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異種生物組織材料的抗鈣化改性方法

文檔序號(hào):1115991閱讀:294來源:國(guó)知局

專利名稱::異種生物組織材料的抗鈣化改性方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明涉及生物組織材料的抗鈣化改性方法,具體地說是用于同種或異種生物組織材料的抗鈣化改性方法。技術(shù)背景在心臟外科手術(shù)治療中,大多數(shù)情況下都需要植入各類修補(bǔ)材料,以替代病變的組織器官,恢復(fù)其功能。按照植入物材料的來源大致可以分為人工材料和生物材料兩大類,而生物材料通常都需要化學(xué)改性處理以去除其免疫原性、增加抗酶解的能力從而提高材料在體內(nèi)的耐久性。目前,異種材料的改性處理一直沿用戊二醛處理方法,該方法于1968年由法國(guó)人Carpentier首次用于心臟瓣膜材料的處理,可同時(shí)達(dá)到交聯(lián)組織、去除免疫原性、增加穩(wěn)定性、消毒的效果,且至今尚沒有其他處理方法替代它的地位。但是,戊二醛處理也有它自身的缺點(diǎn),首先,其只對(duì)膠原纖維有一定交聯(lián)作用,但對(duì)其它組分如彈性纖維和蛋白多糖等無(wú)交聯(lián)作用;第二,其容易導(dǎo)致生物組織中鈣鹽沉積即鈣化。鈣化的組織會(huì)變硬變脆,影響組織的活動(dòng)并容易撕裂、穿孔,導(dǎo)致生物材料耐久性差,患者必須接受二次手術(shù)將鈣化的組織取出,這樣不僅由一定的危險(xiǎn)性而且給患者增加了不必要的痛苦,因此戊二醛改性處理方法很大程度上限制了生物材料的應(yīng)用。如何減輕戊二醛交聯(lián)的生物材料鈣化是近二十年來人們研究的重點(diǎn)內(nèi)容,從清除組織中引起鈣化的脂質(zhì)、細(xì)胞碎片,中和組織中殘余的戊二醛和競(jìng)爭(zhēng)抑制鈣離子吸收等角度也找到了一些有效的處理方法,但其操作復(fù)雜,且其長(zhǎng)期的效果仍在觀察中。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是基于這樣一種發(fā)現(xiàn)而完成的,即通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),生物組織中降解的彈性纖維碎片常常是鈣化最多的地方如圖1所示,若從防止彈性纖維降解的角度來減輕鈣化效果將非常顯著,同時(shí)經(jīng)凡寧酸交聯(lián)后組織材料的力學(xué)性能還能得到進(jìn)一步提高。因此,本發(fā)明的目的在于提供一種能防止彈性纖維降解,并顯著地抑制鈣化發(fā)生,且能進(jìn)一步提高交聯(lián)后組織材料力學(xué)性能的異種生物組織材料的抗鈣化改性方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其是使用丹寧酸溶液浸泡組織材料進(jìn)行抗鈣化改性交聯(lián)處理;所述的丹寧酸溶液的濃度為16%,溶液pH值為4.06.0,浸泡溫度1832X:,浸泡時(shí)間為2496小時(shí)。一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其是在常規(guī)化學(xué)抗鈣化改性處理的過程中使用丹寧酸溶液協(xié)同處理組織材料。上述的常規(guī)化學(xué)抗鈣化改性處理方法為戊二醛交聯(lián)處理或環(huán)氧化合物交聯(lián)處理。上述的與丹寧酸協(xié)同交聯(lián)處理的常規(guī)化學(xué)交聯(lián)處理方法最優(yōu)為戊二醛交聯(lián)處理。上述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其具體交聯(lián)處理步驟為用濃度為0.1%1.5%戊二醛/0.1%0.6%丹寧酸溶液的混合溶液,pH值為4.06.0,浸泡組織材料,浸泡溫度1832t:,浸泡時(shí)間為48小時(shí)以上。上所述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其具體交聯(lián)處理步驟為(1)用濃度為0.11.5%,pH值為4.09.0的戊二醛溶液浸泡組織材料,浸泡溫度為為4'C,浸泡時(shí)間為48小時(shí);(2)浸泡后的組織材料再以濃度為0.1%1.5%戊二醛/0.1%0.6%丹寧酸的混合溶液,pH值為4.06.0,浸泡組織材料,浸泡溫度1832'C,浸泡時(shí)間為48小時(shí)以上。上述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其具體處理步驟為(1)用濃度為0.11.5%,pH值為4.09.0的戊二醛溶液浸泡組織材料,浸泡溫度為為4'C,浸泡時(shí)間為48小時(shí);(2)浸泡后的組織材料再以濃度為0.卜0.6%、pH值為4.06.0的丹寧酸溶液浸泡48小時(shí)以上,浸泡溫度1832'C。上述異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其中,所述的異種生物組織材料為可用于心血管植入的修補(bǔ)材料。上述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其中,所述的可用于心血管植入的修補(bǔ)材料為異種牛頸靜脈帶瓣或不帶瓣管道,牛頸靜脈帶瓣或不帶瓣血管補(bǔ)片,牛心包以及豬的主動(dòng)脈瓣,肺動(dòng)脈瓣,動(dòng)脈、靜脈血管通道及小腸粘膜下層。本發(fā)明所述的丹寧酸是一種植物多酚,屬于galloyl—glucose家族,其水溶性好,適當(dāng)劑量對(duì)人體無(wú)毒害作用。其分子結(jié)構(gòu)上含有多個(gè)親水性殘基,能特異性結(jié)合到富含脯氨酸蛋白(如膠原蛋白和彈性蛋白)的疏水區(qū)域并形成多個(gè)氫鍵。丹寧酸可能通過這些氫鍵穩(wěn)定組織材料細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白纖維、彈性蛋白纖維以及粘多糖等成分,一方面能顯著降低由彈力纖維粘多糖等物質(zhì)降解導(dǎo)致的鈣化,一方面還能改善材料的生物力學(xué)性能,增強(qiáng)抗疲勞性,從而延長(zhǎng)材料的在體內(nèi)的使用壽命。另外,丹寧酸還具有抗菌和減少蛋白抗原性的作用,這些特性也有助于增強(qiáng)材料的抗鈣化性能和生物相容性。本研究還發(fā)現(xiàn),單獨(dú)使用丹寧酸溶液交聯(lián)處理組織材料時(shí),適當(dāng)劑量、較高濃度的單寧酸溶液可一次性交聯(lián)組織材料中的膠原纖維、彈力纖維及蛋白多糖,交聯(lián)鍵以氫鍵為主,所得材料的生物相容明顯較傳統(tǒng)戊二醛處理的材料好。