專利名稱：葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑和用于治療糖尿病或糖尿病并發(fā)癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑、 一種包括所述葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑的 藥物組合物和一種用于在需要治療的哺乳動物體內(nèi)治療糖尿病或糖尿病并 發(fā)癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物有效量的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑。
背景技術(shù)：
除胰島素外，各種激素或生理條件能夠刺激葡萄糖的吸收。例如運動通 過非胰島素胃途徑來誘導(dǎo)骨駱肌內(nèi)的葡萄糖吸收。此外，ou-腎上腺素能 受體或內(nèi)皮素A受體的激活會導(dǎo)致非胰島素依賴性地提高葡萄糖吸收率。一 些介導(dǎo)這些代謝反應(yīng)的信號傳導(dǎo)機制類似于那些胰島素所采用的機制，而另 一些則明顯不同。例如，用花生四烯酸處理的脂肪細胞中發(fā)生的對葡萄糖吸 收的刺激，以及被過氧化物SI^增生物激活的受體Y激動劑似乎涉及特異性 和非胰島素依賴性的信號傳導(dǎo)途徑。許多年以來， 一直認為脂肪組織在全身脂質(zhì)和能量穩(wěn)態(tài)中起關(guān)鍵作用。 從循環(huán)中去除過量的葡萄糖的過程包括刺激葡萄糖向脂肪組織和肌肉組織 中轉(zhuǎn)運。已經(jīng)很清楚2型糖尿病中的葡萄糖不耐受是由葡萄糖轉(zhuǎn)運至脂肪組 織的缺陷導(dǎo)致的。因此，發(fā)現(xiàn)新的調(diào)節(jié)脂肪細胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運的內(nèi)源因子對 于我們理解糖尿病進程和開發(fā)改進的治療策略是必不可少的。生物活性分子例如激素、神經(jīng)遞質(zhì)和細胞因子在生物體內(nèi)的許多調(diào)節(jié)過程中起到重要作用。這些分子在細胞通訊中具有必不可少的作用。此外，它 們已被用于診斷和治療人類的疾病。為了找到新的生物活性分子，通常使用 連續(xù)柱色譜法。但是，由于多個柱色譜步驟所導(dǎo)致的低產(chǎn)率，所以不可M 限制了所要研究的分子的豐度。為解決這一問題，本發(fā)明的發(fā)明4之前開發(fā)了 一種新的用于搜索各種內(nèi)源配體的綜合方法——配體鐠及鑒定(LPI)法(Ligand Profiling and Identification)。這種基于平行柱色鐠方法和靈敏MS分析的方法適合于快 速和同時地搜索低豐度生物活性分子。近來，為進行有效純化，我們通iti口 入蛋白酶過濾法M了這一 LPI技術(shù)。我們認為這些系統(tǒng)的和靈敏的分析技 術(shù)可以被有效地用于從組織或體液中鑒定新的生物活性分子。這些現(xiàn)有技術(shù)的參考文獻沒有具體描述或提出將胰島素致敏劑與厭食 劑(anorectic)相組合以及這種組合的效果。需要開發(fā)足以^皮改良為藥品 的優(yōu)良藥物，這些藥物應(yīng)具有優(yōu)良的糖尿病療效而又沒有明顯的副作用。發(fā)明內(nèi)容在本發(fā)明尋找可以刺激3T3-L1脂肪細lfe^血清中吸收葡萄糖的新配體 的過程中，溶血磷脂酰膽堿(LPC)被鑒定為可以活化葡萄糖吸收的新型配體。 本發(fā)明首次證明，在糖尿病模型小鼠體內(nèi)，LPC能刺激3T3-L1脂肪細胞中 的葡萄糖吸收并且降^jMt7jc平。此外，這種LPC代謝調(diào)節(jié)需要PKC5的激活。在本發(fā)明的另一個方面中，研究了外周^口壓素(urocort in)在葡萄糖 穩(wěn)態(tài)中的作用。UCN增強了胰島素誘導(dǎo)的IR磷酸化以及隨后的^U夷島素受 體-過表達大鼠-1細胞(hIRcB細胞)和C2C12肌管中的胞內(nèi)信號傳導(dǎo)。此外， 與我們的體外研究結(jié)杲一致的是，靜脈內(nèi)注射UCN也會在STZ小鼠體內(nèi)致敏 胰島素誘導(dǎo)的jMt水平下調(diào)。這些研究結(jié)果首次證明，尾加壓素通過IR致 敏機制來致ltl夷島素功能。因此，本發(fā)明篩選了內(nèi)源肽，并且發(fā)現(xiàn)4^口壓素 可作為胰島素致敏劑。本發(fā)明的一個目的是提供一種葡萄糖吸收刺激劑，所述刺激劑包括選自 溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰絲氨酸、溶血磷脂酸和尾加壓素的化合物。所 述溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰絲氨酸和溶血磷脂酸不用依賴胰島素也可以 刺激葡萄糖吸收。^口壓素在葡萄糖穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中起到了胰島素作用輔因子的作用。溶血磷脂酰膽堿對于Akr磷酸化沒有影響。溶血磷脂酰膽喊的酰基鏈具 有14-16個碳。肉豆蔻酰LPC、棕櫚酰(palmytoyl)LPC刺激葡萄糖吸收，而 硬月旨酰LPC不刺激3T3-Ll脂肪細胞中的葡萄糖吸收。用幾種溶血磷脂來處 理3T3-L1脂肪細胞。棕櫚酰溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、棕櫚酰溶血磷脂酰甘 油(LPG)和棕櫚酰溶血磷脂酰肌醇(LPI)不刺激3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖 吸收，表明LPC的首基可能與3T3-L1脂肪細胞中由LPC刺激的葡萄糖吸收 中的結(jié)構(gòu)選擇性有關(guān)。一 l咖5i lpc (i輔)本發(fā)明的另一個目的是提供一種藥物組合物，所述藥物組合物包括選自 溶血磷脂酰膽喊、i^血磷脂酰絲氨酸、溶血磷脂酸和尾加壓素的化合物。所 述藥物組合物還包括可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。此外，所述藥物組合物 還包括至少一種選自胰島素分泌增強劑、雙胍和oc-葡糖苷酶抑制劑的化合 物。本發(fā)明的另一個目的是提供一種藥物組合物，其中尾加壓素與胰島素被 聯(lián)合使用。本發(fā)明的又另 一個目標是提供一種用于在需要治療的哺乳動物體內(nèi)治 療糖尿病或糖尿病并發(fā)癥的方法，包括給予所述哺乳動物有效量的胰島素致 敏劑，所述胰島素致敏劑選自溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰絲氨酸、溶血磷 脂酸或尾加壓素。所述糖尿病并發(fā)癥為肥胖癥、高脂血癥、動脈硬化、高血 壓或心臟病。此外，所述方法包括將有效量的胰島素致敏劑和至少一種選自 胰島素分泌增強劑、雙胍和oc-葡糖苷酶抑制劑的化合物聯(lián)合給予所述哺乳動物的步驟。


圖1A至1E示出了a清中鑒定新的葡萄糖吸^'J激分子。圖2A至2D示出了 LPC對3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收的作用。圖3A和3B示出了 3T3-L1脂肪細胞中LPC刺激的GLUT4易位。圖4A和4B示出了 LPC通過PKC 5激活來刺激葡萄糖吸收。圖5A至5E示出了靜脈內(nèi)給予的LPC在正常小鼠以及I型和n型糖尿病模型小鼠體內(nèi)的抗糖尿病效果。圖6A示出了 LPS特異性地刺激3T3-Ll脂肪細胞中的葡萄糖吸收，6B示出了 LPS劑量依賴性地刺激3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖吸收。圖7A和7D示出了 LPS P爭低正常小鼠和I型糖尿病模型小鼠體內(nèi)的M水平。圖8A和8B示出了 LPA以劑量依賴性和時間依賴性的方式刺激3T3-L1 脂肪細胞中的葡萄糖吸收。圖9A和9B示出了 LPA通過LPA受體和Goci激活來刺激3T3-Ll脂肪細 胞中的葡萄糖吸收。圖10A和10B示出了 LPA通過PI3-激S^l賴性信號傳導(dǎo)途徑來刺激 3T3-Ll脂肪細胞中的葡萄糖吸收。圖11A至11D示出了 LPA通過LPA受體激活來降低正常小鼠體內(nèi)的iMt水平。圖12A至12D示出了 UCN對hIRcB細胞中的IR自磷酸化的作用。 圖13A和13B示出了 UCN對C2C12肌管中的葡萄糖吸收和IR磷酸化的 作用。圖14A和14B示出了 UCN對正常小鼠和STZ小鼠體內(nèi)血漿葡萄糖控制的 作用。
具體實施方式
