專利名稱：：基于肽的流感疫苗制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明一般涉及抗病毒制劑，尤其涉;s^基于肽的流感疫苗制劑。
背景技術(shù)：
：流行性感冒是常見的呼吸系統(tǒng)傳染病，其與正粘病毒(Orthomyxoviridae)科病毒有關(guān)。由于該病毒的高度變異性，通常需要每年用重新配制考慮毒林變異的疫苗進(jìn)行疫苗接種。盡管進(jìn)行重新配制，但疫苗不可能包括在特定季節(jié)中感染全世界人們的所有不同毒株。盡管目前可以獲得針對流感的有效疫苗，但由于病毒表面蛋白的抗原變異，所以必須每年對其進(jìn)行重新配制。重新配制的一個(gè)障礙是需要相對長的時(shí)間才能配制和制備足夠的疫苗劑量來應(yīng)對流感感染的季節(jié)性增加。通?？赡芤馁M(fèi)六個(gè)月以上的時(shí)間來制備疫苗；有時(shí)，一種新的或被忽略了的流感毒林在這六個(gè)月中開始盛行，從而導(dǎo)致流行病。血凝素(HA)是流感病毒的主要表面糖蛋白，并且是病毒中和抗體所針對的有效免疫原。基于相對穩(wěn)定的胞內(nèi)核蛋白和包膜相關(guān)基質(zhì)蛋白，流感病毒可分為A型和B型。病毒的亞型是基于病毒包膜中的兩種蛋白(HA和神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase,NA))，它們不斷進(jìn)行抗原變化。對于流感A型病毒，識別了HA的十五種不同亞型和NA的9種亞型(DeJong,Rimmelzwaan，G.R，F(xiàn)ouchier，R,A.M.和Osterhaus,A.D.M.E./tfwr"fl/0/7rt/e"z'諸，2000;40:218-228)。突然出現(xiàn)的新亞型(抗原轉(zhuǎn)變)引起了上個(gè)世紀(jì)的三次大流行1918(西班牙流感，H1N1)、1957(亞洲流感，H2N2)和1968(香港流感，H3N2)。最近也已產(chǎn)生了對禽流感、馬流感和人易感性的關(guān)注。HA是流感病毒的主要包膜糖蛋白，介導(dǎo)病毒侵入宿主細(xì)胞(Wiley，D.C.等，AW"m1981;289(29):373國377;Wilson,IA等，7Vfl似^1981;289，366-373;Caton等，CW/1982:417-427)。三種HA單體結(jié)合形成天然HA，所述HA單體作為病毒感染性的前提被酶切成氨基端HA1和羧基端HA2?；贖A1的三維結(jié)構(gòu)，已經(jīng)通過確定抗原變體的氨基酸變化對抗原位點(diǎn)進(jìn)行了作圖(Wiley，同上)?？乖儺愒贖A受體結(jié)合區(qū)的周圍最常見，包括抗體難以進(jìn)入的受體結(jié)合袋周圍的殘基。因此，期望闡明基于肽的方法來作為免疫療法。然而，對基于肽的亞基疫苗的主要擔(dān)心是線性肽誘導(dǎo)能識別構(gòu)象性B細(xì)胞和T細(xì)胞表位的抗體的能力。針對這些抗原位點(diǎn)的單克隆抗體可在存在確切的該序列時(shí)中和流感病毒的感染性。T和B細(xì)胞表位均可見于這些位點(diǎn)上(Atassi等，爿rfvfl/ic^/"Ex/7^7'附e/ito/A/^//c/e1989;251:49-635-6jTorresetal,/挑附wwtfA^y丄"&M，1988;19(1):49隱53)。在針對HA上抗原位點(diǎn)之一的單克隆抗體存在時(shí)，流感病毒的增殖導(dǎo)致對親代病毒中極少數(shù)逃避變體(escapevariants)的選擇(Webster等，Wra/ogj;1983;126(2):587隱99;Webster等，F(xiàn)/ra/05j1980;104(1):139-48;Yewdell等，A^"^1979;279(5710):246-8)。與這些體外數(shù)據(jù)一致，針對一種病毒林進(jìn)行了免疫并用另一種進(jìn)行感染的個(gè)體產(chǎn)生大量抗原變體。這些數(shù)據(jù)提示，針對這些表位的群體免疫性是選擇流感病毒新毒林的驅(qū)動(dòng)力。美國每年開發(fā)的疫苗制劑由食品和藥物管理局疫苗及相關(guān)生物制品顧問委員會(huì)(theDepartmentofFoodandDrugAdministrationVaccinesandtheRelatedBiologicalsAdvisoryCommittee)確定。類似地,世界衛(wèi)生組織(WHO)運(yùn)作一個(gè)全實(shí)驗(yàn)室監(jiān)控網(wǎng)，用于檢測新的流感變體(Lavanchy,1999;17:S24-S25)?；谧罱蛛x的流感病毒的抗原分析、抗原變體的傳播模式和最近接受疫苗接種個(gè)體的抗體應(yīng)答來進(jìn)行選擇。然而，由于上文所指出的疫苗制劑的延遲，很難有效且高效地生產(chǎn)足夠量的疫苗來滿足不斷變化的免疫策略需求。因此期望可以高效地提供更有效的流感疫苗制劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的是消除或減輕先前的流感疫苗制劑的至少一種缺點(diǎn)。本發(fā)明提供基于肽的流感疫苗制劑，其源于流感HA的表位。與商品疫苗相比，本發(fā)明的疫苗制劑有利地改善了動(dòng)物模型中的體液應(yīng)答。由于所述制劑中的肽變體，本發(fā)明可針對不同的流感病毒株而提供廣泛的保護(hù)。意想不到的是，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明基于肽的流感疫苗制劑(其代表流感病毒在保護(hù)性HA表位中的抗原多樣性)引發(fā)保護(hù)性免疫，它比用商品疫苗(僅基于少數(shù)流感分離物)誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫具有更廣泛的反應(yīng)性。在第一個(gè)方面中，本發(fā)明提供基于肽的抗流感制劑，其包含選自SEQIDNO:l-248中的至少一種肽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中提供了包含選自SEQIDNO:l-248的至少4種肽序列的制劑。在另一實(shí)施方案中，所述制劑可以包含選自SEQIDNO:l-64的至少兩種肽和選自SEQIDNO:133-180的至少兩種肽。所述制劑還可以包含SEQIDNO:1-64和SEQIDNO:133-180。本發(fā)明還提供包含選自SEQIDNO:185-248的至少一種肽序列的制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑可以包含以下至少兩個(gè)組中來自每一個(gè)組的至少兩種肽序列SEQIDNO:185-200;SEQIDNO:201-216;SEQIDNO:217-232或者SEQIDNO:233-248。本發(fā)明還提供包含選自SEQIDNO:65-128的至少一種肽序列的制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑可以包含以下至少兩個(gè)組中來自每一個(gè)組的至少兩種肽序列SEQIDNO:65-80;SEQIDNO:81-96;SEQIDNO:97-112或者SEQIDNO:113-128。