專利名稱：一種新化合物葛根新苷a及其分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新化合物及其分離方法，特別涉及一種新化合物葛根新苷A及其分離方法。
背景技術(shù)：
血管性癡呆(VD)是發(fā)生在腦血管病基礎(chǔ)上的以記憶、認(rèn)知功能缺損為主，或伴有語言、視空間能力及情感、人格障礙的獲得性智能持續(xù)性損害。近年來，其發(fā)病率不斷升高，已成為影響中老年人健康和生活質(zhì)量的常見病和多發(fā)病。隨著我國人口老齡化的發(fā)展，已給社會和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。據(jù)調(diào)查，65歲以上癡呆的發(fā)病率為5％。美國統(tǒng)計，60歲以上缺血性腦血管病存活患者中26.3％會發(fā)生癡呆。目前，西醫(yī)對VD的治療，一是預(yù)防和治療腦血管病，二是改善腦功能，減輕癡呆癥狀。而中醫(yī)藥在延緩病情、改善全身癥狀、一定程度上改善智能方面存在優(yōu)勢，對改善記憶力、定向力有一定作用，尤其是對改善患者神情呆滯、自覺癥狀以及主動性和改善提高生存質(zhì)量方面有突出作用。傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論認(rèn)為“濁毒損傷腦絡(luò)”是VD的主要病機，腎精氣虛、痰瘀互結(jié)，阻滯絡(luò)脈是VD發(fā)生的基礎(chǔ)，痰瘀蘊積、釀生濁毒，敗壞腦絡(luò)腦髓，是導(dǎo)致VD發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵。葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi和粉葛的干燥根，為常用中藥，具有降低血管阻力，改善腦和冠狀動脈循環(huán)的作用。到目前為止，根據(jù)有關(guān)葛根的化學(xué)成分研究文獻(xiàn)報道，葛根的化學(xué)成分主要包括異黃酮類、脂肪酸類和甾醇類。無有關(guān)化合物葛根新苷A的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新化合物葛根新苷A；本發(fā)明的另一個目的在于提供一種新化合物的分離方法；本發(fā)明的第三個目的在于提供一種新化合物的結(jié)構(gòu)鑒定方法。
本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的
一種新化合物葛根新苷A，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下 本發(fā)明化合物還可以制備成含有上述結(jié)構(gòu)式的化合物及其鹽或衍生物的藥物。其中該化合物的鹽或衍生物可以是但不限于如下九種A.該化合物7-OH甲基化，生成葛根新苷A甲基化衍生物，示例結(jié)構(gòu)式為 B.該化合物7-OH與葡萄糖、鼠李糖、木糖、甘露糖等單糖或由上述單糖聚合形成的雙糖、三糖等寡糖結(jié)合，生成苷類化合物，示例結(jié)構(gòu)式為
C.該化合物7-OH與Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+等金屬離子結(jié)合生成金屬鹽衍生物，示例衍生物結(jié)構(gòu)式為 D.該化合物可與硫酸、硝酸生成璜基或硝基衍生物，示例衍生物結(jié)構(gòu)式為
E.該化合物7-OH可與酸、酸酐或酰鹵生成酯類化合物，如與甲酸、乙酸或乙酸酐、丙酸或丙酸酐、丁酸或丁酸酐、丁二酸或丁二酸酐、苯甲酸或苯甲酸酐等小分子有機酸、酸酐或酰鹵生成有機酸酯，示例衍生物結(jié)構(gòu)式為
與棕櫚酸、亞油酸、油酸、月桂酸等大分子有機酸生成有機酸酯，示例結(jié)構(gòu)式為
F.該化合物5′位脫去葡萄糖，生成5′-OH，示例結(jié)構(gòu)式為 G.該化合物5′位脫去葡萄糖，生成的5′-OH發(fā)生上述1～5所述衍生化反應(yīng)，生成相應(yīng)衍生物，示例衍生反應(yīng)及相應(yīng)衍生物為
H.該化合物該7-OH與5′位脫去葡萄糖后生成的5′-OH同時發(fā)生上述1～5所述相同或不同的衍生化反應(yīng)，生成相應(yīng)衍生物；I.該化合物1”、2”、3”、6”位OH發(fā)生上述1～3和5所述衍生化反應(yīng)，生成相應(yīng)衍生物。
葛根新苷A的理化性質(zhì)為白色無定型粉末；可溶于甲醇、乙醇，難溶于氯仿、丙酮；紫外燈(254nm)下不顯熒光，5％三氯化鐵-鐵氰化鉀顯藍(lán)色。
發(fā)明新化合物葛根新苷A的分離方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片2000-4000重量份，用6～10倍體積份的50～95％乙醇提取1～3次，每次0.5～2小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至800～1200體積份后，用水稀釋至2500～3500體積份，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏300-500重量份；將干浸膏300-500重量份用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用10～25∶1～3∶0.5～1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用10～25∶1～3∶0.5～1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用15～35∶1～3∶0.5～1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用10～20∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A。
本發(fā)明新化合物葛根新苷A的分離方法優(yōu)選為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片3000重量份，用8倍體積份的50～95％乙醇提取2次，每次1.5小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至1000體積份后，用水稀釋至3000體積份，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏400重量份；將干浸膏400重量份用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，即色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A。
