和癌細(xì)胞的類脂細(xì)胞膜接合。專利U.S. Pat. No. 6482850公開了一種疏水紫杉醇衍生物，據(jù)說(shuō)可以通過(guò)脂質(zhì)載體 的給藥途徑而成為一種脂溶性的抗癌藥。專利U.S. Pat. No. 6602902公開了一種紫杉醇前體藥叫DHA—紫杉醇，這種紫杉醇 的衍生物在細(xì)胞試驗(yàn)中降低了毒性，其細(xì)胞毒從 10"M降到了 1(T6 ，毒性降低可以 加大臨床劑量，可惜在體內(nèi)試驗(yàn)中它過(guò)快被分解還原成為紫杉醇。關(guān)于前體還原性藥的文獻(xiàn)還有Deman et al報(bào)告的紫杉醇的1,6位消除 (1,6-elimination)或1,8位消除(Bioorg Med Chem. 2002, 10(1 ):71-7)，可惜此藥對(duì)癌細(xì) 胞沒(méi)有特異性殺傷而對(duì)于正常細(xì)胞的毒性太大。綜上所述，關(guān)于前體藥的研究已經(jīng)很多，之所以尚未在實(shí)際上用于臨床的原因是還 沒(méi)有找到一種恰到好處的，使前體藥達(dá)到既能暫時(shí)封閉藥效又能及時(shí)在癌細(xì)胞的條件下 被解開的，毒性小效率高的藥物。然而在客觀上極需要對(duì)腫瘤有靶向性的新藥，這樣的 靶向藥在大大地提高療效的同時(shí)降低其毒副作用，同時(shí)其制備技術(shù)可行，成本又是可以 被接受的。因此，提供一種可以被生物還原的紫杉烷前藥是合乎需要的。本申請(qǐng)人發(fā)明了一種 紫杉烷前藥，此前體紫杉烷在被還原降解后釋出紫杉醇或紫杉醇的衍生物。本發(fā)明的特點(diǎn)是經(jīng)特殊設(shè)計(jì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)能使此前體藥在正常組織中不被分解，但可在處于缺氧條件 下的癌細(xì)胞內(nèi)通過(guò)還原作用而被激活，激活后的藥物就對(duì)癌細(xì)胞造成殺傷。因此，該前 體藥能在降低對(duì)正常細(xì)胞的毒性的同時(shí)對(duì)癌細(xì)胞造成針對(duì)性的殺傷。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種新的式(I)的紫杉烷前體藥或其藥學(xué)上可接受的鹽 O<formula>formula see original document page 7</formula>其中R^,R2和R3獨(dú)立地為氫、烷基、C2—C1()鏈烯基或被鹵素、氨基、硫 酸根、磷酸根取代的C4-C1()芳香基或如式(Ia)所示的基團(tuán)<formula>formula see original document page 7</formula>L代表-YCR6R7-、-CR6R7 —、-CR6R7CR8R9-、-CR9R10Y—;Y代表0、S、或NR10; R6、 R7、 R8、 R9和R10獨(dú)立地代表氫或Cr~Qq烷基、d—Q烷氧基、<:2~€1()鏈烯 基或C4—C1()芳香基；X!、 X2、 X3和X4獨(dú)立地代表N02、 CN、 OH、囟素、C02H、 C02Na、 OPO(ONa)2、被取代(或不被取代)的d—"Qo烷基、d~C8烷氧基、被取代(或不被取代)的C2"Ch)鏈烯基或C4-C8芳香基；R4是C廣do烷基、C廣do烷氧基、C2 —Cu)鏈烯基或C4一do芳香基； R5代表C!一Cu)垸基、d — 烷氧基、C2—C8鏈烯基或C4一do芳香基； 烷基還可以在不影響活性的位置被多個(gè)取代基取代，這些取代基可以是卣素、d-C6烷氧基，羥基、氰基、氨基或硝基；芳香基可以被1一5個(gè)下列取代基取代鹵素、Q—C6烷基、d—C6烷氧基、d — C6垸基氨基，羥基、氰基、氨基、羧酸、d-C6垸氧羰基、芐氧基、哌啶基、C,—Q垸 基幾基、Q — C6烷基酰胺基；這里RbR2和R3中至少一-^代表式(Ia)。L優(yōu)選為被取代(或不被取代)的d—Q烷基、d""C4垸氧基、C2—C6鏈烯基或Q-C6芳香基等。Xt、 X2、 X3和X4代表NCh、 CN、 OH、 卣素、C02H、 C02Na、 OPO(ONa)2、 被取代(或不被取代)的C,一(V烷基、Cr"C4烷氧基、被取代(或不被取代)的C2—C6鏈烯基或C4-Cs芳香基；在上面的式(I)中，Ri、 R2和R3中至少有一個(gè)基團(tuán)優(yōu)選氫或CrC6烷基。R4優(yōu) 選Q-Cu)烷基或被氯、氨或烷基氨基取代的Q—do芳香基等。R5優(yōu)選C4一do烷基、 CVCh)芳香基、C4-C6垸氧基。優(yōu)選的垸基取代物可以是甲基、乙基、丙基、正丁基和叔 丁基等。在通式(I)中，L優(yōu)選-YCR6R7-、 -CR6R7-、 -CR6R7CR8R9-、 -CR9R10Y-,這里Y是 氧、硫或NR10; R6、 R7、 R8， R9和R10是氫或取代(不取代)的d-C,o烷基、C!一 C8垸氧基、C2—C1Q鏈烯基、或GrC8芳香基，優(yōu)選取代(或不取代)的d—C4烷基、 Q—C4烷氧基、C2—Cs鏈烯基、或C4一C8芳香基等。X,、 X2、 X3和X4選用N02、 CN、 OH、鹵素、C02H、 C02Na、 OPO(ONa)2的取代(或不取代)的C,—C1()烷基、 C,—C8烷氧基被取代(或不被取代)的C2—Cu)烯基或C4一C8芳香基等。X,、 X2、 X3 和X4優(yōu)選N02、 CN、 OH、鹵素、C02H、 C02Na、 OPO(ONa)2、取代(或不取代)的 C廣Q烷基、d—C4烷氧基、被取代(或不被取代)的C2—C6鏈烯基或C4—Q芳香 基等。本發(fā)明還包括式(I)的紫杉垸前體藥的藥學(xué)上可接受的鹽。 如果沒(méi)有另外指出，以下的術(shù)語(yǔ)具有如下的含義術(shù)語(yǔ)"鹵素"或"鹵"是指一價(jià)鹵元素，包括氯、溴、碘和氟。鹵化物代表1個(gè)到 多個(gè)鹵素的取代。術(shù)語(yǔ)"烷基"涉及具有衍生基團(tuán)的烷烴例如CrC6烷基或任何含有l(wèi)一6碳原子的烷 基基團(tuán)。垸基可以是直鏈，也可以是支鏈或環(huán)狀。低級(jí)的烷基涉及1-6個(gè)碳原子，例如 甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、異丙基、異丁基、戊基、異戊基、仲 丁基、叔丁基、叔戊基等。高級(jí)烷基涉及7個(gè)以上碳原子，如正庚基、正辛基、正壬基、正癸基及其支鏈化合物等。