專利名稱：：一種抑制血管新生的雌甾硝酸酯藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及式(1)化合物及其合成方法。本發(fā)明也涉及該化合物在藥物上的用途和藥用制劑，特別是針對血管新生疾病如腫瘤、眼部血管新生疾病的治療。
背景技術(shù)：
：血管新生包括兩個概念胚胎期的血管發(fā)生(vasculogenesls，VG)和出生后的血管生成(anglogenesls，AG)。VG指的是在沒有血管系統(tǒng)的情況下，由血管內(nèi)皮祖細胞(endothelialprogenitor,cells,EPCs)或成血管細胞(angloblasts)分化成內(nèi)皮細胞，并形成血管網(wǎng)。AG指的是在成體血管，由己經(jīng)存在的成熟內(nèi)皮細胞沖破管壁基質(zhì)遷移，增殖和重構(gòu)，以發(fā)芽方式使血管樹枝持續(xù)延長。本發(fā)明中的血管新生是指出生后的血管生成(anglogenesls，AG)。血管新生(anglogenesls)不但是正常生理變化中(如生長、傷口愈合)所必需有的過程，近年來科學(xué)家們也發(fā)現(xiàn)它和腫瘤、老年性黃斑變性、惡性血液病等許多疾病的發(fā)展有密切的關(guān)系。抑制病理性的血管新生，可以治療或減緩腫瘤、老年性黃斑變性、惡性血液病等許多疾病。目前臨床治療腫瘤的方法大多是針對不同腫瘤采用不同的方法，并且絕大部分是針對腫瘤細胞進行治療。而腫瘤生長是一個復(fù)雜的過程，它受到多種因素的影響，其中包括腫瘤血管網(wǎng)的建立。許多研究己經(jīng)證明腫瘤生長必須依賴血管生成，通過抑制血管生成的某些環(huán)節(jié)或整個過程，進而控制腫瘤的生長，對腫瘤治療和防止腫瘤遠處轉(zhuǎn)移有重要意義。70年代初隨著腫瘤生長依賴于血管形成概念的提出，也相應(yīng)提出了抗血管形成治療的概念，即通過阻止新生血管的發(fā)生和/或新生血管網(wǎng)的擴展和/或破壞新生血管來阻止小的實體瘤的產(chǎn)生或建立，以阻止腫瘤生長、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。國外報道較多的肝素加氫化可的松.被公認為能有效地抑制血管生成。實驗證實，其二者聯(lián)合應(yīng)用能抑制雞胚絨毛尿囊膜上血管的生成，井能使腫瘤消退和阻止轉(zhuǎn)移，還可抑制腫瘤引起的兔角膜血管新生。而血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一類多功能的生長因子，具有促進內(nèi)皮細胞增殖、誘導(dǎo)血管形成的作用，一般認為抑制血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)可以治療或減緩病理性血管新生。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)與新生血管有關(guān)的疾病如腫瘤、眼部新生血管疾病、惡性血液病、支氣管哮喘等疾病有密切關(guān)系，通過抑制血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，可以治療或減緩這些疾病，大量文獻均有這方面的報道如《綜述VEGF的結(jié)構(gòu)特征及生物學(xué)功能》(中華臨床醫(yī)學(xué)研究雜志，2007年13巻3期，388)、《血管內(nèi)皮生長因子及其受體在婦科疾病中的研究進展》(河北醫(yī)藥2006年28巻12期，1192-1194)、《血管內(nèi)皮生長因子與腫瘤關(guān)系研究進展》(廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006年23巻2期，333-335)、《VEGF相關(guān)抗腫瘤治療的研究現(xiàn)狀》(吉林醫(yī)學(xué)，2006年27巻5期，454-457)、《靶向VEGF治療惡性腫瘤的研究進展》(現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2006年14巻3期，370-372)、《VEGF和PEDF對眼底新生血管的共同調(diào)節(jié)作用》(國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊，2005年26巻ll期，819-821)、《眼底新生血管防治的研究進展》(眼科新進展，2000年20巻6期，449-451)、《血管內(nèi)皮生長因子及其受體與眼內(nèi)新生血管性疾病》(眼科研究,2003年21巻l期,103-106)、《VEGF與惡性血液病的關(guān)系》(國外醫(yī)學(xué):生理病理科學(xué)與臨床分冊，2004年24巻2期，183-185)、《腦白質(zhì)疏松患者血清VEGF水平的研究》(疑難病雜志，2007年6巻l期，10-11)、《血管內(nèi)皮生長因子與支氣管哮喘》(實用醫(yī)學(xué)雜志，2007年第23巻第3期，433)。已知有多種藥物可抑制新血管的形成(血管生成或新生血管形成)。例如，在Oum等人的"一類新的類固醇在肝素或肝素片段的存在下抑制血管生成"(ANewClassofsteroidsInhibitsAnglogeneslsInthePresenceOfHeparinoraHeparinFragment,Science,Vol.230:1375-1378，1985年12月20日)一文中，公開了可在肝素或特定肝素片段的存在下抑制血管生成的類固醇。作者將所述類固醇稱為"血管抑制(anglostatlc)"類固醇。此類被發(fā)現(xiàn)具有血管抑制作用的類固醇中所包括的有可的松和去氧可的松的二氫和四氫代謝物。在測試有關(guān)所述機理的假說的后續(xù)研究中證明肝素/血管抑制類固醇組合物導(dǎo)致基底膜支架溶解，在所述支架上連接有貼壁依賴性內(nèi)皮，從而導(dǎo)致毛細管萎縮(lnvokitlori);其中所述機制是類固醇通過其來抑制血管生成的機制；參見lngber等人的"通過血管抑制類固醇來抑制血管生成的可能機理毛細管基底膜溶解的誘導(dǎo)"(APossibleMechanismforInhibitionofAnglogeneslsbyAnglostatlcSteroids:InductionofCapillaryBasementMembraneDissolution,EndocrinologyVol.119:1768-1775,1986)。在Arlstoff等人的美國專利US4，975，537中公開了一組可用于抑制血管生成的四氫類固醇.該專利公開所述化合物可用于治療頭部創(chuàng)傷、脊柱創(chuàng)傷、敗血癥性休克或創(chuàng)傷性休克、中風(fēng)和出血性休克。此外，該專利還討論了這些化合物在胚胎植入以及在治療癌癥、關(guān)節(jié)炎和動脈硬化中的作用。在美國專利us4771,042中公開了Arlstoff等人的專利中所公開的某些類固醇與肝素或肝素片段組合來抑制溫血動物的血管生成。LI等人，"通過硫酸化環(huán)糊精而增強效力的血管抑制類固醇抑制角膜新生血管形成"(AnglostatlcSteroidsPotentiatedbySulphatedCyclodextrlnInhibitCornealNeovascularization,InvestigativeophthalmologyandVisualScience,Vol32(11):2898-2905,1991年10月)。類固醇單獨使用可使新生血管形成多少減輕一些，但是僅單獨使用不能有效消退新生血管形成。四氫可的松已經(jīng)作為血管抑制類固醇，在Folkman等人的"血管抑制類固醇"(Anglostatlcsteroids,Ann.Surg，Vol.206(3),1987)一文中公開，其中該文獻提出血管抑制類固醇可能可用于治療由新生血管形成異常所控制的疾病，包括糖尿病性視網(wǎng)膜病、新生血管性青光眼以及晶狀體后纖維組織形成。CN03818826中介紹了乙酸阿奈可他是一種開發(fā)用于抑制眼睛新血管生成的血管抑制劑。該發(fā)明涉及用于預(yù)防AMD相關(guān)性視力喪失、維持AMD患者的視力以及抑制AMD相關(guān)性損害發(fā)展的制劑和方法。該制劑和方法涉及鞏膜旁施用3-30mg的乙酸阿奈可他或其相應(yīng)的醇以提供經(jīng)鞏膜的藥物釋放。