本發(fā)明新化合物葛根新苷A的分離方法優(yōu)選為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片2000重量份，用10倍體積份的50～95％乙醇提取1次，每次2小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至800體積份后，用水稀釋至3500體積份，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏300重量份；將干浸膏300重量份用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用35∶1∶1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A。
本發(fā)明新化合物葛根新苷A的分離方法優(yōu)選為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片4000重量份，用6倍體積份的50～95％乙醇提取3次，每次0.5小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至1200體積份后，用水稀釋至2500體積份，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏500重量份；將干浸膏500重量份用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用10∶3∶0.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A。
本發(fā)明新化合物葛根新苷A的結(jié)構(gòu)鑒定為葛根新苷A用5％三氯化鐵-鐵氰化鉀溶液顯藍(lán)色，說明結(jié)構(gòu)中含有酚羥基；高分辨FAB-MS給出分子式C24H26O10Na，分子量497.146271(加Na)，計算分子量為497.142367(加Na)。
1HNMR譜(in DMSO-d6)和13CNMR譜(in DMSO-d6)顯示此化合物的結(jié)構(gòu)中含有兩個苯環(huán)；1HNMR譜在不飽和區(qū)出現(xiàn)一組ABX系統(tǒng)7.55(1H，d，J＝8.4Hz)、6.901H，d，J＝2.4Hz)和6.72(1H，dd，J＝2.4，8.4Hz)，提示有一個三取代苯環(huán)存在，從HMQC譜中找到這三個信號峰對應(yīng)的碳原子分別出現(xiàn)在δ 131.8、101.7、109.1；6.95(2H，d，J＝8.4Hz)和6.63(2H，d，J＝8.4Hz)這兩個信號峰提示結(jié)構(gòu)中存在一個對位取代的苯環(huán)，從HMQC譜中找到對應(yīng)的碳原子分別出現(xiàn)在δ 130.9、115.3；此外不飽和區(qū)還有一個單質(zhì)子寬單峰6.33(1H，br.s)，HMQC譜中找到對應(yīng)的碳原子出現(xiàn)在δ 113.9，HMBC譜顯示該氫質(zhì)子與碳原子112.6、166.4、172.9有遠(yuǎn)程相關(guān)，而三取代苯環(huán)上的氫6.72(1H，dd，J＝2.4，8.4Hz)與112.6季碳遠(yuǎn)程相關(guān)，說明該化合物中存在α、β不飽和酮結(jié)構(gòu)，而且α、β不飽和酮與三取代苯環(huán)相連；低場區(qū)有一酚羥基氫信號9.18(1H，s)，三取代苯環(huán)上的氫6.90(1H，d，J＝2.4Hz)和6.72(1H，dd，J＝2.4，8.4Hz)均與碳原子δ 156.9、112.6與遠(yuǎn)程相關(guān)，提示酚羥基連在三取代苯環(huán)上，且位于α、β不飽和酮取代基的鄰位；3.84(3H，s)說明存在一甲氧基，碳譜中的δ56.0信號峰也證明了這一點，HMBC譜顯示甲氧基質(zhì)子與δ163.4碳原子相連，而該碳原子與三取代苯環(huán)上的氫質(zhì)子7.55(1H，d，J-8.4Hz)，6.90(1H，d，J＝2.4Hz)有相關(guān)信號，說明甲氧基連在三取代苯環(huán)上；3.77～3.17間出現(xiàn)一組葡萄糖上的6個氫信號，5.42(1H，d，J＝4.8Hz)，5.14(1H，br.s)，5.07(1H，d，J＝4.8Hz)，4.66(1H，t，J＝4.8Hz)為糖上羥基氫信號，5.05(1H，d，J＝7.2Hz)為葡萄糖的端基氫信號，提示苷鍵為β構(gòu)型；13CNMR譜也出現(xiàn)一組葡萄糖的碳信號峰100.8、77.9、77.0、73.6、70.0、61.3；HMBC譜中出現(xiàn)葡萄糖端基氫質(zhì)子5.05(1H，d，J＝7.2Hz)與對位取代苯環(huán)的δ156.4碳原子有遠(yuǎn)程相關(guān)信號峰，說明葡萄糖連在對位取代苯環(huán)上；6.02(1H，d，J＝7.8Hz)，3.04(1H，dd，J＝3.0，15.0Hz)，2.53(1H，dd，J＝7.8，15.0Hz)這三個信號峰提示該化合物中存在-O-CH-CH2-片斷，從HMQC譜中找到對應(yīng)的碳原子信號分別出現(xiàn)在δ 84.1、38.7，HMBC譜顯示δ38.7碳原子上的氫質(zhì)子3.04(1H，dd，J＝3.0，15.0Hz)，2.53(1H，dd，J＝7.8，15.0Hz)與對位取代苯環(huán)的δ127.1和δ130.9碳原子有遠(yuǎn)程相關(guān)，提示-O-CH-CH2-片斷通過其亞甲基與對位取代苯環(huán)相連，而-O-CH-CH2-片斷上的叔碳原子δ 84.1與α、β不飽和酮的113.9碳和156.9碳有遠(yuǎn)程相關(guān)，提示-O-CH-CH2-片斷通過其叔碳與α、β不飽和酮相連；由于α、β不飽和酮上β位碳原子δ 166.4和-O-CH-CH2-上的叔碳δ84.1均與氧原子相連，根據(jù)HRFAB-MS給出分子式C24H26O10中有10個氧原子，除去葡萄糖基上的6個氧原子、甲氧基、酚羥基和羰基氧原子，僅余下1個氧原子，故推測δ166.4和δ84.1這兩個碳原子共用一個氧原子，即α、β不飽和酮和-O-CH-CH2-片斷上的叔碳原子δ84.1通過氧原子形成了五元環(huán)；綜上所述，確定了此化合物的結(jié)構(gòu)，分子式為C24H26O10與HRFAB-MS給出的分子式一致，經(jīng)文獻(xiàn)檢索未見報道，故為新化合物，命名為葛根新苷A；EI-MS譜中，m/z312為分子離子失去葡萄糖的碎片離子峰，m/z和m/z107為m/z312碎片離子峰C2-C1′鍵斷裂后生成的碎片離子峰，m/z206碎片峰脫去一分子H2O生成m/z188碎片離子峰，m/z206碎片峰脫去+CHO后生成m/z177碎片離子峰，m/z177碎片離子峰脫去CO生成m/z149碎片離子峰；通過EI-MS圖譜驗證，該化合物結(jié)構(gòu)推斷正確；其1HNMR譜和13CNMR譜信號歸屬見實驗例中表12，相關(guān)圖譜見附圖1～10。
