專利名稱：一種鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球的制備方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種可生物降解的鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球，這種微球的制備方法，該微球制劑用于治療口腔牙周炎疾病。
背景技術：
米諾環(huán)素為四環(huán)素衍生物，除了具有四環(huán)素抗菌譜廣、抑制膠原酶等優(yōu)點外，對牙周致病微生物的抗菌作用在四環(huán)素族中最強，98％的牙周病原菌都能被5μg/mL的米諾環(huán)素抑制，對牙周組織再生有促進作用，對牙周組織雄激素代謝起作用。但全身用藥時，GCF(Gingival Crevicular Fluid)中藥物濃度低，容易誘導耐藥菌株和二重感染。牙周疾病治療中局部用藥正在逐漸替代全身用藥，因為局部給藥一方面可以降低全身給藥時的毒副作用；另一方面，可使病灶部位保持較高的藥物濃度，有利于殺死病菌，提高藥物的療效。
根據(jù)牙周疾病的特點，目前治療牙周病的米諾環(huán)素局部釋放系統(tǒng)臨床應用形式主要分為薄膜型、軟膏型和微球型。薄膜型是在乙基纖維素膜中含30％左右的米諾環(huán)素，例如韓國產的艾亞林(Dung Kook minocycline strip)。軟膏型是將2％鹽酸米諾環(huán)素置于軟膏內，每支軟膏容量0.5g含米諾環(huán)素10mg，例如日本生產的派麗奧(Periocline)已用于臨床數(shù)年。微球型是米諾環(huán)素微粒結合在多聚物微球中，用塑料注射器置入牙周袋內，藥物緩慢釋放達到治療的目的。常見治療牙周病的治療物通常在給藥一定時間后需要再次取出，這給患者帶來了很大的不便；另外藥物制劑很難達到牙周袋的底部，不利于根除深處的病菌。因此開發(fā)新型的藥物劑型可方便給藥，用藥后無需取出，而且藥物劑型能達到牙周袋底部，將具有重要意義。達到該目的可采用鹽酸米諾環(huán)素微球制劑，微球材料采用可降解吸收，具有生物相容性的材料，這樣微球可被降解吸收無需取出，方便了患者；而且由于微球的尺寸很小(幾十微米級)，能達到牙周袋深處，可在底部釋放藥物，利于根除病菌。而該微球制劑的關鍵在于微球的制備及微球材料的選擇。
殼聚糖是甲殼素脫乙酰化物，具有成膜性、可紡性，并有促進傷口愈合、骨形成等功能，可被人體吸收利用，具有良好的生物相容性。殼聚糖在口腔醫(yī)學領域的研究和應用近年來逐漸引起了人們的重視，已有殼聚糖在牙周病、牙體病防治、拔牙術后干槽癥預防和骨填充材料等諸多領域的應用報道。殼聚糖在口腔疾病中的作用包括①抑菌作用除對雙齒雙歧ATCC27534無凝集作用外，殼聚糖對口腔其他常見菌都有不同程度的凝集作用。同時，殼聚糖對附著的變形鏈球菌有一定的解吸附作用。殼聚糖還具抑制細菌活性的作用，可抑制牙周病的主要致病菌牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis，Pg)的活性，抑制效果隨分子量的增大而增加。脫乙酰度為91.5％的殼聚糖寡聚糖(chitooligosaccharide)可降低青少年牙周炎的主要致病菌放線共生放線桿菌(Actinobacillusactinimycetemcomitans，Aa)的活性；②作為輔劑制作牙周線條牙周線條常作為牙周袋局部用藥，載體多為非降解材料。Riceardo等(Carbohydrate Polymers1993(20)7-14)將殼聚糖作為輔劑制得的軟膏或牙周線條置于患者的牙周袋中，線條可降解吸收，不用取出。