戊二醛交聯(lián)固定技術(shù)現(xiàn)廣泛應(yīng)用于心血管植入材料,其交聯(lián)作用的位點(diǎn)正好與丹寧?kù)o酸的作用位點(diǎn)互補(bǔ),鍵合的類型也不一樣,所以當(dāng)使用戊二醛與丹寧酸協(xié)同交聯(lián)時(shí),戊二醛交聯(lián)材料上的膠原蛋白,而丹寧酸同時(shí)交聯(lián)材料的膠原蛋白、彈蛋白纖維以及蛋白多糖,彌補(bǔ)了戊二醛交聯(lián)的不足,材料各種組分均得到了有效地交聯(lián),交聯(lián)鍵除氫鍵以外,還有共價(jià)鍵、絡(luò)合鍵等形式,由于使用丹寧酸與戊二醛協(xié)同交聯(lián)處理,材料的鍵合程度和力學(xué)性能均有較大幅度的提高,植入體內(nèi)后不易被宿主組織中的酶降解,減少了彈性蛋白降解的數(shù)量,從而降低材料的鈣化潛能,同時(shí)也能發(fā)揮戊二醛去除組織抗原性和消毒滅菌的作用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是經(jīng)本發(fā)明戊二醛一丹寧酸協(xié)同交聯(lián)方法和單獨(dú)丹寧酸交聯(lián)處理的組織材料與經(jīng)傳統(tǒng)戊二醛溶液交聯(lián)處理的組織材料相比較,具有以下特點(diǎn)1、丹寧酸能同時(shí)交聯(lián)組織材料細(xì)胞外基質(zhì)中膠原纖維、彈力纖維和粘多糖,減少組織植入體內(nèi)后降解,彌補(bǔ)戊二醛只交聯(lián)膠原纖維的不足,從而顯著提高材料的抗鈣化性能;2、丹寧酸還具有抗菌和減少蛋白抗原性的作用,這些特性也有助于增強(qiáng)材料的抗鈣化性能和生物相容性。3、用本發(fā)明處理的組織材料熱皺縮溫度比傳統(tǒng)的戊二醛處理組高2'C左右,說明經(jīng)本發(fā)明交聯(lián)的組織材料生物穩(wěn)定性增強(qiáng)。4、用本發(fā)明處理的組織材料的最大拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率高于傳統(tǒng)戊二醛處理組,說明經(jīng)本發(fā)明交聯(lián)的組織材料生物力學(xué)性能增強(qiáng),因此有助于延長(zhǎng)組織材料在體內(nèi)的使用壽命。下面結(jié)合附圖及最佳實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明,以使公眾對(duì)
發(fā)明內(nèi)容有整體和充分的了解,而并非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。前述部分已經(jīng)充分公開了本發(fā)明可以實(shí)施的保護(hù)范圍,因此凡依照本發(fā)明公開內(nèi)容進(jìn)行的任何本領(lǐng)域公知的等同替換,均屬于對(duì)本發(fā)明的侵犯。圖1為彈性纖維顯微鏡照片(左)與降解鈣化后的彈性纖維顯微鏡照片(右)比較;左圖藍(lán)色部分為彈性纖維,右圖褐色部分為鈣化點(diǎn),可以看出彈性纖維降解的地方鈣化嚴(yán)重。圖2為單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)牛頸靜脈管壁(左)彈性纖維與單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)牛頸靜脈管壁(右)彈性纖維的顯微鏡照片比較;可以看出左圖黑色部分比右圖黑色部分多且完整,說明左圖的彈性纖維(黑色部分)保存得較右圖的彈性纖維完整。圖3為單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)牛頸靜脈管壁(左)與單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)牛頸靜脈管壁(右)的鈣化點(diǎn)顯微鏡照片比較;可以看出左圖的褐色部分明顯少于右圖褐色部分,說明左圖鈣化點(diǎn)(褐色部分)明顯少于右圖。圖4為使用丹寧酸、戊二醛協(xié)同交聯(lián)的牛頸靜脈管壁(左)彈性纖維與單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)牛頸靜脈管壁(右)彈性纖維的顯微鏡照片比較;可以看出左圖深藍(lán)色部分比右圖深藍(lán)色部分多且完整,說明左圖的彈性纖維(深藍(lán)色部分)保存得較右圖的彈性纖維多且完整。圖5為使用丹寧酸、戊二醛協(xié)同交聯(lián)的牛頸靜脈管壁(左)與單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)牛頸靜脈管壁(右)的鈣化點(diǎn)顯微鏡照片比較;可以看出左圖的褐色部分明顯少于右圖褐色部分,說明左圖鈣化點(diǎn)(褐色部分)明顯少于右圖。圖6為單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)牛心包(左)與單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)牛心包(右)的鈣化點(diǎn)顯微鏡照片比較;可以看出左圖的褐色部分明顯少于右圖褐色部分,說明左圖鈣化點(diǎn)(褐色部分)明顯少于右圖。圖7為使用丹寧酸、戊二醛協(xié)同交聯(lián)的牛心包(左)與單獨(dú)使用戊二酸交聯(lián)牛心包(右)的鈣化點(diǎn)顯微鏡照片比較;可以看出左圖的褐色部分明顯少于右圖褐色部分,說明左圖鈣化點(diǎn)(褐色部分)明顯少于右圖。圖8為單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(左)彈性纖維與單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(右)彈性纖維的顯微鏡照片比較;可以看出左圖綠色部分明顯比右圖綠色部分多且完整,說明左圖的彈性纖維(綠色部分)保存得較右圖的彈性纖維多且完整。圖9為單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(左)與單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(右)的鈣化點(diǎn)顯微鏡照片比較;可以看出左圖的褐色部分明顯少于右圖褐色部分,說明左圖鈣化點(diǎn)(褐色部分)明顯少于右圖。圖10為使用丹寧酸、戊二醛協(xié)同交聯(lián)的豬主動(dòng)脈管壁(左)彈性纖維與單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(右)彈性纖維的顯微鏡照片比較;可以看出左圖綠色部分明顯比右圖綠色部分多且完整,說明左圖的彈性纖維(綠色部分)保存得較右圖的彈性纖維多且完整。