優(yōu)選的環(huán)垸基為6個(gè)碳原子左右的環(huán)垸基，如環(huán)丙基，環(huán)丁 基，環(huán)己基。烷基還可以在不影響活性的位置被多個(gè)(例如l一5個(gè))取代基取代。這些 取代基可以是鹵素、低級(jí)垸氧基，羥基、氰基、氨基或硝基等。術(shù)語(yǔ)"烷氧基"涉及一價(jià)基團(tuán)RO-，其中R是烷基，例如1-8個(gè)碳原子的烷氧基，涉 及所有的含有l(wèi)一8碳原子的垸氧基。優(yōu)選l一6個(gè)碳原子的烷氧基、例如甲氧基、乙氧 基、正丙氧基、正丁氧基、正戊氧基、正己氧基、異丙氧基、異丁氧基、異戊氧基、異 己氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、叔戊、環(huán)六氧基、正庚氧基、2—乙基己氧基等。這些烷 氧基還可以在不重要的位置在不影響藥效的條件下被1_5個(gè)取代基取代。垸基還可以被 l一5個(gè)其它獨(dú)立的基團(tuán)取代，取代基可以是鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)垸氧基、羥基、氰基、 硝基或氨基等。術(shù)語(yǔ)"C2-C1()鏈烯基"代表具有2—10個(gè)碳原子的鏈烯基，可以是直鏈的，也可以 帶有支鏈基團(tuán)，特別是天然或非天然的脂肪酸；可能有l(wèi)個(gè)或更多的(特別是2—4個(gè)) 雙鍵。這樣的例子有乙烯基、烯丙基、l一丙烯基、異丙烯基、2—甲基—l丙烯基、1 —丁烯基、2—丁烯基、3—丁烯基、4—丙烯基、l一己烯基、2—己烯基、3 —己烯基、1 一辛烯基等。鏈烯基可以任選被多個(gè)鹵原子、低級(jí)垸基、低級(jí)烷氧基、羥基、氰基、硝 基或氨基取代。術(shù)語(yǔ)"C4-C1Q芳香基"涉及芳基或雜芳基，例如苯基、萘基、呋喃基、咪唑基。芳 香基可以被l一5個(gè)下列取代基取代鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)垸氧基、低級(jí)垸氨基，羥 基、氰基、氨基、羧酸、低級(jí)烷氧羰基、芐氧基、哌啶基、烷基羰基、烷基酰胺基，優(yōu) 選被鹵素、C廣Q烷基、C廣CV烷氧基、C廣Q烷氨基取代。典型的實(shí)例有4一氯苯、2 一氟苯、4一氟苯、3 —氟苯、4一甲基苯、4-三氟基甲苯和2—甲基苯等。術(shù)語(yǔ)生物還原部分是指任何分子在酶還原過(guò)程中被除去的部分。生物還原部分本身 不反應(yīng)，但在酶存在下可以促進(jìn)反應(yīng)。在本發(fā)明中這部分生物還原分子優(yōu)選能在還原激 活過(guò)程中提供電子造成分子內(nèi)重排而變成新藥的分子。術(shù)語(yǔ)藥學(xué)上可接受的鹽是指式I的化合物與酸或堿形成的鹽。式(I)化合物的l個(gè) 或多個(gè)功能性基團(tuán)具有堿性或酸性，則它們可以制備成藥學(xué)上可以接受的鹽。可以用于 制藥的酸有鹽酸、溴酸、磷酸、硫酸、亞硫酸、烷基磺酸、芳基磺酸、醋酸、苯甲酸、 檸檬酸、馬來(lái)酸、富馬酸、琥珀酸、乳酸、和酒石酸等。堿式鹽有堿金屬的鹽，例如 鈉或鉀鹽，還有鎂或鈣鹽等。至于有機(jī)鹽則有嗎啉、毒芹側(cè)堿或二甲胺形成的鹽等。通式(1)可以產(chǎn)生立體異構(gòu)物和/或平面異構(gòu)物，具備抗癌活性的所有異構(gòu)物也包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。本發(fā)明公開的化合物的單一的對(duì)映體(enantiomer)或其混合物也 包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。式I的化合物或其鹽形成的溶劑化物(最常見為水合物)也是本發(fā)明的目的。 提供式(I)化合物的制備方法是本發(fā)明的另一目的。下面敘述式(I)化合物的制備 方法首選2'位取代。式(I)的2'位取代可以通過(guò)紫杉醇與式(II)反應(yīng)(為便于描 述，將反應(yīng)式中的第2個(gè)化合物稱為式(n))將生物還原物接到紫杉醇的分子上；還可以 將式(II)中的羧酸變?yōu)橄鄳?yīng)的酰氯后再與紫杉醇反應(yīng)(反應(yīng)式l)反應(yīng)式l (其中的R2—Rs、 L、 X,—X4的定義同前文中的定義) 反應(yīng)可在惰性溶劑中進(jìn)行，包括四氫呋喃，二乙醚或二氧雜芑等，或在芳香碳?xì)浠?如苯或甲苯，或非質(zhì)子傳遞溶劑如二甲基甲酰胺，或在三乙胺，二異丙基乙胺，二甲胺 基吡啶，氫氧化鉀，氫氧化鈉等提供的堿性基礎(chǔ)上進(jìn)行，優(yōu)選三乙胺或二異丙基乙胺，在 適當(dāng)?shù)臏囟认路磻?yīng)。也可以使用相同的方法在7位羥基引進(jìn)基團(tuán)Ia。為在7位引入功能性基團(tuán)需先將2， 位羥基封閉。需優(yōu)選保護(hù)基，有一個(gè)卓越的基團(tuán)是三乙基甲硅烷基。這個(gè)基團(tuán)可以通過(guò) 在甲醇中用鹽酸處理，或吡啶中被氫氟酸處理而很容易地從2'位被拿掉。也可以使用 2,2,2-三氯乙基-氧羰基，這個(gè)保護(hù)基可以選擇性地被鋅和醋酸除掉。反應(yīng)式2是一個(gè)這類轉(zhuǎn)變的例子紫杉烷通過(guò)氯三乙基硅烷的處理可以得到可觀產(chǎn) 量的2，-三乙基硅基紫杉烷。2'-三乙基硅基紫杉烷和基團(tuán)Ia對(duì)應(yīng)的酸可得到7位?；a(chǎn)物，而2，-三乙基甲硅垸基團(tuán)可以被除掉。J TESC1/TEA/DCM反應(yīng)式2 (其中R3—Ks、 L 、 X,—X4的定義同前式(I)中的定義)反應(yīng)使用二甲基甲酰胺和甲基亞砜為溶劑，當(dāng)使用一個(gè)當(dāng)量的二環(huán)己基碳二亞胺 (DCC)和催化量的胺時(shí)，優(yōu)選仲胺或叔胺，產(chǎn)物可以過(guò)柱純化。于是紫杉烷可以在DCM、 THF、 DMF或DMSO的條件下反應(yīng)，在存在DCC和4-二甲胺基吡啶的情況下得到2， -TES中間體，它可以容易地在一定的條件下被除去。紫杉烷通式(I)的第10位取代過(guò)程在反應(yīng)式3中表示。當(dāng)紫杉烷用氯化三乙基硅 (TESC1)處理時(shí)可以產(chǎn)生2' ,7-二 (三乙基甲硅垸)紫杉院。