本發(fā)明新化合物葛根新苷A及其鹽或衍生物用于制備抗血栓形成的藥物。
本發(fā)明所述的重量份與體積份的比例為克/毫升。


圖1葛根新苷A的1HNMR譜(in DMSO-d6，600M Hz)圖2葛根新苷A的13CNMR譜(in DMSO-d6，150M Hz)圖3葛根新苷A的HSQC譜(in DMSO-d6，150M Hz)圖4葛根新苷A的HMBC譜(in DMSO-d6，150M Hz)圖5葛根新苷A的HMBC局部放大譜(in DMSO-d6，150M Hz)圖6葛根新苷A的HMBC局部放大譜(in DMSO-d6，150M Hz)圖7葛根新苷A的HMBC局部放大譜(in DMSO-d6，150M Hz)圖8葛根新苷A的HR-FAB-MS譜數(shù)據(jù)圖9葛根新苷A的EI-MS圖譜圖10EI-MS譜中葛根新苷A的主要碎片離子峰裂解過程下述實驗和實施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。
實驗例1 本發(fā)明化合物葛根新苷A對大鼠動靜脈旁路血栓形成的影響(一)實驗材料1動物SD大鼠，雄性，體重288±16g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，合格證號SCXK(京)2002-0003。
2藥品及試劑受試藥葛根新苷A，給藥前用0.5％CMC溶解配成溶液，4℃冰箱保存。
陽性藥天保寧銀杏葉片，浙江康恩貝集團制藥有限公司產(chǎn)品，給藥前用0.5％CMC溶解配成溶液，4℃冰箱保存。
3儀器AEG-220型電子分析天平，日本Shimadzu公司產(chǎn)品；DF-206型鼓風(fēng)干燥箱，北京西城醫(yī)療器械廠產(chǎn)品。
(二)實驗方法與結(jié)果1分組及給藥大鼠按體重隨機分為5組，即模型對照組、天保寧24mg/kg組、葛根新苷A小、中、大劑量組。模型組給予等容積0.5％CMC。各組動物連續(xù)灌胃給藥四天，第四天給藥1小時后進(jìn)行實驗。
2實驗方法大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(3.5ml/kg)麻醉，仰位固定，分離右側(cè)頸總動脈和左側(cè)頸外靜脈，將三段聚乙烯管相連，一端插入右頸總動脈，另一端插入左頸外靜脈，中間段長10cm，放入一根長為8cm已稱重的7#手術(shù)線，管內(nèi)注滿生理鹽水，連接右側(cè)頸總動脈和左頸外靜脈，開放血流20分鐘后中斷血流，取出絲線，置已稱重的硫酸紙上稱濕重，此時總濕重減去原絲線和硫酸紙重即為所形成血栓的濕重。再置于烘箱內(nèi)60℃烘烤1小時至恒重，冷卻稱重，此時總干重減去原絲線和硫酸紙重即為所形成血栓的干重，比較組間差異。
3統(tǒng)計方法 組間比較進(jìn)行t檢驗，實驗結(jié)果以

表示。
4實驗結(jié)果見表1。
表1葛根新苷A對大鼠實驗性血栓形成的影響


注與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01(三)結(jié)論葛根新苷A小、中、大劑量組均可減輕大鼠動靜脈旁路血栓的濕重及干重，與模型組相比具有顯著性差異，表明葛根新苷A具有抗血栓形成作用。
實驗例2 葛根新苷A結(jié)構(gòu)鑒定實驗表2 葛根新苷A的1HNMR譜(600M Hz，in DMSO-d6)和13CNMR譜(150M Hz，in DMS0-d6)數(shù)據(jù)

下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果。
具體實施例方式
實施例1化合物葛根新苷A，其結(jié)構(gòu)式如下
其分離方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片2000g，用10倍體積份的50～95％乙醇提取1次，每次2小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至800ml后，用水稀釋至3500ml，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏300g；將干浸膏300g用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用35∶1∶1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A 0.015g。
實施例2化合物葛根新苷A，其結(jié)構(gòu)式如下 其分離方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片3000g，用8倍體積份的50～95％乙醇提取2次，每次1.5小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至1000ml后，用水稀釋至3000ml，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏400g；將干浸膏400g用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A 0.025g。
實施例3化合物葛根新苷A，其結(jié)構(gòu)式如下 其分離方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片4000g，用6倍體積份的50～95％乙醇提取3次，每次0.5小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至1200ml后，用水稀釋至2500ml，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏500g；將干浸膏500g用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用10∶3∶0.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A 0.035g。