Needleman等(Journal of ClinicalPeriodontology 1998 25(1)74-82)研究發(fā)現(xiàn)殼多糖的緩釋效果優(yōu)于其他緩釋材料，可提高藥物療效。③用于牙周術后塞治Muzzarelli等(Biomaterials 198910(9)598-606)在抗壞血酸鹽中加人殼聚糖制成抗壞血酸凝膠，用于牙周外科治療術后的創(chuàng)面覆蓋。掃描電鏡顯示其呈蜂窩狀，有利于氧的交換，可促進細胞增殖和組織重建。用其作牙周塞治劑，易降解，可被宿主吸收，有利于牙周組織的重建，在臨床取得滿意的治療效果，可使牙周袋深度降低、牙齒松動度減少。④引導牙周組織重建牙周引導組織再生術(guidedt issuer egeneration，GT R)是目前較為先進的牙周疾病治療手段。實驗室檢測及動物實驗均顯示殼聚糖具有良好的生物相容性，無細胞毒性，不致敏，且具有促進細胞增殖的作用。殼聚糖膜表面的多孔狀結構，允許宿主血管長人和組織形成，利于缺損修復。并可降解吸收，不必二次手術取出。因此具有廣闊的應用前景。
牙周炎是牙床炎癥，慢性的牙周炎會導致牙齒松動和損失。它也和其他的嚴重的疾病例如心血管的疾病，骨質疏松癥，糖尿病有關系。牙周炎急需新一代治療藥。從患者的反饋來看，米諾環(huán)素普通膠囊用于治療牙周疾病療效相當好，但存在有一定副作用，臨床醫(yī)生也反映急需米諾環(huán)素口腔局部用制劑來解決這一問題。因此研究開發(fā)將具有重大的臨床意義和廣闊的市場前景。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供一種綜合牙周炎局部給藥要求和殼聚糖在牙周炎疾病治療方面作用的新型治療藥，即鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球制劑。該制劑具有緩釋作用，藥物載體在給藥后無需再次取出，可被降解吸收，同時該制劑具有殼聚糖的優(yōu)點，如抑菌作用和利于牙周組織再生等。
本發(fā)明的另一目的是提供一種制備這種微球的方法。
本發(fā)明的再一目的是提供這種微球在牙周炎治療中的應用。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種含米諾環(huán)素類藥物殼聚糖微球制劑，其包括鹽酸米諾環(huán)素藥物、殼聚糖、交聯(lián)劑、防腐劑及微球分散劑。
本發(fā)明提供了一種含米諾環(huán)素類藥物殼聚糖微球制劑，其包括鹽酸米諾環(huán)素藥物、殼聚糖、選自硫酸、硫酸鈉，檸檬酸、檸檬酸鈉，聚磷酸鹽，甲醛、香草醛及戊二醛的交聯(lián)劑，選自對羥基苯甲酸甲、乙和丙酯，苯扎溴胺，苯扎氯胺，三氯叔丁醇，苯甲酸，山梨酸或苯酚的防腐劑，選自硬脂酸鈉、鎂和聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)的分散劑。
本發(fā)明還提供了一種制備含米諾環(huán)素藥物的殼聚糖微球制劑的方法，其包括鹽酸米諾環(huán)素藥物、殼聚糖溶液和防腐劑作為內水相，植物油作為外油相，微球分散劑加入到外油相中，用油水相分離法制備含米諾環(huán)素藥物的殼聚糖微球制劑。
根據(jù)本發(fā)明，以微球制劑重量計，本發(fā)明微球制劑中藥物含量為0.5-20％；殼聚糖、交聯(lián)劑、防腐劑及微球分散劑含量為78-99％，余量為水份。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明微球粒徑為0.01-1mm。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球制劑可以通過塑料注射裝置注入到牙周袋中，實現(xiàn)局部給藥的目的。