發(fā)明內(nèi)容一種如下通式的化合物1或其酯或鹽T-(B-0-N02)tl，tl為l或2，T-H為甾體化合物，T為化合物T-H除去H的甾體殘基，T與H是以T上的氧原子與H相連，形成羥基即O-H的形式相連。THB與TH上的tl個羥基以酯鍵形式相連，即TH上的tl個取代基的-0H中的0分別與tl個B上的-C=0-相連形成-0-C0-，tl為2時，TH上的兩個羥基分別與兩個-B-0-N02相連，這兩個-B-O-N02基團中的B在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。TH的取代通式中所示的CH基中的H或CH2基中的H2可以不存在取代基，也可以存在的取代基，各位置的取代基可為在第3位可以是0R3，R3是H或十個碳以內(nèi)的碳氫化合物或含有l(wèi)-2個雜原子的十個碳以內(nèi)的碳氫化合物，雜原子為N，0，S中的一種或兩種；在9，11位可以是雙鍵在ll位可以是羥基在17位可以是酮基、0H、或0-CO-R，R為十個碳以內(nèi)的碳氫化合物或含有l(wèi)-2個雜原子的十個碳以內(nèi)的碳氫化合物，雜原子為N，0，S中的一種或兩種Rl可以為氫或具有1至4個碳原子的直鏈或支鏈烷基X可為O，S中的一種或是不存在R2可以不存在或為H、十個碳以內(nèi)的碳氫化合物或含有l(wèi)-2個雜原子的十個碳以內(nèi)的碳氫化合物，雜原子為N，0，S中的一種或兩種B為-CO(0)a(CR4R5)b.D(CR4R5)b..-a為O或l,b'，b"可以相同或不同，并為0至6的整數(shù)，R4，R5相同或不同，并選自H，1至6碳的碳氫化合物，D可以不存在也可以為含有0至兩個雜原子的1至8碳的碳氫化合物，雜原子為N，0，S中的一種或兩種，B中所述的任一R4取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。B中所述的任一R5取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。優(yōu)選Rl為甲基。優(yōu)選TH的17位為0H優(yōu)選X可以為O優(yōu)選TH的9，11位為雙鍵。優(yōu)選tl為1時，TH上的17位為羥基，與-B-0-N02相連，B與T上的羥基以酯鍵形式相連，即TH上-OH中的0分別與B上的-C^-相連形成-0C0-，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>tl為1時的化合物1優(yōu)選tl為2時，TH上的17位為羥基，與一個-B-0-N02相連，T上的另一個羥基與另一個-B-0-N02相連，B分別與T上的羥基以酯鍵形式相連，即TH上-OH中的0分別與B上的-O0-相連形成-0C0-，這兩個-B-0-N02基團中的B在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。優(yōu)選R2為十個碳以內(nèi)的碳氫化合物優(yōu)選R2為甲基優(yōu)選R3是H優(yōu)選tl為2時，TH上的17位為羥基，與一個-B-0-N02相連，TH上3位為羥基，與另一個-B-0-N02相連，B分別與TH上的羥基以酯鍵形式相連，即TH上-OH中的0分別與B上的-C=0-相連形成-OCO-，這兩個-B-0-N02基團中的B在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。優(yōu)選X為O，R2為甲基，R3是H，TH上的17位為羥基。優(yōu)選X為O，R2為甲基，R3是H，TH上的17位為羥基，TH的9，11位為雙鍵。優(yōu)選B為-C0(0)a(CR4R5)b.D(CR4R5)h..-a為O時，R4，R5相同或不同，并選自H，1至6碳的直鏈或支鏈烴類，D可以不存在也可以為含有0至2個雜原子的1至8碳的烴。優(yōu)選B為-C0(0)a(CR4R5)b.D(CR4R5)b..-a為l時，R4，R5相同或不同，并選自H，l至6碳的碳氫化合物，D可以不存在也可以為含有0至2個雜原子的1至8碳的五元或六元環(huán)碳氫化合物。優(yōu)選B為-C0(0)a(CR4R5)b.D(CR4R5)h..-a為0或l時，b',b''為0，D為含有0至兩個雜原子的1至8碳的五元或六元環(huán)烴，雜原子在環(huán)上。優(yōu)選B為-C0(0)a(CR4R5)b.D(CR4R5)b..-a為0時，D可以不存在也可以為含有1至兩個雜原子的1至8碳的五元或六元環(huán)烴，雜原子在環(huán)上。式l化合物優(yōu)選為3-羥基雌甾-1,3,5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17e-(3-硝基氧)丙酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-170-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯3-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)-四烯_2-甲氧基-17-酮-3-(2-硝基氧)醋酸酯3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三烯-17P-(4-硝基氧甲基)苯甲酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17P-羥基-3-(2-硝基氧)醋酸酯-17-(3-硝基氧)丙酸酯3-輕基雌甾-1，3，5(10)-三烯-2-甲氧基-17e-羥基-17-醋酸酯-3-(2-硝基氧)醋酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)-三烯_2-甲氧基-17P-羥基-3-(2-硝基氧)醋酸酯3-羥基雌甾-1,3,5(10)，9(11)-四烯-2-乙氧基-17P羥基-17-(2-硝基氧)醋酸酯3-羥基雌甾-1，3，5(10)-三烯-2-乙氧基-17-酮-3-(2-硝基氧)醋酸酯式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物作為治療哺乳動物疾病的藥物中的應(yīng)用，哺乳動物優(yōu)選是人類。式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物作為治療哺乳動物疾病的藥物為抑制哺乳類動物血管內(nèi)皮生長因子的藥物，哺乳動物優(yōu)選是人類。式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物作為治療哺乳動物疾病的藥物為血管生成抑制劑的藥物，哺乳動物優(yōu)選是人類。上述任一項的化合物在制備治療腫瘤類疾病藥物的應(yīng)用。上述任一項的化合物在制備治療眼科眼部新生血管疾病的藥物中的的應(yīng)用。上述任一項的化合物在制備治療惡性血液病的藥物中的應(yīng)用。上述任一項的化合物在制備治療支氣管哮喘的藥物中的應(yīng)用。上述任一項的化合物在制備治療腦白質(zhì)疏松疾病的藥物中的應(yīng)用。一種藥用組合物，該組合物包含上述任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。