專利名稱：眼素肽注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療人體近視眼的藥物制劑—眼素肽注射液及其制備方法。
背景技術(shù)：
在科學(xué)技術(shù)高速發(fā)展的今天，近視眼的研究遲遲不前，我們認(rèn)為關(guān)鍵是在于病因?qū)W懸而未決，原因不明，難以施治。重點在研究方法上出了問題。病因病機是診斷之本，治則之根，辨證施治之源。
西方醫(yī)學(xué)和國內(nèi)的西醫(yī)均將病因?qū)W限制在遺傳問題上了，如單純近視眼是多因子遺傳而高度近視是常染色體隱性遺傳，《近視的遺傳控制論》阻止近視研究的發(fā)展。學(xué)術(shù)狀態(tài)一直停留在實驗研究階段，盡管認(rèn)識不斷深入，成果甚微，理論概念仍就模糊不清，目前大醫(yī)院只能配鏡矯正視力或手術(shù)矯治。對于學(xué)生，戴上近視鏡也控制不住學(xué)生的病情發(fā)展，隨年級不斷增長，近視度數(shù)也不斷加大，對于學(xué)生，手術(shù)矯治又不是適應(yīng)癥，近視眼治療攻克前景依然渺茫。
而目前在我國學(xué)生眼病—近視眼的醫(yī)療問題，對于新藥的發(fā)現(xiàn)與發(fā)明，不但要看醫(yī)療質(zhì)量，還要看接受醫(yī)療人群的經(jīng)濟能力。中國目前還是發(fā)展中國家，人民群眾、工薪階層大，普遍收入少，是溫飽型的特點，讓廣大人民群眾能接受的新藥必須考慮造價低、品質(zhì)高的產(chǎn)品，才能是廣大學(xué)生全面接受治療的藥物。
中醫(yī)理論是整體醫(yī)學(xué)的先導(dǎo)，整體觀是中醫(yī)觀人識病的理論的精髓，從古至今依然認(rèn)為外因與內(nèi)因相結(jié)合認(rèn)證，先天不足，后天補。據(jù)考證，我國近視記載在2000年前的《史記》中有“視如望羊”記載。公元610年，隋·巢元方《諸病源候論·目病諸候》中記有“目不能遠視，勞傷腑臟，肝氣不足”。公元625年唐·孫思邈的《防治眼病16條》中有10條與近視有關(guān)。明末·傅仁宇《審視瑤函》指出“肝經(jīng)不足，腎經(jīng)病”、“稟受生成近覷”、“久視傷睛成近覷”等等都說明“近視病因病機”是環(huán)境影響和先天不足交叉干擾所致?，F(xiàn)今我國26年的學(xué)生體質(zhì)、健康調(diào)研發(fā)現(xiàn)原發(fā)性近視均發(fā)生于兒童和青少年的生長發(fā)育期，成人后很少發(fā)病。這完全與人體眼結(jié)構(gòu)正視化傾向的生理特點有關(guān)，原發(fā)性近視有62.5％沒有近視家族史；只有37.5％有近視家族史；雜合子發(fā)病占17.5％；高度近視人數(shù)占總?cè)丝跀?shù)的1-5％。因此我們在人類基因組的大環(huán)境影響下進行“環(huán)境與基因”、“基因與環(huán)境”的深層次研究中建立了《環(huán)境基因組學(xué)》，完全否定《絕對遺傳控制論》。判定中國學(xué)生近視是“可治人群”。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種治療效果好、治療費用低、可廣泛普及應(yīng)用的治療近視眼的制劑及其制備方法。
本發(fā)明提出的技術(shù)方案為一種眼素肽注射液，其特征在于采用紫睛以循環(huán)回流提取方法和中藥小容量水針劑工藝流程提純活性物質(zhì)制成滅菌水溶液。
一種眼素肽注射液的制備方法，其特征在于原藥紫睛取出，去除外包燈芯草，用水洗凈，稱重60g，采用循環(huán)回流提純方法，將紫睛原藥放絞刀中絞成漿液狀，加注射用水100ml浸泡1小時，在水浴上浸煮五次，每次浸煮30分鐘，過濾后，除渣，過濾液濃縮致1/2，在攪拌中逐漸加入95％乙醇100毫升，放置，過濾、濾液回收乙醇。同法用95％乙醇反復(fù)處理，致無沉淀為止，過濾回收乙醇，加苯甲醇、吐溫80，采用中藥小容量水針劑工藝流程，在加入100ml注射用水，攪勻、過濾、分裝、滅菌、樣品檢測、裝瓶、封口、備用，肌肉注射或穴位注射用。
本發(fā)明所述的紫睛為脊椎動物，?？啤⒆详柦】蹬ｕr全眼球，或馬、驢、騾健康鮮全眼球。
本發(fā)明所述的紫陽健康牛鮮全眼球簡稱紫睛，產(chǎn)地陜西紫陽、安徽石臺、湖北恩施等地。
本發(fā)明所述的紫睛四季均可采集，宰牛時將鮮活眼球摘出，洗去血漬，去凈周圍脂類雜物，鹽漬后用燈芯草包裹、陰干，低溫冷凍保鮮儲藏，忌用火烘、日曬、風(fēng)吹以防破裂變質(zhì)，色鮮完整無破裂者為佳品，屬眼科用藥。
根據(jù)中醫(yī)藥名稱傳統(tǒng)命名法，用產(chǎn)地和藥用部位對新藥規(guī)范命名，紫陽牛眼，簡稱紫睛。產(chǎn)地陜西紫陽、安徽石臺、湖北恩施等地。
紫睛為脊椎動物，?？?、紫陽健康牛鮮全眼球，或馬、驢、騾健康鮮全眼球。
紫睛為球形或不規(guī)則圓球形，直徑2-3厘米，重量60-80g，色鮮，完整，眼球前六分之一有半圓形胞瞼、瞼裂、睫毛，眼裂內(nèi)有黑睛、疃神、白膜，后六分之一體壁較軟，柔韌、表面呈乳白色，光滑有彈性，氣微膻，有咸味。
紫睛四季均可采集，宰牛時將鮮活眼球摘出，洗去血漬，去凈周圍脂類雜物，鹽漬后用燈芯草包裹、陰干，低溫冷凍保鮮儲藏。忌用火烘、日曬、風(fēng)吹以防破裂變質(zhì)，色鮮完整無破裂者為佳品。屬眼科用藥。
紫睛性味歸經(jīng)甘平、咸、微寒；心、肝、腎、脾。
紫睛藥物功能具有補益臟氣、滋養(yǎng)營血、平肝熄風(fēng)、清肝明目、活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、近視變癥、通達復(fù)明。
本發(fā)明紫睛藥劑劑型-眼素肽注射液注射劑應(yīng)當(dāng)符合《中國藥典》2000年版二部附錄1B的規(guī)定[適用范圍]各類各期近視、發(fā)育性眼病、遠視、散光、斜視、弱視、眼疲勞、眼外傷、近視并發(fā)癥、視神經(jīng)萎縮、非化膿性角膜炎、紅膜睫狀體炎、波動體混濁、中心性視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、近視性青光眼、近視性白內(nèi)障等近視變證，紫睛為近視各癥治療配方的主味藥。
本發(fā)明積極效果可以通過以下測定數(shù)據(jù)及臨床結(jié)論得到說明。
一、本發(fā)明紫睛的含量測定方法1.測定設(shè)備(1)SB--01原子吸收光譜儀AAS.SOLAAR-M6 Tbermo jarrellashco.(USA)(2)SB--23液相色譜儀HPLC.LC一10A shimadzn(JAPAN)(3)SB--24電感耦合等離子體貿(mào)漕儀ICP-MSX7 Tbermo jarrellashco.(USA)(4)SB--31日立8350氨基酸自動分析儀2.測定標(biāo)準(zhǔn)(1)GB/T5009.13-2003 (2)GB/T5009.14-2003 (3)GB/T5009.82-2003(4)GB/T5009.84-2003 (5)GB/T5009.86-2003 (6)GB/T5009.90-2003(7)GB/T5009.91-2003 (8)GB/T5009.92-2003 (9)GB/T5009.93-2003(10)GB/T5009.123-2003(11)GB/T5009.124-20033.測定結(jié)果一、本品為陜西紫陽牛眼(簡稱—紫睛)，紫睛鮮品單味新藥計量認(rèn)證檢測結(jié)果如下提供1、北京譜尼理化分析測試中心《檢驗報告》檢測紫睛(1)微量元素1)鈣(Ca)269.5mg/kg2)鐵(Fe)45.8mg/kg3)銅(Cu)3.60mg/kg4)鉻(Cr)1.30mg/kg 5)錳(Mn)＜0.002mg/kg 6)鎂(Mg)67.1mg/kg7)鈉(Na)7.56×10mg/kg 8)鉀(K)391.9mg/kg9)鋅(Zn)5.81mg/kg10)硒(Se)0.020mg/kg(2)氨基酸1)天門冬氨酸(Asn)1.12g/100g 2)蘇氨酸 (Thr)0.41g/100g3)絲氨酸(Ser)0.65g/100g 4)谷氨酸 (Glu)1.80g/100g5)甘氨酸(Gly)3.24g/100g 6)丙氨酸 (Ala)1.24g/100g7)纈氨酸(Val)0.41g/100g 8)蛋氨酸 (Met)0.19g/100g9)異亮氨酸 (Ile)0.39g/100g 10)亮氨酸 (Leu)0.73g/100g11)酪氨酸 (Tyr)0.31g/100g 12)苯丙氨酸(Phe)0.52g/100g13)賴氨酸 (Lys)0.72g/100g 14)組氨酸 (His)0.20g/100g
