專利名稱：白藜蘆醇和丹酚酸b復(fù)方制劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物活性成分組合領(lǐng)域，具體涉及一種由a):白藜蘆醇或其衍生 物，和b)丹酚酸B或其可藥用鹽組成的復(fù)方。
技術(shù)背景白黎盧醇(Resvemtrol)，化學(xué)名稱為芪三酚，屬于多酚類化合物。廣泛存在于 葡萄、花生和多種藥用植物中，目前至少已經(jīng)在21個(gè)科、31個(gè)屬的72種植物中 發(fā)現(xiàn)了白黎蘆醇。對白黎蘆醇生理功能的認(rèn)識(shí)源于WHO的一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)査，流 行病學(xué)調(diào)査資料顯示，法國人血管疾病的發(fā)病率明顯低于其他國家，這與其紅葡 萄酒的攝入量較高有關(guān)，進(jìn)一步研究證實(shí)，白黎蘆醇是紅葡萄酒中發(fā)揮心血管保 護(hù)作用的主要物質(zhì)。白黎蘆醇具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗癌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、 抗凝血、抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)及神經(jīng)保護(hù)等。對心血管方面的作用，白黎蘆 醇主要通過以下方面加于調(diào)節(jié)(1)減少缺血-再灌注心肌細(xì)胞凋亡，保護(hù)缺血性 心肌細(xì)胞免收損傷；(2)減少低密度脂蛋白的氧化，阻斷氧化性低密度脂蛋白引 起動(dòng)脈粥樣硬化病變早期標(biāo)志中脂質(zhì)條紋的形成，降低人血清脂質(zhì)水平；(3)抑 制血栓烷的形成，同時(shí)還可降低由二磷酸腺苷(ADP)、膠原和凝血酶誘導(dǎo)的血小 板聚集率；(4)通過抑制巨噬細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的核因子-kB而減少胞質(zhì)一氧化氮 合酶(iNOS)蛋白的穩(wěn)定狀態(tài)的mRNA水平，以達(dá)到抗氧化作用。此外，白黎蘆 醇還可通過保護(hù)肝細(xì)胞、抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞西方，阻止腫瘤新生血管生成而 起到保肝和抗腫瘤的作用。丹參含有丹酚酸、丹參素、丹參酮等多種活性成分，具有活血化瘀、安神寧 心、排膿止痛的功效，臨床常用于治療冠心病、心絞痛等各種血瘀或血行不暢病
癥。近年來的大量藥理試驗(yàn)研究表明，丹參對多種肝臟疾病，包括急、慢性肝炎、 脂肪肝、肝纖維化、肝腹水等有明顯療效。丹參具有良好的護(hù)肝降酶、軟縮肝脾、 改善血清蛋白含量，抗炎，提高免疫功能，促進(jìn)纖維吸收，對慢性肝炎轉(zhuǎn)化為肝 硬化起延緩與阻斷作用。丹酚酸是從丹參中提取水溶性成分物質(zhì)，研究表明不但 可抑制肝纖維組織的增生，而且可促進(jìn)已形成的肝內(nèi)膠原纖維降解和重吸收，保護(hù)缺血性心、腦血管細(xì)胞免收損傷、增加冠脈血流量的作用，而丹酚酸B為丹參 水溶性成分的主要成分。本發(fā)明的目的是提供一種由a) :白藜蘆醇或白藜蘆醇衍生物，和b) :丹酚酸B或丹酚酸B的可藥用鹽組成的一種復(fù)方制劑，在研究中發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明復(fù)方制劑在治療心腦血管疾病 和保肝方面有很好的療效，'組合在一起能起到協(xié)同增強(qiáng)的作用。本發(fā)明中，白黎蘆醇衍生物是指具有如下通式結(jié)構(gòu)的化合物其中R,、 R2、 R3中至少有一個(gè)或全部為氫、Cl-C5飽和或不飽和烴基、糖基， 或?yàn)轷セ鵕4CO- (R4為氫或Cl-C3飽和或不不和烴基)、或?yàn)榻饘匐x子。