在下文中將會參照附圖來詳細描述本發(fā)明的示例性實施方案。 葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑是指任何可通過增加組織對胰島素的反應(yīng)性來降低 血瞎水平的藥劑。對胰島素抗性高血壓敏感的患者是指表現(xiàn)出胰島素抗性并且因此可能 表現(xiàn)出高血壓的患者。這類患者是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知并且^^易辨 別的。治療是指胰島素抗性和/或高循環(huán)胰島素水平所致的血壓的任何降低。 預(yù)防是指依據(jù)疾病的嚴重程度，部分地至完全i^免胰島素抗性患者體內(nèi)的 高血壓。"單位劑量，，是指適合于醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)目的給藥形式的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑 的離散量。因此，理想的單位劑量應(yīng)該是含有用于特定目的(例如治療或預(yù) 防抗糖尿病藥物治療導(dǎo)致的肥胖癥)的精確量的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑的一個單 位或其整數(shù)量。對于藥物制劑領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員來說顯而易見的是，葡 萄糖吸收調(diào)節(jié)劑可以被配制成常規(guī)的單位劑量。這些單位劑量可以被包裝成 各種形式，例如片劑、硬膠嚢、箔包裝、玻璃a等等。類似地，單位劑量 可以用藥物滴管或泵式噴霧器送遞。然后這些不同的單位劑量可以以各種可 藥用的液體給藥形式來給予，即口服或腸胃外給藥。因此，例如，箔包裝的 內(nèi)容物可以在水中溶解并經(jīng)口才IUv，或者小玻璃瓶的內(nèi)容物可以被注射。類 似地，離散量形式例如藥物滴管或泵式噴霧器可以在水中溶解。"哺乳動物"是指一類高等脊推動物(哺乳動物類)中的任何動物，包括 人和所有其他用乳腺分泌的乳養(yǎng)育幼崽并且具有通常被或多或少的毛發(fā)覆 蓋的皮膚的動物。這一定義特別包括人，其耐力、精力或運動能力不是最佳 的。普通醫(yī)師或獸醫(yī)可以容易地診斷這類人和非人類的動物。葡萄糖穩(wěn)態(tài)可通過對肝葡萄糖產(chǎn)生和細胞葡萄糖吸收的精細控制來維 持。如果我們的身體不能維持葡萄糖穩(wěn)態(tài)，我們就會患上高血瞎或各種代謝紊亂病癥。在尋找新的增強3T3-Ll脂肪細胞中葡萄糖吸收的因子時，我們 應(yīng)用了新的基于系統(tǒng)性平行柱色語、蛋白酶過濾和靈敏的MS分析的綜合方 法，并Jb tLPC進行鑒定。我們發(fā)現(xiàn)LPC以劑量依賴性和時間依賴性的方式刺激葡萄糖吸收。LPC 治療所刺激的葡萄糖吸收對LPC的酰基鏈長度的變化和其極性首基的差異 都很敏感。對3T3-L1進行的LPC處理會導(dǎo)IL^膜處GLUT4水平的顯著升高。 LPC對葡萄糖吸收的作用可被PKC5的抑制劑相c毒素(rottlerin)和顯性負 性PKC5的表達消除。將LPC給予小鼠會導(dǎo)致血糖水平的顯著下降。此外，性糖尿病):、鼠模型中的jHI7K平。這^結(jié)絲明lpc V能會引發(fā)對葡萄糖 穩(wěn)態(tài)的新觀念和治療糖尿病的新方式。溶血磷脂調(diào)節(jié)各種生物過程，包括細胞增殖、肺瘤細胞^Jl和炎癥。通 過磷脂酶A2 (PLA2)作用產(chǎn)生的LPC是主要的血漿脂質(zhì)成分并且將脂肪酸和膽 堿轉(zhuǎn)運到組織中。也已知LPC與葡萄糖穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)高度相關(guān)。最近，已經(jīng)證 明LPC會增強胰細胞的葡萄糖依賴性胰島素分泌。已經(jīng)報道的LPC的生理作 用之一是誘導(dǎo)胰細胞分泌胰島素。最近，Takatoshi等人鑒定了一種孤兒G蛋白偶聯(lián)受體GPR 119，它是一種新的針對LPC的Gs蛋白偶聯(lián)受體。所述 GPR 119主要在胰細胞中表達且LPC對GPR 119的激活會導(dǎo)致葡萄糖依賴性 胰島素分泌。LPA是一種有效的多生物活性的磷脂，它已知能通過特異性G蛋白偶聯(lián) 受體來調(diào)節(jié)多種細胞事件。LPA可以調(diào)節(jié)血小板凝集、肌動蛋白細胞骨架活 化、成纖維細胞增殖和軸突收縮。已經(jīng)推斷有兩種主要的LPA細胞外產(chǎn)生途 徑。第一種途徑是通過活化的血小板釋放LPA。另一種途徑是通過自分泌運 動因子(溶-LPD)由溶血磷脂產(chǎn)生LPA。最近，有報導(dǎo)稱由于自分泌運動因子 的分泌，可以在脂肪細胞的胞外培養(yǎng)基中產(chǎn)生LPA。 LPA可能參與在總能量 平衡調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用的脂肪組織的發(fā)育控制。作為一種生物活性溶血磷脂，溶血磷脂酰絲氨酸(LPS)被認為與免疫調(diào) 節(jié)相關(guān)。但是LPS對細胞活性的作用以及其耙分子的身M沒有得到完全闡 明。LPS也存在于卵巢癌患者的腹水內(nèi)。已有報導(dǎo)稱它M導(dǎo)卵巢癌和乳腺 癌細胞系中細胞內(nèi)鈣濃度的暫時性增加。LPS也會刺激Jurkat細胞內(nèi)的白 細胞介素-2的生成，表現(xiàn)出對Jurkat細胞增殖的抑制作用。此外，LPS治 療增強了大鼠肥大細胞內(nèi)的神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)的組胺釋放以及PC12細胞的 神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)的分化。由于僅有有限的才艮導(dǎo)證明了 LPS在一些生物應(yīng)答 調(diào)節(jié)中的作用，所以應(yīng)該對它在各種細胞活性中的作用以及其作用機制進行研九。本發(fā)明研究了 。壓素(UCN)作為葡萄糖穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中胰島素作用的輔因 子的新作用。眾所周知，UCN起血糖增高劑的作用。但是，我們發(fā)現(xiàn)UCN可 以致敏信號傳導(dǎo)分子的胰島素誘導(dǎo)活化，所述信號傳導(dǎo)分子例如IR it^達 (hIRcB)細胞和C2C12肌管中的胰島素受體(IR)、胰島素受體底物(IRS)和蛋 白激酶B(AKT)。值得注意的是，體內(nèi)尾加壓素在JMI7JC平的調(diào)節(jié)中的作用 會隨劑量而不同。在低劑量(O. lpM)時，^口壓素會下調(diào)JMI水平并且因此 增加小鼠骨骼肌內(nèi)的IR磷酸化?？傊?，我們示出了4>壓素會增強胰島素 敏感性的生理現(xiàn)象，表明>€>壓素可被應(yīng)用為糖尿病的治療耙標。4^口壓素是具有40個M酸的肽，它是促皮質(zhì)素釋放因子(CRF)家族的 一員。已知尾加壓素是下丘腦-腦垂體-腎上腺(HPA)軸調(diào)節(jié)中的一種主要 下丘腦因子。此外，有越來越多的證據(jù)表明UCN還在能量平衡調(diào)節(jié)中具有重 要作用。在各種動物模型中，UCN通過兒茶酚胺能系統(tǒng)來抑制食欲并活化產(chǎn) 熱作用和胃排空，并且刺激結(jié)腸運動功能。最近，有一些關(guān)于外周組織(如骨骼肌)中UCN表達的報導(dǎo)。但是葡萄糖調(diào)節(jié)中的外周UCN的作用仍舊是未 知的。溶血磷脂調(diào)節(jié)各種生物過程，包括細胞增殖、肺瘤細胞^7v。通過磷月旨 酶A2(PLA2)對溶血磷脂酰膽喊的作用產(chǎn)生的LPC^1進炎性效應(yīng)，包括增加 內(nèi)皮細胞粘附分子和生長因子的表達、單核細胞趨化性和巨噬細胞活化。本 發(fā)明首次提供了 LPC是涉及葡萄糖穩(wěn)態(tài)的血源性激素(blood borne hormone)的證據(jù)。為了尋找這種分子，我們使用了新的包括平行柱色諳、 蛋白酶過濾和高靈敏度MS分析的綜合方法(Baek， M. C. ， et al.， 戶,Weo邁/"《卯1741-1749， 2006)。 LPC治療通過PI3-激Sl^性PKC 5 激活快速刺激3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖吸收。此外，給予糖尿病才莫型小 鼠LPC會導(dǎo)致血糖水平的顯著下降。除LPC外，已知許多溶血磷脂(LPL)具 有各種生理和病理功能。但是，沒有報導(dǎo)稱它們參與葡萄糖穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)。作 為與葡萄糖代謝相關(guān)的內(nèi)源脂質(zhì)，脫氬表雄酮(DHEA)已經(jīng)被報道過。