圖11為使用丹寧酸、戊二醛協(xié)同交聯(lián)的豬主動(dòng)脈管壁(左)與單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(右)的鈣化點(diǎn)顯微鏡照片比較;可以看出左圖的褐色部分明顯少于右圖褐色部分,說明左圖鈣化點(diǎn)(褐色部分)明顯少于右圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明較佳實(shí)施例中使用的儀器和試劑為牛頸靜脈帶瓣管道及牛心包的來源取自河北大廠華安肉制品有限公司屠宰現(xiàn)場(chǎng);豬主動(dòng)脈瓣來源取自北京昌平第五肉聯(lián)廠屠宰現(xiàn)場(chǎng);丹寧酸sigma公司,分子生物學(xué)級(jí)別純度>99.9%;戊二醛北京化學(xué)試劑公司,分析純濃度50%Na2HP04:北京化學(xué)試劑公司,分析純級(jí)別純度〉99.5%;D-HanK's液此液體為自配,配方如下NaCl8.0g/L,KCL0.4g/LNa2HP04.12H200.12g/L,KH2P040.06g/L,D-Gl畫el.OOg/LNaHC030.35g/L,以雙蒸水配制,所用試劑均購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司,分析純級(jí)別;生理鹽水北京雙鶴藥業(yè)有限公司醫(yī)用級(jí)別濃度0.9°/o;SD大鼠來源北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司多聚甲醛工作濃度4%,北京化學(xué)試劑公司,分析純級(jí)別純度>99.9%;二甲苯北京化學(xué)試劑公司,分析純級(jí)別純度>99.5%;乙醇北京化學(xué)試劑公司,分析純級(jí)別;維多利亞藍(lán)北京化學(xué)試劑公司,生物染料級(jí)別。I型膠原纖維酶溶液(自配)I型膠原纖維酶(sigma公司,純度>99.9%),CaCl2(sigma公司,分子生物等級(jí),純度>99.9%),Trisbuffer(Progema公司,分子生物等級(jí),純度>99.9%);彈力纖維酶溶液(自配)I型膠原纖維酶(sigma公司,純度>99.9%),CaCl2(sigma公司,分子生物等級(jí),純度>99.9%),Trisbuffer(Progema公司,分子生物等級(jí),純度>99.9%)離心機(jī)日立型號(hào)CR21G;皮革收縮溫度測(cè)定儀中國(guó)皮革和制鞋工業(yè)研究院型號(hào)PS-03;原子吸收分光光度計(jì)日立,型號(hào)Z-8000;所涉及的試劑有HC1:北京化學(xué)試劑公司,分析純級(jí)別;氮?dú)獗本┭嗷咝麓呋瘎┯邢薰靖呒儯宦然Jsigma公司分析純;鈣標(biāo)準(zhǔn)品sigma公司純度>99.9%。具體效果的評(píng)價(jià)方法1、組織形態(tài)學(xué)檢査取本發(fā)明方法交聯(lián)后的組織材料,用4%多聚甲醛溶液固定,石蠟包埋,切成4微米厚的薄片,經(jīng)二甲苯脫蠟、系列酒精脫水,做HE染色、Masson染色、vanGieson或維多利亞藍(lán)行彈力纖維染色,觀察細(xì)胞及基質(zhì)中膠原纖維和彈力纖維等細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu);彈性纖維多且完整的說明該方法交聯(lián)效果好。2、膠原纖維酶降解試驗(yàn)取本發(fā)明方法交聯(lián)后的組織材料,在100ml的雙蒸水中漂洗3次(每次1小時(shí)),冷凍干燥;取20mg標(biāo)本置入1.2mlI型膠原纖維酶溶液(150U/mlI型膠原纖維酶溶于50mmTrisbuffer,10mmCaCl2中,pH7.4)中,37'C恒溫振浴(振頻650rpm)24小時(shí),然后低溫高速離心(10000rpm,4'C)10分鐘,lml雙蒸水洗滌3次,凍干后準(zhǔn)確稱取干重,計(jì)算被膠原纖維酶降解的組織占降解前組織干重的百分比,酶解后的部分標(biāo)本做組織形態(tài)學(xué)檢查;被膠原纖維酶講解組織占講解前組織干重的百分比越小,說明組織材料抗酶解能力越高。3、彈力纖維酶降解試驗(yàn)取本發(fā)明方法交聯(lián)后的組織材料,在100ml的雙蒸水中漂洗3次(每次1小時(shí)),冷凍干燥;取20mg標(biāo)本置入l.Oml彈力纖維酶溶液(20U/ml彈力纖維酶溶于100mmTrisbuffer,lmmCaCl2,0.02%NaN3,pH7.8)中,37。C恒溫振浴(振頻650rpm)48小曰寸,然后取出樣品低溫高速離心(10000rpm,4'C)10分鐘,lml雙蒸水洗滌3次,凍干后準(zhǔn)確稱取干重,計(jì)算被彈力纖維酶降解的組織占降解前組織干重的百分比,酶解后的部分標(biāo)本做組織學(xué)檢查;被彈力纖維酶講解組織占講解前組織干重的百分比越小,說明組織材料抗酶解能力越高。4、熱皺縮溫度測(cè)定取本發(fā)明方法交聯(lián)后的組織材料,裁剪成長(zhǎng)3cm、寬lcm的試條。用皮革收縮溫度測(cè)定儀測(cè)定熱皺縮溫度,溫度從40'C開始,升高速度為2'C/分鐘,每種標(biāo)本做3份,取平均值作為熱皺縮溫度;熱皺縮溫度越高,說明組織材料生物穩(wěn)定性越強(qiáng)。5、血管壁拉伸強(qiáng)度及斷裂伸長(zhǎng)率的測(cè)定取本發(fā)明方法交聯(lián)后的組織材料,裁剪成3cm長(zhǎng),0.5cm寬的片狀(n=6),測(cè)定材料的厚度,在力學(xué)測(cè)試平臺(tái)上進(jìn)行拉伸負(fù)荷及斷裂伸長(zhǎng)率的測(cè)試,并計(jì)算斷裂強(qiáng)度;其中斷裂強(qiáng)度表示材料的抗拉能力,斷裂伸長(zhǎng)率表示材料的變形能力;其血管壁拉伸強(qiáng)度值越高,伸長(zhǎng)率值越高,說明組織材料生物力學(xué)性能好。6、大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)觀察材料在體內(nèi)的炎性反應(yīng)程度和鈣化程度。