一種用于糖尿病及其并發(fā)癥的水蛭小肽有效部位藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種具有預(yù)防或治療糖尿病及其并發(fā)癥作用的水蛭小肽有效部位組 合物及其制備方法，具體地說(shuō)從水蛭、黃芪、枸杞子、山茱萸中提取的中藥有效部位組合物 及其制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病（diabetes mellitus，DM)是一種由多種原因引起糖代謝紊亂的終身性內(nèi) 分泌疾病，目前世界范同內(nèi)DM患者人數(shù)約2. 4億人，估計(jì)到2025年，將達(dá)到3. 5億人。糖 尿病引起的糖代謝紊亂，導(dǎo)致微血管病變，繼而引起一系列糖尿病并發(fā)癥，包括糖尿病視網(wǎng) 膜病變，糖尿病腎病和糖尿病足等。其中糖尿病腎病（diabetic η印hropathy，DN)和糖尿 病視網(wǎng)膜病變（diabetic ratinopathy，DR)是糖尿病常見且嚴(yán)重的并發(fā)癥。糖尿病病人一 旦發(fā)生腎病變，出現(xiàn)持續(xù)性尿蛋白，則病情逐漸發(fā)展直至腎功能衰竭，最終死亡。糖尿病視 網(wǎng)膜病變是DM最常見和嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，是DM代謝紊亂、內(nèi)分泌及血液系統(tǒng)損害在視網(wǎng) 膜上的反映，是致盲的主要原因之一。糖尿病及其并發(fā)癥正在對(duì)人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅！ 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療本病采用降糖藥和胰島素制劑，雖可使血糖迅速下降，但長(zhǎng)期應(yīng)用易產(chǎn) 生抗藥性和依賴性，特別是當(dāng)并發(fā)癥產(chǎn)生之后，單純控制血糖并不能完全阻止其病理進(jìn)程 的繼續(xù)。WHO糖尿病專家委員會(huì)指出：許多地區(qū)用中藥治療糖尿病有效，需要對(duì)這些療法進(jìn) 行有條理的研究，以確定他們治療糖尿病的機(jī)理。因此，國(guó)內(nèi)外學(xué)者都在致力于尋求高效、 安全、服用方便的糖尿病新藥。
[0003] 糖尿病屬于中醫(yī)學(xué)消渴病范疇，中醫(yī)歷代醫(yī)書記載的"消渴病"即主要指糖尿病。 首先，在《內(nèi)經(jīng)》中即有消渴病的較完整的記載，在《金匱》中已列有消渴病專篇。宋代則創(chuàng) 立了三消分治的理論，金元時(shí)期已形成燥熱與陰虛兩大學(xué)說(shuō)。明清以后又進(jìn)一步充實(shí)了氣 虛、脾腎陽(yáng)虛及痰濕的病理內(nèi)容，開拓了從肝論治的先河。近代在大量臨床研究及實(shí)驗(yàn)研究 中已取得許多成就，已確立了較為統(tǒng)一的分為陰虛火旺、氣陰兩虛、陰陽(yáng)兩虛、血瘀氣滯等 的辨證標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)的治則與方藥，藥物研究也證明了多種中藥的降糖作用，臨床上已有效 地減少了西藥降糖藥物的劑量，提高了機(jī)體對(duì)胰島素的利用率，尤其是活血化瘀法、補(bǔ)腎法 的運(yùn)用，進(jìn)一步展示了中醫(yī)藥治療糖尿病的科學(xué)性和優(yōu)越性，體會(huì)到陰虛是糖尿病發(fā)生的 關(guān)鍵，氣虛是其迀延的癥結(jié)，血瘀是其合并癥發(fā)生的重要原因，而且臨床糖尿病患者氣陰兩 虛多兼血瘀。有鑒于此，確立了益氣養(yǎng)陰、活血化瘀治療II型糖尿病氣陰兩虛證的治療大 法，通過(guò)系統(tǒng)的臨床觀察與實(shí)驗(yàn)研究，證明其治療糖尿病的良好療效，并揭示了其治療糖尿 病的機(jī)理，為中醫(yī)藥防治糖尿病提供了科學(xué)依據(jù)。
[0004] 而現(xiàn)階段的中藥復(fù)方，有效成分含量較低，服用量較大，藥效較差。而用有效成分 組方能源于中藥高于中藥，使用劑量小，有效成分可控，是一種非常理想的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種具有預(yù)防或治療糖尿病及其并發(fā)癥的水蛭小肽 有效部位組合物； 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述中藥組合物的制備方法和用途。
[0006] 本發(fā)明的第一目的：以水蛭小肽、黃芪總皂苷、枸杞子多糖和山茱萸總苷為原料， 加入適當(dāng)藥用輔料，制成相關(guān)的劑型。
[0007] 本發(fā)明藥物的組合物的原料藥的組成及配比為：水蛭小肽3~9重量份、黃芪總皂 苷1~3重量份、枸杞子總多糖10~20重量份和山茱萸總苷2~4重量份。
[0008] 本發(fā)明中藥藥物組合物優(yōu)選的組成及配比為：水蛭小肽6重量份；黃芪總皂苷2 重量份；枸杞子多糖15重量份；山茱萸總苷5重量份。
[0009] 上述水蛭小肽有效部位中總小肽的含量不低于提取物的50%，總皂苷有效部位中 總皂苷不低于提取物的30%，總多糖有效部位中總多糖不低于提取物的5%，總苷有效部位 中總苷不低于提取物的10%。
