專利名稱：磷脂酶c的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及對象體內(nèi)磷脂酶Cγ(PLCγ)的活性、表達和/或功能的調(diào)控以及它的用途，如用于治療和預防疼痛。
背景技術：
對用于治療疼痛的新的和改進方法和制劑的需要是醫(yī)學領域突出的一直存在的問題。急性疼痛，例如，與損傷或疾病相關的疼痛，可能是嚴重的，并且對患者的恢復具有關鍵作用。更引人關注的是慢性疼痛，它影響著較大的人群，不僅導致明顯的不舒服，而且可能導致自尊心低下，抑郁，憤怒，并且可能干擾或完全妨礙進行正常的日常活動。
盡管業(yè)已在本領域進行了多項研究，與痛覺相關的很多機制和途徑仍然了解不夠。一直需要提供進行疼痛治療的治療性干預的新方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及治療和/或預防患者疼痛的方法。本發(fā)明還涉及調(diào)節(jié)(例如，抑制)對象體內(nèi)磷脂酶Cγ(PLCγ)的活性、表達和/或功能的方法。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了治療或預防患者疼痛的方法，該方法包括調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了治療或預防患者疼痛的方法，該方法包括給所述對象服用能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了治療或預防患者疼痛的方法，包括給所述對象服用組合物，包括能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑；和可以藥用的載體。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了預防和/或治療對象疼痛的組合物，包括能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑；和可以藥用的載體。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包裝，包括能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑，以及將它用于治療或預防疼痛的說明書。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包括組合物的包裝，包括能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑；和可以藥用的載體，以及將它用于治療或預防疼痛的說明書。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了將用于能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑治療或預防疼痛的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了將能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑用于制備用于治療或預防疼痛的藥品的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了用于治療或預防疼痛的組合物，包括能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑；和可以藥用的載體。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了鑒定或表征治療或預防疼痛的制劑的方法，包括在存在測試制劑的條件下確定PLCγ活性、功能和/或表達。在一種實施方案中，所述方法包括讓所述測試制劑與PLCγ或具有PLCγ的活性、功能和/或表達的細胞接觸；和在存在所述制劑的條件下確定是否存在PLCγ的活性、功能和/或表達的調(diào)控(例如，抑制作用)；其中，所述調(diào)控是所述制劑可用于治療或預防疼痛的指標。
本發(fā)明還提供了一種鑒定或表征用于治療或預防疼痛的化合物的方法，所述方法包括(a)讓測試化合物與包括第一種核酸的細胞接觸，所述核酸包括正常情況下與PLCγ基因結(jié)合的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，可操作地與第二種核酸連接，第二種核酸包括能夠編碼報道蛋白的報道基因；和(b)在存在所述測試化合物的條件下測定報道基因表達或報道蛋白活性是否減弱；其中，所述報道基因表達或報道蛋白活性的減弱是所述測試化合物可用于治療或預防疼痛的指標。
本發(fā)明還提供了一種鑒定或表征治療或預防疼痛的制劑的方法，包括讓所述制劑和PLCγ配體與包括PLCγ的細胞接觸；和在存在所述制劑的條件下，確定是否存在配體與PLCγ結(jié)合的減弱；其中，所述減弱是所述制劑可用于治療或預防疼痛的指標。
