專利名稱：從山楂中提取的一種用于防治腦缺血的物質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是涉及一種臨床上用于防止腦缺血的物質(zhì)，特別是從山楂中提取的一種用于防治腦缺血的物質(zhì)。
背景技術(shù)：
山楂的醫(yī)用價值是眾所周知的，其功能在于消食健胃，行氣散瘀，主要用于食物積滯、胃腔脹滿，血瘀疼痛，包括瀉痢腹痛，瘀血經(jīng)閉、產(chǎn)后瘀阻，心腹刺痛，疝氣疼痛，高血脂癥等，但未見用于防治腦缺血，而腦缺血又是一種常見病癥，嚴(yán)重影響著人們的身體健康，目前治療腦缺血多用阿斯匹林、潘生丁、噻氯匹定，亞潢吡唑酮、煙酸、尼莫地平等西藥，中藥有華佗再造丸、丹參注射液等，由于種種原因，上述藥物的使用并不盡人意，有待開拓新的防治腦缺血的新途徑，新成分，新藥物。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，本發(fā)明之目就是從山楂中提取的一種用于防治腦缺血的物質(zhì)，可有效解決防治腦缺血的問題，其解決的技術(shù)方案是首先將山楂粉碎成粗顆粒，用乙醇回流或超聲提取，回收乙醇，得山楂浸膏，加入蒸餾水，攪勻，再加入氯化鈣，靜置后，得上清液，用氨水調(diào)PH值，再加入大孔吸附樹脂中，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，得提取物質(zhì)，該物質(zhì)為山楂提取物，可有效用于制備防治腦缺血的物質(zhì)，本發(fā)明防治腦缺血效果好，原材料豐富，易生產(chǎn)，開辟了山楂的新用途及腦缺血防治的新途徑，為中醫(yī)藥學(xué)增添了新奇葩。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合具體情況，對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。
根據(jù)前述所說的從山楂中提取的一種用于防治腦缺血的物質(zhì)，該物質(zhì)稱山楂提取物，該物質(zhì)是由山楂制得，具體是，說先將山楂粉碎成粗顆粒(粗粉)用質(zhì)量濃度為60％的乙醇加入山楂粗顆粒中，回流提取2次，每次1.5小時，乙醇每次加入量為山楂重量體積的8-10倍，即每100克山楂粗顆粒中加入800-1000ml的乙醇，合并兩次提取液，回收乙醇，得山楂浸膏，或山楂粗顆粒加入60％乙醇8-10倍量，超聲3次，每次45分鐘，合并提取液，回收乙醇，得山楂浸膏，山楂浸膏加入蒸餾水?dāng)噭?，靜置12-24小時，離心后收集上清液，用氨水調(diào)PH值為7-8，之后，加入大孔吸附樹脂中，調(diào)節(jié)流速5ml/min，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，得山楂提取物，山楂提取物含量在80％以上。
所說的大孔吸附樹脂是由市售大孔吸附樹脂用乙醇加熱回流洗脫，洗至洗脫液蒸干后無殘留物，經(jīng)乙醇洗凈的樹脂揮去溶劑后，以乙醇濕法裝柱，繼續(xù)用乙醇在柱上流動清洗，不時檢測流出的乙醇，至與水混合不呈白色混濁為止，然后以大量的蒸餾水洗去乙醇即得所需的大孔吸附樹脂。
本發(fā)明所得物質(zhì)山楂提取物，經(jīng)動物試驗(yàn)，對防治腦缺血取得了滿意的效果，具體情況如下1、山楂提取物對小鼠血瘀合并腦缺血—再灌注模型的干預(yù)作用，取小鼠80只，昆明種，休重19-21g，雄性，隨機(jī)均勻分為8組，分別灌服大、中、小劑量山楂提取物(0.4/kg，0.2/kg，0.1/kg，配成濃度為20mg/ml，10mg/ml，5mg/ml，)、尼莫地平(0.02g/kg，配成1mg/ml，)、華佗再造丸(1.33g/kg，配成66.5mg/ml)及同體積(灌胃體積均為0.2ml/10g)的生理鹽水(為三組，空白組為不造血瘀模型但作手術(shù)組；手術(shù)組為造血瘀模型也作手術(shù)組；假手術(shù)組為造血瘀但不作手術(shù)組)，每天給藥1次，同時每天后腿肌肉注射地塞米松0.8mg/kg(0.1ml/10g空白組注射生理鹽水)，連續(xù)給藥15天，于第16天給藥后1h，禁食后10h，水合氯醛麻醉，分離并結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈30min，再灌20min后摘眼球取血，肝素抗凝，測全血粘度；取腦稱腦重量、作腦部病理切片、腦勻漿測ATP、LD、LDH、Ca2+等指標(biāo)。