實施例4化合物葛根新苷A，其結(jié)構(gòu)式如下 其分離方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片3000g，用10倍體積份的50～95％乙醇提取1次，每次2小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至800ml后，用水稀釋至3500ml，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏300g；將干浸膏300g用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每60ml收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每60ml收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用15∶3∶0.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每60ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用15∶3∶0.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每60ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用15∶3∶0.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每60ml收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每60ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A 0.015g；其結(jié)構(gòu)鑒定為葛根新苷A用5％三氯化鐵-鐵氰化鉀溶液顯藍(lán)色，說明結(jié)構(gòu)中含有酚羥基；高分辨FAB-MS給出分子式C24H26O10Na，分子量497.146271(加Na)，計算分子量為497.142367(加Na)。
實施例5化合物葛根新苷A，其結(jié)構(gòu)式如下 其分離方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片4000g，用6倍體積份的50～95％乙醇提取3次，每次0.5小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至1200ml后，用水稀釋至2500ml，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏500g；將干浸膏500g用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用10∶3∶0.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A 0.035g；其結(jié)構(gòu)鑒定為葛根新苷A用5％三氯化鐵-鐵氰化鉀溶液顯藍(lán)色，說明結(jié)構(gòu)中含有酚羥基；高分辨FAB-MS給出分子式C24H26O10Na，分子量497.146271(加Na)，計算分子量為497.142367(加Na)。
實施例6化合物葛根新苷A，其結(jié)構(gòu)式如下 其分離方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片2000g，用10倍體積份的50～95％乙醇提取1次，每次2小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至800ml后，用水稀釋至3500ml，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏300g；將干浸膏300g用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用35∶1∶1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A 0.015g；其結(jié)構(gòu)鑒定為葛根新苷A用5％三氯化鐵-鐵氰化鉀溶液顯藍(lán)色，說明結(jié)構(gòu)中含有酚羥基；高分辨FAB-MS給出分子式C24H26O10Na，分子量497.146271(加Na)，計算分子量為497.142367(加Na)。
實施例7化合物葛根新苷A甲基化衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下 實施例8化合物葛根新苷A7-OH與不同糖生成的苷類衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下
實施例9一化合物葛根新苷A5′位脫葡萄糖衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下
實施例10化合物葛根新苷A酯類衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種新化合物葛根新苷A，其特征在于該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
2.一種藥物，其特征在于該藥物含有如下結(jié)構(gòu)式的化合物及其鹽或衍生物
3.如權(quán)利要求1所述的新化合物葛根新苷A的分離方法，其特征在于該方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片2000-4000重量份，用6～10倍體積份的50～95％乙醇提取1～3次，每次0.5～2小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至800～1200體積份后，用水稀釋至2500～3500體積份，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏300-500重量份；將干浸膏300-500重量份用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用10～25∶1～3∶0.5～1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用10～25∶1～3∶0.5～1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用15～35∶1～3∶0.5～1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用10～20∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每40～60體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A。