本發(fā)明還提供了一種鑒定或表征治療或預防疼痛的制劑的方法，包括讓所述制劑和PLCγ配體與PLCγ接觸；和確定是否存在減弱配體與PLCγ結(jié)合在存在所述制劑的條件下；其中，所述減弱是所述制劑可用于治療或預防疼痛的指標。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了減輕對象傷害性感受的方法，包括調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了減輕對象傷害性感受的方法，包括給所述對象服用能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了減輕對象傷害性感受的方法，包括給所述對象服用組合物，包括能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達的制劑；和可以藥用的載體。
在一種實施方案中，上述PLCγ活性、功能和/或表達的調(diào)控是PLCγ活性或表達的抑制。在一種實施方案中，上述能夠調(diào)節(jié)PLCγ活性、功能和/或表達的制劑是能夠抑制PLCγ活性、功能和/或表達的制劑。
在一種實施方案中，本文所述制劑可以是PLCγ抑制劑，抗-PLCγ抗體，反義分子，siRNA，siRNA-樣分子，或結(jié)合配偶體與PLCγ的結(jié)合的抑制劑。例如，所述PLCγ抑制劑可以是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，或1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
在一種實施方案中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的一部分mRNA的核酸。在一種實施方案中，所述反義分子是大體上互補于包括能夠編碼具有選自SEQ ID NO2和SEQ ID NO4的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的核酸的核酸。在其他實施方案中，所述反義分子是大體上互補于包括選自SEQ ID NO1和SEQ IDNO3的核苷酸序列的核酸的核酸。在一種實施方案中，上述部分mRNA包括至少5個連續(xù)的堿基。
在一種實施方案中，所述siRNA或siRNA-樣分子大體上與編碼PLCγ的mRNA的一部分相同。在一種實施方案中，所述siRNA或siRNA-樣分子大體上與相當于能夠編碼具有選自SEQ ID NO2和SEQ ID NO4的氨基酸序列的多肽的DNA序列的一部分mRNA相同。在其他實施方案中，所述siRNA或siRNA-樣分子大體上與相當于選自SEQ ID NO1和SEQ ID NO3的DNA序列的一部分mRNA相同。在一種實施方案中，所述siRNA或siRNA-樣分子包括少于大約30個核苷酸，在其他實施方案中，為大約21-23個核苷酸。
在實施方案中，所述疼痛是與神經(jīng)性疼痛和/或CNS功能失調(diào)相關的疼痛。
在其他實施方案中，疼痛可以是神經(jīng)性疼痛，肉體或內(nèi)臟疼痛。例如，所述神經(jīng)性疼痛可能與神經(jīng)或神經(jīng)束損傷相關。在另一種實施方案中，疼痛可以是慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛或復發(fā)性急性痛。


圖1用三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽(O)和媒介物(D)處理的大鼠之間的疼痛過敏50％的消退限度的比較。
圖2人類磷脂酶Cγ1的DNA(SEQ ID NO1)和多肽(SEQ ID NO2)序列(PLCG1；保藏號NM 002660和NP 002651)。編碼序列被確定為DNA序列的122-3997號位置。
圖3人類磷脂酶Cγ2(PLCG2；保藏號NM 002661和NP 002652)的DNA(SEQ ID NO3)和多肽(SEQ ID NO4)序列。編碼序列是由DNA序列的153-3911號位置確定的。
具體實施例方式
本發(fā)明提供了預防和/或治療對象疼痛的方法。在實施方案中，所述對象可以是脊椎動物或哺乳動物。在一種實施方案中，所述對象是哺乳動物，例如人類。所述方法包括抑制或減弱對象體內(nèi)磷脂酶Cγ(PLCγ)的活性、功能和/或表達，例如，在所述對象的細胞或組織中，例如，中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)神經(jīng)細胞或組織。所述方法可以包括給所述對象服用，系統(tǒng)性或局部服用能夠調(diào)節(jié)，例如，抑制PLCγ的活性、表達和/或功能的制劑，作為減輕疼痛的手段。所述制劑可以是在疼痛發(fā)作之前，大體上同時或之后服用。
在一種實施方案中，要調(diào)節(jié)其中的PLCγ活性、功能和/或表達的CNS神經(jīng)細胞可以位于表面背角或脊髓中。另外，所述細胞還可以是外周神經(jīng)細胞或感覺纖維的跨突觸的，疼痛信號可能就來自這里。
本發(fā)明還涉及治療急性和慢性疼痛，更具體地講，涉及治療神經(jīng)性疼痛。在本文中，″神經(jīng)性疼痛″表示與神經(jīng)損傷相關的慢性疼痛(例如，在神經(jīng)受到壓迫橫切或壓縮之后或在因為疾病導致神經(jīng)退化之后)。神經(jīng)性疼痛可能與神經(jīng)或神經(jīng)束損傷相關。另外，所述神經(jīng)性疼痛可以是與內(nèi)臟和/或肉體疼痛相關。
在一種實施方案中，所述疼痛可以與選自下列一組的癥狀相關慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛，復發(fā)性急性痛，和/或上述任意組合。
