專利名稱：作為鈉和/或鈣通道選擇性調(diào)節(jié)劑的(鹵代芐氧基)芐氨基－丙酰胺類的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及選自(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺和(R)-2-[4-(2-氯芐氧基)芐氨基]-N-甲基丙酰胺的(鹵代芐氧基)芐氨基-丙酰胺及其藥物上可接受的鹽在制備具有作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的選擇性活性的藥物中的應用，這些藥物用于預防、緩解和治愈所述的機制其病理性作用的廣泛病變，包括疼痛、偏頭痛、心血管、炎癥、泌尿生殖、代謝和胃腸疾病，其特征在于所述的藥物基本上沒有任何MAO抑制作用或在預防、緩解和/或治愈所述病變的治療上有效的劑量下表現(xiàn)出顯著降低的MAO抑制作用。
本發(fā)明的另-個方面涉及選擇性治療上述病變的方法，該方法包括對有此需要的患者給予治療有效量的上述(R)-(鹵代芐氧基)芐氨基-丙酰胺類，其中所述化合物的治療活性基本上沒有任何MAO抑制副作用或表現(xiàn)出MAO抑制副作用顯著降低。
背景技術：
化學背景對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有活性并且用作抗癲癇藥、抗震顫麻痹藥、神經(jīng)保護劑、抗抑郁藥和催眠劑的取代的芐氨基丙酰胺衍生物披露在國際專利申請公開號WO90/14334、WO94/22808、WO97/05102和WO97/05111中(另外參見Pevarello P.等″一類新的2-[(芳烷基)氨基]烷酰胺衍生物的合成和抗驚厥活性″J.Med.Chemistry，1998，41，579-590)。此外，國際專利申請公開號WO 99/26614、WO99/35123和WO99/35125中披露了取代的α氨基酰胺衍生物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有活性并且用作止痛藥。
WO 03/020273中披露了包括選擇的α-氨基酰胺衍生物和加巴噴丁、普加巴林或噻加賓的藥物組合物。
WO 04/062655中披露了某些α-氨基酰胺衍生物在制備用于治療頭痛病的藥物中的應用。
WO 05/018627中披露了作為抗炎藥的α-氨基酰胺衍生物。
WO 04/066987中披露了使用鈉通道調(diào)節(jié)劑治療胃腸道病癥的方法。
WO 04/066990中披露了使用鈉通道調(diào)節(jié)劑治療下泌尿道病癥的方法。
PCT/EP/2005/000514中披露了用于治療下泌尿道病癥的α-氨基酰胺衍生物。
生物學背景眾所周知鈉通道通過將電脈沖快速傳遞在整個細胞和細胞網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而在神經(jīng)元網(wǎng)絡中起重要作用，由此協(xié)調(diào)從從動到認知范圍的高級過程。這些通道為較大的跨膜蛋白，它們能夠在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)換以便能夠?qū)︹c離子具有選擇性滲透性。為了這一過程，需要動作電位使膜去極化且由此這些通道為電壓控制的。在過去的幾年中，對鈉通道和與之相互作用的藥物的已經(jīng)得到了明顯更好的理解。
顯而易見的是具有未知作用機制的大量藥物實際上通過調(diào)節(jié)鈉通道電導率起作用，包括局部麻醉藥、I類抗心律失常藥和抗驚厥藥。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元鈉通道阻滯劑具有應用于治療癲癇(苯妥英和卡巴西平)、雙相性精神障礙(卡馬西平、拉莫三嗪)、預防神經(jīng)變性和減輕神經(jīng)性疼痛的應用。使神經(jīng)元興奮性穩(wěn)定的各種抗癲癇藥可有效地用于神經(jīng)性疼痛(加巴噴丁、普加巴林)。
此外，已經(jīng)在幾種炎癥性疼痛的模型中觀察到了鈉通道表達或活性增加，從而提示鈉通道在炎癥性疼痛中的作用。
鈣通道為跨膜的多亞單位蛋白質(zhì)，它們能夠使鈣離子進入來自胞外液的細胞。通常鈣通道為電壓依賴性的并且稱作電壓敏感性鈣通道(VSCC)。在整個哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)中均發(fā)現(xiàn)了VSCCs，其中它們調(diào)節(jié)諸如細胞興奮性、遞質(zhì)釋放、胞內(nèi)代謝、神經(jīng)分泌活性和基因表達的各種活性。動物中所有″可激發(fā)的″細胞，諸如中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)神經(jīng)元、外周神經(jīng)細胞和肌細胞，包括那些骨骼肌、心肌和靜脈和動脈平滑肌的細胞具有電壓依賴性鈣通道。鈣通道在調(diào)節(jié)對細胞存活和功能而言重要的胞內(nèi)鈣離子水平中具有關鍵作用。胞內(nèi)鈣離子濃度涉及動物的大量生命過程，諸如神經(jīng)遞質(zhì)釋放、第二信使和信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)活化、肌收縮、起搏點活動和激素分泌。認為鈣通道涉及某些疾病狀態(tài)。認為用于治療哺乳動物，包括人的心血管疾病的許多化合物通過調(diào)節(jié)存在于心臟和/或血管平滑肌中的電壓依賴性鈣通道的功能發(fā)揮其有益作用。對鈣通道具有活性的化合物也用于治療疼痛。特別地，認為導致對神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)的N-型鈣通道(Cav2∶2)在傷害性傳遞中起重要作用，正如在幾種藥理學研究中證實的。這種推定在臨床上通過齊考諾肽，即一種來源于海螺(marine snail)Conus Magus的毒物的肽得到驗證。這種肽在治療應用中的局限在于必須將其通過向鞘內(nèi)對人體給藥(Bowersox S.S.和Luther R.Toxicon，1998，36，11，1651-1658)。
所有這些發(fā)現(xiàn)共同表明具有鈉和/或鈣通道阻滯作用的化合物在預防、緩解和治愈廣泛的病理情況中具有高度治療潛能，包括疼痛、偏頭痛、心血管、泌尿生殖、代謝和胃腸疾病，其中將上述機制描述為起病理性作用。
許多論文和專利中描述了用于治療和/或調(diào)節(jié)多種病癥的鈉通道和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑或拮抗劑。幾種局部麻醉藥、抗心律不齊藥、止吐藥、抗高血壓藥、情緒穩(wěn)定劑、用于治療如下疾病的的活性劑單相抑郁、心血管疾病、尿失禁、腹瀉、炎癥、中風、癲癇、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)細胞死亡、抗驚厥、神經(jīng)性疼痛、偏頭痛、急性痛覺過敏和炎癥、腎病、變態(tài)反應、哮喘、支氣管痙攣、痛經(jīng)、食道痙攣、青光眼、泌尿道病癥、胃腸蠕動障礙、早產(chǎn)、肥胖，能夠調(diào)節(jié)這些通道。
