專利名稱：四環(huán)素衍生物在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類四環(huán)素衍生物的用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
四環(huán)素化合物有如下通式結(jié)構(gòu) 母核環(huán)系的編號(hào)如下 四環(huán)素以及其5-羥基(土霉素)和7-氯(金霉素)衍生物存在于自然界，是眾所周知的抗生素。天然四環(huán)素可不失其抗生素性質(zhì)而進(jìn)行修飾，盡管必須保留結(jié)構(gòu)中的某些元素。在Mitscher的“The Chemistry Of Tet racyclines，Chapter 6，Mrcel Dekker，Publishers，New York 1978)”一書中，已經(jīng)闡述了在四環(huán)素的基本結(jié)構(gòu)中哪些位置可以或不可以進(jìn)行修飾。根據(jù)Mitscher的說法，四環(huán)素環(huán)系的5-9位的取代基進(jìn)行修飾，可不失其抗生素性質(zhì)。但在基本環(huán)系的1-4位及10-12位改變或被取代基代替，通常會(huì)導(dǎo)致合成的四環(huán)素實(shí)質(zhì)上降低或失去抗微生物效果。一些化學(xué)修飾的無抗微生物效果的例子(以下稱為CMT)有4-脫二甲氨基四環(huán)素，4-脫二甲氨基脫氧脫甲四環(huán)素(6-脫甲基-6-脫氧-4-脫二甲氨基四環(huán)素)，4-脫二甲氨基二甲氨四環(huán)素(7-二甲氨基-4-脫二甲氨基四環(huán)素)，及4-脫二甲氨基強(qiáng)力霉素(5-羥基-6-脫氧-4-脫二甲氨基四環(huán)素)。
一些4-脫二甲氨基四環(huán)素衍生物公開在美國專利Nos.3,029,284和5,122,519中，包括6-脫甲基-6-脫氧-4-脫二甲氨基四環(huán)素和5-羥基-6-脫氧-4-脫二甲氨基四環(huán)素，同時(shí)在D環(huán)的C-7位和C-9位有氫和其它取代基。這些取代基包括氨基，硝基，二(低級烷基)氨基和單(低級烷基)氨基或鹵素。6-脫甲基-6-脫氧-4-脫二甲氨基四環(huán)素衍生物和5-羥基-6-脫氧-4-脫二甲氨基四環(huán)素衍生物據(jù)稱可被用作抗菌劑。
其它在A環(huán)C4位帶有一個(gè)肟基的4-脫二甲氨基四環(huán)素衍生物公開在美國專利Nos.3,622,627和3,824,285中。這些肟衍生物在C7位有氫和鹵素作為取代基，包括7-鹵-6-脫甲基-6-脫氧-4-脫二甲氨基-4-肟基四環(huán)素，以及7-鹵-5-羥基-6-脫氧-4-脫二甲氨基-4-肟基四環(huán)素。
在4-脫二甲氨基四環(huán)素A環(huán)C4位取代了烷基氨基(NH-烷基)，以及烷基腙(N-NH-烷基)。這些化合物因?yàn)樗鼈兊目咕钚远阎⒁娒绹鴮＠鸑os.3,345,370，3,609,188，3,622,627，3,502,660，3,509,184，3,502,696，3,515,731，3,265,732，5,122,519，3,849,493，3,772,363，以及3,829,453。
除了作為抗生素，四環(huán)素已被描述有許多其它用途，如已知四環(huán)素還有抑制膠原蛋白破壞酶的活性，如胞間質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)，包括膠原蛋白酶(MMP-1)，白明膠酶(MMP-2)和溶基質(zhì)素(MMP-3)。Golub等，J.Periodotit.Res.2012-23(1985)；Golub等，Crit.Revs.Oral Biol.Med.2297-322(1991)；美國專利Nos.4,666,897；4,704,383；4,935,411；4,935,412。此外，已知四環(huán)素可以抑制哺乳動(dòng)物骨骼肌消耗和蛋白降解，美國專利No.5,045,538，并能增強(qiáng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞白介素-10的產(chǎn)生。
而且，在美國專利No.Re.34,656中，四環(huán)素被報(bào)道可增強(qiáng)骨蛋白合成，在美國專利No.4,704,383中報(bào)道四環(huán)素在組織培養(yǎng)中有減少骨吸收的作用。
同樣地，Golub等的美國專利No.5,532,227公開了四環(huán)素類可以改善蛋白質(zhì)過多的糖基化作用。特別是，四環(huán)素類抑制由糖尿病人過量的膠原糖基化作用引起的過量膠原交聯(lián)。
美國專利No.5,532,227公開了已知在發(fā)炎的情況下，如發(fā)生牛皮癬時(shí)，四環(huán)素類抑制過量磷脂酶A2活性。另外，已知四環(huán)素類還抑制環(huán)氧酶-2(cycloxygenase-2，COX-2)、腫瘤壞死因子(TNF)、氧化氮和IL-1(白細(xì)胞介素-1)。
這些性質(zhì)使四環(huán)素用于治療許多疾病。例如對四環(huán)素類包括非抗微生物藥的四環(huán)素類在內(nèi)的用途有許多建議，可以有效治療關(guān)節(jié)炎。例如，greenwald等的文章中提到，“四環(huán)素類抑制反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎金屬蛋白酶活性，且與氟比洛芬共同使用可改善骨損害”(Journal Of Rheumatology 19927-938(1992))；Greenwald等認(rèn)為，″與MMP抑制劑共用可治療毀滅性的關(guān)節(jié)炎；在基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制中，四環(huán)素類起著重要作用“(Therapeutic Potential，Annals Of theNew York AcademyOf Sciences 732181-198(1994))；Kloppenburg等，Minocycline in Active RheumatoidArthritis，Arthritis Rheum 37629-636(1994)；Ryan等的“二甲氨四環(huán)素在活動(dòng)性變形性關(guān)節(jié)炎治療中的作用”，Arthritis Rheum 37629-636(1994)；Ryan等，″四環(huán)素改善骨關(guān)節(jié)炎破裂”，CurrentOpinion in Rheumatology 8238-247(1996)；O′Dell等，“二甲氨四環(huán)素或安慰劑治療早期變形性關(guān)節(jié)炎”，Arthritis Rheum 40842-848(1997)。
也有人建議用四環(huán)素類治療皮疾病。例如white等，Lancet，Apr.29，p966(1989)報(bào)道說二甲胺四環(huán)素可有效治療大皰型表皮松解癥，該病是一種危急生命的皮膚病，被認(rèn)為與膠原蛋白酶有關(guān)。
此外，也有研究建議四環(huán)素類和金屬蛋白酶抑制劑可用于抑制腫瘤發(fā)展，DeClerck等，Annals N.Y.Acad.Sci.，732222-232(1994)，骨吸收，Rifkin等，Annals N.Y.Acad.Sci.，732165-180(1994)，血管生成，Maragoudakis等，Br.J.Pharmacol，111894-902(1994)，并且可能具有抗炎的性質(zhì)，Ramamurthy等，Annals N.Y.Acad.Sci，732，427-430(1994)。
綜上所述，四環(huán)素類已經(jīng)被認(rèn)為能有效治療許多疾病和病癥。所以，需要有新的而且甚至更多有用的衍生物。

發(fā)明內(nèi)容
在此公開的化合物是四環(huán)素的衍生物，均顯示出抗菌和/或抗癌活性。
在一個(gè)優(yōu)選方案中，本發(fā)明涉及一種用于抑制細(xì)菌或腫瘤生長的方法，包括對所述需要處理的對象給予有效量的四環(huán)素組合物或其鹽，包括如下通式
其中R選自CH2N(RaRb)或 RaRb是C1～C6烷基；Rc和Rd是(CH2)nCHRe，n是0或1，且Re是H，C1～C6烷基，或NH2，以及X是NH，S，或CH2；R1是H或OH；R2是H，OH，＝O，或OCOR8，其中R8是C1～C6烷基，或可選擇的，R2是N(R9)2，其中R9是氫或C1～C6低級烷基，或R9CO，條件是當(dāng)R2是羰基或N(R9)2時(shí)，R3和R4是H或CH3，R3和R4不能同時(shí)是CH3或同時(shí)是H；5a氫是α或β；R3和R4是H，CH3或F，條件是當(dāng)R3是CH3時(shí)，R4是H或F，當(dāng)R4是CH3時(shí)，R3是H或F，R4和R5不能同時(shí)是F；R5和R7是鹵素，H，NO2，N3，N2+，C2H5OC(S)S-，CN，NR10R11，其中R10和R11是H，C1～C10烷基，R12(CH2)nCO-，其中n是0～5，且R9是H，NH2，選自直鏈、支鏈或環(huán)狀C1～C10烷基的單或二取代氨基，條件是R10和R11不能同時(shí)是R12(CH2)nCO-；可選擇的，R7是叔丁基；R6是鹵素、乙炔、R13-C6H5，其中R13是NO2，鹵素，乙酰氨基，氨基，苯基，烷基或烷氧基。
在另一個(gè)優(yōu)選方案中，本發(fā)明涉及一種用于抑制細(xì)菌或腫瘤生長的方法，包括對所述需要處理的對象給予有效量的四環(huán)素組合物或其鹽，包括如下通式
其中R選自CH2N(RaRb)或 式中，RaRb是C1～C6烷基；Rc和Rd是(CH2)nCHRe，n是0或1且Re是H，C1～C6烷基，或NH2，X是NH，S，或CH2；R1是H或OH；R2是H或OH；R3是H或CH3；R4和R6是鹵素，H，NO2，N3，N2+，C2H5OC(S)S-，CN，NR7R8，其中R7和R8是H，C1～C10烷基，R9(CH2)nCO-，其中n是0～5，且R9是H，NH2，選自直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-C10烷基的單或二取代氨基，條件是R7和R8不能同時(shí)是R9(CH2)nCO-；且R6是H或鹵素，乙炔，R10-C6H5，其中R10是NO2，鹵素，乙酰氨基，氨基，苯基，烷基，或烷氧基。
