專利名稱：：促腎上腺皮質(zhì)激素類似物以及相關(guān)方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及ACTH類似物化合物以及相關(guān)藥物組合物和治療方法。
背景技術(shù)：
：促腎上腺皮質(zhì)素(corticotropin)也稱作促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)，是由垂體腺分泌的主要激素，垂體腺被認為是產(chǎn)生多種重要生長類固醇和生理控制類固醇的介質(zhì)。ACTH刺激腎上腺皮質(zhì)。更加具體而言，它刺激糖皮質(zhì)激素如人體中的皮質(zhì)醇(或者嚙齒動物中的皮質(zhì)酮)的分泌，并JU艮少控制來自腎上腺皮質(zhì)的其它主要類固醇激素醛固酮的分泌。ACTH結(jié)合至腎上腺中表達的MC-2R促腎上腺皮質(zhì)激素受體上。ACTH是響應源自下丘腦的促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素(CRH)而由垂體前葉分泌的。在垂體腺中，ACTH衍生自大的前體分子阿黑皮素原(POMC)，該前體分子通過特異性肽酶作用而斷裂。ACTH對類固醇合成的影響包括增加膽固醇酯酶、膽固醇向線粒體膜和跨線粒體膜的轉(zhuǎn)運、膽固醇與P450SCC的結(jié)合，因此增加了孕烯醇酮的產(chǎn)生(參見Nussey，S.和S.Whitehead,Endocrinology:AnIntegratedApproach,BIOSScientificPublishersLtd.(2001))。隨后的作用包括誘導類固醇生成酶以及特征為超血管化的顯著結(jié)構(gòu)改變、細胞過度生長和超常增生。這在ACTH過量分泌較長時間階段后特別明顯。類固醇糖皮質(zhì)激素由腎上腺的束狀帶-網(wǎng)狀帶細胞(fasciculata-reticulacell)產(chǎn)生，并且作為對血漿促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)水平增加的反應而分泌。糖皮質(zhì)激素涉及糖、蛋白質(zhì)和脂肪代謝，已經(jīng)表明其具有抗炎癥特性并且在應激過程中過度分泌。過量的糖皮質(zhì)激素會損害腦邊緣系統(tǒng)的海馬區(qū)，海馬區(qū)對于認知功能如學習和記憶是至關(guān)重要的。參見例如Sapolsky，R.M.，Ann.N.Y.Acad.Sci.746:294(1994);以及McEwen，B.S.，Ann.N.Y.Acad.Sci.746:134(1994)。此外，糖皮質(zhì)激素的神經(jīng)毒性以及神經(jīng)危害性在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和衰老以及與海馬損傷相關(guān)的神經(jīng)疾病中具有重要的作用。參見例如deKloet，E.R.等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.746:8(1994)。皮質(zhì)類固醇是在結(jié)構(gòu)上與膽固醇相關(guān)的類固醇激素。這些激素在腎上腺皮質(zhì)合成，并且包括糖皮質(zhì)激素(例如皮質(zhì)類固醇)、鹽皮質(zhì)激素(例如醛固酮)以及弱的雄激素和雌激素。與曱狀腺一樣，腎上腺的功能處于下丘腦(HPT)和垂體(PIT)的控制之下。當皮質(zhì)類固醇(天然存在的糖皮質(zhì)激素)水平下降到i殳定點時，下丘腦釋放CRH(促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素)，CRH刺激促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)從垂體釋放。ACTH是促激素，其刺激皮質(zhì)類固醇的合成和分泌(其對醛固酮的合成/分泌作用最小)以及腎上腺的生長。這里需要能結(jié)合ACTH受體但對皮質(zhì)類固醇分泌的活化降低的化合物，以便例如治療ACTH相關(guān)疾病，包括庫欣綜合征、因皮質(zhì)類固醇過度分泌導致的免疫應答受損以及某些腎上腺相關(guān)原因的早產(chǎn)。庫欣綜合征是源自腎上腺皮質(zhì)分泌皮質(zhì)類固醇增加的病癥。腎上腺皮質(zhì)功能亢進可以是ACTH依賴性的，或者不依賴于ACTH的調(diào)節(jié)，例如由腎上腺皮質(zhì)腺瘤癌導致的皮質(zhì)類固醇產(chǎn)生。庫欣綜合征的共因是垂體腺過量產(chǎn)生ACTH。這種在血流中ACTH水平增加一般是因為垂體腺瘤(庫欣病)產(chǎn)生的，但在罕見情況下病因不同。源自垂體腺外位點ACTH產(chǎn)生的庫欣綜合征被稱作異位庫欣綜合征。異位位點實例包括胸腺瘤、甲狀腺髓樣癌、嗜鉻細胞瘤、胰腺的胰島細胞瘤以及肺的燕麥細胞癌。然而，在人中絕大多數(shù)的庫欣綜合征的病因是垂體腺瘤。庫欣綜合征的癥狀包括與未患該疾病的哺乳動物相比體重增加、中心性肥胖、類固醇分泌過多、尿皮質(zhì)醇排泄增加、月亮臉、虛弱、疲勞、背痛、頭痛、陽萎、精神狀態(tài)改變、肌肉萎縮、口渴增加以及尿增加。庫欣綜合征的診斷和治療仍然是一個挑戰(zhàn)(參見Oldfield，E.W.等人，N.Engl.J.Med"325:897-卯5(1991);Findling，J.W.等人，"DiagnosisanddifferentialdiagnosisofCushing，ssyndrome,"Endocrinol.Metab.Clin.NorthAm.，30:729-47(2001);Orth，D.N.，"Cushing，ssyndrome,"NEnglJMed.,332:791-803(1995))。對于庫欣綜合征，當前還沒有醫(yī)學治療法。在有經(jīng)驗的專科中心，手術(shù)切除分泌ACTH的垂體孩魄瘤的總體治愈率為大約70-80%,但是對于大腺瘤，治愈率僅為大約30%，需要廣泛的手術(shù)切除預示著對周圍正常垂體組織存在重大風險，在大約80%的病理中導致部分或全部的垂體功能減退(Simmons，N.E.等人，"SerumCortisolresponsetotransphenoidalsurgeryforGushingdisease,"J.Neurosurg.，95:1-8(2001);Mampalam，T.J.等人，"TranssphenoidalmicrosurgeryforCushing，sdisease:Areportof216cases,"Ann.Intern.Med.，109:487-93(1988);以及Trainer,P.J.等人，"TranssphenoidalresectioninCushing，sdisease:undetectableserumCortisolasthedefinitionofsuccessfultreatment,"Clin.Endocrinol"38:73-8(1993))。因此，對于ACTH的來自為散步垂體腫瘤或者異位來源的庫欣綜合征，仍然需要有效且對患者沒有危險的治療法。結(jié)合ACTH受體但對皮質(zhì)醇分泌的活化降低的化合物也可用于治療引起早產(chǎn)的下丘腦-垂體-腎上腺軸。在所有分娩中，大約7-10%存在早產(chǎn)，并且早產(chǎn)在圍產(chǎn)期發(fā)病率和死亡率中占相對大的比例(McCormick，M.C，"Thecontributionoflowbirthweighttoinfantmortalityandchildhoodmorbidity,"NEnglJMed.，312:82-卯(1985))。由于種種原因，需要預防自發(fā)流產(chǎn)和早產(chǎn)以及延長女性的妊娠。因為下列原因需要延長妊娠(i)更可能分娩出活的嬰兒；(ii)降低早產(chǎn)兒健康并發(fā)癥的發(fā)生率；以及(iii)減少早產(chǎn)兒接受特別護理(即1更是健康的，但由于其大小和生存能力的原因必須接受特別護理)的時間階段。如下所有因素(i)出生存活，(ii)嬰兒健康，以及(iii)嬰兒能在父母照看下能及時出院影響著父母和親戚的幸福和安寧。早產(chǎn)還對社會產(chǎn)生影響，包括因護理過早出生嬰兒而產(chǎn)生的非常巨大的社會經(jīng)濟影響。在農(nóng)業(yè)和水產(chǎn)業(yè)中，當生物在高群體密度下飼養(yǎng)時會更加劃算。然而在哺乳動物、家禽和魚類中，這經(jīng)常導致過量產(chǎn)生腎上腺應激激素，這會造成有害的后果，包括免疫功能受損和生長降低。降低這些情況下或者由長時間應激產(chǎn)生并且導致不良健康改變(例如免疫功能降低并且對疾病易感)的其它情況下的腎上腺應激激素水平也是合乎需要的。多種組合物和方法可用于降低ACTH水平，例如通過精氨酸血管升壓素(AVP)的某些受體。2000年5月3日提出的美國專利號6，380，155涉及某些血管升壓素受體拮抗物組合物用于調(diào)節(jié)ACTH釋放的用途。調(diào)節(jié)ACTH水平以治療ACTH相關(guān)病癥的組合物是合乎需要的，例如能結(jié)合ACTHMC-2R受體但同時降低和消除了ACTH誘導的皮質(zhì)類固醇產(chǎn)生以致于減輕了與ACTH水平提高相關(guān)不良病癥的化合物。發(fā)明簡述提供了多種修飾的促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)肽("ACTH類似物")，與未修飾ACTH相比，修飾的ACTH降低和消除了ACTH誘導的皮質(zhì)類固醇的分泌。優(yōu)選地，ACTH類似物還降低了在未修飾ACTH存在下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌。ACTH類似物化合物優(yōu)選包含帶有一個和多個氨基酸替代的未修飾ACTH中的至少氨基酸1-24。ACTH類似物化合物可包括一個和多個M酸替代或者相對于未修飾ACTH氨基酸序列而言為截斷的。未修飾的人ACTH是具有下列序列的39個氨基酸殘基的多肽N-Ser、Tyr-Ser曙Met-Glu5-ffis-Phe-Arg-Trp-Gly"-Lys-Pro-Val-Gly-Lys15-Lys-Arg-Arg-Pro-Val2。-Lys-Val-Tyr-Pro-Asn25-Gly-Ala-Glu-Asp-Glu30-Ser-Ala-Glu-Ala-Phe35-Pro-Leu-Glu-Phe39-Ac(SEQIDNO.1)，其中N和Ac分別代表分子的氨基和羧基末端。ACTH類似物還可包含這樣的化合物，即包括在序列N-SerLTyr-Ser-Met-Glu5-His-Phe-Arg-Trp-Gly"-Lys-Pro-Val-Gly-Lysls-Lys-Arg-Arg-Pro-Val20-Lys-Val-Tyr-Pro-Ac(SEQIDNO:2)中具有一個和多個替代和修飾的肽的化合物，其中N和Ac分別代表分子的氛基和m^末端。優(yōu)選的ACTH類似物化合物至少包括帶有一個或多個M酸替代的hACTH和mACTH的至少氨基酸殘基1-19、更優(yōu)選hACTH或mACTH的氬基酸殘基1-24。ACTH類似物化合物包括包含帶有一個或多個結(jié)構(gòu)修飾的ACTH序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的化合物，所述修飾導致產(chǎn)生一種或多種下列優(yōu)選的ACTH類似物生物功能(1)與未修飾ACTH相比，降^f氐在ACTH類似物存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，(2)降低在內(nèi)源ACTH存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，以及(3)與未修飾ACTH相比，增加對MC-2R的結(jié)合親和性同時降低對MC-2R受體的活化。優(yōu)選的ACTHM酸替代以形成ACTH類似物化合物的實例包括下列的一種或多種(l)保留位置6-9的氨基酸和/或促進或保留MC-2R結(jié)合而在位置1-13處進行的一個或多個氨基酸殘基替代，(2)為了防止或?qū)乖谖恢?5-18處進行酶切斷裂而在位置25-18處進行的一個或多個氨基酸殘基替代，(3)為了使ACTH類似物在位置15-18不包含相鄰的帶堿性側(cè)鏈的氨基酸殘基而在位置15-18處進行的一個或多個氨基酸殘基替代，(4)為延長ACTH類似物的血清半衰期而在位置20-24進行的一個或多個氨基酸殘基替代或截斷，(5)為了與未修飾ACTH肽相比降低在ACTH類似物化合物存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，而在位置20-36處進行的一個或多個氨基酸g替代，(6)為了向ACTH類似物化合物提供想要的釋放特性而在位置25-39處進行的一個或多個氨基酸殘基替代或者優(yōu)選截斷，或者(7)將氨基酸殘基25-39截斷，在位置24的氨基酸殘基形成分子的氯基末ACTH類似物化合物優(yōu)選結(jié)合ACTH受體，如腎上腺膜中的黑皮質(zhì)素2受體(MC-2R)。更加優(yōu)選地，ACTH類似物化合物不活化或者較弱地活化表達MC-2R的細胞并且抑制或降低未修飾的內(nèi)源ACTH的作用。在第一個實施方案中，相對于未修飾的人ACTH^J^酸序列而言，多種ACTH類似物化合物可以包括一個或多個M酸替代或截斷。例如，包含分離的ACTH類似物肽的組合物可以包括具有至少一種下列氨基酸替4戈的SEQIDNO:2的肽a.SEQIDNO:2位置19處的Pro殘基替代成氨基酸Trp;或者b.選自SEQIDNO:2的氨基酸殘基16-18的殘基處的一個或多個氨基酸替代，以致于ACTH類似物的氨基酸殘基16、17和18不包括任何兩個相鄰的選自Lys和Arg的Jl^酸殘基；并且在SEQIDNO:2的位置16、17或18替代成的一個或多個氨基酸殘基選自Lys、Arg、Gln、Gly、Ala、Val、Leu、lie以及具有烷基側(cè)鏈的氨基酸類似物(例如Nle),任選地，ACTH類似物肽可以包括至少一個Ala、Gly或具有烷基側(cè)鏈的另一個氬基酸(即Val、Leu、Ile、包含烷基側(cè)鏈的氨基酸類似物如Nle)以及至少一個Arg殘基，它們在SEQIDNO:2的M酸位置15、16、17或18的任何兩個位置進行替代。任選地，ACTH類似物基本上由具有下列M酸替代的SEQIDNO:2的序列組成SEQIDNO:2中位置19處的Pro殘基被氨基酸Trp替代；SEQIDNO:2中位置15處的^tj^酸選自Lys、Ala和Gin;以及ACTH類似物肽可以在選自SEQIDNO:2中的氨基酸殘基16、17和18的殘基處包含一個或多個M酸替代，以致于ACTH類似物的氨基酸殘基16、17和18不包括任何兩個相鄰的選自Lys和Arg的氛基酸殘基。優(yōu)選地,ACTH類似物肽在氨基酸殘基6、7、8和9處包括SEQIDNO:4的M酸序列。ACTH類似物肽還可以在氨基酸殘基15-19處包括SEQIDNO:12的#^酸序列。第一個實施方案還包括具有帶有至少一個氛基酸替代的SEQIDNO:l的肽的ACTH類似物，所述替代例如SEQIDNO:l的位置19、26、30或36處的氨基酸殘基替代。ACTH類似物肽也包括具有至少一個下列氨基酸替代的SEQIDNO:l的肽a.SEQIDNO:l位置19處的Pro殘基替代成氨基酸Trp;或者b.選自SEQIDNO:l的M酸殘基16-18的殘基處的一個或多個氨基酸替代，以致于ACTH類似物的氨基酸殘基16、17和18不包括任何兩個相鄰的選自Lys和Arg的氨基酸殘基；并且在SEQIDNO:l的位置16、17或18替代成的一個或多個氨基酸殘基選自Lys、Arg、Gln、Gly、Ala、Val、Leu、lie以及Nie(或者具有烷基側(cè)鏈的另一個氨基酸類似物)。其它優(yōu)選的ACTH類似物肽包括對SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的肽的修飾，以致于ACTH類似物肽在氨基酸殘基15-19處包括SEQIDNO:6的氨基酸序列。ACTH類似物肽還包括對一個或多個肽的截斷。ACTH類似物還包括對SEQIDNO:l的氨基酸殘基25-39截斷。ACTH類似物肽SEQIDNO:20是特別優(yōu)選的。在一些實施方案中，通過體外血清皮質(zhì)類固醇誘導分析法(SerumCorticosteroidInductionAssay)所測定，與施用SEQIDNO:2的^bf目比，施用ACTH類似物肽使ACTH所誘導的腎上腺膜產(chǎn)生的皮質(zhì)酮降低至少10%,優(yōu)選降低高達100%。例如，在第二個實施方案中，ACTH類似物是修飾的ACTH肽，其與未修飾ACTH相比降低了在ACTH類似物存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌。在一些實施方案中，通過體外血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法(SerumCorticosteroidInhibitionAssay)所測定，施用ACTH類似物肽使ACTH所誘導的皮質(zhì)類固醇分泌降低至少10%。在第三個實施方案中，ACTH類似物是修飾的ACTH肽，其降低了在內(nèi)源ACTH存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌。在一些實施方案中，提供了組合物，所述組合物包括分離的帶有至少一個氨基酸替代的SEQIDNO:2的ACTH類似物的肽，其中ACTH類似物肽結(jié)合至腎上腺膜并替代下腎上腺膜上的SEQIDNO:2的肽?？赏ㄟ^體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析法(Serum-FreeAdrenalCompetitiveBindingAssay)測定肽的結(jié)合。例如，在第四個實施方案中，ACTH類似物是修飾的ACTH肽，其結(jié)合至腎上腺ACTH受體如MC-2R受體，并優(yōu)選具有增加的MC-2R結(jié)合親和性并且對MC-2R受體的活化降低(與未修飾ACTH相比)。優(yōu)選地，ACTH類似物肽可結(jié)合至腎上腺膜并替代下腎上腺膜上的SEQIDNO:2的肽，其中可通過體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析法測定肽的結(jié)合。