下文中報導了參考文獻的選擇C.Alzheimer在Adv.Exp.Med.Biol.2002，513，161-181中描述了作為神經(jīng)保護物質(zhì)靶標的鈉和鈣通道。
Vanegas e Schaible(Pain2000，85，9-18)中討論了鈣通道拮抗劑對疼痛、痛覺過敏和異常性疼痛的脊柱機制的作用。
美國專利US5,051,403涉及減輕與局部缺血性疾病，諸如中風相關的神經(jīng)元損害的方法，通過給予結(jié)合/抑制性ω-芋螺毒素肽來進行，其中所述肽的特征在于對神經(jīng)組織電壓控制的鈣通道電流的選擇性特異性抑制。
美國專利US5,587,454涉及生產(chǎn)特別用于治療疼痛和神經(jīng)性疼痛的組合物和方法。
美國專利US5,863,952涉及用于治療缺血性發(fā)作的鈣通道拮抗劑。
美國專利US6,011,035涉及用于治療諸如中風和疼痛這類疾病的鈣通道阻滯劑。
美國專利US6,117,841涉及鈣通道阻滯劑及其在治療中風、腦缺血、疼痛、頭部創(chuàng)傷或癲癇中的應用。
美國專利US6,362,174涉及用于治療中風、腦缺血、疼痛、癲癇和頭部創(chuàng)傷的N-型鈣通道阻滯劑。
美國專利US6,380,198涉及鈣通道阻滯劑氟桂利嗪在局部治療青光眼中的應用。
美國專利US6,420,383和美國專利US6,472,530涉及用于治療和預防許多病癥的新鈣通道阻滯劑，所述的病癥諸如超敏反應、變態(tài)反應，、哮喘、支氣管痙攣、痛經(jīng)、食道痙攣、青光眼、早產(chǎn)、泌尿道病癥、胃腸蠕動障礙和心血管病癥。
美國專利US6,458,781涉及起阻滯鈣通道作用的化合物及其在治療中風、腦缺血、疼痛、頭部創(chuàng)傷或癲癇中的應用。
美國專利US6,521,647涉及鈣通道阻滯劑在治療動物腎病，尤其是慢性腎衰竭中的應用。
WO 97/10210涉及三環(huán)雜環(huán)衍生物及其在療法，特別是作為鈣通道拮抗劑例如在治療局部缺血，特別是缺血性發(fā)作中的應用。
WO 03/018561涉及作為N-型鈣通道拮抗劑的喹啉化合物和使用這類化合物治療或預防疼痛或傷害感受的方。
WO 03/057219涉及用作治療或調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥，的鈉通道阻滯劑，所述的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病諸如神經(jīng)性疼痛、炎癥性疼痛、與炎癥相關的疼痛或癲癇。
單胺氧化酶(MAO)為存在于神經(jīng)元和非神經(jīng)元細胞外部線粒體膜中的酶。MAO存在兩種同種型MAO-A和MAO-B。MAO酶導致內(nèi)源性和異生胺類氧化脫氨基并且具有不同的底物優(yōu)選性、抑制劑特異性和組織分布。就MAO-A5-羥色胺而言，去甲腎上腺素和腎上腺素為優(yōu)選的底物，并且氯吉蘭為選擇性MAO-A抑制劑；而MAO-B優(yōu)選將β-苯乙胺作為底物并且受到司來吉蘭的選擇性抑制。多巴胺、酪胺和色胺被MAO-A和MAO-B氧化，特別是在人腦中，多巴胺被MAO-B脫氨基化達80％。
MAO抑制使得內(nèi)源性和外源性底物蓄積且由此可能在幾乎完全抑制(＞90％)時，改變有規(guī)律的單胺遞質(zhì)的動力學。MAO調(diào)節(jié)大腦中大部分重要神經(jīng)遞質(zhì)的濃度，諸如與情緒、焦慮和運動相關的去甲腎上腺素、5-羥色胺和多巴胺。因此，認為MAO活性與各種精神病和神經(jīng)障礙緊密相關，諸如抑郁癥、焦慮和帕金森病(PD)且一般老化。
MAO-A抑制劑作為其增加減少的5-羥色胺和去甲腎上腺素腦水平的能力的結(jié)果在精神病學上主要用于治療嚴重抑郁癥、頑固性抑郁癥和非典型性抑郁癥。更近來，MAO-A抑制劑已經(jīng)用于治療患有焦慮癥的患者，諸如社交恐怖、驚恐性障礙、創(chuàng)傷后應激障礙和強迫性精神障礙。
MAO-B抑制劑在神經(jīng)病學上主要用于治療PD。
還存在MAO-B在其它病理情況，諸如阿爾茨海默病(AD)中的作用的最新證據(jù)和對其的關注。迄今為止，尚無報導有關MAO-B涉及共存遞質(zhì)代謝的證據(jù)，所述的共存遞質(zhì)諸如涉及調(diào)節(jié)疼痛感覺的colecystokinin、物質(zhì)P、生長抑素和神經(jīng)降壓素。由于這一原因，所以沒有MAO-B抑制劑在疼痛綜合征中應用的科學原理。
已經(jīng)報導了在使用MAO抑制劑的臨床實踐過程中的不良藥物反應。第一代非選擇性和不可逆MAO抑制劑，諸如反苯環(huán)丙胺(tranylcypromide)和苯乙肼存在嚴重的副作用，包括肝毒性、直立性低血壓且最重要的是在攝入含有酪胺的食物后發(fā)生的高血壓危象(Cooper AJ.-“臨床實踐中的酪胺和不可逆單胺氧化酶抑制劑”-Br JPsych Suppl198938-45)。
當使用這些非選擇性和不可逆MAO抑制劑時，必須觀察嚴格的酪胺減少的膳食。在終止反苯環(huán)丙胺療法后4周和終止苯乙肼療法后11周以上校準對酪胺的加壓敏感性。
選擇性和不可逆MAO-B抑制劑司來吉蘭，尤其是在與左旋多巴對患有PD的患者聯(lián)用時可以導致食欲缺乏/惡心、口干燥、運動障礙和直立性低血壓，后者是最多的問題(Volz H.P.和Gleiter C.H.-“單胺氧化酶抑制劑。其在中老年中應用的展望”-Drugs Aging13(1998)，pp.341-355)。
在單一療法中，食欲缺乏/惡心、肌骨骼損傷和心律失常在接受司來吉蘭的患者中的發(fā)生通常多于那些接受安慰劑的患者。除這些不良反應外，注意到血清AST和ALT水平升高的增加比例。
最頻繁報導的選擇性和可逆MAO-A抑制劑嗎氯貝胺的不良反應為睡眠障礙、焦慮增加、坐立不安和頭痛。
選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)和嗎氯貝胺的聯(lián)合用藥對頑固性抑郁癥具有良好的功效，但作為因這種聯(lián)合用藥是否產(chǎn)生毒性副作用，諸如5-羥色胺能綜合征存在爭論(Baumann P.-“選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑的藥代動力學-藥效學相關性”-ClinPharmacokinet 31(1996)，pp444-469)。由于心律失常和肝酶水平增加，所以應定期檢查心電圖和實驗室值。
