專利名稱：山楂核提取物及其在制備治療呼吸道感染的藥物和空氣消毒劑中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種山楂核提取物及其制備方法，以及所述山楂核提取物和/或其藥物組合物在制備治療呼吸道感染的藥物和制備空氣消毒劑上的用途。
背景技術(shù)：
山楂核提取物是山楂果核經(jīng)干餾得到的黑色粘稠液體，具有抑菌效果，可以用于殺菌消炎和消毒凈化空氣。但是山楂果核經(jīng)干餾得到的黑色粘稠液體中含油脂、膠狀物和水，作為藥用或食品原料，尚需濃縮精制。
現(xiàn)有技術(shù)中公開了很多山楂核提取物的制備方法，主要有CN1001566A中公開了一種以山楂核為原料，在90-450℃的溫度范圍內(nèi)干餾，獲得干餾液，并經(jīng)過液體精餾等技術(shù)得到液體煙熏香劑和醫(yī)用舒痛精藥物的方法。
CN1041281A中公開了一種以山楂核為原料提取醫(yī)用舒痛精的方法，先將干燥潔凈的山楂核在90～450℃溫度范圍內(nèi)干餾，獲得的干餾液再經(jīng)精餾，除去低沸點(diǎn)物、高沸點(diǎn)物以及液體煙熏香劑等物質(zhì)，收集精餾釜底中沸點(diǎn)為210～220℃黑色粘性油狀液體，得到其所說的醫(yī)用舒痛精。
CN1102206A中公開了一種從山楂核中提取食用煙熏香料的方法，采用山楂核干餾，取其100-150℃恒溫下的煙熏蒸汽冷凝過程，其特征在于冷凝后的油狀物經(jīng)過濾，然后將其濾液輸入罐中，在常溫、常壓條件下，采用物質(zhì)比重分離法，使濾液分為上、下兩層，上層液經(jīng)虹吸分離，即可得到該產(chǎn)品。
CN1182538A中公開了一種從山楂核提取消毒殺菌劑的方法，其特征在于它由下列步驟組成a)將收購(gòu)的山楂核經(jīng)清洗瀝水后裝入干餾容器內(nèi)，加熱至90-110℃進(jìn)行干餾，蒸汽冷凝收集液體；b)當(dāng)無液體流出后提高加熱溫度至200-300℃，保溫3-4小時(shí)，繼續(xù)干餾，蒸汽冷凝收集液體，直至無液體流出，停止加熱，降溫棄渣；c)將(a)、(b)兩項(xiàng)液體混合沉淀40-60小時(shí)，分離上層棗紅色水狀物，即為半成品，與底層黑色有光澤的油狀粘稠體分離；d)再將(C)項(xiàng)半成品加入蒸餾罐中加熱蒸餾，至少六段以上的精餾，精餾溫度為90-98℃，蒸汽冷凝成液體尾棄，收集黃色無油水性溶液即為成品液；e)成品液加活性炭進(jìn)行脫色，其配比為成品液與活性炭比為30∶1-2；f)產(chǎn)品檢驗(yàn)，包裝入庫(kù)。
CN1275346A中公開了山楂核直接提取山楂核汁液技術(shù)，采用爐內(nèi)直接加熱山楂核使其產(chǎn)生汽煙，將汽煙導(dǎo)入膽管然后冷凝，產(chǎn)出山楂核汁液，再經(jīng)沉淀分離，靜置比重分離，得到產(chǎn)品。具體步驟為洗凈山楂核，去掉雜質(zhì)；自然涼干；入爐前用水浸泡；瀝水后即入爐；兩段加溫，提取干餾液。兩段加溫干餾液混合沉淀；分離水狀物；靜置比重分離；虹吸分離。
CN1299861A中公開了一種山楂核餾油提取液及其制作方法，其以山楂核餾油的粗制品與水的混合物作為原液，原液濃度為50-70％，在105-130℃的溫度區(qū)間進(jìn)行常壓蒸餾，即得出所需餾出液。
上述公開了山楂核提取物的各種制備方法，較本發(fā)明而言步驟復(fù)雜并且重現(xiàn)性較差，申請(qǐng)人通過反復(fù)的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了工藝參數(shù)，得到了一種新的制備山楂核提取物的方法。所得的山楂核提取物是微黃色或無色的水性溶液，含有枸櫞酸15-20％、對(duì)羥基苯甲酸2-4％、氯原酸2-4％、熊果酸1-3％。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種山楂核提取物。