在另一個(gè)優(yōu)選方案中，本發(fā)明涉及一種用于抑制細(xì)菌或腫瘤生長的方法，包括對所述需要處理的對象給予有效量的四環(huán)素組合物或其鹽，包括如下通式
其中R選自CH2N(RaRb)或 式中，RaRb是C1～C6烷基；Rc和Rd是(CH2)nCHRe，n是0或1，且Re是H，C1～C6烷基，或NH2，X是NH，S，或CH2；R1，R2是H或N(R9)2，其中R9是H或C1～C6烷基，條件是R1和R2不能同時(shí)是N(R9)2，R1，R2還可以是N(R10)3I，其中R10是C1～C6烷基，條件是R1，R2不能同時(shí)是N(R10)3I；R3是H；R4和R5是H，CH3或F，條件是當(dāng)R4是CH3時(shí)，R5是H或F，當(dāng)R5是CH3時(shí)，R4是H或F，且R4和R5不能同時(shí)是F；R6和R8是鹵素，H，NO2，N3，N2+，C2H5OC(S)S-，CN，N R11R12，其中R11和R12是H，C1～C10烷基，R13(CH2)nCO-，其中n是0～5，R13是H，NH2，選自直鏈、支鏈或環(huán)狀C1～C10烷基的單或二取代氨基，條件是R10和R11不能同時(shí)是R12(CH2)nCO-；R8還可以是叔丁基，R7是H或鹵素。
在又一個(gè)優(yōu)選方案中，本發(fā)明涉及一種用于抑制細(xì)菌或腫瘤生長的方法，包括對所述需要處理的對象給予有效量的四環(huán)素組合物或其鹽，包括如下通式
其中R選自CH2N(RaRb)或 Ra Rb是C1～C6；Rc和Rd是(CH2)nCHRe，n是0或1，Re是H，烷基(C1～C6)，NH2，X是NH，S，或CH2；R1，R2是H或N(R9)2式中，R9是氫或低級烷基(C1～C6)，條件是R1和R2均不可以是N(R9)2。
R3是H，OH，＝O，OCO R10，其中R10是C1～C6，或可選擇的，R3是N(R9)2式中，R9是氫或C1～C6，條件是當(dāng)R23是＝O或N(R9)2時(shí)，R4和R5是H或CH3，且R4和R5不能同時(shí)是CH3或H；5a氫是α或β；R4和R5是H，CH3或F，條件是當(dāng)R4是CH3時(shí)，R5是H或F，當(dāng)R5是CH3時(shí)，R4是H或F，且R4和R5不能同時(shí)是F；R6和R8是鹵素，H，NO2，N3，N2+，C2H5OC(S)S-，CN，N R10R11，其中R10和R11是H，烷基(C1～C10)，R12(CH2)nCO-，其中n是0～5，R12是H，NH2，選自直鏈、支鏈或環(huán)狀C1～C10烷基的單或二取代氨基，條件是R10和R11均為R12(CH2)nCO-，或者，可選擇的，R8是叔丁基；R7是H或鹵素，乙炔，R12-C6H5，其中R12是NO2，鹵素，乙酰氨基，氨基，苯基，烷基，或烷氧基。
在另一個(gè)優(yōu)選方案中，本發(fā)明涉及一種用于抑制細(xì)菌或腫瘤生長的方法，包括對所述需要處理的對象給予有效量的四環(huán)素組合物或其鹽，包括如下通式 其中R1是H或N(CH3)2；R2是H，CH3或OCOCH3；R3是H或CH3；R4是H；R5是H，N(CH3)2，NH2，N(C4H9)2，N(C6H13)2，N(3，3-二甲基丁基)2，N3，N2+，NO2，NHCOCH3，NH(n-丙基)2，NH-異丁基，NH-異丁基甲基，NH(環(huán)丁基)，NH(環(huán)丁基甲基)；R6是H，NO2，NH2，(CH3)2CHNH，N3，NHCOCH3，N2+，N3或(CH3)3C。
在另一個(gè)優(yōu)選方案中，本發(fā)明涉及一種用于抑制細(xì)菌或腫瘤生長的方法，包括對所述需要處理的對象給予有效量的四環(huán)素組合物或其鹽，包括如下通式 其中R1是H或N(CH3)2；R2是H，OH或OCOCH3；R3是H或CH3；R4是H；R5是H，N(CH3)2；N(C4H9)2，N(C6H13)2，N(3，3-二甲基丁基)2；N3，N2+，NO2，NHCOCH3，NH(n-丙基)2，NH-異丁基，NH-異丁基甲基，N(CH3CO)(異丁基)，NH(環(huán)丁基)，NH(環(huán)丁基甲基)，或NH2；R6是H，NO2，NH2，(CH3)2CHNH，N3，NHCOCH3，N2+或(CH3)3C。
以下實(shí)施例描述了本發(fā)明各種物質(zhì)的制備。
HPLC分析用Waters反相層析C18-對稱柱，使用含0.1％TFA的水和乙腈作為洗脫劑。
分析LC/MS用配備系列1100 MSD檢測器的Hewlett Packard Series1100液相色譜儀進(jìn)行，并帶有ES電離模式及于270nm的紫外檢測，用4.6×100mm柱，流速是0.4ml/min。制備HPLC用Gilson系列HPLC，并帶有270nm紫外檢測，用19×150mm柱，流速是15ml/min，1H NMR用Bruker 300 MHz核磁儀在氘代甲醇中進(jìn)行。
9-硝基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，在0℃向鹽酸強(qiáng)力霉素(1g，2.08mmol)在30ml濃硫酸的溶液中，加硝酸鉀(252mg，2.49mmol)。產(chǎn)生的混合物在0℃攪拌20分鐘，然后在攪拌下注入1.2L冷乙醚。濾出沉淀的固體，用冷的醚洗滌，并在真空中干燥，得到1.22g米色的產(chǎn)物。如需要，將產(chǎn)物溶于甲醇進(jìn)行純化，過濾并將濾液傾入乙醚，濾出固體進(jìn)行干燥。
9-氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向9-硝基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽(1g，1.7mmol)在35ml乙二醇一甲基醚和5ml甲醇的溶液中，攪拌下加入700mg 10％Pd/C。反應(yīng)混合物在常壓下氫化6小時(shí)。用硅藻土濾去催化劑，用甲醇洗。濃縮濾液，然后攪拌下滴加至800ml冷乙醚中。濾去分離出的固體，用冷乙醚洗滌，并真空干燥，得到843mg米色的產(chǎn)物。
9-異丙基氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向攪拌的9-氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽(100mg，0.18mmol)在10ml乙二醇一甲基醚的溶液中，加入0.05ml濃硫酸，0.5ml丙酮和100mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化1小時(shí)15分鐘，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮濾液，然后攪拌下傾入150ml冷乙醚中。濾出沉淀的固體，用冷乙醚洗滌，并真空干燥，得到109mg米色的產(chǎn)物。將產(chǎn)物溶于甲醇進(jìn)行純化，過濾并將濾液傾入乙醚。濾出形成的固體并進(jìn)行干燥。
9-乙酰氨基強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向9-氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽(72mg，0.13mmol)在1.5ml 1，3-二甲基-2-咪唑并烷酮的溶液中加入70mg碳酸氫鈉，再加入0.05ml乙酰氯化物?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時(shí)，然后過濾。濃縮濾液，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出沉淀的固體，用冷的乙醚洗滌，并真空干燥，得到92mg產(chǎn)物。
9-重氮-強(qiáng)力霉素硫酸鹽鹽酸鹽攪拌下，向冷卻在冰浴中的9-氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽(300mg，0.54mmol)在9ml 0.1N鹽酸的甲醇溶液內(nèi)，加入0.3ml正丁基亞硝酸酯。溶液在0℃攪拌30分鐘，然后攪拌下傾入300ml冷乙醚中。濾出沉淀的固體，并真空干燥，得到256mg橙棕色產(chǎn)物。
9-疊氮基強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向9-重氮-強(qiáng)力霉素硫酸鹽鹽酸鹽(80mg，0.14mmol)在4.5ml0.1N鹽酸在甲醇中的溶液中，加入10mg疊氮化鈉。溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出沉淀的固體，并真空干燥，得到43mg產(chǎn)物。
9-(4-氟苯基)-強(qiáng)力霉素向9-重氮-強(qiáng)力霉素硫酸鹽鹽酸鹽(358mg，0.59mmol)和4-氟苯基硼酸(107mg，0.76mmol)在4ml甲醇的溶液中，加入18mg醋酸鈀(II)，產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。濾去催化劑，濃縮殘余物，用制備高效液相層析法純化。從高效液相層析收集的部分進(jìn)行濃縮，并傾入20ml冷乙醚中。濾出固體，真空干燥，得到32mg產(chǎn)物。
7-[1，2-雙(芐氧羰基)肼基]-強(qiáng)力霉素?cái)嚢柘拢驈?qiáng)力霉素鹽酸鹽(300mg，0.62mmol)在2.5 ml四氫呋喃和3.2ml甲磺酸的溶液中，在0℃下加入230mg二芐偶氮二羧酸酯(dibenzyazodicarboxylate)。產(chǎn)生的混合物在0℃攪拌2小時(shí)，然后傾入400ml冷乙醚中。濾出固體，真空干燥，得到479mg灰白色產(chǎn)物。
7-氨基-強(qiáng)力霉素向7-[1，2-雙(芐氧羰基)肼基]強(qiáng)力霉素(478mg)在30ml乙二醇一甲基醚的溶液中，加入200mg 10％Pd/C，產(chǎn)生的混合物在室溫下氫化3小時(shí)。用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌，將濾液濃縮，并傾入500ml冷乙醚中。濾出分離出的固體，并真空干燥，得到268mg產(chǎn)物。