上述任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物與一種或多種生理學(xué)上可接受的藥物輔料混合。上述藥用組合物可以配制成液體制劑、滅菌制劑與無菌制劑、固體制劑、半固體制劑、氣霧劑。上述藥用組合物，該組合物還包含另一種治療腫瘤的藥物。上述組合物還包含另一種治療眼部新生血管疾病的藥物。上述組合物還包含另一種治療惡性血液病疾病的藥物。上述組合物還包含另一種治療支氣管哮喘的藥物。一種眼用制劑，該制劑含有上述任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，以及作為載體的藥用輔料。一種口服制劑，該制劑含有上述任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，以及作為載體的藥用輔料。藥用組合物，該組合物還包含另一種治療腫瘤的藥物。一種制備上述的式1化合物方法，其包括(1)將TH在堿性有機溶媒存在下與YBOH的酸酐YBOBY、羧酰氯YBCl或羧酰溴YBBr反應(yīng)形成TBY;Y為溴或氯原子，然后(2)將上述反應(yīng)中得到的產(chǎn)物TBY通過與硝酸的無機鹽在有機溶媒中反應(yīng)得到T-B-0-N02。一種制備上述B與TH的3位羥基相連的式1化合物方法，其包括(1)將TH在堿性有機溶媒存在下與YBOH的酸酐YBOBY、羧酰氯YBCl或羧酰溴YBBr反應(yīng)形成TBY;催化劑可以存在或不存在，Y為溴或氯原子，然后(2)將上述反應(yīng)中得到的產(chǎn)物TBY通過與硝酸的無機鹽在有機溶媒中反應(yīng)得到T-B-0-N02。當(dāng)TH的17位取代基中為羥基時，可以先對相應(yīng)羥基進行酯化保護，再形成3位取代硝酸酯后脫去酯基保護，產(chǎn)生化合物l。一種制備上述的B與TH的17位的羥基相連的式1化合物方法，其包括(1)將TH在堿性有機溶媒存在下與YBOH的酸酐YBOBY、羧酰氯YBCl或羧酰溴YBBr反應(yīng)形成TBY;Y為溴或氯原子，然后(2)將上述反應(yīng)中得到的產(chǎn)物TBY通過與硝酸的無機鹽在有機溶媒中反應(yīng)得到T-B-0-N02。上述制備方法，其特征在于第(1)步反應(yīng)中的堿性有機溶媒為三烷基胺或吡啶等，催化劑為DMAP，第(2)步反應(yīng)中的硝酸的無機鹽為硝酸銀，有機溶媒為乙腈。上述tl為2的式1化合物，相同或不同的B分別與TH的17位和3位的羥基相連的，其包括(1)將TH在堿性有機溶媒存在下與YBOH的酸酐Y，B'0B，Y'、羧酰氯Y'B'Cl或羧酰溴Y'B'Br反應(yīng)形成TB'Y';催化劑可以存在或不存在，Y'為溴或氯原子，其中B'與17位取代基上的羥基相連，然后(2)將上述化合物TBY在堿性有機溶媒存在下與Y''B''OH的酸酐Y，，B，，0B'，Y，，、羧酰氯Y'，B，，C1或羧酰溴Y'，B'，Br反應(yīng)形成Y，'B，，TB'Y，；催化劑可以存在或不存在，Y，，為溴或氯原子，其中B'，與3位取代基上的羥基相連，然后(3)將上述反應(yīng)中得到的產(chǎn)物Y'B'TB''Y''通過與硝酸的無機鹽在有機溶媒中反應(yīng)得到02N-0-B，TB''-0-N02,B，，、B'的定義范圍同B。其中上述(1)至(3)步中的B'，、B'可以相同或不同。上述制備方法，其特征在于第(1)、(2)步反應(yīng)中的堿性有機溶媒為三垸基胺或吡啶等，催化劑為DMAP，第(3)步反應(yīng)中的硝酸的無機鹽為硝酸銀，有機溶媒為乙腈。血管新生性疾病，主要涉及腫瘤、眼部新生血管、惡性血液病、支氣管哮喘、腦白質(zhì)疏松疾病。腫瘤主要是各種實體腫瘤如胃部腫瘤、肺部腫瘤、肝部腫瘤、各種腺體腫瘤、鼻部腫瘤、眼部腫瘤、咽部腫瘤、喉部腫瘤等；惡性血液病是指血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，主要包括白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤及惡性組織細胞病等。本化合物還可在眼部新生血管生成造成的疾病中應(yīng)用眼部新生血管生成造成的疾病涉及角膜、虹膜、脈絡(luò)膜及視網(wǎng)膜等，其造成的滲出、出血和增生等病理改變對眼部結(jié)構(gòu)和功能的損害，是引起視力障礙的重要原因。大部分眼疾病均存在炎癥、缺血、缺氧等病理過程因此，眼病與眼部新生血管形成有密切的關(guān)系。其中眼部新生血管生成造成的疾病包括角膜新生血管性眼病在與角膜新生血管相關(guān)的眼部疾病中，最常見的是配戴角膜接觸鏡所致的角膜新生血管性疾病，其他引起角膜新生血管的眼部疾病有角膜外傷，堿及其他化學(xué)物質(zhì)燒傷，角膜手術(shù)，各種感染包括細菌感染、衣原體感染、病毒感染(單皰病毒和帶狀皰疹病毒等)、原蟲感染(利什曼原蟲)等。虹膜新生血管性眼病常見有新生血管性青光眼，而視網(wǎng)膜脫離、創(chuàng)傷、糖尿病視網(wǎng)膜病變、腫瘤(視網(wǎng)膜母細胞瘤)、視網(wǎng)膜中央靜脈栓塞等是其常見的誘因。視網(wǎng)膜新生血管性眼病糖尿病、腫瘤、視網(wǎng)膜脫離、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、視網(wǎng)膜靜脈周圍炎、全身性紅斑狼瘡、Eales病、Coat病、Takavas病等均可引起。脈絡(luò)膜新生血管性眼病老年性黃斑變性、高度近視、中心性滲出性視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、創(chuàng)傷、腫瘤、眼組織胞漿菌病綜合征、匍行性脈絡(luò)膜病變等均可引起該種眼病。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以認為，本文所涉及的"治療"可以延伸為疾病的預(yù)防和以確定疾病為目的的治療。式(1)化合物在治療哺乳動物的疾病中的劑量以TH的計為0.OOlmg-5mg/kg/天，優(yōu)選0.005mg-2mg/kg/天。式(1)化合物在治療抑制哺乳類動物血管內(nèi)皮生長因子的藥物劑量以TH的計為0.OOlmg-5mg/kg/天，優(yōu)選0.005mg-2rag/kg/天。式(1)化合物在治療哺乳類動物血管新生性疾病藥物的劑量以TH的計為0.001mg-5mg/kg/天，優(yōu)選0.005mg-2mg/kg/天。作為治療人的疾病時，人的體重一般按照50Kg計算，所以本發(fā)明中所述人用劑量可以按照人的實際體重計算，也可以按照上述劑量X50計算。本發(fā)明化合物可配制成任何便于用藥的制劑，因此本發(fā)明在其范圍內(nèi)也包含本發(fā)明化合物，可與一種或多種生理學(xué)上可接受的稀釋劑或載體混合的藥物組合物。本發(fā)明化合物可配制成任何便于人用藥的制劑，該制劑治療疾病中其活性成分的用量為以TH的計為0.001mg-5mg/kg/天，優(yōu)選0.005mg-2mg/kg/天。作為治療人的疾病時，人的體重一般按照50Kg計算，所以本發(fā)明中所述人用量可以按照人的實際體重計算，也可以按照上述用量X50計算。一種藥用組合物，該組合物包含任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。上述藥用組合物包含式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物與一種或多種生理學(xué)上可接受的藥物輔料混合。上述藥用組合物可以配制成液體制劑、滅菌制劑與無菌制劑、固體制劑、半固體制劑、氣霧劑，上述制劑類型可以按照藥劑學(xué)(第五版，人民衛(wèi)生出版社，崔福德主編)中的相關(guān)定義理解。