發(fā)明詳述制備本發(fā)明所述的微球的方法包括如下步驟(1)配制稀酸溶液，摩爾濃度為0.01M-1M；(2)稱取一定質量的殼聚糖，加入到稀酸溶液中，充分溶解以配制0.5-6％(W/V)的殼聚糖的溶液；(3)稱取一定量的鹽酸米諾環(huán)素加入到殼聚糖溶液中，充分溶解；(4)在油相中反應，制備微球a.取含鹽酸米諾環(huán)素的殼聚糖溶液作為內水相加入到油相中，內水相與外油相的體積比為1∶4-15，在500-3500轉/分條件下攪拌分散；b.再加入防腐劑，防腐劑可以是對羥基苯甲酸甲、乙和丙酯，苯扎溴胺，苯扎氯胺，三氯叔丁醇，苯甲酸，山梨酸或苯酚中的一種或幾種；c.再加入占外油相體積約0.1-5％(V/V)的非離子型乳化劑；d.加入分散劑，分散劑質量和內水相體積的比為5-50∶1(mg∶ml)，充分攪拌，分散劑可以是硬脂酸或硬脂酸鹽中的一種或幾種；e.加入0.1-3倍于內水相體積的5-60％(W/W)硫酸檸檬酸鈉或聚磷酸鈉溶液作為交聯(lián)劑，攪拌10-180分鐘；(5)離心分離、洗滌、真空干燥后即得離子交聯(lián)殼聚糖微球。
優(yōu)選在步驟(1)中采用乙酸、檸檬酸、酒石酸、甲酸、氨基酸或乙二酸等酸溶液溶解殼聚糖。
優(yōu)選在于步驟(4)中防腐劑為對羥基苯甲酸甲、乙和丙酯，山梨酸或苯酚；進一步優(yōu)選采用對羥基苯甲酸甲酯、乙和丙酯等。
優(yōu)選在于步驟(4)中油相為礦物油或植物油；進一步優(yōu)選采用葵花籽油、菜籽油、大豆油、花生油等。
優(yōu)選步驟(4)中的硬脂酸鹽分散劑選自硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鉀、硬脂酸鈉等。
優(yōu)選步驟(4)中采用乙醚、乙醇或者丙酮溶解分散劑硬脂酸及硬脂酸鹽。
優(yōu)選在步驟(4)中非離子型乳化劑是Span型乳化劑、或Span型和Tween型乳化劑組成的復合乳化劑；進一步優(yōu)選該制備方法的Span型乳化劑可以是Span80、Span85、Span83；優(yōu)選Tween型乳化劑是Tween20、Tween60或Tween80；優(yōu)選復合乳化劑是Span80和Tween60組成的HLB值為6-9的復合乳化劑。
優(yōu)選在步驟(4)中的e中的交聯(lián)劑為硫酸、硫酸鈉，檸檬酸、檸檬酸鈉，聚磷酸鈉，甲醛、香草醛；進一步優(yōu)選采用硫酸、檸檬酸鈉香草醛溶液等。
優(yōu)選在步驟(4)中的e中在加入5-60％(W/W)的后，過10-150分鐘再加入0.1-3倍于內水相體積的5-60％(W/W)硫酸、檸檬酸鈉或香草醛溶液進一步交聯(lián)。
本發(fā)明提供的離子交聯(lián)的鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球可用于作為治療牙周炎的藥物制劑。
本發(fā)明選用硫酸、聚磷酸鈉或檸檬酸鈉溶液作為離子交聯(lián)劑，可以避免化學交聯(lián)可能引起的毒性或者其他副作用；同時在制備的過程中，添加硬脂酸作為分散劑，使得微球具有很好的分散性；而且還可以通過調節(jié)轉速、殼聚糖溶液濃度等工藝條件，比較容易控制微球的形貌和粒徑分布。


圖1為實施例1制備條件下，鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球電鏡圖片。
圖2為實施例2制備條件下，鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球的粒徑分布圖。