其中優(yōu) 選R2或&中的一個(gè)為糖基，其余兩個(gè)為氫，糖基優(yōu)選為葡萄糖基，即優(yōu)選白藜蘆 醇苷。本發(fā)明中所涉及到的丹酚酸B的可藥用鹽是指丹酚酸B的金屬鹽，優(yōu)選為丹 酚酸B的鎂鹽。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明處方中，活性成分a)白藜蘆醇或白藜蘆醇的衍生物，與b)丹酚酸B或丹酚酸B的可藥用鹽的重量比為100: 1-1: 100，優(yōu)選20: 1-1: 20。本發(fā)明中所用的原料白黎蘆醇或白黎蘆醇衍生物，可以是通過合成方法得到 的，也可以是直接從植物中提取分離得到的，如從葡萄、虎杖、花生等植物中提取分離得到。丹酚酸B是指直接從丹參或其他植物中提取分離得到的原料，也可 以是以合成或其他方法得到的。丹酚酸B的可藥用鹽是指以丹酚酸B為原料，通 過適當(dāng)?shù)臈l件反應(yīng)得到其鹽。以本發(fā)明活性成分制成的制劑，主要是口服制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、 滴丸劑、顆粒劑、口服液等，也可以是注射用制劑，如水針、粉針、大輸液，還 可以是透皮吸收制劑，如透皮貼劑。本發(fā)明中，除含有有效量的活性成分外，還含有制藥上可接受的藥用載體、 輔料，如稀釋劑、潤滑劑、潤濕劑、崩解劑、粘合劑、防腐劑、乳化劑、助溶劑、 助懸劑、填充劑等。本發(fā)明中，活性成分在組合物中所占的重量比例為1%-30%，余量為藥用輔料等。本發(fā)明復(fù)方在保護(hù)缺血-ff灌注心肌細(xì)胞免受損傷、保護(hù)缺血性腦細(xì)胞、抗氧 化、保肝、抗腫瘤等方面有較好的療效，尤其是在用于心血管疾病和保肝功能方 面，其作用強(qiáng)于任何一種單獨(dú)用藥，具有協(xié)同增強(qiáng)的作用。 具體實(shí)施例以下從體內(nèi)體外藥理實(shí)驗(yàn)對本發(fā)明復(fù)方制劑的治療效果做進(jìn)一步說明。1 、 對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用取40只wistar大鼠，體重220-250g，雌雄不限，隨機(jī)分為5組，分別為假手 術(shù)組、對照組和給藥組。對照組(A組)iv等容量的生理鹽水，給藥組分別給予 丹酚酸B或丹酚酸B鎂鹽10mg/kg(C組)、白藜蘆醇或白黎蘆醇苷15mg/kg(D組)、 丹酚酸B或丹酚酸B鎂鹽6mg/kg+白藜蘆醇或白黎蘆醇苷9mg/kg (E組)，給藥1 次/天，連續(xù)3天，假手術(shù)組不結(jié)扎頸總動(dòng)脈，其余處理同對照組。末次給藥10min 后，大鼠以烏拉坦1.0g/kgip麻醉，參照文獻(xiàn)(潘鑫鑫，劉天培.人生皂苷對急性 腦缺血的保護(hù)作用[J].南京醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).1992，12(3):237-239.)方法結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng) 脈，30min后再回復(fù)腦供血，24h后斷頭取腦，去除小腦和腦干，制成10°/。的勻漿， 經(jīng)分級離心后取上清液，按硫代巴比妥酸法測定MDA含量，按試劑盒說明書測定 LDH活性和SOD活性。蛋白定量用Folin酚法(Lowry O H, Rosenbaugh N J， Farr A L. Protein measurement with folin phenol reagent[J]. J Biol Chem, 1951,193:265-271 )。 