專利名稱：：薯蕷科提取物及包含此提取物、用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的薯蕷科(Dioscoreaceae)植物的提取物，以及包含此提取物或從此提取物分離的化合物的藥物組合物或食物組合物。
背景技術(shù)：
：神經(jīng)疾病是一種由于神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)或功能異常而導(dǎo)致的疾病。神經(jīng)系統(tǒng)可分為中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布在大腦和脊柱中并參與控制大腦和脊柱的功能，外周神經(jīng)系統(tǒng)分布在除大腦和脊柱以外的幾乎所有器官中，并參與控制這些器官的功能。外周神經(jīng)系統(tǒng)可細(xì)分為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng)、感官神經(jīng)系統(tǒng)、植物神經(jīng)系統(tǒng)。外周神經(jīng)，其神經(jīng)突從大腦和脊柱伸向身體、臂和腿，可將臂和腿的感覺傳遞到中樞神經(jīng)(大腦和脊髓)，并將中樞神經(jīng)的指令傳遞到肌肉。外周神經(jīng)可因多種原因受損，其統(tǒng)稱為外周神經(jīng)疾病。單一神經(jīng)疾病是指只有單個(gè)外周神經(jīng)受損的病癥；多重神經(jīng)疾病是指多個(gè)外周神經(jīng)在同一水平受損的病癥。單一神經(jīng)疾病通常在單個(gè)外周神經(jīng)伸向臂和腿末端時(shí)，受到異常壓迫或外傷損害而發(fā)生。單一性神經(jīng)疾病可以通過手術(shù)治療。多重神經(jīng)疾病可由多種原因引發(fā)，如代謝疾病(如糖尿病，腎衰竭，甲狀腺功能退化)、藥物(如抗癌藥，抗結(jié)核藥)或者毒性物質(zhì)中毒(如Pb，有機(jī)溶劑)，營養(yǎng)不良(如維生素缺乏，酒精中毒)，結(jié)締組織疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡)，炎性疾病(格-巴二氏綜合癥(Guillain-Barresyndrome))，或遺傳決定的神經(jīng)疾病。此外，癌癥也可以引發(fā)多重神經(jīng)疾病。目前，神經(jīng)疾病釆用用于癥狀治療的藥物來治療，其只改善癥狀、幾乎對(duì)神經(jīng)疾病沒有根本的治療。美國食品與藥品管理局(FDA)只批準(zhǔn)了依帕司他(epalrestat)，一種醛糖還原酶抑制劑，來用于糖尿病外周神經(jīng)病變(一種多重外周神經(jīng)疾病)，但由于依帕司他的療效差未被采用(FosterDW.,Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine13,pl979，1999;StephenLD，AppliedTherapeutics:theclinicaluseofdrugs.6，p48.1-48.62，1996)。同時(shí)，影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)的神經(jīng)元的生長，分化以及存活的蛋白質(zhì)，統(tǒng)稱為神經(jīng)營養(yǎng)因子(NF)，是調(diào)節(jié)神經(jīng)元生長，分化和死亡的神經(jīng)元控制因子之一。NF的例子包括大腦誘導(dǎo)的神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)，神經(jīng)營養(yǎng)因子-3(NT-3),，NT-4和NT-5，這些神經(jīng)營養(yǎng)因子在不同區(qū)域合成，并具有不同的分化作用，不同的表達(dá)和不同的靶區(qū)。神經(jīng)生長因子(NGF)，NF的一種，抑制神經(jīng)元的退化和死亡，以防止神經(jīng)元數(shù)量下降，保護(hù)神經(jīng)元免受損害，保持成熟的神經(jīng)元來源(HeftiF.，J.Neurosci,,6(8),pp2155-2162，1986;和Levi-MontalciniR.,etal.，Proc.Natl.Acad,ScLUSA,46,pp384-391，1960)。眾所周知，神經(jīng)系統(tǒng)正常發(fā)育時(shí)，約50%生長的神經(jīng)元由于細(xì)胞死亡而去除(RaffMC,etal.，Science,262(5134)，pp695-70,1993),并且由靶細(xì)胞分泌的NGF決定了神經(jīng)元是否存活。為使神經(jīng)元以正常狀態(tài)存活，生長和分化，諸如NGF的生長因子是必須的。為治療糖尿病神經(jīng)疾病，一種多重神經(jīng)疾病，NGF的這種可利用性已經(jīng)引起了對(duì)重組人神經(jīng)生長因子的開發(fā)。但是，重組人神經(jīng)生長因子在安全性和有效性方面，仍然不能令人滿意(ApfelSCetal.，JournalofAmericanMedicalAssociation284(17),pp2215-2221，2000)。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問趙本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療由多種原因誘導(dǎo)的外周神經(jīng)疾病的草藥提取物和從中分離的化合物，。