取本發(fā)明方法交聯(lián)后的組織材料,裁成1平方厘米大小的片狀,埋植前以生理鹽水洗滌;取3周齡的雄性SD大鼠麻醉,消毒,在其腹部皮下切四個(gè)小口,放入待測(cè)試片,縫合;3周及2月后處死大鼠,取出試片,取一小塊用4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,做常規(guī)蘇木素一伊紅染色、Masson染色或vonKossa染色,觀察炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和鈣化情況;其余試片在105ll(TC下烘干4小時(shí),水解,原子吸收分光光度法測(cè)定鈣元素的含量,鈣元素含量越低,說明組織材料抗鈣化性能越好。本發(fā)明所用的生物材料,其中牛頸靜脈帶瓣管道、牛頸靜脈不帶瓣管道、牛頸靜脈帶瓣血管補(bǔ)片、牛頸靜脈不帶瓣血管補(bǔ)片、豬的主動(dòng)脈瓣、豬肺動(dòng)脈瓣、豬動(dòng)脈、豬靜脈血管通道及豬小腸粘膜下層及牛心包為同一性質(zhì)的生物材料;相同性質(zhì)的生物材料應(yīng)用于本發(fā)明所述方法,其所用試劑、具體操作步驟及達(dá)到的效果均相同,現(xiàn)以牛頸靜脈帶瓣管道、牛心包及豬的主動(dòng)脈瓣為例詳細(xì)說明本發(fā)明,其余材料在此不一一贅述。傳統(tǒng)戊二醛方法交聯(lián)處理牛頸靜脈帶瓣管道、牛心包及豬的主動(dòng)脈瓣三種組織材料方法步驟一樣,試劑用量濃度相同,所以在此只以牛頸靜脈帶瓣管道材料為例,戊二醛方法交聯(lián)處理其余材料就不一一舉例說明了。對(duì)比例1戊二酸方法交聯(lián)處理牛頸靜脈帶瓣管道(一)試劑配制0.6%戊二醛溶液配制50mmol/LHEPES緩沖液至500ml,調(diào)PH值為7.4,再取市售50%戊二醛溶液6ml溶于上述溶液。0.3、戊二醛溶液配制5Ommol/LHEPES緩沖液至500ml,調(diào)PH值為7.4,再取市售50%戊二醛溶液3ml溶于上述溶液。(二)材料準(zhǔn)備采集管徑為1224mm的牛頸靜脈管道長(zhǎng)約10cm,修剪表面的脂肪和多余的疏松結(jié)締組織,并置于D-Hank's液中漂洗后備用。(三)交聯(lián)處理過程1、先以0.6%戊二醛溶液潤(rùn)洗牛頸靜脈管腔內(nèi)外各一遍,再向腔內(nèi)注滿0.6%戊二醛溶液,然后置入含300ml0.6%戊二醛溶液的容器中在4'C下浸泡48小時(shí)。2、取出經(jīng)步驟l處理的材料,倒去腔內(nèi)的0.6%戊二醛溶液,以0.3%戊二醛溶液潤(rùn)洗腔內(nèi)外各一遍,再向腔內(nèi)注滿0.3%戊二醛溶液然后置入含300ml0.3%戊二醛溶液的容器中在4'C下浸泡7天以上。3、在使用前將上述經(jīng)本方法處理的材料置入生理鹽水漂洗多次,去除組織材料尚未結(jié)合的戊二醛。(四)結(jié)果評(píng)價(jià)1、組織形態(tài)學(xué)檢査如圖2所示,在SD大鼠皮下埋植3周后,經(jīng)vanGieson染色證實(shí),傳統(tǒng)戊二醛交聯(lián)的牛頸靜脈管壁(右)血管壁內(nèi)側(cè)彈性纖維(黑色部分)降解明顯。2、大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)如圖3所示,在SD大鼠皮下埋植2月后,VanKossa染色證實(shí),傳統(tǒng)戊二醛交聯(lián)的牛頸靜脈管壁(右)鈣化(褐色部分)嚴(yán)重。3、膠原纖維酶降解試驗(yàn)和彈力纖維酶降解試驗(yàn)傳統(tǒng)戊二醛交聯(lián)的牛頸靜脈管壁的抗酶解能力較低,見表l。實(shí)施例1單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)處理牛頸靜脈帶瓣管道;(一)試劑配制2.5%pH4.0丹寧酸溶液取市售丹寧酸12.5克溶于50mmol/LNa2HP04溶液至500ml,用鹽酸調(diào)節(jié)pH到4.0。(二)材料準(zhǔn)備采集管徑為1224mm的牛頸靜脈管道長(zhǎng)約10cm,修剪表面的脂肪和多余的疏松結(jié)締組織,并置于D-Hank's液中漂洗后備用。(三)交聯(lián)處理過程1、先以2,/opH4.0丹寧酸溶液潤(rùn)洗牛頸靜脈管腔內(nèi)外各一遍,再向腔內(nèi)注滿2.5%pH4.0丹寧酸溶液,然后置入含300ml2.5%pH4.0丹寧酸溶液的容器中在32'C下浸泡48小時(shí)。2、在使用前將上述經(jīng)本方法處理的材料置入生理鹽水漂洗多次,去除組織材料尚未結(jié)合的殘留丹寧酸。(四)結(jié)果評(píng)價(jià)1、組織形態(tài)學(xué)檢査如圖2所示,在SD大鼠皮下埋植3周后,經(jīng)vanGieson染色證實(shí),單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)牛頸靜脈管壁(左)血管壁內(nèi)側(cè)彈性纖維(黑色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)的管壁(右)彈性纖維保存完整。2、大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)如圖3所示,在SD大鼠皮下埋植2月后,VanKossa染色證實(shí),單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)牛頸靜脈管壁(左)血管壁鈣化程度(褐色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)牛頸靜脈管壁(右)鈣化程度輕。3、膠原纖維酶降解試驗(yàn)和彈力纖維酶降解試驗(yàn)丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)的牛頸靜脈管壁的抗酶解能力高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表1。表1牛頸靜脈管壁被酶解組織占總重量的百分比(%)(n=10)膠原纖維酶彈力纖維酶戊二醛交聯(lián)組31.28±5.61*18.34±5.97S丹寧酸交聯(lián)組8.55±4.54*4.83±2.16e*P<0.01訳O.014、熱皺縮溫度的測(cè)定丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組的熱皺縮溫度稍高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表2。表2牛頸靜脈材料管壁(n=6)熱皺縮溫度rc)戊二醛交聯(lián)組88.83±0.16*丹寧酸交聯(lián)組90.77±1.26**P<0.015、拉伸強(qiáng)度及斷裂伸長(zhǎng)率的測(cè)定丹寧酸交聯(lián)組的最大拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率均高于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表3。