對全血黏度的影響與空白組比，模型組全血粘度值(高切、中切、低切)均顯著性升高(P＜0.01＝，表明造血瘀模型成功；與手術(shù)組和假手術(shù)組比，山楂提取物大、中劑量組全血粘度值(高切、中切、低切)均顯著性降低(P＜0.01)，提示本品可顯著降低模型小鼠血液黏度，其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組作用一致，以大劑量組作用為最好。
對腦能量代謝的影響與假手術(shù)組比，模型組腦勻漿中Na+K+-ATP、Ca2+Mg2+-ATP、Ca2+-ATP、Mg2+-ATP活力顯著為低，說明腦缺血再灌注后腦部能量代謝降低；與模型組比，山楂提取物大、中、小劑量組的Na+K+-ATP、Ca2Mg2+-ATP、Ca2+-ATp、Ma2+-ATP活力均顯著性或明顯性升高(p＜0.01，或p＜0.05)其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致。與假手術(shù)組比，模型組的乳酸含量顯著升高、乳酸脫氫酸活力顯著降低與模型組比，山楂提取物大、中、小劑量組乳酸含量顯著降低，乳酸脫氫酶活力顯著升高，其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致，以大劑量組作用為最好。提示可改善腦缺血再灌注小鼠腦部能量代謝。
對腦水腫和Ca2的影響與假手術(shù)組比，模型組腦含水量和細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量均顯著升高；與模型組比，山楂提取物大、中劑量組的腦含水量和細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量均顯著性或明顯降低，其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致，以中劑量組作用為最好。表明山楂提取物有預(yù)防小鼠血瘀合并腦缺血模型及生腦水腫和細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載的作用。
對腦組織顯微結(jié)構(gòu)的影響模型組的動物腦神經(jīng)鈿胞的損傷表現(xiàn)為細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的自溶，其病理特征樹突、軸突及細(xì)胞核模糊不清與正常小鼠有著明顯的差異，而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也明顯的減少，證明造模成功；山楂提取物對小鼠腦缺血—再灌注損傷具有顯著的拮抗作用，大、中、小劑量組對其病理改變有明顯正相關(guān)量效關(guān)系；其作用與尼莫地平，華陀再造丸兩藥一致，均具有明顯的拮抗缺血—再灌注對腦細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞損傷作用，以大劑量組作用為最好。
2、山楂提取物對大鼠血瘀合并腦缺血模型的影響取大鼠80只，wistar，體重180-200g，雄性，隨機(jī)均勻分為8組，分別灌服大、中、小劑量山楂提取物(0.2g/kg，0.1g/kg，0.05g/kg，配成濃度為10mg/ml，5mg/ml，2.5mg/ml，)、尼莫地平(0.01g/kg，配成0.5mg/ml，)、華佗再造丸(0.67g/kg，配成33.25mg/ml)及同體積(灌胃體積均為2ml/100g)的生理鹽水(為三組空白組為不造血瘀模型但作手術(shù)組；手術(shù)組為造血瘀模型也作手術(shù)組；假手術(shù)組為造血瘀但不作手術