7-二甲氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向7-氨基-強(qiáng)力霉素(100mg)在8ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入1ml 37％含水甲醛溶液，0.05ml濃硫酸和100mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化6小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮殘余物，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。分離出的固體因?yàn)檎承院軓?qiáng)，進(jìn)行很困難的過濾。然后立即將該固體再溶解在甲醇中，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到89mg產(chǎn)物。
7-二丙基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向7-氨基-強(qiáng)力霉素(90mg)在8ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入0.5ml丙醛，0.05ml濃硫酸和80mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化5小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮殘余物，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到415mg產(chǎn)物。
7-二丁基氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向7-氨基-強(qiáng)力霉素(100mg，0.2mmol)在6ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入0.6ml丁醛，0.05ml濃硫酸和100mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化4小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮殘余物，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到103mg產(chǎn)物。
7-二(3，3-二甲基)丁基氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向7-氨基-強(qiáng)力霉素(100mg，0.2mmol)在6ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入0.5 ml 3，3-二甲基丁醛，0.05 ml濃硫酸和100mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化4小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮殘余物，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到122mg產(chǎn)物。
7-二己基氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向7-氨基-強(qiáng)力霉素(100 mg，0.2 mmol)在6ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入0.6ml己醛，0.05ml濃硫酸和100mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化4小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮殘余物，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到129mg產(chǎn)物。
7-異丙基氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向7-氨基-強(qiáng)力霉素(90mg，0.2mmol)在8ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入0.5ml異丁醛，0.05ml濃硫酸和90mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化6小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮殘余物，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到142mg產(chǎn)物。
7-甲基-7-異丙基氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向7-異丙基氨基-強(qiáng)力霉素(60mg)在4ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入0.4ml 37％甲醛水溶液，0.05ml濃硫酸和50mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化2小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮殘余物，并在攪拌下傾入80ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到52mg產(chǎn)物。
7-環(huán)丁基氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向7-氨基-強(qiáng)力霉素(80mg)在7ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入0.3ml環(huán)丁酮，0.04ml濃硫酸和60mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化24小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮殘余物，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到85mg產(chǎn)物。
7-甲基-7-環(huán)丁基氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽向7-環(huán)丁基氨基-強(qiáng)力霉素(40mg)在3.5ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入0.3ml 37％甲醛水溶液，0.03ml濃硫酸和40mg 10％Pd/C。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化6小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮殘余物，并在攪拌下傾入80ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到35mg產(chǎn)物。
7-乙酰氨基強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向7-氨基-強(qiáng)力霉素(200mg)在3ml 1，3-二甲基-2-咪唑烷酮的溶液中，加入200mg碳酸氫鈉，然后加入0.09ml乙酰氯化物。混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后過濾。濃縮濾液，并在攪拌下傾入200ml冷乙醚中。濾出沉淀的產(chǎn)物并真空干燥，獲得202mg產(chǎn)物。
7-乙酰氨基-7-異丙基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向7-異丁基氨基-強(qiáng)力霉素(60mg)在1.5ml 1，3-二甲基-2-咪唑烷酮的溶液中，加入60mg碳酸氫鈉，然后加入0.05ml乙酰氯化物?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時(shí)30分鐘，然后過濾。濃縮濾液，并在攪拌下傾入80ml冷乙醚中。濾出沉淀的產(chǎn)物并真空干燥。
7-重氮-強(qiáng)力霉素鹽酸鹽或四氟硼酸鹽攪拌下，向冷卻在冰浴中的7-氨基-強(qiáng)力霉素(200mg，0.4mmol)在4ml0.1N鹽酸的甲醇溶液內(nèi)，加入0.2ml正丁基亞硝酸酯。溶液在0℃下攪拌30分鐘，然后攪拌下傾入200ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到173mg產(chǎn)物。重氮四氟硼酸鹽用四氟硼酸(54％乙醚溶液)制備，以代替鹽酸。
7-疊氮-強(qiáng)力霉素?cái)嚢柘?，向冷卻在冰浴中的7-重氮-強(qiáng)力霉素鹽酸鹽(80mg，0.14mmol)在4.5ml 0.1N鹽酸的甲醇溶液內(nèi)，加入12mg疊氮化鈉。溶液在0℃下攪拌2小時(shí)，然后攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出沉淀的固體，并真空干燥，得到43mg產(chǎn)物。
7-氨基-9-硝基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向7-氨基-強(qiáng)力霉素(220g，0.44mmol)在4ml濃硫酸的溶液中，在0℃加入硝酸鉀(52mg，0.51mmol)。產(chǎn)生的混合物在0℃下攪拌15分鐘，然后攪拌下傾入300ml冷乙醚中。濾出分離的固體，用冷乙醚洗滌并真空干燥。將產(chǎn)物再溶解于甲醇中，過濾，將濾液傾入乙醚中。濾出分離出的固體，并真空干燥，得到222g產(chǎn)物。
7-二甲氨基-9-硝基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向7-二甲氨基-強(qiáng)力霉素(40g，0.07mmol)在1.5ml濃硫酸的溶液中，在0℃加入硝酸鉀(12mg，0.12mmol)。產(chǎn)生的混合物在0℃下攪拌30分鐘，然后攪拌下傾入60ml冷乙醚中。濾出分離的固體，用冷乙醚洗滌并真空干燥。LC/MS顯示，主要是一種有二個(gè)硝基的產(chǎn)物(可能是期望產(chǎn)物的一種硝酸酯)。