最優(yōu)選地，ACTH類似物肽以比SEQIDNO:2的肽高2至少2倍的親和性結(jié)合至MC-2R腎上腺膜，在一些實施方案中，通過體外無血清腎上腺抑制分析法(Senim-freeAdrenalInhibitionAssay)所測定ACTH類似物肽降低了ACTH誘導的腎上腺膜的皮質(zhì)酮的產(chǎn)生。例如，在笫五個實施方案中，ACTH類似物化合物可以體外降低外植體組織中由未修飾ACTH對皮質(zhì)類固醇的誘導。ACTH類似物包括在體外無血清腎上腺抑制分析中降低ACTH誘導的腎上腺膜對皮質(zhì)酮產(chǎn)生的肽。在第六個實施方案中，提供了半衰期延長的ACTH類似物。半衰期延長的ACTH類似物被鑒定為通過體內(nèi)檢測的血清皮質(zhì)類固醇濃度所測量的第一種活性高于通過體外活性檢測的皮質(zhì)類固醇的無血清濃度(serum-freeconcentration)所測量笫二種活性，其中體內(nèi)活性通過實施例2的血清腎上腺皮質(zhì)類固醇抑制分析法測定，體外活性通過實施例4的體外無血清腎上腺皮質(zhì)類固醇抑制分析法測定。在第七個實施方案中，提供了篩選可阻斷過量ACTH同時維持腎上腺健康狀態(tài)的ACTH類似物的方法?？芍苽洳⑾蚧颊呤┯枚喾NACTH類似物來評估在體內(nèi)對可的松的誘導。在第八個實施方案中，本公開涉及包含ACTH類似物的藥物組合物以及以適于治療與ACTH相關(guān)病有關(guān)癥狀的方式向受試者施用。本文所述的ACTH類似物可以加入到藥物組合物中來治療ACTH相關(guān)病，如人或動物中的ACTH過表達。還提供了產(chǎn)生ACTH類似物以及包含ACTH類似物的相關(guān)藥物組合物的方法。例如，在一個方面，提供了在一類ACTH類似物中篩選可用于阻斷過量ACTH同時維持腎上腺健康狀態(tài)的化合物的方法。ACTH類似物化合物可用于治療與ACTH水平相關(guān)的疾病，例如對ACTH受體(例如MC-2R)調(diào)節(jié)作出響應的病。還提供了用于調(diào)節(jié)皮質(zhì)類固醇分泌或皮質(zhì)類固醇水平的化合物?？墒┯肁CTH類似物化合物來治療與ACTH水平調(diào)節(jié)相關(guān)的病，例如降低患者中高水平ACTH的影響而同時維持了腎上腺功能的健康狀態(tài)。例如，ACTH類似物組合物可用于治療ACTH相關(guān)病，例如庫欣綜合征、因皮質(zhì)類固醇過度分泌導致的免疫應答受損、引起早產(chǎn)(例如通過下丘腦-垂體-腎上腺軸)以及相關(guān)病。在一個方面，制備并向患者施用多種ACTH類似物來評估在體內(nèi)對可的松的誘導。在另一個方面，提供了治療獸類受試者的方法，例如降低應激激素以便利于高群體密度下農(nóng)業(yè)和水產(chǎn)業(yè)物種健康生長的方法。附圖簡述在附圖中圖1顯示與施用未修飾ACTH后測量的皮質(zhì)酮水平相比，注射多種ACTH類似物化合物后體內(nèi)測量的皮質(zhì)酮水平。圖2比較了施用未修飾ACTH、組合施用ACTH類似物與未修飾ACTH、施用ACTH類似物后再單獨施用未修飾ACTH、以及僅施用ACTH類似物所體內(nèi)誘導的皮質(zhì)酮。圖3是比較未修飾ACTH和ACTH類似物化合物對腎上腺ACTH受體竟爭性結(jié)合分析結(jié)果的圖。圖4比較了未修飾ACTH、ACTH類似物與未修飾ACTH的組合、以及單獨的ACTH類似物在體外對外植腎上腺膜中中皮質(zhì)酮的誘導。圖5比較了與未修飾ACTH的活性(即100%)相比，不同的ACTH激動劑化合物體內(nèi)和體外誘導皮質(zhì)酮的活性。發(fā)明詳述除非另外定義，本文所用的所有技術(shù)術(shù)語和科學術(shù)語具有同本發(fā)明相'關(guān)領域內(nèi)普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同的含義。在相沖突的情況下，以本申請文件(包括定義)為準。優(yōu)選的方法和材料描述如下，但是與本發(fā)明。本文提到的所有出版物、專利申請、專利文獻和其它參考文獻在此全部引用作為參考。本文公開的材料、方法和實施例僅是例證性的，并不是限制性的。如本文所使用，術(shù)語"未修飾促腎上腺皮質(zhì)激素"("未修飾ACTH，，)意思是指由垂體前葉腺體產(chǎn)生的刺激腎上腺皮質(zhì)分泌糖皮質(zhì)激素的肽激素，所述的糖皮質(zhì)激素幫助細胞通過糖異生作用合成葡萄糖、分解代謝蛋白質(zhì)、動員游離脂肪酸以及抑制變態(tài)反應中的炎癥。一種此類激素是皮質(zhì)類固醇，其調(diào)節(jié)糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝。如本文所使用的"皮質(zhì)類固醇"包括人皮質(zhì)類固醇皮質(zhì)醇和嚙齒動物皮質(zhì)類固醇皮質(zhì)酮。在涉及數(shù)量中所使用的術(shù)語"大約，，包括相當于所述數(shù)量的所述數(shù)量的變化，例如對于預期的目的或功能而言與所述數(shù)量沒有基本不同的數(shù)量。如本文所使用的命名法"P(x-y)"(其中P是多肽的名稱，x和y是整數(shù))指由稱作"P"的多肽的位置(x)至位置(y)的連續(xù)氨基酸組成的氛基酸序列。例如，"hACTH(l-24)"指由人ACTH肽從M末端開始的殘基1至24組成的24個連續(xù)氨基酸的多肽。"mACTH"指鼠ACTH。特別地，hACTH(l-24)和mACTH(l-24)是相同的肽序列。命名法"aXb"(其中a和b是氨基酸的單字母縮寫，X是數(shù)字)指未修飾ACTH肽中"X"位置的氨基酸"a"被替代成氨基酸"b"。例如"(K26F，五M/0mACTH"指從從分子的氛基末端開始第26位的Val被替代成Phe并且第30位的Glu^f皮替代成Lys的39個氨基酸的小鼠ACTH分子。類似地，命名法"a卩3cX-Y8scj)"(其中ou卩、x、S、s和(J)代表^J^酸的單字母縮寫，X和Y是數(shù)字)指位置X至Y的連續(xù)氬基酸"apx"被氨基酸"&4)"替代。ACTH類似物化合物包括包含具有一個或多個結(jié)構(gòu)修飾的ACTH序列的化合物，所述修飾提供了一種或多種下列優(yōu)選的ACTH類似物的生物學功能(i)與未^奮飾ACTH相比，降低在ACTH類似物存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，(2)降低在內(nèi)源ACTH存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，(3)與未修飾ACTH相比，提高MC-2R結(jié)合親和性同時降低對MC-2R受體的活化。據(jù)認為，ACTH類似物化合物通過結(jié)合至黑皮質(zhì)素2受體(MC-2R)、較弱地活化表達MC-2R的細胞并阻斷內(nèi)源ACTH對MC-2R受體的作用而起作用。用于形成帶有一種或多種期望功能的ACTH類似物化合物的優(yōu)選的ACTHM酸替代實例包括(l)保留位置6-9的氨基酸和/或促進或保留MC-2R結(jié)合而在位置1-13處進行的一個或多個氨基酸殘基替代，(2)為了防止或?qū)乖谖恢?5-18處進行酶切斷裂而在位置25-18處進行的一個或多個氨基酸殘基替代，(3)為避免出現(xiàn)兩個相鄰堿性氨基酸而在位置15-18處進行的一個或多個氨基酸殘基替代，(4)為延長ACTH類似物的血清半衰期而在位置20-24進行的一個或多個氨基酸殘基替代或截斷，(5)為了向ACTH類似物化合物提供想要的釋放特性而在位置25-39處進行的一個或多個氨基酸殘基替代或者優(yōu)選截斷，或者(6)將氨基酸殘基25-39截斷，在位置24的氨基酸殘基形成分子的氛基末端。ACTH類似物化合物在第一個實施方案中，相對于未修飾的人ACTH氨基酸序列而言，多種ACTH類似物化合物可以包括一個或多個M酸替代或截斷。未修飾的人ACTH是具有下列序列的39個氨基酸殘基的多肽N-SerLTyr-Ser-Met-Glu5-His-Phe-Arg-Trp-Gly"-Lys-Pro-Val-Gly誦Lys"-Lys-Arg-Arg-Pro-Val2°-Lys-Val-Tyr-Pro-Asn25-Gly-Ala-Glu-Asp-Glu30-Ser-Ala-Glu-Ala-Phe3S-Pro-Leu-Glu-Phe39-Ac(SEQIDNO:1)("hACTH")，其中N和Ac分別代表分子的氨基和羧基末端。ACTH(l-24)是保守的，因為在許多脊索動物中發(fā)現(xiàn)了ACTH(1-24),包括人具有如下肽序列N-Ser、Tyr-Ser-Met-Glu5-His國Phe-Arg-Trp-GIyW-Lys-Pro-Val-Gly-Lys"畫Lys-Arg-Arg-Pro-Val20-Lys-Val-Tyr-Pro-Ac(SEQIDNO:2)的人ACTH(l-24)(以及與其相同的鼠ACTH的1-24部分("mACTH(l-24)")，其中N和Ac分別代表分子的氨基和羧基末端。ACTH類似物化合物可以包括帶有一個或多個氨基酸替代的hACTH(SEQIDNO:l)的至少氨基酸殘基1-19，更優(yōu)選氨基酸殘基1-24,優(yōu)選的ACTH類似物化合物包含通過一個或多個M酸替代修飾的SEQIDNO:2。ACTH類似物化合物包括包含帶有一個或多個結(jié)構(gòu)修飾的ACTH序列的化合物，所述修飾提供了一種或多種下列優(yōu)選的ACTH類似物的生物功能(1)與未修飾ACTH相比，降低在ACTH類似物存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，(2)降低在內(nèi)源ACTH存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，以及(3)與未修飾ACTH相比，增加對MC-2R的結(jié)合親和性同時降低對MC-2R受體的活化。特別優(yōu)選的ACTH類似物化合物具有對未修飾的人ACTH序列進行的一個或多個下列氛基酸替代(1)保留位置6-9的氛基酸而在位置1-13處進行的一個或多個氨基酸殘基替代，(2)防止或?qū)乖谖恢?5-18上進行酶切斷裂的在這些位點上的一個或多個氨基酸殘基替代，(3)為避免出現(xiàn)兩個相鄰堿性氨基酸而在位置15-18處進行的一個或多個氨基酸殘基替代，(4)為延長ACTH類似物的血清半衰期而在位置20-24進行的一個或多個氛基酸殘基替代或截斷，和(5)為了向ACTH類似物化合物提供延長的血清半衰期(與未修飾ACTH相比，或者與其它ACTH類似物化合物相比)而在位置25-39處進行的一個或多個氨基酸殘基替代或者優(yōu)選截斷。ACTH類似物優(yōu)選包含通過下式(I)描述的多肽(I)N-(AA"3)-(AA")-(AA15-1SHAA19)-Ac其中N和Ac分別指多肽的氛基末端和羧基末端，(AA"")指第一個系列的13個連續(xù)氨基酸或氨基酸類似物，(AA")代表連接到第一個系列氣基末端的氛基酸殘基，(AA"-")指連接到(AA")氣基末端的第二個系列的4個連續(xù)氨基酸，(AA")代表連接到第二個系列羧基末端的氨基酸殘基。式(I)的ACTH類似物還優(yōu)選包含連接到(AA,-Ac部分的羧基末端的一部分更大分子。ACTH類似物還可包括連接到式(I)的羧基末端(Ac)的另外氨基酸。最優(yōu)選地，ACTH類似物包括連接到式(I)的Ac部分的總共5個另外氨基酸，這樣在ACTH類似物中總共有24個氨基酸。ACTH類似物可以包含對應于式(I)的未修飾ACTH的M酸序列，優(yōu)選地包括一個或多個M酸替代。另外的氨基酸或氨基酸類似物優(yōu)選地被連接到式(I)的(AA")殘基的氣基末端。式(I)的(AA"")-部分代表著式(II)的13個氛基酸的序列(II)-AALAALAA^AAtAAS-AA^AALAAS-AA^AA^AA11-AA12-AA13-其具有表1第二行所述的未修飾ACTHM酸序列，任選地包括在表1第三行所提供的一個或多個JL^酸替代。未修飾的人ACTH的(AA"勺-部分具有序列Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys畫Pro-Val(SEQIDNO:3)。優(yōu)選地，式(H)的AA、AA乙AAS-AA、部分具有可任選地被一個或多個其(D)氨基酸類似物替代的未修飾的氨基酸序列His-Phe-Arg-Trp-(SEQIDNO:4)。表1.ACTH類似物中的(AA"")的M酸替代<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>在表l中，標記(D)指所指定氬基酸的(D)對映異構(gòu)體；Nle指氨基酸類似物正亮氨酸或帶有烷基側(cè)鏈的另一個氨基酸；Orn指鳥氨酸或者帶有相似側(cè)鏈的另一個修飾氨基酸；Dab指2，4二氨基丁酸或相似的二氨基酸；Dpr指2，3二氨基丙酸或者另一個二氨基酸；(D)p-iodo-Phe指空間基團(stericgroup),例如對碘修飾的Phe;并且(D)-I-naph-Ala指I-萘基修飾的(D)-Ala或者另一個空間修飾氨基酸。包括對未修飾ACTH的未修飾的(AA"")-部分進行替代的ACTH類似物化合物優(yōu)選包括在表1中給定殘基位置之下指出的任選的ACTH類似物氨基酸殘基之一。例如，未修飾的ACTH在位置AA5具有Glu殘基，在所形成的ACTH類似物中其可以被(D)-Glu、Cys或Asp殘基任選替代。式(II)的絲酸序列還可以包括對應于MC-2R結(jié)合序列的一個或多個M酸替代，所述的MC-2R結(jié)合序列由Hruby等人在美國專利號4，485，039;4,457,864;4，866，038;5,731,408;5，714，576;5,049,547;4,918,055;4,649,191以及5，674，839中描述，這些專利在此引用作為參考。式(I)的(AA")-部分代表著一個氨基酸殘基，其優(yōu)選地為Gly或(D)Gly，但是保留了ACTH類似物化合物的良好生物學功能(例如與ACTH相比降低通過ACTH類似物產(chǎn)生的皮質(zhì)類固醇分泌，降低通過內(nèi)源ACTH和/或MC-2R結(jié)合產(chǎn)生的皮質(zhì)類固醇分泌)的其它氛基酸也可以在(AA")-位置進行替代。式(I)的(AA"-")-部分代表式(ni)的4個氨基酸的序列(III)-AAls-AA16-AA17-AA18-。未修飾的人ACTH的(AA"-")-部分包含序列Lys-Lys-Arg-Arg(SEQIDNO:5)，其包括4個相鄰的具有堿性側(cè)鏈的氨基酸。優(yōu)選地，ACTH類似物化合物包括式(III)中的一個或多個氨基酸殘基替代，這些替代防止或?qū)乖谶@些位點的酶切斷裂。還優(yōu)選地，ACTH類似物化合物包括式(III)中的一個或多個氨基酸替代，這些替代避免了存在相鄰的帶有堿性側(cè)鏈的氨基酸。優(yōu)選地，AA"-和AA16-獨立地選自Lys、Ala、Gly和Val;優(yōu)選地，AA"-AA"獨立地選自Arg、Ala、Gly和Val。在一個方面，這樣選擇SEQIDNO:2或式(III)的殘基AA16-AA17-AA18的一個或多個M酸替代，使得ACTH類似物的氮基酸殘基16、17和18不包括2個相鄰的選自Lys和Arg的#^基酸殘基。換句話說,在一些ACTH類似物中，肽序列AA"-AA"-AA化部分中氨基酸Lys和Arg不能彼此相鄰(即一個精氨酸與一個賴氨酸相鄰，反之亦然)或者自身相鄰(即一個精氨酸與另一個精氨酸相鄰，或者一個賴氨酸與另一個賴氨酸相鄰)出現(xiàn)。作為替代，AA"-AA"-AA"部分中的一個或多個氨基酸可以被除Lys或Arg外的任何氨基酸或氨基酸類似物替代，以提供了一種或多種下列優(yōu)選的ACTH類似物的生物功能(1)與未修飾ACTH相比，降低在ACTH類似物存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，(2)降低在內(nèi)源ACTH存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，以及(3)與未修飾ACTH相比，增加對MC-2R的結(jié)合親和性同時降低對MC-2R受體的活化。例如，ACTH類似物化合物可以包括在式(III)的一個或多個位置替代未修飾ACTH殘基的Ala殘基。ACTH類似物化合物可以包括替代式(III)中SEQIDNO:5殘基的Gly或者帶有烷基側(cè)鏈的任意M酸(即Ala、Val、Leu、lie或者包含烷基側(cè)鏈的氨基酸類似物，例如Nle)。還優(yōu)選地，ACTH類似物還可以包括替代SEQIDNO:2的M酸位置15、16、17或18中任意兩個位置的至少一個Ala殘基和至少一個Arg殘基。任選地，在SEQIDNO:2的位置15、16、17或18處的ACTH類似物替代物是選自下列的氮基酸Lys、Arg、Ala、Gly、Val、Leu、Ile、包含烷基側(cè)鏈的氨基酸類似物如Nle、Gln、Asn、Glu和Asp。最優(yōu)選地，ACTH類似物包含根據(jù)式(III)的氨基酸序列，所述式(III)選自Lys-Arg-Ala-Ala-(SEQIDNO:6)、Ala-Lys-Ala-Arg(SEQIDNO:7)、Lys-Ala謹Ala畫Arg(SEQIDNO:8)、Lys-Ala證Arg-Ala-(SEQIDNO:9)、Gln-Lys-Gln-Arg(SEQIDNO:10)以及Ala-Ala-Ala-Ala(SEQIDNO:ll)。ACTH類似物化合物還可以包括在位置15、16、17或18處用具有烷基側(cè)鏈的氨基酸或氨基酸類似物包括Gly、Ala、Val、Leu、Ile或Nle進行的一個或多個氨基酸殘基替代。ACTH類似物包括在AA1S-AA16-AA17-AA18位置的一個或多個位置替代的其它M酸，這些替代^:留了ACTH類似物化合物的一種或者優(yōu)選多種生物學功能，例如與未^務飾ACTH相比降^f氐通過ACTH類似物產(chǎn)生的皮質(zhì)類固醇分泌，降低通過內(nèi)源ACTH和/或MC-2R結(jié)合產(chǎn)生的皮質(zhì)類固醇分泌。