表3牛頸靜脈材料管壁(n=6)最大拉伸強(qiáng)度(mPa)斷裂伸長(zhǎng)率(%)戊二醛交聯(lián)組3.27±0.79*175.28±16.50**丹寧酸交聯(lián)組5.68±0.94*207.95±26.068*PO.01#P<0.056、鈣含量測(cè)定丹寧酸交聯(lián)組在3周和2月后的組織鈣含量均顯著低于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有非常顯著意義,見表4。___鈣含量(mg/g)牛頸靜脈材料管壁-_3周(n:10)_2月(n=10)戊二醛交聯(lián)組_35.03±9.58*111.74±34.01S丹寧酸交聯(lián)組_3.65±3.45*10.25±11.60tt111PO.01#P<0.01實(shí)施例2丹寧酸與戊二醛協(xié)同交聯(lián)處理牛頸靜脈帶瓣管道;(一)試劑配制0.3、戊二醛/0.3%丹寧酸混合溶液pH5.5:市售50。X戊二醛溶液3ml溶于50mmol/LNa2HP04溶液至500ml,再取市售丹寧酸0.5克溶于上述溶液,用鹽酸調(diào)節(jié)pH5.5。(二)材料準(zhǔn)備采集管徑為1224mm的牛頸靜脈長(zhǎng)約10cm,修剪表面的脂肪和多余的疏松結(jié)締組織,并置于D-Hank's液中漂洗后備用。(三)交聯(lián)處理過程1、以0.3n/。戊二醛/0.3M丹寧酸pH5.5混合溶液潤(rùn)洗腔內(nèi)外各一遍,再向腔內(nèi)注滿0.3%戊二酸/0.3%丹寧酸混合溶液然后置入含300ml0.3%戊二醛/0.3%丹寧酸pH5.5混合溶液的容器中在22'C下浸泡96小時(shí)。2、使用前將上述經(jīng)本方法處理的材料置入生理鹽水漂洗多次,去除組織材料尚未結(jié)合的殘留戊二醛及丹寧酸。(四)結(jié)果評(píng)價(jià)1、組織形態(tài)學(xué)檢査如圖4所示,在SD大鼠皮下埋植3周后,經(jīng)vanGieson染色證實(shí),丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)牛頸靜脈管壁(左)血管壁內(nèi)側(cè)彈性纖維(黑色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)的管壁(右)彈性纖維保存完整。2、大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)如圖5所示,在SD大鼠皮下埋植2月后,VanKossa染色證實(shí),丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)牛頸靜脈管壁(左)血管壁鈣化程度(褐色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)牛頸靜脈管壁(右)鈣化程度輕。3、膠原纖維酶降解試驗(yàn)和彈力纖維酶降解試驗(yàn)丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)的牛頸靜脈管壁的抗酶解能力高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表5。表5牛頸靜脈材料管壁被酶解組織占總重量的百分比(%)(n=10)膠原纖維酶彈力纖維酶戊二醛交聯(lián)組28.63±6.02'16.67±4.35**丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組12.09±3.93*4.12±1.068*P〈0.01ftP〈0.014、熱皺縮溫度的測(cè)定丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組的熱皺縮溫度稍高二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表6。表6牛頸靜脈材料管壁(n=6)熱皺縮溫度('C)戊二醛交聯(lián)組88.73±0.1,丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組90.96±1.12**P<0.015、拉伸強(qiáng)度及斷裂伸長(zhǎng)率的測(cè)定丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組的最大拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率均高于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表7。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>6、鈣含量測(cè)定丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組在3周和2月后的組織鈣含量均顯著低于戊二酲交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有非常顯著意義,見表8。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>P〈0.01#P〈0.01實(shí)施例3單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)處理牛心包;(一)試劑配制1。%pH5.5丹寧酸溶液配置50mmol/LNa2HPO4緩沖液至500ml,再取市售丹寧酸5克溶于上述溶液,用鹽酸調(diào)pH值為5.5。(二)材料準(zhǔn)備采集面積約8X8cr^的牛心包,修剪表面的脂肪和多余的疏松結(jié)締組織,并置于D-Hank's液中漂洗后備用。(三)交聯(lián)處理過程1、先以1%pH5.5丹寧酸溶液潤(rùn)洗牛心包材料一遍,然后置入含300ml1%pH5.5丹寧酸溶液的容器中在22'C下固定96小時(shí)。2、使用前將上述經(jīng)本方法處理的材料置入生理鹽水漂洗多次,去除組織材料尚未結(jié)合的殘留丹寧酸。(四)結(jié)果評(píng)價(jià)1、大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)如圖6所示,在SD大鼠皮下埋植2月后,VanKossa染色證實(shí),丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)牛心包(左)血管壁鈣化程度(褐色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)牛心包(右)鈣化程度輕。