本發(fā)明的制劑可用于制備疫苗。在所述疫苗的制備中可以應(yīng)用佐劑，如明礬或者其它替代物。所述疫苗可用于治療動(dòng)物(如人、小鼠、馬或者禽類)的流感。本發(fā)明的制劑具有針對A和B型流感的廣泛反應(yīng)性。有利地，本發(fā)明的制劑可在僅為6周的時(shí)間內(nèi)以合成方式制備。參考下文對本發(fā)明具體實(shí)施方案的描述并結(jié)合附圖之后，本發(fā)明的其它方面和特征對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將是顯而易見的。在此參考附圖描述本發(fā)明的一些實(shí)施方案，其僅用于舉例，其中圖l顯示對本發(fā)明的馬流感discosite構(gòu)建體(INFE-HA-1-V1至V4;A-D)的HPLC分析。圖2顯示對本發(fā)明的人A型流感discosite構(gòu)建體(INF-HA-1-V1至V4;A-D)的HPLC分析。圖3顯示對本發(fā)明的人和禽流感discosite構(gòu)建體(INF-HA-2-V1至V4;A-D)的HPLC分析。圖4顯示對本發(fā)明的B型流感discosite構(gòu)建體(INF-HB-1-V1至V4;A-D)的HPLC分析。圖5A-5D展示本發(fā)明的馬流感discosite構(gòu)建體(INFE-HA-1-V1至V4;圖5A-5D)的質(zhì)^普數(shù)據(jù)。圖6A-6D展示本發(fā)明的人A型流感discosite構(gòu)建體(INF-HA-1-V1至V4;圖6A-6D)的質(zhì)i普數(shù)據(jù)。圖7A-7D展示本發(fā)明的人和禽流感discosite構(gòu)建體(INF-HA-2-V1至V4;圖7A-7D)的質(zhì)鐠數(shù)據(jù)。圖8A-8D展示本發(fā)明的人B型流感discosite構(gòu)建體(INF-HB-1-V1至V4;圖8A-8D)的質(zhì)i普數(shù)據(jù)。圖9展示在免疫之后本發(fā)明疫苗對體液免疫的誘導(dǎo)。圖10顯示接種了疫苗的小鼠對H3N2攻擊的存活曲線。圖11顯示用本發(fā)明的疫苗INF-01P(INF-HA-1-V1-V4)接種后受攻擊小鼠的重量減輕百分比。圖12顯示小鼠中由INFE-01P(INFE-HA-1-V1-V4)疫苗接種謙導(dǎo)的體液免疫，以HAI效價(jià)衡量。圖13展示了在鼠疫苗研究中進(jìn)行的血細(xì)胞凝集測定的結(jié)果。圖14顯示基于表22中數(shù)據(jù)的流感疫苗ELISA測試的結(jié)果。發(fā)明詳述一般而言，本發(fā)明提供抗病毒制劑，更具體地，提供基于肽的抗流感制劑，其包含選自SEQIDNO:1-248的至少一種肽。本發(fā)明的制劑是包含一種或多種肽的混合物。所述制劑可以包含選自SEQIDNO:1-248的至少四種肽序列。在一個(gè)實(shí)例中，所述制劑可以包含選自SEQIDNO:1-64的至少兩種肽以及選自SEQIDNO:133-180的至少兩種肽。一個(gè)具體實(shí)例包含SEQIDNO:1-64和SEQIDNO:133-180。在另一具體實(shí)例中，所述制劑包含SEQIDNO:1-64。仍在另一具體實(shí)例中，所述制劑包含SEQIDNO:185-248。在另一實(shí)例中，所述制劑可以包含以下至少兩個(gè)組中來自每一組的2"種肽序列a)SEQIDNO:1-16;b)SEQIDNO:17-32;c)SEQIDNO:33-48;或者d)SEQIDNO:49-64，其中n為1-4。此外，所述制劑可包含來自a)-d)中至少兩個(gè)組a)來自SEQIDNO:133-140的2m種肽序列；b)來自SEQIDNO:141-156的2n種肽序列；c)來自SEQIDNO:157-172的2n種肽序列；或者d)來自SEQIDNO:173-180的2m種肽序列，其中m是l-3，n是l-4。本制劑可用于制備人的抗流感疫苗。本文描述的人抗流感制劑可以單獨(dú)使用或者組合使用。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明的制劑可包含選自SEQIDNO:185-248的至少一種肽序列。在一個(gè)實(shí)施例中，所述制劑可包含以下至少兩組中來自每一組的2n種肽序列a)SEQIDNO:185-200;b)SEQIDNO:201-216;c)SEQIDNO:217-232;或者d)SEQIDNO:233-248，其中n是從l至4。本制劑可用于制備馬抗流感疫苗。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明的制劑可包含選自SEQIDNO:65-128的至少一種肽序列。在一個(gè)實(shí)施例，所述制劑可包含以下至少兩組中來自每一組的2°種肽序列:a)SEQIDNO:65-80;b)SEQIDNO:81-96;c)SEQIDNO:97-112;或者d)SEQIDNO:113-128，其中n是從l至4。本制劑可用于制備禽抗流感疫苗。在肽序列不代表變異性的制劑實(shí)施例中，該制劑可包含SEQIDNO:129-132或者SEQIDNO:181-184中的至少一種。在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述制劑可以包含SEQIDNO:129-132。在另一具體實(shí)施例中，所述制劑可以包含SEQIDNO:181-184。本發(fā)明還提供疫苗，其包含含有選自SEQIDNO:1-248的至少一種肽的制劑以及可藥用稀釋劑或載體。所述疫苗還可以包含佐劑，例如可以是明礬。所述制劑可用于制備預(yù)防或者治療動(dòng)物流感的疫苗。所述動(dòng)物可以是人、鼠、馬或者禽。本發(fā)明涉及制劑在制備治療人流感的疫苗中的用途，所述制劑包含選自SEQIDNO:1-64的至少兩種肽和選自SEQIDNO:133-180的至少兩種肽。本發(fā)明還涉及制劑在制備治療馬流感的疫苗中的用途，所述制劑包含選自SEQIDNO:185-248的至少一種肽序列。本發(fā)明還涉及制劑在制備治療禽流感的疫苗中的用途，所述制劑包含選自SEQIDNO:65-128的至少一種肽序列。根據(jù)本發(fā)明制備的疫苗可用于預(yù)防或者治療流感。基于對流感血凝素(HA)蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)的分析來測定這些肽的序列，從而確定肽表位。血凝素是流感病毒的主要表面糖蛋白，并且是病毒中和抗體所針對的一種高效免疫原?；旌衔镏械木€性肽表位模擬HA蛋白表面上的非連續(xù)表位。應(yīng)用分析來自數(shù)千個(gè)人流感隔離群的HA蛋白質(zhì)抗原變異的生物信息學(xué)軟件，可以基于這些表位制備簡并性肽混合物，其代表這些表位中的HA的抗原變異。因此，本發(fā)明的流感疫苗制劑包含代表HA蛋白主要表位的肽的混合物?？梢灾苽浯砘虿淮砀鱾€(gè)肽中特定殘基的變異的疫苗。在不代表變異時(shí)，所形成的肽在本文中可稱為DiscotopeTM構(gòu)建體。