本發(fā)明涉及制備山楂核提取物的方法，其特征在于它由下列步驟組成(1)將山楂核經(jīng)清洗瀝水后裝入干餾容器內(nèi)，漸進(jìn)式加熱90-115℃進(jìn)行干餾，蒸汽冷凝收集液體；(2)當(dāng)無液體流出后，提高加熱溫度至250-350℃，保溫3-5小時(shí)后，繼續(xù)干餾，蒸汽冷凝收集液體，直至無液體流出后停止加熱，降溫出渣棄去；(3)將(1)、(2)兩項(xiàng)液體混合沉淀50-80小時(shí)，分離上層棗紅色水狀物，即為半成品；(4)再將(3)項(xiàng)半成品加入蒸餾罐中加熱蒸餾，至少五段以上的精餾，精餾溫度為90-110℃，同樣為漸進(jìn)式升溫蒸餾，蒸汽冷凝成液體，收集微黃色無油水性溶液即為成品液；(5)成品液加活性炭脫色得到無色或微黃色的產(chǎn)品，成品液與活性炭比為40∶10。
所得的山楂核提取物是微黃色或無色的水性溶液，含有枸櫞酸15-20％、對(duì)羥基苯甲酸2-4％、氯原酸2-4％、熊果酸1-3％。
本發(fā)明涉及山楂核提取物和/或其藥用組合物在制備治療呼吸道感染的藥物上的用途。
本發(fā)明還涉及山楂核提取物和/或其藥用組合物在制備空氣消毒劑上的用途。
所述山楂核提取物可以采用藥劑學(xué)上的常規(guī)制備方法，制成任何一種藥劑學(xué)上可接受的劑型，如噴霧劑、滴劑、洗液、浸膏、栓劑、硬膠囊、軟膠囊、片劑、霜?jiǎng)ａ槍?duì)山楂核提取物的理化性質(zhì)決定其劑型，例如按照本發(fā)明制備的山楂核原液為油狀物，一般可制為噴霧劑。各種制劑的制備參照上?？茖W(xué)技術(shù)出版社1997版的《中藥制劑學(xué)》。
當(dāng)然如果需要，該山楂核提取物還可以與其他中藥、中藥的提取物或其他有效成分組成組合物，再制成相應(yīng)的劑型，用于治療呼吸道感染或者用于空氣消毒。
具體實(shí)施例方式
一、制備山楂核提取物實(shí)施例1將120kg山楂核，用水清洗后瀝水，裝入160立升的干餾罐中漸進(jìn)式加熱升溫至105℃，進(jìn)行干餾，產(chǎn)生的蒸汽經(jīng)冷凝后收集液體，再提高溫度310℃，保溫5小時(shí)后并繼續(xù)干餾得到液體，兩次液體合并后靜止沉淀80小時(shí)，分出上層棗紅色水狀物半成品8kg，將半成品精餾，其溫度85-100℃，其蒸汽進(jìn)行八段精餾冷凝收集黃色無油水性溶液體為成品4.2kg，加入活性炭140g，脫色后成產(chǎn)品，含有枸櫞酸16％、對(duì)羥基苯甲酸2.6％、氯原酸3％、熊果酸1.5％。
實(shí)施例2將120kg山楂核，用水清洗后瀝水，裝入160立升的干餾罐中加熱至115℃，進(jìn)行干餾，產(chǎn)生的蒸汽經(jīng)冷凝后收集液體，再提高溫度345℃，保溫3.5小時(shí)后，繼續(xù)干餾得到液體，兩次液體合并后靜止沉淀50小時(shí)，分出上層棗紅色水狀物半成品5.6kg，將半成品精餾，其溫度92-94℃，其蒸汽進(jìn)行七段精餾冷凝收集黃色無油水性溶液體為成品4.2kg，加入活性炭260g，脫色后成產(chǎn)品，含有枸櫞酸19％、對(duì)羥基苯甲酸3.2％、氯原酸3.9％、熊果酸2.6％。
二、采用用本發(fā)明實(shí)施例1的山楂核提取物進(jìn)行了抗病毒試驗(yàn)和抗呼吸道感染的藥效學(xué)試驗(yàn)，結(jié)果如下1.抗病毒試驗(yàn)1.1.體外抗病毒試驗(yàn)1.1.1.對(duì)Hep-2培養(yǎng)細(xì)胞的毒性試驗(yàn)通過毒性試驗(yàn)觀察到，0.96mg/ml、1.85mg/ml二種稀釋度的山楂核提取物藥液對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無明顯影響，故取這二種稀釋度的藥液作抗病毒試驗(yàn)用。