4.如權(quán)利要求3所述的新化合物葛根新苷A的分離方法，其特征在于該方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片3000重量份，用8倍體積份的50～95％乙醇提取2次，每次1.5小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至1000體積份后，用水稀釋至3000體積份，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏400重量份；將干浸膏400重量份用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，即色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A。
5.如權(quán)利要求3所述的新化合物葛根新苷A的分離方法，其特征在于該方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片2000重量份，用10倍體積份的50～95％乙醇提取1次，每次2小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至800體積份后，用水稀釋至3500體積份，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏300重量份；將干浸膏300重量份用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用35∶1∶1.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A。
6.如權(quán)利要求3所述的新化合物葛根新苷A的分離方法，其特征在于該方法為選用豆科植物野葛的干燥根制成的葛根飲片4000重量份，用6倍體積份的50～95％乙醇提取3次，每次0.5小時，過濾；合并濾液并減壓濃縮至1200體積份后，用水稀釋至2500體積份，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫至流出液近無色后再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色后，合并上述乙醇洗脫液，減壓濃縮后置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏500重量份；將干浸膏500重量份用硅膠柱色譜分離，即色譜分離I，氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到75～85個流份，硅膠薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離I得到的第22～68流份合并，經(jīng)硅膠柱色譜分離，好色譜分離II，用氯仿-甲醇混合溶劑100∶0→20∶1→10∶1→4∶1梯度洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到35～40個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離II得到的第11～19流份合并，用硅膠柱色譜分離，即色譜分離III，用10∶3∶0.5比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離III得到的第2～6流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離IV，用18∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離IV得到的第6～14流份合并，用聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離V，用20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到10～15個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離V得到的第3～5流份合并，經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，即色譜分離VI，用15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶劑洗脫，分份收集，每50體積份收集一份，共收集得到15～20個流份，聚酰胺薄層色譜檢識后合并相同流份；色譜分離VI得到的第10～13流份合并，回收溶劑，得到白色細(xì)沙狀結(jié)晶，用甲醇反復(fù)洗滌后，得到葛根新苷A。
7.如權(quán)利要求1所述的新化合物葛根新苷A在制備抗血栓形成藥物中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求7所述的新化合物葛根新苷A是其鹽或衍生物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新化合物葛根新苷A及其分離方法、結(jié)構(gòu)鑒定方法。本發(fā)明化合物葛根新苷A的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下經(jīng)實驗結(jié)果證明本發(fā)明化合物葛根新苷A具有抗血栓形成的作用。
文檔編號A61K125/00GK1935823SQ20061011383
公開日2007年3月28日 申請日期2006年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月18日
發(fā)明者石任兵, 王永炎, 劉斌, 徐秋萍, 王彥志 申請人:北京中醫(yī)藥大學(xué)