(shù)組)，每天給藥1次，同時每天后腿肌肉注射地塞米松0.2mg/kg(0.1ml/100g，空白組注射同體積生理鹽水)，連續(xù)給藥10天，于第11天給藥后1h，禁食后10h，水合氯醛麻醉，分離并結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈60min后斷頭取血，一部分肝素抗凝，測全血粘度及紅細(xì)胞聚集指數(shù)，一部分枸櫞酸鈉抗凝，測TT、PT、APTT；取腦作病理切片及勻漿測ATP、LD、LDH、NO、NOS、ET、SOD、MDA、TAA、Glu、CGRP等指標(biāo)。
對全血粘度的影響與空白組比，模型組全血粘度值(高切、中切、低切)均顯著升高，表明造血瘀模型成功；與模型組比，山楂提取物大、中、小劑量組全血粘度值(高切、中切、低切)均顯著降低，其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致，以大劑量組作用為最好。提示山楂提取物對大鼠血瘀合腦缺血模型的全血液粘度有最著降低作用。
對血液凝聚時間的影響與空白組比，模型組組TT、PT、APTT值均顯著降低，表明造血瘀模型成功；與模型組比，山楂提取物大、中、小劑量組TT、PT、APTT值均顯著或明顯升高。其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致，以大劑量組作用為最好。提示山楂提取物可顯著延長大鼠血瘀合腦缺血模型的血液凝聚時間。
對腦能量代謝的影響與假手術(shù)組比，模型組的Na+K+-ATP、Ca2+-ATP、Ca2+-ATP、Mg2+-ATP活力均顯著性降低；山楂提取物大、中劑量組Na+K+-ATP、Ca2+-ATP、Ma2+-ATP活力均顯著性升高，其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致，以大劑量組作用為最好。提示山楂提取物可顯著提高大鼠血瘀合并腦缺血模型腦部的能量代謝。與假手術(shù)組比，模型組乳酸含量顯著升高，乳酸脫氫酶活力顯著降低；山楂提取物大、中、小劑量組可使腦部乳酸含量顯著降低，乳酸脫氫酶活力顯著升高，其作用與尼莫地平組和華佗再造九組一致，以大劑量組作用為最好。提示山楂提取物可顯著改善大鼠血瘀合腦缺血模型的代謝。
對腦組織中抗氧化能力及氧自由基的影響與假手術(shù)組比，模型組腦組織中NO和NOS水平顯著升高；與模型相比，山楂提取物大、中、小劑量腦組織中NO和NOS含量顯著降低。具作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致，以大劑量組作用為最好。提示山楂提取物可顯著降低大鼠血瘀合并腦缺血模型腦組織中NO和NOS水平。與假手術(shù)組比，模型組腦組織中SOD活力顯著降低、MDA水平顯著升高；與模型組比，山楂提取物大、中、小劑量組可顯著提高腦組織中SOD活力，顯著降低腦組織中MDA水平。其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致，以大劑量組作用為最好。提示山楂提取物可顯著改善大鼠血瘀合腦缺血模型腦局部的抗氧化能力，降低脂質(zhì)過氧化物水平。
對腦組織T-AA和Glu含量的影響與假手術(shù)組比，模型組腦組織中Glu和T-AA水平均顯著升高；與模型組比，山楂提取物大、中、小劑量組可顯著或明顯降低腦組織中Glu和T-AA水平，其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致，以大劑量組作用為最好。提示山楂提取物可顯著降低大鼠血瘀合腦缺血模型腦組織中Glu和T-AA(興奮性氨基酸)水平，減少腦缺血時的神經(jīng)元損傷。
對腦組織ET和CGRP的影響與假手術(shù)組比，模型組腦組織中ET水平顯著升高、CGRP水平顯著降低；與模型組比，山楂提取物大、中、小劑量組可顯著降低腦組織中ET水平，顯著升高腦組織中CGRP水平。其作用與尼莫地平組和華佗再造丸組一致，以大劑量組作用力最好。提示山楂提取物可顯著升高大鼠血瘀合腦缺血模型腦組織中舒血管活性肽的水平，顯著降低縮血管活性肽的水平，起到對腦組織缺血的保護(hù)作用。