式(I)的(AA")-部分代表一個氨基酸殘基，其可以是Pro、Trp或Ala，但是優(yōu)選地是Trp、Ala或者可以在(AA,-位置進行替代同時又保留了ACTH類似物化合物的一種或優(yōu)選多種生物學功能(例如與未修飾ACTH相比降低通過ACTH類似物產(chǎn)生的皮質(zhì)類固醇分泌，降低通過內(nèi)源ACTH和/或MC-2R結(jié)合產(chǎn)生的皮質(zhì)類固醇分泌)的其它氨基酸。優(yōu)選地，ACTH類似物化合物具有可以在(AA")-位置替換的除脯氨酸以外的其它氨基酸。更加優(yōu)選地，ACTH類似物包括在(AA")-位置替換的氨基酸Trp,而不是Pro。未修飾ACTH肽序列，例如hACTH和mACTH，包含(AA")-位置的脯氨酸殘基。脯氨酸具有下列化學結(jié)構(gòu)脯氨酸的化學結(jié)構(gòu)包括一個形成環(huán)結(jié)構(gòu)的側(cè)鏈。脯氨酸常存在于a螺旋的末端或者轉(zhuǎn)角或環(huán)中。與在多肽中以幾乎唯一的反式形式存在的其它氛基酸不同，脯氨酸在肽中可以以順式構(gòu)型存在。順式和反式幾乎是等能的。優(yōu)選地，在式(III)中包含SEQIDNO:6-10的ACTH類似物中，(AA19)-是Trp，但是還提供了在ACTH類似物中(AA")-是Pro的化合物。因此，特別優(yōu)選的ACTH類似物是修飾的hACTH、mACTH或hACTH(l-24)肽序列，其中(AA14)-(AA15-18)-(AA19)-選自-Gly"-Lysls-Arg16-Ala17-Ala18-Trp19-(SEQIDNO:12);-GlyW-Ala^-Lys^AlaU-Arg^Pro"-(SEQIDNO:13);-Gly"-Lys15-Ala16-Ala17-Arg18-Pro19-(SEQIDNO:14);-Gly14-Lys15-Ala16-Arg17-Ala18-Pro19-(SEQIDNO:15);-Gly14-Gln15-Lys16-Gln17-Arg18-Pro19-(SEQIDNO:16)以及-Gly14-Lys15-Arg16-Ala17-Ala18-Pro19-(SEQIDNO:17)。ACTH類似物包含式(IVa)或式(Ivb)所述的多肽(IVa)N曙(AA""HAA")畫(AA""8)誦(aV9)-(AA20-24)-(ivb)n-(aaW3haa")國(aa"-")-(aa"haa2"4)-Ac其中N-指多肽的N末端，Ac指多肽的氯基末端。式(VIa)或(VIb)的ACTH類似物包括針對上面式(I)所述的N-(AAM3HAA14HAA1S-18)-(AA19)-,此外還包含連接至式(I)氨基酸序列羧基末端的(AA加")-部分。式(VIa)和(VIb)的(AA20-24)-部分代表著式(V)的5個氨基酸的序列(V)-AA20-AA21AA22AA23-AA24-。未修飾的人ACTH(AA加-24)-部分包含序列Val-Lys-Val-Tyr-Pro(SEQIDNO:18)。優(yōu)選地，ACTH類似物化合物在式(V)中包括一個或多個^J^酸殘基替代，所述替代延長了ACTH類似物的血清半衰期。例如ACTH類似物可以包含對應于式(V)的序列-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-(SEQIDNO:19)。特別優(yōu)選的按照式(IVa)的ACTH類似物包含這樣的序列hACTH(l-24)，即在該序列中包含被SEQIDNO:6替代的式(III)-AA"-AA"-AA"-AA"-部分。一個特別優(yōu)選的式(IVa)化合物是ACTH類似物(KKRRP15-19KRAAW)mACTH(l-24)，其具有序列N-Ser，-Tyr-Ser-Met-Glu5-His-Phe-Arg-Trp國Gly"-Lys-Pro-Val-Gly-Lys15-Arg-Ala-Ala-Trp-Val2°-Lys-Val-Tyr-Pro-Ac(SEQIDNO:20),也稱作"AT814"。其它特別優(yōu)選的ACTH類似物化合物基本上由在位置15、16、17或18處的一個或多個氨基酸殘基帶有丙氨酸或谷氨酰胺替代和/或在位置20、21、22、23或24處的氨基酸殘基帶有丙氨酸替代的SEQIDNO:2的肽組成。例如Costa，幾等人，"MutationalanalysisofevolutionarilyconservedACTHresidues,"GenCompEndocrinol.Mar;136(1):12-6(2004)所描述的那些，該文獻在此全部引用作為參考。在第一個實施方案的第三個方面，ACTH類似物包含通過式(VIa)或式(VIb)所述的多肽(Via)^(AAW^AAMHAA15-18)-^19)-^20-24)-^25-39)-(vib)n-(aa"3)-(aa"haab"8)-(aa"haa2"4)-(aa25-39)-ac其中N-指多肽的氨基末端，Ac指多肽的羧基末端。式(IVa)或(IVb)的ACTH類似物包括上面對于式(IVa)所描述的n誦(aa"3haa")-(aah"8)-(aa"HAA2"V，并且還包含連接至式(IVa)M酸序列羧基末端的(AA"-")-部分。式(VIa)可以任選地包括連接至AA39殘基的額外化學結(jié)構(gòu)，其中AA"殘基形成了式(VIb)結(jié)構(gòu)的氣基末端。式(VIa)和(VIb)的(AA&")-部分代表著式(VII)的15個氨基酸的序列(VII)-AA25-AA26-AA27-AA28-AA29-AA30-AA31AA32-AA33-AA34-AA3S-AA36-AA37-AA38-AA39。未修飾的人ACTH的(AA2"9)-部分包含序列Asn-Gly-Ala-Glu-Asp-Glu畫Ser-Ala-Glu-Ala國Phe誦Pro-Leu-Glu嗎Phe(SEQIDNO:21)。優(yōu)選地，ACTH類似物化合物包括式(VII)中的一個或多個氨基酸殘基替代或者式(VII)的羧基末端的一個或多個氨基酸殘基截斷，只要ACTH類似物化合物具有想要的持續(xù)釋放特性即可。例如，ACTH類似物可以包含對應于式(VII)的序列，其具有SEQIDNO:10的未修飾ACTH序列并且可以任選地通過AA3°的Lys替代和/或AA36的Arg替代修飾。替代變體是那些在M酸序列中至少一個殘基被去除并且在其位置上插入不同殘基的變體。如果想要細微調(diào)整蛋白質(zhì)特性時，可依照下表2進行此類替代。表2列出了可以替代蛋白質(zhì)中原始氨基酸并且在本領域中認為是保守替代的氛基酸。ACTH類似物化合物包括帶有一個或多個保守替代的化合物，所述替代保留了一種或多種下列優(yōu)選的ACTH類似物的生物學功能:(l)與未修飾ACTH相比，降低在ACTH類似物存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，(2)降低在內(nèi)源ACTH存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌，以及(3)與未4務飾ACTH相比，增加對MC-2R的結(jié)合親和性同時降低對MC-2R受體的活化。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>通過選擇比表2中保守性差的替代進行功能或免疫學特性的替代變化，即選擇對維持下列特性中具有更加明顯不同的殘基(a)替代區(qū)域的多肽主鏈結(jié)構(gòu)，例如為折疊構(gòu)象或螺旋構(gòu)象；(b)在耙位點分子的電荷或疏水性；或者(c)側(cè)鏈體積。通常預期產(chǎn)生蛋白質(zhì)特性最大變化的替代將是這些替代，即在其中(a)親水殘基如絲氨酸或蘇氨酸替代疏水殘基如亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸或丙氨酸(或被疏水殘基如亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸或丙氨酸替代)；(b)半胱氨酸或脯氨酸替代任何其它殘基(或者被任何其它殘基替代)；(c)具有正電側(cè)鏈的殘基如賴氨酸、殘基如谷氨酸或天冬氨酸替代)；或者(d)具有大體積側(cè)鏈的殘基如苯丙氨酸替代沒有側(cè)鏈的殘基如甘氨酸(或者被沒有側(cè)鏈的殘基如甘氨酸替代)。ACTH類似物化合物的優(yōu)選的ACTH類似物生物學功能可通過任何適宜方法測量，但是優(yōu)選地通過下面描述的一個或多個測定法開展。具有降低的ACTH功能的ACTH類似物化合物在第二個實施方案中，ACTH類似物是修飾的ACTH肽，與未"f務飾ACTH相比，其降低了在ACTH類似物存在情況下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌。ACTH類似物的結(jié)構(gòu)優(yōu)選才艮據(jù)上面提供的一個或多個結(jié)構(gòu)式選擇。ACTH類似物化合物可降低ACTH介導的血液皮質(zhì)酮的分泌，例如施用ACTH類似物后受試者血液皮質(zhì)類固醇水平降低所示。如通過體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇誘導分析法所測定，與可比施用未修飾的ACTHIM目比，ACTH類似物優(yōu)選使血清皮質(zhì)酮水平降低至少10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、卯％、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%,體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇誘導分析法用于測量受試者血流中的皮質(zhì)類固醇或皮質(zhì)酮水平。更加具體而言，體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇誘導分析法可包括下列步驟首先，向小鼠受試者施用抑制內(nèi)源ACTH產(chǎn)生的活性劑(agent),例如腹腔內(nèi)注射地塞米松；第二，在等待抑制內(nèi)源ACTH產(chǎn)生適當時間階段之后(例如1.5-2.0小時)，通過適宜方法(例如腹腔內(nèi)注射或皮下注射)向小鼠施用測試化合物；第三，在等待所注射測試化合物作用適當時間階段之后(例如1小時)，從受試者得到血液樣品并且通過適宜方法，例如使用12SIRIA試劑盒(ICN，CostaMesa,CA)的竟爭性放射免疫分析法確定血清皮質(zhì)酮水平。實施例l詳細描述了鼠體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇誘導分;f斤法，通過測定ACTH或ACTH類似物作為測試化合物施用后血清皮質(zhì)類固醇，將通過ACTH類似物化合物體內(nèi)誘導的皮質(zhì)類固醇或皮質(zhì)酮分泌與通過未<務飾的ACTH化合物產(chǎn)生的皮質(zhì)類固醇分泌水平相比較。圖1顯示了根據(jù)實施例1使用mACTH(l-24)和多種ACTH類似物測試化合物開展的鼠體內(nèi)皮質(zhì)類固醇腎上腺誘導分析法的結(jié)果。具有降低功能的ACTH類似物組合物通過使用標準的放射免疫分析法(RIA)測定血樣樣品中的皮質(zhì)酮水平而鑒定，所述血樣樣品在向地塞米松抑制的小鼠施用mACTH(l-24)或ACTH類似物化合物后1小時收集。在圖1中，多種ACTH類似物肽的潛能被表示為皮質(zhì)酮誘導的百分數(shù)，其中鼠ACTH的潛能被認為是100%。圖表10顯示ACTH和9個ACTH類似物化合物樣品14的皮質(zhì)酮誘導百分數(shù)12。在樣品2-10中ACTH類似物化合物的皮質(zhì)酮誘導百分數(shù)12顯示為占通過體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇腎上腺誘導分析法所測量的未^"飾mACTH(l-24)的血清皮質(zhì)酮濃度的百分數(shù)20。對于圖1中樣品2-10，結(jié)構(gòu)修飾和所測量的降低百分數(shù)示于下表3。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>內(nèi)源ACTH誘導的皮質(zhì)酮誘導降低在第三個實施方案中，ACTH類似物是修飾的ACTH肽，其降低了在內(nèi)源ACTH存在情況下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌。當ACTH類似物化合物在施用ACTH之前施用或者與ACTH并行施用時可使血清皮質(zhì)類固醇水平降低10-100%。優(yōu)選地，如通過體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法如在實施例2中所述的分析法所測定，與單獨施用ACTH相比，施用ACTH類似物化合物使血清皮質(zhì)類固醇水平降低大約10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或者100%。抑制內(nèi)源ACTH所誘導腎上腺激素產(chǎn)生的例證性ACTH類似物化合物通過開展一系列體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法鑒定。ACTH類似物可在施用ACTH之前單獨施用，或者與ACTH并行施用。使用體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法測量了施用具有第一種產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的生物學活性的化合物和測試化合物后受試者血流中的皮質(zhì)類固醇或皮質(zhì)酮水平。具有產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的生物學活性的化合物可以是已知誘導皮質(zhì)類固醇的產(chǎn)生發(fā)生可檢測性增加的任何化合物。測試化合物可與產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物組合施用，測試化合物可在產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物施用之前和/或在產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物施用之后施用。產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物優(yōu)選地是ACTH，但是也可以是具有已知的產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的生物學活性的ACTH類似物。通過^"吏用ACTH類似物測試化合物開展一系列的體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析，可以鑒定出相對于所使用的產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物而言抑制皮質(zhì)類固醇產(chǎn)生的ACTH類似物。優(yōu)選地，以該方式鑒定出的ACTH類似物抑制在內(nèi)源未修飾ACTH存在情況下皮質(zhì)類固醇的產(chǎn)生。體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法可包括通過下列步驟相繼施用測試化合物和產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物首先，向小鼠受試者施用抑制內(nèi)源ACTH產(chǎn)生的活性劑，例如腹腔內(nèi)注射地塞米松；第二，在等待抑制內(nèi)源ACTH產(chǎn)生適當時間階段之后(例如1.5-2.0小時)，通過適宜方法(例如腹腔內(nèi)注射)向小鼠施用測試化合物；第三，在等待測試化合物作用適當時間階段之后(例如l小時)，通過適宜方法(例如腹腔內(nèi)注射)向小鼠施用具有產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇活性的化合物；以及第四，在等待所施用的兩種化合物的生物學活性出現(xiàn)適當時間階段之后(例如1小時)，從受試者得到血液樣品并且通過適宜方法，例如使用1251RIA試劑盒(ICN，CostaMesa，CA)的竟爭性放射免疫分析法確定血清皮質(zhì)酮水平。任選地，步驟2和3可顛倒(首先施用產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物，然后施用測試化合物)。體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法還可以包括通過下列步驟共施用測試化合物和產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物首先，向小鼠受試者施用抑制內(nèi)源ACTH產(chǎn)生的活性劑，例如腹腔內(nèi)注射地塞米松；第二，在等待抑制內(nèi)源ACTH產(chǎn)生適當時間階段之后(例如1.5-2.0小時)，通過適宜方法(例如腹腔內(nèi)注射)向小鼠共施用產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物和測試化合物；以及第三，在等待所施用的兩種化合物的生物學活性出現(xiàn)適當時間階段之后(例如1小時)，從受試者得到血液樣品并且通過適宜方法，例如使用1251RIA試劑盒(ICN，CostaMesa，CA)的竟爭性放射免疫分析法確定血清皮質(zhì)酮水平。同樣，在一些實施方案中，在任何體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法中的第一個步驟可以換成以第4個步驟的方式測定受試者血液中的起始的內(nèi)源皮質(zhì)類固醇或皮質(zhì)類固醇水平，而不是施用抑制ACTH產(chǎn)生的活性劑。實施例2詳細描述了鼠體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法。開展一系列個別的體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法鑒定體內(nèi)抑制ACTH腎上腺激素產(chǎn)生的ACTH類似物。