結(jié)果見表l表l對大鼠急性不完全性腦缺血再灌注損傷的影響(S士s, n=6)組別劑量 mg/kg.dLDH U/mg蛋白MDA nmol/mg蛋白SOD U/mg蛋白A一188±3014.29±2.135.37 ±0.76B—108±27##26.37±2.67##2.04 土 0.5 l糾C10167±32**17.94±2.16**3.92 土 0.67**D15142 ±26*18.71 ±2.37*3.47 ±0.46*E6+9179±39**14.08±2.09**4.99±0.71**與對照組相比*P<0.05, **P<0.01;與假手術(shù)組相比##P<0.01大鼠全腦缺血30min再灌注24小時(shí)后，腦組織LDH、 SOD活性明顯降低， 含量明顯升高，而給藥組能顯著提高缺血腦組織的LDH、 SOD活力，降低MDA 含量，聯(lián)合用藥后基本上能達(dá)到假手術(shù)組水平，而單獨(dú)用藥則達(dá)不到此水平。 2、 對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用30只wistar大鼠，體重220-250g，雌雄不限，隨機(jī)分為5組，分別為假手術(shù) 組(A組)，對照組(B組)，丹酚酸B或丹酚酸B鎂鹽10mg/kg(C組)，白藜蘆醇 或白藜戸醇苷15mg/kg (D組)，丹酚酸B或丹酚酸B鎂鹽6mg/kg+白藜蘆醇或白 藜蘆醇苷9mg/kg (E組)，尾靜脈注射給藥，假手術(shù)組和對照組尾靜脈注射等量的 生理鹽水。大鼠用3。％已戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定，以心電圖機(jī)記 錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖監(jiān)測心臟情況，分離一側(cè)股靜脈供給藥用。用血管鉗沿第4肋間， 鈍性分離肋問肌，開胸，撐開第4、 5肋骨，剪開心包膜，暴露心臟。將心臟擠出 胸腔。在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間找到與左冠狀動(dòng)脈伴行的大靜脈并使之充分暴 露，在左心耳下方2mm處用3號絲線穿線，連同心大靜脈一齊結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降 支。結(jié)扎前于心大靜脈處放一小段細(xì)硅膠管，引線潤滑。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后迅速將 心臟放人胸腔，輕擠胸腔排出胸腔氣體及殘留血液。胸部皮膚用血管鉗閉合胸腔， 引線尾端留在胸外。穩(wěn)定10min(穩(wěn)定后心電圖不正常者棄去)，缺血10min后從股 靜脈緩慢注射給藥，20min后剪斷結(jié)扎線，使前降支再灌注30min。再灌后腹主動(dòng) 脈取血，離心取血清，檢測大鼠血清中SOD及MDA含量，結(jié)果見表2。結(jié)扎3h后立即取下心臟稱重，冷凍。在冠脈結(jié)扎線下，平行于冠狀溝，將心 室橫切成O.lcm厚的心肌片，生理鹽水沖洗后，置于0.05X氯化硝基四氮唑藍(lán)液(N 一BT)37'C恒溫水浴中染色30min，染色過程中不時(shí)振搖染色液，使之與心肌充分 接觸，染色后立即用水沖去多余染料。正常心肌染為暗藍(lán)色，梗死區(qū)不著色。減 去梗死心肌稱重計(jì)算梗死區(qū)重占全心重的百分比。表2對心肌缺血再灌注蘇上大鼠血清SOD、 MDA的影響(;c土s, n=6)組別劑量(mg/kg)SOD(nmol/mL)MDA(U/mL)A一270.69 ±38.246.71 ±0.57B一140.09 ±36.21##9.87±1.04##C10233.57 ±35.09**7.27士0.71*D15217.42±37.61*7.82±0.45*E6+9261.35 ±37.87**6.99土0.51"與對照組相比，*P<0.05， **P<0.01;與假手術(shù)組相比，##P<0.01對大鼠心肌梗死范圍假手術(shù)組無梗死心肌，對照組梗死心肌所占的比例為 11.25±2.14%， C組心肌梗死所占比例為7.48士1.350/0， D組心肌梗死所占比例為 8.07±1.240/0， E組心肌梗死所占比例為6.81土1.380/0，各治療組與對照組相比，在心 肌梗死方面都有一定程度的減小，差別具有顯著意義，但聯(lián)合用藥顯著意義更明 顯(P<0.01)。 