盡管最 近的研究已經(jīng)證明D服A會增加脂肪細胞中的葡萄糖吸收速率，但是沒有報 導(dǎo)稱它對動物模型有效。因此，我們認為LPC可能是第一種調(diào)節(jié)糖尿病模型 小鼠以M常小鼠體內(nèi)jk^水平的內(nèi)源脂質(zhì)。為了尋找新的活性配體，我們在先設(shè)計了稱為LPI的新方法學(xué)，所述方 法學(xué)是&于平行HPLC和MS分析的活性成分潛的概念之上的。如在先的報告 所述，所述平行HPLC是通過增加產(chǎn)率來有效鑒定活性分子的。在本文中， 我們向平行HPLC中加入了蛋白酶過濾法以更有效地純化。蛋白酶通常被用 于蛋白質(zhì)作圖或蛋白質(zhì)鑒定，但是所述蛋白酶過濾法同柱色鐠一樣使用蛋白 質(zhì)酶作為純化工具。蛋白酶過濾特別適用于排除具有與活性分子類似的物理 化學(xué)性質(zhì)的無活性肽。雖然所述無活性肽不容易通過常規(guī)的順序色鐠除去， 但是通過蛋白酶處理切割無活性肽會使無活性肽產(chǎn)生結(jié)構(gòu)變化并且通過接 下來的柱色譜將其從活性分子中分離出來。通過將蛋白酶過濾法與平行HPLC 聯(lián)合起來，我們設(shè)計了一種新的配體鑒定方法并且更容易地鑒定了 LPC。因 此，這種綜合方法可用于從少量原料中搜索各種生物活性分子例如孤兒GPCR 研咒。LPC治療導(dǎo)致的小鼠體內(nèi)3T3-Ll脂肪細胞中對葡萄糖吸收的剌激和血 糖的降^^t于LPC SL&鏈長度的變化敏感。棕櫚酰LPC和肉豆蔻酰LPC增強 3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖吸收，但是硬脂酰LPC對于3T3-Ll脂肪細胞中 的葡萄糖吸收的刺激沒有作用。當用幾種溶血磷脂(它們與棕櫚酰LPC ^極性首基上有結(jié)構(gòu)差異)處理3T3-L1脂肪細胞時，沒有刺激葡萄糖吸收。LPC 的這種結(jié)構(gòu)特異性在小鼠模型中也得到了確認。這些結(jié)^明?；滈L度和 磷脂酰膽堿首基均對于小鼠體內(nèi)3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收的刺激和血 糖的降低都是至關(guān)重要的?；贚PC作用的快it^效性和結(jié)構(gòu)特異性，^^發(fā)明的發(fā)明^v推測，LPC 的生物活性可以通過LPC與細胞表面的特異性LPC受體的結(jié)合來解釋。已有 報導(dǎo)稱幾種溶血磷脂是這一 GPCR家族的配體。有報導(dǎo)稱LPC是結(jié)合并活化 G2A和GPR4的直接配體。但是最近在其他獨立的研究中報道，LPC能激活 G2A和GPR4但并不與它們直接結(jié)合。因此，LPC是通過直接結(jié)合G2A和GPR4 還是間接通過另 一種未知的途徑來刺激葡萄糖吸收仍舊是待研究的問題。很久以前就認識到在脂肪細胞和肌肉細胞中的葡萄糖吸收促進過程中 包括PKC5激活，但是PKC5激活還控制葡萄糖轉(zhuǎn)運。在激活葡萄糖轉(zhuǎn)運的 過程中有PKC 5參與，這一點最初是通過使用藥劑和胰島素的研究來闡明的。 在大鼠骨骼肌細胞中，由胰島素剌激的GLUT4向質(zhì)膜的易位和葡萄糖吸收可 被楸毒素抑制。此外，PKC5的it^達誘導(dǎo)GLUT4向質(zhì)膜的易位，并可佳基 礎(chǔ)葡萄糖吸收增加到通itl4島素達到的水平。在本研究中，LPC誘導(dǎo)的葡萄 糖吸收增強可被楸毒素和顯性負性PKC5的表達抑制。但是，已經(jīng)證明常規(guī)收沒有作用。這些研究結(jié)a明只有PKC 5對于LPC刺激的葡萄糖吸:是:必 不可少的。已經(jīng)報道的LPC的生理作用之一是誘導(dǎo)胰P細胞分泌胰島素。最近， Takatoshi等鑒定了一種孤兒G蛋白偶聯(lián)受體GPR 119,它是一種新的針對 LPC的Gs蛋白偶聯(lián)受體(Soga， T. ， et al. ， 5/oc力e邊5/op力/s Co鵬"/ 326， pp744-751， 2005)。所述GPR 119主要在胰P細胞中表達，并且LPC 對GPR119的激活會導(dǎo)致葡萄糖依賴性胰島素分泌。在本研究中，我們在禁 食條件下給予小鼠LPC。我們也觀察到在給予小鼠LPC后血清胰島素的濃度 沒有變化。這表明小鼠體內(nèi)的jfc^t濃度下降不是由胰島素分泌介導(dǎo)，而是由 LPC刺g LPC的直接作用介導(dǎo)。總之，我們目前的研究表明LPC刺激3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖吸收。 這一作用是受非PI 3-激^賴性、PKC5依賴性的信號傳導(dǎo)途徑介導(dǎo)的。 此外，LPC會直接降低糖尿病小鼠模型中的j&4t水平。關(guān)于LPC降如瞎功能 的這一新發(fā)現(xiàn)可能有助于重新闡明葡萄糖穩(wěn)態(tài)和葡萄糖代謝相關(guān)生物學(xué)的其他方面。LPC和代謝綜合征之間的關(guān)系也值得進一步的研究。最后，我們 的研究結(jié)果增加了 LPC成為用于開發(fā)糖尿病藥物療法的有用乾標的可能性。已知UCN是io4t增高劑，但是在本發(fā)明中在正常ICR小鼠體內(nèi)注射的 UCN會下調(diào)血糖水平(圖14A)，并且與單獨注射胰島素相比，在鏈脲佐菌素 (streptozotocin， STZ)小鼠體內(nèi)共同注射胰島素和UCN會進一步下調(diào)jMt 水平(圖14B)。此外，本發(fā)明研究了 UCN介導(dǎo)的iMt水平下調(diào)的分子機制。 本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，UCN可致敏IR #達(hIRcB)和分化C2C12肌管中的 胰島素介導(dǎo)的IR磷酸化(與IR激活有關(guān))(圖12、13)。并且這些作用與C2C12 肌管中的葡萄糖吸4^目關(guān)。這是第一次發(fā)現(xiàn)GPCR配體可特異性致敏胰島素 誘導(dǎo)的IR激活和葡萄糖調(diào)節(jié)生理學(xué)功能。已知胰島素是血液中主要的葡萄糖調(diào)節(jié)劑。但是，為了有效和精細地調(diào) 節(jié)血糖水平，已經(jīng)表明需要胰島素功能輔因子。這些輔因子可能在生理和病 理條件之間具有不同的功能權(quán)重。在正常生理條件下，胰島素起主要的葡萄 糖調(diào)節(jié)劑的作用，所以輔因子在葡萄糖穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中可能會凈皮忽視。但是在病 理M(如糖尿病和肥胖癥)下，胰島素的作用可能會被高度弱化，此時輔因 子可能通過增強胰島素的作用而在葡萄糖調(diào)節(jié)中起很大作用。UCN表現(xiàn)出降j6l3H作用，雖然是在少數(shù)小鼠體內(nèi)并JL^ STZ小鼠體內(nèi)的 葡萄糖調(diào)節(jié)中與M島素協(xié)同作用。因此，UCN可能在病理條件下的葡萄糖 調(diào)節(jié)中具有更強的作用。總之，本發(fā)明揭示了胰島素介導(dǎo)的葡萄糖調(diào)節(jié)的新 機制和UCN的新功能。值得注意的是IR活性可被GPCR調(diào)節(jié)，并且UCN在葡 萄糖穩(wěn)態(tài)方面在CNS和外周系統(tǒng)中具有相反的功能。本發(fā)明的藥物組合物可以被用作預(yù)防或治療糖尿病或糖尿病并發(fā)癥的 藥劑。糖尿病的實例包括胰島素^性糖尿病、非胰島素依賴性糖尿病等等。 此夕卜，本發(fā)明的藥物組合物可被用作預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥(例如神經(jīng)病、 腎病、視網(wǎng)膜病變、大血管病變、冠狀動脈疾病、骨質(zhì)減少等)的藥劑。此 外，本發(fā)明的藥物組合物可被用作治療受損的葡萄糖耐受的藥劑。此外，將本發(fā)明的藥物組合物與胰島素分泌增強劑、和胍和cc-葡糖苷 酶抑制劑等聯(lián)^^吏用可提供更優(yōu)良的降血瞎效果。本發(fā)明藥物組合物或其各個活性成分的劑型包括口服劑型，例如片劑、 膠嚢(包括m嚢和微膠嚢)、粉末、顆粒、糖漿等；非口月艮劑型，例如注射 劑(例如皮下注射劑、靜脈內(nèi)注射劑、肌內(nèi)注射劑、,內(nèi)注射劑等)、外用 形式(例如鼻噴霧制劑、經(jīng)皮制劑、軟膏劑等)、栓劑(例如直腸栓劑、陰道栓劑等)、球劑、點滴注射劑等。本發(fā)明藥物組合物的劑量可以參考^^種藥物的推薦劑量來適當?shù)卮_定， 并可以根據(jù)個體受試者、受試者的年齡和體重、目前臨床狀況、給藥時間、 劑型、給藥方法、藥物的組合等進行適當選擇。胰島素致敏劑和厭食劑的劑 量可基于臨床所用劑量來適當?shù)剡x擇。例如，對于將胰島素致敏劑給予成年糖尿病患者(體重50 kg),每日劑量通常是O. 01至1000 mg，優(yōu)選0.1至 500 mg。