2， ，7-二(三乙基甲硅院) 紫杉烷和基團(tuán)(Ia)對(duì)應(yīng)的酸在一定的條件下可以生成10位?；a(chǎn)物，三乙基甲硅基可以 被除去而獲得IO位取代的紫杉垸衍生物。<formula>formula see original document page 12</formula>紫杉烷中引進(jìn)生物還原的部分也可通過(guò)應(yīng)用含有氯化?；闹虚g體來(lái)進(jìn)行，反應(yīng)式2 和3中的酸類可用相應(yīng)的酰氯化物來(lái)代替可用相當(dāng)于1一10倍分子的酰氯化合物，2_50倍分子的堿和催化量的DMAP處理而得到產(chǎn)品。也可以用二步法制備通式(I)的紫杉烷前體藥首先，紫杉醇的羥基可以被某些試 劑例如4-硝基苯氯甲酸酯激活形成活化的中間體C (反應(yīng)式4)。反應(yīng)可以在惰性的溶劑 中進(jìn)行。用TLC監(jiān)控。 一旦獲得激活的中間體后被活化的紫杉烷中間體C便可以和含有 1個(gè)功能團(tuán)的試劑(D)反應(yīng)，從而產(chǎn)生所需要的產(chǎn)物(E)和一個(gè)副產(chǎn)品硝基苯酚。例如被活 化的紫杉烷C可用含有羥基或氨基功能團(tuán)的硝基化合物與催化量的DMAP的混合物反 應(yīng)。分離出來(lái)的有機(jī)相用5% NaHC03和鹽水洗，用硫酸納干燥，然后濃縮。將殘留物 過(guò)硅膠柱用二氯甲垸/甲醇洗脫，得到產(chǎn)品E，產(chǎn)量約為10-80%。<formula>formula see original document page 14</formula>E反應(yīng)式4 (其中R2—Rs、 L、 X'—X4的定義同前式(I)中的定義) 反應(yīng)式4的醇或胺(D)可從下面的化合物中選用，這里L(fēng)的定義應(yīng)為-YCR6R7和 一CR9R10—Y， Y應(yīng)為O或NRIO，其含胺基功能團(tuán)的化合物可以根據(jù)反應(yīng)式5所示由 相應(yīng)時(shí)醇來(lái)制備。<formula>formula see original document page 15</formula>R'iR'2,OHNO,NH2R，XPh3P Et02CN=NC02Et THFR、,NHR, N02X反應(yīng)式5 (R', R、、 R'2為氫或C,-C4垸基，X為X,， X2， X3或X4， X, — ^如式(I)中 定義)如果反應(yīng)式4中的產(chǎn)物(E)含有氨基則可以通過(guò)加入藥物學(xué)通用的酸而變成酸性鹽。 適用的酸有無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸，包括鹽酸、硫酸、磷酸、二磷酸、溴酸、硝酸、醋酸、蘋 果酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、琥珀酸、檸檬酸、乳酸、甲基磺酸、對(duì)位甲苯磺酸、 棕櫚酸、水楊酸和硬脂酸等酸的鹽。鹽類可以通過(guò)在合適的溶劑中結(jié)晶而純化，或在水 中溶化后凍干。反應(yīng)式4中的(D)可以購(gòu)買也可自行制備，也可將含有至少一個(gè)硝基的硝基芳香族 化物轉(zhuǎn)化為其它含硝基的芳香化物。合適的硝基化試劑有硝酸。溶劑有酸酐如醋酸酐或酸例如磺酸、醋酸、四氟硼酸硝酐等。在特定的溶劑例如醚、四氫呋喃、二乙醚、硝化 丙酮、冰醋酸或氯化溶劑像二氯甲烷或芳香溶劑如苯或甲苯中進(jìn)行反應(yīng)。本發(fā)明公開的化合物屬于紫杉烷和其衍生物的前體藥。紫杉烷的衍生物具有十分活 躍的抗癌性但也很毒，然而我們發(fā)明的紫杉烷的衍生物能在發(fā)揮其固有的殺癌能力的同 時(shí)大大地降低其毒性。因此它將是一個(gè)十分有意義的抗癌良藥，在低毒性的基礎(chǔ)上其抗 癌作用卻像紫杉醇一樣具有十分廣泛的抗癌譜包括骨髓源的急性白血病、慢性髓性白血 病、淋巴肉瘤、骨髓瘤、慢性白血病、淋巴肉瘤、黑色素瘤、多發(fā)性骨髓瘤、骨瘤、消 化系癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膀胱癌、乳腺癌、子宮癌、腸癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列 腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、肝癌、腦癌、腎癌、子宮癌、尿道癌、胃腸癌和其它腫瘤等。這 個(gè)藥可以用于單獨(dú)化療或與其它藥聯(lián)合化療，也可以與放療聯(lián)用。本發(fā)明的前體紫杉烷可以與所有具有不同機(jī)理的抑制、拮抗或干擾有絲分裂的抗癌 藥聯(lián)用，也可以與調(diào)節(jié)免疫的輔助藥物聯(lián)用。舉例可以聯(lián)合使用的藥物例如長(zhǎng)春堿、 長(zhǎng)春新堿、順鉑、卡鉑、奧沙利鉑；氮芥、左旋苯丙氨酸氮芥、瘤可寧、白消安、環(huán)磷 酰胺、5-氟尿嘧啶、胞核嘧啶、阿拉伯糖苷、阿糖胞苷、吉西他濱、卡培他濱、甲胺蝶呤、羥基脲、阿霉素、博來(lái)霉素;、天門冬氨酸酶、局部異構(gòu)酶、依托泊甙、替尼泊苷、 拓?fù)涮婵?、雷替曲塞、千擾素、依決可單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗和曲妥珠單抗等、 吉非替尼、伊馬替尼和埃羅替尼等、三苯氧胺、阿那曲唑、依西美坦和來(lái)曲唑等。組合 療法可以同時(shí)合并給藥也可以分前后單獨(dú)給藥。聯(lián)合用藥將隨著臨床經(jīng)驗(yàn)的積累而豐富。本發(fā)明還包括包含組合藥。任何含有式(I)化合物的藥物可以和其它藥物制成組合 藥。本發(fā)明的藥物可以制成組方成藥，其活性物質(zhì)可以和其它不相沖突的或互相促進(jìn)的 活性物質(zhì)聯(lián)合使用。本發(fā)明的給藥途徑適應(yīng)于一切常規(guī)的途徑，包括通過(guò)口服、腸胃道、 靜脈、皮下、皮內(nèi)、吸入或局部給藥等等。制劑可以使用液相或固相?？诜幍膭┬陀衅瑒㈠V劑、膠囊、香油藥、懸浮劑、糯米紙囊劑、糖漿劑、口嚼膠等?？诜z囊和片劑的大致配方是敷料使用微晶體纖維素、黃芪膠或明膠；賦型劑 有淀粉或乳糖，分散劑例如藻酸、玉米淀粉等；潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂、藻酸、二氧化硅 等；甜味劑如蔗糖或糖精；香味劑和調(diào)味劑有薄荷、甲基水楊酸鹽或桔精等。