具體實施例方式
下面實施例是對本發(fā)明的進一步說明，其并不意味著本發(fā)明局限于此。
實施例1取5％(w/v)的殼聚糖溶液10ml，加入400mg鹽酸米諾環(huán)素，加入適量的對羥基苯甲酸甲酯，充分攪拌溶解，然后將含有鹽酸米諾環(huán)素的殼聚糖溶液加入到裝有80ml液體石蠟、適量Span80和Tween60的三口燒瓶中，再加入溶于乙醚的硬脂酸鎂作為分散劑，硬脂酸鎂的質量為50mg，25℃、600轉/分條件下攪拌10分鐘后加入30％(W/W)的硫酸溶液5ml，35分鐘再加入此濃度的硫酸溶液5ml，70分鐘后停止攪拌，2500轉/分條件下離心分離，用揮發(fā)性有機溶劑、去離子水交替充分洗滌固體產物，最后30℃下真空干燥。微球的粒徑為80-300μm(＞80％)。微球電鏡照片見圖1所示。
實施例2取4％(w/v)的殼聚糖溶液20ml，加入200mg鹽酸米諾環(huán)素，加入適量的對羥基苯甲酸甲酯，充分攪拌溶解，然后將含有鹽酸米諾環(huán)素的殼聚糖溶液加入到裝有80ml葵花籽油、適量Span80和Tween60的三口燒瓶中，再加入溶于乙醚的硬脂酸鎂作為分散劑，硬脂酸鎂的質量為100mg，25℃、2000轉/分條件下攪拌10分鐘后加入30％(W/W)的檸檬酸鈉溶液5ml，35分鐘再加入此濃度的檸檬酸鈉溶液5ml，60分鐘后停止攪拌，3000轉/分條件下離心分離，用石油醚、丙酮和去離子水交替充分洗滌固體產物，最后50℃下真空干燥。微球的粒徑為150-220μm(＞70％)。微球粒徑分布見圖2所示。
權利要求
1.一種鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球制劑，其包括鹽酸米諾環(huán)素藥物、殼聚糖、交聯(lián)劑、防腐劑及微球分散劑。
2.權力要求1的鹽酸米諾環(huán)素微球制劑，其中殼聚糖作為藥物微球載體材料。
3.權力要求1的鹽酸米諾環(huán)素微球制劑，其中交聯(lián)劑選自硫酸、硫酸鈉，檸檬酸、檸檬酸鈉，聚磷酸鈉，甲醛、香草醛或戊二醛。
4.權力要求1的鹽酸米諾環(huán)素微球制劑，其中防腐劑選自對羥基苯甲酸甲、乙和丙酯，苯扎溴胺，苯扎氯胺，三氯叔丁醇，苯甲酸，山梨酸或苯酚
5.權力要求1的鹽酸米諾環(huán)素微球制劑，其中分散劑選自硬脂酸鈉、鎂和聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)。
6.權力要求1-5任一要求的鹽酸米諾環(huán)素微球制劑，其中交聯(lián)劑為檸檬酸鈉。
7.權力要求1-5任一要求的鹽酸米諾環(huán)素微球制劑，其中分散劑為硬脂酸鎂。
8.權力要求1-5任一要求的鹽酸米諾環(huán)素微球制劑，其中防腐劑為對羥基苯甲酸甲酯。
9.權力要求1-5任一要求的鹽酸米諾環(huán)素微球制劑，其中所述微球制劑含1mg鹽酸米諾環(huán)素/單位劑量。
10.權利要求1所述的鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球制劑在治療牙周炎中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球，這種微球的制備方法。本發(fā)明制備的鹽酸米諾環(huán)素殼聚糖微球可用于治療口腔牙周炎疾病。
文檔編號A61P1/00GK1883488SQ20051007760
公開日2006年12月27日 申請日期2005年6月21日 優(yōu)先權日2005年6月21日
發(fā)明者仰振球 申請人:北京華禧聯(lián)合科技發(fā)展有限公司