7-二甲氨基-9-重氮-強(qiáng)力霉素硫酸鹽鹽酸鹽攪拌下，向冷卻在冰浴中的7-二甲氨基-9-氨基-強(qiáng)力霉素(50mg)在1.5ml 0.1N鹽酸的甲醇溶液內(nèi)，加入0.05ml正丁基亞硝酸酯。溶液在0℃下攪拌30分鐘，然后攪拌下傾入80ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到38mg產(chǎn)物。
7-乙酰氨基-9-硝基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向7-乙酰氨基強(qiáng)力霉素(60g，0.095mmol)在2ml濃硫酸的溶液中，在0℃加入硝酸鉀(11mg，0.11mmol)。產(chǎn)生的混合物在0℃下攪拌5分鐘，然后攪拌下傾入80ml冷乙醚中。濾出分離的固體，用冷乙醚洗滌并真空干燥。
7-乙酰氨基9-氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向7-乙酰氨基9-硝基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽(77mg，0.12mmol)在7ml乙二醇一甲基乙醚的溶液中，加入60mg 10％Pd/C。反應(yīng)混合物在常壓下氫化7小時(shí)。用硅藻土濾去催化劑，用甲醇洗。濃縮濾液，然后攪拌下滴加至100ml冷乙醚中。濾出沉淀的固體，用冷的醚洗滌，并真空干燥，得到62mg產(chǎn)物。
7-乙酰氨基-9-重氮-強(qiáng)力霉素硫酸鹽鹽酸鹽攪拌下，向冷卻在冰浴中的7-乙酰氨基-9-氨基-強(qiáng)力霉素(100mg)在3ml0.1N鹽酸甲醇溶液內(nèi)，加入0.1ml正丁基亞硝酸酯。溶液在0℃下攪拌30分鐘，然后攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到92mg產(chǎn)物。
7-乙酰氨基-9-疊氮-強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向冷卻的冰浴中的7-乙酰氨基-9-重氮-強(qiáng)力霉素(112mg，0.19mmol)在6ml 0.1N鹽酸甲醇溶液內(nèi)，加入14mg(0.21mmol)疊氮化鈉。溶液在0℃下攪拌35分鐘，然后攪拌下傾入150ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到94mg產(chǎn)物。
強(qiáng)力霉素甲碘化物將強(qiáng)力霉素游離堿(315mg)溶于2ml甲醇和10ml四氫呋喃中，然后加入1ml甲基碘。將反應(yīng)混合物保持5天；未出現(xiàn)產(chǎn)物結(jié)晶。攪拌下將反應(yīng)混合物傾入300ml冷乙醚，過濾分離出的產(chǎn)物，并真空干燥，得到269mg產(chǎn)物；LC/MS顯示為純品。
5-乙酸基-強(qiáng)力霉素將強(qiáng)力霉素(100mg)在3ml 30％氫溴酸的乙酸溶液在室溫下攪拌3.5天；然后攪拌下將反應(yīng)混合物傾入100ml冷乙醚，濾出分離出的產(chǎn)物。LC/MS顯示起始物轉(zhuǎn)化不完全，因此將產(chǎn)物(86mg)在同樣反應(yīng)條件再進(jìn)行9小時(shí)，然后以同樣方式分離。
9-叔丁基-強(qiáng)力霉素將強(qiáng)力霉素(100mg)在2ml叔丁醇和3ml甲磺酸的溶液在室溫下攪拌18小時(shí)，然后傾入100ml冷水，并用正丁醇提取。用1N氫氧化鈉溶液堿化有機(jī)提取物，并用濃鹽酸將pH迅速地調(diào)節(jié)至6.5-7。濾出固體沉淀物，然后溶于甲醇，濃縮并在攪拌下滴加至30ml乙醚/PET乙醚冷溶液中。濾出分離的固體，用冷乙醚洗滌并真空干燥。
9-叔丁基-7-硝基-強(qiáng)力霉素在室溫下攪拌強(qiáng)力霉素鹽酸鹽(2g)在10ml叔丁醇和30ml甲磺酸中的溶液3小時(shí)，然后加入500mg硝酸鉀，產(chǎn)生的混合物再攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾入100ml含23g氫氧化鈉的冷水溶液中；然后再滴加氫氧化鈉稀釋液，至反應(yīng)混合物成為堿性。用濃鹽酸將pH迅速調(diào)節(jié)至6.5-7。濾除分離出的深色的膠狀固體。
用正丁醇提取含水濾液一次，回收更多產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物溶于小量的甲醇，用高效液相層析法純化。將從高效液相層析中得到的部分合并，濃縮至干，溶于甲醇，并滴加至50ml 3∶1的乙醚/PET乙醚的混合物中。濾出沉淀的固體，得到788mg淺黃色產(chǎn)物。
9-叔-丁基-7-氨基-強(qiáng)力霉素向9-叔-丁基-7-強(qiáng)力霉素(500mg)在25ml乙二醇一甲基醚的溶液中，加入350mg 10％Pd/C，產(chǎn)生的混合物在常壓下氫化17小時(shí)。用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗。濃縮殘余物，溶于四氫呋喃并在攪拌下滴加至1∶1的乙醚/PET的乙醚溶液中。濾出沉淀的產(chǎn)物，并真空干燥，得到452mg產(chǎn)物。
9-叔丁基-7-重氮-強(qiáng)力霉素向冷卻在冰浴中的9-叔丁基-7-氨基-強(qiáng)力霉素(93mg，0.18mmol在2.5 ml0.1N鹽酸甲醇溶液內(nèi)，加入0.1ml正丁基亞硝酸酯。溶液是在0℃攪拌30分鐘，然后攪拌下將一半傾入30ml 3∶1的乙醚/PET的乙醚冷混合物中。產(chǎn)物如膠狀粘附在燒杯的底部。將其再溶解在甲醇中，并進(jìn)行濃縮，將殘余物傾入20ml冷乙醚中，立即濾出分離的固體，進(jìn)行真空干燥；獲得42mg產(chǎn)物。另一半反應(yīng)混合物直接用于下述9-叔丁基物質(zhì)。
9-叔丁基-7-疊氮-強(qiáng)力霉素?cái)嚢柘拢?℃向9-叔丁基-7-重氮-強(qiáng)力霉素反應(yīng)混合物(1.5ml)中加入8mg(0.12mmol)疊氮化鈉。使溶液升溫至室溫期間，攪拌3小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物以后，攪拌下將殘余物傾入冷的3∶1的乙醚/PET的乙醚混合物中。沒有固體分離，因此將溶液濃縮至干，獲得35mg產(chǎn)物。
9-叔丁基-7-二甲氨基-強(qiáng)力霉素?cái)嚢柘?，向?67mg 9-叔丁基-7-氨基-強(qiáng)力霉素在10ml乙二醇一甲基乙醚中9-叔丁基-7-氨基-強(qiáng)力霉素和115mg 10％Pd/C的反應(yīng)混合物中，加入1.2ml37％甲醛水溶液。產(chǎn)生的混合物在大氣壓下氫化3.5小時(shí)，然后用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗滌。濃縮濾液，并在攪拌下將殘余物傾入10ml冷乙醚中。濾出分離的產(chǎn)物，用冷乙醚洗滌并真空干燥。LC/MS顯示為所預(yù)期的產(chǎn)物，但被堿性雜質(zhì)所污染。
9-叔丁基-7-乙酰氨基-強(qiáng)力霉素硫酸鹽攪拌下，向9-叔丁基-7-氨基-強(qiáng)力霉素(100mg)在2ml 1，3-二甲基-2-咪唑烷酮的溶液中，加入100mg碳酸氫鈉，然后加入0.07ml乙酰氯化物。將混合物在室溫下攪拌1.5小時(shí)，然后過濾。濃縮濾液，并在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾除分離出的產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物再溶于甲醇，過濾并在攪拌下滴加至冷的3∶1的乙醚/PET的乙醚混合物中。過濾收集產(chǎn)物，并真空干燥，得到76mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-強(qiáng)力霉素?cái)嚢柘?，向四環(huán)素甲基碘化物(860mg)在12ml乙酸和12ml水的溶液中，加入432mg鋅粉。攪拌15分鐘后，濾出鋅粉。濾液用86ml含0.86ml濃鹽酸的水稀釋。濾出分離的產(chǎn)物，并真空干燥，得到419mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-9-硝基-強(qiáng)力霉素?cái)嚢柘拢?℃向4-脫二甲氨基-強(qiáng)力霉素(402mg，1mmol)在20ml濃硫酸的溶液中，加入111mg硝酸鉀。攪拌20分鐘以后，反應(yīng)混合物傾入100ml冷水中。將正丁醇加入此含產(chǎn)物的水中，分出有機(jī)層。用正丁醇重復(fù)提取兩次。濃縮合并的有機(jī)提取物，攪拌下加入到冷水中。濾除分離出的產(chǎn)物。通過用正丁醇再提取含水濾液回收更多產(chǎn)物，濃縮，然后傾入冷水中，再過濾。真空干燥后，獲得353mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-9-氨基-強(qiáng)力霉素向4-脫二甲氨基-9-硝基-強(qiáng)力霉素(353mg)在17ml乙二醇一甲基醚的溶液中，加入0.1ml濃硫酸和200mg 10％Pd/C，產(chǎn)生的混合物在常壓下氫化10小時(shí)。用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗。濃縮濾液，并傾入100ml乙醚中。濾出分離出的固體，并真空干燥，得到292mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-9-重氮-強(qiáng)力霉素鹽酸鹽攪拌下，向冷卻在冰浴中的4-脫二甲氨基-9-氨基-強(qiáng)力霉素(220mg)在5ml 0.1N鹽酸甲醇溶液內(nèi)，加入0.2ml正丁基亞硝酸酯。溶液在0℃攪拌30分鐘，然后攪拌下傾入150ml 2∶1的乙醚/PET乙醚冷混合物中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到191mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-9-疊氮-強(qiáng)力霉素向冷卻在冰浴中的4-脫二甲氨基-9-重氮-強(qiáng)力霉素(150mg，0.32mmol)在6.5ml 0.1N鹽酸的甲醇溶液內(nèi)，加入23mg疊氮化鈉，產(chǎn)生的混合物在0℃攪拌1小時(shí)，然后在攪拌下傾入120ml冷乙醚中。