專利名稱：肥大細(xì)胞病的治療方法
肥大細(xì)胞病的治療方法本申請要求于2004年6月4日申請的美國臨時專利申請笫 60/576,947號的優(yōu)選權(quán)利益，該臨時申請結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及通過抑制PBK5來調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞活性的方法和化合 物。這樣的肥大細(xì)胞活性包括但不限于肥大細(xì)胞脫粒、肥大細(xì)胞遷 移、肥大細(xì)胞增殖、由肥大細(xì)胞表達(dá)并分泌細(xì)胞因子、趨化因子和 生長因子。因此，可以用本發(fā)明方法和化合物治療或預(yù)防與不需要 的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病。發(fā)明背景磷酸肌醇3-激酶(PI3K)是在很多細(xì)胞活性(包括細(xì)胞生長、重塑 和細(xì)胞凋亡)中發(fā)揮關(guān)鍵作用的信號傳導(dǎo)酶[Wymann和Pirola, 說oc/^m說op/2，爿cto. 1998, 1436: 127-150; Anderson等，J. C&m.,1999, 274: 9907-9910; Rameh等，丄倫/. C7z縫,1999, 274: 8347-8350; Cantrell, J Ce// 2001, 114: 1439-1445; Coelho和Leevers, J Ce〃2000, 113: 2927-2934; Vanhaesebroeck等，爿朋.Wev祝oc/ ew. 2001, 70: 535-602; Northcott等，0>c紐91: 360-369 (2002); Yang等,爿w </T/eaW C/廠c280: H2144-H2152 (2001); Komalavilas等，J 柳/尸—'o/. 91: 1819-1827 (2001)], PI3K還在許多其它細(xì)胞過程中 發(fā)揮作用，例如惡性轉(zhuǎn)化、生長因子信號傳導(dǎo)、炎癥和免疫。有關(guān) 綜述參見Rameh等，J.說o/. C/ ew., 274: 8347-8350 (1999)。這些不同 的活性至少部分歸因于PBK脂質(zhì)和蛋白激酶活性。對PI3-激酶催化 亞基的克隆，使得將該多基因家族根據(jù)其底物特異性、序列同源性 和調(diào)節(jié)，可以分成三大類。I類PI3-激酶是最廣泛深入研究的一類，
它含有兩個亞基，其中一個主要起調(diào)節(jié)/銜接子的作用(p85a、 p85f3、 p55Y或p101同工型)，而另一個維持該酶的催化作用(pllOa、 pll0卩、 pllOS或pll0y同工型)[Wymann和Pirola,出處同上；Anderson等，出 處同上；Rameh等，出處同上；Cantrell，出處同上；Coelho和Leevers, 出處同上；Vanhaesebroeck等，出處同上]。PI3-激酶的P110S同工型的鑒定參見Chantry等，J. Ao/. C/zem., 272: 19236-41 (1997)。發(fā)現(xiàn)了人pllOS同工型以局限于組織的方式表 達(dá)。它在淋巴細(xì)胞和淋巴組織中高水平表達(dá)。有關(guān)P110S同工型的細(xì) 節(jié)還可參見美國專利5,858,753、 5,822,910和5,985,589,所述專利結(jié) 合到本發(fā)明中作為參考。還可參見Vanhaesebroeck等，iVa" Jaj^ 94: 4330-5 (1997)以及國際專利申請WO 97/46688。PI3K至少部分通過催化將磷酸加到磷酸肌醇的肌醇環(huán)上而獲得， 細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)[Wymann等，出處同上]。這些磷酸化產(chǎn)物目標(biāo)之一 是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B (PKB或Akt)。 Akt隨后使若干下游目標(biāo) 磷酸化，包括Bcl-2家族成員Bad和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9 (caspase-9),由此抑制它們的促細(xì)胞凋亡功能[Datta等，Ce〃 91: 231-41 (1997); Cardone等，S"OTce 282: 1318-21 (1998)]。 Akt還已顯示能使 分叉頭型(forkhead)轉(zhuǎn)錄因子FKHR磷酸化[Tang等，丄A'o/. C/ em., 274: 16741-6 (1999)]。另外，細(xì)胞凋亡機(jī)器的許多其它成員以及轉(zhuǎn)錄 因子都含有Akt共有磷酸化位點[Datta等，出處同上]。Akt的磷酸化已被廣泛用作多種細(xì)胞類型(包括上皮細(xì)胞)中的I 類P13-激酶活性的間接測定法[Shiojima等，Cz>c. to., 90: 1243-1250 (2002); Kandel等，Ce〃 , 253: 210-229 (1999); Cantley等， &/e"ce 296: 1655-1657 (2002)]。 PI3K活性是各種細(xì)胞類型生長因子 介導(dǎo)的存活所需要的[Fantl等，爿肌說0c/2em. 62: 453-81 (1993); Datta等，Ge廳&Z)ev. 13:2905-27 (1999)]。已經(jīng)證明，非選擇性磚酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑LY294002和 渥曼青霉素(wortmannin)能使經(jīng)照射的內(nèi)皮細(xì)胞中腫瘤血管化的破壞
增強(qiáng)[Edwards等，Ca"cwi^y, 62: 4671-77 (2002)]，并且能部分抑制肥 大細(xì)胞脫粒[Tkaczyk等，5,》/. CT ew., 278: 48474-84 (2003)]。但是， LY294002和渥曼青霉素?zé)o法把I類PI3K中的四個成員區(qū)別開。例 如，渥曼青霉素對I類PI3K的各成員的ICw值范圍均為l-10nM。類 似地，LY294002對這些PI3K的各成員的ICs。值均約為1 [Fruman 等，爿朋.尺ev，說oc/ em. 67: 481-507 (1998)]。這些抑制弄J不僅對I類 PI3K不具備選擇性，而且還是DNA依賴性蛋白激酶、FRAP-mTOR、 平滑肌肌球蛋白輕鏈激酶和酪蛋白激酶2的有效抑制劑[Hartley等, Ce// 82: 849-56 (1995); Davies等，脅c/ze附.J. 351: 95-105 (2000); Brunn 等，5ikffi(9 J. 15: 5256-67 (1996)]。因為pll0a、 pll0f3、 pll0y和pllOS同工型由多種不同的細(xì)月包類 型差異表達(dá)，所以給予諸如LY294002和渥曼青霉素等非選擇性PI3K 抑制劑通常會影響可非靶向治療的細(xì)胞類型。因此，這些非選擇性 抑制劑的有效治療劑量臨床上是無法使用的，原因是非靶向的細(xì)胞 類型可能受到影響，尤其是當(dāng)將這些非選擇性抑制劑與其它免疫調(diào) 節(jié)療法聯(lián)合使用時。肥大細(xì)胞扮演著不同且重要的角色。例如，肥大細(xì)胞參與介導(dǎo) 先天免疫系統(tǒng)中對變應(yīng)原或寄生蟲或細(xì)菌感染反應(yīng)中所見到的一線 免疫應(yīng)答。肥大細(xì)胞還能激活和募集其它的炎性細(xì)胞，例如嗜中性 粒細(xì)胞和T細(xì)胞，從而產(chǎn)生適應(yīng)性免疫應(yīng)答所需的二線免疫應(yīng)答。 CD34+肥大細(xì)胞作為定型前體細(xì)胞在血液中循環(huán)，并在特定的組織部 位完全成熟。肥大細(xì)胞發(fā)育和成熟需要肥大細(xì)胞生長因子，亦稱干 細(xì)胞因子(SCF)、青灰因子(steel factor)或KIT配體[Gurish等，/ A/ed 194: Fl-F5 (2001)]。 KIT受體與其配體的相互作用促進(jìn)肥大細(xì)胞 的增殖和分化[F6ger等，^rc/ .爿〃ergy /m附w o/. 127: 110-14 (2002)]。肥大細(xì)胞通過抗原結(jié)合的IgE交聯(lián)細(xì)胞表面的高親和性FcsRJ IgE受體而被激活，在較小程度上通過IgG的FcyRI受體交聯(lián)而被激 活[Tkaczyk等，/"f爿rc/2 Z〃ergv /ww柳o/. 133: 305-15 (2004)]。通過 FcsRI的激活一般見于急性變態(tài)反應(yīng)和其它類型的超敏反應(yīng)中，導(dǎo)致 對其它免疫細(xì)胞的刺激和完全傳播的免疫應(yīng)答。肥大細(xì)胞中含有異染顆粒，它儲存有各種通過肥大細(xì)胞激活釋 放的炎癥介質(zhì)。這些介質(zhì)包括組胺和5-羥色胺；前列腺素D2;蛋 白水解酶，例如能破壞組織或酶解補(bǔ)體成分或凝固成分的類胰蛋白 酶；肝素或硫酸軟骨素，它們是抗凝藥；趨化因子，例如過敏毒素 反應(yīng)的嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(一種重要的嗜酸性粒細(xì)胞功能調(diào)節(jié)劑) 和嗜中性粒細(xì)胞趨化因子。在肥大細(xì)胞激活過程中，這些介質(zhì)被釋 放至細(xì)胞環(huán)境中，引起急性和速發(fā)型免疫應(yīng)答，例如血管通透性和 淋巴細(xì)胞募集。例如，類胰蛋白酶水平在1小時內(nèi)上升，在4-6小時 內(nèi)保持升高的水平，而組胺水平在約5分鐘達(dá)到峰值，在15分鐘內(nèi) 迅速下降。組胺的釋放引起血管擴(kuò)張，而導(dǎo)致體液滲漏至周圍組織 中，引起變態(tài)反應(yīng)的很多初級癥狀。組胺和其它介質(zhì)的釋放還能導(dǎo) 致呼吸道收縮、水肺、血管充血、變態(tài)反應(yīng)及哮喘的炎性細(xì)胞募集 特征[Djukanovic等，C7,"五x/ 爿〃ergy, 26增刊3: 44-51 (1996)]。在健康個體中，肥大細(xì)胞活性是必需且所需要的。然而，不需 要的肥大細(xì)胞活性或者正?；虍惓７蚀蠹?xì)胞的過度增殖可能是各種 疾病和/或其癥狀的一種病因。在這些情況下，從治療或預(yù)防觀點來 看，通常需要降低或消除肥大細(xì)胞的活性和/或增殖。例如，大量免 疫介導(dǎo)的疾病都與肥大細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子、趨化因子和其它因子 有關(guān)。細(xì)胞因子、趨化因子和其它因子將淋巴細(xì)胞等其它免疫細(xì)胞(包 括嗜中性粒細(xì)胞和T細(xì)胞)募集到炎癥部位。這可能會導(dǎo)致多種免疫 介導(dǎo)的疾病。例如，最近發(fā)現(xiàn)肥大細(xì)胞活性(例如脫粒)和類胰蛋白酶 蛋白定位于多發(fā)性硬化患者的腦脊液內(nèi)，多發(fā)性硬化是一種通常認(rèn) 為是由T細(xì)胞活性介導(dǎo)的自身免疫性疾病[Rozniecki等，爿朋A^wra/. 37: 63-66 (1995)]。另外，誘發(fā)產(chǎn)生多發(fā)性硬化的實驗?zāi)Ｐ偷姆蚀蠹?xì) 胞缺陷型小鼠(W/Wv),證明MS樣癥狀的延遲產(chǎn)生[Secor等，丄Exp. <formula>formula see original document page 29</formula>類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種自身免疫性疾病，其特征為關(guān)節(jié)的慢性 炎癥和在關(guān)節(jié)的滑液中存在炎性細(xì)胞，從而導(dǎo)致疼痛和衰弱性疾病。 將抗體灌輸至細(xì)胞質(zhì)酶后，缺乏肥大細(xì)胞的小鼠顯示對誘發(fā)關(guān)節(jié)炎 樣癥狀的抗性[Lee等，S"'e"ce 297: 1689-1693 (2002)]。肥大細(xì)胞聚集 在膠原誘發(fā)關(guān)節(jié)炎和該病過程中脫粒所影響的小鼠肢體[Woolley等, 」rt/m'to Wes. 2: 65-74 (2000)],由此表明肥大細(xì)胞在介導(dǎo)炎癥并將另 外的細(xì)胞募集至類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)中發(fā)揮作用。肥大細(xì)胞群體大多數(shù)都存在于皮膚上。業(yè)已證明，大皰性類天 皰瘡， 一種皮膚中具有抗細(xì)胞連接蛋白的自身抗體的自身免疫性疾 病，依賴于肥大細(xì)胞活化[Chen等，J /"ve" 108: 1151-58 (2001)]。肥大細(xì)胞缺陷型w/wv小鼠不會發(fā)生大皰性類天皰瘠，雖然在皮膚中存在類似于正常小鼠的自身抗體和補(bǔ)體蛋白，但是WAT小鼠缺乏嗜 中性粒細(xì)胞募集至皮膚。另外，有證據(jù)表明，在大皰性類天皰癡患 者中檢測到肥大細(xì)胞介質(zhì)[Wintroub等，Wew/. 298: 417-21(2001)]。認(rèn)為肥大細(xì)胞所致的其它免疫性疾病包括斯耶格倫綜合征 (Sjogren's syndrome) [Kontti腦等，朋ew願to/19: 141-7 (2000)]、 慢性蕁麻療[Napoli等,C^r爿〃ergyv4對/w^i ep. 1: 329-36 (2001)]、曱 狀腺眼病[Ludgate等，C//"五xp /mmwwo/. 2002 127: 193-8 (2002)〗、血 管炎[Kiely等，J /mm朋o/. 159: 5100-6 (1997)]和腹膜炎[Malavyn等， A^mm381: 77-80 (1996)]。胞增生病。肥大細(xì)胞增生病包括以在各種組織中肥大細(xì)胞增殖和聚 集為特征的不同類型的臨床疾病，所述組織最常見的是皮膚，但也 可以是骨骼系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、胃腸道系統(tǒng)、心肺系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系 統(tǒng)中的組織。肥大細(xì)胞增生病的特征為肥大細(xì)胞過度增殖，以可預(yù) 見的模式分布于整個皮膚(例如皮膚肥大細(xì)胞增生病和色素性蕁麻
疹)、骨髓、胃腸道、淋巴結(jié)、肝臟和脾臟[Brockow等，Cwr. Op/".. 爿〃e^y C7z力./wm柳o/. 1: 449-54 (2001)]。肥大細(xì)胞增生病分為家族性肥大細(xì)胞增生病或散發(fā)性肥大細(xì)胞 增生病，后者進(jìn)一步被細(xì)分為皮膚肥大細(xì)胞增生病或系統(tǒng)性肥大細(xì) 胞增生病。系統(tǒng)性肥大細(xì)胞增生病還分為無痛性(慢性)肥大細(xì)胞增生 病和攻擊性肥大細(xì)胞增生病，以及肥大細(xì)胞性白血病。肥大細(xì)胞增 生病的類型還在有相關(guān)血液疾病(AHD)時出現(xiàn)(Brockow等，出處同 上)。皮膚肥大細(xì)胞增生病(CM)有 一般臨床病變和組織學(xué)皮膚病變， 但卻不存在與系統(tǒng)有關(guān)的確定體征(判別標(biāo)準(zhǔn))。大多數(shù)CM患者為兒 童，并呈現(xiàn)斑丘滲樣皮膚肥大細(xì)胞增生病(例如色素性蕁麻滲，UP)。 其它不常見的CM形式為彌漫性皮膚肥大細(xì)胞增生病(DCM)和皮膚 月巴大細(xì)力包瘤。系統(tǒng)性肥大細(xì)胞增生病(SM)常見于成人，并通過骨髓(幾乎廣泛 表達(dá)，主要的診斷指標(biāo))或其它真皮外器官的多病灶性組織病變以及 系統(tǒng)性疾病(SM指標(biāo))的細(xì)胞學(xué)和生物化學(xué)跡象(次要指標(biāo))來確診。 攻擊性系統(tǒng)性肥大細(xì)胞增生病以器官功能削弱為特征，原因是骨髓、 肝臟、脾臟、胃腸道或骨骼系統(tǒng)被病理性肥大細(xì)胞(MC)浸潤。肥大 細(xì)胞性白血病是"高級"白血病，通過骨髓涂片(2 20%)和外周血中 MC數(shù)量的增加、焱乏皮膚病變、多器官衰竭和生存期縮短等確診。 在典型病例中，循環(huán)MC數(shù)量占白細(xì)胞的10%以上(典型MCL形式)。 肥大細(xì)胞肉瘤是由非典型MC構(gòu)成的單病灶肺瘤，并呈現(xiàn)出破壞性 生長而不累及(初級)系統(tǒng)。這種高級惡性MC病在真皮外器官(真皮 外肥大細(xì)胞瘤)或皮膚上區(qū)別于局限性良性肥大細(xì)胞瘤。另外，導(dǎo)致肥大細(xì)胞過度增殖的KIT受體中的突變已在患有以 下疾病的患者中發(fā)現(xiàn)急性髓細(xì)胞性白血病(AML) [Beghini等，C朋cer C,g潔f. 119: 26-31 (2000)]、慢性骨髓性白血病[Cairoli等, //函to/ J. 5: 273-5 (2004)]、慢性骨髓單核細(xì)胞性白血病[Sotlar等, 丄e獻(xiàn)i^y. 26: 979-84 (2002)]、生殖細(xì)胞腫瘤[Sakuma等，Ca"cerSc/. 94:486-91 (2003)]和胃腸基質(zhì)腫瘤(GIST) [Heinrich等，丄C7,". 20: 1692-1703 (2002)]。雖然已研制出治療與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病(例如變 態(tài)反應(yīng)和譯喘)的某些具體方法，但肥大細(xì)胞相關(guān)疾病的治療方案一 般都采用為其它增殖性疾病或免疫性疾病所研制的非特異性治療方 案(例如組胺受體阻斷劑、前列腺素阻斷劑、類固醇)，從而導(dǎo)致不完 全的治療、非有效的治療或者引起多種免疫抑制副作用的治療。另外，可用于治療與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病的很多 療法的明顯缺陷，是對治療所靶向的肥大細(xì)胞和其它類型細(xì)胞中很 多細(xì)胞酪氨酸激酶的非特異性抑制。例如，最初研制的治療肥大細(xì) 胞增殖性疾病的兩種激酶抑制劑療法是抑制諸如以下的激酶血小 板衍生生長因子受體(PDGF-R)、血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)或 Bcr/Abl突變體。這些潛在的療法不能對所有類型的肥大細(xì)胞增生病 有效。因此，目前本領(lǐng)域存在對研制更特異性地靶向參與介導(dǎo)肥大 細(xì)胞活性的激酶的有效療法的需求。因此， 一個重要且有意義的目的是開發(fā)和研制能治療和預(yù)防與的方法，并提供易于臨床操作和延續(xù)患者依從性的療法。本發(fā)明正 是基于此目的和其它需求。發(fā)明概述本發(fā)明提供有效治療或預(yù)防至少部分與不需要的肥大細(xì)胞活性 有關(guān)或由其引起的疾病和/或疾病癥狀的方法。本發(fā)明的方法特別適 用于治療或預(yù)防由肥大細(xì)胞上免疫球蛋白受體交聯(lián)介導(dǎo)的疾病(或與 該病有關(guān)的癥4犬)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種抑制肥大細(xì)胞活性的方法， 該方法包括給予個體磷酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑，其用 量有效抑制肥大細(xì)胞活性。 一方面，被抑制的肥大細(xì)胞活性是肥大
細(xì)胞遷移、肥大細(xì)胞增殖、肥大細(xì)胞脫?；蛘哂煞蚀蠹?xì)胞表達(dá)或分 泌細(xì)胞因子、趨化因子或生長因子。另一方面，所述細(xì)胞因子是TNF-a。在一個相關(guān)方面，所述細(xì)胞因子是IL-6。在一個相關(guān)方面， 被抑制的趨化因子是嗜伊紅粒細(xì)胞趨化因子(eotaxin)、 MIP-la、 MIP-113 、 MDC-1 、 MCP-1或淋巴細(xì)胞趨化因子(lymphotactin)。在一個相關(guān)實施方案中，本發(fā)明提供在與不需要的肥大細(xì)胞活 性有關(guān)的疾病中降低或防止淋巴細(xì)胞浸潤到炎癥部位的方法，該方 法包括下述步驟給予個體磷酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑， 其用量有效降低或防止淋巴細(xì)胞浸潤到所述炎癥部位，并且有效降 低所述個體的肥大細(xì)胞引起的淋巴細(xì)胞募集信號傳導(dǎo)。與不需要的 肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病，是任何不需要的肥大細(xì)胞活性的潛在作 用？ 1起或者與之相關(guān)的任何疾病。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供治療或預(yù)防個體的與不需要 的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病的方法，該方法包括下述步驟給予磷 酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑，其用量有效治療或預(yù)防與不 需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病。 一方面，為了治療或預(yù)防與不需 要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病，選擇性PI3KS抑制劑能抑制肥大細(xì)胞 活性。這樣的肥大細(xì)胞活性的實例包括肥大細(xì)胞遷移、肥大細(xì)胞增 殖、肥大細(xì)胞脫?；蛘哂煞蚀蠹?xì)胞表達(dá)或分泌細(xì)胞因子、趨化因子 或生長因子。聯(lián)介導(dǎo)的疾病(或與疾病有關(guān)的癥狀)。"免疫球蛋白交聯(lián)介導(dǎo)的"或 "Ig介導(dǎo)的"是指Ig與肥大細(xì)胞上的受體結(jié)合后引起或加重與不需 要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病的能力。激活肥大細(xì)胞的免疫球蛋白 包括IgG和IgE。在一個實施方案中，與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān) 的疾病是IgE介導(dǎo)的疾病。在另一個實施方案中，所述疾病是IgG 介導(dǎo)的疾病。在再一個實施方案中，所述疾病是由細(xì)胞因子、趨化 因子或其它生長因子等其它刺激物所介導(dǎo)的。哮喘、變態(tài)反應(yīng)或自身免疫性疾病。一方面，變態(tài)反應(yīng)是I型超敏反應(yīng)、變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜 炎、特應(yīng)性皮炎或變應(yīng)性哮喘。I型超敏反應(yīng)，是抗原(變應(yīng)原)與結(jié) 合于組織肥大細(xì)胞和血液嗜堿性粒細(xì)胞上的膜受體的特異性IgE抗體 相結(jié)合的反應(yīng)。所述抗原-抗體反應(yīng)引起有效的血管活性和炎癥介質(zhì) (例如組胺、類胰蛋白酶、白三烯和前列腺素)的快速釋放和促炎性細(xì)胞因子(例如白介素-4和白介素-13)的稍后釋放。所述介質(zhì)產(chǎn)生血管舒張、毛細(xì)管通透性增強(qiáng)、腺體分泌過多、平滑肌痙攣和其它炎性 細(xì)胞的組織浸潤。I型超敏性疾病的實例包括變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性哮喘、某些蕁麻滲和GI食物反應(yīng)癥狀和全身性過敏反應(yīng)。另一方面，所述疾病是自身免疫性疾病。本發(fā)明涉及的自身免 疫性疾病可以是多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、大皰性類天皰癡、 斯耶格倫綜合征、慢性蕁麻滲、曱狀腺眼病、血管炎和腹膜炎。本發(fā)明提供一種給予PI3KS選擇性抑制劑的本發(fā)明方法，所述 抑制劑的用量有效抑制所述肥大細(xì)胞中的Akt磷酸化。術(shù)語"選擇性PI3KS抑制劑"及其本發(fā)明中所用的諸如"PI3KS 選擇性抑制劑"和"PI3KS的選擇性抑制劑"等表述形式，是指能比 PI3KS家族的其它同工酶更有效地抑制PI3KS同工酶的化合物。"選 擇性PI3K5抑制劑"化合物應(yīng)理解為對PI3KS的選擇性要比常規(guī)和一 般稱為PI3KS抑制劑的化合物(例如渥曼青霉素或LY294002)的選擇 性更高。反過來說，渥曼青霉素和LY294002被認(rèn)為是"非選擇性PI3KS 抑制劑"?；衔镒鳛槊富钚?或其它生物活性)抑制劑的相對功效，可通過 測定各化合物抑制預(yù)定范圍的活性時的濃度，然后對比結(jié)果來確定。 通常，優(yōu)選的測定為在生化試驗中抑制50%活性的濃度，即50%抑 制濃度或"IC5。"。通過應(yīng)用本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)，可以測得IC5。
值。 一般來說，通過測量所研究的抑制劑濃度存在下的給定酶活性， 可以確定IC,然后，將實驗獲得的酶活性值對所用抑制劑濃度作圖。義為ICso值。類似地，可通過活性的適當(dāng)確定，定義其它抑制濃度。例如，在某些情況下，可能需要建立90。/。抑制濃度，即IQ。，等等。因此，"選擇性PI3KS抑制劑"可以理解為是指對PI3KS具有50% 抑制濃度(ICs。)的化合物，該ICsJ直比任何或所有的其它I類PI3K家 族成員的ICso值至少低10倍，另一方面至少低20倍，再一方面至 少低30倍。在本發(fā)明一個可選擇的實施方案中，術(shù)語選擇性PBKS 抑制劑可以理解為是指對PI3KS具有IC5Q的化合物，該ICs。值比任何 或所有的其它I類PI3K家族成員的ICs。值至少低50倍，另 一方面至 少低100倍，再一方面至少低200倍，又一方面至少低500倍。在 另一個實施方案中，術(shù)語選擇性PI3KS抑制劑是指負(fù)調(diào)節(jié)pllOS表達(dá) 的寡核普酸，與任何或所有的其它I類PI3K家族催化亞基(即pllOot、 pllOp和pllO力相比，它使pllOS表達(dá)下調(diào)至少10倍，另一方面至少 20倍，再一方面至少30倍。如上所述，可以給予個體適量的PI3KS 選擇性抑制劑，致使所述抑制劑能保留其PI3KS選擇性。 .范圍在本文中可表示為"大約"或"近似" 一個具體值和/或至 "大約"或"近似"另一個具體值。當(dāng)這樣表示范圍時，另一個實 施方案包括一個具體值和/或至另一個具體值。同樣，當(dāng)各數(shù)值用近 似值表示并使用諸如"約"或"至少約"等先行詞時，應(yīng)清楚的是 具體值構(gòu)成另一個實施方案?？梢允褂萌魏芜x擇性PBKS活性抑制劑，包括但不限于小分子 抑制劑、肽抑制劑、非肽抑制劑、天然抑制劑和合成抑制劑。合適 的PI3KS選擇性抑制劑在Sadhu等的美國專利公布第2002/161014號 中已有記載，該專利申請的全部公開內(nèi)容結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。另一方面，可以使用任何類型的能選擇性負(fù)調(diào)節(jié)pllOS表達(dá)(即 比其它PI3K家族的同工酶更有效)并具有可接受的藥理性質(zhì)的化合
物，來作為本發(fā)明方法中的選擇性P13KS抑制劑。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供通過反義寡核苷酸與編碼pll05的信使RNA (mRNA)雜交來負(fù)調(diào)節(jié)pllOS表達(dá)的應(yīng)用。 一方面，本發(fā)明方法中可 以使用降低pl IOS表達(dá)的寡核苷酸?？梢詫⒈景l(fā)明方法應(yīng)用于體內(nèi)(!'" v/vo)或離體(e;c v/vo)細(xì)胞群 體。"體內(nèi)"是指有生命的個體內(nèi)，例如動物或人體內(nèi)。在該內(nèi)容 中，本發(fā)明方法可以治療性用于個體，如下所述。該方法也可以預(yù) 防性使用。"離體"指有生命的個體外。離體細(xì)胞群體的實例包括體外(w v"ra)細(xì)胞培養(yǎng)物和生物學(xué)樣本，包括但不限于從個體獲得的體液或 組織樣本。這些樣本可根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法獲得。生物流體樣本 的實例包括血液、腦脊液和唾液。組織樣本的實例包括腫瘤樣本和 組織活檢樣本。在該內(nèi)容中，本發(fā)明可用于各種目的，包括治療目、 的和實驗?zāi)康?。例如，本發(fā)明可以離體使用，以確定對于給定適應(yīng) 癥、細(xì)胞類型、個體和其它參數(shù)，PI3KS選擇性抑制劑的最佳給藥方 案和/或劑量?？蓪倪@些應(yīng)用中收集的信息用于實驗?zāi)康?，或者?于臨床，以設(shè)計出供體內(nèi)治療用的方案?？蛇m于本發(fā)明的其它離體 應(yīng)用在下文中有描述，或者對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。本文所用"肥大細(xì)胞活性"是指由肥大細(xì)胞所執(zhí)行的生物活性，些活性的實例包括細(xì)胞遷移、增殖、激活、脫粒，趨化因子、細(xì)胞 因子或其它生長因子的表達(dá)或分泌，以及信號傳導(dǎo)途徑的調(diào)節(jié)，例 如AKT磷酸化的調(diào)節(jié)。另外，本文中可以使用"肥大細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)"。本文所用肥 大細(xì)胞活性的"調(diào)節(jié)"，是指在給予選擇性PI3K5抑制劑后，對肥大 細(xì)胞的上述活性中的其中一種活性的降低、抑制、防止、促進(jìn)或增 強(qiáng)作用。選擇性PI3KS抑制劑可抑制酶本身，可抑制PI3K5酶的任何 下游信號傳導(dǎo)作用，或者抑制肥大細(xì)胞的任何進(jìn)一步的下游活性。 它還可發(fā)揮預(yù)防性作用，以防止上述具體的肥大細(xì)胞活性，例如脫 ?；蚣?xì)胞遷移。抑制劑可在降低、抑制或防止一種肥大細(xì)胞活性過 程中，促進(jìn)或增強(qiáng)另一種肥大細(xì)胞活性。例如，可以增加第一種細(xì) 胞因子、趨化因子或生長因子的產(chǎn)生，同時降低或抑制不同的笫二 種次級細(xì)胞因子、趨化因子或生長因子。"不需要的肥大細(xì)胞活性"是指偏離正常、正確或預(yù)期過程的 肥大細(xì)胞活性。例如，不需要的肥大細(xì)胞脫?？梢园ㄔ趯€體引 起超敏反應(yīng)的變態(tài)反應(yīng)過程中的脫粒，而不需要的遷移可以包括肥 大細(xì)胞運動到或者移出具有不合需要的生物作用的組織部位。不需 要的肥大細(xì)胞增殖可以包括由不適當(dāng)?shù)母咚郊?xì)胞分裂、不適當(dāng)?shù)?低水平細(xì)胞凋亡或者二者兼有而介導(dǎo)或引起的細(xì)胞增殖。"抑制不需要的肥大細(xì)胞活性"是指減慢不需要的肥大細(xì)胞活 性發(fā)生的速率或者使其停止。這可由降低肥大細(xì)胞受體激活速率、 降低炎癥介質(zhì)或生長因子釋放速率、降低細(xì)胞復(fù)制速率或者增加細(xì) 胞死亡速率來實現(xiàn)。細(xì)胞死亡可由任何機(jī)制引發(fā)，包括細(xì)胞凋亡和 有絲分裂崩潰。使用本發(fā)明方法可部分或完全抑制不需要的肥大細(xì) 胞活性。"預(yù)防不需要的肥大細(xì)胞活性"是指本發(fā)明的方法可在出現(xiàn)不 需要的肥大細(xì)胞活性前預(yù)防性地用于防止或抑制該活性，或者防止 或抑制該活性的再次出現(xiàn)。因此，在所有的實施方案中，在不需要 的細(xì)胞活性未確定或者不需要的細(xì)胞活性未進(jìn)行時，但分別推測或 預(yù)計要出現(xiàn)不需要的細(xì)胞活性情況下，可以體內(nèi)或離體使用本發(fā)明。 另外，為防止或抑制不需要的肥大細(xì)胞活性的再次出現(xiàn)，本發(fā)明還 可用在不需要的肥大細(xì)胞活性先前已被治療的所有情況下。本文所用"治療有效量"或者"有效量"是指有效抑制或逆轉(zhuǎn) 所治療的個體存在的癥狀的發(fā)展、或者緩解存在的癥狀、延長所治 療的個體的生存期或治愈所治療的個體的量。本文所用"治療指數(shù)"是毒性或不需要的作用與治療效果或所