15)精氨酸(Arg)1.34g/100g 16)脯氨酸(Pro)1.75g/100g17)色氨酸(Trp)0.19g/100g 18)胱氨酸(Cys)0.16g/100g19)氨(An) 0.22g/100g 20)氨基酸總和 15.59g/100g(3)維生素1)維生素A 1.85×10mg/100g2)維生素B1 2.16×10mg/100g3)維生素B2 7.13×10mg/100g4)維生素B120.84μg/100g5)維生素E 1.68×10mg/100g二、提供2、北京譜尼理化分析測試中心《檢驗報告》檢測眼素肽注射液檢驗項目(1)微量元素硒(Se)0.020μg/g 鈣(Ca)9.2μg/g 鋅(Zn)0.047μg/g銅(Cu)0.023μg/g 鉻(Cr)0.021μg/g錳(Mn)0.042μg/g(2)維生素維生素B10.14μg/g維生素B20.20μg/g維生素B120.0015g/g(3)氨基酸蘇氨酸0.019mg/g 谷氨酸0.243mg/g甘氨酸0.101mg/g丙氨酸0.098mg/g 纈氨酸0.039mg/g亮氨酸0.044mg/g苯丙氨酸0.027mg/g賴氨酸0.030mg/g三、提供3、北京譜尼理化分析測試中心《檢驗報告》檢測鮮牛眼球檢驗項目(1)微量元素鈣(Ca)120.6μg/g 鋅(Zn)4.3μg/g 銅(Cu)1.0μg/g鐵(Fe)24.4μg/g 鉀(K)717.8μg/g鎂(Mg)46.5μg/g鈉(Na)2337.2μg/g錳(Mn)0.45μg/g鎳(Ni)5.9μg/g鉻(Cr)1.9μg/g(2)氨基酸天門冬氨酸0.80g/100g 蘇氨酸(Thr)0.28g/100g絲氨酸0.48g/100g谷氨酸(Gln)1.27g/100g甘氨酸(Gly)1.62g/100g丙氨酸(Ala)0.73g/100g纈氨酸(Val)0.45g/100g蛋氨酸(Met)0.15g/100g異亮氨酸(Ile)0.31g/100g亮氨酸(Len)0.58g/100g酪氨酸(Tyr)0.31g/100g 苯丙氨酸(Phe)0.41g/100g賴氨酸(Lys)0.40g/100g氨(An)0.12g/100g 組氨酸(His)0.16g/100g精氨酸(Arg)0.74g/100g脯氨酸(Pro)0.97g/100g色氨酸(Trp)0.16g/100g
胱氨酸(Cys)0.08g/100g氨基酸總和10.02g/100g注明附檢驗報告計量認(rèn)證(2002)量認(rèn)(京)字(Z0407)(3)維生素維生素A51.9μg/g維生素B120.25μg/g 粗脂肪1.40g/100g注明附檢驗報告計量認(rèn)證(2002)量認(rèn)(京)字(Z0407)[藥品鑒別]四、眼素肽注射液的無機成分一微量元素治療近視眼的生理及藥理作用分析1.微量元素的藥理分析中藥成分與藥效接軌分析藥物作用，這是一種以分子藥物學(xué)、生理學(xué)、病理學(xué)、細(xì)胞組織學(xué)的一個創(chuàng)新。微量元素是相對宏觀常量元素而言的人體細(xì)胞功能的物質(zhì)基礎(chǔ)，微量元素雖然只為人體重量的0.05％，但與人體的生理功能關(guān)系密切，經(jīng)實驗證明，研究生長發(fā)育期的兒童、青少年近視眼的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸過程都與微量元素密切相關(guān)，如硒、鋅、鉻、銅、錳、鈣的缺乏相關(guān)，所以在防治上必須注意微量元素的藥物成分，以紫睛中微量元素明顯高于其它產(chǎn)地牛眼中的硒為例分析如下(1)硒是促進眼內(nèi)多種代謝活動物質(zhì)基礎(chǔ)，成人體內(nèi)含硒總量為14-21mg，以肝、胰、腎含量較多。硒是人眼中不可缺少的生理功能物質(zhì)硒在人體中主要以有機硒化合物形式存在有兩種一是含硒氨基酸，另一種是含硒蛋白質(zhì)。硒化氨基酸主要是硒化胱氨酸(Se-Cys)和硒代蛋氨酸(Se-Met)；含硒蛋白質(zhì)中最主要的是谷胱甘肽過氧化物酶(HSH-Px)。硒以兩種形式在于蛋白質(zhì)中，一種離解因素，另一種是特定位點發(fā)揮。
①、硒“視敏度”的基礎(chǔ)物質(zhì)直接參與眼中光感受器的功能，參與光子轉(zhuǎn)換成電信號的能量轉(zhuǎn)換過程，從而保證視力正常功能，是視敏度的基礎(chǔ)物質(zhì)。鷹眼“視敏度”高就是因為含硒量高，膺眼視網(wǎng)膜中含硒700-800微克，正常人眼含7微克，近視眼發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸過程中視網(wǎng)膜硒量不斷減少，以致造成失明。經(jīng)實驗報告提示近視眼病理與微量元素密切相關(guān)。
②、硒促進眼內(nèi)多種代謝活動的基礎(chǔ)物質(zhì)硒代半胱氨酸是多種酶輔基的必需成分，特別是谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)是對抗體內(nèi)氧化過程產(chǎn)生的過氧化氨對細(xì)胞的破壞作用。是保證細(xì)胞內(nèi)代謝功能正常運行重要的物質(zhì)。硒對α酮戊二酸脫氫酶系有明顯激活作用。促進輔酶A、輔酶Q的生物合成，故與三羧酸循環(huán)和呼吸鏈的電子傳遞有關(guān)。三羧酸循環(huán)是物質(zhì)代謝樞紐、是糖、肪肪、氨基酸三大營養(yǎng)物質(zhì)分解的最后共同通道，是三大物質(zhì)氨化分解獲得能量最多的階段，直接影響視力傳導(dǎo)功能，具有很重要的眼生理作用。
③、硒具有抗細(xì)胞衰老，阻止眼結(jié)構(gòu)的退行病變自由基是人類細(xì)胞衰老的主要原因之一，其主要機制是脂質(zhì)過氧化，即在氧存在下，自由基是誘發(fā)劑，可誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)外多種生化成分過氧化，使細(xì)胞膜、細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和功能的損傷，引起生理、生化反應(yīng)紊亂，表現(xiàn)出退行病變。因此，凡能消除自由基或抗氧化物，即可阻止抗衰老功能。硒正是通過抗氧化和清除自由基，減少或延遲脂褐素的形成，從而達到抗細(xì)胞衰老和凋亡的目地。在眼結(jié)構(gòu)中，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)是抗過氧化的重要的酶，其主要功能是阻止過氧化物和自由基的形成，而硒則是GSH-Px的重要組成部分，每個酶分子中有4個硒原子。含有硒的GSH-Px具有極強的抗氧化作用，能使過氧化物(ROOH)或H2O2還原成無毒的醇和水，正是由于含硒的GSH-Px能崔化H2O2還原，使活性氧減少，才使得氧化不飽和脂肪酸以及脂類的機會減少，自由基的產(chǎn)生才不會過量，維持細(xì)胞正常旺盛的生理代謝功能，達到抗細(xì)胞衰老的目的。