不連續(xù)表位(discotope)構(gòu)建體是線性序列的合成構(gòu)建體，與組成非連續(xù)表位的一級序列節(jié)段的位置近似。在序列中構(gòu)建各個(gè)節(jié)段，以引發(fā)識別原始完整蛋白質(zhì)中非連續(xù)表位的免疫應(yīng)答。非連續(xù)表位由蛋白質(zhì)一級序列的兩個(gè)或多個(gè)區(qū)段組成，它們在正確折疊時(shí)聚在一起并與特異性抗體結(jié)合。它們在失去二級結(jié)構(gòu)時(shí)不被抗體所識別，因此不能由連續(xù)的線性肽所代表。當(dāng)根據(jù)特定病原體的不同序列而已知具有不同氨基酸的特定殘基位置上存在變異時(shí)，所述制劑包括多種肽，它們在本文中可整體稱為DiscositeTM構(gòu)建體。為了制備肽混合物，有可能使用如Torres在美國專利申請No.10/072,084中指出的方法，其通過參考并入本文。設(shè)計(jì)不連續(xù)表位/不連續(xù)位點(diǎn)(discosite)構(gòu)建體在本發(fā)明的疫苗制劑中，應(yīng)用流感血凝素來設(shè)計(jì)代表4個(gè)非連續(xù)表位的線性序列。設(shè)計(jì)了模擬HA的四個(gè)抗原位點(diǎn)上的非連續(xù)B和T細(xì)胞表位的4種肽(不連續(xù)表位構(gòu)建體)。應(yīng)用固相肽合成方法合成各個(gè)不連續(xù)表位構(gòu)建體。從GenbankTM和SwissProtein數(shù)據(jù)庫獲得200個(gè)以上人A型流感隔離群的序列，并進(jìn)行比對以研究這些表位的組成。流感疫苗制劑可以包含SEQIDNO:129-132和/或SEQIDNO:181-184的一種或多種不連續(xù)表位構(gòu)建體。設(shè)計(jì)疫苗制劑在本發(fā)明的上下文中，疫苗制劑是用于制備流感疫苗的肽混合物。所述疫苗可以包含肽混合物以及本領(lǐng)域已知的其它可包括的替代物。這些替代物可包括但不僅限于佐劑、稀釋劑和/或載體。本發(fā)明的疫苗制劑尤其適用于制備治療人、馬和/或禽流感的疫苗。然而，應(yīng)當(dāng)理解，肽序列的任何組合或者包含這些肽序列的制劑也可用于其它流感表型?？梢杂靡环N或多種肽序列的集合來制備肽疫苗，所述肽序列代表HA三維結(jié)構(gòu)中包含的表位(SEQIDNO:1-248)。所述疫苗包括一種或多種不連續(xù)表位構(gòu)建體(含有非可變氨基酸殘基的肽)或者一種或多種不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體(含有可變氨基酸殘基的肽)。本發(fā)明的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體源于這些表位之一。因此，不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體制劑包含源于含有可變殘基的表位的一種或多種肽序列?；趚個(gè)可變殘基，本發(fā)明的每種不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體代表2X種可能的肽序列。例如，具有3或4個(gè)可變殘基的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體分別代表23=8或者24=16種序列。因此，在本發(fā)明的上下文中，如本文所指的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體包括表位序列，該表位序列包含可變殘基以及來源于該殘基的一種或多種可能序列。本發(fā)明的疫苗可包含來自給定dicosite構(gòu)建體的至少兩種肽序列，其源于疫苗中所含有的至少兩種表位，在疫苗中有總共至少4種肽序列(來自SEQIDNO:1-248)。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，人流感疫苗制劑可以包含至少4種人流感-A(INF-HA-1-V1-V4)和/或4種人流感-BHA的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體序列(INF-HB-1-V1-V4)。這可以包含來自BEQIDNO:1-64的至少兩種肽和/或來自SEQIDNO:133-180的至少兩種肽?；蛘撸@可以包含以下至少兩個(gè)組中來自每一組的至少兩種肽序列SEQIDNO:1-16;SEQIDNO:17-32;SEQIDNO:33-48;或者SEQIDNO:49-64;和/或以下至少兩個(gè)組中來自每一組的至少兩種肽序列SEQIDNO:133-140;SEQIDNO:141-156;SEQIDNO:157-172;和/或SEQIDNO:173-180。馬流感疫苗的實(shí)施方案可以包含源于4種馬不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體(麗E陽HA-1-V1國V4;SEQIDNO:185-248)的至少一種肽序列。在一些實(shí)施方案中，所述馬疫苗制劑可以包含以下至少兩個(gè)組中來自每一組的至少兩種肽序列SEQIDNO:185-200;SEQIDNO:201-216;SEQIDNO:217-232;和/或SEQIDNO:233-248。禽流感疫苗的實(shí)施方案可以包含4種禽不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體(INF-HA-2國V1-V4;SEQIDNO:65-128)的一種或多種肽序列。在一些實(shí)施方案中，所述禽疫苗制劑可以包含以下至少兩個(gè)組中來自每一組的至少兩種肽序列SEQIDNO:65-80;SEQIDNO:81-96;SEQIDNO:97-112;和/或SEQIDNO:113-128。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，根據(jù)需要可以添加或可以不添加其他序列。用于本發(fā)明疫苗制劑的肽序列根據(jù)不連續(xù)位點(diǎn)(表1-16)或者不連續(xù)表位(表17-18)構(gòu)建體來分組。表l-4列出A型流感(人HA-1)表位序列的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體。表5-8列出A型流感(禽HA-2)表位序列的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體。表9-12列出B型流感(人HB-1)表位序列的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體。表13-16列出馬流感(馬HA-1)表位序列的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體。在所述表格列出的每個(gè)不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體中，可變殘基在下文顯示為構(gòu)建體中相應(yīng)的殘基。