如果使用 膠囊，膠囊內(nèi)除有效成分外也可以加其它成分來(lái)改善其物理性質(zhì)。糖漿的制備除藥物本身外可加蔗糖和穩(wěn)定劑以及食用色素和芳香劑等。所有添加物 需符合無(wú)毒和可以食用與可以被制藥業(yè)接受的條件。賦型劑有羰甲基纖維素鈉、甲基纖 維素、羥丙乙基纖維素藻酸鈉鹽、聚乙烯吡咯烷酮類、黃芪膠等；甜味劑和防腐劑有蔗 糖或糖精；調(diào)味品如薄荷，甲基水楊酸鹽防腐劑等；穩(wěn)定劑有阿拉伯樹膠；增濕劑如天 然的磷酸鹽例如卵磷脂、氧化乙烯和脂肪酸的縮合物例如多氧乙烯硬脂酸、氧化乙烯和 直長(zhǎng)鏈醇的縮合物例如氧化乙烯和己糖醇縮合物例如聚氧乙烯山梨醇單油酸鹽變來(lái)的酯 的縮合物；水化的懸浮液也可以含有一種或更多的防腐劑例如乙基或n-丙基對(duì)羥基苯甲 酸； 一種或多種色素； 一種或多種香料； 一種或多種甜味劑像蔗糖、味精、糖精等等。油性的懸浮液可以通過(guò)將本發(fā)明的活性物質(zhì)和植物油混合的方法制備。可以使用花 生油、橄欖油、芝麻油或椰子油等，或礦物油例如液體石蠟。油劑可以加入蜂蜜或硬性 石蠟或十六烷醇使其變稠；甜味劑可以在片劑中使用。加入抗氧化劑例如維生素C防止 制劑的氧化。本發(fā)明作為液體懸浮劑的粉劑和顆粒在加入潤(rùn)濕劑和穩(wěn)定劑后可以形成穩(wěn)定的具有 活性的藥物。本發(fā)明也可以制備成油乳劑，油相可以用蔬菜油例如橄欖油或花生油或礦物油例如 液體石蠟或它們的混合體等。合適的乳化劑包括天然的膠例如阿拉伯膠和黃芪膠，天然 的磷脂如大豆卵磷脂，從脂肪酸衍化而來(lái)的酯或偏酯和己糖醇酐如脫水山梨糖醇，單油酸鹽和這些偏酯和乙烯氧化物的縮合物如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸鹽。本發(fā)明可以和甘 油、山梨醇、蔗糖等甜味劑配伍。配方中還可以加入緩和劑、防護(hù)劑、芳香劑、色素等。 藥物可以在消毒后制成水劑或油劑的注射用藥，懸浮液的制備可以使用分散劑、潤(rùn)濕劑 和懸浮劑等按照既有的技術(shù)進(jìn)行。本發(fā)明可制成無(wú)菌的注射液或懸液，所有無(wú)毒的溶劑和稀釋劑都可應(yīng)用。無(wú)菌的油 類可以用作溶劑或用作懸浮液的介質(zhì)。凡是無(wú)毒的油都可以使用，包括合成的一價(jià)或二 價(jià)的甘油脂油。此外，也可以用脂肪酸例如油酸制備注射劑型。滅菌可以用常規(guī)消毒法 例如通過(guò)過(guò)濾，輻射或高壓滅菌等。水劑如水包油乳劑、糖漿、甘香酒劑和可以注射的制劑等均需調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)膒H以達(dá) 到穩(wěn)定。調(diào)節(jié)pH可采用常規(guī)方法，使用合適的緩沖液維持制劑的pH值的穩(wěn)定。本發(fā)明也可以用脂質(zhì)體或微囊的形式給藥，本發(fā)明推薦的脂質(zhì)體是類脂，類脂可以 形成微囊。能形成脂質(zhì)體的類脂很多，比較好的有天然或人工的，有中性或帶負(fù)電的磷 脂或神經(jīng)鞘脂類和甾醇例如膽固醇。選擇磷脂的標(biāo)準(zhǔn)需考慮其分子大小和其在血液中的 穩(wěn)定性。脂質(zhì)體呈微囊狀，在脂質(zhì)中包有液體或多聚體的膜，有多種制備方法。制備合適脂 質(zhì)體的方法見專利W0-9318749-A1和EP-276783-A。常用的方法是將類脂成分和有機(jī)溶 劑混合，干燥后在水溶液中重建脂質(zhì)體，通過(guò)使用象擠壓法等方法形成所需要的粒度。還 有其它的方法例如.1).8. 站，>}0.5,976，567公開了用洗滌劑透析自動(dòng)組合法制造粒子，這個(gè) 方法可以節(jié)省時(shí)間和便于大規(guī)模干燥和重建。也可以使用連續(xù)水化法進(jìn)行大規(guī)模的制 備。脂質(zhì)體紫杉垸的制備是將藥物裝入脂質(zhì)內(nèi)部，裝載可以是被動(dòng)的也可以是主動(dòng)的。 一般被動(dòng)裝載需將藥物在重組階段加到緩沖液中，在藥物為非脂溶性和微囊完整的情況 下可將藥物圈進(jìn)脂質(zhì)體內(nèi)。載藥可通過(guò)調(diào)節(jié)pH和離子梯度將大多數(shù)化療藥100W地裝進(jìn)脂質(zhì)體微囊(Mayer, et al.， Biochim. Bi叩hys. Acta 1025:143-151 (19卯)and Madden, et al.， Chem. Phys. Lipids 53:3746 (19卯))。有各種方法通過(guò)適當(dāng)?shù)奶荻葘⒅辔镆氲街|(zhì)體內(nèi)，在維持梯度的 情況下，保持長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定。至于針劑給藥可將藥制成溶液或懸液，用于注射的溶劑可以是水、生理鹽水或油劑、 聚氧乙烯、甘油、丙二醇或其它的合成溶劑；抗菌劑例如芐基醇或4-羥基苯甲酸甲酯等; 抗氧化劑如抗壞血酸或二亞硫酸鈉等；螯合劑如乙二胺四乙酸(EDTA);緩沖液如醋酸、擰檬酸或磷酸緩沖液；氯化鈉或右旋葡萄糖則用于調(diào)節(jié)。針劑可以封閉在安瓿或一次性 使用的針管中或各種玻璃或塑料容器內(nèi)。藥物可以制成消毒的溶液、分散劑、乳液或消 毒的粉末等。藥物的最終產(chǎn)物必須是穩(wěn)定的而且適宜于在儲(chǔ)存中保質(zhì)、保消毒、防細(xì)菌或真菌的 污染。經(jīng)過(guò)合適配方制備好的可以用于注射的藥劑需要進(jìn)行消毒，消毒可以用過(guò)濾法。給藥可以有多種方法，包括緩慢輸液或多次注射等， 一般1一8天為一個(gè)療程，也可 以隔日或隔數(shù)日給藥。典型的分散法是將藥物和輔助劑的成分加入到含有分散劑的介質(zhì)中處，粉末的無(wú)菌 工藝優(yōu)選真空干燥或真空冷凍干燥法。合適的藥物介質(zhì)有水、生理鹽水、葡萄糖的水溶液、含有氧化乙烯的聚氧乙烯篦麻 油、液體酸、低分子鏈脂肪醇；油類可選玉米油、花生油、芝麻油和其它油類，乳化劑 例如脂肪酸的一級(jí)或二級(jí)甘油酯或磷酸鹽例如卵磷脂和其類似物、乙二醇、聚乙二醇、 懸浮于水質(zhì)介質(zhì)中的羧甲基纖維素鈉、藻類酸鈉、聚乙烯砒硌烷酮和其類似物等加上適 當(dāng)?shù)姆稚┤缏蚜字?