也就是說，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的薯蕷科植物的提取物。本發(fā)明還提供包含所述提取物或者從所述提取物中分離的作為活性成分的化合物的藥物組合物或食物組合物。技術(shù)方案本發(fā)明一方面提供用于預(yù)防或治療神經(jīng)外周疾病的薯蕷科植物提取物,著蕷禾斗植物是選自穿龍薯蕷(Z)/oscoream》/ow'c<3義綿萆蘇6atotos乂，日本薯蕷fZ)/oscorea_/a/7om'ca義黃獨(dú)廣6w/6i/fera義山草蘇fZ)/oscoreato&ora義細(xì)柄薯蕷^D/oscoreaj中的至少一種。本發(fā)明另一方面提供了用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的藥物組合物，包含有效治療量的所述提取物和藥學(xué)上可接受載體。本發(fā)明另一方面還提供了用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的食物組合物，包含作為活性成分的所述提取物。本發(fā)明另一方面還提供了用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的藥物組合物，包含有效治療量式l所示化合物或其鹽，以及藥學(xué)可接受載體。[式1]其中R為氫原子，C,Q烷基或糖。本發(fā)明另一方面還提供了用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的食物組合物，包含式l所示的化合物或其鹽作為有效成分。有益效果薯蕷科植物提取物和/或從該提取物分離的化合物誘導(dǎo)生物體的內(nèi)源性神經(jīng)生長因子，因此，它可廣泛用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病。圖1和圖2圖示了根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案從提取物分離的化合物對(duì)神經(jīng)突生長的影響。圖3圖示了施用根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案從提取物分離的化合物導(dǎo)致的正常小鼠血清中神經(jīng)生長因子(NGF)水平的變化。圖4圖示了施用根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案的提取物，以及從該提取物分離的化合物導(dǎo)致的誘發(fā)糖尿病的小鼠的血清中NGF水平的變化。圖5和圖6圖示了根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案從提取物分離的化合物對(duì)誘發(fā)糖尿病的小鼠坐骨神經(jīng)的運(yùn)動(dòng)和感官神經(jīng)傳遞速度的影響(圖5:—個(gè)月DG治療；圖6:兩個(gè)月DG治療)。圖7圖示了施用根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案從提取物分離的化合物后導(dǎo)致的誘發(fā)糖尿病的小鼠的坐骨神經(jīng)中NGF水平的變化。圖8圖示了施用根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案從提取物分離的化合物導(dǎo)致的誘發(fā)糖尿病的小鼠的坐骨神經(jīng)中山梨糖醇水平的變化。圖9圖示了施用根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案的提取物和從該提取物分離的化合物導(dǎo)致的誘發(fā)糖尿病的小鼠的坐骨神經(jīng)中的組織學(xué)變化。具體實(shí)施例方式本說明書中，術(shù)語"外周神經(jīng)疾病"是指外周神經(jīng)(運(yùn)動(dòng)神經(jīng)，感官神經(jīng)和植物神經(jīng))由于多種原因受損的病癥。外周神經(jīng)疾病可細(xì)分為單一神經(jīng)疾病和多發(fā)性神經(jīng)疾病(也成為多重神經(jīng)疾病)。多重神經(jīng)疾病包括由代謝疾病(如糖尿病，腎衰竭，甲狀腺功能退化)，藥物(如抗癌藥，抗結(jié)核藥)或者毒性物質(zhì)中毒(如Pb,有機(jī)溶劑)，營養(yǎng)不良(如維生素缺乏，酒精中毒)，結(jié)締組織疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡)，炎性疾病(格-巴二氏綜合癥(Guillain-Barresyndrome))，或遺傳決定的神經(jīng)疾病導(dǎo)致的任一神經(jīng)疾病。此外，多重神經(jīng)疾病可包括由遺傳因子和癌癥引發(fā)的神經(jīng)疾病。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的薯蕷科植物的提取物，或者從該提取物分離的化合物導(dǎo)致神經(jīng)突生長，增加內(nèi)源性神經(jīng)生長因子的分泌量，使外周神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)有效分化，被保護(hù)并恢復(fù)神經(jīng)支配。尤其是，該提取物和/或化合物可口服施用，改善病人的藥物治療依從性。