隨老化發(fā)生的許多類型的生理改變影響MAO抑制劑的藥效學和藥代動力學。實際上，在中老年中的藥代動力學變量明顯不同于在年輕患者中的變量。這些包括吸收、分布、代謝和排泄的變量必須加以考慮以避免某些不良反應和藥物-藥物相互作用或?qū)⑵錅p少到最低限度。中老年患者一般更易感副作用，包括不良藥物反應。高血壓危象更為頻繁地在中老年中出現(xiàn)，因為中老年的心血管系統(tǒng)因年齡而缺乏抵抗力。
擬交感神經(jīng)藥與MAO抑制劑聯(lián)用還可以升高血壓。此外，與安慰劑相比，苯乙肼與困倦、震顫、運動障礙、腹瀉、排尿困難、直立性作用和不良皮膚病反應的顯著較高的發(fā)病率相關。令人感興趣的是注意到在中老年中，據(jù)報導頭痛在使用嗎氯貝胺治療過程中具有較高的頻率(Volz H.P.和Gleiter C.H.-“單胺氧化酶抑制劑。其在中老年中的展望”-Drugs Aging13(1998)，pp.341-355)。
有時為抑郁癥開據(jù)MAO抑制劑的處方。因存在自殺的潛在風險，所以因超劑量而導致的不良藥物反應和毒性在選擇抗抑郁藥時是需要考慮的重要因素。此外，當以高劑量使用MAO抑制劑時，不良心血管反應看起來顯著增加；并且因為使用大部分可利用的藥物，所以MAO的選擇性因這類高劑量而損失，酪胺可以誘導潛在的危險性高血壓反應。使用MAO抑制劑的急性超劑量導致精神激動、幻覺、高熱、反射亢進和驚厥。異常血壓也是毒性征兆，使得可能需要洗胃和維持心肺功能。傳統(tǒng)的非選擇性和不可逆MAO抑制劑的超劑量是相當危險的并且有時是致命的(Yamada和Richelson，1996.“中老年中抗抑郁藥的藥理學”David JR，Snyder L.，ed itors.Handbook of pharmacologyof aging.Boca RatonCRC Press1996)。
在治療鈉和鈣通道機制起病理性作用的病變，特別是疼痛綜合征(神經(jīng)病或炎癥型中的任一種)的過程中，抑制MAO酶沒有有益性。臨床上最具活性的抗感受傷害的藥物不具有MAO抑制作用。相反，MAO抑制副作用可能施加至少兩種類型的負面限制。
1)膳食食用含有高酪胺含量的食物可以導致嚴重的甚至是威脅生命的全身血壓升高(所謂的″干酪-作用″)。
2)藥理的通常使用諸如阿片樣物質(zhì)衍生物和三環(huán)抗抑郁藥這類聯(lián)合用藥治療疼痛。由于使用了MAO抑制劑，所以這類組合是危險的，它可以導致血清素能綜合征(精神激動、震顫、幻覺、體溫過高和心律失常)。
因此，消除或顯著減少作為用于預防、緩解和治愈所述機制起病理性作用的廣泛病理情況(諸如疼痛、偏頭痛、心血管、炎癥、泌尿生殖、代謝和胃腸疾病)的鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的活性的藥物中的MAO抑制活性與類似功效，但存在上述副作用的化合物相比具有令人意外和顯著性的治療改善。所述的改善對作為特別用于治療疼痛綜合征的鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的活性的藥物而言是特別理想的。
由于解釋了有關MAO抑制劑的這些發(fā)現(xiàn)，且特別是缺乏MAO-B作用在病理性病變中的任何證據(jù)，所述的病理性病變?nèi)缣弁?、偏頭痛、心血管、炎癥、泌尿生殖、代謝和胃腸疾病，所以在上述疾病中所述的化合物不應具有MAO-B抑制活性，如果存在，它可能會增加不需要的不良反應。
應優(yōu)選″具有作為鈉和/或鈣調(diào)節(jié)劑的選擇性活性″或用于″選擇性治療″鈉和/或鈣通道機制起病理性作用的的病理性病變、病癥或疾病的藥物。作為這一表達方式意旨在對有此需要的患者給予有效治療上述機制起病理性作用的上述病變的用量時藥物不會表現(xiàn)出任何MAO抑制活性或表現(xiàn)出顯著減少的MAO抑制活性，由此導致避免了因內(nèi)源性和外源性單胺遞質(zhì)蓄積而產(chǎn)生的副作用。
本發(fā)明的主要目的在于選擇的(鹵代芐氧基)-芐氨基-丙酰胺類在制備治療病理情況的具有作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的活性的藥物中的應用，在所述的病理情況中上述機制起病理性作用，所述的藥物基本上沒有任何的MAO-B抑制活性或MAO的抑制活性顯著減少，且由此具有減少的不需要的副作用的可能性。所述的應用為預防、緩解和/或治愈上述病理性病變提供了改善的選擇性資源。
發(fā)明詳述本發(fā)明的目的涉及選自(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺和(R)-2-[4-(2-氯芐氧基)芐氨基]-N-甲基丙酰胺的(R)-2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺及其藥物上可接受的鹽在制備具有作為用于預防、緩解和/或治愈所述機制起病理性作用的病變的鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的選擇性活性的藥物中的應用，其特征在于所述的藥物基本上沒有任何的MAO抑制作用或在預防、緩解和/或治愈所述病變中為治療有效的劑量下表現(xiàn)出顯著減少的MAO抑制作用。
所述的疾病包括，但不限于疼痛、偏頭痛、心血管、炎癥、泌尿生殖、代謝和胃腸疾病和癲癇病癥。按照本發(fā)明的另一個方面，可以使用上述化合物及其藥物上可接受的鹽預防、緩解或治愈所述病變優(yōu)選在于疼痛綜合征(神經(jīng)性和/或炎癥性中的任一種)和/或偏頭痛和/或泌尿生殖和/或胃腸疾病和/或癲癇發(fā)作。
在與具有作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的活性的相同化學類型衍生物比較，特別是與相應的S-異構(gòu)體比較時，這些化合物具有鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)活性與令人意外的選擇性特征。實際上，已經(jīng)通過預測性藥理試驗證實具有作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的活性的本發(fā)明化合物劑量與和MAO-B酶抑制劑具有相同產(chǎn)品活性的劑量之比以令人意外和顯著性方式下降。
在本說明書和權利要求中，表述″鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑″意旨能夠以電壓依賴性方式阻斷鈉和/或鈣電流的化合物。
在EP 1045830 B1(和WO 99/35125)中將化合物(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺作為單一異構(gòu)體或外消旋混合物提及，但沒有任何有關其制備和表征的具體信息。
在EP 0400495 B1(和WO 90/14334)中將化合物(R)-2-[4-(2-氯芐氧基)芐氨基]-N-甲基丙酰胺以相應的與甲磺酸形成的鹽的形式披露。