1.1.2.對(duì)病毒致細(xì)胞病變作用的影響受試病毒副流感-1、RSV、CoxB4、CoxB5、CoxB6、ADV3、ADV7、HSV-I、HSV-II。
表1山楂核提取物對(duì)病毒致細(xì)胞病變作用的影響

結(jié)果可見，山楂核提取物對(duì)所試9種病毒均有較強(qiáng)的抑制作用，在所試劑量(0.96mg/ml、1.85mg/ml)范圍內(nèi)，抑制強(qiáng)度與陽性對(duì)照藥病毒唑相當(dāng)，不僅對(duì)RSV等5種RNA病毒所致細(xì)胞病變有不同程度的抑制作用，而且對(duì)ADV3等DNA病毒所引起的細(xì)胞病變作用亦有明顯的抑制效果，表明山楂核提取物的抗病毒作用較廣。
1.2.體內(nèi)對(duì)流感病毒的作用1.2.1.對(duì)小鼠流感病毒性肺炎的作用表2山楂核提取物對(duì)小鼠感染流感病毒所致肺病變的影響

以5、10g/kg/d灌胃小鼠，能顯著減輕感染小鼠的肺指數(shù)，由于流感病毒感染引起肺部炎癥，隨著炎癥的浸潤(rùn)、滲出，使肺重量增加，肺指數(shù)值升高。肺重量的大小反映了肺炎的嚴(yán)重程度，山楂核提取物能顯著降低感染小鼠的肺指數(shù)，表明能減輕流感病毒所致肺炎的程度。
以上體內(nèi)外試驗(yàn)表明，山楂核提取物有良好的抗病毒作用，為臨床治療上呼吸道病毒性感染提供了藥理學(xué)基礎(chǔ)。
2.體外抗菌試驗(yàn)2.1.試管稀釋法以雙黃連顆粒為陽性對(duì)照藥，測(cè)試山楂核提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、表皮葡萄球菌、A群鏈球菌，肺炎克雷伯菌、產(chǎn)氣腸桿菌的抗菌作用。
山楂核提取物和雙黃連顆粒60mg/ml對(duì)大腸埃希氏菌、產(chǎn)氣腸桿菌、肺炎克雷伯菌三種革蘭氏陰性菌無抗菌作用。該二種藥物對(duì)表皮葡萄球菌的MIC相同，均為20mg/ml。山楂核提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為30mg/ml，低于雙黃連顆粒的60mg/ml。山楂核提取物在60mg/ml時(shí)抑制A群鏈球菌的生長(zhǎng)，而雙黃連在該濃度時(shí)對(duì)A群鏈球菌無抑制作用。提示山楂核提取物對(duì)金黃色葡萄球菌和A群鏈球菌的抗菌作用略強(qiáng)于雙黃連顆粒。
2.2.血清法以雙黃連顆粒和先鋒4號(hào)為陽性對(duì)照藥，測(cè)試山楂核提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、A群鏈球菌，肺炎克雷伯菌的抗菌作用。
山楂核提取物兔血清、雙黃連顆粒兔血清及正常對(duì)照兔血清在各濃度對(duì)大腸埃希氏菌及肺炎克雷伯菌均無抗菌作用。金黃色葡萄球菌和A群鏈球菌在含有正常兔血清的培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)較不含血清的培養(yǎng)基對(duì)照管內(nèi)為少，而山楂核提取物兔血清和雙黃連顆粒兔血清使這2種細(xì)菌的生長(zhǎng)在濃度較高的培養(yǎng)基內(nèi)較正常血清生長(zhǎng)更少或不生長(zhǎng)，提示有一定抑制作用。先鋒4號(hào)兔血清對(duì)受試的4種細(xì)菌都呈極顯著的抑制作用。