需效果之間的劑量比，用如下定義的LD5Q/ED5。比值表示。本文所用 治療指數(shù)的增加，是指達(dá)到所需效果所必需的治療量降低，或者所 給予治療藥的療效提高。應(yīng)清楚的是，本發(fā)明的治療方法可用于人用藥和獸用藥的領(lǐng)域。 因此，所治療的個體可以是哺乳動物，優(yōu)選人，或者其它動物。對 于獸醫(yī)用途，個體可以包括但不限于農(nóng)場動物，包括牛、羊、豬、馬和山羊；陪伴動物，例如狗和貓；野外和/或動物園動物；實-瞼室 動物，包括小鼠、大鼠、家兔、豚鼠和倉鼠；家禽，例如雞、火雞、 鴨和鵝。本發(fā)明還提供按多劑量給予磷酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑 制劑的方法。多劑量包括所述抑制劑或其它藥物不止給予一個劑量。 本發(fā)明還提供給予選擇性PI3KS抑制劑，其給藥方案中包括共同給予 一種或多種另外的治療化合物， 一起用于治療與不需要的肥大細(xì)胞 活性有關(guān)的疾病，所述另外的治療化合物包括至少 一種免疫調(diào)節(jié)劑 或其它用于治療或預(yù)防所述疾病或癥狀的藥物。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種降低或防止患有與不需要包括給予所述個體治療有效量的聯(lián)合療法，該聯(lián)合療法包括應(yīng)用磷 酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明包括可 將所述聯(lián)合藥物按單一組合物形式給藥，或者將各藥物(例如所述抑 制劑和免疫調(diào)節(jié)劑)作為獨立的組合物形式給藥。必要時，本發(fā)明還 包括將各藥物按多劑量形式給藥。在一個相關(guān)實施方案中，本發(fā)明提供一種降低或防止患有與不 需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病的個體的淋巴細(xì)胞浸潤到炎癥部位 的方法，該方法包括給予所述個體治療有效量的聯(lián)合療法，該聯(lián)合 療法包括應(yīng)用磷酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑和免疫調(diào)節(jié) 劑。本發(fā)明所提及的免疫調(diào)節(jié)劑包括糖皮質(zhì)激素或或皮質(zhì)類固醇、
免疫抑制藥、抗組胺藥、氨基水楊酸鹽、類固醇激素、非甾體抗炎藥(NSAID)、擬交感神經(jīng)藥和鎮(zhèn)痛藥。糖皮質(zhì)激素的實例選自可的松、地塞米松、氬化可的松、甲潑尼龍、潑尼松龍、潑尼松和布地奈德。NSAID的實例選自布洛芬、萘普生、萘普生鈉、Cox-2抑制劑，例 如Vioxx (羅非考昔)和Celebrex (塞來考昔)和水楊酸鹽。合適的鎮(zhèn) 痛藥包括對乙酰氨基酚、羥考酮、曲馬多或鹽酸丙氧芬。免疫抑制 藥的實例選自硫唑。票呤(6-巰基嘌呤(6-MP))、環(huán)磷酰胺、環(huán)孢菌素、 曱氨蝶呤或青霉胺。還包括Xolair (奧馬佐單抗)、白三烯拮抗劑或 其它變態(tài)反應(yīng)或哮喘中的常用藥物。因子、淋巴因子或其它造血因子、溶血栓或抗血栓因子或者抗炎藥 物一起給藥。更具體地講但并不限于此，本發(fā)明方法可以包括將抑制劑與以 下的一種或多種藥物一起給藥TNF、 IL-1、 IL-2、 IL-3、 IL-4、 IL-5、 IL-6、 IL-7、 IL曙8、 IL誦9、 IL-IO、 IL-ll、 IL畫12、 IL-13、 IL畫14、 IL-15、 IL-16、 IL-17、 IL畫18、 IFN、 G-CSF、 Meg-CSF、 GM-CSF、血小板生 成素、干細(xì)胞因子和紅細(xì)胞生成素。本發(fā)明的藥物組合物還可以包 含其它已知的血管生成素，例如Ang-l、 Ang-2、 Ang-4、 Ang-Y和/ 或人血管生成素樣多肽，和/或血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。本發(fā)明藥 物組合物中所用的生長因子包括血管生成素、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-1、骨 形態(tài)發(fā)生蛋白-2、*骨形態(tài)發(fā)生蛋白-3、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4、骨形態(tài)發(fā) 生蛋白-5、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-6、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-8、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-10、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-11、 骨形態(tài)發(fā)生蛋白-12、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-13、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-14、骨 形態(tài)發(fā)生蛋白-15、骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體IA、骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體IB、 腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子受體oc、 細(xì)胞因子誘發(fā)的嗜中性粒細(xì)胞趨化因子1、細(xì)胞因子誘發(fā)的嗜中性粒 細(xì)胞趨化因子2a、細(xì)胞因子誘發(fā)的嗜中性粒細(xì)胞趨化因子2(3、 p內(nèi)
皮細(xì)胞生長因子、內(nèi)皮素1、表皮生長因子、上皮衍生嗜中性粒細(xì)胞 引誘劑、成纖維細(xì)胞生長因子4、成纖維細(xì)胞生長因子5、成纖維細(xì)胞生長因子6、成纖維細(xì)胞生長因子7、成纖維細(xì)胞生長因子8、成 纖維細(xì)胞生長因子8b、成纖維細(xì)胞生長因子8c、成纖維細(xì)胞生長因 子9、成纖維細(xì)胞生長因子10、酸性成纖維細(xì)胞生長因子、堿性成 纖維細(xì)胞生長因子、膠質(zhì)細(xì)胞系衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子受體al、膠質(zhì)細(xì) 胞系衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子受體a2、生長相關(guān)蛋白、生長相關(guān)蛋白a、生 長相關(guān)蛋白P、生長相關(guān)蛋白y、肝素結(jié)合的表皮生長因子、肝細(xì)胞生 長因子、肝細(xì)胞生長因子受體、胰島素樣生長因子I、胰島素樣生長 因子受體、胰島素樣生長因子II、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白、角質(zhì) 形成細(xì)胞生長因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受體a、神經(jīng) 生長因子、神經(jīng)生長因子受體、神經(jīng)營養(yǎng)素-3、神經(jīng)營養(yǎng)素-4、胎盤 生長因子、胎盤生長因子2、血小板衍生的內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、血小 板衍生生長因子、血小板衍生生長因子A鏈、血小板衍生生長因子 AA、血小板衍生生長因子AB、血小板衍生生長因子B鏈、血小板 衍生生長因子BB、血小板衍生生長因子受體a、血小板衍生生長因 子受體P、前B細(xì)胞生長刺激因子、干細(xì)胞因子、干細(xì)胞因子受體、 轉(zhuǎn)化生長因子a、轉(zhuǎn)化生長因子p、轉(zhuǎn)化生長因子pi、轉(zhuǎn)化生長因子 P1.2、轉(zhuǎn)化生長因子P2、轉(zhuǎn)化生長因子p3、轉(zhuǎn)化生長因子J35、潛在轉(zhuǎn) 化生長因子P1、轉(zhuǎn)化生長因子(3結(jié)合蛋白I、轉(zhuǎn)化生長因子(3結(jié)合蛋白 II、轉(zhuǎn)化生長因子P結(jié)合蛋白III、 I型腫瘤壞死因子受體、II型胂瘤壞 死因子受體、尿激酶型纖溶酶原激活物受體、血管內(nèi)皮生長因子和 嵌合蛋白以及它們的生物學(xué)或免疫學(xué)活性片段?？蓪⒅委熤兴玫拿庖哒{(diào)節(jié)劑按多劑量給藥。本發(fā)明設(shè)計可根 據(jù)本發(fā)明聯(lián)合療法，將所述各藥物按低劑量給藥，即低于各藥物單 獨給藥或治療的臨床情況下常規(guī)使用的劑量，原因是本發(fā)明抑制劑 的PI3KS選擇性特性能提高本發(fā)明聯(lián)合療法的治療指數(shù)(即特異性)。 降低給予個體的藥物或療法的劑量，能減小與高劑量有關(guān)的副作用
的發(fā)生率，由此可以改善所進(jìn)行治療的患者的生活質(zhì)量。其它益處 包括改善患者依從性，降低為治療副作用所需的高額住院費用。另 外，本發(fā)明方法特異性的優(yōu)點在于它們比非選擇性抑制劑(例如LY294002和渥曼青霉素)，允許以更高劑量的PI3K5選擇性抑制劑 進(jìn)行治療，并且還使本發(fā)明方法的治療功效最大化。另 一 方面，本發(fā)明方法可以包括將抑制劑與 一 種或多種其它藥 物一起用藥或者在治療中同時使用，所述其它藥物可以增強(qiáng)該抑制 劑的活性或者順應(yīng)其活性。這些其它要素和/或藥物可與本發(fā)明抑制 劑產(chǎn)生協(xié)同作用或者使副作用最小化。本發(fā)明方法涉及具有下式(I)結(jié)構(gòu)的選擇性PI3KS抑制劑化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物的用途其中A是任選取代的含有至少兩個氮原子的單環(huán)或雙環(huán)體系， 并且該體系中的至少一個環(huán)為芳環(huán)；X選自C(Rb)2、 CH2CHRb和O^C(Rb);Y不存在，或者選自S、 S0、 S02、 NH、 O、 C(=0)、 0C(=0)、 C(=0)0和NHC(=0)CH2S;R1和R2獨立選自氬、C,.s烷基、芳基、雜芳基、鹵素、NHC(=0)CV3 亞烷基N(Ra)2、 N02、 0Ra、 CF3、 OCF3、 N(Ra)2、 CN、 0C(=0)Ra、 C(=0)Ra、 C(=0)0Ra、芳基ORb、 Het、 NRaC(0)CV3亞烷基C(=0)0Ra、 芳基OCw亞烷基N(Ra)2、芳基0C(=0)Ra、 CM亞烷基C(=0)0Ra、 0&.4 亞烷基C(=0)0Ra 、 CM亞烷基OCM亞烷基C(=0)0Ra 、 C(=0)NRaS02Ra、 CM亞烷基N(Ra)2、 C2.6亞烯基N(Ra)2、 Q^O)NRaCw 亞烷基ORa、 C(-0)NRaCw亞烷基Het、 OC^亞烷基N(Ra)2、 OCV4 亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、 OCM亞烷基Het、 OC^亞烷基ORa、 OC2_4
亞烷基NRaC(=0)ORa 、 NRaCM亞烷基N(Ra)2 、 NRaC(=0)Ra 、 NRaC(=0)N(Ra)2、 N(S02CM烷基)2、 NRa(S02CM烷基)、S02N(Ra)2、 OS02CF3、 亞烷基芳基、CM亞烷基Het、 亞烷基ORb、 CV3 亞烷基N(R^、 C(=0)N(Ra)2、 NHC(=0)CV3亞烷基芳基、&_8環(huán)烷基、 C3.8雜環(huán)烷基、芳基OCw亞烷基N(Ra)2、芳基OC(=0)Rb、 NHC(M3)Cl3 亞烷基C3.8雜環(huán)烷基、NHC—0)Cw亞烷基Het、 OCM亞烷基OCM 亞烷基C(=0)ORb、 C(0)C,.4亞烷基Het和NHC(=0)鹵代C,.6烷基；或者R1和R"結(jié)合在一起形成5元或6元環(huán)中3個或4個原子的 亞烷基或亞烯基鏈部分，該5元或6元環(huán)任選含有至少一個雜原子；Rs選自任選取代的以下基團(tuán)氫；Cw烷基；C^環(huán)烷基；C3.8 雜環(huán)烷基；CM亞烷基環(huán)烷基；02.6烯基；CN3亞烷基芳基；芳基CV3 烷基；C(=0)Ra;芳基；雜芳基；C(=0)0Ra; C(=0)N(Ra)2; C(=S)N(Ra)2; S02Ra; S02N(Ra)2; S(=0)Ra; S(=0)N(Ra)2; C(=0)NRaCM亞烷基ORa; C^O)NRaC,.4亞烷基Het; C(=0)CV4亞烷基芳基；C(=0)CM亞烷基 雜芳基；任選被一個或多個以下基團(tuán)取代的Cy亞烷基芳基卣素、 S02N(Ra)2、 N(Ra)2、 C(=0)ORa、 NRaS02CF3、 CN、 N02、 C(=0)Ra、 ORa、 CM亞烷基N(Ra)2和OCM亞烷基N(Ra)2; CM亞烷基雜芳基； CM亞烷基Het; CM亞烷基C(=0)CV4亞烷基芳基;CM亞烷基C(=0)CM 亞烷基雜芳基；CM亞烷基C(=0)Het; CM亞烷基C(=0)N(Ra)2; CM 亞烷基ORa; CM亞烷基NRaC(=0)Ra; CM亞烷基OCM亞烷基ORa; CM亞烷基N(Ra)2; Cm亞烷基C(=0)ORa;和CM亞烷基OCM亞烷 基C(=0)ORa;Ra選自氫、C^烷基、C^環(huán)烷基、C3，8雜環(huán)烷基、CV3亞烷基 N(Re)2、芳基、芳基Cw烷基、Cw亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基Cw烷基和Cw亞烷基雜芳基； '或者兩個Ra結(jié)合在一起形成任選含有至少一個雜原子的5元環(huán)或6元環(huán)；Rb選自氫、&.6烷基、雜Cw烷基、Cw亞烷基雜CV3烷基、芳基雜Cw烷基、芳基、雜芳基、芳基Cw烷基、雜芳基Cw烷基、cv3亞烷基芳基和C,.3亞烷基雜芳基；Re選自氫、C^6烷基、(:3.8環(huán)烷基、芳基和雜芳基；和Het是5元或6元飽和或部分或全部不飽和的雜環(huán)，該雜環(huán)含有至少一個選自氧、氮和硫的雜原子，并且任選被CM烷基或者QH3)ORa取代。本文所用術(shù)語"烷基"定義為含有指定碳原子數(shù)的直鏈和支鏈 烴基， 一般為曱基、乙基及直鏈和支鏈的丙基和丁基。所述烴基可 最多含有16個碳原子，例如1-8個碳原子。術(shù)語"烷基，，包括"橋 連烷基"，即Q-C^雙環(huán)或多環(huán)烴基，例如降冰片基、金剛烷基、 雙環(huán)[2.2,2]辛基、雙環(huán)[2.2.1]庚基、雙環(huán)[3.2.1]辛基或十氫萘基。術(shù) 語"環(huán)烷基"定義為環(huán)狀C3-Q烴基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)己基 和環(huán)戊基。術(shù)語"烯基"的定義同"烷基"，只是其中含有碳-碳雙鍵。"環(huán) 烯基"的定義類似于環(huán)烷基，只是環(huán)中存在碳-碳雙鍵。術(shù)語"亞烷基"定義為具有取代基的烷基。例如，術(shù)語"C"3亞 烷基芳基"是指含有l(wèi)-3個碳原子并被芳基取代的烷基。術(shù)語"雜Cw烷基"定義為還含有選自0、 S和NRa的雜原子的 Cw烷基。例如，-CH2OCH3或-CH2CH2SCH3。術(shù)語"芳基雜CV3烷 基"是指具有雜Cw烷基取代基的芳基。術(shù)語"卣代"或"囟素"在本文中定義為包括氟、溴、氯和碘。術(shù)語"芳基"單用或聯(lián)用時，在本文中定義為單環(huán)或多環(huán)芳族 基團(tuán)，例如苯基或萘基。除非另有說明，"芳基"可以未被取代或 者被一個或多個、尤其是卜3個以下取代基取代卣素、烷基、苯基、 輕基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、卣代烷基、硝基和氨基。芳基的 實例包括苯基、萘基、聯(lián)苯基、四氬萘基、氯苯基、氟苯基、氨基 苯基、曱基苯基、曱氧基苯基、三氟曱基苯基、硝基苯基、羧基苯 基等。術(shù)語"芳基Cw烷基"和"雜芳基C"3烷基"定義為具有Cw
烷基取代基的芳基或雜芳基。術(shù)語"雜芳基"在本文中定義為含有一個或兩個芳環(huán)的單環(huán)或 雙環(huán)體系，并且在芳環(huán)中含有至少一個氮、氧或硫原子，所述環(huán)可 以未被取代或例如被一個或多個、尤其是1-3個以下取代基取代卣 素、烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、卣代烷基、硝 基和氨基。雜芳基的實例包括噻吩基、呋喃基、吡啶基、嗯唑基、 喹啉基、異喹啉基、吲哚基、三唑基、異噻唑基、異嗯唑基、咪唑 基、苯并噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、噻唑基和噻二唑基。術(shù)語"Het"定義為含有一個或多個選自氧、氮和硫的雜原子的 單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)基團(tuán)。"Het"基團(tuán)還可含有與該環(huán)連接的氧代基 (=0)。 Het的非限制性實例包括1,3-二氧戊環(huán)、2-吡唑啉、吡唑烷、 p比咯烷、艱。秦、吡咯啉、2H-p比喃、4H-吡喃、嗎啉、硫代嗎啉、艱 啶、1,4-二噻烷和1,4-二嗨烷。另外，本發(fā)明方法包括具有下式(II)結(jié)構(gòu)的PI3KS選擇性抑制劑 化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物的用途其中R4、 R5、 116和117獨立選自氫、Cw烷基、芳基、雜芳基、 卣素、NHC(0)C"3亞烷基N(Ra)2、 N02、 0Ra、 CF3、 0CF3、 N(Ra)2 CN、 0C(=0)Ra、 C(=0)Ra、 C(=0)ORa、芳基0Rb、 Het、 NRaC(-O)C！
亞烷基C(=0)ORa、芳基OCw亞烷基N(Ra)2、芳基OC(=0)Ra、 CM 亞烷基C(=0)ORa、 0CM亞烷基C(=0)ORa、 CM亞烷基0CM亞烷基 C(=〇)ORa、 C(=0)NRaS02Ra、 CM亞烷基N(R"2、 C2.6亞烯基N(Ra)2、 C(=0)NRaCM亞烷基ORa、 C—0)NRaC,—4亞烷基Het、 OC2-4亞烷基 N(Ra)2、 OCM亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、 OC"亞烷基Het、 OC^亞 烷基ORa、 OC2.4亞烷基NRaC(=0)ORa、 NRaCM亞烷基N(Ra)2、 NRaC(=0)Ra、 NRaC(=0)N(Ra)2、 N(S02Cw烷基)2、 NRa(S02CM烷基)、 S02N(Ra)2、 OS02CF3、 C,.3亞烷基芳基、Cw亞烷基Het、 &.6亞烷基 ORb、 C卜3亞烷基N(ir)2、 C(=0)N(Ra)2、 NHQ^O)C,.3亞烷基芳基、C3.8 環(huán)烷基、C^雜環(huán)烷基、芳基OCw亞烷基N(Ra)2、芳基OC(-O)Rb、 NHC(=0)CV3亞烷基C3.8雜環(huán)烷基、NHC—0)Cm亞烷基Het、 OCM 亞烷基OCm亞烷基C(=0)ORb、 C(=0)CM亞烷基Het和NHC(=0)^ 代C卜6烷基；R8選自氫、C^烷基、鹵素、CN、 QH3)Ra和Q^O)ORa;Xi選自CH(即連接有氫原子的碳原子)和氮；Ra選自氫、C,—6烷基、C^環(huán)烷基、(:3.8雜環(huán)烷基、Cw亞烷基 N(R。)2、芳基、芳基CV3烷基、Cw亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基Cw 烷基和C^亞烷基雜芳基；或者兩個Ra結(jié)合在一起形成任選含有至少一個雜原子的5元環(huán) 或6元環(huán)；Re選自氫、Cb6烷基、C^環(huán)烷基、芳基和雜芳基；和Het是5元或6元飽和或部分或全部不飽和的雜環(huán)，該雜環(huán)含有 至少一個選自氧、氮和硫的雜原子，并且任選被CV4烷基或者 C—0)ORa取代。在又一個實施方案中，本發(fā)明方法包括具有下式(m)結(jié)構(gòu)的PI3KS選擇性抑制劑化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物的用 途<formula>formula see original document page 45</formula>其中R9、 R1Q、 Rn和R^獨立選自氫、CV6烷基、芳基、雜芳基、 面素、NHC(0)C卜3亞烷基N(Ra)2、 N02、 0Ra、 CF3、 0CF3、 N(Ra)2、 CN、 0C(=0)Ra、 C(=0)Ra、 C(=0)0Ra、芳基0Rb、 Het、 NRaC—0)C!—3 亞烷基C(=0)ORa、芳基OCV3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(=0)Ra、 CM 亞烷基C(=0)ORa、 OCM亞烷基C(=0)ORa、 CM亞烷基OC"亞烷基 C(=0)ORa、 C(=0)NRaS02Ra、 CM亞烷基N(Ra)2、 C2.6亞烯基N(Ra)2、 C(=0)NRaCM亞烷基ORa、 C(=0)NRaCM亞烷基Het、 OC2.4亞烷基 N(Ra)2、 OCV4亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、 OC,—4亞烷基Het、 OC2—4亞 烷基ORa、 OC2.4亞烷基NRaC(=0)ORa、 NRaCM亞烷基N(Ra)2、 NRaC(=0)Ra、 NRaC(=0)N(Ra)2、 N(S02Cm;^|)2、服^02(^.4烷基)、 S02N(Ra)2、 OS02CF3、 Cw亞烷基芳基、C,4亞烷基Het、 CV6亞烷基 ORb、 C!—3亞烷基N(ir)2、 C(=0)N(Ra)2、 NHC—0)CV3亞烷基芳基、C3.8 環(huán)烷基、C3.8雜環(huán)烷基、芳基OCw亞烷基N(Ra)2、芳基OC(=0)Rb、 麗C—0)C！—3亞烷基C3—8雜環(huán)烷基、NHC—0)CV3亞烷基Het、 OCM 亞烷基OCM亞烷基C(=0)ORb、 C(=0)CM亞烷基Het和NHC(二O)鹵 代C1-6烷基；1113選自氬、Cw烷基、卣素、CN、 C(=0)R,C(=0)ORa; Ra選自氫、CV6烷基、C^環(huán)烷基、C3—8雜環(huán)烷基、CV3亞烷基 N(Re)2、芳基、芳基C^3烷基、CV3亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基Cw烷基和Cw亞烷基雜芳基；或者兩個Ra結(jié)合在一起形成任選含有至少一個雜原子的5元環(huán)或6元環(huán)；Re選自氫、q—6烷基、&.8環(huán)烷基、芳基和雜芳基；和Het是5元或6元飽和或部分或全部不飽和的雜環(huán)，該雜環(huán)含有至少一個選自氧、氮和硫的雜原子，并且任選被&.4烷基或者C(二O)ORa取代。更具體地講，本發(fā)明包含選自下列的PI3KS選擇性抑制劑及其 混合物的用途(1) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-氯苯基)-6,7-二曱氧基-3//-喹唑啉-4-酮；(2) 2-(6-氨基嘌呤-0-基曱基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(3) 2-(6-氨基。票呤-o-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3/Z-喹唑啉-4-酮；(4) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-6-氯-3-(2-氯苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(5) 2-(6-氨基。票呤-9-基曱基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3//-喹唑啉-4-酮；(6) 2-(6-氨基嘌呤-0-基曱基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(7) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-氯苯基)-5-曱基-3/7-喹唑啉-4-酮；(8) 2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(9) 2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3//-喹唑淋-4-酮；(10) 5-氯-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(11) 5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(12) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(13) 3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4- ÷酮；(14) 5-氯-3-(2-曱氧基苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-奮唑啉 -4-酮；(15) 3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9/^-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(16) 3-(2-氯苯基)-6,7-二曱氧基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹 "坐啉-4-酮；(17) 6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-(18) 3-(2-氯苯基)-8-三氟曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-會唑 啉-4-酮；(19) 3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-苯并[^喹唑啉-4-酮；(20) 6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(21) 8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(22) 3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(23) 3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3/f-喹唑啉-4-酮；(24) 3-(2-氯苯基)-6-雍基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(25) 5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(26) 3-(2-氯苯基)-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(27) 3-(2-氯苯基)-6,7-二氟-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(28) 3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(29) 2-(6-氨基噪呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-曱基-3/f-喹唑啉-4-酮；(30) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-曱基-3-鄰甲苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(31) 3-(2-氟苯基)-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(32) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-氯-3-鄰曱苯基-3/f-喹唑啉-4-酮；(33) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-氯-3-(2-甲氧基-苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(34) 2-(2-氨基-9//"票呤-6-基硫烷基曱基)-3-環(huán)丙基-5-甲基-3//-喹唑 淋-4-酮；(35) 3-環(huán)丙基曱基-5-曱基-2-(9//-。票呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(36) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-環(huán)丙基曱基-5-甲基-3/^喹唑啉-4-酮；(37) 2-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3-環(huán)丙基曱基-5-曱基-3//-P查P坐啉一4-酮；(38) 5-曱基-3-苯乙基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(39) 2-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-5-曱基-3-苯乙基-3//-喹唑 淋-4-酮；(40) 3-環(huán)戊基-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(41) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-環(huán)戊基-5-甲基-3//-喹唑啉-4-酮；(42) 3-(2-氯吡啶-3-基)-5-甲基-2-(9/7-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉－4-酮；