一些固體形成，濾出后發(fā)現(xiàn)不是所期望的產(chǎn)物。將濾液濃縮至干，加在甲醇中，并在攪拌下傾入50ml冷水中。濾出分離的固體，并真空干燥。通過用正丁醇提取濾液，獲得更多產(chǎn)物，濃縮，傾入水中，濾出固體，獲得84mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-7-硝基-9-叔丁基-強(qiáng)力霉素在室溫下攪拌4-脫二甲氨基-強(qiáng)力霉素(500mg 1.25mmol)在3ml叔丁醇和15ml甲磺酸的溶液15小時(shí)，然后加入140mg硝酸鉀，產(chǎn)生的混合物再攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物在攪拌下傾入200ml冷水。濾除分離出的固體并在空氣中干燥。將粗產(chǎn)物溶于小量的甲醇，用高效液相層析法純化。合并從高效液相層析中得到的部分，濃縮至干，溶于甲醇，并滴加至50ml冷水中。濾出分離的固體，真空干燥，得到217mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-7-氨基-9-叔丁基-強(qiáng)力霉素?cái)嚢柘拢?-脫二甲氨基-7-硝基-9-叔丁基強(qiáng)力霉素(217mg 0.42mmol)在12ml乙二醇一甲基醚的溶液中，加入170mg 10％Pd/C，產(chǎn)生的混合物在常壓下氫化13小時(shí)。用硅藻土濾除催化劑，用甲醇洗。濃縮濾液，傾入20 3∶1的乙醚/PET乙醚混合物，得到40mg產(chǎn)物。濃縮橙色濾液至干，另獲得138mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-7-重氮-9-叔丁基-強(qiáng)力霉素?cái)嚢柘?，向冷卻在冰浴中的4-脫二甲氨基-7-氨基-9-叔丁基-強(qiáng)力霉素(165mg)在5ml 0.1N鹽酸甲醇溶液內(nèi)，加入0.15ml正丁基亞硝酸酯。溶液在0℃攪拌30分鐘；在攪拌下將其中一半傾入50ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到50mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-7-氨基-強(qiáng)力霉素?cái)嚢柘拢?℃向4-脫二甲氨基-強(qiáng)力霉素(400mg)在4ml四氫呋喃和4.5ml甲磺酸的溶液中，加入418mg(1.4mmol)二芐基偶氮二羧酸酯，將產(chǎn)生的混合物在溫?zé)岬绞覝氐耐瑫r(shí)攪拌4小時(shí)。加入水和正丁醇，分離出兩相。水層用乙醚/正丁醇的混合物提取。將合并的有機(jī)提取物濃縮至干，然后加入10ml乙二醇一甲基乙醚。然后，加入430mg 10％Pd/C，將產(chǎn)生的混合物在常壓下氫化12小時(shí)。用硅藻土濾去催化劑，用甲醇洗。將濾液濃縮，攪拌下傾入3∶1乙醚/PET乙醚的冷混合物中；濾出分離的產(chǎn)物，并真空干燥，得到114mg產(chǎn)物。
9-硝基-二甲氨四環(huán)素硫酸鹽攪拌下，在0℃向二甲氨四環(huán)素鹽酸鹽(1g，2.02mmol)在30ml濃硫酸中的溶液中，加入硝酸鉀(246mg)。在0℃，將產(chǎn)生的混合物攪拌45分鐘，然后攪拌下傾入1.2L冷乙醚中。濾出沉淀的固體，用冷的醚洗滌，并真空干燥，得到1.33g產(chǎn)物。
9-氨基-二甲氨四環(huán)素硫酸鹽攪拌下，向9-硝基-二甲氨四環(huán)素硫酸鹽(500g，0.83mmol)在10ml乙二醇一甲基乙醚和7ml甲醇的溶液中，加入250mg 10％Pd/C。反應(yīng)混合物在大氣壓力下氫化4小時(shí)。用硅藻土濾去催化劑，用甲醇洗。濾液濃縮，然后在攪拌下滴加至600ml冷乙醚中。濾出沉淀的固體，用冷的醚洗滌，并真空干燥，得到465mg產(chǎn)物。
9-重氮-二甲氨四環(huán)素硫酸鹽鹽酸鹽攪拌下，向冷卻在冰浴中的9-氨基-二甲氨四環(huán)素硫酸鹽(100mg)在3ml0.1N鹽酸甲醇的溶液內(nèi)，加入0.1ml叔丁基亞硝酸鹽(或正丁基亞硝酸酯)。溶液在0℃攪拌30分鐘，然后然后在攪拌下傾入100ml冷乙醚中。濾出沉淀的固體，并真空干燥，得到87mg橙棕色產(chǎn)物。
9-疊氮-二甲氨四環(huán)素硫酸鹽攪拌下，向9-重氮-二甲氨四環(huán)素硫酸鹽鹽酸鹽(485mg，0.83mmol)在18ml 0.1N鹽酸的甲醇溶液中，加入59mg疊氮化鈉。溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后過濾并在攪拌下將濾液傾入500ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到480mg米黃色產(chǎn)物。
9-乙酰氨基-二甲氨四環(huán)素?cái)嚢柘?，?-氨基-二甲氨四環(huán)素硫酸鹽(100mg，0.175mmol)在1.5ml 1，3-二甲基-2-咪唑烷酮的溶液中，加入100mg碳酸氫鈉，然后加入0.05ml乙酰氯化物。產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌45分鐘，然后攪拌下傾入150ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到165mg產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-二甲氨四環(huán)素將二甲氨四環(huán)素游離堿(175mg，0.38mmol)溶于2ml四氫呋喃，然后加入0.43ml甲基碘化物。沒有結(jié)晶產(chǎn)物出現(xiàn)。濃縮反應(yīng)混合物，并在攪拌下傾入200ml冷乙醚/PET乙醚(比例為40∶60)中。濾出分離的產(chǎn)物，并真空干燥。將產(chǎn)物重新置于同樣的反應(yīng)條件中，再進(jìn)行反應(yīng)3天。如前所述，從乙醚中析出沉淀物，獲得123mg二甲氨四環(huán)素甲碘化物。將粗產(chǎn)物溶于2ml乙酸，攪拌下加入2ml水和60mg鋅粉。攪拌15分鐘后，濾出鋅粉。濾液用15ml含濃鹽酸的水稀釋。合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并濃縮。濾出分離的固體，并真空干燥，得到150mg黃色產(chǎn)物。
4-脫二甲氨基-9-硝基-二甲氨四環(huán)素室溫下，將4-脫二甲氨基二甲氨四環(huán)素(415mg，1mmol)溶于30ml濃硫酸。將溶液冷卻在冰浴上，攪拌下加入硝酸鉀(110mg，1.09mmol)。產(chǎn)生的混合物攪拌15分鐘，然后攪拌下傾入300ml冷乙醚中。濾出分離的固體，用冷乙醚洗滌并真空干燥。LC/MS顯示初始物質(zhì)不完全轉(zhuǎn)化，因此將產(chǎn)物再溶解在15ml濃硫酸中，在0℃加入50mg硝酸鉀，攪拌產(chǎn)生的混合物45分鐘。如前所述分離產(chǎn)物，得到542mg產(chǎn)物。
7，9-二溴脫甲脫氧四環(huán)素在0℃，攪拌下向脫甲脫氧四環(huán)素(50mg，0.12mmol)在1.5ml濃硫酸的溶液中，加入42mg N-溴琥珀酰亞胺。30分鐘以后，攪拌下將反應(yīng)混合物傾入60ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到70mg黃色的產(chǎn)物。
7-硝基-脫甲脫氧四環(huán)素與9-硝基-脫甲脫氧四環(huán)素混合物在0℃，攪拌下向脫甲脫氧四環(huán)素(40mg，0.09mmol)在1.5ml濃硫酸中的溶液中，加入10mg硝酸鉀。20分鐘以后，攪拌下將反應(yīng)混合物傾入50ml冷乙醚中。濾出分離的固體，并真空干燥，得到59mg產(chǎn)物。LC/MS顯示，兩種一硝酸鹽產(chǎn)物的比例為1.6∶1。
在本發(fā)明進(jìn)一步的測試中，用十種不同的細(xì)菌菌株評價(jià)了五種測試產(chǎn)物的最低抑菌濃度(MIC)。五個(gè)測試產(chǎn)物的MIC評價(jià)研究用Macrodilution BrothMethod改良方法進(jìn)行，該方法記載在NCCLS文獻(xiàn)M7-A5，Methods for DilutionAntimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically第五版中。每個(gè)測試產(chǎn)物用十種細(xì)菌菌株的懸浮物的評價(jià)進(jìn)行兩次。每個(gè)產(chǎn)物測試前，用滅菌的Mueller-Hinton Broth(MHB)稀釋(w/v)，達(dá)到一個(gè)基礎(chǔ)初始濃度1000μg/mg，160μg/ml效價(jià)。

測試之前約48小時(shí)，從含細(xì)菌的冷凍小瓶中，將每種受試細(xì)菌分別接種在每個(gè)無菌的Tryptic Soy Broth試管中，見下表。肉湯培養(yǎng)基在35±2℃培養(yǎng)大約24小時(shí)。將如上所述制備的肉湯培養(yǎng)基接種到置于陪替氏平皿內(nèi)的胰蛋白酶大豆瓊脂的表面上，在35±2℃培養(yǎng)約24小時(shí)。如此生產(chǎn)在瓊脂平板表面上的細(xì)菌“菌苔”(lawns)被用作配制評價(jià)的混懸物。
在開始測試之前，對每種細(xì)菌配制含大約1.0×109CFU/ml細(xì)菌的初始評價(jià)懸浮物，配制方法是通過接種取自于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌及加入氯化鈉沖洗劑(Sodium Chloride Irrigation)，配制方法如上所述。評價(jià)所用的最終懸浮物每種細(xì)菌含量大約為1.0×106CFU/ml，配制方法是將0.2ml 1.0×109CFU/ml懸浮物置于含200ml MuellerHinton Broth的250ml無菌聚丙烯瓶內(nèi)中。在用于測試之前，將最終評價(jià)懸浮物進(jìn)行充分混合。培養(yǎng)盤中的最終稀釋度是10-3、10-4和10-5。將這些培養(yǎng)盤在35±2℃培養(yǎng)，直到可觀察到細(xì)菌充分生長。(表I).