④、硒在眼結(jié)構(gòu)中對組織細(xì)胞修復(fù)作用硒是眼代謝中肽和酶的主要成分，具有抗氧化清除自由基的作用，硒的抗氧化的功能物質(zhì)是谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的主要成分，硒代半胱氨酸為該酶提供活性中心的必須集團，谷胱甘肽過氧化物酶的重要成分，催化還原型谷胱甘肽變成氧化型谷胱甘肽，利用谷胱甘肽(GSH)使有毒性的過氧化物還原為無害的羥基化合物，使氧化物分解、清除自由基，而保護細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能，阻止退行病變。對阻止近視眼的進展，促進修復(fù)起重要作用，修復(fù)分子損傷部位。硒是眼肌的正常成分，在缺硒時會使眼肌肉攣痙和萎縮，肌細(xì)胞致密性變，脂類增加，鈣質(zhì)沉著，致成肌力退變，硒能加速退變的結(jié)構(gòu)細(xì)胞修復(fù)，對睫狀肌細(xì)胞具有保護作用，明顯抑制眼肌非酶促脂質(zhì)過氧化，穩(wěn)定變性區(qū)域內(nèi)細(xì)胞和亞細(xì)胞膜減輕肌損傷、縮小變性細(xì)胞范圍，因此達到對退行病的眼組織細(xì)胞，達到阻止退變和起到修復(fù)的目的。
⑤、硒的抗炎作用硒是抗氧化劑也是抗炎劑，硒在抗氧化過程中特別是GPx可減少過氧化氫脂質(zhì)和磷脂過氧化氫，從而能減少自由基及活性氧類的集聚。在環(huán)氧化酶和脂氧合酶途徑中，GPx可以減少氫氧化物的中間產(chǎn)物，從而抑制引起炎癥的前列環(huán)素和白三烯的產(chǎn)生。另外GPx還能通過除去過氧化氫和減少超氧化物的產(chǎn)生而調(diào)節(jié)呼吸爆發(fā)。與氧化反應(yīng)增加和炎癥有關(guān)的疾病，都受到硒水平的影響。實驗證明利用兩個細(xì)菌培養(yǎng)基中菌落(金黃色葡萄球菌和大腸桿菌)滴入含硒高的自然淚液中提純物即是純的“溶菌酶”滴至菌落3小時后菌落溶解消失。在這次實驗中發(fā)現(xiàn)用人眼淚液中提純一種“溶菌酶”，成分即是谷胱甘肽過氧化物酶含量較高溶液，眼淚中的溶菌酶和其他溶菌酶比較形態(tài)較小，非?；钴S，可以吸附到細(xì)菌細(xì)胞壁的夾縫里，“溶菌酶”的“酶鉗”直接鉗住細(xì)菌糖蛋白中兩個糖環(huán)的氧，從而降低鍵能，使糖鍵很快破裂，于是細(xì)菌死亡而溶解達到抗炎目的。谷胱甘肽過氧化物酶不但具有抗氧化特性，還有抗菌消炎的作用。
⑥、硒與免疫功能無論從流行病學(xué)研究，還是動物實驗都已證明硒對近視眼的發(fā)生、發(fā)展都有著重要的關(guān)系。硒對生物體液免疫功能的影響，也日益引起人們的重視。此已證實在人類胚胎發(fā)育的早期硒已成為必需元素，它除了作為GSH-Px的成分，在清除自由基、保護細(xì)胞膜、核酸、蛋白質(zhì)的正常結(jié)構(gòu)與功能外，還能拮抗重金屬(汞、鉛、砷、鎘、鉈)的毒性，具有解毒作用。據(jù)實驗證明利用人外周血淋巴細(xì)胞與10-9～10-6M的硒一起培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)硒能促進干擾素的產(chǎn)生，并且在體外可以增加r-干擾素的活性，增強人NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。我們也發(fā)現(xiàn)在亞硒酸鈉存在下，ConA誘導(dǎo)的鼠脾細(xì)胞分泌1L-2活性增強非常顯著，為對照組的2～3倍；經(jīng)硒預(yù)處理可自發(fā)分泌1L-2的產(chǎn)生。硒還能顯著增加巨噬細(xì)胞的分泌1L-1在LPS存在的條件下，加入亞硒酸納的1L-1其活性在不同的稀釋條件下的顯著高于對照組。人外周淋巴細(xì)胞及小鼠脾細(xì)胞經(jīng)低濃度的硒預(yù)處理后PHA和ConA誘導(dǎo)1L-Z活性水平明顯升高；并發(fā)現(xiàn)亞硒酸鈉濃度為3×10-7M時，其促進作用最強，1L-2活性水平為對照組的2倍。
實驗證明硒還能增加免疫球蛋白的分泌，增加白細(xì)胞吞噬和殺菌能力以及使脾臟粘附細(xì)胞的抗原提高能力，雖然亞硒酸鈉本身無直接活化巨噬細(xì)胞的作用，也不能促使淋巴細(xì)胞產(chǎn)生巨噬細(xì)胞激活因子(MAF)，但與MAF有協(xié)同激活巨噬細(xì)胞而增強抗癌活性，同時能除低巨噬細(xì)胞對淋巴細(xì)胞的抑制作用。我們從硒對淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞毒細(xì)胞(LICC)調(diào)節(jié)的研究中，發(fā)現(xiàn)硒可活化腹腔巨噬細(xì)胞，其產(chǎn)生的細(xì)胞毒分化因子(CCDF)可與1L-2協(xié)同激活LICC的活性；同時還發(fā)現(xiàn)應(yīng)用體內(nèi)能活化巨噬細(xì)胞并能促進其吞噬功能的硒劑量在體外實驗時無顯著的促LICC的細(xì)胞毒活性作用，而高劑量的硒對LICC有可逆性的抑制作用。
在進行硒對人NK細(xì)胞活性的體外影響及其機制的研究后得出如下結(jié)論1)濃度為100-500ng/ml的亞硒酸鈉可以明顯增強NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性；2)效靶比值愈高，增強作用愈顯著；3)硒并不損傷靶細(xì)胞膜，也未見激活外周血單個核細(xì)胞釋放出更多的自然殺傷細(xì)胞毒因子(NKCF)。認(rèn)為硒可能是通過激活NK細(xì)胞和靶細(xì)胞膜表面的某些結(jié)構(gòu)促進兩者結(jié)合，從而增強NK殺傷活性。此外也觀察到硒在體可以擴大重組r-干擾素(HnINF-r)對NK細(xì)胞的增殖作用。微量元素對機體免疫具有顯著促進作用。
五、中藥的微量元素研究微量元素研究是穿插在藥材、加工制劑、臨床應(yīng)用等各方面的研究項目。過去中藥有效成份研究大多偏重于有機物，而對其中無機物的研究較少。80年代以來，隨著人們對微量元素作用認(rèn)識上的提高，中藥的微量元素研究也迅速展開，主要表現(xiàn)在下列幾方面①單味藥微量元素測定如紫睛的成分測量時發(fā)現(xiàn)成分中含有鋅、硒、銅、鉻、錳、鈣等多種微量元素和鈉、鉀、鎂等常量元素，決定它在治療中的地位。又如何首烏的含鐵量測定高于其它的微量元素，人參的微量元素測定中，還發(fā)現(xiàn)含有對人體有害的鎘、銻、鉍、鉛等有害物質(zhì)，因此長期服用要注意適度。
②同一種中藥不同產(chǎn)地的微量元素研究如紫睛必須是紫陽牛眼含量有治療價值，其他地區(qū)牛眼的含量極低的不能入藥治療疾病。又如天麻中銣和錳的含量最高，但不同產(chǎn)地、含微量元素的量不同。特別是銣、錳、鉆、鋰、鉬等，認(rèn)為此可作為評價天麻質(zhì)量的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，兼評價藥味質(zhì)量。見紫睛不同產(chǎn)地含量元素分析表不同產(chǎn)地鮮牛眼球微量元素含量對比表 注紫陽地區(qū)牛眼明顯高于上海地區(qū)牛眼的含量，而對眼功能起干攏作用的錳倒低于上海，為我們研究近視眼治療對藥源采集起到提示作用。
③與臨床有關(guān)的功效應(yīng)用研究如有人用原子吸收光譜法對當(dāng)歸等40種調(diào)經(jīng)藥中鋅、銅、鐵的含量進行測定表明巴戟天、當(dāng)歸等含鐵高；黃精等含鋅高；五味子等含銅高。提示了中藥補腎、養(yǎng)血、活血、補氣藥的物質(zhì)基礎(chǔ)以及鋅、銅、鐵與人體內(nèi)分泌功能之間的關(guān)系密切。