式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物可以作為治療眼部新生血管生成造成的疾病的藥物。一種注射制劑，該制劑含有權(quán)利要求卜2中任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，以及作為載體的藥用輔料。注射制劑中的非活性成分含有注射用水或注射用油。一種口服制劑，該制劑含有式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，以及作為載體的藥用輔料。該口服制劑可以按照藥劑學(xué)(第五版，人民衛(wèi)生出版社，崔福德主編)中的相關(guān)制劑的方法配制。本發(fā)明進一步提供制備這樣的藥物組合物的方法，該方法包括將各種組分混合。本發(fā)明化合物可安常規(guī)方法(例如)配制成口服、口腔、舌下、非腸道、注射、埋植、局部用藥或直腸給藥的制劑，尤其是口服或注射的制劑。其中口服制劑包括而不僅限于片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑等口服的固體及口服液等可口服的液體；注射劑包括而不僅限于針劑、混懸劑、輸液劑等可注射的液體或粉針劑等可用于注射的固體。口服制劑中的非活性成分含有淀粉、乳糖、水中的一種或幾種。本發(fā)明的化合物和藥物制劑可以與一種或多種選自以下的其他治療劑聯(lián)合使用或是包含一種或幾種這樣的治療劑抑制腫瘤的藥物、治療眼部新生血管生成造成的疾病的藥物、治療哮喘的藥物。抑制腫瘤的藥物包括而不限于作用于DNA化學(xué)結(jié)構(gòu)的藥物(包括烷化劑、蒽環(huán)類和鉑類化合物)；影響核酸合成的藥物(主要是抗代謝物)；作用于DNA模板影響DNA轉(zhuǎn)錄或抑制DNA依賴RNA聚合酶而抑制RNA合成的藥物；影響蛋白質(zhì)合成的藥物(如高三尖杉酯堿、紫杉類、長春花堿和鬼臼堿類等)；紫杉醇類化合物；其他類型的藥物(如激素、門冬酰胺酶、維甲類化合物等)。抑制腫瘤的藥物優(yōu)選順鉑。治療眼部新生血管生成造成的疾病的藥物包括而不限于內(nèi)皮抑素(Endostatln)、血管生成抑制因子、阿奈可他等。治療哮喘的藥物包括而不僅限于糖皮質(zhì)激素，白三烯抑制劑、受體激動劑、黃嘌呤類藥物、抗膽堿藥、抗過敏藥。式(1)化合物的鹽是指TH上的0H與之相連接形成的藥用鹽，藥用鹽優(yōu)選磷酸、琥珀酸、馬來酸、硫酸的鹽，更優(yōu)選指磷酸、琥珀酸、馬來酸、硫酸的鈉、鉀、鎂、鈣鹽。化合物TH的制法可以參見中國專利申請200710058413.5，"一種治療腫瘤的雌甾藥物"中的方法。DMAP為4-二甲氨基吡啶。具體實施例方式本發(fā)明中柱層析方法層析柱的長度最少70cm，內(nèi)部裝填254-硅膠，并將需要分離的有機物全溶于最少量的氯仿甲醇=1:1中，用最少量254-硅膠將該溶液吸收后置于層析柱內(nèi)硅膠的上部，使用流動相洗脫，層析柱下用若干個10ml試管接經(jīng)過柱層析得到的溶液，控制流速為10ml/3min，將每個試管的溶液用HPLC進行分析,將保留時間相同的試管溶液合并，取主點的化合物進行重結(jié)晶，得到相應(yīng)的產(chǎn)物。確定主點的方法將需要分離的有機物用HPLC進行分析，除原料點外峰面積最大的點確定為主點，其保留時間為主點的保留時間。HPLC可以按照T-(C0CH3)"(T和C0CH3相連的方式與T和B相連的方式相同)的相應(yīng)方法測定，也可以通過以下條件測定，以主點含量最低的方法為準(zhǔn)設(shè)備HP1084B液相色譜儀，HP79850BLC終端和UV檢測器柱材料HypersllC18,5um，125X4.6咖檢測波長242nm流動相甲醇水=5.8:4.2柱溫45°C流速約1.2ml/分實施例l3-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)-四烯_2-甲氧基-17P羥基-17-(3-硝基氧丙酸酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>1.3-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)_四烯-2-甲氧基-17p-羥基-17-(3-氯)丙酸酯方法1:將40ml的三乙胺和0.015mol的3-氯丙酰氯在反應(yīng)并內(nèi)攪拌并降溫至-20度，緩慢加入0.01mo13-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)-四烯-2_甲氧基-17P-羥基并保持溫度-20至-15度，該反應(yīng)為放熱反應(yīng)，所以加入速度和溫度都需要小心控制，將上述反應(yīng)液溫度保持在-io'C以下，加畢后于1小時內(nèi)緩慢升至0-5度，與該溫度保溫10小時后，稀釋到50mlPH為1-2溫度為0度的水中，緩慢加入鹽酸調(diào)節(jié)PH為中性，該液體使用二氯甲烷90ml提取三次(30mlX3)，再用水90ml三次(30mlX3)洗滌二氯甲烷層，pH值調(diào)到中性，二氯甲烷層濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物粗品0.0053mol。方法2:將0.01mol3-羥基雌甾-l,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17e-羥基加入601111吡啶中在，-20。C加入攪拌均勻，在-20至-15。C慢慢加入3-氯丙酰氯0.0015mo1，該反應(yīng)為放熱反應(yīng)，所以加入速度和溫度都需要小心控制，將上述反應(yīng)液溫度保持在-1(TC以下，加完后在-5度下保溫10小時，然后將反應(yīng)液冷卻到0—5。C，稀釋到50mlPH為1-2溫度為0度的水中，并在冷卻和攪拌下慢慢加入HCl,上述反應(yīng)為放熱反應(yīng)，但是溫度不能超過1(TC，一定量的HC1是用來將pH值調(diào)到中性。該液體使用二氯甲垸90ml提取三次(30mlX3)，再用水90ml三次(30mlX3)洗滌二氯甲烷層，pH值調(diào)到中性，二氯甲烷層濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物粗品O.0051mo1。反應(yīng)方法1和2中也可以使用DMAP，相應(yīng)的含量會降低40%，反應(yīng)產(chǎn)生的產(chǎn)物會明顯增加3-羥基-(3-氯)丙酸酯和3，17-雙羥基-雙(3-氯)丙酸酯的雜質(zhì)。2.3-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)_四烯-2-甲氧基-羥基-17-(3-硝基氧)丙酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯_2-甲氧基-173-羥基-17_(3-氯)丙酸酯O.005rao1在乙腈40ml的溶液中，將AgN030.14克加入并回流10小時，后將溶液于減壓下除去溶劑進行柱層析，用甲醇和氯仿(l:l)為流動相洗脫，取其中主點化合物進行減壓濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得標(biāo)題化合物0.0031mo1。元素分析計算值OO:C，63.30;H，6.52;N，3.36;0，26.83元素分析測定值(％):C22H27麗C,63.35;H，6.57;N,3.33;0,26.75'3C-MR(CDC13):1位至22位碳的數(shù)值13C-醒R(CDC1》1位至22位碳的數(shù)值<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例23-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)-四烯_2-甲氧基-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>以3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17e-羥基為原料，按照實施例l的方法與4-溴-3-甲基-2-噻吩甲酰氯、AgN03反應(yīng)得到標(biāo)題化合物0.0030mol。