如實施例2中所述，在施用(l)ACTH(產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物)，(2)ACTH類似物(測試化合物)，然后施用ACTH，(3)ACTH和ACTH類似物組合，和(4)單獨的ACTH類似物之后，測定了受地塞米松抑制的小鼠中的血清皮質(zhì)酮水平。表4顯示所測量的以施用時間為函數(shù)的小鼠血清皮質(zhì)類固醇水平。表4組合施用ACTH和ACTH類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>關(guān)于表4，如實施例2中所述，首先在時間-O分鐘向5個獨立的體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇分析中的小鼠施用地塞米松。在"栽體，，樣品中，在地塞米松注射后120分鐘施用單獨的液體栽體，結(jié)果在1小時之后沒有在血液樣品中檢測到皮質(zhì)酮。在"ACTH"樣品中，在地塞米松注射120分鐘后施用ACTH，結(jié)果在1個小時后在血液樣品中檢測到的皮質(zhì)酮水平為500±76ng/mL。在"AT90-ACTH120"樣品中，在地塞米松注射1.5小時時施用ACTH類似物(KKRRP15-19KRAAW)mACTH(1-24),然后30分鐘后施用ACTH(1-24)，結(jié)果在1個小時后檢測到的血清皮質(zhì)酮水平為175±27ng/mL,在"(AT+ACTH)120"樣品中，在地塞米松注射120分鐘后，同時施用ACTH類似物(KKRRP15-19KRAAW)mACTH(l-24)("AT8"")和mACTH(I-24),結(jié)果在1個小時后檢測到的血清皮質(zhì)酮水平為51±8ng/mL。在"AT"樣品中，在地塞米松注射120分鐘施用ACTH類似物(KKRRP15-19KRAAW)mACTH(1-24)，導致血清皮質(zhì)酮水平可忽略不計，為7士7ng/mL。圖2顯示了來自表2的結(jié)果，表示為如實施例2中所述在地塞米松注射180分鐘時測定的皮質(zhì)酮水平的百分數(shù)。圖表100顯示了對于表2中所述的ACTH和4個樣品114的皮質(zhì)酮誘導百分數(shù)，其中對于施用ACTH所測量的皮質(zhì)酮水平120被歸一化成為100%,樣品"AT卯-ACTH120"140顯示在施用ACTH之前30分鐘施用ACTH類似物，其導致在ACTH施用后1小時時血液樣品中的血清皮質(zhì)酮水平降低大約65%。樣品"(AT+ACTH)120"160顯示同時施用ACTH類似物和ACTH,其導致1小時后血液樣品中血清皮質(zhì)酮水平降低大約90%。如在"AT"樣品180以M1中的樣品10中所見，M用ACTH類似物導致1小時后血液樣品中的血清皮質(zhì)酮水平降低大約99%-100%。"載體"樣品在圖2中未顯示。腎上腺ACTH受體結(jié)合分析法在第四個實施方案中，ACTH類似物是結(jié)合腎上腺ACTH受體，例如MC-2R受體的修飾的ACTH肽，優(yōu)選地，與未修飾ACTH相比，其與MC-2R的結(jié)合親和性增加但對MC-2R受體的活化降低。優(yōu)選的ACTH類似物化合物以比內(nèi)源未修飾ACTH更大的親和性結(jié)合至腎上腺膜，并且在體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析法(實施例3)中能夠置換未修飾ACTH。如通過體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析法所測定，ACTH類似物化合物對結(jié)合至腎上腺膜制備物的ACTH的置換優(yōu)選至少20%。更加優(yōu)選地，與未修飾ACTH相比，ACTH類似物化合物對外植的腎上腺膜的親和性高2、3、4、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100倍。與腎上腺膜的結(jié)合親和性比內(nèi)源未修飾ACTH與腎上腺膜的結(jié)合親和性更大并且可以置換未修飾ACTH的ACTH類似物化合物可以使用體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析法(實施例3)鑒定。圖3顯示了使用例證性的具有SEQIDNO:20的ACTH類似物AT814("AT814")通過實施例3中所述的方法開展的體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析的結(jié)果。圖表200顯示了通過Y計數(shù)器對與放射性ACTH孵育的腎上腺膜制備物進行計數(shù)所測量的每分鐘計數(shù)212(CPM)。CPM水平越高表明存在的放射標記化合物的量越大。柱210顯示沒有任何腎上腺膜存在下測量的背景值。柱220顯示在外植的腎上腺膜與放射性標記的mACTH(l-24)混合2小時后(沒有竟爭性結(jié)合)檢測的放射性標記的未修飾mACTH(l-24)的水平。柱230、240和250顯示竟爭結(jié)合分析的結(jié)果，其中非放射性標記的("非標記")mACTH(l-24)通過竟爭性結(jié)合受體如腎上腺膜上的MC-2R從外植的腎上腺膜置換標記的mACTH(l-24)(在柱220中所測量)。具體而言，柱230顯示在放射性標記的外植腎上腺膜與10nM"非標記"mACTH(l-24)混合后檢測到的放射性標記的mACTH(l-24)水平的降低；柱240顯示在加入100nM"非標記，，mACTH(l-24)后結(jié)合至放射性標記外植腎上腺膜上的放射性標記mACTIH(l-24)水平進一步降低；并且柱250顯示在外植腎上腺膜制備物與1000nM"非標記，，mACTH(l-24)混合后連接至放射性標記的外植腎上腺膜上的放射性標記mACTH(l-24)水平進一步降低。隨著"非標記"mACTH(l-24)濃度的增加，所檢測到的放射性標記的mACTH(l-24)降低，這表明"非標記，，mACTH(l-24)將放射性標記的mACTH(l-24)從MC-2R受體上置換下來。使用通過SEQIDNO:20所述的"非標記"(非放射性標記)AT814ACTH類似物化合物代替mACTH(l-24)重復進行體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析。柱235、245和255顯示竟爭性結(jié)合分析結(jié)果，其中通過10nM(柱235)、100nM(柱245)和1000nM(柱255)濃度的"非標記，，AT814的竟爭性結(jié)合，非放射性標記AT814將放射性標記的mACTH(l-24)從外植腎上腺膜(在柱220中所測量)上置換下來。隨著"非標記"AT814濃度的增加，所檢測到的放射性標記的AT814的水平降低，這表明"非標記"AT814置換了放射性標記的mACTH(l-24)。具體而言，圖表200中的結(jié)果表明，AT814與腎上腺膜結(jié)合的親和性比放射性標記的mACTH(l-24)與腎上腺膜結(jié)合的親和性高大約3倍至大約4倍。AT814結(jié)合至腎上腺膜的親和性的增加預示著與MC-2R受體結(jié)合的親和性增加。ACTH類似物化合物的體外測試在第五個實施方案中，ACTH類似物化合物可以降低在外植組織中未修飾ACTH對皮質(zhì)酮的體外誘導。當外植腎上腺膜與ACTH類似物化合物混合時優(yōu)選地使無血清培養(yǎng)基中質(zhì)類固醇水平降低10-100%。優(yōu)選地，與單獨施用未修飾ACTH相比，ACTH類似物化合物使通過體外無血清腎上腺皮質(zhì)類固醇抑制分析法所測定的血清皮質(zhì)類固醇水平降低大約10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或者100%(實施例4)。抑制由外植腎上腺膜與未修飾ACTH接觸所誘導的腎上腺激素產(chǎn)生的例證性ACTH類似物化合物通過一系列的體外無血清腎上腺皮質(zhì)酮抑制分析鑒定出來，這表明ACTH類似物化合物對腎上腺皮質(zhì)酮的產(chǎn)生具有直接作用。開展了一系列體外無血清腎上腺皮質(zhì)類固醇抑制分析，以鑒定抑制ACTH誘導的腎上腺激素體外產(chǎn)生的ACTH類似物。按照實施例4中的過程，測量了包含外植腎上腺膜和未修飾ACTH、AT814ACTH類似物(SEQIDNO:20)或ACTH與AT814組合(每種100ng/mL)的無血清培養(yǎng)基中的皮質(zhì)酮濃度。表3顯示了使用外植小鼠腎上腺膜開展的一系列體外無血清腎上腺皮質(zhì)酮抑制分析中在無血清培養(yǎng)基中測量的皮質(zhì)類固醇水平。在將腎上腺膜置于無血清M199培養(yǎng)基中之后2.0小時測定皮質(zhì)酮水平，并且表5中的每一皮質(zhì)酮水平為5個樣品的平均值。表5組合施用ACTH和ACTH類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>關(guān)于表5，如實施例4中所提供，將一半外植小鼠腎上腺置于M199無血清培養(yǎng)基(Invitrogen)中30分鐘。在"M199培養(yǎng)基"樣品中，在起始的30分鐘之后，腎上腺膜在M199無血清培養(yǎng)基中總共浸泡2.0小時(共總2.5小時)，然后使用標準RIA放射測定技術(shù)測量培養(yǎng)基中的皮質(zhì)酮水平。在"ACTH"樣品中，將未修飾ACTH加入到M199培養(yǎng)基中，結(jié)果2個小時后在培養(yǎng)基中檢測到的皮質(zhì)酮水平為大約600mg/mL。在"AT-814"樣品中，將ACTH類似物(KKRRP15-19KRAAW)mACTH(1-24)(SEQIDNO:20)加入到M199培養(yǎng)基中，結(jié)果2個小時后在培養(yǎng)基中檢測到的皮質(zhì)酮水平為大約290mg/mL。在"ACTH+入1-814，，樣品中，將100ng/mLAT814ACTH類似物(SEQIDNO:20)和100ng/mL未修飾ACTH—起加入到M199培養(yǎng)基中，結(jié)果2個小時后在培養(yǎng)基中檢測到的皮質(zhì)酮水平為大約396mg/mL。圖4為圖表300,其顯示了來自表3的皮質(zhì)酮誘導百分數(shù)302，表示為如上面以及實施例4中所述的對于"ACTH"樣品310、"AT-814"樣品320以及"ACTH+AT-814"樣品330所測定的M199培養(yǎng)基中的皮質(zhì)酮水平相對于對于ACTH所測量的量310的百分數(shù)。"M199培養(yǎng)基中"樣品未顯示于圖2中。關(guān)于圖4，向M199無血清培養(yǎng)基中的腎上腺膜加入AT814所誘導皮質(zhì)酮的量可以忽略不計，與僅加入未修飾ACTH相比，組合加入等量的AT814ACTH類似物和未修飾ACTH4吏所誘導的皮質(zhì)酮的量降低大約65%。ACTH類似物化合物的體內(nèi)測試對于某些應用，優(yōu)選使用血清半衰期延長的ACTH類似物化合物。ACTH類似物化合物可以任選包括一個或多個氨基酸替代或截斷，使得ACTH類似物的血清半衰期與未修飾ACTH或另一個ACTH類似物相比得以延長。例如，ACTH類似物化合物可以包含未修飾ACTH序列M酸位置25-39中的一個或多個氨基酸替代，使得化合物的血清半衰期與ACTH序列相比延長。優(yōu)選的ACTH類似物化合物可以具有比未修飾ACTH更長的血清半衰期。在血液中，ACTH的半衰期小于大約20分鐘。因此，特別優(yōu)選的ACTH類似物化合物具有大于大約20、30、40或50分鐘或更長的血清半衰期。在第六個實施方案中，提供了半衰期延長的ACTH類似物。半衰期鹽城的ACTH類似物被鑒定為這樣的類似物，即通過體內(nèi)檢測的血清皮質(zhì)類固醇濃度所測定的第一種活性高于通過在體外活性中檢測的皮質(zhì)類固醇的無血清濃度所測定的第二種活性，其中體內(nèi)活性通過實施例1的血清腎上腺皮質(zhì)類固醇抑制分析法測定而體外活性通過實施例4的體外無血清腎上腺皮質(zhì)類固醇抑制分析法測定。在一些情況下，在其它位置進行氨基酸替代也能延長ACTH類似物的血清半衰期，因此某些實施方案通過對包括hACTH或mACTH在內(nèi)的ACTH分子的20-24位置進行一個或多個M酸修飾而延長了ACTH類似物的血清半衰期。圖5比較了7種ACTH類似物化合物410、420、430、440、450、460和470的體內(nèi)活性(灰色柱)和體外活性(白色柱)。對于所有7種ACTH類似物化合物而言，使用實施例1的方法測定體內(nèi)活性，并且使用實施例4的方法測定體外活性。結(jié)果以所測量的相對于mACTH(1-24)序列(SEQIDNO:2)的百分數(shù)"％皮質(zhì)酮誘導"柱型圖提供。如在圖5樣品460中所見，所指定的"Alal9-24，，指ACTH類似物(AAAAA20-24VKVYP)ACTH(l-24)，其包含在mACTH的#^酸19-24的每一位置上的Ala殘基替代。樣品460顯示，相對于該化合物的體外活性464而言，體內(nèi)測定的血清半衰期462增加，并且比未修飾mACTH的體外活性高大約50%。此外，(AAAAA20-24VKVYP)ACTH(l-24)ACTH類似物460的體內(nèi)活性比mACTH和其它ACTH類似物410、420、430、440、450和470的體內(nèi)活性高。這些結(jié)果表明，在位置20-24處的氮基酸殘基可能在決定ACTH類似物化合物的血清半衰期中起作用。特別優(yōu)選地，ACTH類似物化合物在ACTH的20-24位置具有一個或多個M酸替代以延長(相對于ACTH而言)血清半衰期。同樣也希望的是，ACTH類似物化合物可以包括這樣的g酸替代，即如通過體內(nèi)(實施例l)或體夕卜(實施例4)分析法所測定，延長了血清半衰期但一點也沒有增加或者更加優(yōu)選降低ACTH類似物對皮質(zhì)酮的誘導。例如，與未修飾mACTH(l-24)相比，ACTH類似物410、420、430、440、450和470中位置15-19中的替代降低了ACTH類似物的體內(nèi)和體外皮質(zhì)酮誘導活性。具體而言，ACTH類似物410是(K15A，R17A)mACTH(l-24)ACTH類似物，表明其體外活性414大于其體內(nèi)活性412;ACTH類似物420是(K16A，R17A)mACTH(l-24)ACTH類似物，表明其體外活性424大于其體內(nèi)活性422;ACTH類似物430是(K16A，R18A)mACTH(l-24)ACTH類似物，表明其體外活性434大于其體內(nèi)活性432;ACTH類似物440是(K15Q，R17Q)mACTH(l-24)ACTH類似物，表明其體外活性444大于其體內(nèi)活性442;并且ACTH類似物470是(P19W，K21A)mACTH(l-24)ACTH類似物，表明其體外活性474大于其體內(nèi)活性。篩選方法在第七個實施方案中，還提供了篩選可用于阻斷過量ACTH同時維持腎上腺健康狀態(tài)的ACTH類似物的方法?？芍苽涠喾NACTH類似物并向患者施用以評價體內(nèi)對可的松的誘導。某些化合物的的分子識別特異性(即抗原被抗體識別)能形成適宜的復合物，這可作為液體中的分析型免疫測定法和固相界面上免疫傳感器的基礎。這些分析方法可以是基于觀察靶分析物(即結(jié)合MC2R受體的化合物)與高特異性結(jié)合試劑之間的配體結(jié)合反應產(chǎn)物的配體結(jié)合分坤斤法。在某些情況下，對于特定的敏感篩選法，將可選擇的結(jié)合分析物的化合物例如適體應用于配體結(jié)合分析法中。適體是能夠以高親和性和特異性識別多種靶分子的單鏈DNA或RNA寡核苷酸序列。在多種診斷形式中，這些結(jié)合配體的寡核苷酸模擬抗體的特性。它們折疊成獨特的總體形狀以形成針對把結(jié)構(gòu)的復雜結(jié)合溝。適體通過稱作指數(shù)富集配體系統(tǒng)進化(SELEX)的體外選擇過程鑒定。在敏感表面(sensingsurface)儲存方面，適體比抗體優(yōu)越。此外，雖然親和常數(shù)一貫低于抗體的親和常數(shù)并且這些化合物的穩(wěn)定性仍然值得懷疑，但是由于存在可以以任何數(shù)量高度重復合成的方法，因此它們可特別用于復合物生物學度量法中的篩選應用(即用于篩選在ACTH-(15-19)和/或ACTH-(21)位置具有替代氣基酸殘基并且在結(jié)合MC2R中特別活性的ACTH類似物中)。備選地，分子印跡技術(shù)可用于篩選影響MC2R活性的化合物。這是一個基于制備聚合吸附劑的技術(shù)，對于特定物質(zhì)或結(jié)構(gòu)類似物選擇預先確定聚合吸附劑。塑料材料的功能性和交聯(lián)性單體例如甲基丙烯和苯乙烯可與才莫板配體(templatingligand)相互作用以產(chǎn)生低能量的相互作用。然后，誘導聚合。在該過程中，目的分子通過非共價自身裝配方法或者可逆的共價方法陷入到聚合物中。在終止聚合反應后，將模板分子洗下來。所得到的模板的印跡被保留在剛性聚合物中并保留了模板的空間(大小、形狀)和化學(互補功能性的特定排列)記憶。經(jīng)過分子印跡的聚合物(MIP)可以與抗原-抗體相互作用相似的特異性結(jié)合才莫板(=分析物)。分子印跡聚合物除了主要用于固相提取和色鐠以外，還可用作竟爭結(jié)合分析法中抗體的非生物學替代物。在一般生物細胞的生長過程中，吸收含碳的營養(yǎng)物如葡萄糖并釋放酸性代謝產(chǎn)物如乳酸。在微生理記錄儀中，代謝率的這些變化被記錄為細胞周圍培養(yǎng)基酸化率的變化(即Raley-Susman，K.M.等人,"Effectsofexcitotoxinexposureonmetabolicrateofprimaryhippocampalcultures:applicationofsiliconmicrophysiometrytoneurobiology,"JNeurosci"12(3):773-780(1992);Baxter,GT.等人，"PKCsisinvolvedingranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactorsignaltransduction:evidencefrommicrophysiometryandantisenseoligonucleotideexperiments,"Biochemistry,31:1卯50-10954(1992);Bouvier，C.