(43) 2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯吡啶-3-基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(44) 3-曱基-4-[5-曱基-4-氧代-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-4//-喹唑 啉-3-基]-苯甲酸；(45) 3-環(huán)丙基-5-甲基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(46) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-環(huán)丙基-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(47) 5-甲基-3-(4-硝基千基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(48) 3-環(huán)己基-5-甲基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(49) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-環(huán)己基-5-甲基-3//-喹唑啉-4-酮；(50) 2-(2-氨基-9/f-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3-環(huán)己基-5-曱基-3/f-喹唑 啉-4-酮；(51) 5-曱基-3-(￡-2-苯基環(huán)丙基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹 唑啉-4-酮；(52) 3-(2-氯苯基)-5-氟-2-[(9//-嘌呤-6-基氨基)曱基]-3//-喹唑啉-4-酮；(53) 2-[(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)曱基]-3-(2-氯苯基)-5-氟-3//-喹唑 啉隱4-酮；(54) 5-曱基-2-[(9//-嘌呤-6-基氨基)曱基]-3-鄰甲苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(55) 2-[(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)曱基]-5-曱基-3-鄰甲苯基-3//-喹 唑啉-4-酮；(56) 2-[(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)曱基]-5-甲基-3-鄰曱苯基-3//-喹唑 淋陽4-酮；(57) (2-氯苯基)-二曱氨基-(9H-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮； (58) 5-(2-千氧基乙氧基)-3-(2-氯苯基)-2-(9/f-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-壹峻啉-4-酮；(59) 6-氨基嘌呤-9-甲酸3-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3,4-二氫-壹唑啉-2-基曱酯；(60) 琴[3-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3,4-二氫-喹唑啉-2-基甲基]-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基)-乙酰胺；(61) 2-[1-(2-氟-9/7-嘌呤-6-基氨基)乙基]-5-甲基-3-鄰曱苯基-3//-唾 哇啉-4-酮；(62) 5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)乙基]-3-鄰曱苯基-3//-會唑啉-4-酮；(63) 2-(6-二曱氨基噤呤-9-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3/^奎唑啉-4-酮； -(64) 5-曱基-2-(2-甲基-6-氧代-1,6-二氫"票呤-7-基甲基)-3-鄰曱苯基-3H-喹哇啉-4-S同；(65) 5-曱基-2-(2-曱基-6-氧代-1,6-二氪-。票呤-9-基甲基)-3-鄰曱苯基-3//-壹唑啉-4-酮；(66) 2-(氨基-二甲氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3//-#唑 啉-4-酮；(67) 2-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-喹哇啉一4-酮；(68) 2-(4-氨基-1,3,5-三。秦-2-基硫烷基甲基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-唾唑淋_4-酮；(69) 5-甲基-2-(7-曱基-7//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3-鄰曱苯基-3//-唾 p坐淋-4-酮；(70) 5-曱基-2-(2-氧代-1,2-二氫-嘧啶-4-基硫烷基曱基)-3-鄰曱苯基-3//-會哇淋-4-酮；(71) 5-曱基-2-嘌呤-7-基曱基-3-鄰甲苯基-3/f-喹唑啉-4-酮；(72) 5-甲基-2-噤呤-9-基甲基-3 -鄰甲苯基-3//-喹唑淋-4-酉同； (73) 5-曱基-2-(9-曱基-9/f-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3-鄰曱苯基-3//-唾 哇啉-4-酮；(74) 2-(2,6-二氨基-嘧啶-4-基硫烷基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-* p坐淋-4-酮；(75) 5-曱基-2-(5-曱基-[l ,2,4]三唑并[1 ，5-o]嘧啶-7-基硫烷基曱基)-3-鄰曱苯基-3//-奮唑啉-4-酮；(76) 5-曱基-2-(2-曱硫基-9//-。票呤-6-基硫烷基曱基)-3-鄰曱苯基-3//-P查P坐淋-4-酮；(77) 2-(2-羥基-9//-噤呤-6-基硫烷基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//^奎 哇淋-4-酮；(78) 5-曱基-2-(1-曱基-1//-咪唑-2-基硫烷基甲基)-3-鄰曱苯基-3//-唾哇啉-4-酮；(79) 5-曱基-3-鄰曱苯基-2-(1//-[ 1,2,4]三唑-3-基硫烷基曱基)-3//-會 p坐淋-4-酮；(80) 2-(2-氨基-6-氯-嘌呤-9-基曱基)-5-曱基-3-鄰甲苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(81) 2-(6-氨基噪呤-7-基曱基)-5-甲基-3-鄰曱苯基-3/f-p奎唑啉-4-酮；(82) 2-(7-氨基-l,2,3-三唑并[4,5-，密啶-3-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯 基-3//-喹唑啉-4-酮；(83) 2-(7-氨基-l,2,3-三唑并[4,5-，密啶-1 -基曱基)-5-甲基-3-鄰曱苯 基-3/f-喹唑淋-4-酮；(84) 2-(6-氨基-9//-噪呤-2-基硫烷基曱基)-5-曱基-3-鄰甲苯基-3//』奎 哇淋-4誦酮；(85) 2-(2-氨基-6-乙基氨基-嘧啶-4-基硫烷基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯 基-3//-唾唑啉-4-酮；(86) 2-(3-氨基-5-曱硫基-1,2,4-三唑-1-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3/7-唾唑啉-4-S同；(87) 2-(5-氨基-3-曱硫基-1,2,4-三唑-1 -基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3H-p奎喳啉-4-酮；(88) 5-曱基-2-(6-甲基氨基。票呤-9-基曱基)-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(89) 2-(6-芐基氨基嘌呤-9-基曱基)-5-曱基-3-鄰甲苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(90) 2-(2,6-二氨基。票呤-9-基曱基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(91) 5-曱基-2-(9//-。票呤-6-基硫坑基甲基)-3-鄰甲苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(92) 3-異丁基-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(93) |{2-[5-曱基-4-氧代-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-4//-喹唑啉-3- 基]-苯基}-乙酰胺；(94) 5-曱基-3-(E冬曱基-環(huán)己基)-2-(9//-。票呤-6-基硫烷基曱基)-3//-p奎p坐啉-4-酮；(95) 2-[5-甲基-4-氧代-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-4//-喹唑啉-3-基]-苯曱酸；(96) 3- {2-[(2-二甲氨基乙基)曱基氨基]苯基} -5-甲基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(97) 3-(2-氯苯基)-5-甲氧基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3H-喹唑啉 -4-酮；(98) 3-(2-氯苯基)-5-(2-嗎啉-4-基-乙氨基)-2-(9W-嘌呤-6-基硫烷基曱 基)-3/Z-p奎唑啉-4-酮；(99) 3-千基-5-甲氧基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(100) 2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-芐氧基苯基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4- 酮；(101) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-羥基苯基)-5-甲基-3樂喹唑啉-4- 酮；:102) 2-(1 -(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)乙基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-p奎p坐啉-4-酮；103) 5-曱基"2-[卜(9//-噤呤-6-基氨基)丙基]-3-鄰甲苯基-3//-奮唑啉-4-酮；:104) 2-(1-(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)丙基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3//-喹 p生啉-4-酮；105) 2-(1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)丙基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-p奎哇啉-4-酮；106) 2-(2-千氧基-1-(9//-。票呤-6-基氨基)乙基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3//寺坐淋-4-酮；107) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-曱基-3-{2-(2-(1 -甲基吡咯烷-2-基)-乙氧基)-苯基} -3//-喹唑啉-4-酮；108) 2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-(3-二曱氨基-丙氧基)-苯基)-5-曱 基-3H-喹唑啉-4-S同；109) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-曱基-3-(2-丙-2-炔基氧基苯基)-377-唾峻啉-4-酮；110) 2-{2-[1-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-甲基-4-氧代-4//-喹唑啉-3-基]-苯氧基}-乙酰胺；111) 2-[(6-氨基嘌呤-9-基)-曱基]-5-曱基-3-鄰曱苯基-3H-喹唑啉-4-酮；112) 3-(3,5-二氟苯基)-5-曱基-2-[(嘌呤-6-基氨基)-甲基]-3H-喹唑啉-4-酮；:113) 3-(2，6-二氯苯基)-5-曱基-2-[(嘌呤-6-基氨基)-曱基]-3H-喹唑啉-4-酮；114) 3-(2-氟-苯基)-2-[H2-氟-9/f-嘌呤-6-基氨基)-乙基]巧-曱基-3H-唾唑淋_4-酮；:115) 2-[l-(6-氨基嘌呤-9-基)-乙基]-3-(3,5-二氟苯基)-5-曱基-3H-喹唑 啉-4-酮；'116) 2-[l-(7-氨基-[l,2,3]三唑并[4,5-命密啶-3-基)-乙基]-3-(3,5-二氟苯基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮； :117) 5-氯-3-(3,5-二氟-苯基)-2-[1-(9//-噪呤-6-基氨基)-丙基]-3//-唾唑 啉-4-酮；'118) 3-苯基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-丙基]-3//-壹唑啉-4-酮； '119) 5-氟-3-苯基-2-[l-(9H-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3/7-喹唑啉-4-酮； :120) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-甲基-2-[1 -(9//-噤呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹 唑啉-4-酮；'121) 6-氟-3-苯基-2-[1 -(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮； '122) 3-(3,5-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-唾 哇淋-4-酮；'123) 5-氟-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮； 124) 3-(2,3-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-噪呤-6-基氨基)-乙基]-3//-*峻淋一4-酮；'125) 5-甲基-3-苯基-2-[1-(9//-噤呤-6-基氨基)-乙基]-3//-會唑啉-4-酮；:126) 3-(3-氯-苯基)-5-曱基-2-[l-(9/7-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3H-喹唑 啉-4-酮；'127) 5-甲基-3-苯基-2-[(9//-噤呤-6-基氨基)-曱基]-3//-會唑啉-4-酮； '128) 2-[(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-曱基]-3-(3,5-二氟-苯基)-5-曱基-3//-會哇淋-4-酮；'129) 3-{2-[(2-二乙氨基乙基)-曱基-氨基]-苯基}-5-曱基-2-[(9//-。票呤-6-基氨基)-曱基]-3//-喹唑啉-4-酮； '130) 5-氯-3-(2-氟-苯基)-2-[(9//-噪呤-6-基氨基)-曱基]-3//-喹唑啉-4-酮；'131) 5-氯-2-[(9//-嘌呤-6-基氨基)-曱基]-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮； 132) 5-氯-3-(2-氯-苯基)-2-[(9//-噤呤-6-基氨基)-曱基]-3//-會唑啉-4-酮；'133) 6-氟-3-(3-氟-苯基)-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；:134) 2-[1-(2-氨基-9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-5-氯-3-(3-氟-苯基)-3//-唾唾啉-4-酮；135) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑啉-4-酮；'136) 2-[1-(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-甲基-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；'137) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹"坐啉一4-酮；138) 2-[l-(2-氨基-9/f-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮； '139) 3-(2,6-二氟-苯基)-2-[1-(2-氟-9//-噪呤-6-基氨基)-乙基]-5-甲基-^/7-會哇淋-4-g同；'140) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-甲基-2-[1-(7//-吡咯并[2,3-《嘧啶-4-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮； '141) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑 啉-4-酮；'142) 5-甲基-3-苯基-2-[1-(7//-吡咯并[2，3-《嘧啶-4-基氨基)-丙基]-3H-會唑淋-4-酮；143) 2-[1-(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-甲基-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；144) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；'145) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑 啉-4-酮；:146) 2-[2-節(jié)氧基-1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-5-甲基-3-苯基-3//-喹 峻啉-4-酮；:147) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-2-千氧基-乙基]-5-曱基-3-苯基 -3//-會峻淋-4-酮；:148) 2-[2-千氧基-1-(7//-吡咯并[2,3-，密啶-4-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯基-3/7-p奎唑啉-4-酉同； :149) 2-[2-千氧基-1-(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹哇啉-4-酮；150) 3-(4-氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；151) 2-[1 -(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(4-氟-苯基)-5-曱基-3H-p奎峻啉-4-酮；152) 3-(4-氟-苯基)-2-[1-(2_氟-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3//-壹峻啉-4-酮；153) 3-(4-氟-苯基)-5-甲基-2-[1-(7//-吡咯并[2,3-，密啶-4-基氨基)-乙 基]-3/7-p奎哇啉-4-S同；154) 5-甲基-3-苯基-2-[1-(7//-吡咯并[2，3-《嗜啶-4-基氨基)-乙基]-3/7-p套峻淋-4-酮；155) 3-(3-氟-苯基)-5-甲基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；156) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3-氟-苯基)-5-曱基-3//』奎-坐淋-4-酮；:157) 3-(3-氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(7//-吡咯并[2,3-，密啶-4-基氨基)-乙基]-3//-喹唑淋-4-酮； :158) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基)-吡咯烷-2-基]-3//-喹唑啉-4-酮；:159) 2-[2-羥基-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-甲基-3-苯基-3//-喹唑 啉-4-酮；
:160) 5-曱基-3-苯基-2-[苯基-(9/7-。票呤-6-基氨基)-甲基]-3//-喹唑啉-4-酮；:161) 2-[(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-苯基-曱基]-5-甲基-3-苯基-3//-喹P坐啉-4-酮；:162) 2-[(2-氟-9//-。票呤-6-基氨基)-苯基-曱基]-5-甲基-3-苯基-3//-壹唑 啉-4-酮；:163) 5-甲基-3-苯基-2-[苯基-(7//-吡咯并[2,3-司嘧啶-4-基氨基)-曱基]-3//-唾峻淋-4-酮；:164) 5-氟-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；165) 2-[1-(2-氨基-9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-5-氟-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；166) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-氯-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；167) [5-(5-曱基-4-氧代-3-苯基-3，4-二氬-喹唑啉-2-基)-5-(9//-嘌呤-6-基氨基)-戊基]-氨基曱酸千酯；168) [5-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-5-(5-曱基-4-氧代-3-苯基-3,4-二 氫-喹唑啉-2-基)-戊基]-氨基甲酸千酯；169) [4-(5-曱基-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫-喹唑啉-2-基)-4-(9//-噤呤-6-基氨基)-丁基]-氨基曱酸芐酯；170) [4-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-4-(5-曱基-4-氧代-3-苯基-3,4-二 氬-喹唑啉-2-基)-丁基]-氨基甲酸千酯；171) 3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；172) 2-[5-氨基-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-戊基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑 啉-4扁酮；:173) 2-[5-氨基-1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-戊基]-5-曱基-3-苯基-3/f-p奎峻啉-4-酮；174) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2，6-二甲基-苯基)-5-甲基-3//-會唑啉-4-酮；'175) 3-(2,6-二甲基-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-唾峻淋一4-嗣；'176) 5-嗎啉-4-基曱基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹 p坐啉-4-酮；:177) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-嗎啉-4-基曱基-3-苯基 -3//,奎峻啉-4-酮；'178) 2-[4-氨基-1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丁基]-5-曱基-3-苯基-3/f-p查峻淋-4-酮；179) 6-氟-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；180) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-6-氟-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；'181) 2-[2-叔丁氧基-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-甲基-3-苯基-3//-p奎峻啉-4-酮；:182) 3-(3-曱基-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-壹峻啉曙4-酮；:183) 2-[1 -(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3-曱基-苯基)-5-曱基-3//隱p奎峻啉-4-酮；184) 3-(3-氯-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑 淋-4-酮；'185) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3-氯-苯基)-5-曱基-3//-唾哇啉-4-酮；'186) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-2-羥基-乙基]-5-曱基-3-苯基-3H-p奎哇啉-4-酮；'187) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3-氟-苯基)-3//-喹唑 淋-4-酮；'188) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2,6-二氟-苯基)-3//-喹 