該劑量可以一天給予一次至數(shù)次。參照下述實施例進一步更詳細地解釋本發(fā)明。但是，這些實施例不應(yīng)被 解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實施例方法和材料材料合成的14:0、 18:0、 18:1的LPC、胰島素和,佐菌素(STZ)購 自Sigma (St. Louis, MO)。其他i^血磷脂購自Avanti polar lipids。所有 的脂質(zhì)都溶于MeOH中制成50mM儲液。所有的脂質(zhì)儲液都在-70。C氮氣下以 單次用量等分形式存儲于小玻璃瓶中，并JMt—個月內(nèi)使用。G66976和楸 毒素購自Calbiochem?？贵w購自下述來源多克隆抗GLUT4抗體購自 Biogenesis Ltd (Sandown,卿?？沽姿?Ser473 AKT1抗體購自Sigma?？?磷酸-Tyr989 IRS1是我們實驗室制備的。["C] 2-脫氧-D-葡萄糖(300 mCi/mmol)購自Moravek Biochemicals。另爽蛋白酶購自Roche (德國曼海if)。 組織培養(yǎng)基和胎牛血清購自GIBCO。所有其他的試劑都是分析純級。細胞培養(yǎng)3T3-Ll成纖維細胞在DMEM中生長至匯合并維持在37C下含 5°/。0)2的潮濕氣氛中，所述DMEM中含有高濃度的葡萄糖、10%胎牛血清、青 霉素50 U /ml和鏈霉素50 n g /ml。如在先的文獻所述(van den Berghe， N., et al.， #。7 Ce〃14， pp. 2372-2377, 1994)，誘導(dǎo)3T3-L1分化為脂 肪細胞。動物。雄性ICR小鼠購自hyochang science (R0K)。 C57BLKSJ-db/db小 鼠購自SLC(日本)。在靜脈內(nèi)注射LPC后，用便攜式葡萄糖計(Gluco-Dr， R0K) 在斷尾后定期測量如瞎。為測量血清胰島素，用胰島素-RIA試劑盒(LINC0， Missouri)測定小鼠的血液樣品。在雄性ICR小鼠中通過連續(xù)兩天在腹溪內(nèi) 注射溶于檸檬酸鈉(pH5. 5)的STZ (200 mg/kg)來誘導(dǎo)胰島素缺陷型小鼠。在 最后一次STZ注射后第三天，靜脈內(nèi)注射載體、LPC或胰島素后如上所述分析急性降葡萄糖作用。HPLC純化。將約350 ml新鮮Ajfc清與70% (v/v)丙酮、1 M乙酸和20 mM HC1混合，并在4X:下以20， 000 g離心30分鐘。收集所得上清液并用乙醚 萃取三次。在4'C下以20， 000 g離心7m目30分鐘并將上清液上樣到S印Pak C18 (Waters)卡套柱(cartridge)上預(yù)純化。將洗脫液直接上樣到C18反相 HPLC柱上(Vydac 218TP1022, 22 mm x 250 mm)。每10 ml收集一個級分， 并將每個級分取約1%用于測定3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖吸收。將活性級 分在37。C下胰蛋白酶處理12小時，然后分別等量上樣到(M反相HPLC柱 (Vydac 214TP5215, 2.1 mm x 150 mm)和陽離子交換HPLC柱(Amersham Pharmacia Min-S HR 5/5， 4.6咖x50咖)上。質(zhì)i普和數(shù)據(jù)分析。用裝備了納米-ESI源的QSTAR PULSAR I hybrid Q-TOF MS/MS (Applied Biosystems/PE SCIEX， Toronto Ontario)進行ESI-MS和串 聯(lián)質(zhì)諉(MS/MS)分析。將樣品溶于0.1%三氟乙酸中，用protana納米噴嘴 (0dense， Denmark)送遞到ESI源中。用Applied Biosystems (AB)提供的 Analyst QS軟件計算所有用QSTAR檢測到的質(zhì)量。以8， 000-10， 000的分辨 率、10-30 ppm的質(zhì)量精度和24小時的外部校準進行QSTAR。噴嘴的電壓i殳 定在2300V。為了通it^量信息鑒定共同質(zhì)量(common mass),使用了結(jié)合 在線數(shù)據(jù)庫；"/"/o加iy ^f"ra/戶rod"c〃 (Chapman &Hall/CRC)。葡萄糖吸收測量。為測量3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖吸收，使細胞在 無血清DMEM中生長16小時，然后在不存在或存在胰島素或溶血磷脂的情況 下于37'C下按標明的時間進行培養(yǎng)。通iti口入1 jaCi的["C] 2-脫氧-D-葡萄 糖和3 mM的2-脫氧-D-葡萄糖來測量吸收。10分鐘后，通過用水預(yù)冷的PBS 快速洗滌兩次來終止測定。用0. 5 ml含有0. 5 N Na0H和0.1 % SDS的裂解 緩沖液來裂解細胞。用細胞裂解產(chǎn)物進行液體閃爍計數(shù)，并在存在10 |iM 細胞松弛素B的情況下測定非特異性吸收(vandenBerghe， N. ， et al. ， M / Ce//14， pp. 2372-2377， 1994)。脂肪細胞的膜分級。為獲得3T3-LI脂肪細胞的總膜(TM)，將細胞收集 到10 ml用水預(yù)冷的HES緩沖液中(250 mM蔗糖、1 mM EDTA、 1 mM苯甲基 磺酰氟[PMSF]、 1 jiM胃蛋白酶抑制劑、1 jiM抑肽酶、1 jjM亮抑酶肽和 20 mM HEPES， pH 7.4)，隨后在4。C下用玻璃Dounce勻漿器勻漿30次。在 4。C下以1， 000 g離心5分鐘去除未破碎細胞后，在4。C下以212， 000 g離 心上清液90分鐘以獲得總細胞膜的沉淀。為從3T3-L1脂肪細胞獲得質(zhì)膜(PM)亞細胞級分，使用了如在先文獻所述(Perrini， S. ， et al. ， Diabetes 53， pp. 41-52， 2004)的差速趁逸離心。PKC同種型的腺病毒轉(zhuǎn)染。以前已經(jīng)描述過了用于PKC5或G重組腺病 毒的腺病毒表達載體。在所培養(yǎng)的3T3-Ll脂肪細胞分化后，吸出培養(yǎng)基并 用含有PKC5或C重組腺病毒的病毒培養(yǎng)基感染培養(yǎng)物24小時。然后用DMEM 洗滌所述培養(yǎng)物兩次并重新培養(yǎng)。4吏用感染后48小時的細胞進4亍葡萄糖吸 收測定或免疫印跡。免疫印跡。為制備總細胞裂解產(chǎn)物，用不含Ca27Mg"的PBS洗滌3T3-L1 脂肪細胞，然后在裂解緩沖液(50 mM HEPES、 pH 7. 2、 150 mM NaCl、 50 mM NaF、 lmMNa3V04、 10%丙三醇、1% Tririon X-100)中裂解。在4t:下以15,000 rpm離心裂解產(chǎn)物15分鐘。通過在95。C下在Laemmli樣品緩沖液中煮沸5 分鐘使蛋白質(zhì)變性，并通過SDS-PAGE分離。用Hoefer濕轉(zhuǎn)系統(tǒng)將SDS膠轉(zhuǎn) 移到硝酸纖維素膜上。在舍有5。/o脫脂奶粉的TTBS(20mMTris-HC1、 pH 7. 6、 150mMNaCl、 0. 05% Tween 20)中封閉膜30分鐘，然后用抗體孵育3小時。 用TTBS洗膜幾次后，將所述印跡用HRP(辣4艮過氧化物酶)綴合的山羊抗兔 抗體孵育1小時。將所述印跡用TTBS洗滌幾次并且進行ECL。統(tǒng)計分析。所有數(shù)據(jù)都表示為平均值土SE。用Student's t檢M行統(tǒng) 計分析。*代O. 01，認為表明具有統(tǒng)計顯著性。實施例1在3T3-Ll脂肪細胞中鑒定溶血磷脂酰膽堿為來自人血清的葡萄糖吸收 刺激分子。為研究可刺激3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收的內(nèi)源因子，我們使用了 一種新的基于系統(tǒng)性平行柱色鐠、蛋白酶過濾法和靈敏的MS分析的綜合方 法(圖IA)。平行HPLC的基本原理是使用譜圖分析而非常規(guī)的順序純化來鑒 定輩巴分子(Baek， M. C. ， et al.，戶rWe咖/" 6， pp， 1741-1749， 2006)。 由于隨著純化的進行，每個柱之后的產(chǎn)率都呈指數(shù)下降，所以多步驟導(dǎo)致的 低產(chǎn)率是順序柱純化的主要限制因素。這種新方法將順序HPLC步驟減到最 少，并且使用部分純化的HPLC級分來鑒定耙分子，因此與多步驟順序HPLC 相比僅需要少量原料。除平行HPCL外，我們使用了蛋白酶過濾法來進行有效的純化。如果在 特定蛋白酶處理后活性級分沒有失去其活性，則我們可以得到^^有活性分子的級分，并且該級分可通過接下來的柱色譜被徹底從各種無活性肽中分離出 來。因此，這種方法可用于非肽分子(如脂質(zhì)、胺和碳水化合物)的純化。