3.免疫試驗(yàn)山楂核提取物大劑量組和中劑量組能顯著提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)(P＜0.05)。提示該藥對(duì)小鼠非特異性免疫功能有一定增強(qiáng)作用。
4.抗炎試驗(yàn)表3山楂核提取物抗二甲苯所致耳腫脹的作用

(a)腫脹率＝(致炎耳重-未致炎耳重)/未致炎耳重
*P＜0.05**P＜0.01山楂核提取物大、中、小劑量組均有抗二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用，其中小劑量組的作用顯著，與生理眼水組相比有非常顯著差異(P＜0.01)，大、中劑量組與生理鹽水組相比亦有顯著差異(P＜0.05)。
5.止咳試驗(yàn)豚鼠機(jī)械刺激引咳法可待因組有顯著的鎮(zhèn)咳作用，作用快而持久。從咳嗽抑制百分率的數(shù)值上看，山楂核提取物各劑量組有止咳趨勢(shì)，其中山楂核提取物小、大劑量組在用藥后30min，山楂核提取物大劑量組在60min，其咳嗽抑制百分率與正常對(duì)照組相比有顯著差異(P＜0.05)。
按中醫(yī)肺經(jīng)風(fēng)熱癥辨證標(biāo)準(zhǔn)以及西醫(yī)上呼吸道感染(感冒)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，用山楂核提取物和荊銀合劑對(duì)入組病人進(jìn)行臨床研究，每組30例，結(jié)果表明如下山楂核提取物治療上呼吸道感染(肺經(jīng)風(fēng)熱證)顯效率66.67％，總有效率96.67％，荊銀合劑顯效率63.33％，總有效率96.67％，與雙黃連顆粒比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。研究表明，山楂核提取物制劑治療肺經(jīng)風(fēng)熱證的上呼吸道感染療效確切可靠，并有一定抗病毒作用。
三、采用用本發(fā)明實(shí)施例1的山楂核提取物進(jìn)行空氣消毒的試驗(yàn)，結(jié)果如下本發(fā)明的山楂核提取液的空氣消毒劑可在有人或無人的環(huán)境中進(jìn)行噴灑。最好是采用噴霧器進(jìn)行噴灑。噴灑可采用原液，用量為0.5-2ml/m3。也可采用原液稀釋2-3倍后進(jìn)行噴灑。
下面結(jié)合實(shí)施例和試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但這些實(shí)施例和試驗(yàn)例絕不是對(duì)本發(fā)明的任何限制。
空氣消毒試驗(yàn)試驗(yàn)材料1.試驗(yàn)柜1M3氣霧室，試驗(yàn)溫度為26-30℃，相對(duì)濕度70％-85％。
2.氣溶膠發(fā)生器全玻璃同心圓噴霧器，噴霧壓力為2kg/cm2。
3.氣溶膠采樣器全玻璃液體沖擊式采樣器，采樣流量為10升/分。
4.試驗(yàn)菌株金黃色葡萄球菌ATCC6538株，試驗(yàn)時(shí)柜內(nèi)氣溶膠濃度在1×108cfu/m3左右。白色念珠菌ATCC10231株，試驗(yàn)時(shí)柜內(nèi)氣溶膠濃度在1×107cfu/m3左右。
5.山楂核空氣消毒劑，試驗(yàn)時(shí)用其原液。
試驗(yàn)方法1.中和劑試驗(yàn)采用稀釋法。將3×104cfu/ml試驗(yàn)菌菌懸液分別加入氣溶膠采樣器內(nèi)。在1m3氣霧柜噴藥數(shù)分鐘后采樣1分鐘為噴藥組，在1m3氣霧柜內(nèi)噴水?dāng)?shù)分鐘后采樣1分鐘為對(duì)照組，用常規(guī)方法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，比較噴藥組與對(duì)照組菌數(shù)有無差別，觀察氣霧柜內(nèi)的消毒劑對(duì)采樣器內(nèi)的試驗(yàn)菌有無影響。