峻啉-4-酮；'189) 2-[1-(2-氨基-9^-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-氟-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(190) 5-氯-3-(3-氟-苯基)-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(191) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-氯-3-(3-氟-苯基)-3//-唾峻啉-4-酮；(192) 3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-三氟曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(193) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹 口坐啉國4-酮；(194) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-甲基-2-[1-(9//-噪呤-6-基氨基)-乙基]-3//-會 唑啉-4-酮；(195) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱 基-3//-喹唑啉-4-酮；(196) 2-[卜(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2,6-二氟-苯基)-5國甲 基_3//-查唑啉-4-酮；(197) 3-(3,5-二氯-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹 唑啉-4-酮；(198) 3-(2,6-二氯-苯基)-5-甲基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹峻啉一4-酮；(199) 2-[l-(2-氨基-9/7-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2，6-二氯-苯基)-5-曱 基-3/Z-喹唑啉-4-S同；(200) '5-氯-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(201) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-氯-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(202) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丁基]-3//-喹唑啉-4-酮；(203) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丁基]-5-甲基-3-苯基-3//-喹唑 啉-4-酮；(204) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3,5-二氯-苯基)-5-曱 基_3//-喹峻淋-4-酮；(205) 5-曱基-3-(3-嗎淋-4-基曱基-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙 基]-3//-壹唑啉-4-酮；(206) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-(嗎啉-4-基曱 基-苯基)-3//-喹唑啉-4-酉同；(207) 2-[1-(5-溴-7//-吡咯并[2,3-，密啶-4-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯 基_3//-查唑啉-4-酮；(208) 5-甲基-2-[1-(5-甲基-7//-吡咯并[2,3-，密啶-4-基氨基)-乙基]-3-苯基-3/7-p奎哇啉-4-酮；(209) 2-[1-(5-氟-7//-吡咯并[2,3-，密啶-4-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯 基_3//-喹唑啉-4-酮；(210) 2-[2-羥基-1-(9^嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(211) 3-(3,5-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹 哇啉-4-酮；(212) 2-[1-(2-氨基-9//-噤呤-6-基氨基)-丙基]-3-(3,5-二氟-苯基)-5-曱 基_3//-喹唑啉-4-酮；(213) 3-(3,5-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(214) 2-[l-(5-溴-7H-吡咯并[2,3-司嘧啶-4-基氨基)-乙基]-3-(3-氟-苯 基)-5 -曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(215) 3-(3-氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(5-甲基-7//-吡咯并[2,3-《嘧啶-4-基 氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(216) 3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(217) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3，5-二氟-苯基)-3//-喹 哇啉誦4-酮；(218) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3-苯基-3//-喹唑啉-4-
酮；(219) 6,7-二氟-3-苯基-2-[1-(977-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(220) 6-氟-3-(3-氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(221) 2-[4-二乙氨基-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丁基]-5-曱基-3-苯基-3//-唾峻啉-4-酮；(222) 5-氟-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(223) 3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(224) 6-氟-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑淋-4-酮；(225) 3-(3,5-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-唾 峻啉-4-酮；(226) 5-氟-2-[1-(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(227) 3-(3-氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(228) 5-氯-3-(3,5-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3/^奎唑 啉-4-酮；(229) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-唾 P坐啉-4-酮；(230) 3-(2,6-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(231) 5-曱基-3-苯基-2-[3,3,3-三氟-1-(附-噪呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹峻啉一4-酮；(232) 3-(3-羥基-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-會 唑啉-4-酮；(233) 3-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-{l-[9//-。票呤-6-基氨基]-乙基}-3/f-p奎峻啉誦4-酮； (234) 3-[3-(2-二曱氨基-乙氧基)-苯基]-5-曱基-2-{1-[9//-。票呤-6-基氨 基]-乙基}-3//-喹唑啉-4-酮；(235) 3-(3-環(huán)丙基甲氧基-苯基)-5-甲基-2-(H9H-嘌呤-6-基氨基]-乙 基}-3//-喹唑啉-4-酮；(236) 5-甲基-3-(3-丙-2-炔基氧基-苯基)-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨基]-乙 基}-3//-喹唑啉-4-酮；(237) 2-{1-[2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3-(3-羥基苯基)-5-甲基-3//-唾唑淋-4-酮；(238) 2-{1-[2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3-(3-甲氧基苯基)-5-甲 基-3//-全唑啉-4-酮；(239) 2-{1-[2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3-(3-環(huán)丙基曱氧基-苯 基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(240) 2-{1-[2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-5-甲基-3-(3-丙-2-炔基 氧基-苯基)-3/f-喹唑啉-4-酮；(241) 3-(3-乙炔基-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-會哇啉-4-酮；(242) 3-{5-曱基-4-氧代-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-4//-喹唑啉-3-基}-苯曱腈；(243) 3-{5-曱基-4-氧代-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-4//-喹唑啉-3-基)-苯曱酰胺；(244) 3-(3-乙?；?苯基)-5-曱基-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3//-p奎哇啉-4扁酮；(245) 2-(3-(5-曱基-4-氧代-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-4//-喹唑啉 -3-基-苯氧基乙酰胺；(246) 5-曱基-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3-[3-(四氫他喃-4-基氧 基)-苯基]-3//-喹唑啉-4-酮；(247) 3-[3-(2-曱氧基-乙氧基)-苯基]-5-甲基-2-[卜(9//-嘌呤-6-基氨基)曙 乙基-3//-喹唑啉-4-酮； ÷(248) 6-氟-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-[3-(四氫吡喃-4-基氧基)-苯基]-3//-喹唑啉-4-酮；(249) 3-[3-(3-二曱氨基-丙氧基)-苯基]-5-曱基-2-[1 -(9//-嘌呤-6-基氨 基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(250) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]_3_(3-乙炔基-苯基)-5-曱 基-3H-喹哇啉-4-酮；(251) 3-{2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-4-氧代-4//-喹 唑啉-3-基}-苯曱腈；(252) 3-{2-[1-(2-氨基-9/^-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-4-氧代-4//-喹 唑啉-3-基}-苯曱酰胺；(253) 3-{2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-4-氧代-4//-喹 唑啉-3-基}-苯曱酰胺；(254) 5-甲基-3-(3-嗎啉-4-基-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//畫會哇啉-4-酮；(255) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-(3-嗎啉-4-基-苯基)-3//-會唑啉-4-酮；(256) 2-[l-(2-氨基-9/f-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-[3-(2-曱氧基-乙氧基)-苯基]-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(257) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-[3-(2-二曱氨基-乙氧 基)-苯基]-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(258) 2-[1 -(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丁-3-炔基]-5-甲基-3-苯基-3//-壹p坐淋-4-酉同；(259) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丁-3-炔基]-5-曱基-3-苯基-3//-p奎p坐淋-4-酮；(260) 5-氯-3-(3,5-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；(261) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-氯-3-(3,5-二氟-苯基)-3/7-p套唑淋-4-酮；÷
(262) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-氯-3-(3，5-二氟-苯基)-3/Z-p奎哇啉畫4-酮；(263) 3-(3,5-二氟-苯基)-6-氟-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-會唑 淋-4-酮；(264) 5-氯-3-(2，6-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；(265) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-氯-3-(2,6-二氟-苯基)-3//-唾哇啉-4-酮；(266) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氧基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮。當(dāng)存在立體中心時，可以采用所述化合物的外消旋體混合物或 特定的對映體實施本發(fā)明的方法。在優(yōu)選的實施方案中，利用上述 化合物的S-對映體。因此，本發(fā)明包括上述化合物所有可能的立體 異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體。"藥學(xué)上可接受的鹽"是指任何生理上可接受的鹽，只要其與 制劑中的其它組分相容并且對其接受體不產(chǎn)生毒害即可。 一些具體 的優(yōu)選實例為乙酸鹽、三氟乙酸鹽、鹽酸鹽、氬溴酸鹽、硫酸鹽、 檸檬酸鹽、酒石酸鹽、羥乙酸鹽、草酸鹽。在一個實施方案中，本發(fā)明包括一種制品，它包含磷酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑和注明根據(jù)本發(fā)明任一種方法的用法的 標(biāo)簽。在一個相關(guān)實施方案中，本發(fā)明提供含有至少一種PI3KS選擇 性抑制劑的組合物在制備用于治療或預(yù)防與不需要的肥大細(xì)胞活性 有關(guān)的疾病的藥物中的用途。本發(fā)明還包括前藥的給藥。本文所用術(shù)語"前藥"是指在體內(nèi) 能通過水解迅速轉(zhuǎn)化為例如具有本文所述結(jié)構(gòu)式的化合物的化合 物。前藥設(shè)計的一般性論述請參見Hardma等(編輯)，Goodma"朋d (7//wawk 77^尸/2a/7^aco/og7'ca/ 5as7's q/"772era/ ewWc51, 第9版，第11-16 頁(1996)。 詳細(xì)論述請參見Higuchi等，尸/Wn^ o M ve/ De/hw_y5y對ems,第 14巻，ASCD Symposium Series以及Roche (主編), B/orever57力/e Ca/r/e ^ Z>wg Des/g77, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press (1987)。 簡而言之,纟會予藥物后，藥物經(jīng)機(jī)體排出或進(jìn)行某些生物轉(zhuǎn)化，從而藥物的生物活性被降低或 消除。換句話講，生物轉(zhuǎn)化過程可導(dǎo)致產(chǎn)生代謝副產(chǎn)物，與最初給 予的藥物相比，所述副產(chǎn)物本身具有更強(qiáng)的活性，或者具有等同的 活性。對這些生物轉(zhuǎn)化過程的了解加深，使得可以設(shè)計出所稱的"前 藥"，這樣的前藥在生物轉(zhuǎn)化后，以其改變狀態(tài)變成具有更高的生 理活性。因此，前藥包括可轉(zhuǎn)化為生物活性代謝物的藥理上無活性 的化合物。舉例來說，前藥可以通過酯或酰胺鍵的水解，由此在所得到的 產(chǎn)物上引入或暴露出官能團(tuán)，從而轉(zhuǎn)化為藥理上的活性形式?？稍O(shè) 計前藥能與內(nèi)源性化合物反應(yīng)，生成水溶性綴合物，進(jìn)一步增強(qiáng)所 述化合物的藥理性質(zhì)，例如循環(huán)半壽期增加?；蛘?，可設(shè)計前藥能 在官能團(tuán)上與例如葡糖醛酸、硫酸、谷胱甘肽、氨基酸或乙酸鹽進(jìn) 行共價修飾。所得到的綴合物可以是無活性的并從尿中排出，或者 與母體化合物相比活性更強(qiáng)。高分子量綴合物還可能被排泄到膽汁中，經(jīng)歷酶解，然后再被釋放進(jìn)入循環(huán)，因此有效地增加了最初給 予的化合物的生物半壽期。另外，本發(fā)明方法中還包括將與PI3K家族的其它同工酶相比， 能更有效地選擇性負(fù)調(diào)節(jié)pllOS mRNA表達(dá)并且具有可接受的藥理 性質(zhì)的化合物，作為PI3KS選擇性抑制劑。編碼人pllOS的多核苷酸 公開于例如Genbank4企索號AR255866、 NM 005026、 U86453、 U57843 和Yi0055，其所有公開內(nèi)容結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。還可參見 Vanhaesebroeck等，尸rac. Ato/.爿o^. SW. 94: 4330-4335 (1997),其全 文結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。代表性的編碼小鼠pll05的多核苷酸公 開于例如Genbank檢索號BC035203 、 AK040867 、 U86587和 NM_008840,編碼大鼠pllOS的多核苷酸公開于Genbank檢索號 XM_345606,其全文結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。在一個實施方案中，本發(fā)明提供使用能與編碼pllOS的信使RNA (mRNA)雜交來負(fù)調(diào)節(jié)pllOS表達(dá)的反義寡核苦酸的方法。 一方面， 本發(fā)明方法中使用的反義寡核苷酸長度為至少5個至約50個核苷 酸，包括位于其間的所有長度(以核苷酸數(shù)目計)，所述反義寡核香酸 能與編碼pllOS的mRNA特異性雜交并且抑制mRNA表達(dá)，結(jié)果， 導(dǎo)致抑制pllOS蛋白的表達(dá)。反義寡核苷酸包括那些包含修飾核苦酸 間鍵合的反義寡核苷酸，和/或那些包含本領(lǐng)域已知的改進(jìn)寡核苦酸 穩(wěn)定性(即使寡核苷酸對核酸酶降解更具抗性，尤其是體內(nèi))的修飾核 苷酸的反義寡核苷酸。本領(lǐng)域清楚，雖然與靶多核苷酸某個區(qū)完全 互補(bǔ)的反義寡核苷酸具有程度最高的特異性抑制，但是那些并不完 全互補(bǔ)的反義寡核苷酸，即那些相對于靶多核苷酸某個區(qū)包括有限 的幾個錯配的反義寡核苷酸，也保留高度雜交特異性，因此也可以 抑制靶mRNA的表達(dá)。因此，本發(fā)明包括使用與編碼pllOS的多核 苷酸的某個靶區(qū)完全互補(bǔ)的反義寡核苷酸的方法，以及使用與耙多 核苦酸的靶區(qū)不完全互補(bǔ)(即包括錯配)、而錯配并不妨礙與耙多核苷 酸內(nèi)的靶區(qū)特異性雜交的反義寡核苷酸的方法。反義核苦酸的設(shè)計 及最優(yōu)化方法參見Lima等(J說o/C/zew, 272: 626-38, 1997)、 Kurreck 等(AAwc/e/c爿c/A ife&, 30: 1911-8, 2002)和美國專利第6,277,981號， 這些文獻(xiàn)和專利結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。反義化合物的實例參見國際專利申請wo 01/05958,其結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。本發(fā)明還包括利用核酶抑制劑的方法，正如本領(lǐng)域所了解的， 核酶抑制劑包括與耙多核苷酸特異性雜交的核苦酸區(qū)以及消化耙多 核苷酸的酶部分。核酶抑制的特異性與反義區(qū)的長度有關(guān)，也與反 義區(qū)與靶多核苷酸內(nèi)的靶區(qū)互補(bǔ)程度有關(guān)。因此，本發(fā)明的方法包 括核酶抑制劑，其中包括長度至少5個至約50個核苷酸的完全互補(bǔ) 的反義區(qū)，包括位于其間的所有核苷酸長度；以及包含錯配的反義 區(qū)，達(dá)到的程度是錯配并不妨礙與pllOS編碼的靶多核香酸內(nèi)的耙區(qū)
特異性雜交。本發(fā)明方法中使用的核酶包括那些包含修飾核苷酸間 鍵合的核酶，和/或那些包含本領(lǐng)域已知的改進(jìn)寡核苷酸穩(wěn)定性(即使 寡核苷酸對核酸酶降解更具抗性，尤其是體內(nèi))的修飾核苦酸的核酶， 達(dá)到的程度是這些修飾并不改變核酶與靶區(qū)特異性雜交或者降低分 子的酶活性的能力。因為核酶是酶性分子，單個核酶分子就能夠直 接消化多個靶分子，從而提供比非酶反義寡核苷酸更低的濃度下有效的優(yōu)點。核酶的制備及應(yīng)用技術(shù)參見美國專利6,696,250、 6,410,224 和5,225,347，這些專利全文結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。本發(fā)明還包括利用RNAi技術(shù)抑制pllOS表達(dá)的方法的應(yīng)用。一 方面，本發(fā)明提供雙鏈RNA (dsRNA),其中一條鏈與編碼pllOS的 把多核普酸內(nèi)的靶區(qū)互補(bǔ)。 一般來說，該類型的dsRNA分子長度小 于30個核香酸，本領(lǐng)域?qū)⑵浞Q為短千擾RNA (siRNA)。然而，本發(fā) 明還包括長度大于30個核苷酸的dsRNA分子的應(yīng)用，在本發(fā)明某 些方面，這些更長的dsRNA分子長度可以約為30個核苷酸至200 個核苷酸或者更長，并且包括位于其間的所有長度的dsRNA分子。 如同其它RNA抑制劑一樣，dsRNA分子中一條鏈的互補(bǔ)性可以是與 耙多核苷酸內(nèi)的靶區(qū)的完全匹配，或者在一定程度上包括錯配，其 程度是錯配并不妨礙與編碼pllOS的靶多核苷酸內(nèi)的靶區(qū)特異性雜 交。如同其它RNA抑制技術(shù)一樣，dsRNA分子包括那些包含修飾核 苷酸間鍵合的dsRNA分子，和/或那些包含本領(lǐng)域已知的改進(jìn)寡核普 酸穩(wěn)定性(即使寡核苷酸對核酸酶降解更具抗性，尤其是體內(nèi))的修飾 核苷酸的dsRNA分子。使用雙鏈RNA (dsRNA)序列化合物(Fire等, 391: 806-811, 1998)或者短干擾RNA (siRNA)序列化合物(Yu 等，Prac Ato/爿cG^Sc/ W5A 99: 6047-52, 2002)的RNAi制備及其應(yīng)用 的更全面描述參見美國專利申請第20040023390號，其全文結(jié)合到 本發(fā)明中作為參考。本發(fā)明還包括使用RNA套索(lasso)技術(shù)影響pllOS抑制的方法。 環(huán)狀RNA套索抑制劑是高度結(jié)構(gòu)化的分子，對降解具有固有的抗性，
因此 一般不包括或需要修飾核苷酸間鍵合或修飾核苷酸。該環(huán)狀套 索結(jié)構(gòu)包括能與靶多核苷酸內(nèi)的靶區(qū)雜交的區(qū)域，套索內(nèi)的雜交區(qū)具有其它RNA抑制技術(shù)的典型長度。如同其它RNA抑制技術(shù)一樣， 套索內(nèi)的雜交區(qū)可以與靶多核苷酸內(nèi)的靶區(qū)完全匹配，或者可以在 一定程度上包括錯配，其程度是錯配并不妨礙與編碼pllOS的靶多核 苷酸內(nèi)的靶區(qū)特異性雜交。因為RNA套索是環(huán)狀的并與靶區(qū)形成緊 密的拓樸鍵合，所以該類型的抑制劑與典型的反義寡核苷酸不同， 一般不通過解旋酶作用進(jìn)行置換，因此可以使用比典型反義寡核香 酸更低的劑量。RNA套索的制備及應(yīng)用參見美國專利笫6,369,038 號，其全文結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。本發(fā)明抑制劑可以與諸如以下的載體分子共價或非共價結(jié)合 直鏈聚合物(例如聚乙二醇、多熔素、右旋糖肝等)、支鏈聚合物(參 見美國專利4,289,872和5,229,490; 1993年10月28日公布的PCT 申請WO 93/21259);脂質(zhì)；膽固醇基團(tuán)(例如類固醇)；或碳水化合物化合物的聚合物，例如海藻糖、甘露糖醇、木糖醇、蔗糖、乳糖、 山梨糖醇、右旋糖酐(例如環(huán)糊精)、纖維素和纖維素衍生物。還包括 使用脂質(zhì)體、微嚢體、微球體、包合絡(luò)合物或其它類型的載體。其它的載體包括一種或多種水溶性聚合物連接體，例如聚氧乙 二醇或聚丙二醇，參見美國專利4,640,835、 4,496,689、 4,301,144、 4,670,417、 4,791,192和4,179,337。本領(lǐng)域已知的另外其它有用的載 體聚合物包括單甲氧基-聚乙二醇、聚-(N-乙烯基吡咯烷酮)-聚乙二 醇、丙二醇均聚物、聚環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元 醇(例如丙三醇)和聚乙烯醇以及這些聚合物的混合物。雙官能試劑衍生法可用于使本發(fā)明化合物與支持基質(zhì)或載體交 聯(lián)。 一種這樣的載體是聚乙二醇(PEG)。 PEG基團(tuán)可以具有任何常規(guī) 分子量，可以是直鏈，也可以是支鏈。PEG的平均分子量范圍可以 為約2 kDa至約100 kDa，另 一方面可以為約5 kDa至約50 kDa，再
一方面可以為約5 kDa至約10 kDa。 PEG基團(tuán)一般可通過?；⑦€ 原烷基化、邁克爾加成(Michael addition).辟u醇烷基化或者通過PEG 部分上的活性基團(tuán)(例如醛基、氨基、酯基、巰基、卣代乙酰基、馬基、酯基、巰基、a-卣代乙?；ⅠR來酰亞胺基或肼基)的其它化學(xué) 選4^性軛合/連接方法連接到本發(fā)明化合物上。交聯(lián)劑可以包括如4-疊氮基水楊酸的酯、同雙官能酰亞胺基酯，包括二琥珀酰亞胺基酯， 例如3,3'-二辟u代雙(琥珀酰亞胺基丙酸酯)，以及雙官能馬來酰亞胺， 例如雙-N-馬來酰亞胺基-l,8-辛烷。衍生化試劑，例如3-[(對疊氮基 苯基)二硫代]丙亞氨酸甲酯，生成具有光活性的中間體，該中間體在 有光的情況下能形成交聯(lián)化合物。另外，對于抑制劑固定，可以使 用活性水不溶性基質(zhì)，例如溴化氰-活化碳水化合物和活性底物，參 見美國專利3,969,287、 3,691，016、 4,195,128、 4,247,642、 4，229,537 和4,330,440。本發(fā)明的藥物組合物還可以包含衍生化化合物，其中包含一個 或多個抗體Fc區(qū)?？贵w的Fc區(qū)包含多個單體多肽，這些單體多肽 可以是通過二硫鍵或非共價締合連接而成的二聚體或多聚體形式。Fc 分子的單體亞基之間的分子間二硫鍵數(shù)目可以為1-4個，這取決于Fc 區(qū)所來源的抗體的類別(例如IgG、 IgA、 IgE)或亞類(例如IgGl、 IgG2、 IgG3、 IgAl、 IgGA2)。本文所用術(shù)語"Fc，， 一般為Fc分子的單體、 二聚體和多聚體，其中Fc區(qū)為野生型結(jié)構(gòu)或衍生化結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的 藥物組合物還可以包含F(xiàn)c分子的補(bǔ)救受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(參見WO 96/32478)以及其它Fc分子(參見WO 97/34631)。征，包括例如生物活性、溶解度、吸收、生物半壽期等等。或者，征和/或性質(zhì)?；蛘撸霾糠挚上驕p輕所述化合物的任何不需 要的副作用，等等。