本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的薯蕷科植物提取薯蕷科是選自穿龍薯蕷("/oscomzmj/o"/az)，綿萆蘚(Z)/oco歷邵Z綴WoZ^乂D/oyco廂《w—weo/oZa，山藥(D/oscomz),日本薯蕷("Zosco冊(cè)7"P歸'ca)，黃獨(dú)(Aasco，Zw/Zz/era)，山萆蘚(jDZoscom2)和細(xì)柄薯蕷(DZo5corea)中的至少一種。優(yōu)選地，薯蕷科植物是穿龍薯蕷，Dz'oscorea《w/"《weo/okz和/或山萆蘇，更優(yōu)選地，薯蕷科植物是穿龍薯蕷。本發(fā)明的提取物可通過提取方法制得，包括用萃取溶劑(第一萃取溶劑)提取薯蕷科植物的整株，根或地上部分(如葉或莖)，萃取溶劑選自水，C,C4醇以及水和dC4醇的混合物。例如可用第一萃取溶劑提取薯蕷科植物的根得到薯蕷科植物的提取物。所述第一萃取溶劑可以是水和甲醇、或水和乙醇的混合溶劑。在所述提取方法中，薯蕷科植物的整株，根或地上部分，優(yōu)選根切成小片，然后用第一萃取溶劑提取。此時(shí)，第一萃取溶劑的量大于薯蕷科植物的量的1~20倍，優(yōu)選約3-10倍。第一萃取溶劑可以是水和甲醇(如約85%的甲醇溶液)的混合溶劑或水和乙醇(如約85%的乙醇溶液)的混合溶劑。提取不受溫度的影響，可在多種溫度范圍如15100。C溫度進(jìn)行。提取可采用冷提取法，熱提取法，超流體提取法，離心提取法，超聲波提取法或回流冷卻提取法進(jìn)行。提取時(shí)間可根據(jù)提取法變化而變化。例如，提取可一次或多次，進(jìn)行約l小時(shí)到10天。優(yōu)選地，提取可釆用第一萃取溶劑(thefirstextraction)，在室溫進(jìn)行2~3次，持續(xù)約2天。用第一萃取溶劑提取得到的提取物可以是液相，其中雜質(zhì)可釆用諸如過濾的傳統(tǒng)方法去除，或是粉末，其可通過減壓濃縮或用傳統(tǒng)方法干燥液相提取物得到。此外，如果需要，提取方法還進(jìn)一步包括獲得具有更高活性成分含量的級(jí)分。即，所述提取方法還包括將用第一萃取溶劑提取得到的提取物分散在水中；將得到的溶液用dC4醇飽和水溶液(第二萃取溶劑)提取，從而增加所得提取物中的活性成分的含量。當(dāng)用第一萃取溶劑提取得到的提取物分散在水中時(shí)，可將用第一萃取溶劑提取得到的液相本身分散在水中，或者將通過減壓濃縮液相提取物和/或用傳統(tǒng)方法干燥液相提取物得到的粉末分散在水中。d-C4醇飽和水溶液(第二萃取溶劑)可以是丁醇飽和水溶液。本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括包含從提取物分離的化合物，如甾體皂苷或甾體皂素的組合物。即，本發(fā)明包括用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的藥物組合物，包含有效治療量的式l所示化合物或其鹽，以及藥學(xué)上可以接受的載體。其中R為氫原子，dC4烷基或糖。式1的化合物中，R可以是氫或甲基，優(yōu)選氫。式1可為3-|3，25R-螺甾-5-烯-3-醇。糖可以是單糖，二糖或多糖，如葡萄糖，果糖，甘露糖，半乳糖,核糖，纖維素，糖原，蔗糖，麥芽糖和乳糖。式1的化合物的鹽可以是從甾體皂苷或甾體皂素化合物制備的常規(guī)無機(jī)酸和/或有機(jī)酸性加成鹽。式1化合物鹽的例子包括國際公開專利文獻(xiàn)No.WO2003/082893公開的鹽。這些鹽可以在化合物的最終分離和純化過程中原位制備。特別是，酸加成鹽可以通過將游離堿形式的精制化合物與適當(dāng)?shù)臒o機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)，然后分離制得的鹽而制備(見S.M.Berge，etal"PharmaceuticalSalts,J.Pharm.Sci，66:p.l-19(1977))。國際公開專利文獻(xiàn)No.WO2003/082893和M.Berge,等人的文章用作本發(fā)明的參考文獻(xiàn)。堿加成鹽可通過將酸形式的精制化合物與合適的有機(jī)或無機(jī)的堿反應(yīng)并分離制得的鹽而制備。堿加成鹽可以是藥學(xué)上可接受的金屬鹽或胺鹽。酸加成鹽可以是由選自鹽酸，硫酸，磷酸和硝酸的酸制備的鹽。堿加成鹽可以是由選自氫氧化鈉，氫氧化鉀和氫氧化銨的堿制備的鹽。式1所示的化合物可以從本發(fā)明實(shí)施方案的提取物中分離，釆用已知方法合成(見HerbertO.House,ModernSyntheticReactions,TheBenjaminCummingsPublishingCompany,1972)，或購買得至l](SigmaCo"USA.)。采用從根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案獲得的提取物(例如，利用第一萃取溶劑和第二萃取溶劑提取得到的提取物)，從此提取物分離式1所示的化合物的方法，包括酸解過程和重結(jié)晶過程。例如，從所述提取物分離式1所示的化合物的方法包括用酸，如2.5N鹽酸，在50-150°C,優(yōu)選94。C,水解30分鐘至3天，優(yōu)選約4小時(shí)；用諸如氯仿，丙酮，苯或二甲苯的有機(jī)溶劑提取得到的水解產(chǎn)物(即皂苷元(aglyconesapogenin))1~60分鐘，優(yōu)選約15分鐘；然后分離有機(jī)層；必要時(shí)，在10~100°C，優(yōu)選3035。C濃縮分離的有機(jī)層；用d-C4醇或Q-C4醇溶液(如95%乙醇溶液)重結(jié)晶有機(jī)層或有機(jī)層的濃縮溶液；然后，如必要，水洗得到的沉淀，用丙酮重結(jié)晶。