、聚氧乙烯硬脂酸鹽和它們的類似物等。介質(zhì)也可含有調(diào)節(jié)劑例如 穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑與增滲透劑等，通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)娜軇┖唾x型劑調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)恼扯?。本發(fā)明的劑量很大程度上決定于病人的條件、給藥途徑、病情和藥物是單用還是和 其它抗癌藥聯(lián)用等。因此只有醫(yī)生才可以根據(jù)病人的實(shí)際情況決定用藥的劑量而且根據(jù) 全發(fā)明的系列產(chǎn)品的不同性質(zhì)建議每天的劑量范圍在0.001至200 mg/kg內(nèi)，最佳劑量 當(dāng)為0.5至100 mg/kg。凡式(I)化合物對(duì)于預(yù)防腫瘤、減低其發(fā)病率和治療都是十分 有效的。在典型的細(xì)胞增殖病變中的細(xì)胞均有缺氧生長(zhǎng)的特性，因此本發(fā)明的藥物除可以治 療和預(yù)防癌癥和減少其發(fā)病率外還對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、糖尿病視網(wǎng)膜炎或老年性 色斑退化等疑難病有效。特別是針對(duì)癌癥，因?yàn)榘┌Y是典型的缺氧生長(zhǎng)，尤其是對(duì)缺氧 的實(shí)體瘤或白血病細(xì)胞更為合適，其中典型的白血病細(xì)胞累及脾臟和骨髓或兒童急性淋 巴白血病，典型的實(shí)體瘤范圍廣泛，在上文中已經(jīng)提到。此外，已經(jīng)開發(fā)的所有藥物增強(qiáng)手段都可以用于本發(fā)明的增強(qiáng)。有不少酶可以還原 芳硝基和雜芳硝基，于是通過(guò)在腫瘤實(shí)體中促進(jìn)這類酶活性的方法同時(shí)促進(jìn)硝基還原前 體紫杉垸的抗癌活力。這類方法包括將酶連接到抗腫瘤的抗體分子上，將酶一抗體偶聯(lián) 物注射進(jìn)瘤體內(nèi)，當(dāng)它在瘤體內(nèi)定位后再給予病人前體紫杉烷。這個(gè)方法被稱為抗體聯(lián) 酶前體藥療法。也可以在給予前體藥之前先使瘤體內(nèi)編碼此酶的基因選擇性地表達(dá)，此方法被稱為 基因聯(lián)酶前體藥療法。專利WO 00 047725公開了硝基還原酶和其在GDEPT中的應(yīng)用。 專利WO 00 064864公開了硝基芳香族和硝基異芳香族前體藥在GDEPT中的應(yīng)用。本發(fā)明用以下的實(shí)例進(jìn)一步示范，實(shí)例不影響和限制根據(jù)本發(fā)明的原理的進(jìn)一步發(fā) 展，這里DMF代表二甲基甲酰胺、THF代表四氫呋喃、MeOH代表甲醇、EtOAc代 表乙酸乙酯、DCM代表二氯甲烷、TLC代表薄層層析、MeCN代表乙腈、TFA代 表三氟乙酸、LC-RT代表滯留時(shí)間，反應(yīng)可以通過(guò)所有有機(jī)化學(xué)現(xiàn)代檢察手段例如高 級(jí)液相色譜儀等檢測(cè)。層析分離可使用C18號(hào)柱(100x3.2mm)配以不同的洗脫溶劑例 如A: 10%乙腈、水、或B: 5%乙腈、0.1。/。TEA和C:乙腈等，洗脫速度為0.5m1/ 分。


圖1為誘變紫杉醇對(duì)卵巢癌細(xì)胞作用的示意圖； 圖2為普通紫杉醇對(duì)卵巢癌細(xì)胞作用的示意圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。 實(shí)施例l2，-(2-(2-硝萄苯乙酰)紫杉醇的制備方法A:將紫杉醇(100mg)溶解于DCM(5mL)，在0 "下加入三乙胺50微升(0.36 mmol)，再加入2-(2-硝基)苯乙酰氯(2-(2-nitr叩henyl)acetyl chloride) 24mg， (0.12mmo1)。 將混合物在室溫?cái)嚢?加入DCM和飽和碳酸氫鈉，混合物用乙醚提取。有機(jī)相用鹽水洗 后用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空干燥。殘留物過(guò)硅膠柱，產(chǎn)品白色。方法B:將紫 杉醇100mg (0.12mmol)溶于DCM(5mL)，在0 。C加入三乙胺50微升(0.36mmo1)，再加2-(2-硝基)苯乙酰氯24mg (0.12mrno1)，混合物在室溫?cái)嚢?，混合物加入飽和的碳?氫鈉，用乙醚提取，有機(jī)相用鹽水洗，用無(wú)水硫酸鎂干燥后過(guò)濾，真空濃縮。殘留物過(guò) 硅膠柱，洗脫溶劑為己垸/DCM(1/1)，產(chǎn)物白色。 以下為本產(chǎn)品的核磁共振譜相1H NMR (CDC13, 500 MHz): 8.12 (d, J = 7.6 Hz， 2H), 8.07 (d， J = 7.6 Hz， 1H), 7.72 (d， J = 7.1 Hz, 2H)， 7.58 (m, 2H)， 7.50 (m, 4H)， 7.41 (m， 2H)， 7.35 (m， 4H)， 7.24 (m，2H)， 6.80 (s, 1H)， 6.26 (s, 1H)， 6.23 (t, J = 8.6 Hz, 1H)， 5.92 (dd, J = 9.1， 3.3 Hz， 1H)， 5.66 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.48 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 9.7, 1.8 Hz， 1H), 4.42 (m， 1H), 4.30 (d， J = 8.5 Hz, 1H)， 4.19 (m， 2H)， 4.08 (m, 3H), 3.78 (d, J = 7.1Hz, 1H)， 3.48 (m, 2H), 2.54 (m, 1H), 2.47 (d, J =4.1 Hz, 1H), 2.41 (d, 3H)， 2.23 (m, 1H)， 2.12 (s, 3H), 2.12 (m, 1H)， 1.91 (m, 1H), 1.89 (s, 3H), 1.67 (s， 3H)， 1.24 (s， 3H), 1.13 (s, 3H). ESI-MS:質(zhì)譜理論值為C55H56N2017Na (M+Na)+: 1039.實(shí)測(cè)值為1039。