2.殺菌試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)消毒組和對(duì)照組。試驗(yàn)時(shí)向1m3氣霧柜內(nèi)噴菌、同時(shí)風(fēng)機(jī)攪拌3分鐘，靜止1分鐘后采樣1分鐘為消毒前空氣含菌量，噴藥(白色念珠菌噴藥3.9ml；金黃色葡萄球菌噴藥2.5ml)，在預(yù)定消毒時(shí)間采樣1分鐘。對(duì)照組將噴藥改為噴水，其它同消毒組。用常規(guī)方法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。
上述試驗(yàn)用以下公式求出殺菌率(P)Pt=Vo′(1-Nt)-Vt′Vo′(1-Nt)×100%]]>Nt=Vo-VtVo×100%]]>Pt作用至t時(shí)間的殺菌率；Nt空氣中細(xì)菌自0至t時(shí)的自然衰亡率；Vo和Vt分別為試驗(yàn)組消毒前和消毒后空氣中的含菌量；Vo’和Vt’分別為對(duì)照組(相應(yīng)于試驗(yàn)組消毒前和消毒后)空氣中的含菌量。
每種試驗(yàn)重復(fù)五次。
結(jié)果A中和劑試驗(yàn)采用稀釋法進(jìn)行中和試驗(yàn)結(jié)果表明，噴藥組和對(duì)照組菌量無明顯差別，證明氣霧柜的消毒劑對(duì)采樣器內(nèi)的試驗(yàn)菌無殺滅作用(見表4)。
表4中和劑試驗(yàn)


B殺菌試驗(yàn)對(duì)空氣中金黃色葡萄球菌的殺滅作用在1m3氣霧柜內(nèi)噴消毒劑2.5ml對(duì)氣霧柜中的金黃色葡萄球菌15、30和60分鐘的殺滅率均為99.99％(見表5)。
表5對(duì)空氣中金黃色葡萄球菌的殺滅效果

對(duì)空氣中白色念珠菌的殺滅作用在1m3氣霧柜內(nèi)消毒劑3.9ml對(duì)氣霧柜中白色念珠菌15、30和60分鐘的殺滅率為99.91％、99.96％和100.00％(見表6)。
表6對(duì)空氣中白色念珠菌的殺滅效果

C山楂核提取物的毒理學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)方法依據(jù)GB7919-87工業(yè)毒理學(xué)1、急性吸入毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)采用靜式吸入法，樣品以100000mg/m3的劑量對(duì)動(dòng)物進(jìn)行加熱蒸發(fā)染毒，染毒時(shí)間2小時(shí)，觀察一周，未見動(dòng)物有急性中毒癥狀及死亡現(xiàn)象，LD50＞100000mg/m3，屬實(shí)際無毒級(jí)。
2、急性皮膚刺激試驗(yàn)樣品用原液作豚鼠皮膚刺激試驗(yàn)，未出現(xiàn)紅斑和水腫，刺激指數(shù)均值為0，按皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)最高分值在0～0.4之間，屬無刺激性。
3、粘膜刺激試驗(yàn)樣品用原液作兔眼粘膜刺激試驗(yàn)，粘膜刺激的平均指數(shù)48小時(shí)后為0，屬無刺激性。
4、人體致敏試驗(yàn)樣品按GB7919-87進(jìn)行人體致敏試驗(yàn)，共20名，其中男9名、女11名，年齡22～66，按其評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)該樣品對(duì)人體無致敏性。
應(yīng)用例 山楂核提取物空氣消毒劑現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)報(bào)告依據(jù)衛(wèi)生部消毒技術(shù)規(guī)范檢測(cè)24件樣品(酒樓包房空氣)的細(xì)菌總數(shù)。