本發(fā)明的另一個目的在于提供用于選擇性預防、緩解和/或治愈鈉和/或鈣通道機制起病理性作用的病理性病變的方法，該方法包括對有此需要的患者給予治療有效量的選自(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺和(R)-2-[4-(2-氯芐氧基)芐氨基]-N-甲基丙酰胺的(R)-2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺及其藥物上可接受的鹽，其中所述化合物的治療活性基本上沒有任何的MAO抑制副作用或表現(xiàn)出顯著減少的MAO抑制副作用。
按照本發(fā)明上述方法的另一個方面，鈉或鈣通道機制起病理性作用的病理性病變包括疼痛、偏頭痛、心血管、炎癥、泌尿生殖、代謝和胃腸疾病和癲癇病癥；優(yōu)選所述的病理性病變包括神經(jīng)性或炎癥型中的任一種疼痛綜合征。
可以通過這樣一種方法獲得本發(fā)明的化合物及其鹽，即所述的方法包括使一般通式I的化合物與通式II的化合物反應，其中通式I化合物的結(jié)構(gòu)式如下 其中R表示2-氟或2-氯取代基，其中通式II化合物的結(jié)構(gòu)式如下 其中R1表示氫，此時通式II化合物上的R代表2-氟取代基；或甲基，此時通式II化合物上的R代表2-氯取代基。
化合物I和II為商購化合物。
通式I的化合物與通式II的化合物反應而生成相應的(R)-2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺為還原氨基化反應，可以按照眾所周知的方法進行該反應。按照本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案，該反應可以在約0℃-約80℃下和氮氣環(huán)境中以及有還原劑存在下的合適的有機溶劑中進行，所述的有機溶劑諸如醇，例如低級鏈烷醇，特別是甲醇；或乙腈或四氫呋喃，所述的還原劑最合適的為硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉。有時可以將異丙醇鈦IV和分子篩加入到反應混合物中以便有助于反應。
藥理學本發(fā)明的化合物為鈣和/或鈉通道電壓依賴性阻滯劑，正如通過熒光鈣流入試驗和電生理研究所證實的。
通過電生理試驗，使用兩電極電壓鉗制(TEVC)技術測定選擇性(R)-2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺類在表達Na通道Nav1.3的分離的非洲蟾蜍屬(Xenopus)卵母細胞中的鈉通道調(diào)節(jié)活性。
通過基于熒光的鈣流入試驗測定(R)-2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺類的N-型鈣通道調(diào)節(jié)活性。
通過使用體外酶活性試驗測定上述化合物的MAO-B阻滯活性。
通過小鼠福爾馬林試驗評價上述化合物作為止痛藥的體內(nèi)活性。
已經(jīng)通過按照EP 1045830 B1與已知具有作為止痛藥活性的其它2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺衍生物比較，特別是與相應的(S)-異構(gòu)體和與2-[4-(3-氯芐氧基)芐氨基]丙酰胺的(R)和(S)異構(gòu)體比較評價本發(fā)明化合物的選擇性。
這些比較試驗證實，盡管本發(fā)明的(R)-異構(gòu)體具有的活性基本上與對比化合物的止痛活性的程度相同，但是其具有的作為MAO-B阻滯劑的活性比對比化合物低至少40-90倍。
此外，具有作為Na+和/或Ca+調(diào)節(jié)劑活性的本發(fā)明R-異構(gòu)體的劑量與具有作為MAO-B酶抑制劑活性的相同產(chǎn)品的劑量之比遠低于對比化合物的值，由此提供了其選擇性特征的證明。
這類物質(zhì)在鈉通道被阻斷時也表現(xiàn)出″應用-依賴性″，即鈉通道的最大阻滯僅在反復刺激鈉通道后獲得。因此，所述的物質(zhì)優(yōu)選結(jié)合多次活化的鈉通道。作為結(jié)果，這些物質(zhì)能夠優(yōu)選在受到病理性過度刺激的那些身體區(qū)域具有活性，正如通過膜片鉗實驗說明的，這些實驗證實本發(fā)明的化合物以″應用-依賴性″方式阻斷電刺激的鈉通道。
作為這些機制的結(jié)果，本發(fā)明的化合物在持久疼痛的福爾馬林動物模型中以0.1-100mg/kg口服給藥時在體內(nèi)具有活性。
鑒于上述作用機制，本發(fā)明的化合物特別用于選擇性治療或預防神經(jīng)性疼痛。神經(jīng)性疼痛綜合征包括且不限于糖尿病性神經(jīng)??；坐骨神經(jīng)痛；非特異性下背疼痛；多發(fā)性硬化疼痛；纖維肌痛；HIV-相關神經(jīng)病變；神經(jīng)痛，諸如皰疹后神經(jīng)痛和三叉神經(jīng)痛；和因身體創(chuàng)傷、截肢術、癌癥、毒素或慢性炎性疾病導致的疼痛；脊髓、外周神經(jīng)神經(jīng)根和中樞性痛途徑壓迫。
本發(fā)明的化合物還用于選擇性治療慢性疼痛。慢性疼痛包括且不限于因炎癥或炎癥相關疾病、骨關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎導致的慢性疼痛或作為急性損傷或創(chuàng)傷后遺癥的疾病包括上背痛或下腰痛(因全身、區(qū)域或原發(fā)性脊柱疾病(諸如神經(jīng)根病)、骨痛(因骨關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、骨轉(zhuǎn)移灶或未知原因?qū)е?、骨盆痛、脊髓損傷相關性疼痛、心臟性胸痛、非-心臟性胸痛、中樞中風后疼痛、肌盤膜痛、癌痛、AIDS疼痛、鐮刀形紅細胞疼痛、老年病性疼痛或因頭痛、顳下頜關節(jié)機能障礙綜合征、痛風、纖維化或胸廓出口綜合征導致的疼痛、與手術和手術后遺癥相關的疼痛。
本發(fā)明的化合物還用于選擇性治療急性疼痛(因急性損傷、疾病、運動醫(yī)學損傷、腕管綜合征、燒傷、肌骨骼扭傷和勞損、肌腱勞損、頸臂疼痛綜合征、消化不良、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位或手術(諸如心臟直視手術或旁路手術導致)、術后痛、腎結(jié)石疼痛、膽囊疼痛、膽結(jié)石疼痛、助產(chǎn)疼痛或牙痛。
本發(fā)明的化合物還用于選擇性治療偏頭痛和其它頭痛、轉(zhuǎn)變的偏頭痛或發(fā)展的頭痛、叢集性頭痛、緊張性頭痛以及繼發(fā)性頭痛病，諸如來源于感染、代謝性疾病或其它系統(tǒng)性疾病的頭痛和其它因上述原發(fā)性和繼發(fā)性頭痛惡化導致的急性頭痛、代謝性疾病等。
本發(fā)明的化合物還用于選擇性治療外周疾病，諸如耳鳴、肌痙攣、肌硬化和其它病癥，包括且不限于心血管疾病(諸如心律失常、心肌梗死或心絞痛、高血壓、心臟局部缺血)、內(nèi)分泌病癥(諸如肢端肥大癥或尿崩癥)；病癥的病理生理學涉及內(nèi)源性物質(zhì)(諸如兒茶酚胺、激素或生長因子)過度或過多分泌，否則就是不適當細胞分泌的疾病。