利用這種新的綜合方法，首先，我們用C18反相(C18)HPLC對v^Ajk清(350 ml) 中分離出的丙酮萃取物進行了分級分離。然后用這些HPLC級分處理3T3-Ll 脂肪細胞并且通過測定["C] 2-脫氧-D-葡萄糖吸收的增加來測量葡萄糖吸收 (van den Berghe， N, ， et al. ， Ce//14， pp. 2372-2377, 1994)。如圖1B所示，至少存在四種活性級分(A-D)，并且我們;^驗了胰蛋白酶 處理是否會減少它們的活性。只有級分D的活性不受胰蛋白酶處理的影響， 所以將級分D用胰蛋白酶處理，并且用C4反相(C4)和陽離子交換(SCX)平行 HPLC進一步分離。通過測量3T3-Ll脂肪細胞的葡萄糖吸收來篩選C4和SCX 的所有級分(圖1C和1D)。用ESI-QT0F質(zhì)語分析每個柱的活性級分(C4 37分鐘的級分、SCX 6分 鐘的級分)。為尋找共同質(zhì)量，對每個質(zhì)謙進行比較，僅存在一個單同位素 質(zhì)量為495. 33的共同質(zhì)量值(圖1E的上圖和圖1E的中圖)。利用這一質(zhì)量定;為棕櫚酰溶:磷脂^膽堿(LPC)。為確認所述扭分子是否是LPC，'我們 用MS/MS譜分析了標準LPC和495. 33質(zhì)量的每種片段化模式(圖1F)。正離 子模式下的標準LPC產(chǎn)物-離子語顯示有幾種來源于磷^堿首基的碰撞誘 導(dǎo)解離的離子，包括在邁A 183處最強的峰(圖1F下圖和圖1G)。來自C4 和SCX的495. 33質(zhì)量的片段^fW莫式與標準LPC完全匹配(圖1F上圖和圖1F 中圖)?；谏鲜鑫锢硇再|(zhì)，我們推斷所述活性物質(zhì)為LPC。圖1A至1E示出了M清中鑒定新的葡萄糖吸^'j激分子。圖1A示出 了鑒定可刺激3T3-Ll脂肪細胞中葡萄糖吸收的血清因子的鑒定策略的示意 圖。圖lB示出了血清的C18《j目HPLC(Vy(iac 218TP1022, 22 mmx 250 mm) 的洗脫圖。相對2-脫氧-D-葡萄糖吸收被表示為在3T3-L1脂肪細胞中通過 每個級分處理獲得的增量與載體處理的增量的比例?；钚约壏諨是人為選定 的，并用胰蛋白酶處理以進一步純化。圖1C示出了級分D的C4反相 HPLC(Vydac 214TP5215, 2.1 mmxi50咖)的洗脫圖。圖1D示出了級分D 的P曰離子交換HPLC(Amersham Pharmacia Mini-S HR 5/5， 4.6咖x50 mm) 洗脫圖。圖IE示出了用ESI-TOF質(zhì)^沐進行的質(zhì)量分沖斤。圖1C (上)、圖ID (中) 和標準棕櫚酰(16: 0) LPC (下)的活性級分的質(zhì)譜圖。圖IF示出了圖IE的每 個質(zhì)譜中495. 33質(zhì)量的質(zhì)量片段化模式分析及其MS/MS譜。實施例2LPC對3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收的作用。為了研究LPC對葡萄糖吸收的作用，在存在^^ft濃度的標準LPC的情況 下將3T3-Ll脂肪細胞培養(yǎng)不同時間。LPC刺激3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸 收的時間和劑量依賴性增加。LPC對葡萄糖吸收的統(tǒng)計學(xué)顯著作用最開始是 在l iiM濃度時觀察到的，最大的作用是在20 jaM時(圖2A)。用20 jaMLPC 時，在用LPC培養(yǎng)10分鐘后葡萄糖吸收增加到最大(圖2B)。這一濃度的LPC 沒有細胞毒性并且在40至50 yM的臨界膠粒濃度以下(Chaudhuri， P. ， et al. ， Circ Res 97， 674-681， 2005)。已知骨骼肌在葡萄糖代謝中具有重要作用，且骨骼肌中葡萄糖代謝的缺 損通常會導(dǎo)致糖尿病(Petersen, K. F. ， etal. ， Am J Cardiol 90， 11G-18G， 2002; Beck—Nielsen, H. ， et al. ， Diabetologia 37， pp2U-221， 1994)。 盡管該報導(dǎo)主要集中在3T3-L1脂肪細胞，我們也發(fā)現(xiàn)LPC以劑量依賴方式 增加C2C12肌肉細胞中的葡萄糖吸收率(數(shù)據(jù)未示出)。這些結(jié)果意味著LPC 在脂肪細胞和肌肉細胞的葡萄糖調(diào)節(jié)中都起到重要作用。為了確定LPC的?；滈L度的變化是否影響葡萄糖吸收，測試了幾種 LPC。值得注意的是，肉豆蔻酰LPC和棕櫚酰LPC刺激3T3-L1脂肪細胞中的 葡萄糖吸收，而硬脂酰LPC不刺激該葡萄糖吸收(圖2C)。為了評估其他溶 血磷脂是否能增強3T3-Ll脂肪細胞中葡萄糖吸收，用幾種溶血磷脂處理 3T3-L1脂肪細胞。如圖2D所示，棕櫚酰LPE、棕櫚酰LPG和棕櫚酰LPI不 刺激3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收，表明LPC的首基可能有助于3T3-Ll脂 肪細胞中由LPC刺激的葡萄糖吸收中的結(jié)構(gòu)選擇性。圖2A至2D示出了 LPC對3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收的作用。圖2A 示出了將6 314l中生長的3T3-L1脂肪細胞在不含葡萄糖的Krebs-Ringer緩 沖液中平衡l小時并且用LPC(0-30 iaM)或胰島素(lO nM)孵育IO分鐘。在 這些處理后，按材料方法部分所述測量["C] 2-脫氧-D-葡萄糖吸收10分鐘。 圖2B示出了用LPC(20 nM)孵育3T3-Ll脂肪細胞0-20分鐘。圖2C和2D 示出了 3T3-L1脂肪細胞中相對["C]2-脫氧-D-葡萄糖吸收，所述3T3-L1脂 肪細胞在不存在(對照)或存在等摩爾濃度(20 pM)的肉豆蔻酰溶血磷脂酰 M(14:0LPC)、棕櫚酰溶血磷脂酰M(16:0LPC)、石^l旨酰溶血磷脂酰膽 堿(18:0LPC)、棕櫚酰溶血磷脂酰乙醇胺(16:0LPE)、棕櫚酰溶血磷脂酰肌醇(16:0 LPI)、棕櫚酰溶血磷脂酰甘油(16: 0 LPG)的情況下孵育10分鐘。 數(shù)值為三次獨立的重復(fù)進行三次的實驗的平均值土SE。 *與基值相比 代0.05。實施例3LPC刺激3T3-L1脂肪細胞中的GLUT4易位。為了評估LPC增強3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運的能力是否是由LPC 誘導(dǎo)的細胞表面葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的蛋白量的變化介導(dǎo)，測定了基態(tài)或者用 LPC或胰島素處理后質(zhì)膜級分中GLUT4的蛋白水平，GLUT4蛋白是3T3-L1脂 肪細胞中表達的主要葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白同種型。同胰島素一樣，LPC誘導(dǎo)質(zhì)膜 中GLUT4蛋白含量顯著增加CS應(yīng)的180%)(圖3A和。結(jié)杲表明胰島素和 LPC都會刺激GLUT4易位,且這些結(jié)果與葡萄糖吸收實驗中的觀察結(jié)果一致。圖3A和3B示出了 LPC刺激3T3-L1脂肪細胞中的GLUT4易位。A) 3T3-L1 脂肪細胞中胰島素對GLUT4向質(zhì)膜(PM)易位的作用。LDM:低密度孩財立體。 用100 nM胰島素或20wM溶血磷脂刺激3T3-Ll脂肪細胞10分鐘。在每個 實驗中，計算用化合物刺激后GLUT4的整合密度值的相對增加或減少。B) 定量描述了相對增加的量。數(shù)值為三次獨立的重復(fù)進行三次的實驗的平均值 士SE。 *線05。實施例4LPC通過PKC 5激活來刺激葡萄糖吸收。脂肪細胞中葡萄糖吸收的胰島素剌激需要激活I(lǐng)RS1、 PI 3-激酶和[^ ,激活A(yù)KT(Burgering， B. M. ， et al. ， iVa&re 376， pp. 599-602， 1995; Ba讓nn， C. A. ， et al.,紐we 407， pp202-207, 2000)。因此，為確定 響應(yīng)于LPC而增加的葡萄糖吸收是否與胰島素依賴性信號傳導(dǎo)途徑相關(guān)，檢 查了 IRS1和AKT磷酸化。同預(yù)期的一樣，用10nM胰島素處理3T3-Ll脂肪 細胞會導(dǎo)致IRS1和AKT磷酸化的增強(附加數(shù)據(jù))。相反，用LPC處理脂肪 細胞對IRS1和AKT磷酸化無作用(附加數(shù)據(jù))。由于LPC已經(jīng)被證明能在各 種細胞中激活常規(guī)的和新的PKC(Chaudhuri， P. ， et al.,cell migration. 。Vc 97， 674-681， 2005)，接下來評估了 LPC誘導(dǎo)增強的葡萄糖轉(zhuǎn)運 中是否涉及這些PKC。