本發(fā)明中也使用與本文所述抑制劑化合物竟?fàn)幗Y(jié)合PI3KS的化合物。與本發(fā)明具體提供的化合物竟?fàn)幮越Y(jié)合PI3KS的化合物的鑒定方法，是本領(lǐng)域眾所周知的。因此，考慮到以上公開內(nèi)容，本文所用術(shù)語"抑制劑"包括所公開的化合物、與所公開的化合物竟?fàn)幗Y(jié)合PI3KS的化合物、以及在 所有情況下它們的綴合物和衍生物。有需要的個體，在所有情況下，還任選包括一種或多種合適的稀釋 劑、填充劑、鹽、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、助流劑、濕潤劑、控 釋基質(zhì)、著色劑/矯味劑、載體、賦形劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、 其它本領(lǐng)域熟知的物質(zhì)和它們的組合。可以使用本領(lǐng)域已知的作為藥用溶媒、賦形劑或介質(zhì)的任何藥 學(xué)上可接受的(即無菌無毒)液體、半固體或固體稀釋劑。稀釋劑的, 例包括但不限于聚氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯、硬脂酸鎂、磷酸 4丐、礦物油、可可脂、可可油、羥基苯曱酸甲酯、羥基苯曱酸丙酯、 滑石粉、藻酸鹽、糖類，尤其是甘露糖醇、a-乳糖、無水乳糖、纖維 素、蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、改性右旋糖酐、阿拉伯樹膠和淀粉。 某些市售的稀釋劑有Fast-Flo、 Emdex、 STA-Rx 1500、 Emcompress 和Avicell。這些組合物可影響本發(fā)明抑制劑化合物的物理狀態(tài)、穩(wěn) 定性、體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率。參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences,笫18版,(1990, Mack Publishing Co., Easton, PA 18042),第1435-1712頁，其結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。藥學(xué)上可接受的填充劑包括例如乳糖、微晶纖維素、磷酸二鈣、 磷酸三釣、硫酸鈣、葡萄糖、甘露醇和/或蔗糖。所述藥物組合物中還可以使用無機(jī)鹽作為填充劑，包括三磷酸 鉤、碳酸鎂和氯化鈉。可以使用氨基酸，諸如用于藥物組合物的緩 沖制劑中。所述抑制劑的固體劑型中可以包括崩解劑。用作崩解劑的物質(zhì)
包括但不限于淀粉，包括基于淀粉組分的商用崩解劑，Explotab。淀 粉乙醇酸鈉、安伯菜特(Amberlite)、羧甲基纖維素鈉、超支鏈淀粉 (ultramylopectin)、藻酸鈉、明膠、橙皮、酸性羧曱基纖維素、天然 海綿體、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉和膨潤土均可用作藥物組合物的崩 解劑。其它崩解劑包括不溶性陽離子交換樹脂。包括粉狀樹膠(例如 瓊脂)、刺梧桐樹膠或西黃蓍膠等在內(nèi)的粉狀樹膠可用作崩解劑和粘 合劑。藻酸及其鈉鹽也可用作崩解劑。可用粘合劑將所述治療藥粘結(jié)在一起形成硬片劑，包括源自天 然產(chǎn)物的物質(zhì)，例如阿拉伯膠、西黃蓍膠、淀粉和明膠。其它的粘 合劑包括結(jié)晶纖維素、纖維素衍生物例如甲基纖維素(MC)、乙基纖 維素(EC)和羧曱基纖維素(CMC)、阿拉伯樹膠、玉米淀粉和/或明膠。 聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羥丙基曱基纖維素(HPMC)都可用于醇性溶 液中以將所述治療藥制粒。在制劑過程中，為防止粘結(jié)，在治療藥的制劑中可以包括潤滑 劑?？蓪櫥瑒┳鳛橹委熕幒蜎_模之間的一層使用，它們包括但不 限于硬脂酸(包括其鎂鹽和鈣鹽)、聚四氟乙烯(PTFE)、液體石蠟、 植物油、滑石粉和蠟類。還可以使用可溶性潤滑劑，例如十二烷基 硫酸鈉、十二烷基硫酸鎂、各種分子量的聚乙二醇、聚乙二醇4000 和聚乙二醇6000?？杉尤胫鲃?，該助流劑在制劑過程中能改進(jìn)藥物流動性質(zhì)， 并能在壓片過程中幫助重新整理。合適的助流劑包括淀粉、滑石粉、 氧化硅和水合硅鋁酸鹽。為幫助將所述治療藥溶解在水性環(huán)境中，可加入作為濕潤劑的 表面活性劑?？梢允褂锰烊换蚝铣傻谋砻婊钚詣?。表面活性劑可以 包括陰離子洗滌劑，例如十二烷基硫酸鈉、琥珀酸二辛酯磺酸鈉和 磺酸二辛酯鈉?？梢允褂藐栯x子洗滌劑，例如苯扎氯胺和千索氯胺。 可用于所述藥物制劑中的非離子型洗滌劑包括聚月桂乙二醇400，聚 氧乙烯(40)硬脂酸酯，聚氧乙烯氫化蓖麻油10、 50和60,單硬脂酸 甘油酯，聚山梨醇酯40、 60、 65和80，蔗糖脂肪酸酯，曱基纖維素 和羧曱基纖維素。這些表面活性劑可以單獨或者以不同比例混合物 形式存在于本發(fā)明的藥物組合物中?？蒯屩苿┛赡苁亲詈玫?。可將本發(fā)明抑制劑與惰性基質(zhì)混合， 該基質(zhì)允許通過擴(kuò)散或濾取機(jī)制釋放，例如樹膠。還可將慢慢降解 的基質(zhì)加入到所述藥物制劑中，例如藻酸鹽或多糖。另一種控釋的 形式是基于Oros治療系統(tǒng)(Alza Corp.)的方法，即將藥物包入半透膜 內(nèi)，該半透膜允許水進(jìn)入并由于滲透作用將抑制劑化合物通過一個 小口釋放。某些腸溶衣也具有延遲釋放作用。所述藥物組合物中還可以包括著色劑和矯味劑。例如，可將本 發(fā)明抑制劑制成制劑(例如通過脂質(zhì)體或微球體包封)，然后再包封于 可食用產(chǎn)品中，例如含有著色劑和矯味劑的冷凍飲料。還可將所述治療藥以薄膜包衣片形式給藥。用于本發(fā)明藥物組 合物包衣的非腸衣物質(zhì)包括曱基纖維素、乙基纖維素、輕乙基纖維 素、甲基幾乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧曱 基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇。用于本發(fā)明藥物組合物 包衣的腸衣物質(zhì)包括鄰苯二曱酸酯?？捎没旌衔镔|(zhì)以提供最適宜的 薄膜包衣。薄膜包衣的制備可在包衣鍋中、冷流化床中或者通過壓 縮包衣進(jìn)4亍。可將組合物以固體、半固體、液體或氣體形式給藥，或者組合 物可以是干粉形式，例如凍干形式?？蓪⑺鏊幬锝M合物包裝為便 于給藥的形式，包括例如膠嚢劑、嚢劑、扁嚢劑、凝膠劑、紙劑、 片劑、膠嚢劑、軟膏劑、顆粒劑、溶液劑、吸入劑、氣霧劑、栓劑、 小球劑、丸劑、藥片、錠劑或其它本領(lǐng)域已知的形式。包裝的類型 一般依據(jù)所要求的給藥途徑而定。還可以包括可植入的緩釋制劑， 例如經(jīng)皮給藥制劑。本發(fā)明的方法包括通過各種途徑給予抑制劑化合物?？蓪⑦@些 藥物組合物經(jīng)注射或者經(jīng)口服、鼻內(nèi)、經(jīng)皮或其它給藥形式給藥，
包括如通過靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、肌內(nèi)、乳房內(nèi)、腹膜內(nèi)、氣管內(nèi)、鞘內(nèi)、 眼內(nèi)、眼球后、肺內(nèi)(例如霧化藥物)或皮下注射(包括供長期釋放的 儲庫給藥，例如包埋在脾囊下、腦或者角膜內(nèi))；通過舌下、肛門、 陰道或者通過手術(shù)植入給藥，例如包埋在脾嚢下、腦或者角膜內(nèi)。 治療可由單劑量或一段期間內(nèi)的多劑量組成。 一般而言，本發(fā)明方 法涉及給予有效量的本發(fā)明抑制劑以及如上所述的藥學(xué)上可接受的 稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、助劑和/或載體。本領(lǐng)域人員清 楚，所選擇的給藥途徑可決定所給予化合物的物理形式。
一方面，本發(fā)明提供口服給予本發(fā)明藥物組合物的方法?？诜?br> 固體劑型一般參見Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版，1990 (Mack Publishing Co. Easton PA 18042),笫89章。固體劑型包括片劑、 膠嚢劑、丸劑、藥片或錠劑。還可將脂質(zhì)體或類蛋白包嚢用于制備 本發(fā)明組合物的制劑(例如美國專利第4,925,673號中報告的類蛋白微 球)。脂質(zhì)體包嚢可以包括用各種聚合物衍生的脂質(zhì)體(例如美國專利 第5,013,556號)。 一般來說，所述制劑包括本發(fā)明化合物和惰性成分， 惰性成分防止在胃中降解，并使生物學(xué)活性物質(zhì)在腸內(nèi)的釋放。
所述抑制劑可以以粒徑約1mm的顆粒或小球體形式的細(xì)小多顆 粒包括在制劑中。膠囊給藥的制劑物質(zhì)還可以是粉末、輕壓制塞或 者甚至是小片形式。膠嚢劑可通過壓縮制備。
本發(fā)明還包括肺部給予本發(fā)明的抑制劑。根據(jù)本發(fā)明這個方面， 可將抑制劑經(jīng)吸入給予哺乳動物肺部，然后穿過肺上皮細(xì)胞內(nèi)襯進(jìn) 入血流。
本發(fā)明應(yīng)用中包括為肺部給予治療產(chǎn)品所設(shè)計的多種機(jī)械裝 置，包括但不限于霧化吸入器、定量吸入器和粉末吸入器，所有這 些都是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的。適于本發(fā)明實施的市售裝置的某 些具體實例有Ultravent霧化吸入器，由Mallinckrodt, Inc., St. Louis, Missouri制造；Acorn H霧4匕吸入器，由Marquest Medical Products, Englewood, Colorado制造；Ventolin定量吸入器，由 Glaxo Inc.,
Research Triangle Park, North Carolina制造；Spinhaler 4分末吸入器， 由Fisons Corp., Bedford, Massachusetts制造。
所有這些裝置都要求使用適于分配本發(fā)明化合物的制劑。通常， 用于治療時每種制劑對于所用類型的裝置都是特定的，除了稀釋劑 以外，還可以包括使用適當(dāng)?shù)膾伾鋭?、助劑?或載體。
當(dāng)在肺部給藥方法中使用時，為了將本發(fā)明抑制劑最有效地給 予整個肺，最好將本發(fā)明抑制劑制成樣么粒形式，平均粒度小于10pm (微米)，例如0.5-5^m。
適用于使用霧化吸入器(或者是噴氣式或者是超聲式)的制劑一般 包括溶解于水中的本發(fā)明化合物，濃度范圍約為每毫升溶液0.1-100mg抑制劑、每毫升溶液l-50mg抑制劑或者每毫升溶液5-25mg 抑制劑。所述制劑還可以包括緩沖劑。霧化吸入器用制劑還可以包 括表面活性劑，其作用是降低或防止由在形成氣霧劑時溶液霧化所 引起的抑制劑表面誘發(fā)的聚集。
定量吸入器用制劑r"般包括借助表面活性劑懸浮于拋射劑中的 包含本發(fā)明抑制劑的微細(xì)粉末。拋射劑可以是為該目的所使用的任 何常規(guī)物質(zhì)，例如氯氟碳、氬氯氟碳、氬氟碳或烴，包括三氯氟曱 烷、二氯二氟曱烷、二氯四氟乙醇和1,1,1,2-四氟乙烷或它們的組合。 合適的表面活性劑包括脫水山梨醇三油酸酯和大豆卯磷脂。油酸還 可用作表面活性劑。
從粉末吸入裝置中分配的制劑包括含本發(fā)明化合物的微細(xì)干 粉，并且還可以包括增量劑或稀釋劑，例如乳糖、山梨醇、蔗糖、 甘露醇、海藻糖或木糖醇，其用量是促進(jìn)從該裝置中分配粉末的量， 例如占制劑重量的50-90%。
本發(fā)明化合物的鼻內(nèi)給藥也包含在內(nèi)。鼻內(nèi)給藥是在將所述治 療產(chǎn)品給予鼻內(nèi)后，抑制劑直接進(jìn)入血流，而不必使產(chǎn)品在肺內(nèi)停 留。鼻內(nèi)給藥用制劑可以包括右旋糖酐或環(huán)糊精。還可以包括通過 其它粘膜輸送的給藥方式。
可以通過細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游锏葮?biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法，測定PI3KS
選擇性化合物的毒性和治療功效，例如測定LD50 (使群體50%致死 的劑量)和ED50(使群體50。/。治療上有效的劑量)。另外，可在再用其 它療法(例如放射療法、化療藥和抗血管生成藥)處理的細(xì)胞培養(yǎng)物或 實驗動物中確定這些信息。
在實施本發(fā)明方法時，所提供的藥物組合物的劑量范圍以日劑 量給出，或者以更長或更短的時間間隔的等劑量給出，例如隔天1 次、每周2次、每周l次或者每天2-3次，通常日劑量為每千克體重 1 pg ~ 1000mg化合物，O.lmg/kg ~ 100mg/kg、 O.lmg/kg ~ 50mg/kg和 lmg/kg-20mg/kg?？蓪⒁种苿┙M合物最初以大劑量給予，接著通過 連續(xù)輸注保持藥物的治療循環(huán)水平。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)良好 醫(yī)療實踐和具體患者的臨床癥狀，將很容易最優(yōu)化有效劑量和給藥 方案。給藥頻率將根據(jù)藥物的藥代動力學(xué)參數(shù)和給藥途徑而定。最 佳藥物制劑由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)給藥途徑和所需劑量來確定。參 見例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第 18版(1990, Mack Publishing Co., Easton, PA 18042),第1435-1712頁，其結(jié)合到本發(fā)明 中作為參考。這些制劑可影響所給予的藥物的物理狀態(tài)、穩(wěn)定性、 體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率。根據(jù)給藥途徑，按體重、體表面積 或器官大小，可以計算出合適的劑量。本領(lǐng)域普通人員按照常規(guī)方 法，無需進(jìn)行過多的實驗，尤其是根據(jù)本發(fā)明所公開的劑量信息和 測試法、以及在上述人體臨床試驗中觀察到的藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)，就 可以做出必要的精確計算，以確定有關(guān)上述各制劑的合適治療劑量。 通過利用測定血濃度劑量的已建立的測試方法，并且結(jié)合適當(dāng)?shù)闹?治醫(yī)師在考慮各種可改變藥物作用的因素，可以確定合適的劑量， 所述因素例如藥物的比活、損傷的嚴(yán)重程度和患者的反應(yīng)性、患者 的年齡、疾病、體重和飲食、任何感染的嚴(yán)重程度、給藥時間和其 它臨床因素。隨著研究的進(jìn)行，有關(guān)適當(dāng)?shù)膭┝克胶透鞣N疾病和 癥狀的治療持續(xù)時間的進(jìn)一步信息隨之獲得。
附圖簡述


圖1表示從用pllOS抑制劑IC87114治療的OVA敏化/攻擊小鼠 中分離的BAL液或?qū)φ战M小鼠的BAL液的炎性細(xì)胞浸潤計數(shù)(總細(xì) 胞和細(xì)胞組分分類計數(shù))。對巨噬細(xì)胞(Mac)、淋巴細(xì)胞(Lym)、嗜中 性粒細(xì)胞(Neu)和嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)進(jìn)行計數(shù)。各條柱分別表示平均 值士SEM,得自6個獨立的實驗。#， p<0.05,相對于SAL+SAL; *, p<0.05，相對于OVA+SAL。
圖2表示整個肺部炎癥，定義為在用IC87114治療的OVA敏化 /攻擊小鼠或?qū)φ战M小鼠中，支氣管周圍和血管周圍炎癥評分的平均 值。各條柱分別表示平均值士SEM,得自6個獨立的實驗。#， p<0.05, 相對于SAL+SAL; *， p<0.05,相對于OVA+SAL。
圖3表示在用IC87114治療的無限制的意識清醒的OVA敏化/ 攻擊小鼠或?qū)φ战M小鼠中，最后一次攻擊后72小時，所測得的呼吸 道對霧化醋曱膽堿的反應(yīng)性。在測定Penh值期間，每次霧化后3分 鐘讀取呼吸參數(shù)。數(shù)據(jù)表示平均值士SEM,得自6個獨立的實驗。#, p<0.05，相對于SAL+SAL; *, p<0.05,相對于OVA+SAL。
實施例
提供下面的實施例用于舉例說明本發(fā)明，但并不是對本發(fā)明范 圍的限制。
實施例1
選擇性PI3K5抑制劑抑制肥大細(xì)胞脫粒
肥大細(xì)胞在呼吸道的過敏性炎癥中十分重要。肥大細(xì)胞活化由 FcsRl受體的抗原/IgE交聯(lián)、補(bǔ)體成分和細(xì)胞因子活化所介導(dǎo)，從而 導(dǎo)致預(yù)形成的組胺和蛋白酶從分泌顆粒中自發(fā)地釋放。然后，這些 被激活的細(xì)胞開始轉(zhuǎn)錄、翻譯并分泌促炎細(xì)胞因子和趨化因子，導(dǎo)
致炎癥力口重。
已經(jīng)表明，非特異性PI3-激酶抑制劑(例如渥曼青霉素)能抑制大 鼠嗜堿性白血病細(xì)胞(RBL-2H3)中的肥大細(xì)胞脫粒(Kitani等，說ocAem 5/，/2" Cowm，. 183:48-54,1992)。但是，特異性PI3-激酶亞基 在調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞脫粒中的作用并不清楚[Tkaczyk等，丄歷o/. C/zew.， 278: 48474-84 (2003); Windmiller等，飾/. C/2復(fù),278: 11874-8 (2003)]。
為測定PI3-激酶pllOS亞基在調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞活性中的作用，評價 特異性pl IOS抑制劑調(diào)節(jié)人或小鼠骨髓衍生的肥大細(xì)胞脫粒的能力。
將得自小鼠股骨的骨髓細(xì)胞在含有小鼠IL-3的RPMI 1640培養(yǎng) 基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為"。C ,在潮濕95%空氣/5% C02中，該RPMI 1640培養(yǎng)基補(bǔ)充了 10%熱滅活FBS (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)、2mM谷氨酰胺和50)uM 2-ME [Saito, H. F.等，J. /www朋/. 138: 3927-3934 (1987)〗。培養(yǎng)5周后，得到純度95%以上的肥大細(xì)胞 (骨髓衍生的肥大細(xì)胞(BMMC))。
BMMC與0.5-1 jig/ml抗二硝基苯基(DNP) IgE mAb —起孵育過 4艾使其致敏，用Tyrode緩沖液(112mM NaCl、 2.7mM KCl、 0.4mM NaH2P04、 1.6mMCaCl2、 lmMMgCl2、 10mM Hepes [pH 7.5〗、0.05% 明膠、0.1。/。葡萄糖)洗滌1次，再重懸于Tyrode緩沖液至1 x 107細(xì) 胞/ml,與pll0S抑制劑或溶媒對照(0.3。/。 DMSO)—起孵育30分鐘。 然后將細(xì)胞通過多價抗原、0.1-100ftg/ml人血清白蛋白的DNP綴合 物(DNP-HSA)刺激45分鐘。將細(xì)胞懸液短暫離心，使Tyrode溶液與 細(xì)月包沉淀分離開來。通過酶免疫測定法(Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI),測定45分鐘刺激過程中分泌至Tyrode ;容液中的組
在下的％組胺釋放)/(對照細(xì)胞的％組胺釋放))x 100%。
ELISA結(jié)果表明，與溶媒對照組相比，用IC87114 (5inM)預(yù)處理 的肥大細(xì)胞使細(xì)胞上清液中組胺的量減少約40%，并由此增加細(xì)胞
沉淀中所檢測的組胺的量。這證明pllOS激酶的抑制降低從肥大細(xì)胞 儲存顆粒中釋放的組胺的量，這具有作為降低由FcsRI介導(dǎo)的肥大細(xì) 胞活化中釋放組胺的有效療法的效用。
實施例2
選擇性PBK5激酶抑制劑通過肥大細(xì)胞減少炎性細(xì)胞因子的分泌
肥大細(xì)胞FcsRI交聯(lián)的一個重大作用是誘導(dǎo)大量炎性細(xì)胞因子， 例如IL-2、 IL-3、 IL-4、 IL-6、 IL-13、 GM-CSF和TNF-oc?，F(xiàn)已知TNF-ot 和IL-2都在諸如哮喘和變態(tài)反應(yīng)中的那些晚期超敏化反應(yīng)中發(fā)揮作 用[Galli等，F(xiàn)w"(i3we"to/ /wmw"o/ogy,第4版，Paul編著，Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA, (1998);第1127-1174頁]。為測定 pi 10S激酶抑制劑對肥大細(xì)胞激活的下游作用的影響，研究選擇性
BMMC與0.5-lpg/ml抗二硝基苯基(DNP) IgE mAb —起孵育過 夜使其致敏，在IL-3不存在下，用BMMC培養(yǎng)基洗滌1次，再以1 x 10"田胞/ml重懸于同一培養(yǎng)基中。將細(xì)胞與pllOS抑制劑或溶媒對照 (0.3% DMSO)—起孵育30分鐘，然后通過多價抗原、l-100ng/ml人 血清白蛋白的DNP綴合物(DNP-HSA)刺激20小時。收集細(xì)胞上清 液，通過ELISA評價炎性細(xì)胞因子水平(BD PharMingen或Endogen)。 所測定的細(xì)胞因子包括TNF-a、 IL-6、 IL-2和粒細(xì)胞/單核細(xì)胞-集落 刺激因子(GM-CSF)。
結(jié)果表明，用10ng/ml抗原刺激并向肥大細(xì)胞中加入僅2|iM的 IC87114,能將肥大細(xì)胞分泌的TNF-a的量降低至不能檢測的水平。 另外，100ng/ml抗原加上3^Vl抑制劑能使活化肥大細(xì)胞的TNF-cc產(chǎn) 生抑制85%。
加入pllOS激酶抑制劑后對IL-6水平的評價證明類似的影響。 向活化肥大細(xì)胞(10ng/ml抗原)中加入IC87411,對IL-6產(chǎn)生呈現(xiàn)劑 量依賴性降低作用，從無抑制劑下的6000 pg/ml降低到50fiM抑制
劑存在下的大約2000 pg/ml IL-6。抗原(100ng/ml)激活后，也對從pl 105 敲除小鼠中分離的骨髓肥大細(xì)胞評價IL-6分泌水平。加入pllOS抑 制劑(最高10pM)，對敲除細(xì)胞的IL-6水平無影響，表明所述抑制劑 的作用是通過抑制蛋白激酶pllOS同工型來實現(xiàn)的。加入pllOS抑制 劑之后，由活化肥大細(xì)胞分泌的GM-CSF也被抑制大約45%。
也可用抗原刺激的BMMC測定炎性細(xì)胞因子IL-2的水平。用 10ng/ml抗原激活的BMMC表明，在加入pllOS抑制劑時，對IL-2 分泌呈現(xiàn)劑量反應(yīng)性抑制，在20iuM抑制劑存在下，降低對照組值的 大約10 pg/ml至< 4 pg/ml IL-2,降低IL-2分泌的2.5倍。
趨化因子在吸引細(xì)胞進(jìn)入炎癥部位，從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)方面起 重要作用。可以使用多分析物概況分析技術(shù)(Multi-Analyte Profile Technology, Rules-Based Medicine, Inc. Austin, TX)，評價抗原激活的 BM肥大細(xì)胞在pllOS抑制劑存在和不存在下的趨化因子產(chǎn)生。pllOS
細(xì)胞趨化因子水平的約57%抑制、淋巴細(xì)胞趨化因子的約37%抑制、 巨噬細(xì)胞衍生的趨化因子(MDC)分泌的約60%抑制以及巨噬細(xì)胞-炎 性蛋白MIP-lot和MIP-ip水平的約35°/。抑制。
這些結(jié)果表明，pllOS的特異性抑制作用能降低所分泌的炎性細(xì) 胞因子和趨化因子的量，這是肥大細(xì)胞表面FcsRI與抗原交聯(lián)的結(jié) 果。在這些刺激的肥大細(xì)胞中靶向并抑制pll0S活化的能力，為治療 肥大細(xì)胞相關(guān)疾病的改進(jìn)、特異性方法提供了一種方法，并且為減 量調(diào)節(jié)異常肥大細(xì)胞活化提供了 一種有用的治療藥物。
實施例3
P1105抑制劑特異性抑制抗原活化肥大細(xì)胞中的AKT磷酸化
PI3K pllOS參與復(fù)雜信號傳矛途徑，導(dǎo)致磷脂酶C活化和4丐流 入細(xì)胞內(nèi)。Akt是PI3激酶的下游靶標(biāo)，在響應(yīng)PBK激活后在絲氨 酸243處被磷酸化。該磷酸化事件對Akt的激酶活性是必不可少的。
以前一直認(rèn)為Akt激活與細(xì)胞因子的分泌相關(guān)，所述細(xì)胞因子源自 激活的大鼠嗜石威性白血病細(xì)胞或從酪氨酸激酶敲除小鼠中分離的細(xì)胞[Kitaura等，丄~. Med 192: 729-39 (2000)〗。使用LY294002在某 些細(xì)胞類型(例如內(nèi)皮細(xì)胞)中對la類PI3K的廣泛抑制作用已表明， 不僅能降低Akt響應(yīng)于TNF-a的磷酸化，而且能在非細(xì)胞因子刺激 細(xì)胞中起作用，而這些脂質(zhì)對細(xì)胞游動性和存活均十分必要[參見 Madge等，J.腸/. C/j亂,275: 15458-15465 (2000)]。由于Akt活化在 各種不同的生化途徑中出現(xiàn)，測定PI3K pllOS在活化肥大細(xì)胞中觸 發(fā)Akt磷酸化之中的作用顯得十分必要。
為評價PI3K抑制劑對下游信號傳導(dǎo)的作用，將BMMC用一劑 量范圍的抗原刺激，并與0、 2pM、 5)LiM、 20|iM或50pM抑制劑的 IC87114 —起按上述方法進(jìn)行培養(yǎng)。將細(xì)胞按如上所述方法裂解，通 過蛋白質(zhì)印跡測定幾個pll05下游效應(yīng)物的磷酸絲氨酸或磷酸酪氨酸 水平。蛋白質(zhì)印跡分析中所用的抗體包括Akt pS473; 3-磷酸肌醇 依賴性激酶(PDKl)pS241; pERK; pJNK; Lyn pY396和Bruton酪氨 酸激酶(Btk) pY223?？贵w購自Cell Signaling Technology (Beverly, MA)、 Upstate Biotechnology (Lake Placid, NY)、 Zymed和Santa Cruz Biotechnology 。
蛋白質(zhì)印跡分析表明，抗原刺激10分鐘后，低至5|uM的pllOS 抑制劑就能降低Akt磷酸化，而抗原刺激30分鐘后，顯著抑制磷酸 化?？乖碳?分鐘后，50jdM抑制劑劑量再一次顯著抑制S243 Akt 磷酸化，而抗原刺激后10分鐘或30分鐘，能完全消除4^酸化。對 其它下游效應(yīng)物的分析表明，抗原/IgE刺激誘導(dǎo)PDKl、 ERK、 JNK、 Lyn和Btk的磷酸化，但加入pll05抑制劑并不影響任何這些分子的 磷酸化水平。另外，細(xì)胞全部的酪氨酸或絲氨酸磷酸化不受pll0S抑 制劑的影響。所測試的所有分子的蛋白質(zhì)水平保持穩(wěn)定，表明Akt 磷酸化的降低特殊原因是對pl 105活性的抑制。