④同種中藥不同部位的微量元素研究如當(dāng)歸的身、頭、尾，臨床功用不同，其微量元素也不同。有人用能量色散X射線分析法，分別測定了當(dāng)歸頭、身、尾中的多種金屬含量，發(fā)現(xiàn)秦當(dāng)歸頭中鈣、銅、錳含量最高，為歸身或歸尾的1.5-6.8倍；歸尾中鉀、鐵含量最高，為歸頭或歸身的1.5-2倍。川當(dāng)歸也如此。紫陽牛體中的各器官含微量元素均較高，但是只有紫陽牛眼含量適合含治療人眼近視眼的各種有機化學(xué)成分。
⑤栽培與野生包括人工合成與天然藥物之間微量元素的研究。如野生動物與訓(xùn)養(yǎng)動物，野生植物與栽培植物之間所含微量元素存在差異。大部分元素含量與產(chǎn)地土壤中元素含量(特別是活性部分)成正相益性。所以，可以考慮通過微量元素的補給措施來提高人工栽培或人工飼養(yǎng)的質(zhì)量。(微量元素鋅、銅、鉻、鈣、錳等詳見近視基礎(chǔ)研究與應(yīng)用研究紫睛、眼素肽、紫睛組方、中藥新藥項目總結(jié)報告書)六、紫睛的有機成分氨基酸、多肽、蛋白、酶在近視修復(fù)中的藥理作用分析1.氨基酸與蛋白質(zhì)氨基酸組成蛋白質(zhì)的基本單位人類攝食蛋白質(zhì)的最終目標(biāo)，是取得機體所需要的各種氨基酸。
2.構(gòu)成蛋白質(zhì)的第一步是每個氨基酸必須與下一個氨基酸相連，在一個氨基酸的氨基和另一個氨基酸的羧基間間形成一種稱做肽鍵(peptide bond)的化學(xué)鍵。側(cè)鏈從碳骨架中伸出，決定蛋白質(zhì)特定的性質(zhì)。
3.一切蛋白質(zhì)都是因氨基酸組成的，而氨基酸可分解組成肽和酶，與微量元素結(jié)合可形成微量元素代氨基酸或蛋白質(zhì)，組成特殊的蛋白質(zhì)，完成生命活動中的特殊功能，因此蛋白質(zhì)和一切生命活動總是連在一起的，可以說沒有蛋白質(zhì)及其相聯(lián)的核糖核酸，就沒有生命的存在。照目前所知，人體必需六大類營養(yǎng)物質(zhì)即蛋白質(zhì)、脂類、碳水化物、維生素、礦物質(zhì)及水。其中至少包括40種以上的營養(yǎng)素，每一種都不能缺乏，每一種都重要，但是在六大類營養(yǎng)物質(zhì)中，起著特殊而又中心性作用的是蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)的功能眾多，在此只能闡述一些代表性的部分，不過也可以說明蛋白質(zhì)在體內(nèi)作用的多樣性，獨特性和重要性。蛋白質(zhì)被稱為生命的首要物質(zhì)，其主要的作用①機體及機體一切細(xì)胞的基本構(gòu)成物質(zhì)。
②構(gòu)成機體差不多所有的生命活性物質(zhì)，包括酶類、激素類、抗體及免疫物質(zhì)類，以及形成機體的滲透壓，引發(fā)機體的各種活動及氨基酸的特殊作用蛋氨酸可供甲基形成膽堿、乙酸膽堿。如色氨酸是尼克酸和5-釋色胺的前體物；蛋氨酸可供甲基形成膽堿、乙酸膽堿。甘氨酸可是形成葉林、嘌呤、嘧啶的重要成分等等。
③蛋白質(zhì)是體內(nèi)很多重要的代謝物質(zhì)、營養(yǎng)素的載體，例如多種脂類、維生素、礦物質(zhì)與微量元素都需要蛋白質(zhì)，或?qū)Ｒ恍缘鞍踪|(zhì)攜帶和運轉(zhuǎn)。
④人體內(nèi)數(shù)以千計的各種各類蛋白質(zhì)由不同的氨基酸組成，這是六大營養(yǎng)物質(zhì)中特有的，是生命活動的需求物質(zhì)。
⑤支持機體生長發(fā)育和組織更新蛋白質(zhì)是所有的生命細(xì)胞和體液的重要成份，是構(gòu)成機體的肌肉、內(nèi)臟和內(nèi)分泌系統(tǒng)的主要成分，是機體生長發(fā)育和組織修復(fù)更新的物質(zhì)基礎(chǔ)。新生組織蛋白質(zhì)的合成需要氨基酸的連續(xù)供應(yīng)。這些心組織可位于胚胎中，正在發(fā)育的幼兒、兒童和青少年中燒傷、出血或術(shù)后需要補充新鮮血液中，傷口愈合的疤組織中或是新生的頭發(fā)和指甲中。更不為人注意的是我們每個人每時每刻體內(nèi)新陳代謝過程中的蛋白質(zhì)的作用。紅血細(xì)胞的壽命只有3-4個月，到一定時間就會被骨髓產(chǎn)生的新細(xì)胞所代替。消化倒閉的細(xì)胞只能存活3天，他們在不停的脫落和更新。皮膚細(xì)胞會死亡脫落，而新的細(xì)胞由從下面生成。幾乎所有的細(xì)胞都要經(jīng)歷這種生成、生存和死亡的過程。細(xì)胞活動中，自身的蛋白質(zhì)葉在不斷的被合成和分解。食物中的氨基酸可以支持所有的這些機體生長和組織構(gòu)件維護更新的過程。
⑥合成酶、激素和其他化合物
酶是細(xì)胞中作重要的蛋白質(zhì)之一。單個細(xì)胞中就有成千上萬的酶，每一個都是一種催化劑，可使某個特定的化學(xué)反應(yīng)順利進行。
酶是催化劑可使本可以發(fā)生但進行速度又很慢的反應(yīng)速度加快。酶可使兩個化合物A和B處于合適的位置，從而使兩者之間特別容易發(fā)生反應(yīng)。化合物A和B被吸收到酶的活性部位并安置在使反映最容易發(fā)生的最佳位置處。生成新的化合物AB后離開。
單個酶分子可以在一秒鐘內(nèi)完成幾百次類似的合成反映，有一些酶可將化合物分解為兩個或更多的產(chǎn)物或?qū)⒁粋€化合物的原子進行重排生成另外一個化合物。體內(nèi)由很多激素(hormone)是信號分子，其中有一些來自于氨基酸。也有一些激素來自于脂類。多種腺體根據(jù)體內(nèi)環(huán)境的變化分泌相應(yīng)的激素，然后激素誘導(dǎo)必要的反映以使環(huán)境恢復(fù)正常。甲狀腺激素是由氨基酸構(gòu)成的激素，用于調(diào)節(jié)機體代謝。胰島素和胰高血糖素是一對作用相反的激素，用于維持血液中葡萄糖的水平。體內(nèi)還有很多其他的激素在參與調(diào)節(jié)機體中各種同樣重要的功能。有多少氨基酸按照一定原則連接形成人體的胰島素，以及某些側(cè)鏈?zhǔn)侨绾位ハ辔笾行纬删哂姓９δ艿囊葝u素分子的。
除了作為合成蛋白質(zhì)的原料外，氨基酸本身在體內(nèi)也有作用。例如，酪氨酸是化學(xué)信使腎上腺素和去腎上腺素的組成部分，這些信使可以傳遞全身各處的神經(jīng)信號。身體還使用酪氨酸合成黑色素，黑色素是皮膚、頭發(fā)和眼睛顏色的來源。酪氨酸也可以轉(zhuǎn)化成甲狀腺素以調(diào)節(jié)機體的代謝速率。色氨酸是神經(jīng)遞質(zhì)血清素和維生素?zé)熕岬暮铣稍稀?br> ⑦合成抗體在生物體所有種類的蛋白質(zhì)中，抗體(antibodies)最能夠說明蛋白質(zhì)的生物特異性?？贵w能夠識別屬于自身的蛋白質(zhì)和侵入人體的外源微粒(通常為蛋白質(zhì))，而且只會與后者發(fā)生作用。外源蛋白質(zhì)可能是細(xì)菌、病毒或毒素的組成部分，或是食物中引起過敏的某種成分。機體識別出入侵的蛋白質(zhì)，就會產(chǎn)生專門用來抑制這種蛋白質(zhì)的抗體。
每一種抗體只能用來摧毀一種特定的入侵者。一種抗體能夠有效抵御某種流感病毒，而對感染了另一種流感病的病人來說則會毫無效果。一旦機體產(chǎn)生某種特定的抗體，就會對此產(chǎn)生記憶性。下次同樣的入侵者來犯時，他就可以更為迅速的進行抵抗。換句話說，即人體對該入侵者產(chǎn)生了免疫力。這種分子記憶就是免疫接種的原理，免疫接種即給人們注射死亡的或失活的微生物或其產(chǎn)物來激活人體的免疫防御系統(tǒng)。有些免疫力是終生的，而對于其他的一些比如破傷風(fēng)，則需要一定時期接種一次。
⑧提供能量氨基酸的各種功能只有蛋白質(zhì)能夠?qū)崿F(xiàn)，蛋白質(zhì)在必要的時候也能夠提供能量。人體時刻離不開能量，一次獲得能量是最為首要的。