下列培養(yǎng)，對培養(yǎng)皿上的菌落用手持計(jì)數(shù)器進(jìn)行手工計(jì)數(shù)。CFU(菌落形成單位)在30-300范圍的用于數(shù)據(jù)計(jì)算。
每個(gè)待評價(jià)懸浮物計(jì)算初始群體(CFU/ml)公式如下CFU/ml＝(Ci×10-D)Ci＝2個(gè)平皿計(jì)數(shù)的平均值D＝所用的平板計(jì)數(shù)的稀釋因子對于每種待評價(jià)懸浮物，之后接種在每管產(chǎn)物/肉湯中的群體(CFU/ml)按下式計(jì)算每管群體數(shù)(CFU/ml)＝(Ci×10-D)/2其中Ci＝2個(gè)平皿計(jì)數(shù)的平均值D＝所用的平板計(jì)數(shù)的稀釋因子2＝之后接種在每管產(chǎn)物/肉湯中的總體積(ml)測試步驟如下將30ml Mueller-Hinton Broth置于無菌瓶中30ml產(chǎn)物(初始濃度是160μg/ml)加入到11個(gè)系列瓶(每個(gè)含30ml Mueller-HintonBroth)的第1瓶中，并且充分混合，以達(dá)到1∶2的產(chǎn)物稀釋度(v/v)。從上述配制的瓶中移去30ml用剩余10瓶按1∶2(v/v)稀釋度進(jìn)行系列稀釋，(10瓶的產(chǎn)物稀釋度分別是1∶4，1∶8，1∶1 6，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512，1∶1024和1∶2048)，每瓶中均含30ml Mueller-Hinton Broth。每瓶在移去30ml部分用作進(jìn)行下次系列稀釋之前，均進(jìn)行充分混合。將每個(gè)產(chǎn)物稀釋液1.0ml和初始產(chǎn)物(160，μg/ml產(chǎn)物濃度)1.0ml分別轉(zhuǎn)至無菌試管中。配制12個(gè)系列管，每個(gè)含1.0ml適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)物稀釋液(1∶1，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512，1∶1024和1∶2048)用于評價(jià)每種產(chǎn)物對每種細(xì)菌的作用(表1)。這樣，得到的產(chǎn)物濃度范圍從160μg/ml到0.078μg/ml。
將1.0 ml含大約1.0×106CFU/ml混懸物加入到系列產(chǎn)物稀釋管的每個(gè)管中，由此產(chǎn)生最終產(chǎn)物稀釋系列是1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512，1∶1024，1∶2048和1∶4096，每個(gè)稀釋管含有大約5.0×105CFU/ml待評價(jià)細(xì)菌。這樣，最終產(chǎn)物濃度范圍從80μg/ml到0.039μg/ml。試驗(yàn)程序如上所述進(jìn)行，每個(gè)測試產(chǎn)物對每種細(xì)菌的試驗(yàn)重復(fù)兩次(表I)。陽性對照管(生長對照)含1.0 ml Mueller-Hinton Broth和1.0ml待評價(jià)混懸物。還配制了僅含Mueller-Hinton Broth的陰性對照管(培養(yǎng)基)是無菌對照(未接種細(xì)菌)。
通過分別在每個(gè)無菌的試管中加入1.0ml每個(gè)產(chǎn)物稀釋液，為每個(gè)產(chǎn)物準(zhǔn)備了產(chǎn)物混濁度對照。在每個(gè)產(chǎn)物稀釋管中加入1.0ml無菌的Mueller-HintonBroth，并使用渦流混合器充分地混合，由此產(chǎn)生的最終產(chǎn)物稀釋度與如上所述相同。在35±2℃培養(yǎng)待評價(jià)的混懸物/產(chǎn)物稀釋管和對照管20小時(shí)，直到在陽性對照管中的生長清晰可見。
然后進(jìn)行培養(yǎng)，檢查管中細(xì)菌生長，根據(jù)可見的混濁度確定。
記錄每個(gè)測試產(chǎn)物對每個(gè)待評價(jià)細(xì)菌的最低抑菌濃度(MIC)，為測試產(chǎn)物完全抑制細(xì)菌生長的最高稀釋度，檢測是用目視法。記錄每個(gè)待測產(chǎn)物對每種細(xì)菌兩次檢測的結(jié)果，然后將平均值作為最終報(bào)告值。
表I


*＝初始群體培養(yǎng)皿先在室溫下(20℃-27℃)隨意地培養(yǎng)約48小時(shí)，然后在35±2℃培養(yǎng)大約72小時(shí)。
表II提供每一測試產(chǎn)物對10種測試細(xì)菌中每一種的最低抑菌濃度，以產(chǎn)物稀釋度表示。表III提供每一測試產(chǎn)物對10種測試細(xì)菌中每一種的最低抑菌濃度，以產(chǎn)物濃度(μg/ml)表示。每個(gè)產(chǎn)物的初始溶液濃度，以1000μg/mg，160μg/ml為基礎(chǔ)。
表II


表III


在另一些研究中，還研究了本發(fā)明的四環(huán)素衍生物作為基質(zhì)降解金屬蛋白酶(matrix degrading metalloproteinases，簡稱MMPs)抑制劑的活性，MMPs與惡性腫瘤生長和轉(zhuǎn)移有關(guān)。這些研究用哥本哈根大鼠的Dunning MAT LyLu腫瘤模型，該模型來自移植了腫瘤的哥本哈根大鼠，從一只老年哥本哈根大鼠脊部前列腺原發(fā)的前列腺腫瘤移植而來。當(dāng)進(jìn)行注射后，該MAT LyLu腫瘤自然地轉(zhuǎn)移到80-100％的被注射動(dòng)物的淋巴結(jié)和肺，并發(fā)生骨轉(zhuǎn)移。試驗(yàn)中，試驗(yàn)用藥是每日新配制的含每種藥物10mg/ml及2％羧甲基纖維素的溶液。
本研究初步評價(jià)了藥物的毒性，用兩組各5只未移植腫瘤的動(dòng)物，每只動(dòng)物用四環(huán)素類藥物(9-氨基-強(qiáng)力霉素和9-硝基-強(qiáng)力霉素)，劑量為40mg/kg/日，用藥7日。
三組動(dòng)物(10只/組)通過灌胃給藥，分別喂空白對照(藥物賦形劑)及兩種藥物中的一種，共用藥三周，然后每周加大藥量，為三倍用量，直到動(dòng)物死亡或處死。在尾靜脈注射植入MAT LyLu腫瘤細(xì)胞之前7天開始給藥。約0.1ml腫瘤細(xì)胞懸液注入尾部旁靜脈(lateral tail veins)。藥物的選擇根據(jù)兩個(gè)因素(1)藥物作用(2)與疾病有關(guān)的藥物。下表(表IV)列出了對照組和治療組動(dòng)物的存活時(shí)間和每周體重。如表所示，9-氨基-強(qiáng)力霉素和9-硝基-強(qiáng)力霉素顯示出可顯著增加腫瘤移植之后的存活數(shù)，但與對照組相比，體重的改變無差異。此后一發(fā)現(xiàn)特別有意義，因?yàn)槌Ｒ?guī)的抗癌治療往往會(huì)導(dǎo)致體重減輕。
表IV

在另一研究中，評價(jià)了多種四環(huán)素衍生物抑制MMPs的活性以及對各種癌的百分抑制率。結(jié)果見表V，表明了本發(fā)明的治療效果。研究的目的之一是評估系列四環(huán)素衍生物是否可作為純的人基質(zhì)金屬蛋白酶(包括MMP1，2，3，7，9和14)的抑制劑。本發(fā)明的四環(huán)素衍生物在mM-μM范圍內(nèi)是有效的抑制劑。
具體實(shí)施例方式
1.測定MMP 1(膠原酶-1)被四環(huán)素衍生物抑制的方法MMP1活性的測定，是通過從14C乙?；拇笫笃つwI型膠原質(zhì)中可溶的14C標(biāo)記的膠原質(zhì)片斷的釋放來確定的。(測定方法見Enzymology80 711，1981)。
實(shí)驗(yàn)材料100μg14C標(biāo)記的大鼠皮膚I型膠原質(zhì)(5-6000dpm)50mM Tris HCl pH7.915mM CaC12，0.02％疊氮化物重組人MMP1 3-4nM±四環(huán)素(1mM以下)在總體積為300ul的溶液中在35℃培養(yǎng)5小時(shí)。以10,000g轉(zhuǎn)速，在4℃10分鐘離心，除去未斷裂的膠原質(zhì)纖維(在前10分鐘內(nèi)形成的)。取200μl上清液在Packard Opti PhaseSupermix閃爍液中用閃爍計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。僅有來自實(shí)驗(yàn)(10-70％膠原質(zhì)溶解)中呈線性關(guān)系的數(shù)據(jù)可被使用。僅通過每個(gè)樣品的濃度范圍得出的MMP1的抑制百分率?？捎镁€性回歸分析計(jì)算出每種四環(huán)素的IC50值。
2.測定MMP 2(白明膠酶A)被四環(huán)素衍生物抑制的方法MMP 2活性的測定，是通過從14C乙酰化的大鼠皮膚I型白明膠中可溶的片斷釋放的三氯乙酸(TCA)來確定的。(測定方法見Enzymology 248，470，1995.Biochem.J.195，1981)。