這些結(jié)果表明，在活化肥大細(xì)胞中選擇性抑制PI3K pll0S,特 異性地降低Akt磷酸化的水平，而不會影響其它相關(guān)下游酪氨酸或 絲氨酸激酶的磷酸化水平。這表明用于調(diào)節(jié)參與肥大細(xì)胞細(xì)胞因子分泌的Akt的pllOS選擇性抑制劑，通過降低細(xì)胞浸潤到炎癥部位，為在已發(fā)生的肥大細(xì)胞病中調(diào)節(jié)正在出現(xiàn)的炎癥提供了一種有效的 治療方法，或者可在諸如變態(tài)反應(yīng)或哮喘等疾病中發(fā)揮預(yù)防性作用， 以預(yù)防免疫反應(yīng)的發(fā)生。實施例4變應(yīng)原誘發(fā)的呼吸道炎癥導(dǎo)致肺組織中P1105活性的增加在鼠變應(yīng)性哮喘模型中，在抗原攻擊后刺激PI3K活性，給予兩 種廣譜PI3K抑制劑渥曼青霉素或LY294002,會減輕炎癥和呼吸道 超反應(yīng)性(AHR) (Ezeamuzie等，爿w J "e^^> O" Q^e A/ed 164: 1633-39,2001; Kwak等，J. C/,'"./"ve對l 11: 1083-92, 2003)。但是，這些抑 制劑不能區(qū)別四種I類PI3K(Davies等，倫c/^w丄351: 95-105, 2000; Sadhu等，丄/薩,/., 170: 2647-54, 2003),并還能廣泛影響表達(dá)這些 激酶的多種類型細(xì)胞。先前研究已表明，pll05在B和T細(xì)胞抗原受 體信號傳導(dǎo)和激活(Okkenhaug等，5t,e"ce 297: 1031-34, 2002; Clayton 等，196: "3-63, 2002)以及嗜中性粒細(xì)胞遷移和激活(Puri 等，說ood 103: 3448-56, 2004; Sadhu等，^oc/ em S/op/2>w尺^ Cowm, 308:764-69, 2003)中起重要作用。另外，據(jù)報道，pllOS對變應(yīng)原IgE 誘發(fā)的肥大細(xì)胞脫粒和血管通透性十分重要(Ali等，Atowre 431: 1007-11, 2004)。該項研究未確定阻斷這種白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞特異性PI3K 同工型pllOS本身的活性是否足以減輕過敏性炎癥和AHR。為測定 pllOS在哮喘發(fā)病中的作用，采用動物哮喘模型研究pll05抑制劑給 藥后作用。無鼠特異性病原體的8-10周齡雌性BALB/c小鼠購自韓國化學(xué) 技術(shù)研究所(the Korean Research Institute of Chemistry Technology, Daejon, Korea)。整個試驗中，將小鼠飼養(yǎng)在層流箱中，保持隨意進(jìn) 食標(biāo)準(zhǔn)實驗食物。該項研究中使用的所有實驗動物都遵循Chonbuk 國立大學(xué)醫(yī)學(xué)院公共動物管理及使用委員會(the Institutional Animal Care and Use Committee of the Chonbuk National University Medical School)批準(zhǔn)的方案。按文獻(xiàn)所述方法(Kwak等，出處同上)，在笫1天和第14天，通過腹膜內(nèi)注射在lmg氫氧化鋁(Pierce Chemical Co., Rockford, IL)中乳化的20jug卵白蛋白(OVA) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO),注射總體積為200^1,使小鼠致敏。在首次敏化后第21天、 第22天和第23天，用超聲霧化吸入器(NE-U12, Omron， Japan),用 在鹽水中的3% (重量/體積)OVA的氣霧劑(或用鹽水作為對照)，攻 擊小鼠。給每只動物氣管內(nèi)滴注給予體積為50|li1的用0.9% NaCl稀 釋的IC87114 (0.1mg/kg體重/天或lmg/kg體重/天)或DMSO (溶媒對 照)兩次，其中第一次在第21天(用OVA首次呼吸道攻擊前1小時)， 第2次在第23天(用OVA最后一次呼吸道攻擊后3小時)。依次采用 單因素ANOVA和Fisher檢驗，進(jìn)行所有的統(tǒng)計學(xué)比較。運用非配 對學(xué)生氏t檢驗(u叩aired Student's t test),求出各組間的顯著性差異。 將統(tǒng)計學(xué)顯著性設(shè)為p < 0.05。在暴露OVA的小鼠中，按先前方法(Kwak等，出處同上)，采用 在蛋白酶抑制劑存在下制備的肺組織勻漿中的蛋白提取物，來測定I 類PI3K活性。使用Bradford試劑(Bio-Rad, Hercules, CA),測定蛋白 質(zhì)濃度，根據(jù)生產(chǎn)商方案(Echdon， Inc., Salt Lake City, UT),通過PIP3 竟?fàn)幮悦该庖邷y定法，定量測定各組織提取物中的PI3K活性。PIP3 水平從大約15 pmol/ml (預(yù)攻擊)增加至約75 pmol/ml (1小時)，在24 小時增加至大約100 pmol/ml,在48小時和72小時增加至約160 pmol/ml，表明在吸入OVA之后，與預(yù)攻擊階段相比，I類PI3K活 性分別增加大約4.6倍、6.1倍、9.5倍和9.6倍。相比之下，在吸入 鹽水之后，未發(fā)現(xiàn)PI3K活性顯著變化。這些激酶的激活一直與Akt的Ser-473的-粦酸化關(guān)聯(lián)，而所述磷 酸化是Akt酶促激活的關(guān)鍵事件(Alessi等，CWr. 7: 2H-69, 1997)。通過蛋白質(zhì)印跡測定Akt水平。將肺組織勻漿中的蛋白提取 物(30|ag/道)進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠(Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)電泳，電泳轉(zhuǎn)移到PVDF膜(Immobilon-P; Millipore, Billenca, MA)上，然后與上述磷酸絲氨酸抗體于4°C孵育過夜。沖艮 據(jù)蛋白質(zhì)印跡檢測結(jié)果，與接受吸入鹽水的對照組動物相比，與PI3K 活性增加一致的是，吸入OVA后72小時，肺組織中的p-Akt蛋白 水平也有所增加?？侫kt蛋白水平未發(fā)現(xiàn)顯著變化。氣管內(nèi)給予選 擇性pllOS抑制劑IC87114,能阻斷Akt磷酸化。該磷酸化水平與鹽 水對照水平類似，表明pllOS能對變應(yīng)原誘發(fā)的Akt活化中總體I類 PI3K活性產(chǎn)生顯著影響。雖然PIP3形成和Akt磷酸化均表明，PI3K家族在變態(tài)反應(yīng)和哮 喘中發(fā)揮作用，但給予本文所述的pllOS特異性抑制劑表明，對變態(tài) 反應(yīng)和哮喘重要的PI3K是pll0S。實施例5P110S對BAL液中OVA誘導(dǎo)的嗜酸性粒細(xì)胞募集產(chǎn)生影響上述實驗確定了 pllOS介導(dǎo)變應(yīng)原誘發(fā)的Akt活化。為確定pllOS 激酶對變應(yīng)原攻擊后嗜酸性粒細(xì)胞募集的作用，評價OVA攻擊的動 物肺部的炎性細(xì)胞數(shù)量。按以上實施例4中所述，給予小鼠卵白蛋白，在最后一次OVA 氣霧劑攻擊后72小時，收集支氣管肺泡灌洗(BAL)液，對總的白細(xì) 胞和不同細(xì)胞分類計數(shù)。最后一次攻擊后72小時，用過量戊巴比妥 鈉(100mg/kg體重/腹膜內(nèi)給予)處死小鼠。刺破大靜脈抽取血樣，離 心。將血清在液氮中急凍，然后在刁(TC下儲存以備IgE測定。如上 所述(Kwak等，出處同上)進(jìn)行BAL。概括地講，暴露胸腔使之?dāng)U張， 然后小心將管子插入氣管內(nèi)，將導(dǎo)管用結(jié)扎線綁緊。向肺內(nèi)慢慢灌 注0.9% NaCl預(yù)熱溶液，再抽出。使用血細(xì)胞計數(shù)器對總BAL細(xì)胞 計It 。
用細(xì)月包離心才幾(Shannon Scientific Ltd., Cheshire, United
Kingdom),根據(jù)離心到載玻片上的BAL細(xì)胞，得出細(xì)胞分類計數(shù)， 然后用Diff-Quik溶液(Dade Diagnostics of Puerto Rico Inc. Aguada, Puerto Rico)處理。兩名獨立的不知情的研究人員用顯微鏡對細(xì)胞進(jìn) 行計數(shù)。在四個不同的隨機(jī)視野，分別數(shù)大約400個細(xì)胞。用這兩 名研究人員得出的平均數(shù)目估計細(xì)胞分類。為測定細(xì)胞因子和白三 烯，將BAL上清液在液氮中急凍，在-70。C下儲存?zhèn)溆?。與對照組鹽水相比，OVA吸入顯著(p < 0.05)增加嗜酸性粒細(xì)胞、 淋巴細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的絕對數(shù)目(圖1)。在攻擊后72小時，與用 溶媒對照處理的小鼠相比，氣管內(nèi)給予IC87114 (0.1mg/kg)能分別使 BAL液中檢測到的嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的數(shù)目 降低79.8%、 63.5%和80%。相比之下，巨謹(jǐn)細(xì)胞的數(shù)目不受IC87114 的影響。在非敏化的對照動物中未發(fā)現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞，而許多嗜酸 性粒細(xì)胞存在于經(jīng)變應(yīng)原處理的小鼠的BAL液中。與溶媒對照組相 比，經(jīng)IC87114處理的小鼠中BAL液所回收的總細(xì)胞數(shù)降低，主要 是因為經(jīng)IC87114處理的小鼠中嗜酸性粒細(xì)胞顯著(p < 0.05)降低所 致。這些結(jié)果表明，pll05活性對過敏炎癥反應(yīng)過程中嗜酸性粒細(xì)胞 募集產(chǎn)生影響。為測定pllOS是否影響OVA誘導(dǎo)的組織嗜酸性粒細(xì)胞增多、粘 液產(chǎn)生和呼吸道炎癥，提取肺組織，然后進(jìn)行組織學(xué)分析。最后一次OVA攻擊后72小時，收集肺組織。處死小鼠，使用 結(jié)扎線，在氣管周圍，給肺和氣管用氣管內(nèi)充填固定液(0.8%福爾馬 林，4%乙酸)。取出肺，將肺組織用10%(體積/體積)中性緩沖福爾馬 -fr固定。樣本脫水，石蠟包埋。為進(jìn)行組織學(xué)^r查，用Leica 2165 型輪轉(zhuǎn)切片機(jī)(Leica model 2165 rotary microtome, Leica Microsystems Nussloch GmbH, Nussloch,德國)，將經(jīng)固定的包埋組織切成4拜切 片，置于載玻片上，脫蠟，用蘇木精2、伊紅-Y (Richard-Allan Scientific, Kalamazoo, MI)和過碘酸-Schiff (PAS)染色。三名獨立的不知情的研 究人員對炎癥評分進(jìn)行分級。按Kwak等(同上)所述，將支氣管周圍
和血管周圍炎癥的程度按主觀等級0-3進(jìn)行評價。當(dāng)未檢測到炎癥時，判定值為0;炎性細(xì)胞偶爾成套時，判定值為1;在大多數(shù)支氣 管或血管周圍有炎性細(xì)胞薄層(l-5個細(xì)胞)時，判定值為2;當(dāng)大多 數(shù)支氣管或血管周圍有炎性細(xì)胞厚層(超過5個細(xì)胞)時，判定值為3。組織學(xué)分析揭示出，在OVA暴露小鼠中，有哮喘樣炎癥的典型 病理學(xué)特征。與鹽水對照相比，OVA暴露小鼠顯示在細(xì)支氣管周圍 區(qū)帶有大量炎性細(xì)胞，在細(xì)支氣管腔有粘液和細(xì)胞碎片聚集。相比 之下，經(jīng)IC87114處理的小鼠顯示在細(xì)支氣管周圍區(qū)帶，富含嗜酸 性粒細(xì)胞的白細(xì)胞浸潤顯著減弱，腔內(nèi)存在的細(xì)胞碎片顯著減少。 另外，將各組的代表性切片用過碘酸-Schiff (PAS)染色，以檢測杯形 細(xì)胞。與對照組相比，OVA暴露的小鼠呈現(xiàn)呼吸道嚴(yán)重杯形細(xì)胞增 生，經(jīng)IC87114處理后明顯降低。與鹽水吸入后評分相比，OVA吸 入后72小時，支氣管周圍區(qū)、血管周圍區(qū)以及整個肺部的炎癥評分 顯著增加(P < 0.05)(圖2)。給予pllOS抑制劑，可使OVA吸入后觀 察到的肺部炎癥增加降低50%以上。這些結(jié)果表明，p 110 5抑制劑顯著降低變應(yīng)原誘發(fā)的白細(xì)胞流 入、呼吸道炎癥和杯形細(xì)力包增生。實施例6P110S抑制劑對變應(yīng)原謗發(fā)的呼吸道炎癥中 細(xì)胞因子和趨化因子的影響已知支氣管組織中嗜酸性粒細(xì)胞聚集和其后的激活在變應(yīng)性呼 吸道炎癥的病理中發(fā)揮關(guān)鍵性作用(Busse等，A^"g/JA/W344: 35062, 2001; Humbles等，S"e"ce 305: 1776-79, 2004)。嗜酸性粒細(xì)胞移行到 呼吸道，是一個多步驟過程，由Th2細(xì)胞因子(IL-4、 IL-5和IL-13) 協(xié)調(diào)進(jìn)行，通過特異性趨化因子(例如嗜伊紅粒細(xì)胞趨化因子)并且結(jié) 合粘附分子(例如VCAM-1和VLA-4 (10， ll))共同協(xié)調(diào)。IL-13是呼 吸道上皮細(xì)胞中嗜伊紅粒細(xì)胞趨化因子表達(dá)的有效誘導(dǎo)物(Tigani等,Ji^a/Twaco/ 433: 217-23, 2001)。 已知Th2細(xì)胞因子在誘發(fā)過敏性炎癥反應(yīng)中有重要的作用，因 此對接受pl 105抑制劑或溶媒對照的BAL液以及OVA攻擊的小鼠的 肺組織中的IL-4、 IL-5和IL-13濃度進(jìn)行測定。IC87114對細(xì)胞因子蛋白水平的影響根據(jù)生產(chǎn)商方案(IL-ip、 TNF-a、 IL-4和IL-5; Endogen, Inc., Wobum, MA; IL-13和RANTES; R&D Systems, Inc.， Minneapolis, MN),通過酶免疫測定法，定量測定BAL液上清中的IL-ip、 TNF-a、 IL-4、 IL-5、 IL-13和RANTES濃度。在這些測定中，IL-1(3、 TNF-a、 IL-4、 IL-5、 IL-13和RANTES的檢出下限分別是3 pg/ml、 10 pg/ml、 5 pg/ml、 5 pg/ml、 1.5 pg/ml和2 pg/ml。
在肺組織中，通過蛋白質(zhì)印跡法檢測到的所有三種IL-4、 IL-5、 IL-13細(xì)胞因子濃度，以及通過ELISA檢測BAL液，與鹽水攻擊后 所檢測到的各濃度相比，發(fā)現(xiàn)OVA攻擊誘導(dǎo)顯著(p < 0.05)增加。 IC87114顯著(p < 0.0》降低肺組織和BAL液中這些細(xì)胞因子的濃度 增力口。
酶免疫測定法揭示出，與鹽水吸入后的水平相比，OVA吸入后 72小時，BAL液中的IL-l(3和TNFa水平也顯著(p〈0.05)增加，從對 照組動物的大約100 pg/ml TNFa和15 pg/ml IL-1(3增加至大約280 pg/ml TNFa和30 pg/ml IL-ip。 IC87114使這些促炎細(xì)胞因子的水平 增加降低50%以上，下降至大約l40 pg/ml TNFoc和15 pg/ml IL-ip。 這些細(xì)胞因子的其中 一個反應(yīng)是誘導(dǎo)白細(xì)胞-內(nèi)皮粘附分子。事實上， OVA吸入后72小時，肺組織中ICAM-1和VCAM-1蛋白水平顯著(p <0.05)增加，給予IC87114后，這些水平被顯著降低。
IC87114對OVA敏化/攻擊小鼠的肺組織和BAL液中嗜伊紅粒細(xì)胞 趨化因子和RANTES蛋白水平的影響
蛋白質(zhì)印跡分析揭示出，與鹽水對照組相比，OVA吸入后72 小時，肺組織中趨化因子嗜伊紅粒細(xì)胞趨化因子和RANTES的蛋白 質(zhì)水平顯著(p < 0.05)增加。給予IC87114會使這些趨化因子的水平 增加降低50%以上。另外，酶免疫測定分析揭示出，經(jīng)IC87114處 理，OVA吸入后72小時，BAL液中RANTES的水平增加也4皮顯著(p <0.05)降低。IC87114對BAL液中血清IgE水平和LTC4釋放的影響IL-4和IL-13對指導(dǎo)B細(xì)胞生長、分化和IgE的分泌十分重要 (Emson等，A/ed 188: 399-404, 1998)。 IgE的生物學(xué)活性通過肥 大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞上的高親和性IgE受體(FceRI)介導(dǎo)。FcsRI的 交聯(lián)觸發(fā)多種信號傳導(dǎo)級聯(lián)，從而導(dǎo)致細(xì)胞脫粒和激活(Nadler等，A/v /麵畫/ 76: 325-55, 2000; Kawakami等，胸7 ev /細(xì)歸/ 2: 77386, 2002)。為測定IC8 7114能否改變小鼠體內(nèi)OVA特異性Th2應(yīng)答，在OVA 攻擊后72小時，分析循環(huán)IgE抗體水平。按文獻(xiàn)所述方法(MacLean等，J/www"o/ 165: 6568-75, 2000),通 過捕獲ELISA測定OVA特異性IgE水平。概括地講，微量滴定板用 2)ug/ml純化單克隆抗小鼠IgE (BD PharMingen, San Diego, CA)包被。 用PBS-10% FCS封閉后，向滴定板中加入合適的PBS-10% FCS血清 樣本稀釋液，室溫下孵育2小時。用PBS-Tween洗滌后，向各孔中 加入生物素化OVA (10pg/ml)和HRP-綴合的鏈霉親和素，然后孵育 1小時。洗滌各板，然后加入HRP底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺底物 (TMBS, Sigma Chemical Co.)。室溫下避光孵育30分鐘后，在孩i量培 養(yǎng)板讀板儀(Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA)上，在450證處讀 板。按類似于檢測OVA特異性IgE的方法，通過捕獲ELISA測定總 血清IgE。使用生物素化大鼠抗小鼠IgE (PharMingen)檢測所捕獲的 IgE來替代生物素化OVA。與未處理小鼠(約3ng/ml總IgE,小于lng/ml OVA特異性IgE) 相比，在OVA攻擊的小鼠(約12ng/ml總IgE,約3ng/ml OVA特異 性IgE)的血清中，觀察到總IgE和OVA特異性IgE明顯升高。IC87114 以劑量依賴性方式顯著(P < 0.0》降低總循環(huán)IgE水平(約6ng/ml總IgE 和小于1.5ng/ml OVA特異性IgE)。與對總IgE水平抑制作用一致的 是，O.lmg/kg和lmg/kg的IC87114分別顯著(p < 0.05)降低OVA特 異性IgE水平63%和72%。最后一次OVA攻擊后72小時，獲取BAL液，測定LTC4。根 據(jù)生產(chǎn)商方案(Cayman Chemical Co., Ann Arbor, MI)，通過酶免疫測 定法，定量測定BAL液上清中的LTC4水平。該測定法中，LTQ的 檢出下限為10pg/ml。OVA敏化/攻擊小鼠中LTC4W BAL液水平(約40 pg/ml)要比僅 接受鹽水的小鼠中LTQ的BAL液水平(約13 pg/ml)高3.1倍(p < 0.05,相對于鹽水)。IC87114 (O.lmg/kg和lmg/kg)分別顯著(p < 0.05) 抑制LTC4水平37。/。和50%，分別使LTC4水平降低至約26 pg/ml和 21 pg/ml。用溶媒對照處理的OVA敏化/攻擊小鼠的BAL液中LTC4 的含量，與鹽水對照組的沒有顯著性差異。實施例7Pl 105的抑制減弱呼吸道超反應(yīng)性(AHR)上述結(jié)果表明，給予pll0S特異性抑制劑，能有效地抑制與呼吸 道炎癥有關(guān)的很多副作用。為了測定IC87114對實驗動物模型中發(fā) 生AHR的影響，誘發(fā)經(jīng)OVA處理的小鼠發(fā)生AHR,然后用pll0S 抑制劑進(jìn)行治療。連續(xù)3天每天30分鐘用3% OVA氣霧劑攻擊的敏化BALB/c小 鼠因吸入醋曱膽堿而發(fā)生AHR。最后一次卵白蛋白攻擊后3天，按 文獻(xiàn)所述方法(Kwak等，出處同上)，采用整體體積描記術(shù)(All Medicus Co., Seoul, Korea),測定無限制的意識清醒動物中的呼吸道反應(yīng)性。 概括地講，在整體體積描記術(shù)中，測定對關(guān)養(yǎng)在箱子內(nèi)的意識 清醒、自由活動的小鼠的呼吸功能，即允許箱子內(nèi)的動物自由活動， 同時測定它們的呼吸功能。將各箱子連接一個傾斜流量調(diào)節(jié)器，以 在試驗過程中提供平穩(wěn)、穩(wěn)定流量的清新空氣。連接各箱子的傳感 器用于檢測動物呼吸時出現(xiàn)的壓力變化。當(dāng)箱子壓力/時間曲線過零 點時，通過確立開始吸氣和結(jié)束吸氣，記錄吸氣和呼氣。通過箱子的開始。將吸氣時間(TI)定義為從吸氣開始至吸氣結(jié)束的時間；將呼 氣時間(TE)定義為從吸氣結(jié)束至下 一次吸氣開始的時間。將負(fù)方向或 正方向中的一個呼吸過程中出現(xiàn)的最大箱子壓力信號分別定義為吸氣壓力峰值(PIP)或呼氣壓力峰值(PEP)。將每10次呼吸記錄外推以 確定每分鐘呼吸頻率。將松弛時間(Tr)定義為壓力衰減至總呼氣壓力 信號的36%的時間(呼氣時箱子壓力信號下面積)。因此，這可用作體 積信號衰減至被動呼氣時峰體積的3 6 %的 一 種相關(guān)時間常數(shù)(RC)。 在支氣管收縮過程中，信號中的主要改變出現(xiàn)在早期呼氣過程中， 因此導(dǎo)致箱子壓力信號波形的改變。所測的其它參數(shù)包括潮氣量 (ml)、呼吸頻率(每分鐘呼吸次數(shù))、分鐘量(潮氣量x呼吸頻率，m1/ 分鐘)、吸氣時間(秒)、呼氣時間(秒)、吸氣流峰值(ml/秒)和呼氣流峰 值(ml/秒)。以Penh增加百分率評價呼吸道反應(yīng)性(Helmann等，J Aew,> O" Care Mec/ 156: 766-75, 1997; Chong等，J P/wr環(huán)aco/ 7bx/'co/ A/"/20血39: 163-68, 1998)。荻得基線讀數(shù)和暴露于霧化鹽水或醋曱膽 堿(2.5-50mg/ml)后的讀數(shù)。每次霧化后，收集3分鐘數(shù)據(jù)并求平均值。 根據(jù)生產(chǎn)商方案，根據(jù)下列公式計算增大的停頓(Penh):(呼吸時間/ 松弛時間-l) x (呼氣流峰值/吸氣流峰值)。結(jié)果表示為用各濃度醋曱 膽堿攻擊后Penh增力tf的百分?jǐn)?shù)，而將基線Penh (用鹽水攻擊后)表示 為100%。與鹽水攻擊組相比，OVA攻擊組對醋甲膽/威吸入的反應(yīng)中，呼，來確定吸氣
吸道反應(yīng)性明顯增加(圖3)。OVA攻擊前，給予OVA敏化小鼠IC87114 顯示，在測試的所有醋曱膽堿水平上測得的Penh顯著(p < 0.05)減少， 由此表明pllOS在免疫介導(dǎo)的反應(yīng)中發(fā)揮作用，導(dǎo)致體內(nèi)呼吸道超反 應(yīng)性。這些結(jié)果與pllOS抑制后的Th2細(xì)胞因子產(chǎn)生、組織嗜酸性粒 細(xì)胞增多和肥大細(xì)胞激活的降低有關(guān)。過敏性呼吸道炎癥和AHR發(fā)生與多種炎性細(xì)胞和各種各樣的介 質(zhì)有關(guān)。上述結(jié)果表明，在小鼠哮喘模型中，pllOS抑制作用能有效 地降低OVA誘導(dǎo)的Th2細(xì)胞因子產(chǎn)生、肺嗜酸性粒細(xì)胞增多、血清 IgE水平、杯形細(xì)胞增生和AHR。這些發(fā)現(xiàn)表明，pllOS在變應(yīng)性哮 喘的發(fā)病機(jī)理中起重要作用，因此pllOS特異性抑制劑是用于治療哮 喘和呼吸道超反應(yīng)性的有效治療藥。實施例8P1105抑制劑對大鼠肥大細(xì)胞脫粒的影響肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞均表達(dá)IgE的高親和性受體FcsRI,并 對與IgE相關(guān)速發(fā)型超敏反應(yīng)和變應(yīng)性疾病起關(guān)鍵性作用。結(jié)合FceRI 的IgE與多價抗原的交聯(lián)啟動肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的激活，導(dǎo)致 從這些細(xì)胞中脫粒。為確定p 110S抑制劑對肥大細(xì)胞/嗜石威性粒細(xì)胞 脫粒的影響，在pllOS特異性抑制劑存在下，測定因大鼠嗜堿性白血 病細(xì)胞(RBL-2H3)的脫粒而釋放的5-羥色胺。讓RBL-2H3細(xì)胞在培養(yǎng)基中的單層培養(yǎng)物中生長。在75cm2組 織培養(yǎng)瓶中，讓RBL細(xì)胞在"ml含有16% FCS的Eagle極限必要 培養(yǎng)基(EMEM-16)中生長至匯合。通過抽吸取出培養(yǎng)基，細(xì)胞用3ml 胰蛋白酶-EDTA洗滌，以除去血清中存在的胰蛋白酶抑制劑。然后 加入胰蛋白酶-EDTA, 37。C保持5分鐘，以取出貼壁細(xì)胞。從培養(yǎng) *瓦中取出細(xì)胞，用EMEM-16洗滌，然后以1000 rpm離心5分鐘進(jìn) 行收集。細(xì)胞進(jìn)行第二次洗滌，將細(xì)胞沉淀重懸于EMEM-16中。然 后將濃度為4 x 105細(xì)胞/ml的細(xì)胞接種到24孔板中，與25|iil lmCi/ml 3H標(biāo)記的5-羥色胺(終濃度0.5pCi/ml)和l嗎/ml抗DNP IgE —起于 37。C培養(yǎng)過夜。吸出各孔中的細(xì)胞培養(yǎng)基，通過向該孔中加入500^1 的PBS洗滌細(xì)胞2次，將板倒置在一疊紙巾上。加入終體積為200)^1 的PBS，細(xì)胞在37。C水浴中平衡^ 2分鐘，向各孔中加入10|ul DNP-白蛋白(終濃度10ng/ml)， 37。C孵育10-30分鐘。取出各孔中的緩沖液，轉(zhuǎn)移到液體閃爍管中，終止反應(yīng)。各孔 用500|ill% Triton X-100的PBS溶液洗滌2次，室溫下將育IO分鐘， 將液體轉(zhuǎn)移到測量管中進(jìn)行測量。向各樣品管中加入10ml液體閃爍 混合液，用液體閃爍計數(shù)器對放射性水平進(jìn)行計數(shù)，計算細(xì)胞所釋 放的5-羥色胺百分?jǐn)?shù)。加入適量的pllOS抑制劑IC87114或者適量的 第二種pllOS特異性抑制劑，然后與樣品一起培養(yǎng)，以測定各劑量的 功效。測得的對照組和pllOS處理細(xì)胞中的放射性水平表明，濃度為2.5 孩史摩爾的IC87114表現(xiàn)出50%的5-羥色胺釋放被抑制。這些結(jié)果表明，pllOS特異性抑制劑能有效地降低Fc-受體交聯(lián) 介導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫粒，從而為降低變態(tài)反應(yīng)期間的這些影響提供了 一種方法。實施例9P1105抑制劑對I型超敏反應(yīng)的影響如上所述，pllOS抑制劑能有效地降低由IgE交聯(lián)介導(dǎo)的肥大細(xì) 胞脫粒水平。肥大細(xì)胞脫粒在介導(dǎo)體內(nèi)變態(tài)反應(yīng)和其它I型超敏反應(yīng) 中起重要作用。為研究pllOS抑制劑對體內(nèi)肥大細(xì)胞脫粒的影響，使 用皮膚超敏動物模型。為進(jìn)行敏化，剃掉Lewis大鼠背毛，真皮內(nèi)注射鹽水或抗DNP 單克隆IgE(1.25-25ng, 50 。 IgE敏化后48小時，靜脈注射lml 含有抗原(lng/ml DNP-BSA)和0.5% Evan藍(lán)染料的鹽水溶液，30分 鐘后，給大鼠實施安樂死。使用測徑器，測量注射部位滲塊大小，
對皮膚水腫進(jìn)行評價。切下疹塊周圍的皮膚，按文獻(xiàn)所述方法(Inagaki 等，1986),測定滲出染料的量。在給予抗原之前l(fā)小時，給大鼠口服 單劑量的IC87114 (20mg/kg或60mg/kg)或PEG-400 (用作溶媒對照)。 抗原攻擊前30分鐘，腹膜內(nèi)注射酮替芬(10mg/kg)。在測量滲塊大小 之后，立即抽取血樣，按文獻(xiàn)所述方法(Puri等，祝ood 103: 3448-3456, 2004),通過液相色i普/質(zhì)譜法，測定液-液提取物來確定IC87114的血 漿濃度。I型超敏反應(yīng)對IC87114呈現(xiàn)出劑量依賴性反應(yīng)，在20mg/kg劑 量下，降低至對照組的約70%,在60mg/kg劑量下，降低至對照組 的約55%。陽性對照酮替芬(10mg/kg)使過敏反應(yīng)降低至對照組的約 35%。這些結(jié)果表明，在敏化動物中，pllOS在介導(dǎo)I型超敏反應(yīng)中發(fā) 揮作用，說明給予pllOS抑制劑，可以減輕或預(yù)防I型過敏反應(yīng)。實施例10P1105抑制劑對人肥大細(xì)胞脫粒的影響為測定P110S抑制劑對人肥大細(xì)胞的影響，從人臍帶血中分離 出細(xì)胞，使其分化成肥大細(xì)胞譜系，然后測定P110S抑制劑存在下的脫粒和組胺釋放。 .在甲基纖維素存在或不存在下，按照Hsieh等(J Erp A/ed 193: 123-33, 2001)提出的方案，分離出CD34+人臍帶血細(xì)胞，然后使用干 細(xì)胞因子和IL-4使其分'化(Iida等，97: 1016-22, 2001)。將細(xì)胞 培養(yǎng)約5周，然后以1000 rpm離心3分鐘進(jìn)行收集。將細(xì)胞重懸于 含有10,Lig/ml IgE的新鮮培養(yǎng)基(RPMI、 IMDM或曱基纖維素)中，濃 度為1 x 10s細(xì)胞/ml。使細(xì)胞致敏5天，然后測定經(jīng)抗IgE交聯(lián)的激 活作用。為評價經(jīng)IgE交聯(lián)的肥大細(xì)胞活化，以1000 rpm離心2分鐘收 集細(xì)胞，然后用Dulbecco-磷酸緩沖鹽溶液(D-PBS)洗滌細(xì)胞2次。將
細(xì)胞重懸于D-PBS中，濃度為2.5 x 10s細(xì)胞/ml。向95^1細(xì)胞中加 入5^1 200pM的IC87U4或酮洛芬的3% DMSO溶液，然后將細(xì)胞 于37。C培養(yǎng)30分鐘。30分鐘后，加入2jul按l:20稀釋的抗IgE，終 濃度為1:1000 IgE,然后在抗IgE存在下，將細(xì)胞培養(yǎng)45分鐘。然 后4要如上所述方法對細(xì)月包進(jìn)行離心，收集上清液。向細(xì)月包中加入等 量的D-PBS,將細(xì)胞凍融3次，使細(xì)胞裂解。將裂解細(xì)胞以10,000rpm 離心4分鐘，通過組胺ELISA對組胺的釋放進(jìn)行分析。對細(xì)胞上清液和細(xì)胞沉淀中的組胺進(jìn)行測定。在該實^瞼中， IC87114 pllOS抑制劑在lOiaM濃度時降低組胺釋放約18% (以100% 總對照釋放的標(biāo)準(zhǔn)化為基準(zhǔn))。這些結(jié)果表明，pllOS對人肥大細(xì)胞及鼠肥大細(xì)胞均有影響，說 明pllOS抑制劑是組胺釋放和其它肥大細(xì)胞活性的有效調(diào)節(jié)劑，因此 可用于治療患有由異常肥大細(xì)胞活性介導(dǎo)的疾病或病癥的患者。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，可以根據(jù)上述說明性實施例，對本發(fā)明 進(jìn)行各種修改和改變。因此，本發(fā)明應(yīng)當(dāng)僅受所附權(quán)利要求書的限制。
權(quán)利要求
1. 一種抑制肥大細(xì)胞活性的方法，該方法包括下述步驟給予 個體磷酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑，其用量有效抑制所述 活性。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中被抑制的肥大細(xì)胞活性是月巴大細(xì)胞 遷移。
3. 權(quán)利要求1的方法，其中被抑制的肥大細(xì)胞活性是肥大細(xì)胞 脫粒。
4. 權(quán)利要求1的方法，其中被抑制的肥大細(xì)胞活性是肥大細(xì)胞 增殖。
5. 權(quán)利要求l的方法，其中被抑制的肥大細(xì)胞活性是細(xì)胞因子、 趨化因子或生長因子的分泌。
6. 權(quán)利要求l的方法，其中被抑制的肥大細(xì)胞活性是細(xì)胞因子、 趨化因子或生長因子的表達(dá)。
7. 權(quán)利要求5或6的方法，其中所述細(xì)胞因子是腫瘤壞死因子-a (TNF畫a)。
8. 權(quán)利要求5或6的方法，其中所述細(xì)胞因子是白介素-6 (IL-6)。