本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的藥物組合物，其包含有效治療量的薯蕷科植物提取物，或式l所示的化合物或其鹽，或藥學(xué)可接受載體。本發(fā)明的藥物組合物包括藥學(xué)可接受載體，可制成口服劑型，外用劑型，栓劑和無菌注射溶液，如粉劑，顆粒劑，片劑，膠囊劑，懸劑，乳劑，糖漿劑或氣霧劑。該藥學(xué)上可接受的載體可以是乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露糖醇，木糖醇，赤蘚醇，麥芽糖醇，淀粉，阿拉伯膠，藻酸鹽，凝膠，磷酸鈣，硅酸鈣，纖維素，甲基纖維素，微晶纖維素，聚乙烯基吡咯烷酮，水，對(duì)羥基苯甲酸甲酯，對(duì)羥基苯甲酸丙酯，滑石，硬脂酸鎂或礦物油。該藥物組分還可包括稀釋劑或諸如填料，膨脹劑，粘合劑，濕潤劑，崩解劑或表面活性劑的賦形劑。固體口服制劑可以是片劑，丸劑，粉劑，顆粒劑或膠囊劑。此固態(tài)劑型可以包括至少一種選自例如淀粉，碳酸鈣，蔗糖，乳糖和凝膠的賦形劑。另外，此固態(tài)劑型還可包括諸如硬脂酸鎂或滑石的潤滑劑。液體口服制劑可以是懸劑，溶液劑，乳劑或糖漿劑。另外，該液體口服劑可以包括諸如水、液體石蠟的稀釋劑；濕潤劑；甜味劑；風(fēng)味劑或防腐劑。腸胃外制劑可以是無菌水溶液，非水溶液，懸劑，乳劑，凍干劑或栓劑。無水溶劑或懸劑可以是丙二醇，聚乙二醇，諸如橄欖油的天然油或諸如油酸乙酯的可注射的酯。栓劑的介質(zhì)可以是witepsol，聚乙二醇，吐溫61，可可脂，月桂酸甘油酯或甘油明膠。本發(fā)明的藥物組合物中，薯蕷科植物提取物或式l所示的化合物的劑量可根據(jù)病人的狀態(tài)或體重，疾病的嚴(yán)重程度，劑型，給藥途徑和施用周期的變化而變化，可適當(dāng)?shù)赜杀绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員決定。例如，薯蕷科植物提取物或式l所示的化合物可以0.0001到1000mg/kg/天的量施用，優(yōu)選0.001到1000mg/kg/天?？梢砸惶煲淮问┯?，也可以一天分次施用。本發(fā)明的藥物組合物中，薯蕷科植物提取物或式l所示的化合物的量可以占按藥物組合物重量計(jì)100%的0.001到50%。藥物組合物可以不同的途徑，如口腔，直腸，靜脈內(nèi)，肌肉，皮下，通過子宮內(nèi)膜注射或腦室內(nèi)注射，施用于哺乳動(dòng)物，如大鼠，小鼠，家畜或人類。本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的食物組合物，其包含薯蕷科植物提取物或作為活性成分的式l所示的化合物。本發(fā)明的食物組合物可用作保健功能食品。根據(jù)韓國保健功能食品法6727條，"保健功能食品"是指釆用可在人體實(shí)現(xiàn)良好功能的原料或者組分生產(chǎn)和處理的食品。"功能"是指攝入旨在獲得良好的健康效果，即，對(duì)人體或生理機(jī)制的結(jié)構(gòu)與功能的營養(yǎng)調(diào)節(jié)。本發(fā)明的食物組合物可以含有傳統(tǒng)的食品添加劑。"食品添加劑"定義為只要沒有其他規(guī)定，考慮根據(jù)食品添加劑規(guī)范(foodadditivescodex)的通用規(guī)則和韓國食品&藥品管理局批準(zhǔn)的通用檢驗(yàn)的對(duì)應(yīng)條款的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定。"食品添加劑規(guī)范"所列的條款包括諸如酮、甘氨酸、檸檬酸鉀、煙酸或肉桂酸的化學(xué)合成物；諸如柿子色素，甘草提取物，結(jié)晶纖維素，caoliang色或瓜爾膠的天然添加劑，或諸如L-谷氨酸鈉，面條的堿性添加劑，防腐劑或焦油色的混合劑。為預(yù)防和/或治療外周神經(jīng)疾病，本發(fā)明的食物組合物可包括薯蕷科植物提取物或式1所示化合物的量為按重量計(jì)100%食物組合物的0.01到95%,優(yōu)選1%到80%。此外，為預(yù)防和/或治療外周神經(jīng)疾病，食物組合物可制備和加工成片劑、膠囊、粉劑、顆粒劑、液體或丸劑。例如，為生產(chǎn)保健功能性食品的片劑，該薯蕷科植物提取物或式l所示的化合物與賦形劑，粘合劑，崩解劑及其他添加劑的混合物可以使用常規(guī)方法顆?；?，然后用潤滑劑以壓塑法預(yù)成型。任選地，混合物可以直接進(jìn)行壓塑過程。此外，必要時(shí)，片劑形式的保健配方食物可以包括甜味劑；必要時(shí)，可包括保健配方食物片劑的表面包覆劑。膠囊形式的保健功能性食品中，硬膠囊劑可以以薯蕷科植物提取物或式l所示的化合物，與諸如賦形劑的添加劑的混合物或混合物的顆粒，填充常規(guī)硬膠囊；軟膠囊劑可以以薯蕷科植物提取物或式l所示的化合物，和諸如賦形劑的添加劑的混合物，填充膠囊的凝膠載體,且必要時(shí)，軟膠囊劑可以包括諸如甘油或山梨糖醇的增塑劑，著色劑以及防腐劑。丸劑形式的保健功能性食品可以將混合物模制生產(chǎn)，此混合物是釆用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑹硎毧浦参锾崛∥锘蚴絣所示的化合物，與賦形劑，粘合劑和崩解劑混合制得。必要時(shí)，保健功能性食品丸劑可用白糖或其他的表面包覆劑包覆，或以淀粉，滑石或其他材料包覆。顆粒形式的保健功能性食品可以將混合物顆?；频茫嘶旌衔锸轻娪眠m當(dāng)?shù)姆椒▽⑹硎毧浦参锾崛∥锘蚴絣所示的化合物，與賦形劑，粘合劑和崩解劑混合得到的。