本發(fā)明的化合物還用于選擇性治療肝病，諸如炎性肝病，例如慢性乙型病毒性肝炎、慢性丙型病毒性肝炎、酒精性肝損傷、原發(fā)性膽汁性肝硬變、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎和肝移植排斥。
本發(fā)明的化合物抑制影響所有身體系統(tǒng)的炎癥性過程。因此用于選擇性治療肌肉-骨骼系統(tǒng)的炎癥過程，下面是這些疾病的實例表單，但其并非所有靶標病癥的總和關節(jié)炎性疾病，諸如強直性脊柱炎、頸椎關節(jié)炎、纖維肌痛、腸、青少年類風濕性關節(jié)炎、腰骶骨關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、牛皮癬性關節(jié)炎、風濕病；影響皮膚和相關組織的病癥濕疹、銀屑病、皮炎和炎性疾病，諸如曬傷；呼吸系統(tǒng)病癥哮喘、過敏性鼻炎和呼吸窘迫綜合征、涉及炎癥的肺病癥，諸如哮喘和支氣管炎；慢性阻塞性肺疾患；免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)病癥結(jié)節(jié)性動脈周圍炎、甲狀腺炎、再生障礙性貧血、硬化病、重癥肌無力、多發(fā)性硬化、結(jié)節(jié)病、腎炎綜合征、貝切特綜合征、多發(fā)性肌炎、齦炎。
本發(fā)明的化合物還用于選擇性治療胃腸(GI)道病癥，諸如炎癥性腸病，包括，但不限于潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、回腸炎、直腸炎、腹部疾病、腸病、鏡下結(jié)腸炎或膠原性結(jié)腸炎、嗜酸細胞性胃腸炎或直腸與結(jié)腸切除術后和回腸臀吻合后導致的囊炎(pouchitis)；和腸應激綜合征，包括任意與腹部疼痛和/或異常不適感相關的病癥，諸如幽門痙攣、神經(jīng)性消化不良、痙攣性結(jié)腸、痙攣性結(jié)腸炎、腸痙攣、腸神經(jīng)機能病、功能性結(jié)腸炎、粘液性結(jié)腸炎、緩瀉性結(jié)腸炎和機能性消化不良；本發(fā)明的化合物還用于治療萎縮性胃炎、痘疹狀胃炎、潰瘍性結(jié)腸炎、消化性潰瘍、pyresis和其它例如由幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)對GI道的損害、胃食管返流疾病、胃輕癱，諸如糖尿病性胃輕癱；和其它功能性腸病癥，諸如非潰瘍性消化不良(NUD)；嘔吐、腹瀉和內(nèi)臟炎癥。
本發(fā)明的化合物還用于選擇性治療生殖泌尿道病癥，諸如膀胱活動過度、前列腺炎(慢性細菌性前列腺炎和慢性非細菌性前列腺炎)、前列腺痛(prostadynia)、間質(zhì)性膀胱炎、尿失禁和良性前列腺增生、子宮附件炎、盆腔炎、bartolinities和陰道炎。
本發(fā)明的化合物還用于選擇性治療代謝性疾病(例如肥胖)和癲癇病癥(例如癲癇)。
本發(fā)明的化合物還用于選擇性治療所有通過抑制電壓控制的鈉通道和/或電壓控制的鈣通道介導的其它疾病。
可以理解本發(fā)明的化合物可以有利地與一種或多種其它的治療劑聯(lián)用。用于附加療法的合適的活性劑的實例包括5HT1B/1D激動劑，諸如曲坦(例如舒馬普坦或那拉曲坦)；腺苷A1激動劑；EP配體；NMDA調(diào)節(jié)劑，諸如甘氨酸拮抗劑；物質(zhì)P拮抗劑(例如NK1拮抗劑)；大麻素；對乙酰氨基酚或非那西丁；5-脂氧合酶抑制劑；白細胞三烯受體拮抗劑；DMARD(例如甲氨蝶呤)；加巴噴丁和相關化合物；三環(huán)抗抑郁藥(例如阿米替林)；神經(jīng)元穩(wěn)定抗癲癇藥；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；一氧化氮合酶(NOS)抑制劑，諸如iNOS或nNOS抑制劑；腫瘤壞死因子α釋放或作用抑制劑；抗體療法，諸如單克隆抗體療法；抗病毒藥，諸如核苷抑制劑(例如拉米夫定)或免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑(例如干擾素)；止痛藥，諸如環(huán)加氧酶2-抑制劑；局部麻醉藥；刺激劑，包括咖啡因；H2-拮抗劑(例如雷尼替丁)；質(zhì)子泵抑制劑(例如奧美拉唑)；抗酸藥(例如氫氧化鋁或氫氧化鎂；抗胃腸氣脹藥(例如二甲硅油(semethicone))；解充血藥(例如去氧腎上腺素、苯丙醇胺、偽麻黃堿、羥甲唑啉、腎上腺素、萘甲唑林、賽洛唑啉、丙己君或左旋-去氧麻黃堿、萘甲唑林、賽洛唑啉、丙己君或左旋-去氧麻黃堿)；鎮(zhèn)咳藥(例如可待因、氫可酮、carmiphen、噴托維林或dextramethorphan)；利尿藥；或鎮(zhèn)靜或非鎮(zhèn)靜抗組胺藥。應理解本發(fā)明包括本發(fā)明化合物或其藥物上可接受的鹽與一種或多種治療劑的聯(lián)合用藥的應用。
本發(fā)明的化合物用于人和獸藥。應理解無論是否有另外特別的定義，本文所用的術語″治療(treatment)″或″治療(treating)″包括預防、緩解和治愈病理情況，特別地，它們包括治療確立的癥狀和預防性治療。
因此，表達方式″治療有效量″在涉及本發(fā)明的(R)-2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺類的″用量″、″劑量(dose)″或″劑量(dosage)″時意旨足以用于治療確立的癥狀和預防性治療上述病理性病變的任意所述的化合物的″用量″、″劑量(dose)″或″劑量(dosage)″。
按照本發(fā)明的應用，可以將上述選擇性活性的R-2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺類衍生物及其藥物上可接受的鹽作為藥物上可接受的組合物的″活性組分″給予，所述的組合物可以通過常規(guī)操作步驟制備，例如，通過將活性組分與藥物上可接受的治療惰性有機和/或無機載體物質(zhì)混合。
可以以各種形式給予包括上述定義的2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺類衍生物的組合物，例如通過口服，以片劑、藥片、膠囊、包糖衣或包薄膜衣的片劑、液體溶液、乳劑或混懸液的形式；通過直腸或陰道內(nèi)，以栓劑形式；通過非腸道，例如通過肌內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)注射或輸注；通過局部和透皮以貼劑和凝膠和霜劑形式。