用2 mMG66976 (常規(guī)的PKC抑制劑)對3T3-L1脂肪細 胞進行的30分鐘預(yù)處理沒有改變LPC刺激的葡萄糖吸收。但是，LPC刺激的葡萄糖吸收被10 nM楸毒素(PKC 5抑制劑)的預(yù)處理完全抑制(圖4A)。為了更直接地測試PKC的作用，我們使用了腺病毒表達系統(tǒng)在3T3-L1 脂肪細胞中#達特定的PKC同種型和顯性負性PKC同種型。我們測定了過 表達野生型、顯性負性PKC 5或顯性負性PKC C的3T3-L1脂肪細胞中的葡萄 糖吸收。與對照3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖轉(zhuǎn)運活性相比，野生型PKC5 的表達誘導(dǎo)了 LPC刺激狀態(tài)的葡萄糖轉(zhuǎn)運活性的少量增加。PKC5的顯性負 性突變體的表達顯著降低了 LPC刺激的葡萄糖轉(zhuǎn)運活性。相比之下，顯性負 性PKC C的*達既沒有改變LPC誘導(dǎo)的葡萄糖吸收也沒有改變胰島素i秀導(dǎo) 的葡萄糖吸收(圖4B)。這些研究結(jié)果證明PKC 5可能參與了 LPC誘導(dǎo)的葡萄 糖轉(zhuǎn)運激活。圖4A和4B示出了 LPC通過PKC 5激活來刺激葡萄糖吸收。圖4A示出 了將6孔板中生長的3T3-Ll脂肪細胞在不含葡萄糖的Krebs-Ringer緩沖液 中平衡l小時并且如所示地用2 pM G66976、 10 jaM楸毒素或單獨用緩沖 液處理30分鐘。然后，將細胞用載體(空白條)或20 pM LPC(填充條)處理 IO分鐘。在這些處理后，按材料方法部分中所述測量["C]2-脫氧-D-葡萄糖 吸收10分鐘。圖4B示出了 PKC5和PKCi;蛋白的表達水平。用抗PKC5或 PKC ^抗體對對照3T3-L1脂肪細胞和表達PKC 5 WT、 PKC 5 DN或PKC ^ DN 的3T3-Ll脂肪細胞的裂解產(chǎn)物進行免疫印跡(上)，并且測量3T3-L1脂肪細 胞中的葡萄糖吸收(下)。用載體或20 jiM LPC或10 nM胰島素孵育對照 3T3-Ll脂肪細胞和表達PKC 5 WT、 PKC 5 DN或PKC C DN的3T3-L1脂肪細 胞10分鐘。數(shù)值為三次獨立的重復(fù)進行三次的實驗的平均值± SE。 *代0. 05。實施例5小鼠模型中LPC的降葡萄糖作用。在雄性白化(albino) ICR(癌癥研究所)小鼠體內(nèi)測驗了 LPC的體內(nèi)效 果。通過靜脈內(nèi)注射(i.v.)急性給予小鼠LPC(15或30 pmol/kg)會在30 分鐘內(nèi)使JM唐水平呈現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)顯著性下降(圖5A)。這種作用是劑量依賴性 的并且不是由血液胰島素水平的變化導(dǎo)致的(圖5C)。為確定LPC的不同分子種類是否活性不同，以30 pmol/kg的等摩爾劑 量給予(i. v.)具有不同長度?；湹腖PC分子或其他溶血磷脂或溶血磷脂 酰乙醇胺。值得注意的是，只有棕櫚酰LPC具有顯著的降血糖作用(圖5B)。 接下來我們給鏈脲佐菌素(STZ)-處理的力爽島素缺陷小鼠注射(i. v.) 30 pmol/kgLPC。 LPC顯著降低了jMt濃度，該效果類似于胰島素注射誘導(dǎo)的效 果(圖5D)。接下來，我們研究了在胰島素抗性肥胖db/db小鼠體內(nèi)注射LPC是否也 對糖血有作用。當注射LPC時，膽下降到接ieJE常水平(圖5E)。綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明LPC能夠在I型和n型糖尿病小鼠模型以及正常小鼠體內(nèi)調(diào)節(jié)jk^唐水平。圖5A至5E示出了靜脈內(nèi)注射給予的LPC在糖尿病小鼠模型中的抗糖尿 病效力。圖5A和5B示出了 ICR小鼠體內(nèi)LPC導(dǎo)致的急性葡萄糖降低。給八 周齡雄性小鼠靜脈內(nèi)注射PBS、胰島素、LPC或LPE。在給藥后(0-120分鐘) 監(jiān)測iz4t。圖5C示出了單次靜脈內(nèi)注射LPC后八周齡雄性小鼠體內(nèi)的血清 胰島素水平。圖5D示出了W^佐菌素(STZ)-處理的胰島素缺陷ICR雄性小 鼠體內(nèi)LPC導(dǎo)致的急性葡萄糖降低。圖5E示出了胰島素抗性肥胖 C57BLKSJ-db/db小鼠體內(nèi)LPC導(dǎo)致的急性葡萄糖降低。所有動物可以自由 獲得水。按學(xué)會指南進行動物管理。所有數(shù)據(jù)都表示為平均值土SE(n-5-6)。 *風(fēng)05。實施例6LPS對葡萄糖吸收的作用。6-1: LPS對3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收的作用。按照與LPC相關(guān)實施例J4^目同的方法，測試LPS在3T3-L1脂肪細胞 中的作用，結(jié)果在圖6A和6B中示出。將6 ^m中生長的3T3-L1脂肪細胞在不含葡萄糖的Krebs-Ringer緩沖 液中平衡l小時，并在存在等摩爾濃度(20 uM)的溶血磷脂酰膽堿(LPC)、 溶血磷脂酰絲氨酸(LPS)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酖肌醇(LPI)、 溶血磷脂酰甘油(LPG)的情況下孵育10分鐘。圖6A示出了 LPC和LPS特異 性地刺激3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖吸收。圖6B示出了 LPS以劑量依賴性 方式(O-30 jiM)刺激葡萄糖吸收。數(shù)值為三次獨立的重復(fù)進行三次的實驗的 平均值士SE。與基值相比*代0. 05。6-2:糖尿病小鼠模型中LPS的降葡萄糖作用。按照與LPC相關(guān)實施例基;^目同的方法，測試LPS在小鼠體內(nèi)的作用， 結(jié)果在圖7A至7D中示出。圖7A至7B示出了糖尿病小鼠才莫型中靜脈內(nèi)給藥的LPS的降葡萄糖效力。給八周齡雄性小鼠靜脈內(nèi)注射PBS、胰島素、LPS。在給藥后(0-120分 鐘)監(jiān)測血糖。如圖7所示，LPS以劑量依賴性方式降低正常小鼠體內(nèi)的血 糖水平。其他溶血磷脂(如S1P和LPE)不降低正常小鼠體內(nèi)的血糖水平(圖 7B)。接下來，測量了單次靜脈內(nèi)注射LPS后八周齡雄性小鼠體內(nèi)的血清胰 島素水平。這種作用不是由血液胰島素水平的變化導(dǎo)致的(圖70。接下來， 我們^W佐菌素(STZ)-處理的胰島素缺陷小鼠注射LPS。 LPS顯著降低了 血糖濃度，該效果類似于通過胰島素注射誘導(dǎo)的效果(圖7D)。從這些數(shù)據(jù) 來看，LPS劑量依賴性地降低了J&4t水平并且不會影響胰島素分泌。此外， LPS對胰島素缺陷的I型糖尿病模型小鼠體內(nèi)的葡萄糖調(diào)節(jié)有作用。所有動 物可以自由獲得水。按學(xué)會指南進行動物管理。所有數(shù)據(jù)都表示為平均值土 SE(n-5-6)。 *代0. 05。實施例7LPA對3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收的作用。7-1: LPA對3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收的作用。按照與LPC相關(guān)實施例基^f目同的方法，測試LPA在3T3-Ll脂肪細胞 中的作用，結(jié)M圖8A和8B中示出。為研究LPA對葡萄糖吸收的作用，在存在各種濃度的標準LPA的情況下 將3T3-L1脂肪細胞培養(yǎng)不同時間。LPA刺激3T3-L1脂肪細胞中葡萄糖吸收 的時間和劑量依賴性增加。LPA對葡萄糖吸收的統(tǒng)計學(xué)顯著作用最初是在1 iaM濃度時觀察到的，最大的作用是在20 nM時(圖8A)。用20 |iM LPA 時，在用LPA培養(yǎng)10分鐘后葡萄糖吸收增加到最大(圖8B)。圖9A示出了 將6 ^Ul中生長的3T3-L1脂肪細胞在不含葡萄糖的Krebs-Ringer緩沖液中 平衡1小時，并且用LPA(0-20 yM)或胰島素(10 nM)孵育IO分鐘。在這些 處理后，按材料方法部分中所述測量["C] 2-脫氧-D-葡萄糖吸收10分鐘。圖 8B示出了用LPA(20 pM)酵育3T3-Ll脂肪細胞0-20分鐘。7-2: LPA刺激的葡萄糖吸收中的信號傳導(dǎo)機制。按照與LPC相關(guān)實施例基^目同的方法，測試LPA在3T3-Ll脂肪細胞 中的作用，結(jié)果在圖9A和9B以及圖IOA和IOB中示出。為研究LPA是否通過其受體關(guān)聯(lián)來影響葡萄糖吸收，我們4吏用了 LPA受 儲抗劑Kil6425。圖9A示出了 LPA的葡萄糖吸^'j激作用被Ki 16425的 預(yù)處理所完全抑制。接下來，我們通過使用Gai抑制劑-百日咳毒素檢測了LPA是否激活與G cc i偶聯(lián)的LPA受體。圖9B示出了 LPA通過G a i激活來刺激葡萄糖吸收。