必要時(shí)，保健功能性食品的顆粒劑可以包括增香劑和甜味劑。本發(fā)明采用的賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑以及增香劑可定義為具有與現(xiàn)有技術(shù)披露的相同或相似的功能的相應(yīng)物質(zhì)(TheKoreanpharmacopoeiareview,moonsungsaPublicationCo"KoreaPharmaceuticalUniversityAssociation,第5片反，p33-48，1989)。具體實(shí)施例方式本發(fā)明將參考以下實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述。這些實(shí)施例只用于說明目的而不是限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1:提取物的制備將穿龍薯蕷干燥并將它的根切成小塊;將500g樣品加入10升85%的甲醇溶液中，在室溫下提取三次(每次2小時(shí))；此提取工藝重復(fù)兩次；收集生成物的上清液，減壓濃縮，從而得到74g粗提物。將74g粗提物懸浮在1升蒸餾水中，再加入1升飽和丁醇水溶液，然后分離生成的有機(jī)層，此過程重復(fù)五次。收集所有得到的有機(jī)層并減壓干燥。結(jié)果，獲得17g的穿龍薯蕷提取物。實(shí)施例2:提取物的制備將"/oycomz《w/"《weo/oZ^干燥并將它的根切成小塊；將500g樣品加入5升85%的乙醇溶液中，在室溫下提取三次(每次2小時(shí))；此提取工藝重復(fù)兩次；收集生成物的上清液，減壓濃縮，從而得到90g粗提物。將90g粗提物懸浮在l升蒸館水中，再加入l升飽和丁醇水溶液，然后分離生成的有機(jī)層；此過程重復(fù)五次；收集得到的所有有機(jī)層并減壓干燥。結(jié)果，獲得26g的Z)/o"orea^/"《weo/oZja提取物。實(shí)施例3:提取物的制備將山萆蘇(Z^ascweatobra)干燥并將它的根切成小塊；將300g樣品加入3升85%的乙醇溶液中，在室溫下提取三次(每次2小時(shí))；此提取工藝重復(fù)兩次；收集生成物的上清液，減壓濃縮，從而得到35g的粗提物。將35g粗提物懸浮在0.5升蒸餾水中，再加入0.5升飽和丁醇水溶液；然后分離生成的有機(jī)層；此過程重復(fù)五次；收集得到的所有有機(jī)層并減壓干燥。結(jié)果，獲得llg的山萆蘚提取物。實(shí)施例4:活性物質(zhì)的分離取lg實(shí)施例l得到的穿龍薯蕷提取物，加2.5NHC110毫升，在94。C水解四小時(shí)；然后將生成的水解產(chǎn)物用10ml氯仿提取15分鐘，分離并過濾氯仿層；然后在30-35。C減壓濃縮；用5ml95。/。乙醇溶液在4'C重結(jié)晶殘余物；過濾該重結(jié)晶沉淀；水洗；用3ml丙酮在4。C重結(jié)晶；然后過濾得到約100mg的沉淀。此沉淀確定為式2所示的3-P,25R-螺甾-5-烯-3-醇。[式2]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>(1)式C27H4203(2)分子量414.62(3)熔點(diǎn)204-207。C(4)[afD-129(5)NMR數(shù)據(jù)參見表1表1<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實(shí)驗(yàn)例1:神經(jīng)突生長的測(cè)定在含有5。/。C02和37。C的孵卵器中，以補(bǔ)充馬血清(10%，v/v)，胎牛血清(5%,v/v)和1%青霉素-鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)PC12細(xì)胞(嗜鉻細(xì)胞瘤，ATCC編號(hào)CRL-1721)。為了考察式2所示化合物對(duì)神經(jīng)突生長的作用，在每個(gè)涂有聚右旋賴氨酸的6-孔板上，添加補(bǔ)充馬血清(10%,v/v)，胎牛血清(5。/。,v/v)，和1%青霉素-鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基，然后以每孔5X104細(xì)胞溫育PC12細(xì)胞。24小時(shí)后，用10pl/ml的乙醇，10嗎/ml的式2所示的化合物，以及50ng/ml的神經(jīng)生長因子(R&D系統(tǒng)，USA)分別處理這些小孔；48小時(shí)后，用倒置相差顯微鏡(CK-2，Olympus，USA)測(cè)量神經(jīng)突的長度(見圖1和圖2)。關(guān)于圖1和2，在注射乙醇的組(對(duì)照組)中未觀察到神經(jīng)突生長，在式2所示的化合物-處理的組(DG)和神經(jīng)生長因子-處理的組(NGF)中，都誘發(fā)神經(jīng)突生長。因此，發(fā)現(xiàn)式2所示化合物通過誘發(fā)神經(jīng)突生長誘發(fā)PC12細(xì)胞的分化。實(shí)驗(yàn)例2:測(cè)定小鼠血清的神經(jīng)生長因子水平將式2所示化合物溶于0.2ml二甲基-亞砜乙醇(3:1)溶液中，然后以10mg/kg的劑量，口服施用于7周齡雄性ICR小鼠(n=7)—次；24小時(shí)后，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定內(nèi)生神經(jīng)生長因子的量。