1)當(dāng)氨基酸被分解產(chǎn)生能量時，氨基將被除去，用于別的用途或被肝臟吸收轉(zhuǎn)化為尿素(urea)，運送到腎臟以尿的形式排除。剩下的部分與糖和脂肪一樣，都是由碳?xì)浜脱踅M成，可以被用來合成糖和脂肪或者與氨基酸的碳架在人體內(nèi)可能轉(zhuǎn)化生糖氨基酸，及而轉(zhuǎn)化成葡萄糖被利用，或以糖原的形式貯存起來，氨基酸也可轉(zhuǎn)化生酮氨基酸，進而轉(zhuǎn)化脂肪而被利用。
2)氨基酸不僅能提供能量，而且很多氨基酸可以轉(zhuǎn)化為葡萄糖，這一點脂肪則不行。因此在必要的條件下，蛋白質(zhì)能夠幫助維持穩(wěn)定的血糖水平，滿足大腦對葡萄糖的需要。
3)三種提供能量的物質(zhì)的相似之處和區(qū)別現(xiàn)在應(yīng)該很清楚了，糖提供能量，脂肪提供高能量，而蛋白質(zhì)在需要的情況下提供能量及氮。
4)只有糖和脂肪提供的能量足以滿足細(xì)胞的需要時氨基酸才能會都用來進行蛋白質(zhì)的合成。人體可以產(chǎn)生由糖和脂肪貯存能量的化合物，其中葡萄糖以糖原的形式貯存，而脂肪以三酰甘油的形式貯存。而蛋白質(zhì)只是以組織的結(jié)構(gòu)成分和功能分子的形式存在。當(dāng)情況緊急時，人體就不得不分解組織蛋白質(zhì)得到氨基酸來獲得能量。每種蛋白質(zhì)的調(diào)用都有一定的次序首先是血液和肝臟中的小蛋白質(zhì)，其次才是肌肉和其他器官的蛋白質(zhì)。因此能量不足(饑餓)則會同是導(dǎo)致脂肪和機體非脂肪組織的消耗。
5)人體無法儲存過量的氨基酸，這時只有將其氨基脫去，并將剩下的碳骨架轉(zhuǎn)化為貯能物資肝糖原和脂肪。
⑨保持體液和電解質(zhì)平衡蛋白質(zhì)可以通過調(diào)節(jié)體內(nèi)各部分液體的量來幫助保持體液和電解液的平衡(fluid and electrolyte balance)?；罴?xì)胞中必須保持一定量的液體，過多的液體可能導(dǎo)致細(xì)胞脹破，而過少則可能使細(xì)胞喪失功能。盡管水能夠自由的進出細(xì)胞，可蛋白質(zhì)不行；而蛋白質(zhì)又是具有親水性，所以細(xì)胞可以通過保持胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和其他一些礦物質(zhì)的儲存量，來維持它們所需的液體。細(xì)胞還能夠通過分泌出蛋白質(zhì)和抗物質(zhì)來保持細(xì)胞間恒定的液體體積，這樣就可以保持內(nèi)外合適的平衡。假如這套系統(tǒng)失常，細(xì)胞外就會積累大量的體液造成水腫(edema)。
除了體液的量，體液的組成也對生命具有極其重要的意義。細(xì)胞膜上的運輸?shù)鞍淄ㄟ^不斷地將各種物資運出或運進細(xì)胞來維持體液組成。比如，鈉在細(xì)胞外的濃度較高。這種平衡如果受到破壞將會損害心臟、肺和大腦的功能，導(dǎo)致嚴(yán)重的急性病。細(xì)胞中的蛋白質(zhì)抑制在兢兢業(yè)業(yè)地使液體和電解質(zhì)維持在合適的比例，避免這種災(zāi)難性情況發(fā)生。
⑩維持酸堿平衡
正常情況下身體不斷產(chǎn)生酸(acids)和堿(bases)，必須由血液運送到排泄器官。血液必須在不影響自身酸堿平衡(acid-base balance)的前提下來完成這項工作。這就是血液中蛋白質(zhì)的另一項功能，他能夠作為保持血液正常PH值的緩沖物質(zhì)(buffers)，它能夠收集過多的氫離子(酸)，并可以在氫離子太少的時候?qū)⑵溽尫懦鋈?。其機制就在于氨基酸的側(cè)鏈帶負(fù)電，在必要的時候能夠容納另一個帶正電的氫離子。
血液PH值使體內(nèi)受到嚴(yán)格控制的條件之一。假如PH值變化過大，將會導(dǎo)致危險的酸中毒(acidosis)或相反的堿中毒(alkalosis)，造成昏迷甚至死亡。這種情況之所以危險在于它們會對蛋白質(zhì)產(chǎn)生影響。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的緩沖能力已經(jīng)達到飽和時，即接收的氫原子已經(jīng)達到了他們能夠接受的最大限度時，過多的酸將使他們變性，從而使身體很多過程受到破壞。概括并補充了我們前面討論的蛋白質(zhì)的各種功能。見表表 蛋白質(zhì)功能的概括表(1)生長和更新蛋白質(zhì)作為身體生長和組織修復(fù)的構(gòu)建材料。
(2)酶蛋白質(zhì)促進所需的化學(xué)反應(yīng)順利進行。
(3)激素蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)身體各種生理過程。
(4)抗體蛋白質(zhì)形成免疫系統(tǒng)分子抵抗疾病。
(5)體液和電解質(zhì)平衡蛋白質(zhì)幫助維持各部分體液的分配和礦物質(zhì)組成。
(6)酸堿平衡蛋白質(zhì)用作緩沖劑幫助維持各種部分體液的酸堿平衡。
(7)能量蛋白質(zhì)可以為身體提供需要的能量。
(8)運輸?shù)鞍踪|(zhì)幫助機體運輸所需的各種物質(zhì)，如脂、礦物質(zhì)和氧。
(9)血液凝聚蛋白質(zhì)提供網(wǎng)架以供血塊在上面形成。
(10)結(jié)構(gòu)成分蛋白質(zhì)是大多數(shù)身體機構(gòu)，如皮膚、筋腱、韌帶、膜、肌肉、器官和骨骼的核心部分。
總而言之，細(xì)胞中的氨基酸可以被用來1.合成蛋白質(zhì)2.轉(zhuǎn)化為其他小的含氮化合物，如煙酸；3.轉(zhuǎn)化為其他氨基酸。因此紫睛在近視眼治療中的作用起到營養(yǎng)、再生、修復(fù)的功能。(詳見近視基礎(chǔ)研究與應(yīng)用研究紫睛、眼素肽、紫睛組方、中藥新藥項目總結(jié)報告書)七、紫睛的維生素在近視人體中生理、藥理作用分析維生素是維持人體正常生命活動所必需的一類有機化合物，在體內(nèi)其含量極微，但在機體的代謝、生長、發(fā)育等過程中起重要作用。它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)雖不相近，但有共同特點①均以維生素本身，或可被機體利用的前體化合物(又名維生素質(zhì))的形式存在于天然食物中；②非機體結(jié)構(gòu)成份，也不提供熱能，但擔(dān)負(fù)著特殊的代謝功能；③一般不能在體內(nèi)合成，或合成量太少(維生素D例外)，必須由食物提供或藥物補充；④人體只需極少量即可滿足，但絕不能缺少。缺乏某種維生素至一定程度，可引起維生素缺乏癥。近視眼發(fā)生發(fā)展過程中就顯現(xiàn)出多種維生素缺乏特征，眼素肽注射液的發(fā)現(xiàn)正是眼結(jié)構(gòu)大量需要多種維生素補充的藥。
本發(fā)明的積極效果是顯而易見的，紫睛經(jīng)過生物化學(xué)分析，含有各種微量元素，多種氨基酸、蛋白質(zhì)、多酶、多肽、核苷酸、維生素等物質(zhì)，微量元素、維生素、氨基酸營養(yǎng)素這三大元素，是動物紫陽牛眼結(jié)構(gòu)功能代謝的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是近視眼必需治療補充的物質(zhì)基礎(chǔ)，牛眼這個生物化工廠的產(chǎn)品及活性物質(zhì)直接參與人眼的組織代謝，可補臟氣，滋養(yǎng)營血，養(yǎng)心健脾、壯眼肌、緩痙攣、平甘熄火、清肝明目、黑花消退、降瘀除障、阻止眼阻止退行病變，神光炯炯有神，光華發(fā)越于遠處，視遠視近自如，視力恢復(fù)如初。(詳見近視基礎(chǔ)研究與應(yīng)用研究紫睛、眼素肽、紫睛組方、中藥新藥項目總結(jié)報告書)八、紫睛提純液--眼區(qū)穴注眼素肽注射液治療近視眼近視治愈后睫狀體的動態(tài)觀察報告我們于2002年采用了UBM對68例眼區(qū)穴注眼素肽(眼明)治療近視眼治愈病歷停藥三年后進行眼的視近、視遠的調(diào)節(jié)動態(tài)觀察，視近、視遠不同的自發(fā)調(diào)節(jié)狀態(tài)下睫狀體形狀位置的動態(tài)變化作詳盡觀察，旨在間接了解近視眼治愈后活體人眼調(diào)節(jié)時懸韌帶的活動方式。