No.1-9消毒前，No.13-21消毒后No.10-12對(duì)照前No.22-24對(duì)照后。
方法與步驟消毒液濃度(劑量)每立方米空間用原液4毫升，作用時(shí)間25分鐘試驗(yàn)環(huán)境溫度(℃)20相對(duì)濕度(％)68采樣方法選30m3包房四間，三間作消毒試驗(yàn)組，一間作對(duì)照組，包房噴藥量每間為120毫升，對(duì)照組噴同劑量的清水。消毒前將營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板放入房間對(duì)角線里、中、外三點(diǎn)，高度均在1.5米，暴露5分鐘后立即關(guān)蓋作為消毒前空氣含菌量測(cè)定。然后用風(fēng)雷II型超低量噴霧器力加入中草藥空氣消毒劑噴霧，待25分鐘后，另放入營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行消毒后采樣(方法同前)。
檢測(cè)方法用常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)。
檢測(cè)結(jié)果見表7。
表7


本發(fā)明的中草藥空氣消毒劑消毒效果為平均殺滅率95％。
權(quán)利要求
1.一種山楂核提取物，其特征在于所述山楂核提取物是由山楂核經(jīng)干餾提取的微黃色或無色的水性溶液，含有枸櫞酸15-20％、對(duì)羥基苯甲酸2-4％、氯原酸2-4％、熊果酸1-3％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于該殺菌劑pH值2-2.6，比重0.998-1.00g/ml。
3.上述權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的山楂核提取物在制備治療呼吸道感染的藥物中的用途。
4.上述權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的山楂核提取物在制備空氣消毒劑中的用途。
5.一種制備如權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的山楂核提取物的方法，其特征在于(1)將山楂核經(jīng)清洗瀝水后裝入干餾容器內(nèi)，漸進(jìn)式加熱90-115℃進(jìn)行干餾，蒸汽冷凝收集液體；(2)當(dāng)無液體流出后，提高加熱溫度至250-350℃，保溫3-5小時(shí)后，繼續(xù)干餾，蒸汽冷凝收集液體，直至無液體流出后停止加熱，降溫出渣棄去；(3)將(1)、(2)兩項(xiàng)液體混合沉淀50-80小時(shí)，分離上層棗紅色水狀物，即為半成品；(4)再將(3)項(xiàng)半成品加入蒸餾罐中加熱蒸餾，至少五段以上的精餾，精餾溫度為90-110℃，同樣為漸進(jìn)式升溫蒸餾，蒸汽冷凝成液體，收集微黃色無油水性溶液即為成品液；(5)成品液加活性炭脫色得到無色或微黃色的產(chǎn)品，成品液與活性炭比為40∶10。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種山楂核提取物，其制備方法，以及所述山楂核提取物在制備治療呼吸道感染的藥物中的用途，還有其在制備空氣消毒劑中的用途。
文檔編號(hào)A61L9/01GK1969982SQ20061016193
公開日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2006年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月8日
發(fā)明者李劍一 申請(qǐng)人:李劍一