2、膠原纖維酶降解試驗(yàn)丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)的牛心包的抗酶解能力高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表9。表9牛心包(n=10)被酶解組織占總重量的百分比(%)戊二酸交聯(lián)組7.28±2.61*丹寧酸交聯(lián)組4.37±1.82**P〈0.053、熱皺縮溫度的測(cè)定丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組的熱皺縮溫度稍高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表IO。表10牛心包(n=6)熱皺縮溫度('C)戊二醛交聯(lián)組86.08±0.23*丹寧酸交聯(lián)組87.36±0.53**P〈0.Q54、拉伸強(qiáng)度及斷裂伸長(zhǎng)率的測(cè)定丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組的最大拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率均高于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表11。表ll牛心包(n-6)最大拉伸強(qiáng)度(mPa)斷裂伸長(zhǎng)率(%)戊二醛交聯(lián)組20.84±3.86*45.98±7.138丹寧酸交聯(lián)組22.76±4.07*50.01±7.25***P<0.05#P〈0.055、鈣含量測(cè)定丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組在3周和2月后的組織鈣含量均顯著低于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有非常顯著意義,見表12。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>*P〈0.01#P〈0.01實(shí)施例4丹寧酸與戊二醛協(xié)同交聯(lián)處理牛心包;(一)試劑配制0.1%pH4戊二醛溶液1)、50mmol/LHEPES緩沖液市售HEPES粉末11.92克溶于1000ml蒸餾水中,調(diào)節(jié)PH到4.0;2)、0.1%戊二醛溶液市售50%戊二醛溶液lml溶于50mmol/LHEPES緩沖液中至500ml。0.6、戊二醛/0.3%丹寧酸混合溶液pH5.5:市售50%戊二醛溶液6ml溶于50mmol/LNa2HPCV溶液至500ml,再取市售丹寧酸1.5克溶于上述溶液,用鹽酸調(diào)節(jié)pH5.5。(二)材料準(zhǔn)備采集面積約8X8ci^的牛心包,修剪表面的脂肪和多余的疏松結(jié)締組織,并置于D-Hank's液中漂洗后備用。(三)交聯(lián)處理過程1、先以0.1%pH4戊二醛溶液潤(rùn)洗牛心包材料一遍,然后置入含300ml0.1%pH4戊二醛溶液的容器中在4'C下固定48小時(shí)。2、取出經(jīng)步驟1處理的材料,以0.6。/。戊二醛/0.3n/。丹寧酸pH5.5混合溶液潤(rùn)洗一遍,然后置入含300ml0.6%戊二醛/0.3%丹寧酸混合溶液的容器中在32'C下固定72小時(shí)。3、使用前將上述經(jīng)本方法處理的材料置入生理鹽水漂洗多次,去除組織材料尚未結(jié)合的殘留戊二醛及丹寧酸。(四)結(jié)果評(píng)價(jià)1、大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)如圖7所示,在SD大鼠皮下埋植2月后,VanKossa染色證實(shí),丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)牛心包(左)血管壁鈣化程度(褐色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)牛心包(右)鈣化程度輕。2、膠原纖維酶降解試驗(yàn)丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組的牛心包的抗酶解能力高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表13。表13<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>*P<0.013、熱皺縮溫度的測(cè)定丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組的熱皺縮溫度稍高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表14。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>*P<0.014、拉伸強(qiáng)度及斷裂伸長(zhǎng)率的測(cè)定丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組的最大拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率均高于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表15。表15<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>*P<0.01#P<0.055、鈣含量測(cè)定丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組在3周和2月后的組織鈣含量均顯著低于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有非常顯著意義,見表16。表16鈣含量(mg/g)午心包3周(n=10)2月(n=10)戊二醛交聯(lián)組86.54土8.32'168.02±20.93"丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組8.43±2.98*56.22±8.71'P〈0.01駅O.01實(shí)施例5單獨(dú)使用丹寧酸交聯(lián)處理豬主動(dòng)脈瓣管壁;(一)試劑配制6%pH6丹寧酸溶液取市售丹寧酸30.0克溶于50mmol/LNa2HP04溶液至500ml,用鹽酸調(diào)節(jié)pH到6.0。(二)材料準(zhǔn)備采集管徑為1224mm的豬主動(dòng)脈帶瓣管道長(zhǎng)約6cm,修剪表面的脂肪和多余的疏松結(jié)締組織,并置于D-Hank's液中漂洗后備用。