3、 保肝作用試驗(yàn)分組 SD大鼠30只，體重220-250g。陰性對照組(A組)大鼠6只， 每三天皮下注射等劑量生理鹽水，持續(xù)80天。其余24只大鼠于試驗(yàn)第一天起在 背部皮下注射50XCC14植物油溶液，0.2mL/100g體重，每3天一次，持續(xù)80天。 從第二個(gè)月開始，將造模成功的24只大鼠隨機(jī)分為4組陽性對照組(B組)正 常喂伺至試驗(yàn)結(jié)束；治療組分為丹酚酸B或丹酚酸B鎂鹽10mg/kg組(C組)，白 藜蘆醇或白藜蘆醇苷50mg/kg組(D組)、丹酚酸B或丹酚酸B鎂鹽10mg/kg+白 藜蘆醇或白藜蘆醇苷50mg/kg組(E組)，自第2個(gè)月開始灌胃給藥，每日1次， 至試驗(yàn)結(jié)束。(4) 血清生化指標(biāo)的檢查、肝組織脂質(zhì)過氧化水平及肝羥脯氨酸含量測定丙氨 酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)，賴氏法，按試劑盒說明書進(jìn)行；超氧 化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羥脯氨酸(Hyp)的測定均按試劑盒說明 書進(jìn)行。結(jié)果見表3(5) 組織學(xué)檢查取肝臟左葉相同部位，置10%中性甲醛固定24-48小時(shí)后常規(guī) 制片，Mallory染色。表3本發(fā)明組合物對CC14所致肝損傷大鼠ALT、 AST、 MDA、 SOD、 Hyp的影響(S土s)組別劑量ALTASTMDASODHyp(mg/kg)(U/L)(U/L)(nmol/L)(u/L)A—45±5204 ±25232.0 ±0.004631.6 ±0.03.04 ±0.06B—270 土 19782 ±34266.2 ±45.193892.2± 310.65.02 ±0.21C10136±17575 ±29235.2 ±17.23*4390.5土412.3'3.97±0.18D50152±18612±31239.3 ±24.6344302.1 ±198.2*4.65 ±0.24E10+50110±13'478 ±30'233.6士18.9"4569.3 ± 269.4**3.15±0.22*PO.05, "PO.Ol，與模型組相比。
試驗(yàn)結(jié)果由表1可知，模型組中血清AST、 ALT較正常組明顯升高，各治 療組的值也較正常組高，但與模型組相比，有所下降，其中本發(fā)明復(fù)方組較模型 組相比，ALT、 AST水平下降有顯著性(P<0.05)。與正常組相比，模型組的肝羥脯氨酸明顯升高，聯(lián)合用藥組與正常組差異無 顯著性，其余各治療組較正常組均顯著升高，但各治療組較模型組相比，均顯著 降低，單獨(dú)用差別無顯著性，而聯(lián)合用藥組與模型組差別有顯著性(P<0.05)。肝組織中的MDA、 SOD水平，模型組SOD水平明顯低于正常組，MDA水 平高于正常組；各治療組SOD水平也較正常組要低，但與模型組相比，SOD水平 均要明顯升高，差異具有顯著性；各治療組MDA水平也較正常組高，但差異無顯 著性，與模型組相比，各治療組要明顯低于模型組，具有顯著性，其中聯(lián)合用藥 組顯著性更明顯(PO.Ol)。Mallory染色切片光鏡下，正常組肝臟結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射 狀排列，未見明顯病變。模型組肝臟病變嚴(yán)重，可見小葉中心大量肝細(xì)胞壞死明 顯，部分肝細(xì)胞脂肪變性腫脹，匯管區(qū)可見炎性細(xì)胞浸潤。治療組肝小葉內(nèi)以肝 細(xì)胞脂肪變性為主要表現(xiàn)，僅可見少量肝細(xì)胞壞死。 