已經(jīng)有明確凈艮導(dǎo)稱胰島素通過P13-激il^賴性信號傳導(dǎo)途徑刺激葡萄 糖吸收。為研究LPA是否通過P13-激i^l賴性信號傳導(dǎo)途徑增強葡萄糖吸 收，我們檢測了 Akt(PI3-激酶的下游信號)受LPA處理的影響。圖10A示出 了 LPA刺激Akt磷酸化。該磷酸化作用被PI3-激酶抑制劑LY294002的預(yù)處 理所抑制。接下來，為檢驗LPA實際上是通過PI3-激酶信號途徑刺激葡萄 糖吸收，我們用LY294002預(yù)處理并測量3T3-L1脂肪細胞中的葡萄糖吸收。 圖IOB示出了 LPA對葡萄糖吸收的刺激依賴于PI3-激酶激活。7-3:小鼠模型中LPA的降葡萄糖作用按照與LPC相關(guān)實施例基^目同的方法，測試LPA在小鼠才莫型中的降葡 萄糖作用，結(jié)果在圖11A至11D中示出。圖11A至11B示出了小鼠模型中靜脈給藥的LPA的降葡萄糖效力。給八 周齡雄性小鼠靜脈內(nèi)注射PBS、胰島素、LPA。在給藥后(0-120分鐘)監(jiān)測血 糖。圖IIA示出了單次靜脈內(nèi)注射LPA后八周齡雄性小鼠體內(nèi)的血清胰島素 水平。LPA以劑量,性方式降低正常小鼠體內(nèi)的jMt7jc平。其他溶血磷脂 (如S1P和lpe)不降低正常小鼠體內(nèi)的jMI水平(圖11B)。這種作用不是由 血液胰島素水平的變化導(dǎo)致的(圖110 。最后，我們檢測了 LPA的降葡萄糖作用是否依賴于LPA受體激活。在 LPA給藥前，注射LPA受體抑制劑Ki 16425。圖11D示出了 LPA的降葡萄糖 作用^皮LPA受體抑制劑所抑制。從這些數(shù)據(jù)來看，LPA劑量依賴性地降低了 j&4t水平并且不會影響胰島素分泌。此外，LPA的降葡萄糖作用受LPA受體 激活的介導(dǎo)。所有動物可以自由獲得水。按學(xué)會指南進行動物管理。所有數(shù) 據(jù)都表示為平均值土SE(n-5-6)。 *代0. 05。實施例8UCN對hIRcB細胞中的IR自磷酸化的作用材料達爾伯克(氏)改良伊格爾(氏)培養(yǎng)基(DMEM)購自BioWhittaker。 胎牛血清(FBS)和馬血清(ES)購自HyClone (Logan, UT)。促皮質(zhì)素釋i文因 子(CRF)、尾加壓素(UCN)、應(yīng)激素(stresscorpin)相關(guān)肽(SRP)和應(yīng)激素 由Anygen(Kwangju, Korea)合成。磷酸-胰島素受體抗體、IRS抗體、IR抗 體和AKT抗體購自Cell Signaling Technology Inc (Beverly, MA) 。
["C〗2-脫氧-葡萄糖購自Moravek (Mercury, CA)。所有其他的化學(xué)試劑均購自 Sigma (St. Louis， MO)。所有的實驗(包括免疫印跡)最少獨立重復(fù)三次。所有示出的免疫印跡都 代表了超過三次獨立的實驗。定量的數(shù)據(jù)表示為平均值士SE。在適合的地方 使用student's t檢驗。P<0. 05的概率被認為是具有統(tǒng)計學(xué)顯著性的。圖12A示出了 CRF家族中的胰島素致敏作用比較，該比M通過用1 jLi MCRF家族和/或2 nM胰島素或者單獨用培養(yǎng)基孵育細胞1分鐘獲得的。UCN 的胰島素致敏作用以劑量(12B、 12C)和時間(12D)依賴方式增加。圖12B是 通過用2 nM胰島素和不同劑量的UCN (從2 nM到1 pM)孵育細胞1分鐘獲 得的。圖12C是通過用100 nM UCN和不同劑量的胰島素孵育細胞l分鐘獲 得的。用抗pTyr抗體通過蛋白質(zhì)印跡來評估IR的磷酸化。圖13D是通過用 100 nM UCN和/或10 nM胰島素孵育細胞O、 2、 10、 30和60分鐘獲得的， 然后用抗pIR抗體通過蛋白質(zhì)印跡來評估IR磷酸化。用Image Gauge軟件 (Fuji Film)來定量測量IR自磷酸化作用。數(shù)值為三次實驗的平均值士SE。 *代0. 05。細胞培養(yǎng)在補加10%(v/v)FBS的DMEM中培養(yǎng)hIRcB細胞。細胞在37。C下5%C02 和95%空氣的潮濕氣氛中生長。 免疫沉淀和免疫印跡按所述時間和劑量進行配體處理后，用冷PBS洗滌細胞并用含有蛋白酶 抑制劑(O. 5 mM PMSF、 1 pg/ml亮抑酶肽和5 pg/ml抑肽酶)和磷酸酶抑 制劑(30 mM NaF、 1 mM ^3丫04和30 mM Na407P2)的裂解緩沖液(50 mM HEPES pH 7. 5、 150 mM NaCl、 1% Triton X-IOO、 1 mM EDTA、 10°/。甘油)裂解。在 4'C下孵育細胞裂解產(chǎn)物1小時。離心后(14，000 xg， 15分鐘)，用5 jug 抗IR抗體和30 ja 1樹脂體積的固定蛋白A孵育等量的可溶提取物4小時。 為進行凝膠電泳，將沉淀溶于Laemmli樣品緩沖液中。樣品用SDS-PAGE分 離并轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上(Schleicher and Schuell， BA85)。用含有5% 脫脂奶粉的TTBS緩沖液(10 mM Tr is-HCl 、 pH 7. 5、 150 mM NaCl和0. 05% Tween 20)封閉。所述膜在室溫下用一抗進行3小時檢測。隨后洗滌所述免疫印跡 并在室溫下用辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗孵育1小時，用TTBS緩沖液漂洗 4次并用辣根過氧化物酶依賴型化學(xué)發(fā)光試劑(Amersham International, United Kingdom)顯影。在本實施例中，發(fā)現(xiàn)與其他家族(應(yīng)激相關(guān)肽(SRP)和應(yīng)激素(SCP))相 比，^口壓素(UCN)和促皮質(zhì)素釋放因子(CRF)加強了 IR it^達(hIRcB)細胞 中胰島素介導(dǎo)的IR磷酸化作用(圖12A) 。 UCN和CRF單獨對IR磷酸化都沒 有影響。盡管UCN和CRF都加強了胰島素介導(dǎo)的IR磷酸化，但是與CRF相 比，由于UCN與CRF受體1 (CRFR1)的高親和力使得UCN更有效力。UCN誘導(dǎo) 的對胰島素介導(dǎo)的IR磷酸化的增強以劑量(圖12B)和時間(圖12D)依賴性方 式發(fā)生。此外，如圖12C所示，低濃度胰島素中的UCN對IR磷酸化的作用 更有效力。這表明UCN特異性致敏hIRcB細胞中胰島素介導(dǎo)的IR磷酸化。實施例9UCN對C2C12肌管中葡萄糖吸收和IR磷酸化的作用。UCN增強了胰島素誘導(dǎo)的葡萄糖吸收和IR、IRS和Akt的磷酸化。用2nM UCN和/或不同的胰島素劑量(0-50 nM)孵育肌管1分鐘(插入的免疫印跡數(shù) 據(jù))。用抗pIRS和抗pAkt抗體通過蛋白質(zhì)印跡分析評估IRS和Akt的磷酸 化。葡萄糖吸收測定如下。細胞培養(yǎng)在補加10°/。(v/v)FBS的DMEM中培養(yǎng)C2C12細胞。細胞在37'C下5°/。C02 和95%空氣的潮濕氣氛中生長。為了使C2C12細胞分化，將生長培養(yǎng)基換為 補加2% (v/v) ES的DMEM，并培養(yǎng)7天。葡萄糖吸收測定法分化之后，洗滌細胞并用2ml Krebs-Ringer磷酸鹽(KRP)培養(yǎng)3小時， 所述Krebs-Ringer磷酸鹽^^有130mMNaCl、 5mMKCl、 1. 3 mM CaCl2 . 2H20、 1. 3 mM MgS04 7H20和10 mM Na2HP04 ' 7H20 (pH 7. 4 )。為測定UCN對葡萄 糖吸收的作用，按所述條件用1 ml KRP培養(yǎng)10分鐘。通過加入["C] 2-DG (1 pCi/ml)和非放射性2-DG(終濃度20 mM)的混合物來進行反應(yīng)，反應(yīng)持續(xù) 10分鐘。吸出溶液并用水預(yù)冷的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，含8 g NaCl、 0. 2 g KC1、 1.15 g Na2HP04 . 12H20和0. 2 g K線，溶于1 L H20中)快速洗滌細 胞兩次。通# 1 N NaOH中裂解細胞并進行閃爍計數(shù)來測定細^目關(guān)的放 射性。通過用細胞松弛素B(20 nM/ml)孵育細胞來測量非特異性吸收。從 總吸收中減去非特異性吸收以獲得特異性吸收的值。 免疫沉淀和免疫印跡按實施例8的方法來進行。已知IR激活在肌肉的葡萄糖吸收中起關(guān)鍵作用。UCN能夠加強胰島素介導(dǎo)的IR激活，所以它可能會調(diào)節(jié)葡萄糖吸收。為確證這一點，我們研究 了 C2C12肌管中的葡萄糖吸收和胰島素介導(dǎo)的信號。