并評估中藥紫睛組方及紫睛提純液眼素肽(眼明——注射液治療后的眼組織結(jié)構(gòu)、肌力、肌群在治愈眼恢復(fù)的變化狀況報告如下一、臨床資料2000年1月至2004年4月眼區(qū)穴注眼明注射液臨床共治近視患者1328例，共2608只眼，(內(nèi)含48只單近視眼)，其中單純近視眼1172例，2296只眼，病變性近視156例，312只眼。男性608例，1184只眼，女性720例，1424只眼。年齡7-22周歲，病程最短5個月，最長12年。2001年至2003年進行對停治的患者隨機取樣追蹤檢查192例，384只眼。在各型各期近視眼治愈患者中隨機取樣68例(68只眼)，其中男性30例，女性38例。右眼屈光度數(shù)為-4.50-0.00D，平均(-1.47±1.39)D左眼-3.00-0.00D，平均(-1.28±1.20)D。均取左眼進行觀察，其中治愈的28只正視眼，40只經(jīng)治療后，尚有低度近視，矯正視力遠視力1.0以上的近視眼。被觀察人員必須排除現(xiàn)患其他眼疾，各類眼表炎癥、散光、弱視、遠視、角膜疾患、青光眼、白內(nèi)障和虹膜睫狀體炎等，并禁止使用睫狀肌調(diào)節(jié)藥物如阿托品、毛果蕓香堿等的個體。
二、觀察方法1、儀器采用美國ParadigmTMUBM P40型超聲生物顯微鏡，換能器頻率50MHz，探頭側(cè)向和軸向分辨率均為50m，探察深度和寬度約5mm，臨視器顯示范圍5mm×5mm，(864像素×432像素)。
2、檢查方法充足照明下，受檢對象右眼用0.4％丁卡因表面麻醉，仰臥平躺，右眼結(jié)膜囊內(nèi)置合適眼杯(直徑20mm或22mm)，其內(nèi)注適量0.9％生理鹽水接觸劑，調(diào)整探頭與眼球垂直。分別以邊長4cm和0.4cm的白底黑“E”作為視遠、視近的注視目標(biāo)。矚受檢者頭不能動、雙眼左轉(zhuǎn)，用左眼注視與眼位平齊左上方斜角約45°及5m遠處(理論無限遠點)遠視標(biāo)，(最小)調(diào)節(jié)狀態(tài)下用UBM攝取右眼9點鐘方位睫狀體橫斷面圖像2張(視遠1圖既視遠2圖)；再矚受檢者注視相同角度自身近點處近視標(biāo)，同法攝取近(最大)調(diào)節(jié)狀態(tài)下睫狀體橫斷面圖像2張(視近3圖及視近4圖)。所有檢查均由筆者獨立完成。
a)測量方法所在圖像由熱磁打印機打印，AGFA SnapScan e20掃描儀以光學(xué)分辨率300dpi圖像放大200％掃描，以3D-DOCT0R3.5.011019影象分析軟件對其進行多個二維變量的測量，每個變量測3次取平均值。所有測量均由筆者獨立完成。測量內(nèi)容包括18個參數(shù)(圖1)三、統(tǒng)計學(xué)方法結(jié)果輸入SPSS10.0for windows統(tǒng)計軟件包，進行調(diào)節(jié)前后各變量間單因素方差分析、多因變量線性模型方差分析及二元變量相關(guān)分析中的偏相關(guān)分析。
圖例說明CBT1睫狀體厚度1[4]，鞏膜突后1.0mm垂直于鞏膜內(nèi)表面的睫狀體厚度。CBT2睫狀體厚度2[4]，鞏膜突后2.0mm垂直于鞏膜內(nèi)表面的睫狀體厚度。CBT3睫狀體厚度3，鞏膜突后3.0mm垂直于鞏膜內(nèi)表面的睫狀體厚度。CBT4睫狀體厚度4，鞏膜突后4.0mm垂直于鞏膜內(nèi)表面的睫狀體厚度。CPD′睫狀突長度，鞏膜突后1.5處到睫狀突內(nèi)尖的距離。SC鞏膜突睫狀突距離，鞏膜突到CPD′的垂直距離。CT睫狀突寬度，過睫狀突虹膜移行點作垂直CPD′的直線與睫狀突另一緣相交于一點，兩點間距離。TCPD′小梁睫狀突(內(nèi)尖)距離[3]，鞏膜突前500到內(nèi)尖與虹膜長軸平行線的垂直距離。ICPD′虹膜睫狀突(內(nèi)尖)距離，TCPD′線上虹膜與睫狀突內(nèi)尖的距離。AOD500500房角開放距離。鞏膜突前500m垂直于角鞏膜緣內(nèi)表面一直線于虹膜相交于一點，兩點間距離.θ1小梁虹膜夾角[3]，虹膜隱窩與AOD500兩點分別連線間的夾角，θ4鞏膜睫狀突夾角[3]鞏膜外表面切線與睫狀突夾角。θ3鞏膜虹膜夾角[3]，鞏膜外表面切線與虹膜移行點分別連線間夾角[3]。θ5虹膜睫狀突夾角，虹膜長軸與睫狀突夾角。θC睫狀突內(nèi)尖成角與皺褶部平坦部交界點，睫狀突虹膜移行點分別連線夾角。AE鞏膜突后4mm之間睫狀體橫截面積。Ar環(huán)形肌面積。
由睫狀突虹膜移行點平行于鞏膜內(nèi)表面到皺褶部平坦部交界點一線以內(nèi)的睫狀突面積。A1縱行肌面積，為上兩者之差。
四、觀察結(jié)果
1、治后眼視遠、視近調(diào)節(jié)時睫狀體區(qū)UBM影像(圖2)由UBM圖像可見，治后眼視遠時睫狀體皺褶部較平坦，厚度與平坦部無異，睫狀突較短較寬，其內(nèi)尖較鈍，與虹膜距離較遠，前房角較寬視近時睫狀體皺褶部明顯向眼中軸隆起，高于平坦部，睫狀突變長變窄，內(nèi)尖變成直角甚至銳角，并旋前靠近虹膜，前房角開放程度略有變小。視近及視遠時，虹膜、鞏膜均無明顯變化。
2、眼視遠、視近調(diào)節(jié)時睫狀體區(qū)各參數(shù)變化(表1)表1治療后眼睫狀體在視遠和視近狀態(tài)下形態(tài)位置參數(shù)(x±s)

注*為視遠1圖，2為視遠2圖，3為視近3圖，4為視近4圖(1)睫狀體形態(tài)位置的改變(表2)


注*示視遠、視近時差異有統(tǒng)計學(xué)意義。1、2、3、4分別表示視遠、視近各2圖，1-2、3-4等分別為兩圖間參數(shù)作比較**Tamhane及SNK檢驗均為SPSS統(tǒng)計軟件中單因素方差分析的常用方法，前者用于方差非齊性者，后者用于方差齊性的數(shù)據(jù)。
在68只眼視遠1、2圖及視近3、4圖間，進行各組間睫狀體的形態(tài)參數(shù)CBT1、CBT2、CBT3、CBT4、CPD′、CT、θC、Ae、Ar和AL的ANOVA分析。結(jié)果表明(一)、受檢眼CBT1視近比視遠有明顯增大，而CBT1視近比視遠有明顯增大，而CBT2、CBT3、CBT4卻無明顯改變，睫狀體調(diào)節(jié)時主要是鞏膜突后1mm處即皺褶部前份增厚，而2、3和4mm處即平坦部卻無明顯變厚。(二)受檢眼視近與視遠相比，CPD′明顯增加。CT和θC明顯減小，即調(diào)節(jié)時睫狀突變得尖銳且長而窄。(三)受檢眼Ae和Ar在視近比視遠明顯增大，Al卻變化不大，說明調(diào)節(jié)時4mm前睫狀體橫截面積增大，尤其是睫狀突部，即環(huán)形成肌所在，而縱行纖維則無明顯改變。4組間68例治療后眼睫狀位置參數(shù)SC、TCPD′、ICPD′、θ/4、θ3和θ5的ANOVA分析表明，視近和視遠比較，除θ3外，其余均變小，即睫狀突與鞏膜突、小梁網(wǎng)(鞏膜突前500m)、虹膜的距離，與鞏膜和虹膜夾角均顯著減小，說明調(diào)節(jié)時睫狀突內(nèi)尖明顯前移前旋。而鞏膜虹膜夾角無明顯改變，虹膜未見明顯位移。比較4組間前房角參數(shù)AOD500和θ1的變化。視近比視遠時AOD500減小，θ1則無明顯變化，即500m房角開放距離已有減小，而小梁虹膜夾角尚無明顯改變，說明近調(diào)節(jié)時前房輕微變淺，房角開放程度略下降。視遠、視近調(diào)節(jié)間進行多因變量線性模型方差分析比較，得出上述相同結(jié)果。
(2)睫狀體形態(tài)位置相關(guān)分析研究對睫狀體各形態(tài)位置參數(shù)作相關(guān)分析，結(jié)果表明(一)視近調(diào)節(jié)時，睫狀體內(nèi)間向前靠近虹膜的位移與睫狀體前部厚度及睫狀突長度的增加無顯著相關(guān)性，而與各位置參數(shù)改變的程度高度相關(guān)，各位置參數(shù)變化高度一致(表3)。