用于制備這類組合物的合適的藥物上可接受的惰性有機和/或無機載體物質(zhì)包括例如水、明膠、阿拉伯樹膠、乳糖、淀粉、纖維素、硬脂酸鎂、滑石粉、植物油、環(huán)糊精、聚亞烷基二醇類等。可以對包括上述(R)-2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺類的組合物滅菌并且該組合物可以進一步含有眾所周知的成分，諸如，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑或乳化劑，例如石蠟油、二縮甘露醇一油酸酯、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽、緩沖劑等。
例如，固體口服劑型可以與活性組分一起含有稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇類；粘合劑，例如淀粉、阿拉伯樹膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑，例如淀粉、藻酸、藻酸鹽或羥基乙酸淀粉鈉；泡騰劑；染料；增甜劑；濕潤劑，諸如卵磷脂、聚山梨醇酯類、月桂基硫酸酯類；和一般用于藥物制劑的無毒性和藥理上無活性的物質(zhì)。可以按照公知方式，例如，通過混合、制粒、壓片、包糖衣或包薄膜衣過程制備所述的藥物制劑。
口服制劑包括可以按照常規(guī)方式，例如通過給片劑和顆粒包腸溶衣制備的緩釋制劑。
例如，用于口服給藥的液體分散體可以為糖漿劑、乳劑和混懸液。
糖漿劑可以含有例如蔗糖或蔗糖與甘油和/或甘露糖醇和/或山梨醇作為載體。
混懸液和乳劑可以含有例如天然樹膠、瓊脂、藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯醇作為載體。用于肌內(nèi)注射的混懸液或溶液可以與活性化合物一起含有藥物上可接受的載體，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、乙二醇類，例如丙二醇，且如果需要，含有適量的鹽酸利多卡因。用于靜脈內(nèi)注射或輸注的溶液可以含有例如無菌水作為載體，或優(yōu)選它們?yōu)闊o菌含水等滲鹽水溶液的形式。
栓劑可以與活性組分一起含有藥物上可接受的載體，例如可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯表面活性劑或卵磷脂。
每天給予1、2或3次合適的治療，這取決于清除率。因此，可以將所需劑量制成單劑量或在適當間隔給予的分次劑量，例如每天2-4次或4次以上亞-劑量。
包括上述選擇性活性的(R)-2-[(鹵代芐氧基)芐氨基]-丙酰胺類的藥物組合物在每個劑量單位，例如膠囊、片劑、粉末注射劑、一茶匙容量、栓劑等中可以含有約1-約2500mg活性組分，優(yōu)選5-1000mg，最優(yōu)選10-200mg活性組分。
給予的最佳治療有效劑量易于由本領域技術人員確定并且基本上根據(jù)制劑的濃度、給藥方式和病情的發(fā)展或所治療病癥的類型的不同而改變。此外，與所治療的特定受試者相關的因素，包括受試者年齡、體重膳食和給藥時間會產(chǎn)生將所述劑量調(diào)整至合適的治療有效水平的需求。一般而言，本發(fā)明化合物在需要選擇性治療鈉和/或通道機制起病理性作用的上述病變的患者中的每日治療有效劑量在0.05-100mg/kg，優(yōu)選0.1-50mg/kg，最優(yōu)選0.5-10mg/kg體重的范圍。
下列實施例可以進一步解釋本發(fā)明。
實施例1(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺通過在(R)丙氨酰胺鹽酸鹽(1.37g，11mmol)中回流(bubbling)向50ml無水甲醇中加入4-(2-氟芐氧基)苯甲醛(2.3g10mmol)、三乙胺(1，12g，11mmol)和1g3-分子篩并且將該混合物在40℃下攪拌4小時。然后將溫度降至10℃并且在15′內(nèi)加入硼氫化鈉(0.19g，5mmol)。將該反應混合物在室溫下攪拌6小時，然后將其過濾并且在真空中蒸發(fā)至干。在60℃下用水和甲苯處理殘余物并且用溫水將有機相洗滌兩次且在相同溫度下用無水硫酸鈉干燥。過濾該溶液，并且逐步在10℃冷卻。過濾沉淀，用少量冷卻的甲苯洗滌且在真空中干燥至得到2，69g(產(chǎn)率89.0％)的白色晶體。
實施例2(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺甲磺酸鹽在室溫和攪拌下，向(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]-丙酰胺(2.5g，8.3mmol)在40ml乙酸乙酯中的溶液中加入在10ml乙酸乙酯中稀釋的化學計算量的甲磺酸(0.80g)。1小時后，過濾白色晶體，用5ml乙酸乙酯洗滌并且在真空烘箱內(nèi)干燥至得到3.26g(產(chǎn)率98.8％)標題化合物m.p.240-241℃1H-NMR(DMSO-d6)δ1.39(d，J＝6.9Hz，3H，CH3CH)，2.30(s，3H，CH3SO3-)，3.71(q，J＝6.9Hz，1H，CH3CH)，4.01(m，2H，ArCH2-NH)，5.15(s，2H，ArCH2O)，7.08(m，2H，H3，H5)，7.1-7.6(m，6H，H3′，H4′，H5′，H6′，H2，H6)，7.63，7.89(2s，2H，CONH2)，9.0(br s，2H，NH2+)；MSm/z302(M·+)，258，230，215，109.
分析(C17H19FN2O2·CH3SO3H)C，H，F(xiàn)，N，S.
按照類似方式制備(R)-2-[4-(2-氯芐氧基)芐氨基]-N-甲基丙酰胺甲磺酸鹽1H-NMR(DMSO-d6)δ1.40(d，J＝7.0Hz，3H，CH3CH)，2.30(s，3H，CH3SO3-)，2，65(d，J＝4.5Hz，3H，CONHCH3)，3.70(q，J＝7.0Hz，1H，CH3CH)，4.01(s，2H，ArCH2-NH)，5.17(s，2H，ArCH2O)，7.08(m，2H，H3，H5)，7.3-7.7(m，6H，H3′，H4′，H5′，H6′，H2，H6)，7.63，7.89(2s，2H，CONH2)，9.0(brs，2H，NH2+)；MS m/z332(M·+)，274，246，231，125.
分析(C18H21ClN2O2·CH3SO3H)C，H，Cl，N，S.
(R)-2-[4-(3-氯-芐氧基)芐氨基]丙酰胺甲磺酸鹽
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.39(d，J＝6.8Hz，3H，CH3CH)，2.29(s，3H，CH3SO3-)，3.70(q，J＝6.8Hz，1H，CH3CH)，4.01(s，2H，ArCH2-NH)，5.15(s，2H，ArCH2O)，7.06(m，2H，H3，H5)，7.3-7.6(m，6H，H2′，H2′，H5′，H6′，H2，H6)，7.64-7.91(2s，2H，CONH2)，8.96(br s，2H，NH2+)；MS m/z318(M·+)，274，246，231，125.
分析(C17H19ClN2O2·CH3SO3H)C，H，Cl，N，S.