等人，"DopaminergicactivitymeasuredinD廣andD2-transfectedfibroblastsbysiliconmicrophysiometry,"J.Recept.Res"13(l-4):559-571(1993);以及McConnell，H.M.等人，"Thecytosensormicrophysiometer:biologicalapplicationsofsilicontechnology,"Science,257:1906-1912(1992))。孩史生理記錄儀可用于檢測影響細胞的分子。此類分子包括神經(jīng)遞質(zhì)、生長因子、細胞因子、受體等。因此，微生理記錄儀方法可提供關(guān)于影響MC2R受體活性的ACTH類似物的有價值的信息。合成的組合文庫可以是用于大規(guī)模生物化學篩選的多種多樣結(jié)構(gòu)的來源(即Sastry，L.等人，"Screeningcombinatorialantibodylibrariesforcatalyticacyltransferreactions,"CibaFoundSymp.，159:145-155(1991);Persson，MAA.等人，"Generationofdiversehigh-affinitymonoclonalantibodiesbyrepertoirecloning,"Proc.Natl.Acad.Sci.USA,33:2432-2436(1991);以及Houghten，R.A.，"Generationanduseofsyntheticpeptidecombinatoriallibrariesforbasicresearchanddrugdiscovery,"Nature,354:84-86(1991))。此類文庫通過組合液相和固相化學產(chǎn)生，并且從固相支持物上裂解下來用于篩選。分離技術(shù)例如與質(zhì)鐠或串連質(zhì)鐠相連的液相色鐠、氣相色鐠以及毛細管電泳建立起可用于結(jié)構(gòu)評估的分析系統(tǒng)(即Hsieh,S.等人，"Separationandidentificationofpeptidesinsingleneuronsbymicrocolumnliquidchromatography-Matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometryandpostsourcedecayanalysis,"AnalChem.，70(9):1847-1852(1998);Tretyakova，N.Y.等人，"Quantitativeanalysisofl，3-butadene-inducedDNAadducts!Viv/wandiViW/rousingliquidchromatographyelectrosprayionizationtandemmassspectrometry,"J.MassSpectrom,33:363-376(1998);以及Taylor，G.W.等人，"Excursionsinbiomedicalmassspectrometry,"Br.J.Clin.Pharmacol"41:119-126(1996))。質(zhì)語在提供化合物/分子的分子量信息方面特別有用。隨著對大分子的精確和可控片段化，還可能得到關(guān)于序列的信息。篩選ACTH類似物化合物以鑒定與SEQIDNO:2或SEQIDNO:l的未修飾ACTH相比誘導腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇分泌較少的ACTH類似物化合物的方法包括腎上腺膜與ACTH類似物相接觸的步驟。篩選ACTH類似物化合物以鑒定降低ACTH所誘導的皮質(zhì)類固醇分泌的化合物的方法包括一個或多個下列步驟a.提供第一腎上腺膜和第二腎上腺膜；b.將第一腎上腺膜與包含含有未修飾ACTH肽的未修飾肽的第一個組合物接觸，然后測定與未修飾ACTH肽接觸后由第一腎上腺膜所分泌的皮質(zhì)類固醇的第一個濃度；c.將第二腎上腺膜與包含ACTH類似物的第二個組合物接觸，然后測定與ACTH類似物接觸后由第二腎上腺膜所分泌的皮質(zhì)類固醇的第二個濃度；d.將所分泌皮質(zhì)類固醇的第一個濃度與所分泌皮質(zhì)類固醇的第二個濃度相比較；和e.確定是否第二個化合物誘導的皮質(zhì)類固醇分泌比第一個化合物誘導的皮質(zhì)類固醇分泌少。未修飾ACTH肽優(yōu)選地為SEQIDNO:2或SEQIDNO:l的肽。第一腎上腺膜和笫二腎上腺膜可位于受試者中并且皮質(zhì)類固醇的濃度為測定的受試者血液中的濃度(體內(nèi)分析法)。備選地，第一腎上腺膜和第二腎上腺膜是從受試者外植的并且皮質(zhì)類固醇濃度為測定的無血清培養(yǎng)基中的濃度(體外分析法)。包括體內(nèi)抑制分析步驟或體外竟爭性結(jié)合分析步驟的篩選分析法還可包括下列步驟，該步驟優(yōu)選地替換步驟(c)或者位于步驟(c)之后而步驟(d)之前a.將第二腎上腺膜與包含ACTH肽的第一個組合物和包含ACTH類似物的第二個組合物同時接觸，然后測定由第二腎上腺膜所分泌的皮質(zhì)類固醇的第二個濃度。篩選分析法可包括開展一個或多個其它分析法的步驟，所述分析法包括表述為血清皮質(zhì)類固醇誘導分析法、血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法、腎上腺結(jié)合分析法或無血清腎上腺抑制分析法的分析法。除非另外指出，步驟可以任何順序開展。ACTH類似物組合物以及施用ACTH類似物可以摻入到用于治療患者中包括與ACTH過表W目關(guān)病在內(nèi)的多種ACTH相關(guān)病的藥物組合物中。短語"可藥用"或"可藥理學接受"同義，指處于合理的醫(yī)學判斷范圍內(nèi)的配體、材料、組合物和/或劑量形式適宜與人和動物的組織接觸使用，而沒有額外的毒性、刺激、變態(tài)反應或其它問題或并發(fā)癥，具有相稱的合理收益/風險比。關(guān)于治療中使用的化合物如ACTH類似物肽的"治療有效量"指制劑中多肽或肽的量，當該量作為目的劑量方案的一部分施用時(向脊索動物如哺乳動物或魚類施用)，根據(jù)待治療病癥或病的臨床可接受的標準或者用于化妝品目的的臨床可接受的標準其減輕了癥狀、改善了狀況或者減慢了疾病發(fā)作，例如對于任何醫(yī)學治療可應用的合理收益/風險比時。如本文所使用，術(shù)語"治療(treat)"或任何其派生詞(即治療(treatment)、治療(treating))涉及并且包括l)預防傾向于患高水平ACTH相關(guān)疾病或病但沒有診斷患有這類疾病或病的患者發(fā)生這種高水平ACTH相關(guān)疾病或?。?)抑制高水平ACTH相關(guān)疾病或病，例如使其停止發(fā)展；或者3)減輕高水平ACTH相關(guān)疾病或病，例如導致疾病或病衰退。"患者"或"受試者"在本文是同義的，用于指根據(jù)本發(fā)明為其提供治療的生物、優(yōu)選脊索動物如哺乳動物、魚類或鳥類。從所公開ACTH類似物以及治療方法受益的哺乳動物包括但不限于猿、黑猩猩、猩猩、人、猴；以及馴養(yǎng)動物(例如寵物)，例如狗、貓、小鼠、大鼠、豚鼠以及倉鼠。魚類包括鮭魚和水產(chǎn)業(yè)所用的其它物種。在本文中所用的術(shù)語"ACTH相關(guān)病，，指可以通過調(diào)節(jié)ACTH介導的皮質(zhì)類固醇或皮質(zhì)類固醇水平、調(diào)節(jié)ACTH與腎上腺膜結(jié)合、或者調(diào)節(jié)ACTH-受體如MC-2R可治療或者對其具有反應的病、病癥、癥狀或疾病，包括某些黑皮質(zhì)素受體相關(guān)病。在本文中使用的的術(shù)語"黑皮質(zhì)素受體相關(guān)病"指通過調(diào)節(jié)受試者中受體與ACTH結(jié)合和/或通過降低受試者中皮質(zhì)類固醇水平可以治療的病、病癥或疾病。ACTH相關(guān)病可以包括"MC-2R相關(guān)病"或者通過調(diào)節(jié)MC-2R受體可治療的病、病癥或疾病。優(yōu)選地，MC-2R相關(guān)病可以通過MC-2R受體與ACTH類似物的結(jié)合(導致與通過內(nèi)源ACTH所分泌的皮質(zhì)類固醇水平相比所分泌的皮質(zhì)類固醇水平降低)治療。本發(fā)明考慮了使用本發(fā)明方法所鑒定化合物的所有立體異構(gòu)體，包括對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體形式。本發(fā)明化合物的各個立體異構(gòu)體可以例立體異構(gòu)體或其它所選捧立體異構(gòu)體的混合物。通過本發(fā)明鑒定的化合物的手性中心可以具有由IUPAC1974推薦(Reeommendation)中定義的S或R、或者D或L構(gòu)型。在第八個實施方案中，本發(fā)明涉及包含ACTH類似物的藥物組合物以及其以治療ACTH相關(guān)病的相關(guān)癥狀的方式向受試者的施用?？梢赃x擇與已知方法相一致的施用途徑?？蓪CTH類似物作為包含可藥用載體的藥物組合物的部分使用?？梢愿鶕?jù)藥物配制領域眾所周知的技術(shù)，與適于目的施用方式的常規(guī)固體或液體栽體或稀釋劑以及藥物添加劑(例如賦形劑、粘合劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、矯味劑等)混合配制包含至少一種本發(fā)明ACTH類似物的藥物組合物，以治療與ACTH水平提高相關(guān)的疾病或病。包含ACTH類似物的藥物組合物可通過任何適宜的手段施用。例如，包含ACTH類似物的組合物可通過皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腦池內(nèi)注射或灌注技術(shù)(例如作為無菌注射水溶液或非水溶液或混懸液)施用；或者鼻內(nèi)施用，例如通過吸入噴霧；或者局部施用，例如以霜劑或軟骨劑的形式；并且以包含非毒性的可藥用載體或稀釋劑的劑量單位制劑形式施用。本發(fā)明的ACTH類似物可以以例如適宜立即釋力文或者延長釋i文的形式施用。立即釋放或者延長釋放可通過使用包含本發(fā)明ACTH類似物的適宜藥物組合物實現(xiàn)，或者特別以延長釋放為例，通過使用裝置如皮下植入物或者滲透泵實現(xiàn)。本發(fā)明的ACTH類似物還可以以脂質(zhì)體的形式施用?？梢愿鶕?jù)已知的方法配制包含本發(fā)明ACTH類似物多肽的藥物組合物，由此其ACTH類似物產(chǎn)物與可藥用載體媒介物組合。可用于預防性和治療性治療的組合物包括一種和多種ACTH類似物化合物以及一種應用手段(例如可注射的載體系統(tǒng)、鼻內(nèi)模式或透皮模式)。如本文所使用的"載體"包括在所使用的劑量和濃度對所接觸的細胞或者受試者無毒的可藥用載體、賦形劑或穩(wěn)定劑。如本文所使用的短語"可藥用載體"意思是指參與攜帶或轉(zhuǎn)運目的化學藥品從一種器官或身體的一部分到另一種器官或身體的另一部分的可藥用材料、組合物或媒介物，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料。每一載體必須是"可接受的"(在與制劑中的其它成分相容方面)、對患者無毒的并且基本上是無熱原的?？捎米骺伤幱幂d體的材料的一些實例包括(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素以及醋酸纖維素；(4)powderedkagacanth;(5)麥芽；(6)白明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，例如可可脂以及suppositorywaxes;(9)油類，例如花生油、棉花子油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)乙二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如丙三醇、山梨糖醇、甘露醇以及聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯以及月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)褐藻酸；(16)無熱原水；(17)等張鹽；(18)林格氏液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；以及(21)在藥物配制中可用的其它無毒的相容物質(zhì)。在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是非熱原的，即在向患者施用時不引起溫度顯著升高。通常，生理可接受的載體是水溶性的pH緩沖溶液。可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所使用的劑量和濃度對接受者無毒，并且包括緩沖劑例如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸；包含抗壞血酸在內(nèi)的抗氧化劑；低分子量(小于大約IO個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白、白明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；M酸或氨基酸衍生物，例如正亮氨酸或鳥氨酸；單糖、二糖以及其它糖類，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑例如EDTA;糖醇例如甘露醇或山梨糖醇；形成鹽的抗衡離子例如鈉；和/或非離子表面活性劑例如TWEE『m、PLURONICStm或者PEG?？梢酝ㄟ^常規(guī)手段制造用于ACTH類似物的任何載體。然而，如果在栽體中使用醇，則ACTH類似物應該在微團、脂質(zhì)體或"反(reverse)"脂質(zhì)體中以防止ACTH類似物變性。同樣地，當將ACTH類似物置于載體中并且載體是加熱過的或者已經(jīng)被加熱過，則應該在載體稍稍變冷后加入ACTH類似物，以避免ACTH類似物被熱變性。栽體優(yōu)選是無菌的。一種或多種ACTH類似物可以以液體形式或者凍干狀態(tài)加入到這些物質(zhì)中，其中當ACTH類似物遇到液體時其會溶解。在修飾的ACTH類似物與載體系統(tǒng)混合之前或者混合的同時，ACTH類似物可以處于穩(wěn)定化的緩沖環(huán)境中以維持藥理學適宜的pH范圍，例如在大約4.0和大約9.0之間，包括pH大約5.0、6.0、7.0、8.0或者它們之間的以0.05為間隔的任何pH或者它們之間的多個0.05的間隔，例如5.2、6.5、7.4、7.5和8.5的卩11值。通過將具有預期純度的ACTH類似物活性成分任選地與生理可接受載體、賦形劑和穩(wěn)定劑(Remington'sPharmaceuticalSciences16thedition,Osol，A.Ed.(1980))混合，制備適于儲存的凍干制劑和水溶液形式的治療性制劑。穩(wěn)定化的緩沖液應該允許ACTH類似物發(fā)揮最佳活性。緩沖液可以包含還原劑，例如二硫蘇糖醇。穩(wěn)定化的緩沖液還可以是或者包括金屬螯合劑，例如乙二胺四乙酸二鈉鹽，或者其還可以包含磷酸鹽或檸檬酸鹽磷酸鹽緩沖液或者任何其它緩沖液。本發(fā)明采用的化合物的有效量可以通過本領域的普通技術(shù)人員確定。ACTH類似物的有效劑量比或者有效量會部分地依賴于ACTH類似物是治療性使用還是預防性使用、接受者接觸傳染性細菌的持續(xù)時間、個體大小和體重以及醫(yī)學判斷范圍內(nèi)的其它考慮因素。使用包含ACTH類似物的組合物的持續(xù)時間也取決于是預防性目的還是治療性目的，在預防性目的中，使用可以是每小時、每天和每周使用較短時間，在治療性目的中，需要強度更大的組合物使用方案，以致于使用會持續(xù)數(shù)小時、數(shù)天或者數(shù)周和/或在每天的基礎上或者在每天的固定間隔使用。所采用的劑量形式應該提供對于最短時間(aminimumamountoftime)的最小數(shù)量單位。本發(fā)明藥物組合物的劑量以及目的藥物濃度會取決于特定用途而變化。例如，當本發(fā)明的ACTH類似物為了治療庫欣綜合征和早產(chǎn)向患者施用時，對于成人的例證性劑量包括每天每kg體重大約0.001至100mg活性化合物，其可以以單次劑量形式施用或者以各個分開的劑量形式(例如每天1-4次)施用。應當理解，對于任何特定化合物的特定劑量水平和劑量頻率可以變化，并且會依賴于多種因素，包括所采用特定化合物的活性、該化合物的代諒^！定性和作用時間長短、物種、年齡、體重、一般健康狀況、患者的性別和飲食、施用方式和時間、排泄率、藥物組合以及特定病的嚴重性。對適當劑量或者施用途徑的確定在本領域普通醫(yī)師的技術(shù)范圍內(nèi)。動物實驗為確定治療人的有效量提供了可靠的指導.有效量的種間類推可按照Mordenti，J.和Chappell，W."Theuseofinterspeciesscalingintoxicokinetics"InToxicokineticsandNewDrugDevelopmentYacobi等人編，PergamonPress,NewYork1989，第42-96頁中設計的原則進行。提供有效量ACTH類似物的ACTH類似物活性單位的濃度可以在大約10單位/ml至大約500,000單位/ml液體(鼻和口腔通道的濕和濕潤環(huán)境中的液體)范圍內(nèi)，并且一般可以在大約10、20、30、40、50、60、70、80、90或100單位/ml至大約50,000單位/ml范圍內(nèi)。因此，代表性的數(shù)值包括大約200單位/ml、300單位/ml、500單位/ml、l，OOO單位/ml、2，500單位/ml、5,000單位/ml、10,000單位/ml、20,000單位/ml、30,000單位/ml和40,000單位/mL更加具體而言，接觸活性ACTH類似物單位的時間可以影響目的濃度活性ACTH類似物單位/ml。用于體內(nèi)施用的制劑優(yōu)選是無菌的。這可以在凍干和重構(gòu)之前或之后，通過無菌濾膜過濾而容易地實現(xiàn)。本文的治療性組合物一般被置于具有無菌入口的容器中，例如帶有可通過皮下注射針頭刺穿塞子的靜脈溶液袋或瓶。包含ACTH類似物的藥物組合物實例包括可注射組合物、提供在目的時間階段內(nèi)持續(xù)釋放ACTH類似物的組合物、用于皮膚施用的組合物、可注射凝膠、用于可植入醫(yī)學裝置的涂層(coating)、粘膜粘附組合物或者用于鼻的組合物或其它可吸入組合物。