1.3-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17e-羥基-17-(3_甲基-4-溴)-2-噻吩甲酸酯方法l:將40ml的三乙胺、0.015mol的4-溴-3-甲基-2-噻吩甲酰氯在反應(yīng)并內(nèi)攪拌并降溫至0度，緩慢加入0.01mol3-羥基雌甾-l,3，5(10)，9(11)_四烯-2-甲氧基-17P-羥基并保持溫度0-5度，該反應(yīng)為放熱反應(yīng)，所以加入速度和溫度都需要小心控制，將上述反應(yīng)液溫度保持在-l(TC以下，加完后在-5度下保溫10小時，然后將反應(yīng)液冷卻到0—5X:，稀釋到50mlPH為1-2溫度為0度的水中，緩慢加入鹽酸調(diào)節(jié)PH為中性,該液體使用二氯甲烷90ml提取三次(30mlX3)，再用水90ml三次(30mlX3)洗滌二氯甲垸層，pH值調(diào)到中性，后將二氯甲烷層于減壓下除去溶劑進行柱層析，用甲醇和乙酸乙酯(l:l)為流動相洗脫，取其中主點化合物進行減壓濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得標(biāo)題化合物0.0057mo1。方法2:將0.01mo13-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯_2-甲氧基-17e-羥基加入6(^1吡啶中在，0—1(TC加入攪拌均勻，在-15'C慢慢加入4-溴-3-甲基-2-噻吩甲酰氯0.0015mol，該反應(yīng)為放熱反應(yīng)，所以加入速度和溫度都需要小心控制，將上述反應(yīng)液溫度保持在-l(TC以下，力口完后在-5度下保溫10小時，然后將反應(yīng)液冷卻到0—5'C，稀釋到50mlPH為l-2溫度為0度的水中,并在冷卻和攪拌下慢慢加入HCl,上述反應(yīng)為放熱反應(yīng)，但是溫度不能超過2(TC，一定量的HC1是用來將pH值調(diào)到中性。該液體使用二氯甲垸90ml提取三次(30mlX3)，再用水90ml三次(30mlX3)洗滌二氯甲烷層，pH值調(diào)到中性，后將二氯甲烷層于減壓下除去溶劑進行柱層析，用甲醇和乙酸乙酯(l:l)為流動相洗脫，取其中主點化合物進行減壓濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得標(biāo)題化合物O.0054mol。反應(yīng)方法1和2中也可以使用DMAP，相應(yīng)的含量會降低30%，反應(yīng)產(chǎn)生的產(chǎn)物會明顯增加3-酯和3，17-雙酯的雜質(zhì)。2.3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17P-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯_2-甲氧基-17&-羥基-17-(3-甲基-4-溴)-2-噻吩甲酸酯0.005mol在乙腈40ml的溶液中，將AgN030.12克加入并回流20小時，后將溶液于減壓下除去溶劑進行柱層析，用甲醇和乙酸乙酯(l:l)為流動相洗脫，取其中主點化合物進行減壓濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得標(biāo)題化合物0.0029mo1。元素分析計算值(％):C，61.84;H，5.60;N,2.88;0,23.07;S,6.60元素分析測定值(°/。):C25H27N07SC，61.80;H，5.59;N，2.90;S,6.62，0,23.0913C-NMR(CDC13):1位至25位碳的數(shù)值13C-NMR(CDC13):1位至25位碳的數(shù)值<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例33-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17-酮-3-(2-硝基氧)醋酸圃<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>1.3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17-酮-3-(2-氯)乙酸酯方法l:將40ml的三乙胺、0.05g的DMAP和0.015mol的3-氯丙酰氯在反應(yīng)并內(nèi)攪拌并降溫至0度，緩慢加入0.01mol3-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)_四烯-2-甲氧基-17-酮并保持溫度0-5度，該反應(yīng)為放熱反應(yīng)，所以加入速度和溫度都需要小心控制，將上述反應(yīng)液溫度保持在IO'C以下，加畢后于1小時內(nèi)緩慢升至10-15度，與該溫度保溫15小時后，稀釋到50mlPH為1-2溫度為0度的水中，緩慢加入鹽酸調(diào)節(jié)中性，該液體使用二氯甲垸90ml提取三次(30mlX3)，再用水90ml三次(30mlX3)洗滌二氯甲烷層，pH值調(diào)到中性，二氯甲垸層濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得到上述化合物粗品0.0060mo1。方法2:將0.01mo13-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17-酮、0.05g的服AP加入60ml吡啶中在，0—l(TC加入攪拌均勻，在0—1(TC慢慢加入3-氯丙酰氯0.0015mol，該反應(yīng)為放熱反應(yīng)，所以加入速度和溫度都需要小心控制，將上述反應(yīng)液溫度保持在1(TC以下,加完后在這個溫度下保溫15小時，然后將反應(yīng)液冷卻到0—5'C，稀釋到50mlPH為1-2溫度為0度的水中，并在冷卻和攪拌下慢慢加入HCl,上述反應(yīng)為放熱反應(yīng)，但是溫度不能超過2(TC,—定量的HC1是用來將pH值調(diào)到中性。該液體使用二氯甲烷90ml提取三次(30mlX3)，再用水90ral三次(30mlX3)洗滌二氯甲垸層，pH值調(diào)到中性，二氯甲烷層濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得到上述化合物粗品O.0054mol。反應(yīng)方法1和2中也可以不使用DMAP，上述化合物的含量會降低35%,未反應(yīng)的原料會增加。2.3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17-酮-3-(2-硝基氧)醋酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17-酮-(2-氯)乙酸酯0.005mol在乙腈40ml的溶液中，將AgN030.12克加入并回流20小時，后將溶液于減壓下除去溶劑進行柱層析，用甲醇和乙酸乙酯(l:l)為流動相洗脫，取其中主點化合物進行減壓濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得標(biāo)題化合物0.003mol。