9，權(quán)利要求5或6的方法，其中所述趨化因子是嗜伊紅粒細(xì)胞趨化因子、MIP-la、 MIP-lp、 MDC-1、 MCP-1或淋巴細(xì)胞趨化因子。
10. —種降低與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病中淋巴細(xì)胞浸 潤到炎癥部位的方法，該方法包括下述步驟給予個體磷酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑，其用量有效降低或防止淋巴細(xì)胞浸潤 到所述炎癥部位，并且有效降低由所述個體的肥大細(xì)胞引起的淋巴 細(xì)胞募集信號傳導(dǎo)。
11, 一種治療或預(yù)防個體的與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病 的方法，該方法包括下述步驟給予磷酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇 性抑制劑，其用量有效治療或預(yù)防與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的 疾病。
12. 權(quán)利要求11的方法，其中被抑制的肥大細(xì)胞活性是肥大細(xì) 胞遷移、肥大細(xì)胞增殖、肥大細(xì)胞脫?；蛘哂煞蚀蠹?xì)胞表達(dá)或分泌 細(xì)胞因子、趨化因子或生長因子。
13. 權(quán)利要求ll的方法，其中所述疾病是IgE介導(dǎo)的疾病。
14. 權(quán)利要求11的方法，其中所述疾病是哮喘、變態(tài)反應(yīng)或自 身免疫性疾病。
15. 權(quán)利要求14的方法，其中所述變態(tài)反應(yīng)是I型超敏反應(yīng)、 變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎或變應(yīng)性哮喘。
16. 權(quán)利要求14的方法，其中所述自身免疫性疾病是大皰性類 天皰瘡或慢性蕁麻滲。
17. 權(quán)利要求11-16中任一項的方法，其中給予所述PI3KS選擇 性抑制劑，其用量有效抑制所述肥大細(xì)胞中的Akt磷酸化。
18. 權(quán)利要求11-16中任一項的方法，該方法還包括給予所述個 體免疫調(diào)節(jié)劑。
19. 權(quán)利要求18的方法，其中按多劑量給予所述免疫調(diào)節(jié)劑。
20. 權(quán)利要求18的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑是糖皮質(zhì)激素或 皮質(zhì)類固醇、免疫抑制藥、抗組胺藥、氨基水楊酸鹽、類固醇激素、 非甾體抗炎藥(NSAID)、擬交感神經(jīng)藥或鎮(zhèn)痛藥。
21. 權(quán)利要求18的方法，其中所述免疫抑制藥是硫唑嘌呤、環(huán) 孢菌素、環(huán)磷酰胺、曱氨蝶呤或青霉胺。
22. 權(quán)利要求18的方法，其中所述糖皮質(zhì)激素是可的松、地塞 米松、氫化可的松、曱潑尼龍、潑尼松龍、潑尼松或布地奈德。
23. 權(quán)利要求11-16中任一項的方法，其中按多劑量給予所述 PI3KS選擇性抑制劑。
24. —種降低或防止患有與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病的 個體的肥大細(xì)胞增殖的方法，該方法包括給予所述個體治療有效量的聯(lián)合療法，該聯(lián)合療法包括應(yīng)用磷 酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑。
25. —種降低或防止患有與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病的 個體的淋巴細(xì)胞浸潤到炎癥部位的方法，該方法包括給予所述個體治療有效量的聯(lián)合療法，該聯(lián)合療法包括應(yīng)用磷 酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑。
26. —種增加免疫調(diào)節(jié)劑的治療指數(shù)的方法，該免疫調(diào)節(jié)劑用于 給予個體以治療與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病，該方法包括給予所述個體聯(lián)合療法，該聯(lián)合療法包括應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑和磷 酸肌醇3-激酶S (PI3KS)選擇性抑制劑，該抑制劑的用量有效增加免 疫調(diào)節(jié)劑的治療指數(shù)。
27. 權(quán)利要求24-26中任一項的方法，其中所述疾病是哮喘、變木-點^ 6身條諒,M:癥庇 一,、 h, lj /,、,, 一 。
28. 權(quán)利要求24-26中任一項的方法，其中所述變態(tài)反應(yīng)是I型 超敏反應(yīng)、變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎或變應(yīng)性哮喘。
29. 權(quán)利要求24-26中任一項的方法，其中所述自身免疫性疾病 是大皰性類天皰瘡或慢性蕁麻疹。
30. 權(quán)利要求1-16或24-26中任一項的方法，其中選擇性PI3KS抑制劑是具有下式(I)結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合 物其中A是任選取代的含有至少兩個氮原子的單環(huán)或雙環(huán)體系， 并且該體系中的至少 一個環(huán)為芳環(huán)；X選自C(Rb)2、 CH2CHRb和CH二C(Rb);Y不存在，或者選自S、 SO、 S02、 NH、 O、 C(-O)、 OC(O)、C(-O)O和NHC(=0)CH2S;R1和R2獨立選自氫、C"6烷基、芳基、雜芳基、卣素、NHC(=0)CV3 亞烷基N(Ra)2、 N02、 ORa、 CF3、 OCF3、 N(Ra)2、 CN、 OC(=0)Ra、 C(=0)Ra、 C(=0)ORa、芳基ORb、 Het、 NRaC(=0)CV3亞烷基C(=0)ORa、 芳基OC,.3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(=0)Ra、 CM亞烷基C(=0)ORa、 OCM 亞烷基C(=0)ORa 、 CM亞烷基OCM亞烷基C(=0)ORa 、 C(=0)NRaS02Ra、 Cw亞烷基N(Ra)2、 C2.6亞烯基N(Ra)2、 C(=0)NRaCM 亞烷基ORa、 C(=0)NRaCM亞烷基Het、 0C24亞烷基N(Ra)2、 OCM 亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、 OC"4亞烷基Het、 OC^亞烷基ORa、 OC2^ 亞烷基NRaC(=0)ORa 、 NRaCM亞烷基N(Ra)2 、 NRaC(=0)Ra 、 NRaC(=0)N(Ra)2、 N(S02C,—4烷基)2、 NRa(S02CM烷基)、S02N(Ra)2、 OS02CF3、 CV3亞烷基芳基、CM亞烷基Het、 &.6亞烷基ORb、 亞烷基N(Ra)2、 C(K))N(Ra)2、 NHC(-O)Cw亞烷基芳基、C^環(huán)烷基、 C3.8雜環(huán)烷基、芳基OC!.3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(=0)Rb、麗C(-O)Cw 亞烷基C3.8雜環(huán)烷基、NHQH3)Cw亞烷基Het、 OCM亞烷基OCM 亞烷基C(=0)ORb、 C(=0)CM亞烷基Het和NHC(=0)閨代CV6烷基；或者W和W結(jié)合在一起形成5元或6元環(huán)中3個或4個原子的 亞烷基或亞烯基鏈部分，該5元或6元環(huán)任選含有至少一個雜原子；R3選自任選取代的以下基團(tuán)氬；Cw烷基；03.8環(huán)烷基；C3.8 雜環(huán)烷基；CM亞烷基環(huán)烷基；(32-6烯基；(^.3亞烷基芳基；芳基CV3 烷基；C(=0)Ra;芳基；雜芳基；C(=0)ORa; C(=0)N(Ra)2; C(=S)N(Ra)2; S02Ra; S02N(Ra)2; S(=0)Ra; S(=0)N(Ra)2; C(=0)NRaCM亞烷基ORa; C(=0)NRaCM亞烷基Het; C(=0)CM亞烷基芳基；C(=0)CM亞烷基 雜芳基；任選被一個或多個以下基團(tuán)取代的Cw亞烷基芳基卣素、 S02N(Ra)2、 N(Ra)2、 C(=0)ORa、 NRaS02CF3、 CN、 N02、 C(=0)Ra、 ORa、 CM亞烷基N(Ra)2和OCM亞烷基N(Ra)2; CM亞烷基雜芳基； Cw亞烷基Het; CM亞烷基C一O)CM亞烷基芳基;CM亞烷基C一O)CM 亞烷基雜芳基；CM亞烷基C(=0)Het; 亞烷基C(=0)N(Ra)2; CM亞烷基OR" Cw亞烷基NRaQH3)Ra; CM亞烷基OCM亞烷基ORa; CM亞烷基N(Ra)2; CM亞烷基C(=0)ORa;和CM亞烷基OCM亞烷 基C(=0)ORa;Ra選自氫、6烷基、(^3-8環(huán)烷基、C3—8雜環(huán)烷基、Cw亞烷基N(Re)2、芳基、芳基Cw烷基、Cw亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基&.3 烷基和&.3亞烷基雜芳基；或者兩個Ra結(jié)合在一起形成任選含有至少一個雜原子的5元環(huán)或6元環(huán)；Rb選自氫、C,—6烷基、雜C!.3烷基、Cw亞烷基雜Cw烷基、芳基雜Cw烷基、芳基、雜芳基、芳基Cw烷基、雜芳基c^烷基、cv3亞烷基芳基和CV3亞烷基雜芳基；Re選自氫、C^6烷基、C^環(huán)烷基、芳基和雜芳基；和Het是5元或6元飽和或部分或全部不飽和的雜環(huán)，該雜環(huán)含有至少一個選自氧、氮和硫的雜原子，并且任選被CM烷基或者C—0)ORa取代。
31.權(quán)利要求1-16或24-26中任一項的方法，其中所述選擇性 PI3KS抑制劑選自下列化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物(1) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-氯苯基)-6,7-二曱氧基-3//-喹唑啉-4-酮；(2) 2-(6-氨基嘌呤-o-基曱基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(3) 2-(6-氨基嘌呤-0-基曱基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3//-喹唑啉-4-酮；(4) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-6-氯-3-(2-氯苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(5) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3//-喹唑啉-4-酮；(6) 2-(6-氨基嘌呤-o-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(7) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-氯苯基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(8) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(9) 2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3//-喹唑啉-4-酮；(10) 5-氯-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3-鄰甲苯基-3//-*唑啉畫4-酮；(11) 5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(12) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(13) 3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(14) 5-氯-3-(2-曱氧基苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-壹唑啉 -4-酮；(15) 3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(16) 3-(2-氯苯基)-6,7-二曱氧基-2-(9//-。票呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹 哇啉-4曙酮；(17) 6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(18) 3-(2-氯苯基)-8-三氟曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑 啉-4-酮；(19) 3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-377-苯并[8]會唑啉-4誦酮；(20) 6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(21) 8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(22) 3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(23) 3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(24) 3-(2-氯苯基)-6-雍基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(25) 5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(26) 3-(2-氯苯基)-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(27) 3-(2-氯苯基)-6,7-二氟-2-(9/f-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3/7-喹唑啉 國4-酮；(28) 3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(29) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-異丙基苯基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(30) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3/f-喹唑啉-4-酮；(31) 3-(2-氟苯基)-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(32) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-氯-3-鄰曱苯基-3ff-喹唑啉-4-酮；(33) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-氯-3-(2-曱氧基-苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(34) 2-(2-氨基-9//-。票呤-6-基硫烷基曱基)-3-環(huán)丙基-5-曱基-3//-喹唑 啉-4-酮；(35) 3-環(huán)丙基曱基-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(36) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-環(huán)丙基曱基-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(37) 2-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3-環(huán)丙基甲基-5-甲基-3//-p奎"坐啉-4-酮；(38) 5-甲基-3-苯乙基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(39) 2-(2-氨基-9/f-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-5-曱基-3-苯乙基-3/Z-喹唑啉-4誦酮； *(40) 3-環(huán)戊基-5-甲基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑淋-4-酮；(41) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-環(huán)戊基-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(42) 3-(2-氯吡啶-3-基)-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹峻啉一4國酮；(43) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-氯吡啶-3-基)-5-甲基-3//-喹唑啉-4-酮；(44) 3-曱基-4-[5-曱基-4-氧代-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-4//-喹唑 啉-3-基]-苯甲酸；(45) 3-環(huán)丙基-5-曱基-2-(9&嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(46) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-環(huán)丙基-5-甲基-3//-喹唑啉-4-酉同；(47) 5-甲基-3-(4-硝基千基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉 畫4-酮；(48) 3-環(huán)己基-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3//-喹唑啉-4-酮；(49) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-環(huán)己基-5-曱基-3H-喹唑啉-4-酮；(50) 2-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3-環(huán)己基-5-曱基-3//-喹唑 啉-4-酮；(51) 5-曱基-3-(E-2-苯基環(huán)丙基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹 哇淋-4國酮；(52) 3-(2-氯苯基)-5-氟-2-[(9//-嘌呤-6-基氨基)曱基]-3//-喹唑啉-4-酮；(53) 2-[(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)曱基]-3-(2-氯苯基)-5-氟-3//-喹唑 啉-4-酮；(54) 5-曱基-2-[(9//-。票呤-6-基氨基)曱基]-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(55) 2-[(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)曱基]-5-甲基-3-鄰曱苯基-3//-喹 峻啉-4-酮；(56) 2-[(2-氟-9//-。票呤-6-基氨基)曱基]-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-喹唑 啉-4-酮；(57) (2-氯苯基)-二曱氨基-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(58) 5-(2-千氧基乙氧基)-3-(2-氯苯基)-2-(9//-噤呤-6-基硫烷基曱基)-3//-壹峻啉-4-酮；(59) 6-氨基噤呤-9-甲酸3-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3,4-二氬-唾唑啉-2-基甲酯；(60) 7\43-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3,4-二氫-喹唑啉-2-基曱基]-2-(9//-噤呤-6-基碌^烷基)-乙酰胺；(61) 2-[1-(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)乙基]-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-喹 哇啉_4-酮；(62) 5-曱基-2-[1-(9//-噪呤-6-基氨基)乙基]-3-鄰曱苯基-3//-唾唑啉-4-酮；(63) 2-(6-二甲氨基噤呤-9-基甲基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//^奎唑啉-4-酮；(64) 5-曱基-2-(2-曱基-6-氧代-l,6-二氬-嘌呤-7-基曱基)-3-鄰曱苯基-3//一p奎峻啉-4-酮；(65) 5-曱基-2-(2-曱基-6-氧代-1,6-二氫-噪呤-9-基甲基)-3-鄰曱苯基-3//-會峻淋-4-酮；(66) 2-(氨基-二曱氨基嘌呤-9-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3/f-喹唑 啉-4-酮；(67) 2-(2-氨基-9//-。票呤-6-基硫烷基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-* 峻啉-4-酮；(68) 2-(4-氨基-l,3,5-三嗪-2-基硫烷基曱基)-5-甲基-3-鄰曱苯基-3//-唾哇啉-4-酮；(69) 5-曱基-2-(7-曱基-7//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3-鄰曱苯基-3/f-喹 峻啉-4誦酮；(70) 5-曱基-2-(2-氧代-1,2-二氫-嘧啶-4-基硫烷基曱基)-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(71) 5-曱基-2-嘌呤-7-基曱基-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(72) 5-甲基-2-嘌呤-9-基甲基-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(73) 5-曱基-2-(9-曱基-9//-。票呤-6-基硫烷基曱基)-3-鄰甲苯基-3//-* P坐啉-4-酮；(74) 2-(2,6-二氨基-嘧啶-4-基硫烷基甲基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-喹 峻啉-4-酮；(75) 5-曱基-2-(5-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-"]嘧啶-7-基硫烷基甲基)-3-鄰甲苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(76) 5-曱基-2-(2-曱硫基-9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3-鄰曱苯基-3//-唾唑淋-4-酮；(77) 2-(2-羥基-9//-噤呤-6-基硫烷基曱基)-5-甲基-3-鄰曱苯基-3/f-p奎 峻啉-4-酮；(78) 5-甲基-2-(1 -曱基-1//-咪唑-2-基硫烷基甲基)-3-鄰曱苯基-3/f-唾 哇啉-4-酮；(79) 5-曱基-3-鄰曱苯基-2-(1//-[1,2,4]三唑-3-基硫烷基曱基)-3//-喹 哇啉-4-酮；(80) 2-(2-氨基-6-氯-嘌呤-9-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(81) 2-(6-氨基。票呤-7-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-壹唑啉-4-酮；(82) 2-(7-氨基-l,2,3-三唑并[4，5-《嘧啶-3-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯 基-3//-喹唑啉-4-酮；(83) 2-(7-氨基-l,2,3-三唑并[4，5-，密啶-l-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯 基_3//-會唑啉-4-酮；(84) 2-(6-氨基-9//-嘌呤-2-基硫烷基甲基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-喹^坐淋_4-酮；(85) 2-(2-氨基-6-乙基氨基-嘧啶-4-基硫烷基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯 基一3/f-p奎唑啉-4-酮；(86) 2-(3-氨基-5-曱硫基-1,2,4-三唑-1-基曱基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-唾峻淋-4-酮；(87) 2-(5-氨基-3-甲硫基-1,2,4-三唑-1-基曱基)-5-曱基-3-鄰甲苯基-3//-會唑淋-4-酮；(88) 5-曱基-2-(6-曱基氨基噤呤-9-基曱基)-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(89) 2-(6-千基氨基噤呤-9-基甲基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(90) 2-(2,6-二氨基噤呤-9-基曱基)-5-曱基-3-鄰甲苯基-3/7-p奎唑啉-4-酮；(91) 5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3-鄰甲苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(92) 3-異丁基-5-曱基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(93) ,{2-[5-曱基-4-氧代-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-4//-喹唑啉-3-基]-苯基}-乙酰胺；(94) 5-曱基-3-(E-2-曱基-環(huán)己基)-2-(9//-。