在一些實例中，ACTH類似物可以通過肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)注射施用。例如，ACTH類似物可以通過肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、真皮下、皮內(nèi)或其組合方式施用。可注射組合物優(yōu)選地包含適宜載體和一種或多種ACTH類似物化合物。載體可以由蒸餾水、鹽溶液、白蛋白、血清或其任意組合組成。在選擇肌肉內(nèi)注射作為施用方式的情況下，可以使用等張制劑。通常，用于維持等張性的添加劑包括氯化鈉、右旋糖、甘露醇、山梨糖醇和乳糖。在一些情況下，使用了等張溶液，例如磷酸緩沖鹽水。穩(wěn)定劑包括白明膠和白蛋白。在一些實例中，向制劑中加入血管收縮劑。提供的藥物制劑是無菌的且無熱原的。通常，如上面所提到，靜脈內(nèi)注射是最適宜的。用于腸胃外施用的例證性組合物包括可注射溶液或混懸液，其可以包含例如適宜的、無毒的、腸胃外施用可接受的稀釋劑和溶劑，例如甘露醇、1，3-二丁醇、水、林格氏液、等張氯化鈉溶液，或者其它適宜的分歉劑或潤濕劑和懸浮劑，包括合成的甘油一酯或甘油二酯和包括油酸在內(nèi)的脂肪酸。丙三醇或甘油(1,2,3丙三醇)是商業(yè)可得的用于藥物用途的載體。丙三醇或甘油可稀釋于注射用無菌水中、或者注射用氯化鈉中或者其它可藥用水溶性注射液中，并且以0.1至100%(v/v)、1.0至50%或者大約20%的濃度使用。DMSO是非質(zhì)子溶劑，其可增強許多局部應用藥物的滲透。DMSO可稀釋于注射用無菌水中、或者注射用氯化鈉中或者其它可藥用水溶性注射液中，并且以0.1至100%(v/v)的濃度使用。媒介物也可包括林格氏液、緩沖溶液和右旋糖溶液，特別是當制備靜脈內(nèi)施用溶液使更是如此。在將ACTH類似物加入到載體系統(tǒng)中之前或同時，理想的是ACTH類似物處于維持適宜pH范圍的穩(wěn)定化的緩沖環(huán)境中。穩(wěn)定化緩沖液使得ACTH類似物發(fā)揮最佳活性。緩沖液可以是還原試劑，例如二硫蘇糖醇。穩(wěn)定化緩沖液也可以是或者包括金屬螯合劑，例如乙二胺四乙酸二鈉鹽，或者其還可以包含磷酸鹽或檸檬酸鹽磷酸鹽緩沖液。載體中的緩沖液可用作穩(wěn)定ACTH類似物的環(huán)境。載體可任選包含較少量的添加劑，例如增加等張性和化學穩(wěn)定性的物質(zhì)。此類物質(zhì)在所采用的劑量和濃度時對接受者是無毒的，并且包括緩沖液如磷酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、乙酸和其它有機酸或其鹽；抗氧化劑，如抗壞血酸；低分子量(小于大約IO個殘基)多肽，例如多聚精氨酸或三肽；蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白、白明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；甘氨酸;氨基酸，例如谷氨酸、天冬氨酸、組氨酸或者精氨酸；單糖，二糖以及其它糖，包括纖維素或其衍生物、葡萄糖、甘露糖、海藻糖或糊精；螯合劑，例如EDTA;糖醇，例如甘露醇或山梨糖醇；抗衡離子，例如鈉；非離子表面活性劑，例如聚山梨醇酯、poloxamers或聚乙二醇(PEG);和/或可藥用鹽，例如NaCl、KC1、MgCl2、CaCh等。術(shù)語"可藥用鹽"指抑制劑的相對無毒的無機酸和有機酸加成鹽。這些鹽可以在抑制劑的最后分離和純化過程中原位制備，或者通過將游離堿形式的純化的抑制劑與適宜有機或無機酸反應產(chǎn)生并且分離如此形成的鹽。代表性的鹽包括-14氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、醋酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲M酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽(naphthylate)、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽和laurylsulphonate等(參見例如Berge等人，(1977)"PharmaceuticalSalts"，J.Pharm.Sci.66:1-19)。在其它情況下，在本發(fā)明方法中可用的抑制劑可以包含一個或多個酸性官能團，因此能夠與可藥用堿形成可藥用鹽。在這些情況中的"可藥用鹽"指抑制劑的相對無毒的無機和有機堿加成鹽。同樣，這些鹽可以在抑制劑的最后分離和純化過程中原位制備，或者通過將游離酸形式的純化的抑制劑與適宜堿(例如可藥用金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽、重碳酸鹽)、與氨、或者與可藥用有機伯胺、仲胺或叔胺反應制備。代表性的堿金屬鹽或堿土金屬鹽包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁鹽等。用于形成堿加成鹽的代表性的有機胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌，秦等(參見例如Berge等人，同上)。包含ACTH類似物的可注射藥物制劑可任選包括其它治療劑，包括抗菌劑、抗炎藥、抗病毒藥和局部麻醉藥。局部麻醉藥包括丁卡因、鹽酸丁卡因、利多卡因、鹽酸利多卡因、達克羅寧、鹽酸達克羅寧、鹽酸奎尼卡因、辛可卡因、鹽酸辛可卡因、苦^^未酸氨苯丁酯以及鹽酸丙嗎卡因。用于局部麻醉的例證性濃度為占總組成成分的大約0.025%至大約5%(重量比)。麻醉藥例如苯佐卡因還可以以大約2%至大約25%(重量比)的優(yōu)選濃度使用。藥物組合物還可以任選包含一種或多種額外的生物活性劑以在不同水平抑制類固醇激素合成(即催化類固醇激素合成不同階段的酶的抑制劑)，包括在J.類固醇Biochem.，第5巻，第501頁，(1974)中綜述的那些生物活性劑，其包括下列幾種a)二苯基曱烷衍生物，例如amphenonB(其在羥化酶的ll-p-、17-和21-羥化階段抑制類固醇激素合成)；b)吡咬f汙生物(SU-c系列)，例如metirapon(其在羥化酶的ll-p-羥化階段抑制合成)；c)取代的a，a-戊二酰胺，例如氨魯米特(其通過抑制20-a-羥化酶和C20，C22-裂解酶而阻止從膽固醇合成孕烯醇酮)；d)類固醇物質(zhì)，例如腈環(huán)氧雄烷(3P-取代的類固醇-3p-羥基-5-雄甾烯-17-酮)，其抑制3p-去氧類固醇羥化酶-5.4-異構(gòu)酶(Steroids，第32巻，第257頁)；e)螺內(nèi)酯家族類固醇，其用作快速離解的抗鹽皮質(zhì)激素(PNASUSA71(4)，第1431-1435頁，(1974));f)作為抗鹽皮質(zhì)激素描述的合成類固醇ZK91587，顯示對腎臟(Z.Naturforsch.，45b，第711-715頁，(1990))和海馬的I型MR(LifeScience,59，笫511-21頁，(1996))具有特異結(jié)合特性，但對II型GR沒有特異結(jié)合特性。因此，其常規(guī)用作研究在包含該兩個受體系統(tǒng)的組織中MR功能的工具。ACTH類似物可以任選地與特異性抑制糖皮質(zhì)激素與激素受體相互作用的生物活性劑一起施用，所述生物活性劑包括a)米非司酮(11卩,17卩)-11-[-4-(二甲氨基)苯基1-17-羥基-17-(1-丙炔基)雄甾-4，9-二烯-3-酮，其與糖皮質(zhì)激素受體作用形成復合物，該復合物不能夠啟動產(chǎn)生糖皮質(zhì)激素效應機制(AnnalsofNew-YorkAcademyofScience,第761巻，第296-310頁，(1995));所述的化合物也稱作宮縮劑(RU38486或RU486);b)非類固醇物質(zhì)(J.SteroidBiochem.,第31巻，第481-492頁，(1988))，侈J3口鹽酸氬乙翼粟堿(isoquinoline-l-(3.4-dietoxibenezilidene)-6.7-dietoxy-l，2,3，4-tetrahydrizoquinoline的衍生物)或者acetvlsalicicacid(MoskovskavaMeditsina,1990，"Receptormechanismsoftheglucocorticoideffect",V.P.Golikov)。抗糖皮質(zhì)激素(例如米非司酮)已經(jīng)在臨床中使用用于治療不宜手術(shù)的非垂體性庫欣綜合征。以米非司酮(抗孕酮和抗糖皮質(zhì)激素)為例，需務使用高劑量(高達800mg/天)。隨著采用系統(tǒng)應用策略來提高活性并且降低交叉反應性和不良副作用，在開發(fā)具有更大潛能和選擇性的抗激素藥物中，特別是在抗雌激素和抗雄激素領域已經(jīng)取得了令人印象深刻的進展。待腸胃外施用的ACTH類似物的有效劑量率或有效量以及治療持續(xù)時間部分地取決于感染的嚴重程度、患者體重、接受者接觸感染性細菌的持續(xù)時間、感染的嚴重程度以及大量其它可變因素.組合物可以一天使用一次至數(shù)次，可以短期使用或長期使用。使用持續(xù)數(shù)天或數(shù)周。所采用的劑量形式應該提供對于最短時間(aminimumamountoftime)的最小數(shù)量單位。i人為可以提供有效量或有效劑量ACTH類似物的ACTH類似物活性單位的濃度可以在大約10、20、30、40、50、60、70、80、90或100單位/ml組合物至大約10，000，000單位/ml組合物的范圍內(nèi)、在大約1000單位/ml組合物至大約10,000,000單位/ml組合物的范圍內(nèi)、以及在大約10,000單位/ml組合物至10，000，000單位/ml組合物的范圍內(nèi)。每毫升活性單位的量以及接觸的持續(xù)時間取決于感染種類以及接觸ACTH類似物的栽體的量。應該記得，ACTH類似物在液體環(huán)境中時作用較佳。因此，ACTH類似物的效果部分地與栽體所含有的水分的量有關(guān)。用于治療的ACTH類似物的濃度取決于血液中的細菌數(shù)和血液體積。當體內(nèi)施用ACTH類似物時，正常的劑量為每天大約10ng/kg至100mg/kg受試者體重或更高，或者大約lfig/kg/天至10mg/kg/天，這取決于施用途徑。關(guān)于特定劑量以及遞送方法的指導還在下面以及文獻中提供?？梢灶A料到，不同的制劑會對于不同的治療化合物和不同的病癥是有效的，靼向一種器官或組織施用有必要以與遞送至另一器官或組織不同的方式遞送。用于灌注或注射的藥物溶液可以以常規(guī)方式制備，例如加入防腐劑如p-羥基苯甲酸鹽或者穩(wěn)定劑如乙二胺四乙酸的堿金屬鹽，然后將溶液轉(zhuǎn)移至灌注容器、注射瓶或安瓿瓶種。備選地，用于注射的化合物可以與其它成分一起凍干或者單獨凍干，并且在使用時按照需要溶解于緩沖溶液中或蒸餾水中。在這里還可使用非水溶性媒介物，例如不揮發(fā)油類、脂質(zhì)體以及油酸乙酯。另外，多種方法可用于輔助ACTH類似物跨細胞膜轉(zhuǎn)運。ACTH類似物可于脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)運，其中通過已知的技術(shù)將ACTH類似物"插入"至脂質(zhì)體中。同樣，ACTH類似物可以在反微團中。ACTH類似物還可以是聚乙二醇化的，其中聚乙二醇與ACTH類似物的非活性部分相連。備選地，疏水分子可用于跨細胞膜轉(zhuǎn)運ACTH類似物.最后，ACTH類似物的糖基化可用于靼向細胞膜上的特異內(nèi)化受體。具有可控釋放能力的材料特別適合于某些治療方法。ACTH類似物可與載體系統(tǒng)組合使用，所述載體系統(tǒng)例如使得ACTH類似物化合物在預期的時間階段內(nèi)持續(xù)釋》文的聚合物。在此類制劑中還可包括高分子量的賦形劑，例如纖維素(avicel)或聚乙二醇(PEG)。此類制劑還可以包括幫助粘膜附著的賦形劑，例如羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧曱基纖維素鈉(SCMC)、馬來酐共聚物(例如Gantrez)，以及控制釋放的試劑，例如聚丙烯酸共聚物(例如Carbopol934)。為了^f更于潤滑和使用還可使用潤滑劑、助流劑、矯味劑、著色劑和穩(wěn)定劑。ACTH類似物化合物可與Loughman在美國專利號6,893，645(于2002年7月15日提交，并且于2005年5月17日頒發(fā))中所述的持續(xù)釋放載體成分組合，該專利文獻在此引用作為參考?？膳cACTH類似物組合的持續(xù)釋放制劑和可控釋放制劑以及方法的其它實例包括所7〉布的美國專利申請?zhí)朥S2005/0164927Al(由Cheung等人于2004年8月18日提出)、US2003/0125528Al(由Hay等人于2002年9月27日提出)、US2003/0211966Al(由Kubek等人于2002年10月21日提出)、US2003/0148938Al(由Sharma等人于2001年11月7日提出)以及US2003/0181361Al(由Sharma等人于2003年3月31日提出)，這些專利文獻的公開在此全部引用作為參考。在一些實施方案中，可控釋放治療組合物可包括可控釋放聚合物以及有效量的ACTH類似物?？煽蒯尫啪酆衔锟梢允撬蛎浶跃酆衔?，其任選包括預期水平的交聯(lián)部分。可控釋放聚合物可具有預期水平的水溶解度或者具有最小的水溶解度?？墒褂玫木酆衔镌龀韯┌ū绢I域人員已知的那些，例如在化妝品和制藥業(yè)經(jīng)常用到的親水凝膠化劑和水醇凝膠化劑。親水凝膠化劑或水醇凝膠化劑可包括例如CARBOPOL(B.F.Goodrich,Cleveland,Ohio)、HYPAN(KingstonTechnologies,Dayton,N.J.)、NATROSOL(Aqualon，Wilmington,Del.)、KLUCEL(Aqualon,Wilmington,Del.)或者STABILEZE逸(ISPTechnologies,Wayne,N.J.)。凝膠化劑可占組成成分的大約0.2%至大約4%(重量比)。更加具體而言，對于CARBOPO！^,組成的重量百分比范圍實例可以在大約0.5%至大約2%之間，而對于NATROSOI^和KLUCEI^的重量百分比范圍在大約0.5%至大約4%之間。對于HYPAN—STABILEZE⑧的組成重量百分比范圍在大約0.5%至大約4%之間。CARBOPOI^是眾多交聯(lián)丙烯酸聚合物之一，其一般采用的名稱為卡波姆(carbomer)。這些聚合物溶解于水，并且當用腐蝕性物質(zhì)例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙醇胺和其它胺堿基中和時會形成清晰和略模糊的凝膠。KLUCEI^是纖維素聚合物，其分散于水中并且當完全水合時形成均一凝膠。其它凝膠化聚合物包括羥乙基纖維素、纖維素膠、MVE/MA癸二烯交聯(lián)聚合物、PVM/MA共聚物和其組合。在本發(fā)明中還可以使用防腐劑，并且防腐劑可以占例如總組成成分的大約0.05%至0.5%(重量比)。使用防腐劑可以保證，如果產(chǎn)物^皮微生物污染，則制劑會防止和降4氐孩i生物的生長。可用于本發(fā)明的一些防腐劑包括對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、對氯間二甲苯酚、苯甲酸鈉、DMDM乙內(nèi)酰脲、3-碘代-2-丙基丁基氨甲酸酯、山梨酸鉀、葡萄糖酸氯己定或其組合。在具有適合治療任何疾病或病癥(需要施用ACTH類似物)的釋放特征的制劑中期望ACTH類似物持續(xù)釋放施用，在這種情況下考慮將ACTH類似物孩i膠嚢化。適宜與ACTH類似物使用的優(yōu)選的微膠嚢化組合物包括在Pellet等人的美國專利號6，475，507(2000年ll月6日提出)以及Ignatious等人的6,911,218(1999年4月20日提出)中描述的那些，該兩個專利在此全部引用作為參考。用于持續(xù)釋放的重組蛋白質(zhì)的微膠嚢化已經(jīng)用人生長激素(rhGH)、干擾素-(rhIFN-)、白細胞介素-2以及MNrgpl20成果開展。Johnson等人，Nat.Med"2:795-799(1996);Yasuda,Biomed.Ther"27:1221-1223(1993);Hora等人，Bio/Technology.8:755-758(1990);Cleland,"DesignandProductionofSingleImmunizationVaccinesUsingPolylactidePolyglycolideMicrosphereSystems."inVaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach,Powell和Newman編(PlenumPress:NewYork,1995)，第439462頁；WO97/03692，WO96/40072，WO96/07399;以及美國專利號5,654,010。持續(xù)或可控釋放載體可以是"長期"或"慢速"釋放載體(例如某些噴鼻劑、聚合物或膠嚢)或者"短期"或"快速"釋放載體(例如含漱液)，"長期，，或"慢速"釋放載體會具有或者提供較低濃度的活性(ACTH類似物)單位/ml，但持續(xù)較長的時間；而"短期"或"快速"釋放載體會具有或提供較高濃度的活性(ACTH類似物)單位/ml，但持續(xù)時間較短。每毫升活性單位的數(shù)量以及接觸的持續(xù)時間取決于感染種類、治療為預防性治療還是治療性治療以及其它可變因素。因此，給藥次數(shù)會取決于環(huán)境，并且可以每天l-4次或更多，持續(xù)時間從一天至數(shù)周。感染可發(fā)生在皮膚中，因此還可使用眾所周知的媒介物，例如美國專利6，056，954和6,056,955中描述的那些將此類組合物配制成適于局部應用。還可使用微團和多層微團以控制ACTH類似物的釋放。在這些蛋白質(zhì)的持續(xù)釋放制劑中可使用生物可吸收聚合物，例如聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)聚合物，因為它們具有生物適應性合廣泛的生物可降解特性。PLGA的降解產(chǎn)物乳酸和乙醇酸可被人體快速清除。此外，可調(diào)節(jié)該聚合物的降解性，使其從數(shù)月至數(shù)年，這取決于其分子量和組成。