將口服施用0.2亳升二甲基-亞砜乙醇(3:1)ICR溶液的ICR小鼠作為對(duì)照組，然后用上述同樣的方法測(cè)定對(duì)照組的神經(jīng)生長因子關(guān)于圖3，施用式2所示化合物的組的血清內(nèi)(DG10mg/kgP.O)顯示出大于對(duì)照組約2.5倍的神經(jīng)生長因子。此結(jié)果表明式2化合物可以通過抑制小鼠體內(nèi)的神經(jīng)元的退化和死亡，治療神經(jīng)疾病，并因此預(yù)防神經(jīng)元數(shù)量的減少。實(shí)驗(yàn)例3:測(cè)定糖尿病-誘發(fā)小鼠血清內(nèi)的神經(jīng)生長因子水平將四氧嘧嚏-誘發(fā)糖尿病小鼠作為糖尿病性神經(jīng)病變，即一種多重神經(jīng)病的動(dòng)物模型。將7周齡的雄性ICR小鼠禁食18小時(shí)，然后以160mg/kg的劑量，腹膜注射溶于生理鹽水的四氧嘧啶誘發(fā)糖尿病。維持它們的空腹血糖200mg/dl或以上l周時(shí)間，然后挑選糖尿病-誘發(fā)小鼠，分成對(duì)照組(11=10)，提取物-施用組(11=10)，和化合物-施用組(11=10)。對(duì)照組施用0.2ml二甲基-亞砜乙醇(3:l)溶液，提取物-施用組以100mg/kg施用實(shí)施例1涉及的提取物，此提取物溶解在二甲基-亞砜乙醇(3:1)溶液，化合物-施用組以10mg/kg施用式2所示的化合物，此化合物溶解在二甲基-亞砜乙醇(3:l)溶液，所有群組均每周施用三次，施用期為一個(gè)月。用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定內(nèi)生神經(jīng)生長因子。關(guān)于圖4，提取物施用組(DN100mg/kgp.o)和化合物-施用組(DG10mg/kgp.o)二者的血清內(nèi)的內(nèi)源神經(jīng)生長因子的量，分別比只注射載體的對(duì)照組高三倍和四倍。此結(jié)果表明本發(fā)明的提取物和化合物可以通過抑制由糖尿病引起的神經(jīng)-損害疾病的神經(jīng)元的退化和死亡，來治療糖尿病性神經(jīng)病變，從而預(yù)防神經(jīng)元數(shù)量減少。實(shí)驗(yàn)例4:測(cè)定糖尿病-誘發(fā)小鼠坐骨神經(jīng)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)和感覺神經(jīng)的傳輸速度本發(fā)明的化合物對(duì)糖尿病性神經(jīng)病變一一種多重神經(jīng)病變的治療效果，是通過測(cè)量本發(fā)明的化合物在坐骨神經(jīng)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)和感覺神經(jīng)的傳輸速度確定的。將7周齡的雄性ICR小鼠禁食18小時(shí)，然后以160mg/kg的劑量，腹膜注射溶于生理鹽水的四氧嘧啶，誘發(fā)糖尿病。維持它們的空腹血糖200mg/d域以上l周時(shí)間。然后選擇糖尿病-誘發(fā)小鼠，分成對(duì)照組(11=7)和化合物-施用組(11=7)。對(duì)照組施用0.2ml的二甲基-亞砜乙醇(3:l)溶液，化合物-施用組以10mg/kg.施用式2所示的化合物，此化合物溶解在二甲基-亞砜乙醇(3:1)溶液。未誘發(fā)糖尿病的7周齡雄性ICR小鼠作為正常組(n:7)，正常組施用0.2ml的二甲基-亞砜乙醇(3:1)溶液。所有群組均每周施用三次，施用期為一個(gè)月。用頸部脫臼法處死完成給藥的小鼠，迅速取下股骨區(qū)的皮膚和肌肉，然后，將左右坐骨神經(jīng)分別分離20毫米或以上，用生理鹽水貯存，生理鹽水中通氣。將分離的坐骨神經(jīng)置于20mm圓形測(cè)定板上，然后，分別將傳感器和刺激探針連接在神經(jīng)終器上，用數(shù)字存儲(chǔ)示波器測(cè)量電導(dǎo)率來評(píng)定神經(jīng)傳遞速度(見圖5和圖6)。通常，髓脂質(zhì)是圍繞軸突的幾層磷脂膜，也被稱為髓鞘，就像電線的塑料涂層一樣，髓脂質(zhì)通過白色脂質(zhì)材料預(yù)防神經(jīng)元傳送的電信號(hào)泄漏或分散。髓脂質(zhì)有規(guī)律地分布在郎飛氏結(jié)(nodesofranvier(髓脂質(zhì)的部分結(jié)點(diǎn)形式))間，郎飛氏結(jié)處沒有髓脂質(zhì)，髓脂質(zhì)只圍繞軸突。電信號(hào)沿間隔傳送，脈沖沿著神經(jīng)元迅速地傳送，髓脂質(zhì)提高電脈沖的速度。因此當(dāng)髓脂質(zhì)由于糖尿病誘發(fā)的神經(jīng)病變對(duì)神經(jīng)的損害而破壞，軸突停止其功能，神經(jīng)傳遞速度降低。在糖尿病-誘發(fā)期的一個(gè)月內(nèi)，化合物-施用組(DM-DG)的感覺神經(jīng)的傳輸速度，比只施用載體的糖尿病-誘發(fā)對(duì)照組(DM)高25。/。(見圖5)。在糖尿病-誘發(fā)期的兩個(gè)月內(nèi)，化合物-施用組(DM-DG)的感覺神經(jīng)的傳輸速度，比對(duì)照組(DM)高45。/。，運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的傳輸速度比對(duì)照組(DM)高40。/。(見圖6)。由此發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物，通過提高糖尿病-誘發(fā)小鼠的感覺神經(jīng)和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的傳輸速度，可治療由于糖尿病性神經(jīng)病變引發(fā)的神經(jīng)傷害。