實施例3體外MAO-B酶活性試驗膜制備(粗制線粒體級分)在輕度麻醉下處死雄性Wistar大鼠(Harlan，Italy-175-200g)并且快速摘除大腦且在含有0.1M EDTA，pH7.4的8個體積的冰冷0.32M蔗糖緩沖液中勻化。將勻化物以2220rpm離心10分鐘并且回收上清液。勻化沉淀并且再次離心且收集上清液并且在+4℃下以9250rpm離心10分鐘。將沉淀重新懸浮于緩沖液中并且在+4℃下以11250rpm離心10分鐘。將所得沉淀貯存在-80℃下至使用為止。
體外酶活性試驗使用放射酶學測定，應用選擇性底物14C-苯乙胺(PEA)對MAO-B評價酶活性。
將線粒體沉淀(500μg蛋白質(zhì))重新懸浮于pH7.4的0.1M磷酸鹽緩沖液中并且在37℃下將500μl加入到50μl的測試化合物或緩沖液中30分鐘(預溫育)，然后加入底物(50μl)。在37℃下使溫育進行10分鐘(14C-PEA，0.5μM)。
通過添加0.2ml HCl或高氯酸終止反應。在離心后，使用3ml甲苯提取脫氨基的代謝物并且通過液閃光譜法以90％的效率測定放射性有機相。洗脫液中的放射性表明作為MAO-B活性的結(jié)果形成的中性和酸性代謝物產(chǎn)生。
將酶促活性表示為轉(zhuǎn)化的底物的nmoles/mg蛋白質(zhì)/分鐘。將MAO-B在樣品中活性表示為扣除合適的空白值后在沒有抑制劑存在下的控制活性的百分比。
藥物抑制曲線獲自至少8個不同的濃度，各自一式兩份(10-10-10-5M)和IC90值(抑制90％酶活性的藥物濃度)與使用線性回歸分析測定的置信區(qū)間。(輔助計算機程序)。
為了達到神經(jīng)遞質(zhì)水平顯著性增加，必須將MAO-B酶活性阻斷至少90％。本發(fā)明(R)-異構(gòu)體與對比化合物的IC90值報導在表I中。
實施例4鈣流入試驗IMR32人神經(jīng)母細胞瘤細胞以組成型方式具有L和N型通道。在不同的分化條件下，IMR32優(yōu)選在膜表面N-型鈣通道上表達。使用選擇性L型阻滯劑硝苯地平阻斷剩余的L-型鈣通道。在這些實驗條件下，僅檢測到N型通道。
在225cm2燒瓶中，使用1mM dibutyril-cAMP和2.5μM溴脫氧尿苷使IMR32細胞分化8天(4次)，然后分離，以200,000個細胞/孔接種在96聚賴氨酸包被的平板上并且在使用前有分化緩沖液存在下進一步孵育18-24小時。
使用基于熒光鈣指示劑485-535nm波長的Ca2+試劑盒試驗(Molecular Devices)。
將分化的細胞與加載染料一起在37℃下溫育30分鐘，然后加入單獨或有ω-芋螺毒素或測試化合物存在下的硝苯地平(1μM)以便進一步溫育15分鐘。
在自動注射100mM KCl去極化溶液前后(30-40秒)使用Victor平板讀出器(Perkin Elmer)測定熒光(485-535nm)。
使用線性回歸分析測，由5個濃度，各自一式三份和IC50計算抑制曲線。
將表示為本發(fā)明(R)-異構(gòu)體和對比化合物的IC50的對N-型鈣通道的活性報導在表I中。
實施例5電生理試驗對表達Nav1.3的Na通道的非洲蟾蜍屬卵母細胞進行用于測定緊張阻斷的實驗。使用電極電壓鉗制(TEVC)技術記錄電流。
卵母細胞制備用含有3-氨基苯甲酸乙酯(1g/l)的溶液麻醉蛙(XenopusLaevis)，并且在25分鐘后，將其背置于″冰-床″上放置。切下皮膚和其它組織，拉出卵巢葉并且保存在ND96Ca2+(NaCl96mM，KCl2mM，MgC12 1mM，Hepes10mM，pH7.85與NaOH)中。
在除去卵母細胞后，分別縫合肌肉和皮膚。
使卵巢葉分解成10/20卵母細胞的簇，將其放入含有膠原酶溶液(1mg/ml)的試管并且即刻保持在保溫箱內(nèi)約1小時。
在該步驟結(jié)束時，當卵母細胞彼此成分分離時，用ND96Ca2+沖洗三次和用NDE(ND96Ca2++CaCl0.9mM，MgC12 0.9mM，丙酮酸鹽2.5mM，慶大霉素50mg/l)將它們沖洗3次。
獲得的卵母細胞處于不同的發(fā)育期。僅選擇在V或VI期的細胞進行RNA注射，隨后進行實驗。
在制備后的當天，將卵母細胞與20ng Nav1.3cRNA一起注射(Drummond Nanoject)并且維持在NDE中。
使用兩-微型電極電壓鉗自動化工作站記錄從mRNA注射后48小時開始的完整細胞電流。
典型微型電極具有0.5-1Mohm電阻并且充滿了KCl3M。
對照浴溶液含有(mM)NaCl98、MgCl21、CaCl21.8、HEPES5(pH7.6)。
化合物制備在儲備溶液中(20mM)并且在外部浴溶液中溶解至終濃度。
電流記錄首先研究在卵母細胞中表達的Nav1.3電流的電流/電壓(I/V)相關性，以便測定引起最大活化的膜電位。Nav1.3表示在0mV時的最大活化，將其用作緊張阻斷研究的測試電位(Vtest)。
還研究了Nav1.3電流的穩(wěn)態(tài)失活特性，以便分別測定通道的利用率為最大值(Imax)的靜止狀態(tài)的膜電位(Vrest)和產(chǎn)生一半最大電流利用率(I1/2)的半數(shù)最大失活膜電位(V1/2)。然后將這兩種電壓條件用于評價緊張阻斷的電壓依賴性。
最終將兩步方案用于測定阻斷Nav1.3的電壓依賴性在-80mV下鉗制卵母細胞，從分別在-80mV(靜止，Imax條件)和-40mV(去極化，I1/2條件)下的3000ms預先調(diào)電位通過100ms階躍脈沖而達到0mV(Vtest)活化電流。
在沒有和有不同濃度化合物存在下記錄兩種條件下的電流振幅(兩種濃度之間進行清除)，以便測定濃度-抑制曲線和去極化(半數(shù)最大電流利用率)條件中用于緊張阻斷的IC50值。
將表示為本發(fā)明(R)-異構(gòu)體和對比化合物的IC50的對Nav1.3鈉通道的活性報導在表I中。
實施例6小鼠福爾馬林試驗按照Rosland等(1990)的改進方案，將2012.7％福爾馬林溶液經(jīng)皮下(s.c.)注射到小鼠左后爪的跖面并且即刻放入潔凈的PVC觀察室(23×12×13cm)。
在給每次劑量10只小鼠的組注射10ml/kg體重體積的福爾馬林前15分鐘口服給予測試化合物(20mg/kg)。用載體處理對照組。
通過對使用福爾馬林注射爪的蓄積舔爪時間(秒)進行計數(shù)量化疼痛行為。在注射福爾馬林后的晚期30-40分鐘過程中取測定值(Tjolsen等1992)。
將化合物的止痛作用計算為與對照組相比的對蓄積舔爪時間的抑制％。
正如表II中報導的，本發(fā)明的兩種(R)-異構(gòu)體表現(xiàn)出相似的止痛活性(無統(tǒng)計學差異)或比對比化合物更好的止痛活性。