表3睫狀體TCPD′改變相關(guān)因素分析

注*示差異有顯著意義(二)睫狀突內(nèi)尖變尖程度與睫狀體前部厚度、睫狀突長度的增長，與其到鞏膜突距離和鞏膜夾角的減小高度正相關(guān)，并隨著面積增加的程度而增大；但其與睫狀突寬度、到小梁的距離無明顯相關(guān)性(表4)表4治療后眼睫狀突成角θc相關(guān)因素分析

注*示差異有顯著意義(三)睫狀體前部越厚、睫狀突越長而尖，其環(huán)形肌部面積增加越多；但睫狀突越窄，此面積增加越少；其與睫狀突內(nèi)尖的前旋沒有明顯關(guān)系(表5)表5治療后眼睫狀體面積Ar相關(guān)因素分析

注*示差異有顯著意義(四)調(diào)節(jié)時前房角的變淺程度與CBT1和CPD′的變厚、TCPD′和θ4的減小呈高度正相關(guān)(表6)，說明調(diào)節(jié)時前房角的變化與睫狀體形態(tài)和位置的改變有關(guān)。
表6治療后前房角調(diào)節(jié)時改變(AOD500)的相關(guān)因素分析

注*示差有顯著意義第五觀察小結(jié)一、試驗對治后人眼在有限距離內(nèi)視遠、視近的自發(fā)調(diào)節(jié)進行了初步研究，我們還可進一步了解調(diào)節(jié)時鞏膜、虹膜、眼軸長度[5]的作用以及前房的改變[6]；直接觀測睫狀體、晶狀體、懸韌帶系統(tǒng)[3]的微妙聯(lián)系。和驗證治療后眼結(jié)構(gòu)的恢復(fù)程度。另外，調(diào)節(jié)前后睫狀區(qū)顳側(cè)和鼻側(cè)各參數(shù)及其變化是有明顯區(qū)別的[7]，進一步研究調(diào)節(jié)與集合的關(guān)系。幾百年來，眼調(diào)節(jié)機制一直是研究爭論的熱點而爭論的焦點，主要集中在調(diào)節(jié)時懸韌帶松馳還是緊張這一問題上。超聲生物顯微鏡的發(fā)明彌補了普通A、B超成像的清晰度差的不足?？稍诨铙w人眼上用低倍變顯微鏡無創(chuàng)觀察效果。三維超聲活體顯微鏡顯示像檢查的開發(fā)[8]，提高了空間關(guān)系可視化程度，亦為眼前節(jié)解剖結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)機制的進一步研究提供了新路徑，也為眼結(jié)構(gòu)活體動態(tài)觀察打下基礎(chǔ)。
本試驗用UBM觀測和分析治療后人眼自發(fā)視遠視近調(diào)節(jié)時，睫狀區(qū)結(jié)構(gòu)多個參數(shù)的變化，結(jié)果表明，在視近調(diào)節(jié)時睫狀體各部肌纖維協(xié)調(diào)收縮，主要是環(huán)形肌收縮，使其向前向內(nèi)位移，睫狀突變尖前旋，靠近晶狀體，從而懸韌帶松馳，前房角變窄。本研究結(jié)果支持Helmholtz的調(diào)節(jié)松馳學(xué)說。這是近視眼治療學(xué)研究又進一大步。也是對治療抗疲勞的“紫睛的藥理作用”與“屈度調(diào)節(jié)說”的提供理論依據(jù)。
二、調(diào)節(jié)時睫狀體形態(tài)位置的改變治愈后的人眼與正常人眼對比看治愈后人眼從視遠變?yōu)橐暯鼤r，屈光介質(zhì)需要增加屈光度數(shù)來增大對進入光線的折射與會聚，使發(fā)散光線清晰聚焦于視網(wǎng)膜。靈長目動物，如恒河猴和人類，這一過程主要通過睫狀體-懸韌帶-晶狀體系統(tǒng)的變化來完成視近時睫狀肌的收縮，改變了懸韌帶對晶狀體牽拉的張力，由于晶狀體自身囊膜的彈性和基質(zhì)的可塑性使其前后徑增大，前表面明顯前突，曲率半徑減小，屈光度數(shù)因此增加視遠時睫狀肌舒張，逆行上述改變，屈光度數(shù)變小。
由于睫狀突底部(2mm)占整個睫狀體長度1/3，鞏膜突后1mm處相當(dāng)于睫狀體皺褶部中央最突出的地方，而2、3、4mm處相當(dāng)于其平坦部。視遠時，皺褶部較平，睫狀突短而寬，內(nèi)尖較鈍，類似一以鞏膜為底邊、內(nèi)尖為頂角的鈍角三角形；視近時皺褶部向內(nèi)突出，睫狀突變的長而窄，內(nèi)尖也變成直角甚至銳角，像一個以睫狀體靠近虹膜的前緣為底邊，鞏膜為對邊的直角三角形，睫狀突越突出，其內(nèi)尖也越尖。
視遠時，睫狀突距離各標(biāo)志點，如鞏膜突、鞏膜突前500m的小梁網(wǎng)以及虹膜均較遠。視線由遠及近，睫狀突明顯靠近上述標(biāo)志，甚至緊貼虹膜，與虹膜的距離消失，與鞏膜外表面切線的夾角也明顯變小，充分說明近調(diào)節(jié)時，睫狀突尤其是其內(nèi)尖的確在前旋前移。睫狀肌收縮時，由于鞏膜內(nèi)表面凹面向內(nèi)，同時前止點鞏膜突順應(yīng)性小于后止點鋸齒緣順應(yīng)性，因此睫狀體整體即沿內(nèi)表面彎曲的幅度向前位移，其結(jié)果必然是向內(nèi)(眼軸)向前的移動。睫狀肌收縮越強，睫狀突越長而尖，也越靠近虹膜和鞏膜突。
由于睫狀體的向前、向內(nèi)移動，又由于睫狀體收縮時內(nèi)尖明顯向內(nèi)突出，不論晶狀體赤道部直徑如何，兩者之間的距離明顯縮小，連于兩者間的懸韌帶松馳，放松了懸韌帶對晶狀體赤道部的向外牽拉力，進一步完成調(diào)節(jié)的功能，這也是完全符合Helmhotz松馳學(xué)說的理論。治療后眼的調(diào)節(jié)完全與正常眼功能調(diào)節(jié)具有相關(guān)一致性。
試驗中我們還觀察到，視近時前房角開放程度略有縮小，而小梁虹膜夾角尚未變窄，不足以引起類似閉角型青光眼那樣明顯的房角變窄或關(guān)閉。這一微小變化與睫狀突的變長和前移前旋有一定相關(guān)性，可能是因為睫狀體的收縮牽拉鞏膜突有向后位移趨勢所致。
三、調(diào)節(jié)時睫狀肌的收縮近調(diào)節(jié)時，睫狀體前部(CBT1)明顯變厚，這正是3組肌纖維最集中的地方，睫狀突明顯增長變尖，恰是環(huán)形纖維所在睫狀體后部(CBT2、CBT3、CBT4)卻無明顯變化，而這一段主要分布縱行纖維，已沒有環(huán)形纖維。另外，睫狀體橫截面積在視近時比視遠明顯增大，增大的部分主要是皺褶部向內(nèi)突出的部分，也就是環(huán)形肌纖維之所在，其增大的幅度也與上述改變高度正相關(guān)；而縱行纖維部分卻無明顯改變，同時環(huán)形肌收縮的改變與睫狀突的前移前旋似乎也沒關(guān)系。由此可見，各部肌纖維在視近調(diào)節(jié)中主角是環(huán)形纖維，收縮時肌纖維環(huán)像彈性圈般向中心縮小，半徑減小，與晶狀體距離縮小而松馳懸韌帶，收縮越強烈，睫狀突內(nèi)尖越銳利，產(chǎn)生的調(diào)節(jié)越強；縱行纖維可能主司連接前后止點的作用，并由于前上點順應(yīng)性的不同而使睫狀體位移。兩者各司其職，互相沒有明顯的影響，這就為觀察近視眼治療后和治療前對比研究組織結(jié)構(gòu)提供了依據(jù)。
四、通過以上睫狀體的動態(tài)觀察完全證實了《中藥紫睛組方》及紫睛提純液一眼素肽注射液，《眼區(qū)穴注眼素肽注射液治療近視眼》醫(yī)療新方法治療近視眼的治愈效果提供組織學(xué)的依據(jù)，由于經(jīng)過治療的眼組織結(jié)構(gòu)、肌力、肌群纖維的恢復(fù)促使遠視力的恢復(fù)，眼生理功能的恢復(fù)，視遠、視近調(diào)節(jié)的完全恢復(fù)達到超前組織結(jié)構(gòu)和功能水平，因此在臨床上有治愈患者依然在治療前同等的環(huán)境下生活、學(xué)習(xí)，眼睛不但不再發(fā)生近視，這就說明強化抗疲勞的效果。完全達到《全息免疫平衡療法》的目的。臨床觀察眼組織結(jié)構(gòu)的恢復(fù)的患者中有經(jīng)過3年到13年時間考驗、具有健壯、靈敏的調(diào)節(jié)力不變，均可達到遠、近視力的調(diào)節(jié)達到正常水平，這對于近視眼治療后遠期的療效的評估具有重要意義。今將典型病例32例后附門診統(tǒng)計表壹份。