實(shí)驗(yàn)材料100μg14C標(biāo)記的白明膠(I型膠原質(zhì)，60℃變性20分鐘)50mM Tris HCl pH 7.915mM CaC12，0.02％疊氮化物重組人MMP1，0.1-0.5nM±四環(huán)素(1mM以下)在總體積為250ul的溶液中在37℃培養(yǎng)16小時(shí)。冷卻培養(yǎng)物停止反應(yīng)，并加入50μl冷的90％(w/v)三氯乙酸，小心地混合均勻。在4℃使三氯乙酸沉淀15分鐘，然后以10,000g轉(zhuǎn)速，在4℃離心10分鐘，取200μl三氯乙酸上清液，在Packard Opti PhaseSupermix閃爍液中進(jìn)行閃爍計(jì)數(shù)，以確定放射含量。僅有來自實(shí)驗(yàn)(10-70％溶解)中呈線性關(guān)系的數(shù)據(jù)可被使用。通過每個(gè)四環(huán)素樣品的濃度得出的MMP2的抑制百分率。用線性回歸分析計(jì)算出每種四環(huán)素的IC50值。
3.測定MMP 3(溶基質(zhì)素1)被四環(huán)素衍生物抑制的方法MMP 3活性的測定，是通過從14C乙酰化的β酪蛋白(Sigma)中可溶的片斷釋放三氯乙酸(TCA)來確定的。測定方法見Enzymology 248，451(1995)。
實(shí)驗(yàn)材料100μg14C標(biāo)記的酪蛋白(7000dpm)50mM Tris HCl pH 7.915mM CaC12，0.02％疊氮化物重組人MMP 3，0.25-1.0nM±四環(huán)素(1mM以下)在總體積為250ul的溶液中在37℃培養(yǎng)16小時(shí)。冷卻培養(yǎng)物停止反應(yīng)，并加入500μl冷的18％三氯乙酸，在冰上放置15分鐘。在4℃，以10,000g轉(zhuǎn)速離心10分鐘，以除去三氯乙酸沉淀。取200μl三氯乙酸上清液用于進(jìn)行閃爍計(jì)數(shù)。僅有來自實(shí)驗(yàn)(10-60％溶解)中呈線性關(guān)系的數(shù)據(jù)可被使用。通過每個(gè)待選四環(huán)素的濃度得出的MMP3的抑制百分率。用線性回歸分析計(jì)算出每種四環(huán)素的IC50值。
4.測定MMP7(Matrilysin)被四環(huán)素衍生物抑制的方法MMP7活性的測定，是通過從14C乙酰化的β酪蛋白(Sigma)中可溶的片斷釋放三氯乙酸(TCA)來確定的。測定方法見Enzymology 248，451(1995)。
實(shí)驗(yàn)材料100μg14C標(biāo)記的酪蛋白(7000dpm)50mM Tris HCl pH 7.915mM CaC12，0.02％疊氮化物重組人MMP 7，1.5nM±四環(huán)素(1mM以下)在總體積為250ul的溶液中在37℃培養(yǎng)16小時(shí)。冷卻培養(yǎng)物停止反應(yīng)，并加入500μl冷的18％三氯乙酸，在冰上放置15分鐘。在4℃，以10,000g轉(zhuǎn)速離心10分鐘，以除去三氯乙酸沉淀。取200μl三氯乙酸上清液用于進(jìn)行閃爍計(jì)數(shù)。僅有來自實(shí)驗(yàn)(10-60％溶解)中呈線性關(guān)系的數(shù)據(jù)可被使用。通過每個(gè)待選四環(huán)素的濃度得出的MMP7的抑制百分率。用線性回歸分析計(jì)算出每種四環(huán)素的IC50值。
5.測定MMP9(白明膠酶)被四環(huán)素衍生物抑制方法MMP9活性的測定，是通過從14C乙?；拇笫笃つwI型可溶的片斷釋放三氯乙酸(TCA)來確定的。測定方法見Enzymology 248，470，1995.Biochem.J.195，1981。
實(shí)驗(yàn)材料100μg14C標(biāo)記的白明膠(膠原質(zhì)，60℃變性20分鐘)50mM Tris HCl pH 7.915mM CaC12，0.02％疊氮化物重組人MMP9，1.2-2nM±四環(huán)素(1mM以下)在總體積為250ul的溶液中在37℃培養(yǎng)16小時(shí)。冷卻培養(yǎng)物停止反應(yīng)，并加入50μl冷的90％(w/v)三氯乙酸，小心地混合均勻。在4℃使三氯乙酸沉淀15分鐘，然后以10,000g轉(zhuǎn)速，在4℃離心10分鐘，取200μl三氯乙酸上清液，在Packard Opti PhaseSupermix閃爍液中進(jìn)行閃爍計(jì)數(shù)，以確定放射含量。僅有來自實(shí)驗(yàn)(10-70％溶解)中呈線性關(guān)系的數(shù)據(jù)可被使用。通過每個(gè)四環(huán)素樣品的濃度得出的MMP9的抑制百分率。用線性回歸分析計(jì)算出每種四環(huán)素的IC50值。
6.測定MMP14(MTI-MMP)被四環(huán)素衍生物抑制的方法MMP14活性的測定，是通過從14C乙?；拇笫笃つwI型可溶的片斷釋放三氯乙酸(TCA)來確定的。測定方法見Enzymology 80 711，1981)。
實(shí)驗(yàn)材料100μg14C標(biāo)記的膠原質(zhì)(5-6000dpm)50mMTris HCl pH 7.915mM CaC12，0.02％疊氮化物重組人MMP 14，50-100nM
±四環(huán)素(1mM以下)在總體積為300ul的溶液中在35℃培養(yǎng)15小時(shí)。以10,000g轉(zhuǎn)速，在4℃10分鐘離心除去未斷裂的膠原質(zhì)纖維(在前10分鐘內(nèi)形成的)，取200μl上清液在Packard Opti PhaseSupermix閃爍液中用閃爍計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。僅有來自實(shí)驗(yàn)(10-70％膠原質(zhì)溶解)呈線性關(guān)系的數(shù)據(jù)可被使用。僅通過每個(gè)樣品的濃度范圍得出的MMP1的抑制百分率，計(jì)算出每種四環(huán)素的IC50值。
另一目的是分析四環(huán)素衍生物在體外對下列腫瘤細(xì)胞的化學(xué)侵入的特異性作用C8161人黑色素瘤細(xì)胞MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞PC3人前列腺癌細(xì)胞RPM 18226人骨髓瘤細(xì)胞Ark人骨髓瘤細(xì)胞Arp-1人骨髓瘤細(xì)胞選擇體外膜侵入培養(yǎng)系統(tǒng)(Membrane Invasion Culture System，MICS)化學(xué)侵入試驗(yàn)，以測定四環(huán)素衍生物藥物侵入時(shí)對特異的人癌細(xì)胞的改變。每種化合物原液在含2％DMSO，pH為10.0的水中成為水合物。溶解后立即在溶液中加入HCI，調(diào)節(jié)pH為7.5-8.0。將該溶液用薄片包裹，試驗(yàn)的24小時(shí)中，在4℃保存。每次試驗(yàn)新制備化合物。對腫瘤細(xì)胞入侵的化學(xué)侵入試驗(yàn)用前述體外膜侵入培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行。
該MICS系統(tǒng)是一個(gè)經(jīng)過熱處理的塑料復(fù)合系統(tǒng)，包括兩個(gè)配套的14孔板，直徑為13mm。兩板之間有孔徑為10μm的一層濾膜，覆蓋有一層已知成分的基質(zhì)，由人層粘連蛋白/膠原質(zhì)IV/白明膠組成，在MICS的孔頂部和底部形成一層厚度為35μm的屏障。在放置此屏障之前，下板的孔中加入無血清的RPMI培養(yǎng)基，培養(yǎng)基50％來自保存完好的人成纖維細(xì)胞的2日培養(yǎng)物，已通過離心或經(jīng)過0.45μm無菌濾器過濾除去細(xì)胞或細(xì)胞碎片。該系統(tǒng)組裝完畢后，此屏障置于下部板的孔上，將新鮮的無血清培養(yǎng)基置于上板的孔上。然后將5萬個(gè)腫瘤細(xì)胞加在孔中，孔中或者有受試化合物存在，或者有DMSO載體(對照)。在12個(gè)試驗(yàn)孔中，3個(gè)隨機(jī)選擇的孔作為對照，3個(gè)孔中加入1μg/ml受試化合物，3個(gè)孔中加入10μg/ml，3個(gè)孔中加入25μg/ml。24小時(shí)之后，從下部的孔中取出細(xì)胞和培養(yǎng)基，以磷酸緩沖鹽水和2mM EDTA代替。此溶液用于從下部的孔中去除所有細(xì)胞，對從同一孔中恢復(fù)的細(xì)胞和培養(yǎng)基增加此沖洗。用斑點(diǎn)印跡多功能系統(tǒng)收集這些樣品于含多熔素的孔徑為3μm的聚碳酸酯膜上。將收集的濾器固定在甲醇中，用Wright′s stain(Leukostat染色試劑盒)在原位進(jìn)行染色。將這些濾器放在顯微鏡載玻片上，同時(shí)還加入浸鏡用油(減少從孔中產(chǎn)生的光折射)。進(jìn)行5次顯微鏡視野計(jì)數(shù)，以計(jì)算24小時(shí)內(nèi)透過膜入侵的細(xì)胞數(shù)。然后對該數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，討論如下。
表V