(三)固定過程1、先以6WpH6丹寧酸溶液潤(rùn)洗腔內(nèi)外各一遍,再向腔內(nèi)注滿6n/opH6丹寧酸溶液,然后置入含300ml6%pH6丹寧酸溶液的容器中在18'C下固定24小時(shí)。2、使用前將上述經(jīng)本方法處理的材料置入生理鹽水漂洗多次,去除組織材料尚未結(jié)合的殘留丹寧酸。(四)結(jié)果評(píng)價(jià)1、組織形態(tài)學(xué)檢査如圖8所示,在SD大鼠皮下埋植3周后,經(jīng)維多利亞藍(lán)染色證實(shí),丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(左)血管壁彈性纖維(綠色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(右)彈性纖維保存完整。2、大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)如圖9所示,在SD大鼠皮下埋植2月后,VanKossa染色證實(shí),丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(左)血管壁鈣化程度(褐色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二醒交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(右)鈣化程度輕。3、膠原纖維酶降解試驗(yàn)和彈力纖維酶降解試驗(yàn)丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)的豬主動(dòng)脈管壁的抗酶解能力高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表17。表17豬主動(dòng)脈管壁被酶解組織占總重量的百分比(%)(n=10)膠原纖維酶彈力纖維酶戊二醛交聯(lián)組23.18±4.05*54.76±4.27S丹寧酸交聯(lián)組2.95±1.13*5.45±1.89***P<0.01#P〈0.014、熱皺縮溫度的測(cè)定丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組的熱皺縮溫度稍高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表18。表18豬主動(dòng)脈管壁(n=6)熱皺縮溫度('c)戊二醛交聯(lián)組87.69±0.21*丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組89.78±0.56**P〈0.015、拉伸強(qiáng)度及斷裂伸長(zhǎng)率的測(cè)定丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組的最大拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率均高于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表19。表19豬主動(dòng)脈管壁(n=6)最大拉伸強(qiáng)度(mPa)斷裂伸長(zhǎng)率(%)戊二醛交聯(lián)組5.87士1.82'115.32±13.57S丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組6.71±2.45*130.09±16.12***P<0.05ttP〈0.056、鈣含量測(cè)定丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組在3周和2月后的組織鈣含量均顯著低于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有非常顯著意義,見表20。表20..、、..—,鈣含量(mg/g)裕王切抓官壁3周(n=10)2月(n=10)戊二醛交聯(lián)組42.26±5.38*136.74±29.37**丹寧酸單獨(dú)交聯(lián)組13.35±3.29*29.64±5.32***P<0.01#P<0.01實(shí)施例6丹寧酸與戊二醛協(xié)同交聯(lián)處理豬主動(dòng)脈瓣管壁;(一)試劑配制1.5%pH9戊二醛1).50mmol/LHEPES緩沖液市售HEPES粉末11.92克溶于1000ml蒸餾水中,調(diào)節(jié)PH到9.0;2).1.5%戊二醛溶液市售50%戊二醛溶液18ml溶于50mmol/LHEPES緩沖液中至500ml。0.6、pH6丹寧酸溶液取市售丹寧酸30.0克溶于50mmol/LNa2HP04溶液至500ml,用鹽酸調(diào)節(jié)pH到6.0。(二)材料準(zhǔn)備采集管徑為1224mm的豬主動(dòng)脈帶瓣管道長(zhǎng)約6cm,修剪表面的脂肪和多余的疏松結(jié)締組織,并置于D-Hank's液中漂洗后備用。(三)固定過程1、先以1.5y。pH9戊二醛溶液潤(rùn)洗腔內(nèi)外各一遍,再向腔內(nèi)注滿1.5%pH9戊二醛溶液,然后置入含300mll.5%pH9戊二醛溶液的容器中在4'C下固定48小時(shí)。2、取出經(jīng)步驟l處理的材料,倒去腔內(nèi)的1.5%pH9戊二醛溶液,以0.6%pH6丹寧酸溶液潤(rùn)洗腔內(nèi)外各一遍,再向腔內(nèi)注滿0.6%pH6丹寧酸溶液然后置入300ml0.6%pH6丹寧酸溶液的容器中在22。C下固定96小時(shí)。3、使用前將上述經(jīng)本方法處理的材料置入生理鹽水漂洗多次,去除組織材料尚未結(jié)合的殘留戊二醛及丹寧酸。(四)結(jié)果評(píng)價(jià)1、組織形態(tài)學(xué)檢査如圖10所示,在SD大鼠皮下埋植3周后,經(jīng)維多利亞藍(lán)染色證實(shí),丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(左)血管壁彈性纖維(綠色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二醛交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(右)彈性纖維保存完整。2、大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)如圖11所示,在SD大鼠皮下埋植2月后,VanKossa染色證實(shí),丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(左)血管壁鈣化程度(褐色部分)明顯較單獨(dú)使用戊二酸交聯(lián)豬主動(dòng)脈管壁(右)鈣化程度輕。