元素分析計算值(％):C，62.83;H，5.78;N,3.49;0,27.90元素分析測定值(％):C21H23麗C,62.91;H,5.73;N,3.44;0,27.92l3C-NMR(CDCl3):1位至21位碳的數(shù)值wc,2-:三IHH畫c的位置91011121314151613CR128.0136.7117.234.848.547.922.835.9c的位置1718192021222324"C-醒R221.414.9180.476.755.9c的位置12345678126.5111.7158.3114.2138.130.028.238.9c的位置9101112131415163C_NMR44.7133.227.136.742.951.723.727.9c的位置1718192021222324"C-陋R83.012.4166.8130.4131.8130.5142.6130.5c的位置2526272829303132"C-麗R131.879.356.1實施例53-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-170-羥基-3-(2-硝基氧)醋酸酯-17-(3-硝基氧)丙酸酯實施例43-甲氧基雌甾-1,3,5(10)-三烯-173-羥基-17-(4-硝基氧甲基)苯甲酸酉l27以為3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三烯-17e-羥基為原料，按照實施例1的方法與(4-氯甲基)苯甲酰氯、AgNO:,反應(yīng)得到標(biāo)題化合物。元素分析計算值(％):C，69.66;H，6.71;N,3.01;0,20.62元素分析測定值(％):C27H31N06C,69.67;H,6.73;N，3.02;0,20.5813C-麗R(CDC1》1位至27位碳的數(shù)值13C-NMR(CDC13):1位至27位碳的數(shù)值三l一s《B<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>以3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-170_羥基為原料，按照實施例1的方法l與(3-氯)丙酰氯反應(yīng)，得到3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17e-羥基-17-(3-氯)丙酸酯，再根據(jù)實施例3的方法1與(2-氯)乙酰氯得到3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17P-羥基-3-(2-氯)醋酸酯-17-(3-氯)丙酸酯，最后根據(jù)實施例1中的方法與AgN(U用量是原方法的兩倍)反應(yīng)得到標(biāo)題化合物3-羥基雌甾-1,3,5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-羥基-3-(2-硝基氧)醋酸酯-17-(3-硝基氧)丙酸酯。元素分析計算值(％):C，55.38;H，5.42;N,5.38;0，33.81元素分析測定值(％):C24H28N2011C,55.44;H，5.44;N,5.35;0,33.7713C-NMR(CDC13):1位至24位碳的數(shù)值13C-麗R(CDC1》1位至24位碳的數(shù)值<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實施例63-羥基雌甾-1，3，5(10)-三烯-2-甲氧基-17日-羥基-17-醋酸酯-3-(2-硝基氧)醋酸酯將0.002mol3-羥基雌甾-l，3，5(10)-三烯-2-甲氧基-17e-羥基-17-醋酸酯-3-(2-硝基氧)醋酸酯溶于甲醇和氯仿(l:1)10ml中，氮氣保護下于0度滴加0度下飽和的0.0025rao1的碳酸鈉水溶液，攪拌5小時后，用鹽酸調(diào)節(jié)反應(yīng)體系PH為中性后加壓濃縮，除去氯仿，將該溶液稀釋于40ml冰水中，過濾，干燥得標(biāo)題化合物粗品。將粗品進行柱層析，用甲醇和乙酸乙酯(3:2)為流動相洗脫，取其中主點化合物進行減壓濃縮，沖入甲醇進行重結(jié)晶，得標(biāo)題化合物0.OOllmol。元素分析計算值(％):C，62.21;H,6.71;N，3.45;0,27.62元素分析測定值(％):C21H27N07C，62.24;H,6.67;N,3.42;0，27.6713C-NMR(CDC13):1位至21位碳的數(shù)值13C-腿(CDCU:1位至21位碳的數(shù)值c的位置1234567813C-醒R109.4149.0137.3122.7129.830.027.938.9c的位置910111213141516以3-羥基雌甾-1,3，5(10)-三烯-2-甲氧基-羥基-17-醋酸酯為原料，按照實施例3的方法與(2-氯)乙酰氯反應(yīng)得到3-羥基雌甾-1,3，5(10)-三烯-2-甲氧基-羥基-17-醋酸酯-3-(2-氯)醋酸酯，再根據(jù)實施例3中的方法與AgN03反應(yīng)得到標(biāo)題化合物3-羥基雌甾-1,3,5(10)-三烯_2-甲氧基-羥基-17-醋酸酯-3-(2-硝基氧)醋酸酯。元素分析計算值(％):C,61.73;H'6.53;N,3.13;0，28.60元素分析測定值(％):C23H29N08C,61.70;H,6.55;N,3.11;0，28.64"C-國R(CDCl3):1位至23位碳的數(shù)值13C-醒R(CDC1》:1位至23位碳的數(shù)值c的位置12345678't-羅109.4149.0137.3122.7129.830.027.938.9c的位置91011121314151613C,MR44.7139.226.936.742,951.923.731.8c的位置1718192021222324^C-麗R83.212.2179.876.956.1171.521.9實施例73-羥基雌甾-1，3，5(10)-三烯-2-甲氧基-173-羥基-3-(2-硝基氧)醋酸酯<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實施例83-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-乙氧基-170-(2-硝基氧)醋酸酉l<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>以為3-羥基雌甾-1,3,5(10)，9(11)-四烯_2-乙氧基-17P-羥基為原料，按照實施例1的方法與(2-氯)乙酰氯反應(yīng)得到3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-乙氧基-17P—(2-氯)醋酸酯，后根據(jù)實施例1種的方法與AgN03反應(yīng)得到標(biāo)題化合物3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)_四烯-2-乙氧基-17e-(2-硝基氧)醋酸酯。元素分析計算值(％):C,63.30;H,6.52;N,3.36:0,26.83元素分析測定值(。/。)C22H27N07C,63.27;H,6.55;N,3.38;0，26.80"C-薩R(CDCl3):1位至22位碳的數(shù)值13C-NMR(CDC13):1位至22位碳的數(shù)值<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實施例9:3-羥基雌甾-1,3，5(10)-三烯-2-乙氧基-17-酮-3-(2-硝基氧)醋酸熙<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>以3-羥基雌甾-1，3，5(10)_三烯-2-乙氧基-17-酮為原料，按照實施例3的方法與(2-氯)乙酰氯、AgN03反應(yīng)得到3-羥基雌甾-1，3，5(10)-三烯-2-乙氧基-17-酮-3-(2-硝基氧)醋酸酯。