票呤-6-基硫烷基曱基)-3//-p奎唑啉-4-酮；(95) 2-[5-曱基-4-氧代-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-4/f-喹唑啉-3-基]-苯甲酸；(96) 3-{2-[(2-二曱氨基乙基)曱基氨基]苯基} -5-甲基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉-4-酮；(97) 3-(2-氯苯基)-5-甲氧基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑啉 -4-酮；(98) 3-(2-氯苯基)-5-(2-嗎啉-4-基-乙氨基)-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基)-3//-喹唑淋-4-酮； 〔99)3-千基-5-曱氧基-2-(9//-嘌呤-6-基硫烷基曱基"/f-喹唑啉-4-酮；:100) 2-(6-氨基噪呤-9-基曱基)-3-(2-千氧基苯基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；:101) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-羥基苯基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；:102) 2-(1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)乙基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3/^ 壹哇淋-4-酮；:103) 5-曱基-2-[l-(9F-噪呤-6-基氨基)丙基]-3-鄰曱苯基-3//-喹唑啉-4-酮；:104) 2-(l-(2-氟-9/f-嘌呤-6-基氨基)丙基)-5-曱基-3-鄰甲苯基-3//-喹 峻啉-4-酮；:10》2-(1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)丙基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3//-p奎p坐啉-4-酮；:106) 2-(2-千氧基-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)乙基)-5-曱基-3-鄰曱苯基-3/f-壹p坐啉-4-酮；:107) 2-(6-氨基噪呤-9-基曱基)-5-曱基-3-{2-(2-(1-甲基吡咯烷-2-基)-乙氧基)-苯基} -3//-喹唑啉-4-酮； :108) 2-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-3-(2-(3-二甲氨基-丙氧基)-苯基)-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮； :109) 2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-(2-丙-2-炔基氧基苯基)-3//-p奎峻啉-4-酮；:110) 2-{2-[1-(6-氨基嘌呤-9-基曱基)-5-曱基-4-氧代-4//-喹唑啉-3-基]-苯氧基}-乙酰胺； :111) 5-氯-3-(3,5-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；:112) 3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(113) 5-氟-3-苯基-2_[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(114) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹 峻啉-4-酮；(115) 6-氟-3-苯基-2-[1-(9//-噪呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(116) 3-(3,5-二氟-苯基)-5-甲基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-會 峻啉-4-酮；(117) 5-氟-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(118) 3-(2,3-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//陽喹 唑淋-4-酮；(119) 5-甲基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(120) 3-(3-氯-苯基)-5-甲基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-壹唑 啉-4-酮；(121) 5-曱基-3-苯基-2-[(9//-嘌呤-6-基氨基)-曱基]-3//-喹唑啉-4-酮；(122) 2-[(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-3-(3,5-二氣-苯基)-5-曱基-3//-會哇啉-4-酮；(123) 3-{2-[(2-二乙氨基乙基)-曱基-氨基]-苯基}-5-甲基-2-[(9//-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-3//-喹唑啉-4-酮；(124) 5-氯-3-(2-氟-苯基)-2-[(9//-嘌呤-6-基氨基)-曱基]-3//-喹唑啉-4-酮；(125) 5-氯-2-[(9//-噤呤-6-基氨基)-曱基]-3-鄰曱苯基-3//-會唑啉-4-酮；(126) 5-氯-3-(2-氯-苯基)-2-[(附-嘌呤-6-基氨基)-曱基]-3//-喹唑啉-4-酮；(12" 6-氟-3-(3-氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(128) 2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-氯-3-(3-氟-苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；'129) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑啉-4-酮；'130) 2-[1-(2-氟-9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；'131) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹 峻淋-4-酮；132) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱基-3/f-p奎唑啉-4-酮； '133) 3-(2,6-二氟-苯基)-2-[1-(2-氟-9//-噤呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3//-*唑啉-4-酮；'134) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-甲基-2-[1-(7//-吡咯并[2,3-司嘧啶-4-基氨基)-乙基]-3//-會唑啉-4-酮； '135) 2-[卜(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑 啉-4-酮；'136) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(7//-吡咯并[2,3-司嘧啶-4-基氨基)-丙基]-3//一p奎峻淋-4-酮；'137) 2-[1-(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；'138) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-會唑啉-4-酮；'139) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑 啉-4誦酮；'140) 2-[2-千氧基-1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-5-甲基-3-苯基-3//-#峻啉—4-酮；'141) 2-[l-(2-氨基-9/f-嘌呤-6-基氨基)-2-千氧基-乙基]-5-曱基-3-苯基 -3//-唾峻啉-4-酮；142) 2-[2-千氧基-1-(7//-吡咯并[2,3-司嘧啶-4-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯基-3//-查唑啉-4-酮；143) 2-[2-千氧基-1-(2-氟-9//-噤呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑淋-4-酮；'144) 3-(4-氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//"票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；'145) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(4-氟-苯基)-5-曱基-3//-唾哇啉-4誦酮；'146) 3-(4-氟-苯基)-2-[1-(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3//畫奮峻啉一4-酮；'147) 3-(3-氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(7//-吡咯并[2,3-，密啶-4-基氨基)-乙基]-3/f-壹唑啉-4-酮； '148) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(7//-吡咯并[2,3-《嘧啶-4-基氨基)-乙基]-3/7-p套哇淋-4-酮；'149) 3-(4-氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；'150) 2-[1 -(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3-氟-苯基)-5-曱基-3//-唾峻啉-4-酮；:151) 3-(3-氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(7//-吡咯并[2,3-，密啶-4-基氨基)-乙基]-3/f-喹唑啉-4-酮； '152) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基)-吡咯烷-2-基]-3//-喹唑啉-4-酮；'153) 2-[2-羥基-1-(9/^-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑 淋-4-酮；'154) 5-曱基-3-苯基-2-[苯基-(9//-嘌呤-6-基氨基)-曱基]-3H-喹唑啉-4-酮；'155) 2-[(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-苯基-曱基]-5-甲基-3-苯基-3//-喹峻啉曙4-酮；'156) 2-[(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)-苯基-曱基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑 淋-4-酮；(157) 5-曱基-3-苯基-2-[苯基-(7//-吡咯并[2,3-司嘧啶-4-基氨基)-曱基]-3/f-p奎p坐啉-4-酮；(158) 5-氟-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(159) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-氟-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(160) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-氯-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(161) [5-(5-曱基-4-氧代-3-苯基-3,4-二氬-喹唑啉-2-基)-5-(9//-嘌呤-6-基氨基)-戊基]-氨基曱酸芐酯；(162) [5-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-5-(5-曱基-4-氧代-3-苯基-3,4-二 氬-壹唑啉-2-基)-戊基]-氨基曱酸千酯；(163) [4-(5-曱基-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫-喹唑啉-2-基)-4-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丁基]-氨基曱酸芐酯；(164) [4-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-4-(5-曱基-4-氧代-3-苯基-3,4-二 氫-喹唑啉-2-基)-丁基]-氨基甲酸千酯；(165) 3-苯基-2-[l-(9/Z-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3/f-喹唑啉-4-酮；(166) 2-[5-氨基-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-戊基]-5-曱基-3-苯基-3//-喹唑 淋-4-酮；(16" 2-[5-氨基-1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-戊基]-5-甲基-3-苯基-3/f-p查TT坐啉-4-酮；(168) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2,6-二曱基-苯基)-5-甲基-3/f-p奎唑啉-4-酮；(169) 3-(2,6-二曱基-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-噤呤-6-基氨基)-乙基]-3//-p奎哇啉-4-酮；(170) 5-嗎啉-4-基曱基-3-苯基-2-[1-(9//-噤呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹P坐啉—4-酮；(171) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-嗎啉-4-基曱基-3-苯基 _3//-唾唑啉-4-酮；(172) 2-[4-氨基-1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丁基]-5-甲基-3-苯基-3//-喹唑淋-4-酮；6-氟-3-苯基-2-[1-(9/^-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮； '174) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-6-氟-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；'175) 2-[2-叔丁氧基-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯基-3//-p奎哇啉-4-酮；'176) 3-(3-曱基-苯基)-5-甲基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹 峻啉-4-酮；'177) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3-曱基-苯基)-5-甲基-3/f-p查P坐淋-4-酮；'178) 3-(3-氯-苯基)-5-甲基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；'179) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3-氯-苯基)-5-曱基-3/f-p奎峻淋-4-酮；'180) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-2-羥基-乙基]-5-甲基-3-苯基-3//-喹唑淋-4-酮；'181) 2-[1-(2-氨基-9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3-氟-苯基)-3//-喹唑 啉-4曙酮； '182) 2-[1-(2-氨基-9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2,6-二氟-苯基)-3//-喹 峻淋-4-酮；'183) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-氟-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；'184) 5-氯-3-(3-氟-苯基)-2-[1-(9&嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-'4-酮；'185) 2-[1-(2-氨基-9/^嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-氯-3-(3-氟-苯基)-3//-p奎峻淋-4-酮；'186) 3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]_5-三氟曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(187) 3-(2，6-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//"票呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹 p坐啉-4-酮；(188) 3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱基-2國[1-(9//陽噪呤-6-基氨基)-乙基]-3〃-喹 峻啉畫4畫酮；(189) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱 基-377-#唑啉-4-酮；(190) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱 基-3//-*唑啉-4-酮；(191) 3-(3，5-二氯-苯基)-5-曱基-2-[1-(9/^票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-* 哇啉-4-酮；(192) 3-(2,6-二氯-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-噤呤-6-基氨基)-乙基]-3//-唾 峻啉-4-酮；(193) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(2,6-二氯-苯基)-5-曱 基_3//-喹唑啉-4-酮；(194) 5-氯-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基絲)-丙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(195) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-氯-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(196) 5-曱基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丁基]-3//-唾唑啉-4-酮；(197) 2-[l-(2-氨基-9/f-嘌呤-6-基氨基)-丁基]-5-曱基-3-苯基-3H-喹唑 啉-4-酮；(19S) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3,5-二氯-苯基)-5-曱 基_3//-喹唑啉-4-酮；(199) 5-曱基-3-(3-嗎啉-4-基曱基-苯基)-2-[l-(9/f-噪呤-6-基氨基)-乙 基]-3/7-p奎唑啉-4-酮；(200) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-(嗎啉-4-基曱 基-苯基)-3/f-喹唑啉-4-酮；(201) 2-[1-(5-溴-7//-吡咯并[2,3-《嘧啶-4-基氨基)-乙基]-5-甲基-3-苯 基-3//-喹唑啉-4-酮；(202) 5-曱基-2-[1-(5-曱基-7仏吡咯并[2,3-，密啶-4-基氨基)-乙基]-3-苯基-3/Z-p奎唑啉-4-酮；(203) 2-[1-(5-氟-7樂吡咯并[2,3-《嘧啶-4-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-苯 基-3//-*唑啉-4-酮；(204) 2-[2-羥基-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(205) 3-(3,5-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹 峻啉-4-酮；(206) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3-(3,5-二氟-苯基)-5-曱 基_3//-壹唑啉-4-酮；(207) 3-(3，5-二氟-苯基)-2-[1-(9//-噤呤-6-基氨基)-乙基]-3//-查唑啉國4-酮；(208) 2-[1-(5-溴-7//-吡咯并[2，3-《嘧啶-4-基氨基)-乙基]-3-(3-氟-苯 基)_5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(209) 3-(3-氟-苯基)-5-甲基-2-[1-(5-曱基-7//-吡咯并[2,3-，密啶-4-基 氨基)-乙基]-3/f-喹唑啉-4-酮；(210) 3-苯基-2-[1-(9//-噤呤-6-基絲)-丙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(211) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3,5-二氟-苯基)-3//-喹 唾啉-4-酮；(212) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；(213) 6,7-二氟-3-苯基-2-[1-(9//-噤呤-6-基氨基)-乙基]-3//-奮唑啉-4-酮；(214) 6-氟-3-(3-氟-苯基)-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-*唑啉-4-酮；(215) 2-[4-二乙氨基-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丁基]-5-甲基-3-苯基-3//-壹p坐淋-4-酉同；5- 氟-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑淋-4-酮； 3-苯基-2-[1-(9/7-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；6- 氟-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮； 3-(3,5-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹 峻啉_4-酮；5-氟-2-[1-(2-氟-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-苯基-3//-喹唑啉-4-酮；3-(3-氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；5-氯-3-(3,5-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；3-(2,6-二氟-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹 哇啉-4-酮；3-(2,6-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；5-曱基-3-苯基-2-[3，3,3-三氟-1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹 峻啉-4-酮；3-(3-雍基-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹3-(3-甲氧基-苯基)-5-曱基-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3& p奎p生淋-4-酮；3-[3-(2-二曱氨基-乙氧基)-苯基]-5-曱基-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨 基]-乙基)-3H-喹唑啉-4-酮；3-(3-環(huán)丙基曱氧基-苯基)-5-甲基-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨基]-乙 基}-3//-奮唑啉-4-酮；5-曱基-3-(3-丙-2-炔基氧基-苯基)-2-{ 1 -[9//-噪呤-6-基氨基]-乙 基}-3//-會唑啉-4-酮；(231) 2-{1-[2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3-(3-羥基苯基)-5-甲基-3//-喹唑淋-4-酮；(232) 2-{1-[2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3-(3-曱氧基苯基)-5-曱 基國3//-#峻啉-4-酮；(233) 2-{1-[2-氨基-9//-噤呤-6-基氨基]-乙基}-3-(3-環(huán)丙基曱氧基-苯 基)-5-甲基-3//-喹唑啉-4-酮；(234) 2-{1-[2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-5-曱基-3-(3-丙-2-炔基 氧基-苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(235) 3-(3-乙炔基-苯基)-5-曱基-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-3//-會峻啉-4-酮；(236) 3-{5-甲基-4-氧代-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-4//-喹唑淋-3-基}-苯曱腈；(237) 3-{5-曱基-4-氧代-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-4//-喹唑啉-3-基}-苯曱酰胺；(238) 3-(3-乙?；?苯基)-5-曱基-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3//-會p坐啉-4-S同；(239) 2-(3-(5-曱基-4-氧代-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-4//-喹唑啉 -3-基-苯氧基乙酰胺；(240) 5-曱基-2-{1-[9//-嘌呤-6-基氨基]-乙基}-3-[3-(四氫吡喃-4-基氧 基)-苯基]-3//-喹唑啉-4-酮；(241) 3-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-5-甲基-2-[ 1 -(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑淋-4-酮；(242) 6-氟-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-[3-(四氫吡喃-4-基氧基)-苯基]-3//-喹唑啉-4-酮；(243) 3-[3-(3-二曱氨基-丙氧基)-苯基]-5-曱基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨 基)-乙基]-3//-喹唑啉-4-酮；(244) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-(3-乙炔基-苯基)-5-曱 基_3//-喹唑啉-4-酮；(245) 3-{2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-4-氧代-4//-喹 唑啉-3-基}-苯曱腈；(246) 3-{2-[1-(2-氨基-9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-4-氧代-4//-喹 唑啉-3-基}-苯曱酰胺；(247) 3-{2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-4-氧代-4//-喹 唑啉-3-基}-苯曱酰胺；(248) 5-曱基-3-(3-嗎啉-4-基-苯基)-2-[1-(9//-。票呤-6-基氨基)-乙基〗-3//-唾峻淋-4-酮；(249) 2-[1-(2-氨基-9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-5-曱基-3-(3-嗎啉-4-基-苯基)-3//-喹唑啉-4-酮；(250) 2-[1 -(2-氨基-9/7-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-[3-(2-曱氧基-乙氧基)-苯基]-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(251) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3-[3-(2-二曱氨基-乙氧 基)-苯基]-5-曱基-3//-喹唑啉-4-酮；(252) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丁-3-炔基]-5-曱基-3-苯基-3//-p奎哇啉-4-酮；(253) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丁-3-炔基]-5-曱基-3-苯基-3//-p查峻淋-4-酮；(254) 5-氯-3-(3,5-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹唑 啉-4畫酮；(255) 2-[1-(2-氨基-9//-噤呤-6-基氨基)-丙基]-5-氯-3-(3,5-二氟-苯基)-3//-唾峻啉-4-酮；(256) 2-[1-(2-氨基-9//-。票呤-6-基氨基)-乙基]-5-氯-3-(3,5-二氟-苯基)曙 3/7-p套峻啉-4-酮；(257) 3-(3,5-二氟-苯基)-6-氟-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-乙基]-3//-喹峻 啉-4-酮；(258) 5-氯-3-(2,6-二氟-苯基)-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-3//-喹唑 啉-4-酮；(259) 2-[1-(2-氨基-9//-嘌呤-6-基氨基)-丙基]-5-氯-3-(2,6-二氟-苯基)-3/f-p奎p坐淋-4-酮；(260) 5-甲基-3-苯基-2-[1-(9//-嘌呤-6-基氧基)-乙基-3//-喹唑啉-4-酮。
32. —種制品，它包含磷酸肌醇3-激酶S (PI3K5)選擇性抑制劑 和注明權(quán)利要求1-31中任一項的用法的標(biāo)簽。
33. 包含至少一種PI3KS選擇性抑制劑的組合物在制備用于治療 或預(yù)防與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過給予選擇性磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)抑制劑來抑制肥大細(xì)胞活性的方法。本發(fā)明還提供治療或預(yù)防個體的與不需要的肥大細(xì)胞活性有關(guān)的疾病的方法，該方法包括給予有效量的選擇性PI3Kδ抑制劑。
文檔編號A61P37/08GK101123968SQ200580025596
公開日2008年2月13日 申請日期2005年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月4日
發(fā)明者J·S·海弗利克, K·D·普里, N·佩福爾, T·卡瓦卡米, W·蒂諾, Y·卡瓦卡米 申請人:艾科斯有限公司