4、 抗腫瘤作用目前研究可知，白黎蘆醇對致癌作用的3個(gè)主要階段均具有化學(xué)防癌活性， 它具有抗氧化性和抗突變作用，并且可以誘導(dǎo)第二期藥代酶(抗起始活性)；它可 以傳遞抗炎作用并有抑制環(huán)氧合酶(COX)和過氧化氫酶的功能(抗促進(jìn)作用)； 它還可以誘導(dǎo)人類早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞的分化(抗發(fā)展作用)及抑制核糖核酸 還原酶作用，而核糖核酸還原酶是細(xì)胞增生中DNA合成所必需的物質(zhì)。體外實(shí)驗(yàn)研究表明，白藜蘆醇或白藜蘆醇苷與丹酚酸B組合在一起的復(fù)方， 對白血病細(xì)胞株K562、胰腺癌細(xì)胞株MIAPaCa-2、肝癌細(xì)胞H-22、胃癌細(xì)胞MFC
均具有一定的抑制作用，抑制最佳濃度為白藜蘆醇5u g/mL+丹酚酸B 10P g/mL， 對各癌細(xì)胞的抑制率分別為58%、 69%、 86.2%、 71%。聯(lián)合用藥要稍強(qiáng)于單獨(dú) 用藥，但差異無顯著性。下文提到的是本發(fā)明制劑配方說明性而非限定性實(shí)例1)、白黎蘆醇5g丹酚酸B500g2)、白藜盧醇500g丹酚酸B50g3)、白藜盧醇10g丹酚酸B300g4)、白藜蘆醇，g丹酚酸B10g5)、白藜戸醇150g丹酚酸B100g6)、白藜蘆醇30g丹酚酸B鎂鹽，g7)、白藜蘆醇苷，g丹酚酸B30g8)、白藜蘆醇苷，g丹酚酸B10g9)、白藜蘆醇苷100g丹酚酸B鎂鹽100g10)、,白藜聲醇苷簡g200丹酚酸B鎂鹽200g11)、三甲氧基白藜蘆醇100g丹酚酸B150g12)、三甲?；邹继J醇200g丹酚酸B鎂鹽10g13)、白藜盧醇10g丹酚酸B，g淀粉■g14)、白藜蘆醇苷 2g丹酚酸B鎂鹽 200g注射用水 1800ml 15)、白黎蘆 10g丹酚酸B鎂鹽 50g甘露醇 400g 上述組合物通過適宜的制劑工藝，加上一些適宜的藥用輔料，可制成口服、 非腸道、直腸或透皮給藥的固體、半固體、液體、半液體、粉末、顆粒或脂質(zhì)體 形式。
權(quán)利要求
1、一種白藜蘆醇和丹酚酸B復(fù)方制劑，其特征是由活性成分a)白藜蘆醇或白藜蘆醇衍生物，和；b)丹酚酸B或其可藥用鹽組成。
2、 如權(quán)利要求l所述的復(fù)方制劑,其中所述的活性成分a與b的重量比為100:1-1:亂
3、 如權(quán)利要求2所述的復(fù)方制劑，其中所述的活性成分a與b的重量比優(yōu)選為20: 1-1: 20。
4、 如權(quán)利要求1所述的復(fù)方制劑，其中所述的白藜蘆醇衍生物主要是指白藜 蘆醇苷。
5、 如權(quán)利要求1所述的復(fù)方制劑，其中所述的丹酚酸B的可藥用鹽為其金屬 ±卜
6、 如權(quán)利要求5所述的復(fù)方制劑，其中所述的金屬鹽主要是指丹酚酸B的鎂
7、 如權(quán)利要求1所述的復(fù)方制劑，其中還包含有制藥上可接受的藥用輔料。
8、 一種如權(quán)利要求1、 2或3所述的復(fù)方制劑在制備具有治療心血管疾病、 保肝、抗腫瘤作用藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種(A)由白藜蘆醇或白藜蘆醇衍生物和(B)丹參酚酸B或丹酚酸B可藥用鹽組成的復(fù)方制劑，制劑中組分(A)與(B)的重量配比為1∶100-100∶1，本發(fā)明復(fù)方在保護(hù)缺血-再灌注心肌細(xì)胞免受損傷、保護(hù)缺血性腦細(xì)胞、抗氧化、保肝、抗腫瘤等方面有較好的療效，尤其是在用于心血管疾病和保肝功能方面，其作用強(qiáng)于任何一種單獨(dú)用藥，具有協(xié)同增強(qiáng)的作用。
文檔編號A61K31/05GK101156839SQ200710119448
公開日2008年4月9日 申請日期2007年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月25日
發(fā)明者張樹祥 申請人:北京星昊醫(yī)藥股份有限公司