對腦組織顯微結(jié)構(gòu)的影晌模型組動物腦神經(jīng)細(xì)胞雖然體密度沒有改變，但膠質(zhì)細(xì)胞體密度有所增加，形態(tài)學(xué)上可見腦神經(jīng)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞均發(fā)生自溶現(xiàn)象，細(xì)胞核邊緣不清呈模糊狀，有的已破裂，可能與細(xì)胞水腫有關(guān)，這一現(xiàn)象可能與缺氧而引起細(xì)胞代謝障礙有一定關(guān)系，這一病理改變與空白組和假手術(shù)組有著明顯的不同，證明本實(shí)驗(yàn)的造模方法是可行的。山楂提取物對大鼠腦缺血損傷具有顯著的拮抗作用，并具有增強(qiáng)細(xì)胞代謝和神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞耐缺氧的作用，從大、中、小劑量上觀察其病理改變沒有隨劑量增加而作用增強(qiáng)的正相關(guān)的量效關(guān)系，以大、小劑量作用較佳；與對照藥尼莫地平，華陀再造丸作用一致。
總之，本發(fā)明物質(zhì)經(jīng)動物實(shí)驗(yàn)，具有很好的防治腦缺血的效果，可用于制備防治腦缺血藥物，完全具備臨床應(yīng)用及制備腦缺血藥物的實(shí)際推廣應(yīng)用價值，開拓了山楂藥用的新前景，是對中藥學(xué)的創(chuàng)造性貢獻(xiàn)。
權(quán)利要求
1.從山楂中提取的一種用于防治腦缺血的物質(zhì)，其特征在于，該物質(zhì)是由山楂粉碎成粗顆粒，用質(zhì)量濃度為60％的乙醇加入山楂機(jī)顆粒中，回流提取2次，每次1.5小時，乙醇每次加入量為山楂重量體積的8-10倍，即每100克山楂粗顆粒中加入800-1000ml的乙醇，合并兩次提取液，回收乙醇，得山楂浸膏，或山楂粗顆粒加入60％乙醇8-10倍量，超聲3次，每次45分鐘，合并提取液，回收乙醇，得山楂浸膏，山楂浸膏加入蒸餾水?dāng)噭?，靜置12-24小時，離心后收集上清液，用氨水調(diào)PH值為7-8，之后，加入大孔吸附樹脂中，調(diào)節(jié)流速5ml/min，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，得山查提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從山楂中提取的一種用于防治腦缺血的物質(zhì)，其特征在于，所說的大孔吸附樹脂是大孔吸附樹脂用乙醇加熱回流洗脫，洗至洗脫液蒸干后無殘留物，經(jīng)乙醇洗凈的樹脂揮去溶劑后，以乙醇濕法裝柱，繼續(xù)用乙醇在柱上流動清洗，不時檢測流出的乙醇，至與水混合不呈白色混濁為止，然后以大量的蒸餾水洗去乙醇即得所需的大孔吸附樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從山楂中提取的一種用于防治缺血的物質(zhì)，其特征在于，該物質(zhì)為山楂提取物，用于制備防治腦缺血藥物。
全文摘要
本發(fā)明是一種從山楂中提取的一種用于防治腦缺血的物質(zhì)，可有效解決防治腦缺血的問題，其解決的技術(shù)方案是首先將山楂粉碎成粗顆粒，用乙醇回流或超聲提取，回收乙醇，得山楂浸膏，加入蒸餾水，攪勻，再加入氯化鈣，靜置后，得上清液，用氨水調(diào)pH值，再加入大孔吸附樹脂中，用蒸餾水洗去雜質(zhì)，以乙醇為流動相解吸附，回收乙醇，得提取物質(zhì)，該物質(zhì)為山楂提取物，可有效用于制備防治腦缺血的藥物，本發(fā)明防治腦缺血效果好，原材料豐富，易生產(chǎn)，開辟了山楂的新用途及腦缺血防治的新途徑，為中醫(yī)藥學(xué)增添了新奇葩。
文檔編號A61P9/00GK1682852SQ20051001739
公開日2005年10月19日 申請日期2005年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月2日
發(fā)明者苗明三 申請人:苗明三