表l:INF-HA-1-Vl的不連續(xù)位點(diǎn)枸建體<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表2:INF-HA-1-V2的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表3:INF-HA-1-V3的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體DVLFSVESPNNKNKDPIDTCD(SE<3IDNO:33------K—V----------<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表4:INF-HA-1-V4的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體YVSVSTSRIASRPKVRGQSGR(SEQIDNQ:49)一T一-S——G——W-------<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表5:INF-HA-2-Vl的A型禽流感不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>1.藥物洗脫支架(Drug-elutingstent)[0262J再狹窄(之前狹窄之后擴(kuò)張的外周或冠狀血管再閉合)以很高的比率發(fā)生(例如占這些手術(shù)的20-50%),并取決于許多臨床和形態(tài)變量。再狹窄可在血管成形手術(shù)不久后開始，但是通常在約6個(gè)月結(jié)束時(shí)停止。0263已經(jīng)研發(fā)出應(yīng)對血管內(nèi)支架再狹窄問題的最新技術(shù)。支架是冠狀和外周血管持久性移植(擴(kuò)張)時(shí)的常用裝置。這些支架的目的是為患病(狹窄)血管提供長期性的"骨架(scaffolding)"或支持。從理論上看，如果血管從內(nèi)部得到支持，它將不會(huì)閉合或再狹窄。[0264已知的支架設(shè)計(jì)包括但不限于單絲線盤支架(monofilamentwirecoilstent)(參見例如美國專利4，969,458);焊接金屬籠(weldedmetalcage)(參見例如美國專利4,733,665和4，776,337),具有環(huán)繞四周所形成的軸向縫隙的薄壁金屬圓筒(thin-walledmetalcylinder)(參見例如美國專利4，733,665、4,739,762、4,776,337等)。已知的用于制造支架的材料包括但不限于聚合物、有機(jī)纖維和生物相容性金屬(例如不銹鋼、金、銀、鉭、鈦)和形狀記憶合金(例如鎳鈦金屬互化物)。[0265為了進(jìn)一步防止再狹窄，支架可以用一種或多種藥物包裹和/或浸滲，例如在抑制細(xì)胞增殖相關(guān)再狹窄的控釋劑型。大多數(shù)常用的這些"藥物洗脫"支架被設(shè)計(jì)成用來遞送各種癌癥藥物(細(xì)胞毒素)。0266j無^r如何，由于本文所述活性劑在減輕炎癥反應(yīng)、減少和/或清除氧化脂質(zhì)和/或其它氧化中間體、抑制巨噬細(xì)胞趨化活性等的活性，所以非常適于防止再狹窄。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明包括具有一種或多種本文所述活性劑包被在表面和/或保留支架表面的腔隙或微腔隙內(nèi)的支架。02671在某些實(shí)施方案中，活性劑包含在生物相容性骨架(例如生物相容性聚合物例如氨基曱酸乙酯、硅氧烷等)內(nèi)。合適的生物相<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>INF-HB-1-V2/4PKDNFHSDNKTQMKNLYGDSN(SEQIDNO:144)2453.61INF-HB-1-V2/5PNDNFHSDNKTQMERIjYGDSN(SEQ工DNO:145)2482.56INF-HB-1-V2/6PNDNFHSDNKTQMENLYGDSN(SEQIDNO:146)2440.48INF-HB-1-V2/7PNDNFHSDNKTQMKRLYGDSN(SEQIDNO:147)2481.62INF-HB-1-V2/8PNDNFHSDNKTQMKNLYGDSN(SEQIDNO:148)2439.54INF-HB-1-V2/9RKDNFHSDNKTQMERLYGDSN(SEQIDNO:149)2555.7INF-HB-1-V2/10RKDNFHSDNKTQMENLYGDSN(SEQIDNO:150)2S13.62INF-HB-l-V2/11RKDNFHSDNKTQMKRLYGDSN(SEQIDNO:151)2554.76INF-HB-1-V2/12RKDNFHSDNKTQMKNLYGDSN(SEQIDNO:152)2512.68INF-HB-1-V2/13RNDNFHSDNKTQMERLYGDSN(SEQIDNO:153)2S41.63INF-HB-1-V2/14RNDNFHSDNKTQME肌YGDSN(SEQIDNO:154)2499.55INF-HB-1-V2/15RNDNFHSDNKTQMKRLjYGDSN(SEQIDNO:155)2S40.69INF-HB-1-V2/16RNDNFHSDNKTQMKNLYGDSN(SEQIDNO:156)2498.61裊l1:INF-HB-:L-V3的B型人流感不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體RGKLCPNCFNCTDIICSEGEDLPLIGE(SEQIDNO:157)--------L---—Li—TK---------肽名稱序列MWINF-HB-1-V3/1RGKLCPNCFNCTDIICSEGEDLPLIGE(SEQIDNO:157)2940INF-HB-1-V3/2RGKLCPNCFNCTDIICSKGEDIjPIjIGE(SEQIDNO:158)2939INF-HB-1-V3/3RGKLCPNCFNCTDIICTEGEDLPLIGE(SE<2工DNO:159)2954INF-HB-1-V3/4RGKLCPNCFNCTDIICTKGEDIiPLIGE(SEQIDNO:160)2953INF-HB-1-V3/5RGKLCPNCFNCTDIjICSEGEDIjPrjIGE(SEQIDNO:161)2940INF-HB-1-V3/6RGKICPNCFNCTDIjICSKGEDIjPIjIGE(SEQIDNO:162)2939INF-HB-1-V3/7RGKLCPNCFNCTDLICTEGEDLPLIGE(SEQIDNO:163)2954INF-HB-1-V3/8RGKLCPNCFNCTDLICTKGEDIjPLIGE(SEQIDNO:164)2953INF-HB-1-V3/9RGKIjCPNCIjNCTD工ICSEGEDIjPIjIGE(SEQIDNO:165)2906INF-HB-1-V3/10RGKLjCPNCIjNCTDIICSKGEDIjPIjIGE(SEQIDNO:166)2905INF-HB-1-V3/11RGKLCPNCIiNCTDIICTEGEDLPLjIGE(SEQIDNO:167)2920INF-HB-1-V3/12RGKLCPNCLNCTDIICTKGEDLPLIGE(SEQIDNO:168)2919INF-HB-1-V3/13RGKIjCPNCIjNCTDIjICSEGEDIjPIjIGE(SEQIDNO:169)2906INF-HB-1-V3/14RGKLCPNCIjNCTDIjICSKGEDIjPrjIGE(SEQIDNO:170)2905INF-HB-1-V3/15RGKLCPNCLNCTDLICTEGEDLPLIGE(SEQIDNO:171)2920INF-HB-1-V3/16RGKICPNCLNCTDIjICTKGEDIjPIjIGE(SEQIDNO:172)2919裊12:INF-HB-1-V4的B型人流感不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體KFTSSANG工GGFPNQTEDEGLKQSGR(SEQIDNO:173)-------------D----G—P----肽名稱序列MWINF-HB-1-V4/1KFTSSANGIGGFPNQTEDEGLKQSGR(SEQIDNO:173)2725.88INF-HB-1-V4/2KFTSSANGIGGFPNQTEDEGLPQSGR(SEQIDNO:174)2694.82INF-HB-1-V4/3KFTSSANGIGGFPNQTEDGGIiKQSGR(SEQIDNO:175)2653.82工NF-HB-1-V4/4KFTSSANGIGGFPNQTEDGGLPQSGR(SEQIDNO:176)2622.76INF-HB-1-V4/5KFTSSANGIGGFPDQTEDEGLKQSGR(SEQIDNO:177)2726.87INF-HB-1-V4/6KFTSSANGIGGFPDQTEDEGLiPQSGR(SEQIDNO:178)2695.81INF-HB-1-V4/7KFTSSANGIGGFPDQTEDGGKKQSGR(SEQIDNO:179)2654.8INF-HB-1-V4/8KFTSSANGIGGFPDQTEDGGLPQSGR(SEQIDNO:180〉2623.75表13:INFE-HA-1-V1的馬流感不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體SACKRRSASSNAAFPQMNKTM(SEQIDNO:185)-------------Y——T-SY肽名稱序列MWINFE-HA-1-Vl/1SACKRRSASSNAAFPQMNKTM(SEQIDNO:185)2286.62工NFE-HA-1-V1/2SACKRRSASSNAAFPQMNKTY(SEQIDNO:186)2318.6INFE-HA-1-V1/3SACKRRSASSNAAFPQMNKSM(SEQIDNO:187)2272.6INFE-HA-1-V1/4SACKRRSASSNAAFPQMNKSY(SEQIDNO:188)2304.57INFE-HA-1-V1/5SACKRRSASSNAAFPQMTKTM(SEQ工DNO:189)2273.62INFE-HA-1-V1/6SACKRRSASSNAAFPQMTKTY(SEQIDNO:190)2305.6INFE-HA-1-V1/7SACKRRSASSNAAFPQMTKSM(SEQ工DNO:191)2259*6INFE-HA-1-Vl/8SACKRRSASSNAAFPQMTKSY(SEQIDNO:192)2291.57INFE-HA-1-V1/9SACKRRSASSNAAYPQMNKTM(SEQIDNO:193)2302.62INFE-HA-1-V1/10SACKRRSASSNAAYPQMNKTY(SEQIDNO:194)2334.6INFE-HA-1-Vl/11SACKRRSASSNAAYPQMNKSM(SEQIDNO:195)2288.6INFE-HA-1-VI/12SACKRRSASSNAAYPQMNKSY(SEQ工DNO:196)2320.57INFE-HA-1-Vl/13SACKRRSASSNAAYPQMTKTM(SEQ工DNO:197)2289.62INFE-HA-1-VI/14SACKRRSASSNAAYPQMTKTY(SEQIDNO:198)2321.6INFE-HA-1-V1/15SACKRRSASSNAAYPQMTKSM(SEQIDNO:199)2275.6INFE-HA-1-V1/16SACKRRSASSNAAYPQMTKSY(SEQIDNO:200)2307.57表14:INFE-HA-1-V2的馬流感不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體SSTDNAIHHSSSNQEQTKLYVQE(SEQIDNO:201)-N-------P——T-------S-肽名稱序列MWINFE-HA-1-V2/1SSTDNAIHHSSSNQEQTKLYVQE(SEQIDNO201)2603.67INFE-HA-1-V2/2SSTDNAIHHSSSNQEQTKLYVSE(SEQIDNO202)2562.62INFE-HA-1-V2/3SSTDNAIHHSSSNTEQTKLYVQE(SEQIDNO203)2576.64INFE-HA-1-V2/4SSTDNA工HHSSSNTEQTKLYVSE(SEQIDNO:204)2535，59INFE-HA-1-V2/5SSTDNAIHHPSSNQEQTKLYVQE(SEQ工DNO:205)2613.71INFE-HA-1-V2/6SSTDNAIHHPSSNQEQTKLYVSE(SEQIDNO:206)2572.66INFE-HA-1-V2/7SSTDNAIHHPSSNTEQTKXYVQE(SEQ工DNO:207)2586，68INFE-HA-1-V2/8SSTDNAIHHPSSNTEQTKLYVSE(SEQIDNO:208)2545.63INFE-HA-1-V2/9SNTDNAIHHSSSNQEQTKLYVQE(SEQIDNO:209)2630.69INFE-HA-1-V2/10SNTDNAIHHSSSNQEQTKLYVSE(SEQIDNO:210)2589.64INFE-HA-1-V2/11SNTDNAIHHSSSNTEQTKLYVQE(SEQIDNO:211)2603.67INFE-HA-1-V2/12SNTDNAIHHSSSNTEQTKLYVSE(SEQIDNO:212)2562.62INFE-HA-1-V2/13SNTDNAIHHPSSNQEQTKLYVQE(SEQIDNO:213)2640，73INFE-HA-1-V2/14SNTDNAIHHPSSNQEQTKLYVSE(SEQIDNO:214〉2599.68INFE-HA-1-V2/15SNTDNAIHHPSSNTEQTKLYVQE(SEQIDNO:215)2613.71INFE-HA-1-V2/16SNTDNAIHHPSSNTEQTKLYVSE(SEQIDNO:216)2572.66表15:INFE-HA-1-V3的馬流感不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體DQFQEESPNNRNFDPDDNCE(SEQIDNO:217)——L-F——T——P------肽名稱序列MWINFE-HA-1-V3/1DQFQEESPNNRNFDPDDNCE(SEQIDNO217)2413.36INFE-HA-1-V3/2DQFQEESPNNRNFPPDDNCE(