實(shí)施例22，2，-(2-(2-硝基苯乙酰))多烯紫杉醇的制備方法和例1同，ESI-MS:質(zhì)譜理論值為C51H59N2017(M+H)+:972.實(shí)測(cè)值為972. 實(shí)施例37-[2-(2-硝基苯)乙酰]—紫杉醇將紫杉醇的二氯甲烷溶液和咪唑和氯化三乙基硅烷相混?；旌衔镌谑覝?cái)嚢瑁寐燃淄橄♂?，再水洗，飽和氯化鈉洗，干燥，濃縮。新鮮的過(guò)柱物為2，-三乙基硅基烷紫杉 醇，將此物的氯甲垸溶液在室溫和在氬氣的保護(hù)下加上吡啶和2-(2-硝基苯)乙酰氯混合 物，在室溫?cái)嚢?小時(shí)，用乙醚稀釋，將有機(jī)相濃縮。硅膠柱分離后制得2，-三乙基甲硅 烷-7-[2-(2-硝基苯)乙酰紫杉醇的中間體。此中間體的甲醇溶液和鹽酸的水溶液混合，在 相同的溫度下攪拌。用乙酸乙酯沖稀后，用飽和的碳酸氫鈉沖洗。有機(jī)相用鹽水洗，用 無(wú)水硫酸鎂干燥過(guò)濾后濃縮，粗制品用新鮮的硅膠柱提純，產(chǎn)品為7-[2-(2-硝基苯)乙酰 基] 一紫杉醇。ESI-MS:質(zhì)譜理論值為C55H56N2017Na(M+Na)+: 1039.實(shí)測(cè)1039。7-[2-(2-硝基苯)乙?；鵠 一多烯紫杉醇的制備:本產(chǎn)品7 — [2-(2-硝基苯)乙酰] 一多烯紫杉醇的制備同實(shí)例3。 ESI-MS:質(zhì)譜理論值 為C51H59N2017(M+H)+: 972.實(shí)測(cè)值為972。多烯紫杉醇的二氯甲烷溶液加入砒啶，加氯化三乙基硅烷，在室溫?cái)嚢?。用氯甲?稀釋，水洗，飽和氯化鈉洗，干燥，濃縮。新鮮的過(guò)柱物為2，，7-二(三乙基硅基)-多烯紫 杉醇。此物的氯甲醇溶液和氫化鈉混合，再加入2-(2-硝基苯)乙酰氯。將混合物在室溫 攪拌，用乙醚稀釋，將有機(jī)層濃縮。粗制品用新鮮的硅膠柱提純，產(chǎn)品為2'，7-雙(三乙基 硅基)-10-[2-(2-硝基苯)乙酰]多西紫杉醇。將此中間體的甲醇溶液在氬氣的保護(hù)下在0°C 和鹽酸的水溶液混合，在室溫?cái)嚢?。再用乙酸乙酯稀釋后加飽和的碳酸氫鈉。有機(jī)相用 鹽水洗，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，真空濃縮。粗制品用新鮮的硅膠柱提純得到產(chǎn)品實(shí)施例4實(shí)施例510-[2-(2-硝基)乙酰]-多烯紫杉醇的制備:10-[2-(2-硝基苯)乙?；鵠多烯紫杉醇。檢測(cè)ESI-MS:質(zhì)譜理論值為 C51H59N2017(M+H)+: 972.實(shí)測(cè)972。實(shí)施例6紫杉醇的N—(4-硝基苯酚基)甲酸酯的制備在含有紫杉醇100 mg (0.12mmol)和4-硝基苯酚基甲酰氯24 mg (0.12 mmol)的二氯 甲烷溶液10ml中加入三乙胺20ml (0.24 mmol)和4-二甲氨基吡啶10mg，在室溫中攪拌 12小時(shí)。用碳酸氫鈉水溶液洗，用水洗。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥后濃縮。殘留物過(guò)新 鮮的硅膠柱得到一黃色物。ESI-MS:質(zhì)譜理論值為C54H54N2Na018(M+Na)+: 1042.實(shí) 測(cè)1042。實(shí)施例7紫杉醇的N —(4-硝基節(jié)酚基)甲酸酯的制備在含有紫杉醇100 mg (0.12 mmol)和(4-硝基)芐氧基甲酰氯26 mg (0.12 mmol)的二 氯甲烷溶液10ml中加入三乙胺20ml (0.24mmol)和4-二甲氨基吡啶10mg，在室溫中攪 拌12小時(shí)。用碳酸氫鈉水溶液洗，用水洗。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥后濃縮。殘留物過(guò) 新鮮的硅膠柱得到一黃色物。ESI-MS:質(zhì)譜理論值為C55H56N2Na018(M+Na)+: 1056.2紫杉醇的N—(2-硝基芐基)一N—甲基氨基甲酸酯的制備在含有紫杉醇的N—(4-硝基苯酚基)甲酸酯的二氯甲烷溶液(實(shí)施例6)的混合物中 加入N-甲基-l-(2-硝基苯)甲氨60mg (0.36mmo1),在室溫?cái)嚢瑁锰妓釟溻c水溶液洗， 用水洗。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥后濃縮。殘留物過(guò)新鮮的硅膠柱得到一黃色物(二步 法得率50%)。 ESI-MS:質(zhì)譜理論值為C56H59N3Na017 (M+Na)+: 1069.實(shí)測(cè)1069。實(shí)施例9多烯紫杉醇的甲基(2-硝基芐酯)氨基甲酸酯的制備本例的制備方法同實(shí)施例6。 ESI-MS (M+Na)+簡(jiǎn)，實(shí)測(cè)；1023。實(shí)施例10多烯紫杉醇的甲基(4-氯-2-硝基芐酯)氨基甲酸酯質(zhì)譜理論值為C52H61N3Na017CI本例的制備方法同實(shí)施例6,應(yīng)用實(shí)施例8制備的N-甲基-l-(4-氯-2-硝基苯)甲氨合 成。ESI-MS:質(zhì)譜理論值為C52H60ClN3NaO17 (M+Na)+: 1057，實(shí)測(cè)；1057。實(shí)施例ll本例證明前體藥被生物還原酶細(xì)胞色素P450還原后被激活的例子。細(xì)胞色素P450 是在人體的腫瘤中和正常組織中廣泛存在的生物還原酶的一種，其功能是催化生物還原 反應(yīng)。將實(shí)例1制備的2，-(2-(2-硝基苯)乙酰紫杉醇溶解于DMSO，濃度為625 mM，本溶 液20 mL加入到含20ml (lOmM)的還原輔酶IINADPH的60ml磷酸鉀緩沖液(pH 7.4 (2.4mL)中，37° C培育，此培育物的培育環(huán)境在加入化合物前減少供氮20分鐘，在加 入化合物后則增加供氮。在反應(yīng)間隔中取若干樣品加入到等體積的乙腈中，14,300 RPM離心2分鐘，然后用 HPLC分析出現(xiàn)被還原的紫杉醇。分析表明實(shí)施例1的前體藥在低氧分壓的條件下被細(xì)胞色素酶p450選擇性地還原激活。實(shí)施例12本例可證明生物激活前體藥在整細(xì)胞內(nèi)的活化。 以下的分析可以證明前體藥可被培養(yǎng)的缺氧細(xì)胞分解為目的藥。 將A549細(xì)胞(癌細(xì)胞.4x105每孔l)培養(yǎng)于6孔培養(yǎng)板，在加入試驗(yàn)物前在37。 