元素分析計算值(％):C,63.30;H，6.52;N，3.36;0,26.83元素分析測定值(％):C22H27N07C,63.29:H,6.53;N，3.34;0，26.85'3C-醒R(CDC1》1位至22位碳的數(shù)值l3C-醒R(CDC1》1位至22位碳的數(shù)值<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實施例10:注射劑主藥3-甲氧基雌甾-1,3，5(10)-三烯-170-羥基-17-(4-硝基氧甲基)苯甲酸酯5g輔料煙酰胺70g苯甲醇7.5ml注射用水加至1000ml制備將3-羥基雌甾-1,3，5(10)-三烯_2-甲氧基-17t3-醇-3,17-二(2-硝基氧)醋酸酯先用少量注射用水調(diào)勻待用，再將煙酰胺溶于適量注射用水中，加入活性炭0.1g，攪拌均勻后放置15mln，粗濾脫碳，加注射用水至約900ml，水浴上加熱至8(T90'C，慢慢加入己用注射用水調(diào)好的孕甾-4，9(11)-雙烯-3，20-雙酮-17，21-雙羥基-21-(2-硝基氧)醋酸酯，保溫2(T30rnln,完全溶解后冷卻至室溫。加入苯甲醇，調(diào)節(jié)pH至6.5~6.0，調(diào)整體積至1000ml，然后在10'C以下放置8h，過濾至澄明、灌封，10(TC流通蒸氣滅菌15min即可。實施例ll:口服膠囊用細碎的淀粉將20mg3-羥基雌甾-1，3，5(10)_三烯-2-甲氧基-17P-羥基-17-醋酸酯-3-(2-硝基氧)醋酸酯稀釋混合成200mg的藥物組合物，裝入4號硬膠囊中。藥理實施例l:體外實驗采用生長因子誘導(dǎo)的雞胚絨毛尿囊膜(CAM)血管增生模型觀察式(1)化合物對血管增生的影響，了解式(1)化合物對血管生成的作用。實驗材料受精3日齡雞胚玻璃纖維濾紙血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)Chemlcon公司產(chǎn)品將實施例1-9所制成的化合物先用DMS0溶解，再用PBS稀釋至所需要的濃度(DMSO濃度〈0.1%)實驗方法1.CAM模型的建立75%乙醇清洗雞胚卵殼于超凈臺中吹干，水平放置5min后，在100mm培養(yǎng)皿邊緣小心將卵殼敲碎，卵內(nèi)容物置于培養(yǎng)皿中(培養(yǎng)皿中預(yù)先加有IOralDMEM培養(yǎng)基)。將此培養(yǎng)皿放入150mm大培養(yǎng)皿中(大培養(yǎng)皿中加少許水)，蓋上皿蓋，置于37。C、5%0)2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2.對CAM血管增生的影響用打孔機將玻璃纖維濾紙制成直徑3mm的小圓片，濕熱滅菌,將試劑各10yl滴于玻璃纖維濾紙上，制成藥膜，吹干備用。雞胚培養(yǎng)3d后，隨機分成13組，每組8個，將實施例l-9所得的化合物設(shè)為9個給藥組(lg/L)，同時給予生長因子(2yg/L)，以及生長因子(VEGF)單獨刺激組(陽性對照組)和PBS(磷酸鹽緩沖液，PH7.4)刺激組(陰性對照組)。將藥膜貼于CAM和卵黃囊膜(yolksacmembrane，YSM)外2/3處血管較少的部位。加藥48h后，顯微鏡下觀察，計數(shù)藥膜周圍5mm內(nèi)大、中、小血管數(shù)。表l對CAM血管增生的影響表(元土s，n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)以i±S表示.組間比較應(yīng)用t檢驗3.結(jié)果l式(1)化合物對VEGF誘導(dǎo)的CAM血管增生的影響結(jié)果表l，PBS組血管生長良好.VEGF組小血管增生明顯，式(1)化合物的各組血管增生明顯受到抑制.小血管顯著減少，基本回到正常水平。CAM是經(jīng)典的血管生成評價模型，具有方法簡便、易觀察、價廉等優(yōu)點.是目前最常用的在體模型。VEGF是重要的促血管生成因子，能刺激內(nèi)皮細胞的增生和遷移，促進血管生成，且在多種腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)過度表達。本研究表明式(1)化合物抑制VEGF誘導(dǎo)的CAM血管增生，表明式(1)化合物具有抑制VEGF的促血管生成作用。式(1)化合物對血管生成有抑制作用，進一步證實了具有抑制腫瘤血管生成的潛力。藥理實施例2:體內(nèi)實驗1.實驗動物及瘤株實驗選用昆明種小鼠，雄性，體重(20土2)g，160只，分16組，每組10只。小鼠肉瘤瘤株S1802.藥品順鉑(DDP)注射液20ml:20mg/支。3.方法3.1瘤鼠模型的建立小鼠肉瘤S180瘤株，腹腔傳代接種。待腹水生長良好時，抽出腹水，細胞計數(shù)，調(diào)整細胞濃度為2X107個細胞/ml，在小鼠腋下皮下注射S180肉瘤細胞，每只接種0.25ml，于第ll天觀察局部腫瘤生長情況。3.2治療及分組160只小鼠于接種當(dāng)天隨機分為16組，每組10只。按下列表格給與藥物試驗分組情況表組號活性成分給藥方式給藥量對照組生理鹽水每日口服一次0.4mlDDP組順鉑隔日腹腔注射一次0.5mg/kg1實施例l每日口服一次lmg/kg2實施例2每日口服一次lmg/kg3實施例3每日口服一次lmg/kg4實施例4每日口服一次lmg/kg5實施例5每曰口服一次lmg/kg6實施例6每日口服一次lmg/kg7實施例7每日口服一次lmg/kg8實施例8每日口服一次lrag/kg9實施例9每日口服一次lmg/kg10實施例5每日口服一次0.01rag/kg11實施例5每日口服一次0.lmg/kg12實施例5每日口服一次10mg/kg13實施例5每日口服一次20mg/kgDDP聯(lián)合組實施例5實施例5每日口服一次，實施例5，lmg/kg和DDPDDP隔日腹腔注射一次DDP，0.5mg/kg注實施例試驗組中給藥量按活性成分計。根據(jù)文獻"順鉑對小鼠骨髓遺傳毒性的研究"(《癌變.畸變.突變》，1996年8巻6期，362-365)中的介紹，對小鼠采用0.5mg/kg的給藥量。用藥10d，末次灌胃后60min，處死各組小鼠，剝?nèi)×鰤K、稱重，瘤塊作病理組織切片。按公式計算抑瘤率抑瘤率=(對照組平均瘤重-實驗組平均瘤重)/對照組平均瘤重Xl(K)c/。。3.3微血管染色免疫組化SABC法染色血管，即用型微血管染色試劑盒(CD31)為武漢博士德生物公司產(chǎn)品。各組瘤體剝離后，切取標(biāo)本，固定，包埋，切片。經(jīng)染色后的切片，內(nèi)皮細胞褐染，血管呈黃褐色，易于辨認。MVD的測定MVD按照Weldner等人(WeldnerN，SempleJP,WelchWR。etal.TumoranglogeneslsandMetastastaslscorrelationInInvasivebreastcarclnonma,NEnglJMed，1991，324，1-8)的方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)進行，計算腫瘤內(nèi)著色的毛細血管和微小血管，即在低倍鏡視野下掃視整個腫瘤組織切片，選擇最密集的微血管標(biāo)記區(qū)，凡呈現(xiàn)黃褐色標(biāo)記清晰的單個內(nèi)皮細胞或內(nèi)皮細胞串均作為一個可計數(shù)的微血管，有較厚肌壁的大血管及管腔面積大于8個紅細胞直徑的血管不計數(shù)。計數(shù)方法先在低倍鏡(10X10)視野下掃視整個組織切片，在腫瘤浸潤區(qū)選擇最密集的3個微血管標(biāo)記區(qū)視野，即所謂的"新生血管熱點區(qū)"，然后在相同的背底、背體條件下，以高倍鏡(20X20)視野(0.72,2)為標(biāo)準(zhǔn)計數(shù)所有染色的微血管數(shù)，取其平均值作為該樣本的測定值。