[0010] 該藥物組合物可以加入相應(yīng)輔料，制成丸劑、片劑、顆粒劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑中 的任一種。然后可以再加入其他具有預(yù)防或治療糖尿病及其并發(fā)癥的有效部位、有效成分、 化學(xué)合成品或者半合成品，然后再加入相應(yīng)輔料，制成丸劑、片劑、顆粒劑、硬膠囊劑、軟膠 囊劑中的任一種。
[0011] 本發(fā)明中藥組合物的制備方法包括以下步驟： ① 水蛭小肽的制備：取水蛭，適當(dāng)粉碎，加5~20倍量水勻漿5~15分鐘，加熱煮沸 5~30分鐘，放冷至室溫，采用鹽酸調(diào)pH至2. 0 ± 0. 1，然后加入底物量0. 5%~10%的胃蛋 白酉每，在30°C~45°C條件下酶解1~6小時(shí)，然后采用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7~10,加 入底物量〇. 5%~10%的胰蛋白酶，在45°C~55°C條件下酶解1~6小時(shí)，時(shí)時(shí)攪拌并調(diào)節(jié) pH在7~10范圍內(nèi)，酶解完畢后繼續(xù)升溫煮沸5~15分鐘，放冷，離心，收集上清液，調(diào)節(jié) pH6. 5~7. 0,加入1%~3%的活性炭，攪拌均勻，濾過(guò)，濾液用截留相對(duì)分子質(zhì)量為3kD的 中空纖維膜進(jìn)行超濾，收集透過(guò)液，再以截留相對(duì)分子質(zhì)量為150D~300D的陶瓷膜進(jìn)行納 濾，收集未透過(guò)液，減壓濃縮，干燥，得水蛭小肽；其中水蛭小肽的含量為50%~90% ; ② 黃芪總皂苷的制備：取黃芪飲片，適當(dāng)粉碎，加5~20倍量60%~80%乙醇，回流提 取1~3次，每次1~3小時(shí)，合并乙醇提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，再加水使成相對(duì)密度 為L(zhǎng) 01~L 04(20°C )的藥液，攪拌下加入氫氧化鈣調(diào)pH至10~12,用高速離心機(jī)離心 (3000~5000r/min，10~30min)得上清液，將上清液加入預(yù)先處理好的DlOl大孔吸附樹 脂柱中（D101大孔吸附樹脂量：生藥量=1:1~1:5, g/g，上樣時(shí)柱流速10~40ml/min)，流 出液棄去，先用清水洗脫至流出液近無(wú)色，繼用30%~40%乙醇洗脫至流出液呈淡黃色，以 上流出液均棄去，再以60%~80%乙醇洗脫，收集洗脫液至薄層層析檢查無(wú)黃芪甲苷斑點(diǎn)， 減壓回收乙醇，干燥，得黃芪總皂苷粗品（黃褐色），其中黃芪甲苷的含量為30%~50% ; ③ 枸杞子總多糖的制備：取枸杞子，適當(dāng)粉碎，加5~20倍量石油醚（60~90°C)回 流脫脂1~3次，每次1~3小時(shí)，直至溶液無(wú)色，過(guò)濾，濾渣揮干溶劑后，加5~20倍量 70%~90%乙醇回流1~2次，每次0. 5~1. 5小時(shí)，過(guò)濾，濾渣加5~20倍量水加熱回流 提取1~3次，每次1~3小時(shí)，過(guò)濾，濾液減壓干燥，得枸杞多糖粗品；其中枸杞多糖的含 量為5%~15% ; ④ 山茱萸總苷的制備：取山茱萸粗粉，6~10倍量水浸泡過(guò)夜，煎煮提取1~3次，每次 1~3小時(shí)，濾過(guò)，合并水提液，濃縮，加入4倍量乙醇攪勻，冷藏過(guò)夜，濾過(guò)，濾液回收乙醇， 減壓濃縮至無(wú)醇味，得山茱萸提取液，將山茱萸提取液加入預(yù)先處理好的AB-8大孔吸附樹 脂中（AB-8大孔吸附樹脂量：生藥量=1:1~1:5, g/g，上樣時(shí)柱流速10~40ml/min)流出 液棄去，先用3~5倍量蒸餾水洗脫，流出液均棄去，再以4~6倍量25%~40%乙醇洗脫， 收集洗脫液，濃縮，低溫干燥，得山茱萸總苷粗品；其中馬錢苷的含量為10%~30% ; 按照各有效部位的重量配比取上述四份有效部位，不加輔料或加入藥劑學(xué)常規(guī)輔料， 制成藥學(xué)上可以接受的劑型。
[0012] 增加：各樹脂的型號(hào)可以是DlOl大孔樹脂、D201大孔樹脂、AB-8大孔樹脂， 001X2. 5、001X7、001X 15型陽(yáng)離子交換樹脂。
[0013] 總小肽、總皂苷、總多糖、總苷含量測(cè)定方法為： 總小肽的含量測(cè)定方法為：取牛血清白蛋白對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每毫升含 0. 25mg的溶液，即得。精密量取對(duì)照品溶液0,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0ml，分別置具塞試管 中，各精密加水至I. 〇ml，再分別精密加堿性銅試液I. 0ml，搖勻，各精密加入福林酚試液 [取福林試液儲(chǔ)備液（1 - 16) ]4. 0ml，搖勻，于55°C水浴中保溫5min，取出，置冷水浴中冷 卻lOmin，迅速測(cè)定，以0管為空白，照紫外一可見分光光度法，在650nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。 以吸光度為縱坐標(biāo)，牛血清白蛋白質(zhì)量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程。精密量 取提取液lml，別置100mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 項(xiàng)下自分別精密加堿性銅試液1.0 ml起，依法測(cè)定吸光度，從回歸方程中計(jì)算多肽的含量。
[0014] 總皂苷含量測(cè)定方法為：