C 培養(yǎng)在空氣或0. 2%的氧氣的條件下過(guò)夜。加入試驗(yàn)物75ml，溶于DMSO)，用細(xì)胞培養(yǎng)液 稀釋到藥物的最終濃度為5pM)。繼續(xù)培養(yǎng)，間隔取樣，由HPLC分析，證明化合物在0.2% 氧分壓條件下產(chǎn)生紫杉醇的速度明顯地低于比有氧條件下產(chǎn)生的量。0 5:陽(yáng)-ldNl-I實(shí)施例13本例證明生物還原前體藥的細(xì)胞毒效應(yīng)。本發(fā)明的原理是要求通式(1)的化合物的細(xì)胞毒性比由它在缺氧的條件下釋放的相 應(yīng)的藥物紫杉醇的細(xì)胞毒性小。用本發(fā)明的化合物進(jìn)行體外細(xì)胞毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在有氧條件 下對(duì)于卵巢癌細(xì)胞的殺傷作用被封閉而在缺氧條件下細(xì)胞毒得到恢復(fù)，即對(duì)癌細(xì)胞恢復(fù) 了殺傷作用。下面二個(gè)圖表清晰的顯示出本發(fā)明的理論的到了驗(yàn)證(見圖1和圖2)。圖1是一張誘變紫杉醇(前體紫杉醇)對(duì)于卵巢癌細(xì)胞的作用縱坐標(biāo)表示癌細(xì)胞的活度，用細(xì)胞存活的百分比表示；橫坐標(biāo)表示用藥的劑量，單位用納克分子表示。蘭 線(圖1中標(biāo)為VC6-N)為有氧培養(yǎng)，紅線(圖1中標(biāo)為VC6-H)為缺氧培養(yǎng)，本圖表顯 示誘變紫杉醇在有氧條件下對(duì)于癌細(xì)胞的殺傷曲線幾乎平行，這說(shuō)明基本上對(duì)細(xì)胞不造 成殺傷；紅線代表缺氧培養(yǎng)，細(xì)胞活度明顯地隨著藥物濃度的增加而降低，表明藥物的 殺傷作用隨著藥物濃度的增加而加強(qiáng)。相反的情況出現(xiàn)在紫杉醇(沒(méi)有接上分子鎖)的細(xì)胞活度曲線中(見圖2)。本圖顯 示沒(méi)有裝上分子鎖的紫杉醇對(duì)卵巢癌細(xì)胞的作用曲線。蘭線(圖2中標(biāo)為Paclitaxel-N) 代表有氧培養(yǎng)，紅線(圖2中標(biāo)為Paclitaxel-H)代表缺氧培養(yǎng)，曲線表明無(wú)論有氧還 是缺氧都對(duì)癌細(xì)胞造成殺傷，這就意味著藥物對(duì)于正常細(xì)胞并無(wú)保護(hù)作用。如果比較圖1和圖2，可以看出誘變紫杉醇能夠識(shí)別正常細(xì)胞和癌細(xì)胞的區(qū)別，在對(duì) 正常細(xì)胞相對(duì)低毒的前提下有效地針對(duì)癌細(xì)胞造成殺傷。實(shí)施例14本例證明由生物還原激活的前體藥在肝臟的勻漿中釋放具有活性的藥。 在缺氧條件下從生物還原前體藥釋放出原藥可以利用肝臟勻漿內(nèi)的還原酶得到證明。這種酶也存在于實(shí)體腫瘤內(nèi)。另一方面，關(guān)于化合物的代謝穩(wěn)定性和在肝區(qū)有氧條件下不希望有的釋放也可以用此法測(cè)定。將l克鼠肝在50 mmol dm—3冰冷的磷酸鉀緩沖液(pH7.4)中打成勻漿。1000 RPM 離心10分鐘，將上清儲(chǔ)存在冰中。5拜ol dm—3前體藥在有氧條件下的代謝可以在0.5 ml的肝勻拔中(大約含有2 mg肝勻漿蛋白質(zhì))測(cè)定。反應(yīng)的體系包括100 pmol dm—3 NADPH, 50 mmol dm—3的磷酸 鉀緩沖液(pH 7.4) 37° C孵育。在一定的間隔取60 ^L的樣品，加入到等體積的乙腈(acetonitrile)中，14, 300 RPM離心2分鐘，然后HPLC分析。分析結(jié)果顯示，本發(fā)明 的樣品在氮?dú)鈼l件下能夠釋放核苷酸樣(nucleoside analogues)的細(xì)胞毒，而在有氧 條件下，其釋放的速度很慢。實(shí)施例15本例證明生物還原激活的前體藥在腫瘤的勻漿中釋放出藥物的活性。用新鮮切除的 CaNT腫瘤大約0. 5至1 g，勻漿于15 ml冰冷的 50隱ol dnT3磷酸鉀緩沖液內(nèi)(pH7.4)。 勻漿用1000 RPM離心1分鐘，上清儲(chǔ)存于冰浴中，將5 nmol dm—3的前體藥分別在空氣中和N2中和0.5 ml的腫瘤勻漿(大約3 mg蛋白質(zhì))，和100 )amol dm—3 NADPH在in 50 mmol dm—3在磷酸鉀緩沖液中(pH 7.4)混合后孵育于37 0"按一定間隔 取出60pl的樣品，加入到等體積的乙腈中，混合后于14， 300 RPM離心2分鐘，用HPLC 分析。在這個(gè)試驗(yàn)中，前體紫杉醇在氮?dú)獾沫h(huán)境下以100 pmol/min/mg蛋白質(zhì)的速度釋 放出紫杉醇，而在氧氣的環(huán)境下，僅以8 pmol/min/mg蛋白的速度釋放。實(shí)施例16本例用小鼠直接證明本發(fā)明的急性毒性下降使用C3H/HeJ種小鼠，體重18-22克。用標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定40天最大耐受劑量(MTD40)方 法根據(jù)Gad and Chengelis (see, for example, 6Acute Toxicology Testing, 5 2nd Ed., Shayne 0. Gad and Christopher P. Chengelis, pp. 186-195 (Academic Press).)。 使用3只小鼠，分別給予低劑量(20mg/kg)和中等劑量(40 mg/kg)。如果不發(fā)生死亡， 則開始新一輪試驗(yàn)以l. 5倍的劑量遞增直到致死。之后開始用小鼠進(jìn)行新一輪最高耐受劑 量的試驗(yàn)，這時(shí)的劑量遞增為1.15。結(jié)果得出二組數(shù)據(jù)， 一組為非致死劑量，另外一組 為致死劑量。每一個(gè)劑量需要使用6只小鼠。如果在低劑量組沒(méi)有發(fā)生嚴(yán)重的致死反應(yīng)而 在高劑量組至少發(fā)生一只以上的致死，于是這個(gè)低劑量組就是最大耐受劑量MTD。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是，可以對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行多種變化和改進(jìn)， 而且該變化和改進(jìn)并不背離本發(fā)明的精神。因此，所附權(quán)利要求涵蓋了落入本發(fā)明精神 和范圍內(nèi)的所有等價(jià)的方案。