3.4VEGF免疫組化VEGF免疫組化檢測試劑盒(即用型)，光學(xué)顯微鏡下觀察VEGF陽性染色以腫瘤細胞及其附近的血管內(nèi)皮細胞漿或胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達。然后每張染色切片通過MP1AS—1000高清晰度彩色病理圖像分析系統(tǒng)進行吸光度(面密度)和強度(灰度)測定。3.5統(tǒng)計方法運用SPSS統(tǒng)計軟件，采用q檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。4.結(jié)果4.1S180各組小鼠移植瘤重變化比較瘤重的變化各治療組瘤重均顯著低于對照組，與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，實驗結(jié)果表明各種式(1)化合物對S180移植瘤有明顯抑制作用，與DDP合用具有增效作用，而不同劑量的式(1)化合物對S180移植瘤也具有劑量正相關(guān)的抑制作用，具體情況見表2。表2式(1)化合物對S180移植瘤的抑制作用Ui"D<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>4.2式(1)化合物對S180瘤體微血管密度的影響各組腫瘤病理標(biāo)本經(jīng)CD31染色，腫瘤組織間質(zhì)血管均有著色，以內(nèi)皮細胞被染成黃褐色為陽性表達，微血管的大小、形態(tài)差異較大，有的僅為單個內(nèi)皮細胞和內(nèi)皮細胞族，有的管腔不明顯或形態(tài)不規(guī)則，腫瘤邊緣組織的MVD高于中央。對照組腫瘤內(nèi)見大量的新生毛細胞血管，陽性目標(biāo)為位于腫瘤組織及間質(zhì)成片狀或團塊狀分布的黃褐色顆粒，各用藥組陽性表達細胞顆粒減少，見表3。表3S180瘤體平均微血管密度(i4"彌》<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>4.3式(1)化合物對小鼠S180肉瘤組織VEGF表達的影響免疫組化結(jié)果顯示，光學(xué)顯微鏡下觀察對照組腫瘤組織及其間質(zhì)見大量呈片狀或團塊狀分布的棕黃色顆粒，各用藥組陽性表達細胞明顯減少。對VEGF表達平均面積密度和平均灰度結(jié)果見表4。表4S180肉瘤組織VEGF表達數(shù)據(jù)表(i土"銀)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>權(quán)利要求1.一種如下通式的化合物1或其酯或鹽T-(B-O-NO2)t1，t1為1或2，T-H為甾體化合物，T為化合物T-H除去H的甾體殘基，T與H是以T上的氧原子與H相連，形成羥基即O-H的形式相連。B與TH上的t1個羥基以酯鍵形式相連，即TH上的t1個取代基的-OH中的O分別與t1個B上的-C＝O-相連形成-O-CO-，t1為2時，TH上的兩個羥基分別與兩個-B-O-NO2相連，這兩個-B-O-NO2基團中的B在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。T的取代通式中所示的CH基中的H或CH2基中的H2可以不存在取代基，也可以存在的取代基，各位置的取代基可為在第3位可以是OR3，R3是H或十個碳以內(nèi)的碳氫化合物或含有1-2個雜原子的十個碳以內(nèi)的碳氫化合物，雜原子為N，O，S中的一種或兩種；在9，11位可以是雙鍵在11位可以是羥基在17位可以是酮基、OH、或O-CO-R，R為十個碳以內(nèi)的碳氫化合物或含有1-2個雜原子的十個碳以內(nèi)的碳氫化合物，雜原子為N，O，S中的一種或兩種R1可以為氫或具有1至4個碳原子的直鏈或支鏈烷基X可為O，S中的一種或是不存在R2可以不存在或為H、十個碳以內(nèi)的碳氫化合物或含有1-2個雜原子的十個碳以內(nèi)的碳氫化合物，雜原子為N，O，S中的一種或兩種B為-CO(O)a(CR4R5)b’D(CR4R5)b”-a為0或1，b’，b”可以相同或不同，并為0至6的整數(shù)，R4，R5相同或不同，并選自H，1至6碳的碳氫化合物，D可以不存在也可以為含有0至兩個雜原子的1至8碳的碳氫化合物，雜原子為N，O，S中的一種或兩種，B中所述的任一R4取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。B中所述的任一R5取代基在其定義的范圍內(nèi)可以相同或不同。2.如權(quán)利要求l所述的式l化合物為3-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17e-(3-硝基氧)丙酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯-2-甲氧基-17e-(3-甲基-4-硝基氧)-2-噻吩甲酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)，9(11)-四烯_2-甲氧基-17-酮-3-(2-硝基氧)醋酸酯3-甲氧基雌甾-1,3，5(10)-三烯-(4-硝基氧甲基)苯甲酸酯3-輕基雌甾-1,3，5(10)，9(11)_四烯-2-甲氧基-170-羥基-3-(2-硝基氧)醋酸酯-17-(3-硝基氧)丙酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)-三烯-2-甲氧基-17e-羥基-17-醋酸酯-3-(2-硝基氧)醋酸酯3-羥基雌甾-1，3，5(10)-三烯-2-甲氧基-170-羥基-3-(2-硝基氧)醋酸酯3-羥基雌甾-1，3，5(10)，9(11)-四烯-2-乙氧基-羥基-17-(2-硝基氧)醋酸酯3-羥基雌甾-1,3，5(10)_三烯-2-乙氧基-17-酮-3-(2-硝基氧)醋酸酯3.權(quán)利要求l中任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物作為治療哺乳動物疾病的藥物中的應(yīng)用。4.如權(quán)利要求3所述的，其特征在于治療哺乳動物疾病的藥物為抑制哺乳類動物血管內(nèi)皮生長因子的藥物。5.如權(quán)利要求3所述的，其特征在于治療哺乳動物疾病的藥物為血管生成抑制劑的藥物。6.—種藥用組合物，該組合物包含權(quán)利要求1-2中任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。7.—種權(quán)利要求6的藥用組合物，權(quán)利要求1-2中任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物與一種或多種生理學(xué)上可接受的藥物輔料混合。8.—種注射制劑，該制劑含有權(quán)利要求1-2中任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，以及作為載體的藥用輔料。9.一種口服制劑，該制劑含有權(quán)利要求1-2中任一項定義的式1化合物或其生理學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，以及作為載體的藥用輔料。10.如權(quán)利要求1-2的任一項定義的式1化合物，在治療哺乳動物的疾病中的劑量以TH的計為0.OOlmg-5mg/kg/天。全文摘要一種如下通式的化合物1或其酯或鹽T-(B-O-NO2)_t1，t1為1或2，T-H為甾體化合物，T為化合物T-H除去H的甾體殘基，T與H是以T上的氧原子與H相連，形成羥基即O-H的形式相連。文檔編號A61K31/58GK101434631SQ20071015019公開日2009年5月20日申請日期2007年11月16日優(yōu)先權(quán)日2007年11月16日發(fā)明者盧彥昌,姚民芳,亮孫,樂張,靜李,胡筱蕓,健行,郝于田,松陳,英韓申請人:天津金耀集團有限公司