Lewis,"Controlledreleaseofbioactiveagentsfromlactide/glycolidepolymer,"in:M.ChasinandR.Langer(Eds.)，BiodegradablePolymersasDrul:DeliverySystems(MarcelDekker:NewYork,1990)，第1-41頁。在一些實例中，治療性組合物包含粘膜粘附持續(xù)釋放制劑和ACTH類似物。如所公開和所描述，粘膜襯里包括例如上呼吸道和下呼吸道、眼睛、口腔、鼻、直腸、陰道、牙周袋、腸和結(jié)腸。來自E.R.Squibb&Co的Orahesive⑧是粘合劑，其在粘性烴聚合物中組合了果膠、白明膠和羧甲基纖維素鈉，用于粘附于口腔粘膜。然而，此類親水和疏水成分的物理混合物會最終脫落下來。與^f目反，本公開中的親水和疏水結(jié)構(gòu)域產(chǎn)生了不溶的共聚物。美國專利號4，948，580描述了生物粘性的藥物遞送系統(tǒng)，該專利在此引用作為參考。組合物包括凍干的聚合物混合物，該聚合物混合物是分散于軟骨基質(zhì)如包含分散聚乙烯的礦物油中的聚(甲基乙烯基醚/馬來酸肝)與白明膠的共聚物形成的。美國專利號5,413,792(在此引用作為參考)公開了糊劑，如包含(A)包含聚硅氧烷和水溶性聚合材料(可以以3:6至6:3的重量比存在)的糊狀基質(zhì)，和(B)活性成分的制劑。美國專利號5，554，380要求保護包含具有至少兩個相的油包水系統(tǒng)的固體和半固體生物粘附口腔吸收藥物遞送系統(tǒng)。一相包含大約25%至大約75%(體積比)的內(nèi)部親水相，另外的相包含大約23%至大約75。/。(體積比)的外部疏7jc相，其中外部疏水相由以下3種成分組成(a)乳化劑，(b)甘油酯，和(c)蠟材料。美國專利號5,942,243描述了用于施用抗菌劑的一些代表性的釋放材料，其公開在此引用作為參考。該公開組合物的劑量形式可通過常規(guī)方法制備。包含ACTH類似物的組合物可通過噴鼻劑、滴鼻劑、鼻用軟青、洗鼻液、鼻注射、鼻填塞、支氣管噴霧和吸入器施用。當ACTH類似物通過使用噴鼻劑、滴鼻劑、鼻用軟骨、洗鼻液、鼻注射、鼻填塞、支氣管噴霧、口腔噴霧和吸入器直接引入時，ACTH類似物可以為液體和凝膠形式，其中液體作用栽體起作用。雖然可以以液體遞送形式使用，但干燥的無水修飾的ACTH類似物可以通過吸入器和支氣管噴霧施用。鼻噴霧可以是長效噴霧或者定期釋放噴霧，并且可以通過本領域眾所周知的方法制造。還可使用吸入器，使ACTH類似物可以達到支氣管道(包括肺)的更下端。適于鼻氣溶膠或吸入施用的例證性組合物包括鹽水中的溶液，在其中還包括例如苯甲醇或其它適宜防腐劑、增加生物利用度的吸收促進劑和/或其它穩(wěn)定劑或分散劑，例如本領域已知的那些。適于經(jīng)皮施用ACTH類似物的組合物可使用遞送至少一種ACTH類似物至或穿過皮膚的載體配制。ACTH類似物的應用模式包括多種不同類型以及載體的組合，所述栽體包括但不限于水溶性液體、基于醇的液體、水溶性凝膠、洗液、軟骨、非水溶性液體基質(zhì)、礦物油基質(zhì)、礦物油和凡士林的混合物、羊毛脂、脂質(zhì)體、蛋白質(zhì)栽體如血清白蛋白或白明膠、粉末纖維素carmel以及其它的組合。包含治療劑的栽體的遞送模式包括但不限于涂沫、噴霧、限時釋放pACTH、液體可吸收性擦拭以及它們的組合。ACTH類似物可直接應用于繃帶上或者以一種其它載體的方式應用于繃帶上?？噹Э梢允琴徺I的濕繃帶或者干繃帶，其中ACTH類似物以凍干的形式存在于繃帶上。該應用方法對于治療感染的皮膚是最有效的。局部組合物的載體可包含半固體和凝膠樣媒介物，所述的媒介物包括聚合物增稠劑、水、防腐劑、表面活性劑和乳化劑、抗氧化劑、防曬劑以及溶劑或者混合溶劑系統(tǒng)。美國專利號5，863，560(Osborne)討論了許多可以幫助皮膚和藥物接觸的不同載體組合。用于局部施用的另一組合物包括局部載體，例如Plastibase(用聚乙烯凝膠化的礦物油)。在一個實例中，本發(fā)明包含具有大約0.5%至10%的卡波姆和大約0.5%至10%的藥物的皮膚病學組合物，其中藥物以溶解狀態(tài)和微粒狀態(tài)存在。溶解的藥物具有穿過角質(zhì)層的能力，而微粒狀態(tài)的藥物則不能。加入胺堿、氫氧化鉀溶液或者氫氧化鈉溶液使凝膠完全形成。更加具體而言，藥物可以包括氨笨颯，其是一種具有抗炎特性的抗菌劑。一個例證性的微粒形式氨^風與溶解形式氨苯砜之比是5或者更小。在另一實例中，本發(fā)明包含大約1%卡波姆、大約80-卯％水、大約10%乙ltJ^二甘醇(ethoxydiglyco1)、大約0.2%對羥基苯甲酸甲酯、大約0.3%至3.0%氨^(包括孩^立氨^1和溶解的氨^1)以及大約2%腐蝕性物質(zhì)。更加具體而言，卡波姆可包括CARBOP01^980,并且腐蝕性物質(zhì)可包括氫氧化鈉溶液。治療方法ACTH類似物化合物可用于治療多種ACTH相關(guān)病。治療方法包括施用一種或多種ACTH類似物化合物，以降低ACTH誘導的腎上腺激素分泌率、減輕高水平ACTH對患者的影響或者阻斷過量ACTH并且同時維持健康狀態(tài)的腎上腺功能。ACTH類似物化合物可用于治療與ACTH水平相關(guān)的疾病，例如對ACTH受體(例如MC-2R)的調(diào)節(jié)作出反應的疾病。可施用ACTH類似物化合物來治療與ACTH水平調(diào)節(jié)相關(guān)的病，例如降低高水平ACTH對患者的影響并且同時維持正常健康狀態(tài)的腎上腺功能。ACTH類似物組合物可用于例如治療ACTH相關(guān)病，例如庫欣綜合征、因皮質(zhì)類固醇過度分泌導致的免疫應答受損、引起早產(chǎn)(例如通過下丘腦-垂體-腎上腺軸)以及相關(guān)病。在一個方面，制備了多種ACTH類似物并向患者施用以評價在體內(nèi)對可的松的誘導。結(jié)合高分辨率MR垂體影像，施用ACTH類似物化合物可治療垂體腺中產(chǎn)生ACTH的腫瘤。結(jié)合巖竇釆樣，施用ACTH類似物化合物可確立垂體來源的ACTH過度分泌、手術(shù)前垂體腫瘤的定位和偏側(cè)性(參見Oldfleld，E.W.等人，"Petrosalsinussamplingwithandwithoutcorticotrophin-releasinghormoneforthedifferentialdiagnosisofCushing，ssyndrome,"NEnglJMed"325:897-卯5(1991);以及Findling，J.W.等人，EndocrinolMetabClinNorthAm.，30:729-47(2001))。雖然經(jīng)蝶骨方法可以成功切除70%的垂體微腺瘤，但是對大大腺瘤的手術(shù)"治愈"率僅為專科中心患者的大約三分之一(Mampalam，T.J.等人，AnnInternMed.，109:487-93(1988))?？梢栽谀[瘤治療中，包括與治療ACTH過度分泌的聯(lián)合治療中或者與垂體放射治療的聯(lián)合治療中也可以施用ACTH類似物化合物，以抑制腫瘤的生長和激素水平。放射的效果在幾天內(nèi)不明顯，并且在多數(shù)患者中與最終的垂體損傷和功能紊亂相關(guān)(Brada，M.等人，"Thelong-termefficacyofconservativesurgeryandradiotherapyinthecontrolofpituitaryadenomas,"ClinEndocrinol.,38:571-8(1993))。皮質(zhì)醇增多癥、皮質(zhì)醇過度分泌可通過腎上腺切除術(shù)(手術(shù)切除一個或兩個腎上腺)完全解決，但是該方法不能夠抑制垂體腫瘤生長并且還與其它共病有關(guān)(參見Trainer,P.J.等人,"Cushing，ssyndrome:Therapydirectedattheadrenalglands,"EndocrinolMetabClinNorthAm.，23:571-584(1994))'ACTH類似物化合物可與醫(yī)學療法組合施用，例如與塞庚咬共施用，塞庚啶是一種抗血清素藥物，其用于抑制ACTH分泌但是最終的效果較差，并且已經(jīng)停止使用(Krieger，D.T.等人，"Cyproheptadine-inducedremissionofCushingsdisease,"NEnglJMed.293:893-6(1975))。雖然抗真菌藥物酮康唑能抑制腎上腺的皮質(zhì)醇生物合成，但是該藥物不能抑制垂體腫瘤的生長或者ACTH的分泌，并且特質(zhì)性肝損害限制了其長期使用(參見Sonino，N.，"Theuseofketoconazoleasaninhibitorofsteroidproduction,"NEnglJMed.，317:812-8(1987》。在妊娠的第九個月，胎盤和胎膜產(chǎn)生相當大數(shù)量的CRH(參見Frim，D.M.等人，"Characterizationandgestationalregulationofcorticotrophin-releasinghormonemessengerRNAinhumanplacenta,"JClinInvest"82:287-292(1988))，引起母體外周血液CRH濃度增加，特別是妊娠30周后(參見Sasaki,A.等人，"Immunoreactivecorticotropin-releasnighormoneinhumanplasmaduringpregnancy,labor,anddelivery,"JClinEndocrinolMetab.，64:224-229(1987)以及Goland,R.S.等人,"Highlevelsofcorticotropin-releasinghormoneimmunoreactivityinmaternalandfetalplasmaduringpregnancy,"JClinEndocrinolMetab.，63:119-1204(1986))。最近的研究表明，在早產(chǎn)孕婦的血液中CRH水平提高(參見Wolfe,C.D.A.等人，"Plasmacorticotrophinreleasingfactor(CRF)inabnormalpregnancy,"BrJObstetGynaecol"95:1003-1006(1988);Warren,W.B.等人，"Elevatedmaternalplasmacorticotropin-releasinghormonelevelsinpregnanciescomplicatedbypretermlabor,"AmJObstetGynecol.，166:1198-1207(1992);以及McLean,M.等人，"Aplacentalclockcontrollingthelengthofhumanpregnancy,"NatMed"1:460-463(1995))，并且在過期分娩的孕婦中降低(McLean等人，同上)。ACTH類似物可以與抗分娩藥或防止分娩的藥物組合使用以推遲分娩?？狗置渌幍膶嵗ɡ芯吞夭妓?，它們是P-擬交感性的。然而，為了產(chǎn)生效果，這些藥物通常必須在分娩之前或者開始發(fā)生分娩時施用，如果在分娩開始之后施用則效果或安全性不可靠，雖然有時在妊娠的高危險階段(一般在妊娠的大約28周和34周之間)向孕婦連續(xù)施用(一般通過灌注)低水平的抗M藥，但是藥物對腎臟功能、呼吸功能、心率和全面的肌肉組織健康狀態(tài)具有不良副作用.劑量通常必須維持在低于例如大約0.1cc/小時(1mg/cc特布他林溶液)，在避免發(fā)生分娩的這些低劑量的效果是不一致的并且很難量化。因此，需要治療早產(chǎn)的治療藥物(treatments)和方法。更加具體而言，需要用于治療早產(chǎn)的不存在現(xiàn)有不良副作用的新的治療藥物和方法。在一個實施方案中，可施用ACTH類似物組合物以降低ACTH的生物合成。該治療方法可以與施用藥物(例如甲吡酮)相組合，或者優(yōu)選地代替之。優(yōu)選地，可施用ACTH類似物組合物治療妊娠過程中發(fā)展的庫欣病的發(fā)生，如在J.R.Lindsay和L.K.Nieman(2005)"TheHypothalamic-Pituitary-AdrenalAxisinPregnancy:ChallengesinDiseaseDetectionandTreatment,"EndocrineReviews26:775-800中所述。對該病的治療(通常延長妊娠或者準備分娩)可包括施用ACTH多肽和/或甲吡酮，經(jīng)觀察這種治療具有很好的耐受性，不會對母體肝臟功能和胎兒發(fā)育產(chǎn)生不良影響?？上蚧颊呤┯眉走镣越档虯CTH的生物合成。當確信皮質(zhì)類固醇過度分泌的原因是因為ACTH水平提高(推測來自這些女性的垂體腫瘤)時，則ACTH類似物組合物特別優(yōu)選地作為降低皮質(zhì)類固醇合成策略的一部分。在另一方面，提供了治療獸類受試者的方法，例如用于降低應激激素以利于高密度的農(nóng)業(yè)和水產(chǎn)業(yè)物種健康生長的方法?？梢杂媒档蛻ぜに匾岳诟呙芏鹊霓r(nóng)業(yè)和水產(chǎn)業(yè)物種健康生長的方法施用包含一種或多種ACTH類似物化合物的組合物。實施例下面的實施例用于闡明本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。本領域的技術(shù)人員應當意識到，在實施例中公開的材料和技術(shù)(接著給出本發(fā)明者所公開的材料和技術(shù))可以^艮好的實踐本發(fā)明，因此可以認為構(gòu)成該實踐的優(yōu)選模式。然而，本領域的技術(shù)人員應當意識到，按照^/^開可以對所公開的特定實施方案進行諸多修改而仍然可得到相同和相似的結(jié)果，這沒有偏離本發(fā)明的精神和范圍。實施例l血清皮質(zhì)類固醇誘導分析法(體內(nèi))通過開展體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇誘導分析法測定施用ACTH類似物后受試者血液中的皮質(zhì)類固醇水平，來鑒定具有降低的ACTH所介導皮質(zhì)類固醇分泌的ACTH類似物。體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇誘導分析根據(jù)下列方法開展。首先，向我們所繁殖的2-3月齡的雄性FVB/N小鼠(每組5只)皿內(nèi)注射地塞米松(每只小鼠0.4mg/0.1mlPBS;Sigma,St.Louis,MO)以抑制它們的內(nèi)源性ACTH產(chǎn)生。參見Hajos，GT等人，"StudiesofthepotencyofpolypeptideswithACTHactionbyanewmethodbasedoncontinuousmeasurementofplasmacorticosterone，"SteroidsLipidsRes3:225-228(1972);Costa,JL等人，"MutationalanalysisofevolutionarilyconservedACTHresidues,"GenCompEndocrinol,136:12-16(2004);以及Karpac,J等人，"Development,Maintenance,andFunctionoftheAdrenalGlandinEarlyPostnatalPro-opiomelanocortinNullMutantMice,"Endocrinology(2005)，于2005年2月24日印刷之前在線公布，所有這些文獻在此引用作為參考。第二，卯分鐘至120分鐘之后，向用地塞米松抑制的小鼠在肩胛骨間皮下注射未修飾mACTH(1-24)、或者幾種ACTH類似物肽化合物之一(ljig/0.1mLPBS/0.5%BSA)、或者僅有媒介物(對照)(0.1mLPBS/0.5%BSA)。向各個小鼠施用下列ACTH類似物肽化合物1:鼠ACTH1-24;2:V26F，E30K;3:P19W，K21E，Y23R;4:E30K，P36R;5:ALA19誦24;6:V26F，P36R;7:P19W，K21E;8:P19W，K21A，delY23;9:P19W，K21A;10:KRRP16-19RAAW(AT814)(SEQIDNO:20)。第三，1小時之后，在1分鐘之內(nèi)從尾部的小切口處收集血液，將血清速凍并儲存于-8or;直至分析。通過竟爭性放射免疫分析法(^iwA試劑盒；ICN，CostaMesa，CA)根據(jù)廠商的推薦確定血清皮質(zhì)酮。對于每一分析樣品，使用1jal血清。將樣品一式兩份開展分析。如上所述的對于ACTH類似物肽的結(jié)果示于圖1中的圖表中，活性顯示為ACTH活性的百分數(shù)。與天然ACTH相比，這些ACTH類似物的活性較低。實施例2血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法(體內(nèi))通過開展體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法測試其抑制由未修飾ACTH所誘導的腎上腺激素產(chǎn)生的能力，來鑒定具有降低的ACTH所介導皮質(zhì)類固醇分泌的ACTH類似物。在組合施用ACTH類似物測試化合物與具有已知的皮質(zhì)類固醇誘導活性的化合物(例如ACTH或另一種ACTH類似物)之后，測量受試者血液中的皮質(zhì)類固醇水平。ACTH類似物測試化合物可在產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物施用之前、同時或之后施用。按照下列方法開展體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析。測試了ACTH類似物測試化合物，例如表1中的具有低活性的那些化合物抑制由未修飾ACTH所誘導的腎上腺激素產(chǎn)生的能力。首先，向我們所繁殖的2-3月齡的雄性FVB/N小鼠(每組5只)自內(nèi)注射地塞米;f^(每只小鼠0.4mg/0.1mlPBS;Sigma,St.Louis,MO)以抑制它們的內(nèi)源性ACTH產(chǎn)生。第二，90分鐘至120分鐘之后，向動物在肩胛骨間皮下注射野生型mACTH和/或測試ACTH類似物肽(ljig/0.1mLPBS/0.5%BSA)或者僅有媒介物(O.lmLPBS/0.5%BSA)。第三，1小時之后，在1分鐘之內(nèi)從尾部的小切口處收集血液，將血清速凍并儲存于-80r直至分析。