權(quán)利要求
1、一種紫杉烷前體抗癌藥或其藥學(xué)上可接受的鹽，具有式(I)結(jié)構(gòu)其中R1，R2和R3獨(dú)立地為氫、C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基或被鹵基、氨基、硫酸根、磷酸根取代的C4-C10芳香基，或如式(Ia)所示的基團(tuán)L代表-YCR6R7-、-CR6R7-、-CR6R7CR8R9-、-CR9R10Y-；Y代表O、S、或NR10；R6、R7、R8、R9和R10獨(dú)立地代表氫或C1-C10烷基、C1-C8烷氧基、C2-C10鏈烯基或C4-C10芳香基；X1、X2、X3和X4獨(dú)立地代表NO2、CN、OH、鹵素、CO2H、CO2Na、OPO(ONa)2、被多個(gè)取代基取代或不被取代的C1-C10烷基、C1-C8烷氧基、被取代或不被取代的C2-C10鏈烯基或C4-C8芳香基；R4是C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、 C2-C10鏈烯基或C4-C10芳香基；R5代表C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、C2-C8鏈烯基或C4-C10芳香基；烷基的取代基選自鹵素、C1-C6烷氧基、羥基、氰基、氨基或硝基；芳香基可以被1-5個(gè)下列取代基取代 鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氨基、羥基、氰基、氨基、羧酸、C1-C6烷氧羰基、芐氧基、哌啶基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷基酰胺基；這里R1，R2和R3中至少一個(gè)代表式(Ia)。
2、 權(quán)利要求1所述的化合物，其中R6、 R7、 R8、 R9和R10獨(dú)立地為Cr"C4烷基、垸氧基、C2"Q鏈烯基或C4-C6芳香基，X卜X2、 X3和X4獨(dú)立地代 表N02、 CN、 OH、 卣素、C02H、 C02Na、 OPO(ONa)2、被取代或不被取 代的d—C4烷基、d—C4烷氧基、被取代或不被取代的C2—C6鏈烯基或C4-C8 芳香基。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R2和R3為氫，R,為式(Ia)。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R,和R3是氫，R2為式(Ia)。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中Ri和R2是氫，R3為式(Ia)。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中基團(tuán)R卜R2和R3中只有一個(gè)是氫。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R!、 R2和R3均為式(Ia)。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R4為苯。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R5為d—C6垸基、C2—C6鏈炔基或C4 一Cu)的取代或不被取代的芳基，其取代基為鹵素，羥基，氨基，Q-C4鹵烷，或d-C4烷氧基。
10、 根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物，其中Rs為OCMe3或苯基。
11、 根據(jù)權(quán)利要求1一10任何一項(xiàng)所述的化合物或其藥物學(xué)可以接受的鹽在制備治 療增殖性疾病藥物中的應(yīng)用。
12、 根據(jù)權(quán)利要求要求ll所述的應(yīng)用，其中增殖性疾病為癌癥、類風(fēng)濕病、牛皮癬 類疾病、糖尿病性視網(wǎng)膜病或老年退行性疾病。
13、 根據(jù)權(quán)利要求ll所述的應(yīng)用，其中增殖性疾病是以缺氧為特征的疾病。
14、 根據(jù)權(quán)利要求ll所述的應(yīng)用，其中所述的增殖性疾病是實(shí)體癌或血液腫瘤。
15、 根據(jù)權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其中實(shí)體癌為肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、 黑色素瘤、胰腺癌、胃癌、肝癌、腦癌、腎癌、子宮癌、卵巢癌、泌尿系癌、腸胃系統(tǒng) 癌、白血病或其它實(shí)體癌。
16、 一種藥物組合物，包含一種或幾種如權(quán)利要求1-10任何一項(xiàng)所述的式(I)化 合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥物學(xué)可接受的載體和/或賦形劑。
17、 根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物組合物，其特征在于其劑型為片劑、錠劑、膠囊、 香油藥、懸浮劑、糯米紙囊劑、糖漿劑、口嚼膠、口服液、針劑以及藥物學(xué)可接受的其 它劑型。
18、 一種藥物組合物，包含一種或幾種如權(quán)利要求1-10任何一項(xiàng)所述的式(I)化 合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和一種或幾種其它任何治療增殖性疾病的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種式(I)的可被生物還原的紫杉烷前體抗癌藥或其在藥學(xué)上可接受的鹽，其中R₁-R₅的定義如說(shuō)明書中所述。本發(fā)明還提供含有式(I)化合物的藥物組合物及式(I)化合物在制備治療增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P27/00GK101328159SQ20071016609
公開日2008年12月24日 申請(qǐng)日期2007年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月5日
發(fā)明者孫漢翔, 孫逸萍 申請(qǐng)人:孫漢翔;孫逸萍