實(shí)驗(yàn)例5:測(cè)定糖尿病誘發(fā)小鼠的坐骨神經(jīng)的神經(jīng)生長因子水平將7周齡雄性ICR小鼠禁食18小時(shí)，以160mg/kg的劑量，腹膜內(nèi)注射溶于生理鹽水的四氧嘧啶誘發(fā)糖尿病。維持小鼠的空腹血糖在200mg/d域以上l周，然后挑選糖尿病-誘發(fā)小鼠分成對(duì)照組(n=5)和化合物-施用組(n-5)。對(duì)照組施用0.2ml的二甲基-亞砜乙醇(3:l)溶液，化合物-施用組以10mg/kg.施用式2所示的化合物，此化合物溶解在二甲基-亞砜乙醇(3:1)溶液。所有群組均每周施用三次，施用一個(gè)月。用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定內(nèi)生神經(jīng)生長因子(見圖7)。關(guān)于圖7,化合物-施用組(DM-DG)的坐骨神經(jīng)的神經(jīng)生長因子，比只施用載體的糖尿病-誘發(fā)對(duì)照組(DM)高30。/。。由此，由神經(jīng)生長因子的神經(jīng)保護(hù)作用考慮圖5和圖6的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)例6:測(cè)定糖尿病-誘發(fā)小鼠坐骨神經(jīng)的山梨糖醇量的變化本發(fā)明的化合物的治療效果是通過測(cè)量坐骨神經(jīng)的山梨糖醇量的變化來確定的。將7周齡的雄性ICR小鼠禁食18小時(shí)，以160mg/kg的劑量，腹膜內(nèi)注射溶于生理鹽水的四氧嘧^^誘發(fā)糖尿病。維持小鼠的空腹血糖在200mg/d成以上l周時(shí)間，然后挑選糖尿病-誘發(fā)小鼠分成對(duì)照組(n=3)和化合物-施用組(11=3)。對(duì)照組施用0.21111的二甲基-亞砜乙醇(3:1)溶液，化合物-施用組以10mg/kg.施用式2所示的化合物，此化合物溶解在二甲基-亞砜乙醇(3:1)溶液。未誘發(fā)糖尿病的7周齡雄性ICR小鼠作為正常組(n:3),正常組施用0.2ml的二甲基-亞砜乙醇(3:1)溶液。正常組，對(duì)照組和化合物-施用組均每周施用三次，施用期為2周。用頸部脫臼法處死完成給藥的小鼠，然后用HPLC測(cè)定坐骨神經(jīng)的山梨糖醇含量(見圖8)。多元醇通道是指葡萄糖通過醛糖還原酶變?yōu)樯嚼嫣谴?，山梨糖醇通過山梨醇脫氫酶變成果糖的過程。在諸如糖尿病的血糖過多狀態(tài)，過量葡萄糖通過多元醇通道進(jìn)入細(xì)胞，生成和積聚山梨糖醇，這時(shí)，由于滲透過程引入水進(jìn)入細(xì)胞造成神經(jīng)損傷。因此，釆用糖尿病-誘發(fā)小鼠坐骨神經(jīng)內(nèi)的山梨糖醇累積量，評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的作用，如圖8所示，發(fā)現(xiàn)糖尿病-誘發(fā)對(duì)照組(DM-CON)的坐骨神經(jīng)的山梨糖醇，比正常組大約高40%,但化合物-施用組(DM-DG)的坐骨神經(jīng)的山梨糖醇，比糖尿病-誘發(fā)對(duì)照組(DM-CON)低10。/。。結(jié)果表明本發(fā)明化合物可以部分減少侵蝕性的因素引發(fā)的神經(jīng)損害。實(shí)驗(yàn)例7:糖尿病誘發(fā)小鼠的坐骨神經(jīng)的組織學(xué)比較本發(fā)明化合物對(duì)神經(jīng)病變的治療效果是通過坐骨神經(jīng)的組織的變化來確定的。將7周齡雄性ICR小鼠禁食18小時(shí)，以160mg/kg的劑量，腹膜內(nèi)注射溶于生理鹽水的四氧嘧啶誘發(fā)糖尿病。維持小鼠的空腹血糖在200mg/dl或以上1周時(shí)間，然后挑選糖尿病-誘發(fā)小鼠分成對(duì)照組(n-5)，提取物-施用組(11=5)和化合物-施用組(11=3)。對(duì)照組施用0.2ml的二甲基-亞砜乙醇(3:1)溶液，提取物-施用組以100mg/kg施用實(shí)施例1涉及的提取物，此提取物溶解在二甲基-亞砜乙醇(3:l)溶液，化合物-施用組以10mg/kg施用式2所示的化合物，此化合物溶解在二甲基-亞砜乙醇(3:l)溶液。所有組均每周施用三次，施用期為2月。用頸部脫臼法處死完成給藥的小鼠，分離坐骨神經(jīng)并以下述方法干燥，然后用600X,1200X共焦顯微鏡觀察。(1)預(yù)固定2.5%戊二醛，12小時(shí)或以上；(2)洗滌pH7.4,O.IM磷酸鹽緩沖液，U分鐘兩次；(3)后固定l。/。Os04緩沖溶液，60分鐘；(4)洗滌pH7.4,0.1M磷酸鹽緩沖液，5分鐘/兩次；(5)脫水:50,70,80，90%乙醇，10分鐘/次;100%乙醇15分鐘/兩次；(6)取代環(huán)氧丙烷，15分鐘/兩次；(7)滲透:環(huán)氧丙烷(l),EPOK812(2)，12小時(shí)或以上;(8)包埋精制EPOK812(80。C聚合)12小時(shí)或以上；(9)截段；半-薄片，35-95mm;(10)染色:1%甲苯胺藍(lán)圖9A和9B分別顯示600X(9A)和1200X(9B)的結(jié)果。在糖尿病-誘發(fā)組(DM)，坐骨神經(jīng)中心部分的軸突和髓脂質(zhì)明顯被破壞，但在化合物-施用組(DM-DG)和提取物-施用組(DM-DN),可清楚地觀察到其坐骨神經(jīng)中心部分的軸突和髓脂質(zhì)。此結(jié)果表明本發(fā)明的提取物或化合物可以保護(hù)和治療由于神經(jīng)病變引發(fā)的神經(jīng)損害。