SEQIDNO218)2395.39INFE-HA-1-V3/3DQFQEESPNTRNFDPDDNCE(SEQIDNO219)2400.36INFE-HA-1-V3/4DQFQEESPNTRNFPPDDNCE(SEQIDNO220)2382.39INFE-HA-1-V3/5DQFQEFSPNNRNF"DPDDNCE(SEQIDNO221)2431.42INFE-HA-1-V3/6DQFQEFSPNNRNFPPDDNCE(SEQIDNO222)2413.45INFE-HA-1-V3/7DQFQEFSPNTRNFDPDDNCE(SEQIDNO223)2418.42INFE-HA-1-V3/8DQFQEFSPNTRNFPPDDNCE(SEQIDNO224)2400.45INFE-HA-1-V3/9DQFLEESPNNRNFDPDDNCE(SEQIDNO225)2398，39INFE-HA-1-V3/10DQFLEESPNNRNFPPDDNCE(SEQIDNO226)2380.42INFE-HA-1-V3/11DQFLEESPNTRNFDPDDNCE(SEQIDNO227)2385.39INFE-HA-1-V3/12DQFLEESPNTRNFPPDDNCE(SEQIDNO228)2367.42INFE-HA-1-V3/13DQFLEFSPNNRNFDPDDNCE(SEQIDNO229)2416.45INFE-HA-1-V3/14DQFLEFSPNNRNFPPDDNCE(SEQIDNO230)2398.48INFE-HA-l-V3/15DQFLEFSPNTRNFDPDDNCE(SEQIDNO231)2403.45INFE-HA-1-V3/16DQFQEFSPNTRNFPPDDNCE(SEQIDNO232)2385.48表l6:INFE-HA-l-V4的馬流感不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體RITVSTSRPGARPWVRGQSGR(SEQIDNO:233)-----S-----<2—N-----<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表17和18列舉了不連續(xù)表位構(gòu)建體(分別為A型和B型流感)，可用于制備本發(fā)明的疫苗。表17:A型流感的不連續(xù)表位構(gòu)建體<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表18:B型流感的不連續(xù)表位構(gòu)建體<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>肽合成應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)固相肽化學(xué)方法合成肽。應(yīng)用9-藥甲氧羰基(Fmoc)化學(xué)方法，在Pioneer自動(dòng)肽合成儀上應(yīng)用固相肽合成(SPPS)來合成所述肽，其中如所述使用預(yù)裝的由Fmoc保護(hù)的NovaSynTGT樹脂(NovaBiochem)。期望在給定位置存在變異性時(shí)，將兩種氨基酸的混合物置于該位置上。在合成期間，在任何位置期望存在變異性時(shí)即重復(fù)進(jìn)行該操作。在合成期間，用二甲基甲酰胺(DMF)中2-(1H-苯并三哇-l-基)-l，l，3，3-四曱基脲四氟硼酸酯(TBTU)和N-羥基苯并三唑(HOBt)的1M溶液和DMF中二異丙基乙胺(DIPEA)的1M溶液來偶聯(lián)氨基酸，而用DMF中20%的派咬來去封閉氨基酸。使偶聯(lián)在室溫下進(jìn)行l(wèi)小時(shí)。在最后一個(gè)氨基酸被偶聯(lián)后，從合成儀中取出樹脂，并在燒結(jié)玻璃漏斗中用DMF、用2-丙醇和用二氯亞甲,基(dichloromethylene，DCM)清洗幾次，并在高度真空下干燥。通過加入含有TFA/水/苯酚/苯甲硫醚/EDT/TIS[82:5:5:5:2:l的溶液來對肽混合物進(jìn)行切割和去保護(hù)。樹脂在室溫下孵育4小時(shí)。隨后在減壓條件下，將切割混合物過濾至含有IO倍體積冷醚的瓶中。樹脂也用TFA清洗兩次至同樣的醚溶液中。在冰箱中孵育30分鐘以進(jìn)一步促進(jìn)沉淀之后，樣品以1,000xg離心5分鐘，并去除醚。該萃取過程重復(fù)3次。在最后一次醚萃取之后，在氮?dú)庵姓舭l(fā)殘余的有機(jī)溶劑，將肽混合物重新溶解在水中，并使用高效液相層析(HPLC)進(jìn)行純化。應(yīng)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器去除過剩的溶劑，最后經(jīng)凍干成為干粉。對所有的不連續(xù)表位構(gòu)建體進(jìn)行質(zhì)鐠(MS)和氨基酸分析，以確保區(qū)具有正確的肽內(nèi)含物。圖1-4展示了來自本發(fā)明不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體的示例性HPLC數(shù)據(jù)。每條HPLC曲線對應(yīng)于特定的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體制劑，其含有各個(gè)不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體中的肽混合物。圖1A-1D分別對應(yīng)于不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體INFE-HA謹(jǐn)1隱V1至V4(SEQIDNO:185-248)。圖2A-2D分別對應(yīng)于不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體INF-HA-1-V1至V4(SEQIDNO:1-64)。圖3A-3D分別對應(yīng)于不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體INF-HA-2-V1至V4(SEQIDNO:65-128)。圖4A-4D分別對應(yīng)于不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體INF-HB-1-V1至V4(SEQIDNO:133-180)。圖5-8展示了來自本發(fā)明不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體的MS數(shù)據(jù)。與HPLC曲線一樣，每條MS曲線對應(yīng)于特定的不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體制劑，其含有各個(gè)不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體中的肽混合物。圖5A-5D分別對應(yīng)于不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體INFE-HA-1-V1至V4(SEQIDNO:185-248)。