結(jié)果表1
(1)所有化合物均以與甲磺酸形成的鹽的形式使用。
表2
(2)所有化合物均以與甲磺酸形成的鹽的形式使用。
按照本申請和權利要求中使用的術語和標準。認為當Nav1.3的IC50值與IC90MAO-B值之比且IC50Ca2+N-型與IC90MAO-B的值之比小于0.1時，具有作為鈉和/或通道調(diào)節(jié)劑活性的藥物在預防、緩解和/或治愈所述機制起病理性作用的病變中為治療上有效的劑量下基本上沒有任何的MAO-B抑制作用。類似地，當Nav1.3的IC50值與IC90MAO-B值之比且IC50Ca2+與IC90MAO-B的值之比小于0.5，但它們中至少一個不小于0.1時，將具有作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑活性的藥物視為在預防、緩解和/或治愈所述機制起病理性作用的病變中為治療上有效的劑量下表現(xiàn)出顯著性減少的MAO-B抑制作用。
權利要求
1.選自(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺和(R)-2-[4-(2-氯芐氧基)芐氨基]-N-甲基丙酰胺的(鹵代芐氧基)芐氨基-丙酰胺及其藥物上可接受的鹽在制備具有作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的選擇性活性的藥物中的應用，其特征在于所述的藥物基本上沒有任何MAO抑制作用或在預防、緩解和/或治愈上述機制起病理性作用的病變中具有治療有效性的劑量下表現(xiàn)出顯著降低的MAO抑制作用。
2.如權利要求1中所述的(鹵代芐氧基)芐氨基-丙酰胺或其藥物上可接受的鹽與合適的載體和/或稀釋劑和任選與其它治療劑的混合物的應用，用于制備選擇性治療鈉和/或鈣通道機制起病理性作用的病癥的藥物組合物。
3.如權利要求1和2中任意一項所述的(鹵代芐氧基)芐氨基-丙酰胺或其藥物上可接受的鹽在制備具有作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的活性的藥物中的應用，這些藥物用于預防、緩解和治愈選自疼痛、偏頭痛、periferal疾病、心血管疾病、影響所有身體系統(tǒng)的炎癥性過程、影響皮膚和相關組織的病癥、呼吸系統(tǒng)病癥、免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)病癥、胃腸、泌尿生殖、癲癇和代謝病癥的病理性病變，其特征在于所述的藥物基本上沒有任何MAO抑制作用或在預防、緩解和/或治愈所述病理性病變的治療上有效的劑量下表現(xiàn)出顯著降低的MAO抑制作用。
4.權利要求1-3中任意一項所述的應用，包括治療確立的癥狀和預防性治療。
5.權利要求1-4中任意一項所述的應用，其中所述的病理性病變?yōu)樘弁淳C合征、偏頭痛、泌尿生殖和/或胃腸疾病和/或癲癇病癥。
6.權利要求1-5中任意一項所述的應用，其中所述的病理性病變?yōu)樘弁淳C合征。
7.權利要求6所述的應用，其中所述的疼痛綜合征為神經(jīng)性的或炎癥類型中的任一種。
8.權利要求5所述的應用，其中所述的病理性病變?yōu)槠^痛。
9.權利要求1-8中任意一項所述的應用，其中所述(鹵代芐氧基)芐氨基-丙酰胺為(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺和/或其藥物上可接受的鹽。
10.權利要求9所述的應用，其中所述的鹽為與甲磺酸形成的鹽。
11.權利要求1-10中任意一項所述的應用，其中MAO酶為MAO-B同種型。
12.權利要求1-11中任意一項所述的應用，其中將所述(鹵代芐氧基)芐氨基-丙酰胺或其藥物上可接受的鹽與一種或多種其它的治療劑聯(lián)用。
13.(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺及其甲磺酸鹽。
14.用于選擇性預防、緩解和/或治愈其中鈉和/或鈣通道機制起病理性作用的病理性病變的方法，該方法包括對有此需要的患者給予治療有效量的選自(R)-2-[4-(2-氟芐氧基)芐氨基]丙酰胺和(R)-2-[4-(2-氯芐氧基)芐氨基]-N-甲基丙酰胺的(鹵代芐氧基)芐氨基-丙酰胺及其藥物上可接受的鹽，其中所述化合物的治療活性基本上沒有任何MAO抑制副作用或表現(xiàn)出顯著降低的MAO抑制副作用。
15.如權利要求14中所述的方法，其中所述的病理性病變?yōu)樘弁淳C合征、偏頭痛、periferal疾病、心血管疾病、影響所有身體系統(tǒng)的炎癥性過程、影響皮膚和相關組織的病癥、呼吸系統(tǒng)病癥、免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)病癥、胃腸、泌尿生殖、癲癇或代謝病癥。
16.如權利要求15中所述的方法，其中所述的病理性病變?yōu)樘弁淳C合征、偏頭痛、泌尿生殖和/或胃腸疾病和/或癲癇病癥。
17.如權利要求16中所述的方法，其中所述的病理性病變?yōu)樘弁淳C合征。
18.如權利要求17中所述的方法，其中所述的疼痛綜合征為神經(jīng)性的或炎癥類型中的任一種。
19.如權利要求16中所述的方法，其中所述的病理性病變?yōu)槠^痛。
20.權利要求14-19中任意一項的方法，其中MAO酶為MAO-B同種型。
21.權利要求14-20中任意一項的方法，其中將所述(鹵代芐氧基)芐氨基-丙酰胺或其藥物上可接受的鹽與一種或多種其它的治療劑聯(lián)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及選擇的(R)－2－[(鹵代芐氧基)芐氨基]－丙酰胺類及其藥物上可接受的鹽在制備藥物中的應用，這些藥物具有作為鈉和/或鈣通道調(diào)節(jié)劑的選擇性活性且由此用于預防、緩解和治愈廣泛病理情況，包括疼痛、偏頭痛、periferal疾病、心血管疾病、影響所有身體系統(tǒng)的炎癥性過程、影響皮膚和相關組織的病癥、呼吸系統(tǒng)病癥、免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)病癥、胃腸、泌尿生殖、代謝和癲癇病癥，其中將上述機制描述為其病理性作用。
文檔編號A61K31/00GK101018546SQ200580030381
公開日2007年8月15日 申請日期2005年7月28日 優(yōu)先權日2004年9月10日
發(fā)明者E·巴爾班蒂, F·塔勒爾, C·卡恰, R·法列洛, P·薩爾瓦提 申請人:紐朗制藥有限公司