表V中，A是所用的濃度1μg/ml、10μg/ml、25μg/mlB是顯著性差異，即P＜0.051IC50的單位是μm，除非特別指出2預(yù)測值+增加入侵NE未評價(jià)R待重復(fù)(數(shù)目次數(shù)重復(fù))表V中化合物19-硝基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽29-氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽39-異丙基氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽47-二甲氨基-6-脫甲基-6-脫氧-9-硝基四環(huán)素硫酸鹽5同269-疊氮-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽79-氨基-7-二甲氨基-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素硫酸鹽89-乙酰氨基-7-二甲氨基-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素硫酸鹽97-二甲氨基-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素-9-重氮硫酸鹽鹽酸鹽109-疊氮-7-二甲基氨基-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素硫酸鹽116-脫氧-5-羥基四環(huán)素-9-重氮硫酸鹽127-氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽137，9-二溴-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素硫酸鹽147-氨基-6-脫氧-5-羥基-9-硝基四環(huán)素硫酸鹽157-二甲氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽169-乙酰氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽177-二正丁氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽
187-二正己氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽197-二-(3，3-二甲丁基)氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽207-疊氮-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽216-脫氧-5-羥基四環(huán)素-7-重氮硫酸鹽227-乙酰氨基-9-硝基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽237-乙酰氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽247-二正丙氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽257-異丁氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽267-乙酰氨基-9-氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽277-異丁基甲氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽286-脫氧-5-乙酸基-四環(huán)素硫酸鹽297-乙酰異丁基氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽307-乙酰氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素-9-重氮硫酸鹽317-二甲氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素-9-重氮硫酸鹽327-環(huán)丁基氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽337-環(huán)丁基甲基氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽344-脫二甲氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素354-脫二甲氨基-6-脫氧-5-羥基-9-硝基四環(huán)素369-氨基-4-脫二甲氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽374-脫二甲氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素-9-重氮硫酸鹽387-硝基-9-叔丁基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽399-叔丁基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽407-硝基-9-叔丁基-4-脫二甲氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽414-脫二甲氨基-7-二甲氨基-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素硫酸鹽427-乙酰氨基-9-疊氮-6-脫氧-5-羥基-四環(huán)素439-叔丁基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素-7-重氮硫酸鹽
447-氨基-9-叔丁基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽457-疊氮-9-叔丁基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽466-脫氧-5-羥基四環(huán)素-4-甲碘化物477-(1，2-芐基羧基肼)-6-脫氧-5-羥基-四環(huán)素鹽酸鹽484-脫二甲氨基-7-氨基-6-脫氧-5-羥基1四環(huán)素硫酸鹽497-氨基-9-叔丁基-4-脫二甲基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素硫酸鹽504-脫二甲氨基-9-叔丁基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素-7-重氮硫酸鹽519-(4-氟苯基)-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素524-表-7-氯四環(huán)素鹽酸鹽536-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素鹽酸鹽雖然本發(fā)明記述了一些具體的例子，但顯然對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其它一些形式以及對本發(fā)明的一些修改是很容易的。本發(fā)明所附的權(quán)利要求及說明書已經(jīng)基本覆蓋了所有這些顯而易見的形式及改變，所有這些改變都不能脫離本發(fā)明真正的精神實(shí)質(zhì)和范圍。
權(quán)利要求
1.9-氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素或其鹽在制備治療腫瘤的藥中的應(yīng)用。
2.9-氨基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素或其鹽在制備抑制細(xì)菌生長的藥中的應(yīng)用。
3.9-硝基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素或其鹽在制備治療腫瘤的藥中的應(yīng)用。
4.9-硝基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素或其鹽在制備抑制細(xì)菌生長的藥中的應(yīng)用。
5.4-表-7-氯四環(huán)素或其鹽在制備治療腫瘤的藥中的應(yīng)用。
6.4-表-7-氯四環(huán)素或其鹽在制備抑制細(xì)菌生長的藥中的應(yīng)用。
7.7-二甲氨基-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素-9-重氮或其鹽在制備治療腫瘤的藥中的應(yīng)用。
8.7-二甲氨基-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素-9-重氮或其鹽在制備抑制細(xì)菌生長的藥中的應(yīng)用。
9.9-疊氮-7-二甲基氨基-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素或其鹽在制備治療腫瘤的藥中的應(yīng)用。
10.9-疊氮-7-二甲基氨基-6-脫甲基-6-脫氧四環(huán)素或其鹽在制備抑制細(xì)菌生長的藥中的應(yīng)用。
11.9-叔丁基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素或其鹽在制備治療腫瘤的藥中的應(yīng)用。
12.9-叔丁基-6-脫氧-5-羥基四環(huán)素或其鹽在制備抑制細(xì)菌生長的藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種或多種四環(huán)素衍生物在制藥領(lǐng)域中的新用途，其具有治療腫瘤和抑制細(xì)菌生長的作用。
文檔編號(hào)A61K31/655GK1961885SQ20061009922
公開日2007年5月16日 申請日期2002年10月4日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月5日
發(fā)明者約瑟夫·拉弗卡, 理查德·J·阿布林 申請人:泰特拉吉尼克斯醫(yī)藥公司