圖6A-6D分別對應(yīng)于不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體INF-HA-1-V1至V4(SEQIDNO:1-64)。圖7A-7D分別對應(yīng)于不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體INF-HA-2-V1至V4(SEQIDNO:65-128)。圖8A-8D分別對應(yīng)于不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體INF-HB-1-V1至V4(SEQIDNO:133-180)。實(shí)施例才艮據(jù)本發(fā)明制備了兩種示例性疫苗INF-01P(INF-HA-1-V1-V4)和INFE-01P(INFE-HA-V1-V4)?；诎从贏型流感表位并如表1-4(SEQIDNO:1-64)和表13-16(SEQIDNO:185-248)中所列的肽序列的制劑來制備疫苗，總結(jié)于下文表19和20。應(yīng)用鼠模型測試所述疫苗a)以確定添加佐劑是否增強(qiáng)針對攻擊的免疫性；b)以在鼠模型中與商品疫苗相比測定由候選疫苗誘導(dǎo)的體液應(yīng)答；和c)以評估所述疫苗針對使用不同流感病毒林的流感攻擊所引發(fā)的保護(hù)范圍。疫苗接種方案在尾巴的根部對小鼠組進(jìn)行皮下接種;接受商品疫苗的小鼠進(jìn)行肌內(nèi)免疫(如推薦)。相似地以三周的間隔對小鼠加強(qiáng)免疫兩次。在最后一次免疫之后兩周，用致死劑量的H3N2攻擊小鼠。在攻擊后，每日監(jiān)測小鼠的體重和感染體征。佐劑以下佐劑與疫苗組合^f吏用以加強(qiáng)免疫應(yīng)答:Ribi(Cedarlane，1:1的Ribi:疫苗)、明礬(Sigma,等體積的500ng/ml和疫苗)和Montanide(Seppic，1:1比例的montanide:疫苗)。在本實(shí)施例中，應(yīng)用明礬作為佐劑，然而可以應(yīng)用任何適合的佐劑。實(shí)施例1在本實(shí)施例中，用INF-01P疫苗加明礬、Ribi或Montanide，或者用商品疫苗(2004-2005季)免疫B6小鼠。在病毒攻擊之前一天獲取接種過疫苗的小鼠的血清。用致病性A/HK/l/68-MA20c病毒攻擊小鼠，并在隨后實(shí)施三周的后續(xù)攻擊。INF-01P疫苗是基于如表19中所示的4種人流感序列不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體制劑。表19:INF-01P流感疫苗制劑工NF-HA-1匿V1(SEQIDNO:1)YACKRGGKSSGSSYPVIjNVSY----H------------S-TM(SEQIDNO1一16)INF-HA-1-V2(SEQ工DNO:17)KKGSVHHPSTITEGTSLYVNA-S-------------T—QQ-(SEQIDNO17-32)INF-HA-1-V3(SEQIDNO:33)DVLFSVESPNNKNKDPIDTCD------K_v-----ES-----(SEQIDNO33一48)工NF-HA-1-V4(SEQIDNO-49)YVSVSTSR工ASRPKVRGQSGR——T--S——G——W-------(SEQIDNO49一64〉圖9顯示由INF-01P疫苗接種所誘導(dǎo)的體液免疫，通過HAI效價(jià)來衡量。如本實(shí)施例所示，與用INF-01P加Ribi或者INF-01P加Montanide免疫的小鼠相比，以及與當(dāng)前的流感疫苗相比，用INF-01P加明礬的疫苗免疫的小鼠具有提高的體液免疫。圖10顯示經(jīng)INF-01P疫苗接種的小鼠針對H3N2攻擊的存活曲線。在此實(shí)施例中，與INF-01P加Ribi或者INF-OIP加Montanide相比，用INF-OIP加明礬的疫苗免疫的小鼠受到更好的保護(hù)并且針對攻擊有更好的存活率。圖11展示了用INF-OIP免疫的小鼠經(jīng)攻擊后的體重減輕百分比。在本實(shí)施例所中，用INF-OIP加明礬免疫的小鼠與用INF-OIP加Ribi或者INF-OIP加Montanide免疫的小鼠相比，前者在抗體重減輕方面受到更多的保護(hù)。實(shí)施例2用INFE-01P(馬流感)疫苗加明夙或者商品疫苗(2004-2005季)免疫B6小鼠。測試小鼠血清針對幾種流感毒抹(H3N2A/香港/l/68g、HINlA/FM/1/47、H5N1A/香港/213/2003、B/Mass/3/66和HINlA/NewCaledonia/20/1999)的HAI活性。在第一次疫苗接種后獲取血清。INFE-01P疫苗是基于如表20所示的4種馬流感序列不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體制劑表20:INFE-OIP馬流感疫苗制劑<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>圖12展示了用INFE-01P免疫的小鼠中的體液免疫，通過HAI效價(jià)來衡量。如圖示，與用商品疫苗或者僅用佐劑(對照)接種的小鼠相比，在用此示例性馬疫苗制劑免疫的小鼠中誘導(dǎo)出了針對幾種流感病毒毒株的體液免疫。實(shí)施例3血細(xì)胞凝集反應(yīng)(HAI)測定在小鼠中評價(jià)個(gè)體或者組合的不連續(xù)表位構(gòu)建體的免疫原性。用四種不連續(xù)表位構(gòu)建體一起免疫的小鼠發(fā)育出能夠抑制病毒的血細(xì)胞凝集反應(yīng)活性的抗體?；诹鞲械牟贿B續(xù)表位構(gòu)建體顯示出成功地模擬了非連續(xù)表位，因?yàn)橐l(fā)了抑制由流感病毒引起的血細(xì)胞凝集的抗體。應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的HAI測定來測量對針對HA的功能性相關(guān)抗體的誘導(dǎo)。應(yīng)用多種不同的流感毒林測試候選疫苗物誘導(dǎo)的HAI效價(jià)，從而確定該疫苗制劑誘導(dǎo)的免疫范圍。圖13展示了鼠疫苗研究中進(jìn)行的血細(xì)胞凝集測定的結(jié)果。每組疫苗接受不同的疫苗制劑或者磷酸緩沖鹽水(陰性對照)。與病毒(H3亞型流感)一起孵育時(shí)，血將發(fā)生血細(xì)胞凝集(云霧狀)；當(dāng)凝集被保護(hù)或抑制時(shí)，RBC保留在沉淀中(暗圓)。這些結(jié)果顯示了VBI候選疫苗顯示的血細(xì)胞凝集抑制強(qiáng)度(與已許可的商品流感疫苗相比)。注意每種VBI候選疫苗與佐劑的組合均顯示與商品疫苗相同或更高的血細(xì)胞凝集抑制(HI)(可高至1/40-1/80)。含明礬佐劑的disocosite構(gòu)建體免疫原(第12行)甚至在最高為1/320的稀釋度時(shí)也顯示可檢測的HI。表21:不同處理的倒數(shù)效價(jià)免疫原效價(jià)倒數(shù)未接種疫苗的對照10商品疫苗80不連續(xù)位點(diǎn)免疫原+Montanide80不連續(xù)表位免疫原+Ribi160不連續(xù)位點(diǎn)免疫原+明礬320圖14顯示流感疫苗ELISA測試的結(jié)果。這是基于表22中所示數(shù)據(jù)。