本發(fā)明的化合物可配制為下列形式。但這些劑型的實(shí)例只說明本發(fā)明，不限制本發(fā)明的范圍。劑型實(shí)例1:片劑式2的化合物200mg乳糖100mg淀粉100mg硬脂酸鎂適量根據(jù)常規(guī)的片劑制備方法混合這些組分并壓縮成片劑。劑型實(shí)例2:液體劑型式2的化合物1000mgCMC-Na20g異構(gòu)糖20g檸檬風(fēng)味劑適量加凈化水使全部溶液的體積為1000ml，根據(jù)常規(guī)的液劑制備方法混合這些組分并注入布朗瓶并殺菌，生產(chǎn)液劑。劑型實(shí)例3:膠囊劑式2的化合物300mg微晶纖維素3mg乳糖14.8mg硬脂酸鎂0.2mg根據(jù)常規(guī)的膠囊劑制備方法混合這些組分并填充膠囊，來制備膠劑型實(shí)例4:注射劑式2的化合物300mg甘露醇180mg注射用無菌蒸餾水2974mgNa2HP0412H2026mg根據(jù)常規(guī)的注射劑生產(chǎn)方法生產(chǎn)的每瓶(2ml)注射劑包含上述組分。權(quán)利要求1、一種用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的薯蕷科植物的提取物，所述薯蕷科植物為選自穿龍薯蕷(Dioscoreanipponica)，綿萆薢(Dioscoreaseptembloba)，Dioscoreaquinqueoloba，山藥(Dioscoreabatatas)，日本薯蕷(Dioscoreajaponica)，黃獨(dú)(Dioscoreabulbifera)，山萆薢(Dioscoreatokoro)和細(xì)柄薯蕷(Dioscoreatenuipes)中的至少一種。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其中的薯蕷科植物是穿龍薯蕷，D/oscomz，—weo/o6a或山萆蘇。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的提取物，其中的外周神經(jīng)疾病是多重神經(jīng)疾病。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的提取物，其中的提取物通過提取方法得到，所述提取方法包括用選自水，C廣C4醇以及水和C,C4醇的混合物的第一萃取溶劑，提取薯蕷科植物的整株，根或地上部分。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取物，其中所述提取物通過提取方法得到，所述提取方法包括用第一萃取溶劑提取薯蕷科植物的根。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取物，其中的第一萃取溶劑是水與甲醇的混合物或水與乙醇的混合物。7、根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取物，其中所述提取方法還包括將用第一萃取溶劑提取得到的提取物分散在水中，并用d~C4醇飽和水溶液(第二萃取溶劑)提取。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的提取物，其中的第二萃取溶劑為丁醇飽和水溶液。9、一種用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的藥物組合物，其包含有效治療量的權(quán)利要求l-8任一項(xiàng)所述的提取物；以及藥學(xué)上可接受的載體。10、一種用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的食物組合物，其包含作為活性成分的權(quán)利要求l-8任一項(xiàng)所述的提取物。11、一種用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的藥物組合物，其包含有效治療量的下式l所示的化合物或其鹽；以及藥學(xué)上可接受的載體[式1]其中R為氫原子，Q-Q垸基或糖。12、根據(jù)權(quán)利要求ll所述的藥物組合物，其中R為氫原子。13、根據(jù)權(quán)利要求ll所述的藥物組合物，其中的糖選自葡萄糖，果糖，甘露糖，半乳糖，核糖，纖維素，糖原，蔗糖，麥芽糖和乳糖。14、一種用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的食物組合物，其包含作為活性成分的式l所示的化合物或其鹽[式1]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中R為氫原子，C,C4烷基或糖。15、根據(jù)權(quán)利要求14所述的食物組合物，其中R為氫原子。16、根據(jù)權(quán)利要求14所述的食物組合物，其中的糖選自葡萄糖，果糖，甘露糖，半乳糖，核糖，纖維素，糖原，蔗糖，麥芽糖和乳糖。全文摘要本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的薯蕷科植物的提取物，以及包含所述提取物的藥物組合物或食物組合物。此外，本發(fā)明還提供用于預(yù)防或治療外周神經(jīng)疾病的藥物組合物或食物組合物，其包含從薯蕷科植物的提取物分離的化合物。文檔編號(hào)A61P25/02GK101296703SQ200680040194公開日2008年10月29日申請(qǐng)日期2006年10月27日優(yōu)先權(quán)日2005年10月28日發(fā)明者姜東昊,樸智浩,金善礪申請(qǐng)人:金善礪;姜東昊;樸智浩