通過竟爭性放射免疫分析法(1251RIA試劑盒；ICN，CostaMesa，CA)根據(jù)廠商的推薦確定血清皮質(zhì)酮。對于每一分析樣品，使用1pl血清。將樣品一式兩份開展分析。如上所述的對于類似物AT814(SEQIDNO:20)的結(jié)果圖示于圖2中。肽的活性顯示為皮質(zhì)酮誘導的百分數(shù)，其中天然的小鼠ACTH被設成100%。通過對最后一次注射肽1小時后的皮質(zhì)酮誘導的比較表明，當在ACTH注射前30分鐘使用時，AT814使皮質(zhì)酮誘導降低至野生型ACTH的35%;當在ACTH注射的同時使用時，AT814使皮質(zhì)酮誘導降低至野生型ACTH的10%,實施例3腎上腺結(jié)合分析法(體外)通過開展體外腎上腺結(jié)合分析法可鑒定出具有結(jié)合腎上腺受體能力的ACTH類似物?？蓽y定結(jié)合至外植腎上腺膜上的放射性標記的ACTH類似物測試化合物的量，以鑒定具有腎上腺受體結(jié)合活性的ACTH類似物。優(yōu)選地，這可以在無血清培養(yǎng)基中進行(體外無血清腎上腺結(jié)合分析法)。通過體外腎上腺竟爭性結(jié)合分析法還可以鑒定這樣的ACTH類似物，該ACTH類似物具有結(jié)合腎上腺受體的能力，其結(jié)合親和性比已知具有腎上腺結(jié)合活性的化合物(優(yōu)選ACTH)更高，在體外腎上腺竟爭性結(jié)合分析法中，對放射性標記的結(jié)合至腎上腺的化合物(例如ACTH)的數(shù)量降低的測量是通過測量包含外植腎上腺膜的培養(yǎng)基中非放射性標記的ACTH類似物測試化合物的不同濃度實現(xiàn)。祐放射性標記的腎上腺結(jié)合化合物結(jié)合的腎上腺膜的減少可用于鑒定和表征ACTH類似物測試化合物的結(jié)合活性。在一系列體外腎上腺竟爭性結(jié)合分析法，向腎上腺膜培養(yǎng)基中加入ACTH類似物測試化合物，測定放射性標記ACTH結(jié)合的降低。體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析法按照下列方法開展。首先，從小鼠中取出腎上腺，切除脂肪并切成兩半.參見Costa，幾等人，"MutationalanalysisofevolutionarilyconservedACTHresidues,"GenCompEndocrinol.136:12-16(2004);以及Weber,MM等人，"Postnataloverexpressionofinsulin-likegrowthfactorIIintransgenicmiceisassociatedwithadrenocorticalhyperplasiaandenhancedsteroidogenesis,"Endocrinology140:1537-1543(1999)，其在此引用作為參考。第二，將每一半腎上腺置于4-孔皿的各個空中，每一只老鼠的腎上腺置于一個皿中。將分成兩半的腎上腺在0.5ml無血清培養(yǎng)基(M199;Invitrogen)中于5%CO2、37匸下平衡30分鐘.第三，將分成兩半的腎上腺浸軟或者使用Doimce勻漿器分離形成膜部分。將該部分重新懸浮于適當?shù)脑疀_液中(Tris或HEPES)。然后向重懸的膜部分中加入125I放射性標記的ACTH(200ml)和非放射性標記的測試化合物(例如ACTH或者ACTH類似物，例如AT814(SEQIDNO:20))，所加入的量使得測試化合物的總濃度為0nm、10nm、100nm和1000nm;在對照中不加入肽。回收膜部分并且使用Y檢測器檢測放射性信號。在加入非放射性標記的測試化合物之后所檢測到的放射性信號的降低可以與多種測試化合物的結(jié)合親和性關(guān)f^來。在加入ACTH類似物肽測試化合物之后》文射性信號的降低表明，其具有增加的對腎上腺ACTH受體如MC-2R的親和性并具有置換腎上腺MC-2R受體處ACTH的能力。圖3顯示了一系列體外無血清腎上腺竟爭性結(jié)合分析的結(jié)果。實施例4腎上腺抑制分析法(體外)通過開展體外無血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法測試其抑制由未修飾ACTH所誘導的腎上腺激素產(chǎn)生的能力，來鑒定降低和封閉ACTH所介導的腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇分泌的ACTH類似物。在組合施用ACTH類似物測試化合物與具有已知的皮質(zhì)類固醇誘導活性的化合物(例如ACTH或另一種ACTH類似物)之后，測量無血清培養(yǎng)基中的皮質(zhì)類固醇水平。ACTH類似物測試化合物可在產(chǎn)生皮質(zhì)類固醇的化合物施用之前、同時或之后施用。體外無血清腎上腺抑制分析法按照下列方法開展。首先，從小鼠中取出腎上腺，切除脂肪并切成兩半。參見Costa，JL等人，"MutationalanalysisofevolutionarilyconservedACTHresidues,"GenCompEndocrinol.136:12-16(2004);以及Weber，MM等人，"Postnataloverexpressionofinsulin-likegrowthfactorIIintransgenicmiceisassociatedwithadrenocorticalhyperplasiaandenhancedsteroidogenesis,"Endocrinology140:1537-1543(1999)，其在此引用作為參考。第二，將每一半腎上腺置于4-孔皿的各個空中，每一只老鼠的腎上腺置于一個皿中。將分成兩半的腎上腺在0.5ml無血清培養(yǎng)基(M199;Invitrogen)中于5%CO2、37匸下平衡30分鐘。第三，除去培養(yǎng)基并換成0.5ml含ACTH、AT814或者兩者(每一種為100ng/ml)的M199;對照種不加入肽。第四，孵育2小時后，除去培養(yǎng)基中，將4個來自每一小鼠的半片腎上腺混合，并使用標準RIA方法通過皮質(zhì)酮分析。通過竟爭性放射免疫分析法(1251RIA試劑盒；ICN，CostaMesa，CA)按照廠商的推薦測定皮質(zhì)酮。對于每一分析樣品，使用1Ml血清。將樣品一式兩份開展分析。結(jié)果示于圖4。實施例5(預測)治療性的獸醫(yī)學施用魚類孵化面臨著諸多挑戰(zhàn)，因為為了商業(yè)目的將魚類的總噸數(shù)最大化的目標被擁擠以及感染傳播的影響所打亂。在這些環(huán)境中，魚類試圖通過下丘腦/垂體/腎間(HPI)軸來對付這種慢性應激。在這些情況中，死亡率、對皮質(zhì)類固醇的脫敏以及對于種群密度形成新的穩(wěn)態(tài)在一些水平上源于皮質(zhì)類固醇的增加。相反，在這種"調(diào)整"循環(huán)過程中，皮質(zhì)類固醇水平的長期提高降低了對感染的抗性?？赏ㄟ^定時釋》文，例如從這些魚中的硅橡膠膠嚢植入物定時釋放施用本發(fā)明的ACTH類似物調(diào)節(jié)孵化場魚的HPI。對HPI軸的這種緩沖應該改善了存活并可能利于孵化場魚的體重增加?？蓪⒅踩氡景l(fā)明的ACTH類似物或者單獨的ACTH的魚置于激活HPI軸的環(huán)境條件下(即擁擠、pH變化、氨和硝酸鹽增加)。在這些范例中可以分析的兩個參數(shù)是死亡率和體重變化。此類參數(shù)可以闡明，本發(fā)明的ACTH類似物在降低魚類皮質(zhì)酮水平中是否有效。權(quán)利要求1.包含分離的ACTH類似物肽的組合物，其中ACTH類似物肽包含具有下列至少一個氨基酸替代的SEQIDNO2的肽a.SEQIDNO2中位置19上的Pro殘基被氨基酸Trp替代；或者b.選自SEQIDNO2的氨基酸殘基16-18的殘基處的一個或多個氨基酸替代，以致于i.ACTH類似物的氨基酸殘基16、17和18不包括任何兩個相鄰的選自Lys和Arg的氨基酸殘基；以及ii.在SEQIDNO2中位置16、17或18處替代的一個或多個氨基酸殘基選自Lys、Arg、Ala、Gly、Val、Leu、Ile、包含烷基側(cè)鏈的氨基酸類似物、Gln、Asn、Glu和Asp。2.權(quán)利要求1所述的組合物，其中ACTH類似物肽包含在SEQIDNO:2的M酸位置15、16、17或18中的任何兩個位置進4亍替代的至少一個Ala和至少一個Arg殘基。3.權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中ACTH類似物基本上由具有下列^^酸替代的SEQIDNO:2的序列組成SEQIDNO:2的位置19處的Pro殘基被氨基酸Trp替代；SEQIDNO:2的位置15處的氨基酸選自Lys、Ala和Gin;并且ACTH類似物肽包含選自SEQIDNO:2的氨基酸殘基16-18的殘基處的一個或多個M酸替代，以致于ACTH類似物的氨基酸殘基16、17和18不包括任何兩個相鄰的選自Lys和Arg的氨基酸殘基。4.權(quán)利要求l、2或3所述的組合物，其中ACTH類似物肽包括^酸殘基6-9處的氨基酸序列-His6-Phe乙Arg8-Trp9-,5.權(quán)利要求l、2或3所述的組合物，其中ACTH類似物肽包括M酸殘基15-19處的氨基絲列-Lys"-Arg"-Ala"-Ala"-Trp19-。6.權(quán)利要求l、2、3、4或5所述的組合物，其中在體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法中，ACTH類似物肽的施用使ACTH誘導的皮質(zhì)類固醇的分泌降低至少10%。7.權(quán)利要求1、2、3、4、5或6所述的組合物，其中ACTH類似物肽結(jié)合并置換腎上腺膜上的SEQIDNO:2的肽，在其中肽的結(jié)合通過體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析法測定。8.權(quán)利要求7所述的組合物，其中ACTH類似物肽以比SEQIDNO:2的肽高至少兩倍的親和性結(jié)合MC-2R腎上腺膜。9.權(quán)利要求1、7或8所述的組合物，其中在體外無血清腎上腺抑制分析法中ACTH類似物肽降低了ACTH所誘導的腎上腺膜對皮質(zhì)酮的產(chǎn)生。10.包含分離的ACTH類似物肽的組合物，ACTH類似物肽包含具有至少一個M酸替代的SEQIDNO:2的肽，其中ACTH類似物肽結(jié)合并置換腎上腺膜上的SEQIDNO:2的肽，在其中通過體外無血清腎上腺竟爭結(jié)合分析法測定肽的結(jié)合。11.權(quán)利要求10所述的組合物，其中ACTH類似物肽具有至少一個下列M酸替代(a)SEQIDNO:2中位置19上的Pro殘基被氨基酸Trp替代，或者(b)選自SEQIDNO:2的M酸殘基16-18的殘基處的一個或多個M酸替代，以致于ACTH類似物的氨基酸殘基16、17和18不包括任何兩個相鄰的選自Lys和Arg的氨基酸殘基；以及在SEQIDNO:2中位置16、17或18處替代的一個或多個M酸殘基選自Lys、Arg、Ala、Gly、Val、Leu、Ile、包含烷基側(cè)鏈的M酸類似物、Gln、Asn、Glu和Asp。12.權(quán)利要求10或11所述的組合物，其中ACTH類似物肽包括M酸殘基15-19處的氨基醋列-Lys^Arg"-Ala"-Ala"-Trp1、。13.權(quán)利要求10、11或12所述的組合物，其中在體外無血清腎上腺抑制分析法中，ACTH類似物肽降低了ACTH誘導的腎上腺膜對皮質(zhì)酮的產(chǎn)生。14.權(quán)利要求10、11、12或13所迷的組合物，其中ACTH類似物肽的施用使ACTH誘導的皮質(zhì)類固醇誘導降低至少10%，其中皮質(zhì)酮誘導通過體內(nèi)血清皮質(zhì)類固醇抑制分析法測定。15.權(quán)利要求10、11、12、13或14所述的組合物，其中與SEQIDNO:2的^目比，在體外血清皮質(zhì)類固醇誘導分析法中ACTH類似物肽使ACTH誘導的腎上腺膜對皮質(zhì)酮的產(chǎn)生降低至少10%。16.包含分離的ACTH類似物肽的組合物，其中ACTH類似物肽包含具有至少一個^J^酸替代的SEQIDNO:l的肽，其中與SEQIDNO:2的Abf目比，在體外血清皮質(zhì)類固醇誘導分析法中ACTH類似物肽使ACTH誘導的腎上腺膜對皮質(zhì)酮的產(chǎn)生降低至少10%,其中至少一個M酸替代包括SEQIDNO:l的位置19、26、30或36處的氛基酸殘基的替代。17.權(quán)利要求16所述的組合物，其中ACTH類似物肽具有至少一個下列氨基酸替代(a)SEQIDNO:l中位置19上的Pro殘基被氨基酸Trp替代，或者(b)選自SEQIDNO:l的氨基酸殘基16-18的殘基處的一個或多個氨基酸替代，以致于ACTH類似物的氨基酸殘基16、17和18不包括任何兩個相鄰的選自Lys和Arg的氛基酸殘基；以及在SEQIDNO:2中位置16、17或18處替代的一個或多個氨基酸殘基選自Lys、Arg、Ala、Gly、Val、Leu、Ile、包含烷基側(cè)鏈的氨基酸類似物、Gln、Asn、Glu和Asp。18.權(quán)利要求16或17所述的組合物，其中ACTH類似物肽包括M酸殘基15-19處的絲酸序列-Lys"-Arg"-Ala"-Ala"-Trp"-。19.權(quán)利要求16、17或18所述的組合物，其中ACTH類似物還包含對SEQIDNO:l中氨基酸殘基25-39的截斷。20.權(quán)利要求16、17、18或19所述的組合物，其中ACTH類似物肽包含SEQIDNO:20的肽。21.ACTH類似物用于制造治療ACTH相關(guān)病的藥物中的用途，其包括將權(quán)利要求1、10或16所述的ACTH類似物與適宜載體混合的步驟。22.權(quán)利要求21所述的用途，其中ACTH相關(guān)病的一種癥狀是血液皮質(zhì)類固醇濃度升高，23.權(quán)利要求21所述的用途，其中ACTH相關(guān)病選自庫欣病、早產(chǎn)、垂體腫瘤以及下丘腦/垂體/腎間(HPI)軸疾病。24.權(quán)利要求21所述的用途，其中將藥物配制成用于通過注射、吸入或經(jīng)皮吸收施用。25.權(quán)利要求21、22、23或24所述的用途，其中藥物包含SEQIDNO:20的ACTH類似物。26.治療ACTH相關(guān)病的方法，包括向受試者施用包含權(quán)利要求1、10或16所述ACTH類似物的藥物組合物。27.權(quán)利要求26所述的方法，其中將藥物組合物配制成用于通過注射、及入或經(jīng)皮吸收向受試者施用。28.權(quán)利要求27所述的方法，其中將藥物組合物配制成用于注射施用，其中所述方法還包括向受試者注射藥物組合物的步驟。29.權(quán)利要求26所述的方法，其還包括在施用藥物組合物之前測定受試者血液皮質(zhì)類固醇水平的步驟。30.權(quán)利要求28所述的方法，其中藥物組合物通過皮下或靜脈內(nèi)注射。31.權(quán)利要求28所述的方法，其還包括在向受試者注射藥物組合物之前注射降低受試者血液皮質(zhì)類固醇水平的藥物的步驟。32.權(quán)利要求31所述的方法，其中降低血液皮質(zhì)類固醇水平的藥物包含地塞米松。33.權(quán)利要求26所述的方法，其中受試者是人。34.權(quán)利要求26所述的方法，其中藥物組合物包含持續(xù)釋放組合物。35.權(quán)利要求25、26、27、28、29、30、31、32、33或34所述的方法，其中藥物組合物包含SEQIDNO:20的ACTH類似物。36.對ACTH類似物化合物進行篩選以鑒定與SEQIDNO:2的未修飾ACTH相比誘導腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇分泌較少的ACTH類似物化合物的方法，其包括將腎上腺膜與ACTH類似物相接觸的步驟。37.權(quán)利要求36所述的方法，其中篩選方法還包括步驟a.提供第一腎上腺膜和第二腎上腺膜；b.將笫一腎上腺膜與包含含有SEQIDNO:2的未修飾肽的第一個組合物接觸，然后測定與包含SEQIDNO:2的未修飾肽接觸后由第一腎上腺膜所分泌的皮質(zhì)類固醇的第一個濃度；c.將第二腎上腺膜與包含ACTH類似物的第二個組合物接觸，然后測定與ACTH類似物接觸后由第二腎上腺膜所分泌的皮質(zhì)類固醇的第二個濃度。38.權(quán)利要求37所述的方法，其還包括將第一個所分泌皮質(zhì)類固醇濃度與第二個所分泌皮質(zhì)類固醇濃度相比較的步驟。39.權(quán)利要求38所述的方法，其還包括確定是否第二個化合物誘導的皮質(zhì)類固醇分泌比第一個化合物^"導的皮質(zhì)類固醇分泌少的步驟。40.權(quán)利要求36、37、38或39所述的方法，其中ACTH類似物是權(quán)利要求l、10或16所述的ACTH類似物。41.權(quán)利要求36、37、38或39所述的方法，其中第一腎上腺膜和第二腎上腺膜位于受試者中并且皮質(zhì)類固醇的濃度為測定的受試者血液中的濃度。42.權(quán)利要求36、37、38或39所述的方法，其中第一腎上腺膜和第二腎上腺膜是從受試者外植的并且皮質(zhì)類固醇濃度為測定的無血清培養(yǎng)基中的濃度。全文摘要本發(fā)明的ACTH類似物化合物包括包含帶有一個或多個結(jié)構(gòu)修飾的ACTH肽序列的化合物，所述的結(jié)構(gòu)修飾具有一種或多種下列優(yōu)選的ACTH類似物的生物學功能(1)與未修飾ACTH相比，降低了ACTH類似物存在情況下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌；(2)降低在內(nèi)源ACTH存在條件下腎上腺膜對皮質(zhì)類固醇的分泌；和(3)與結(jié)合至MC-2R黑皮質(zhì)素的未修飾ACTH相比，增加對MC-2R的結(jié)合親和性同時降低對MC-2R受體的活化。因此，本發(fā)明的ACTH類似物化合物可用于治療或預防與ACTH、ACTH受體或皮質(zhì)類固醇分泌相關(guān)的疾病和病癥，例如早產(chǎn)和庫欣病。文檔編號A61K38/16GK101189022SQ200580042427公開日2008年5月28日申請日期2005年10月27日優(yōu)先權(quán)日2004年10月27日發(fā)明者C·哈斯克爾-呂瓦諾,J·I·科斯塔,M·B·布倫南,R·M·多里斯,U·H·霍切格施文德申請人:丹佛大學;佛羅里達大學;俄克拉荷馬州醫(yī)學研究基金會