在存在UCN的情況下， 胰島素誘導(dǎo)的IR磷酸化會被增強，而且胰島素刺激的葡萄糖吸收也會顯著 升高(圖13)，但是單獨的UCN無此作用。這些結(jié)絲明UCN會加強C2C12 肌管中胰島素刺激的葡萄糖吸收，這可能是通過它對胰島素介導(dǎo)的信號途徑 的致敏作用來誘導(dǎo)的。實施例10ucn對正常小鼠和stz小鼠體內(nèi)iMt控制的作用已知UCN通過刺激HPA軸起到血糖增高劑的作用。UCN的這一體內(nèi)功能 與我們之前的體外結(jié)果(UCN涉及jMt水平的下調(diào))相左。因此，為辨清它 們之間的矛盾之處，我們給小鼠注射了不同劑量的UCN并檢測iMt水平的變 化。圖14a示出了 ucn導(dǎo)致icr小鼠體內(nèi)jMTF降。所插入的免疫印跡lt據(jù) 是關(guān)于骨骼肌中UCN導(dǎo)致的IR磷酸化。給小鼠注射(靜脈內(nèi))載體(溶于鹽水 的0.1% BSA)或UCN(0.1-100 pM)。數(shù)值為四個對照以及四只UCN處理小鼠 的平均值土S.D。圖14B示出了 UCN處理導(dǎo)致STZ小鼠體內(nèi)j&4t下降。所插 入的免疫印跡數(shù)據(jù)是關(guān)于STZ小鼠骨骼肌中UCN處理導(dǎo)致的IR磷酸化。給 小鼠注射(靜脈內(nèi))載體(溶于鹽水的0.1% BSA)、 UCN(O. 1 pM)和/或胰島素 (1 nM)。并在45分鐘內(nèi)測量血漿中的葡萄糖7jc平。數(shù)值為每組六只小鼠的 平均值士S.D。 *P<0.05。10-1:試驗動物的準備為準備正常的試驗動物，從Hyochang Science購得重20-25 g、 8周齡 的雄性癌癥研究所(ICR)小鼠，在溫度和光線受控的房間(20-22'C; 12小時 明，12小時暗的周期；在07: 00時開燈)內(nèi)將所述小鼠四只一組關(guān)在籠子里， 并且按時提供祠料并不限量地提供水。按照韓國政府關(guān)于實驗室動物使用管 理的指南進行實驗室^Mt。在體內(nèi)研究中，禁食過#,給小鼠靜脈內(nèi)注射 1%BSA鹽水或UCN，然后用葡萄糖分析儀(Model AGM-2100， Al lmedicus Inc.， Anyang， Korea)按時測量血漿葡萄糖。為準備STZ小鼠，從Hyochang Science購得重20-25 g、 8周齡的雄性 癌癥研究所(icr)小鼠。在將雄性icr小鼠禁食1天后，通過給所述動物腹 膜內(nèi)注射給予STZ (Sigma Chemical, St. Louis, M0) (75 mg/kg)來準備STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠。并且在第二天再注射一次STZ。血漿葡萄糖濃度>280 mg/dl的小鼠被認為患有I型糖尿病。所有的試驗都在注射STZ三天后進行。 10-2:小鼠骨骼組織內(nèi)IR信號傳導(dǎo)的分析在禁食過^r，給小鼠靜脈內(nèi)注射激動劑。15分鐘后，通過快速切除 比目魚肌來處死小鼠并且立即在液氮中冷凍。通#含有蛋白酶抑制劑(0. 5 mM PMSF、 1 p g/ml亮抑酶肽和5 p g/ml抑肽酶)和磷酸酶抑制劑(30 mM NaF、 1 mM Na3V04和3 0 mM Na407P2)的裂解緩沖液(5 0 mM HEPES pH 7. 5 、 15 0 mM NaC 1 、 1% Triton X-IOO、 1 mM EDTA、 10%甘油)中勻漿所i^i且織來制備裂解產(chǎn)物。 通it^ 4。C下以14， 000 rpm離心10分鐘來移除碎片。按之前所述進行免疫 沉淀和蛋白質(zhì)印跡。同預(yù)期的一樣，從IOO pM開始，單獨的UCN可以增強j&4t水平，但是 值得注意的是，單獨的0.1 pM UCN會下調(diào)血糖水平。與體外系統(tǒng)相比，血 液中存在基礎(chǔ)胰島素，所以我們認為在小鼠體內(nèi)UCN可能與基礎(chǔ)血氣脧島素 共同發(fā)揮降葡萄糖作用并且在低于皮摩爾的濃度中HPA軸不會被激活。UCN 可能會調(diào)節(jié)胰島素分泌并且以不依賴胰島素的方式下調(diào)血糖水平。因此，我 們使用了胰島素缺陷模型系統(tǒng)一一 佐菌素(STZ)處理的小鼠來研究UCN 在胰島素介導(dǎo)的生理學(xué)中的功能。如圖14B所示，單獨的UCN對jMt水平的變化沒有作用。i^明在jfa^ 水平的調(diào)節(jié)中UCN需^f^胰島素。但是，當UCN與無活性濃度的胰島素被 共同注射時，STZ小鼠體內(nèi)血糖水平顯著下降。這些結(jié)果與小鼠骨骼肌中IR 的磷酸化高度相關(guān)。UCN顯著地致敏了小鼠骨骼肌中胰島素誘導(dǎo)的IR磷酸 化。這些結(jié)果表明在體內(nèi)4>壓素也具有胰島素致敏作用。
權(quán)利要求
1.一種葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑，所述葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑包括選自溶血磷脂酰膽堿(LPC)、溶血磷脂酰絲氨酸(LPS)、溶血磷脂酸(LPA)和尾加壓素(UCN)的化合物。
2. 權(quán)利要求1的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑，其中所述LPC對葡萄糖吸收的作用可 被PKC 5的抑制劑楸毒素和顯性負性PKC 5的表達消除，并且所述作用 不依賴PI3-激H^性信號傳導(dǎo)通路。
3. 權(quán)利要求1的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑，其中所述溶血磷脂酰膽喊為肉豆蔻酰 LPC或棕櫚酰LPC。
4. 權(quán)利要求1的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑，其中4>壓素作為與胰島素聯(lián)合使用 的胰島素致敏劑。
5. —種藥物組合物，所述藥物組合物包括至少一種選自溶血磷脂酰膽堿、 溶血磷脂酰絲氨酸、溶血磷脂酸和尾加壓素的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑。
6. 權(quán)利要求5的藥物組合物，其中還包括可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。
7. 權(quán)利要求5的藥物組合物，其中還包括至少一種選自胰島素分泌增強 劑、雙胍和ot-葡糖苷酶抑制劑的化合物。
8. 權(quán)利要求5的藥物組合物，其中所述葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑與胰島素聯(lián)^f吏 用。
9. 一種用于在需要治療的哺乳動物體內(nèi)治療糖尿病或糖尿病并發(fā)癥的方 法，所述方法包括給予所述哺乳動物有效量的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑，所述 葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑選自溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰絲氨酸、溶血磷月旨 酸或 口壓素。
10. 權(quán)利要求9的方法，其中所i^t尿病為胰島素M'^lt尿病或非胰島素#^性糖尿病。
11. 權(quán)利要求10的方法，其中所iyt尿病并發(fā)癥為肥胖癥、高脂血癥、動 樂1^更化、高血壓或心臟病。
12. 權(quán)利要求11的方法，所述方法還包括對所述哺乳動物聯(lián)合給予有效量 的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑和至少一種選自胰島素分泌增強劑、雙胍和oc-葡 糖苷酶抑制劑的化合物。
13. 權(quán)利要求9的方法，其中所itvC加壓素與胰島素聯(lián)合給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及選自溶血磷脂酰衍生物和尾加壓素的葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑，以及含有所述葡萄糖吸收調(diào)節(jié)劑的藥物組合物，以及治療需要所述治療的哺乳動物的糖尿病或糖尿病并發(fā)癥的方法。
文檔編號A61K31/7032GK101217965SQ200680024782
公開日2008年7月9日 申請日期2006年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月7日
發(fā)明者徐判吉, 李承載, 李泰勳, 李秉大, 柳成浩, 芮敬武, 金宗玄, 金載允 申請人:學(xué)校法人浦項工科大學(xué)校;Posco公司