表22:流感疫苗ELISA測試結(jié)果G71.4160.9120.5710.4210.2510.135G81.41.1770.7530.4530.2710.16G91.6861.3550.7950.4770.2910.193G101.210.950.6130.475D.2960.176G"2.822.291.4670.770.4550.236G122.S592.9442.6992.1741.1460.559G130.6940.5470.3430.2890.2530.16Gl=不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體IFN-1(SEQIDNO:l-16)+Ribi;G2=不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體IFN-2(SEQIDNO:17-32)+Ribi;G3=不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體IFN國3261/501/1001/300G11.5381.2950.921G21.9651.3190.818G31.5591.3210.771G41.4271.240.854G51.2581.130.667G61.2980.9260.6231/27001/81000.3580.1340.4550,1450,3670,1210.4460.1490.3350.1410,3290.13556983Co9655545(SEQIDNO:33-48)+Ribi;G4=不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體IFN-4(SEQIDNO:49-64)+Ribi;G5=不連續(xù)表位構(gòu)建體1(SEQIDNO:129)+Ribi;G6=不連續(xù)表位構(gòu)建體2(SEQIDNO:130)+Ribi;G7=不連續(xù)表位構(gòu)建體3(SEQIDNO:131)+Ribi;G8=不連續(xù)表位構(gòu)建體4(SEQIDNO:132)+Ribi;G9=對照(僅有Ribi);G10=不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體IFN-l-4+Ribi;Gil=不連續(xù)表位構(gòu)建體1-4+Ribi;G12=不連續(xù)位點(diǎn)構(gòu)建體IFN-1-4+Montanide;和G13=商品疫苗。綜上所述，這些數(shù)據(jù)提示了從根本上新穎的開發(fā)流感疫苗的方法，這可引起比當(dāng)前疫苗更快的疫苗生產(chǎn)和更廣泛的保護(hù)。該方法對開發(fā)流行性流感疫苗可能非常有價(jià)值。本發(fā)明上述的實(shí)施方案旨在僅用于舉例。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對具體的實(shí)施方案作出改變、改良和變化，而不背離本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍僅由所附的權(quán)利要求進(jìn)行限定。所有參考文獻(xiàn)均通過參考并入本文。權(quán)利要求1.基于肽的抗流感制劑，其包含選自SEQIDNO1-248的至少一種肽。2.權(quán)利要求l的制劑，其包含選自SEQIDNO:1-248的至少四種肽序列。3.權(quán)利要求l的制劑，其包含選自SEQIDNO:1-64的至少兩種肽和選自SEQIDNO:133-180的至少兩種肽。4.權(quán)利要求3的制劑，其包含SEQIDNO:1-64和SEQIDNO:133-180。5.權(quán)利要求l的制劑，其包含選自SEQIDNO:185-248的至少一種肽序列。6.權(quán)利要求1的制劑，其包含選自SEQIDNO:65-128的至少一種肽序列。7.權(quán)利要求l的制劑，其包含以下至少兩組中來自每一組的2n種肽序列a)SEQIDNO:1-16;b)SEQIDNO:17-32;c)SEQIDNO:33-48;或者d)SEQIDNO:49-64,其中n為1-4。8.權(quán)利要求l的制劑，其包含來自a)-d)中的至少兩組a)來自SEQIDNO:133-140的2""種肽序列；b)來自SEQIDNO:141-156的2n種肽序列；c)來自SEQIDNO:157-172的2n種肽序列；或者d)來自SEQIDNO:173-180的2"*種肽序列,其中m為l至3，n為l至4。9.權(quán)利要求l的制劑，其包含以下至少兩組中來自每一組的2n種肽序列a)SEQIDNO:185-200;b)SEQIDNO:201-216;c)SEQIDNO:217-232;或者d)SEQIDNO:233-248,其中n為1至4。10.權(quán)利要求l的制劑，其包含以下至少兩組中來自每一組的2n種肽序列a)SEQIDNO:65-80;b)SEQIDNO:81-96;c)SEQIDNO:97112;或者d)SEQIDNO:113-128，其中n是從l至4。11.權(quán)利要求l的制劑，其包含SEQIDNO:129-132或者SEQIDNO:181-184中至少其一。12.權(quán)利要求11的制劑，其包含SEQIDNO:129-132。13.權(quán)利要求11的制劑，其包含SEQIDNO:181-184。14.權(quán)利要求1的制劑，其包含SEQIDNO:1-64。15.權(quán)利要求l的制劑，其包含SEQIDNO:185-248。16.疫苗，其包含權(quán)利要求l的制劑以及可藥用稀釋劑或栽體。17.權(quán)利要求16的疫苗，還包含佐劑。18.權(quán)利要求17的疫苗，其中所述佐劑為明礬。19.權(quán)利要求l的制劑在制備用于在有此需要的動(dòng)物中預(yù)防或治療流感的疫苗中的用途。20.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中所述動(dòng)物為人、鼠、馬或者禽。21.權(quán)利要求3的制劑在制備用于治療人流感的疫苗中的用途。22.權(quán)利要求5的制劑在制備用于治療馬流感的疫苗中的用途。23.權(quán)利要求6的制劑在制備用于治療禽流感的疫苗中的用途。24.權(quán)利要求16的疫苗用于預(yù)防或者治療流感的用途。25.包含權(quán)利要求3的制劑的疫苗。26.權(quán)利要求25的疫苗，還包含佐劑。27.權(quán)利要求26的疫苗，其中所述佐劑是明礬。28.在有此需要的動(dòng)物中預(yù)防或治療流感的方法，包括對所述動(dòng)物施用有效量的權(quán)利要求16的疫苗。全文摘要本發(fā)明公開了針對A和B型流感的基于肽的抗流感制劑。所述肽來源于基于流感的表位。所述制劑是基于可以配制的肽混合物，從而在特定殘基上存在變異性。所述制劑可用于制備預(yù)防人、禽、鼠或者馬動(dòng)物流感的疫苗。文檔編號A61K39/145GK101227919SQ200680023950公開日2008年7月23日申請日期2006年6月1日優(yōu)先權(quán)日2005年6月1日發(fā)明者若澤·V·托里斯申請人:變異生物技術(shù)公司