3、膠原纖維酶降解試驗(yàn)和彈力纖維酶降解試驗(yàn)丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)的豬主動(dòng)脈管壁的抗酶解能力高于戊二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表21。表21豬主動(dòng)脈管壁被酶解組織占總重量的百分比(%)(FlO)膠原纖維酶彈力纖維酶戊二醛交聯(lián)組24.23±5.85*56.65±6.39**丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)3.15±0.99*5.83±1.49S*P〈0,01ttP〈0.014、熱皺縮溫度的測(cè)定丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組的熱皺縮溫度稍高二醛交聯(lián)組,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表22。表22豬主動(dòng)脈管壁(n-6)熱皺縮溫度('c)戊二醛交聯(lián)組87.57±0.19'丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組90.02±0.61**P〈0.015、拉伸強(qiáng)度及斷裂伸長(zhǎng)率的測(cè)定丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組的最大拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率均高于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著意義,見表23。表23<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>*P〈0.05ttP〈0.056、鈣含量測(cè)定丹寧酸戊二醛協(xié)同交聯(lián)組在3周和2月后的組織鈣含量均顯著低于戊二醛交聯(lián)組,且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有非常顯著意義,見表24。表24<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>權(quán)利要求1、一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其特征在于使用丹寧酸溶液浸泡組織;所述的丹寧酸溶液的濃度為1~6%,溶液pH值為4.0~6.0,浸泡溫度18~32℃,浸泡時(shí)間為24~96小時(shí)。2、一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其特征在于在常規(guī)化學(xué)抗鈣化改性處理的過程中使用丹寧酸溶液協(xié)同處理組織材料。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其特征在于,所述的常規(guī)化學(xué)抗鈣化改性處理為戊二醛交聯(lián)處理或環(huán)氧化合物交聯(lián)處理。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其特征在于,所述的常規(guī)化學(xué)抗鈣化改性處理為戊二醛交聯(lián)處理。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其特征在于,具體步驟為-用濃度為0.1%1.5%戊二醛/0.1%0.6%丹寧酸的混合溶液,pH值為4.06.0,浸泡組織材料,浸泡溫度1832'C,浸泡時(shí)間為48小時(shí)以上。6、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其特征在于,具體步驟為(1)用濃度為0.11.5%,pH值為4.09.0的戊二醛溶液浸泡組織材料,浸泡溫度為為4'C,浸泡時(shí)間為48小時(shí);(2)浸泡后的組織材料再以濃度為0.1%1.5%戊二醛/0.1°/。0.6%丹寧酸混合溶液,pH值為4.06.0,浸泡48小時(shí)以上,浸泡溫度1832'C。7、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其特征在于,具體步驟為(1)用濃度為0.11.5%,pH值為4.09.0的戊二醛溶液浸泡組織材料,浸泡溫度為為4。C,浸泡時(shí)間為48小時(shí);(2)浸泡后的組織材料再以濃度為0.1~0.6%、pH值為4.06.0的丹寧酸溶液浸泡48小時(shí)以上,浸泡溫度18~32°C。8、根據(jù)權(quán)利要求1~7中任意一項(xiàng)所述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其特征在于,所述的異種生物組織材料為可用于心血管植入的修補(bǔ)材料。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其特征在于,所述的可用于心血管植入的修補(bǔ)材料為異種牛頸靜脈帶瓣或不帶瓣管道,牛頸靜脈帶瓣或不帶瓣血管補(bǔ)片,牛心包以及豬的主動(dòng)脈瓣,肺動(dòng)脈瓣、動(dòng)脈、靜脈血管通道及小腸粘膜下層。全文摘要本發(fā)明公開了一種異種生物組織材料的抗鈣化改性方法,其是使用丹寧酸溶液浸泡組織;所述的丹寧酸溶液的濃度為1~6%,溶液pH值為4.0~6.0,浸泡溫度18~32℃,浸泡時(shí)間為24~96小時(shí)。本發(fā)明所述方法能同時(shí)交聯(lián)組織材料細(xì)胞外基質(zhì)中膠原纖維、彈力纖維和粘多糖,減少組織植入體內(nèi)后降解,彌補(bǔ)現(xiàn)有戊二醛只交聯(lián)膠原纖維的不足,顯著提高材料抗鈣化性能;且具有抗菌和減少蛋白抗原性的作用,有助于增強(qiáng)材料的抗鈣化性能和生物相容性。本發(fā)明交聯(lián)的組織材料生物穩(wěn)定性好,生物力學(xué)性能增強(qiáng),使用壽命長(zhǎng)。文檔編號(hào)A61L27/00GK101161293SQ200610113679公開日2008年4月16日申請(qǐng)日期2006年10月12日優(yōu)先權(quán)日2006年10月12日發(fā)明者周建業(yè),德王,胡盛壽申請(qǐng)人:胡盛壽;周建業(yè);王德
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