附圖1眼前節(jié)結(jié)構(gòu)參數(shù)測量示意圖附圖2治療后人眼睫狀體區(qū)UBM影像附圖3為本發(fā)明循環(huán)回流提純方法流程圖附圖4為本發(fā)明中藥小容量水針劑工藝流程圖實施例1[提純藥液]眼素肽注射液為紫睛以循環(huán)回流提取方法及工藝提純活性物質(zhì)滅菌水溶液，本品為無色或微黃色澄清液體。為紫睛代表鑒定藥液。每1ml相當(dāng)于鮮品紫睛1g或2.5g，含量1ml1g；1ml2.5g；2ml2g；2ml5g.檢測結(jié)果每1g中含量(1)微量元素硒(Se)0.020μg鋅(Zn)0.047μg銅(Cu)0.023μg鉻(Gr)0.021μg鈣(Ca)9.20μg 錳(Mn)0.042μg注明附檢驗報告計量認(rèn)證(2002)量認(rèn)(京)字(Z0407)(2)氨基酸蘇氨酸(Thr)0.019mg谷氨酸(Gln)0.243mg甘氨(Gly)0.101mg丙氨酸(Ala)0.098mg纈氨酸(Val)0.039mg亮氨酸(Len)0.044mg苯丙氨(Phe)0.027mg賴氨(Lys)0.030mg注明附檢驗報告計量認(rèn)證(2002)量認(rèn)(京)字(Z0407)(3)維生素B10.14mgB20.20mgB120.0015mg注明附檢驗報告計量認(rèn)證(2002)量認(rèn)(京)字(Z0407)[藥品鑒別]1.在含量測定項下，本品的水溶液顯鈉鹽和氫化物的鑒別但應(yīng)符合《中國藥典》2000年版二部附錄3。
2.在含量測定項下紀(jì)錄的色譜中各氨基酸色譜峰的保留時間應(yīng)與相應(yīng)對照品溶液色譜峰的保留時間一致。
本品的檢查法符合《中國藥典》2000年版二部附錄1B的規(guī)定。
1.PH值6.59符合《中國藥典》2000年版二部附錄VIH的規(guī)定。
2.蛋白質(zhì)取本品1ml加入20％磺基水物質(zhì)溶液1ml不得發(fā)生混濁。
3.熱源取本品按《中國藥典2000年版二部附錄XID》的規(guī)定進行檢查，劑量按家兔每1kg注射0.2ml符合規(guī)定。
4.細(xì)菌內(nèi)毒素按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法項下的方法《中國藥典2000年版二部附錄XIE》檢查符合規(guī)定。
5.無菌按照無菌檢查法項下方法《中國藥典2000年版二部附錄XIH》檢查符合規(guī)定。
6.澄明度按照《澄明度檢查細(xì)則80判斷標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定檢查符合規(guī)定。
7.裝量按《中國藥典2000年版二部附錄1B》規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
8.其他(1)溶劑(2)附加劑(3)容器(4)配劑(5)罐裝(6)熔封(7)裝量(8)檢漏(9)貯存。均按《中國藥典2000年版二部附錄1B》規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)要求符合規(guī)定。
眼素肽1ml1g；1ml2.5g；2ml2g；2ml5g；[適用范圍]各類各期近視、發(fā)育性眼病、遠視、散光、斜視、弱視、眼疲勞、眼外傷、近視并發(fā)癥、視神經(jīng)萎縮、非化膿性角膜炎、虹膜睫狀體炎、玻璃體渾濁、中心性視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、近視性青光眼、白內(nèi)障等眼病，紫睛是近視治療的配方主味藥。
實施例2眼素肽注射液的制劑方法及工藝流程提純方法循環(huán)回流提純方法制劑方法中藥小容量水針劑工藝流程一、配方紫睛 60g苯甲醇2ml吐溫803滴制成注射液100ml二、操作方法原藥紫睛取出，去除外包燈芯草，用水洗凈，稱重60g，將紫睛原藥放絞刀中絞成漿液狀，加注射用水100ml浸泡1小時，在水浴上浸煮五次，每次浸煮30分鐘，過濾后，除渣，過濾液濃縮致1/2，在攪拌中逐漸加入95％乙醇100毫升，放置，過濾、濾液回收乙醇。同法用95％乙醇反復(fù)處理，致無沉淀為止，過濾回收乙醇，加苯甲醇、吐溫80，在加入100ml注射用水，攪勻、過濾、分裝、滅菌、樣品檢測、裝瓶、封口、備用，肌肉注射或穴位注射用。
權(quán)利要求
1.一種眼素肽注射液，其特征在于采用紫睛以循環(huán)回流提取方法和中藥小容量水針劑工藝流程提純活性物質(zhì)制成滅菌水溶液。
2.一種眼素肽注射液的制備方法，其特征在于原藥紫睛取出，去除外包燈芯草，用水洗凈，稱重60g，采用循環(huán)回流提純方法，將紫睛原藥放絞刀中絞成漿液狀，加注射用水100ml浸泡1小時，在水浴上浸煮五次，每次浸煮30分鐘，過濾后，除渣，過濾液濃縮致1/2，在攪拌中逐漸加入95％乙醇100毫升，放置，過濾、濾液回收乙醇。同法用95％乙醇反復(fù)處理，致無沉淀為止，過濾回收乙醇，加苯甲醇、吐溫80，采用中藥小容量水針劑工藝流程，在加入100ml注射用水，攪勻、過濾、分裝、滅菌、樣品檢測、裝瓶、封口、備用，肌肉注射或穴位注射用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的紫睛為脊椎動物，?？?、紫陽健康牛鮮全眼球，或馬、驢、騾健康鮮全眼球。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的紫陽健康牛鮮全眼球簡稱紫睛，產(chǎn)地陜西紫陽、安徽石臺、湖北恩施等地。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的紫睛四季均可采集，宰牛時將鮮活眼球摘出，洗去血漬，去凈周圍脂類雜物，鹽漬后用燈芯草包裹、陰干，低溫冷凍保鮮儲藏，忌用火烘、日曬、風(fēng)吹以防破裂變質(zhì)，色鮮完整無破裂者為佳品，屬眼科用藥。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的紫睛四季均可采集，宰牛時將鮮活眼球摘出，洗去血漬，去凈周圍脂類雜物，鹽漬后用燈芯草包裹、陰干，低溫冷凍保鮮儲藏。忌用火烘、日曬、風(fēng)吹以防破裂變質(zhì)，色鮮完整無破裂者為佳品。屬眼科用藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于治療人體近視眼的藥物制劑——眼素肽注射液，其特征在于為紫睛提純活性物質(zhì)滅菌水溶液，紫睛為脊椎動物，?？?、紫陽健康牛鮮全眼球，或馬、驢、騾健康鮮全眼球，紫睛經(jīng)過生物化學(xué)分析，含有各種微量元素，多種氨基酸、蛋白質(zhì)、多酶、多肽、核苷酸、維生素等物質(zhì)，微量元素、維生素、氨基酸營養(yǎng)素這三大元素，是動物紫陽牛眼結(jié)構(gòu)功能代謝的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是近視眼必需治療補充的物質(zhì)基礎(chǔ)，牛眼這個生物化工廠的產(chǎn)品及活性物質(zhì)直接參與人眼的組織代謝，可補臟氣，滋養(yǎng)營血，養(yǎng)心健脾、壯眼肌、緩痙攣、平甘熄火、清肝明目、黑花消退、降瘀除障、阻止眼阻止退行病變，神光炯炯有神，光華發(fā)越于遠處，視遠視近自如，視力恢復(fù)如初。
文檔編號A61P27/02GK1781493SQ200510012868
公開日2006年6月7日 申請日期2005年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月29日
發(fā)明者李廣中 申請人:李廣中, 李泉