本發(fā)明還提供了減輕對象傷害性感受的方法。所述方法包括調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性、功能和/或表達，以便減輕傷害性感受。在本文中，″傷害性感受″表示疼痛的感覺成分。疼痛可以是各種刺激的結(jié)果，包括，但不局限于壓力，損傷，熱刺激或化學(例如，離子)刺激。
所述制劑包括，但不局限于能直接或間接改變蛋白活性的制劑，以及能調(diào)節(jié)所述蛋白的生產(chǎn)和/或穩(wěn)定性的制劑(例如，轉(zhuǎn)錄，翻譯，成熟，翻譯后修飾，磷酸化和降解水平)。例如，所述制劑可以是PLCγ抑制劑。在一種實施方案中，所述抑制劑可以是肽或肽型化合物(例如，肽模擬物)。在其他實施方案中，所述制劑可以是抗-PLCγ抗體，它能夠調(diào)節(jié)PLCγ的結(jié)合和/或催化活性?？?PLCγ抗體的例子可以參見，例如，Lee等(2002，Mo1.Vis.，817-25)和Buckley等(2004，J.Biol.Chem.，27941807-14)。在其他實施方案中，所述制劑可以是與編碼PLCγ的mRNA的全部或一部分互補的反義分子。在其他實施方案中，所述制劑可以是siRNA或siRNA-樣分子。
在其他實施方案中，上述抑制作用是通過抑制PLCγ的結(jié)合結(jié)構域?qū)崿F(xiàn)的。在這種場合下，所述制劑是結(jié)合配偶體與PLCγ的結(jié)合的抑制劑。例如，有絲分裂原-激活的蛋白激酶[例如，細胞外信號相關的激酶(ERK1和ERK2)]與PLCγ的結(jié)合(例如，與D-結(jié)構域的結(jié)合)可以被抑制。正如Buckley等，2004，J.Biol.Chem.，27941807-41814所證實的，ERK和磷酸-ERK(它們與PLCγ類似，是通過BDNF結(jié)合TrkB激活的)能結(jié)合PLCγ的D結(jié)構域，并且誘導這種同工酶磷酸化。
在一種實施方案中，所述能夠調(diào)節(jié)PLCγ的活性和/或表達的制劑是PLCγ抑制劑。PLCγ抑制劑的例子包括，但不局限于，三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，or1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。披露了三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽(又被稱作D609)對PLCγ的抑制作用的參考文獻包括Monick，M.M.et al.，1999，J.Immunol.162，3005；Maragoudakis，M.E.et al.，1993，Kidney Int.43，147；Schutze，S.et al.，1992，Cell 71，765；Muller-Decker，K.，1989，Biochem.Biophys.Res.Commun.162，198；Sauer，G.et al.，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81，3263。上述PLCγ抑制劑可以從EMD Biosciences(Calbiochem的分公司)獲得。
在另一種實施方案中，所述能夠調(diào)節(jié)PLCγ的活性和/或表達制劑是抗-PLCγ抗體?？?PLCγ抗體的例子可以參見，例如，Lee等(2002，MoI.Vis.，817-25)和Buckley等(2004，J.Biol.Chem.，27941807-14)。為了制備抗-PLCγ抗體，PLCγ或它的片段，同系物，和/或變體可以被用于對小型動物進行免疫，例如小鼠或兔子，以便產(chǎn)生能識別PLCγ的抗體。抗-PLCγ抗體可以是多克隆抗體或單克隆抗體。生產(chǎn)多克隆或單克隆抗體的方法為本領域所熟知。為了進行回顧，可以參見Harlow和Lane(1988)AntibodiesA Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY和Yelton et al.(1981)Ann.Rev.Blochem.50657-690，這兩份文獻都被收作本文參考。對于單克隆抗體來說，參見Kohler和Milstein(1975)Nature 256495-497，被收作本文參考。
″PLC gamma″或″PLCγ″表示具有能夠裂解磷脂酰肌醇4，5二磷酸鹽以便產(chǎn)生二脂酰甘油和肌醇1，4，5-三磷酸鹽的活性的多肽。在實施方案中，所述PLCγ選自PLCγ1和PLCγ2異構型。編碼人PLCγ多肽的基因可以參見，例如，NCBI保藏號M34667，NM 002660，NM 002661和NM 182811。編碼人PLCγ多肽的基因的例子以及它們所編碼的多肽可以參見圖2和3以及SEQ ID NOs1-4。為了回顧PLCγ活性，可以參見Carpenter和Ji(1999，Experimental Cell Research，25315-24)。PLCγ活性可以通過，例如，電泳遷移率移動分析(Noh et al.，1998，AnticancerResearch，182643-8)和肌醇1，4，5-三磷酸radioceptor分析(Shu et al.，2002，J.Biol.Chem.，27718447-18453)進行測定。
如上文所述，保留了活性的PLCγ的片段，同系物和/或變體還可用于本發(fā)明的方法中。同系物包括大體上與PLCγ的氨基酸序列相同的蛋白序列，與PLCγ具有顯著的結(jié)構和功能同源性。變體包括，但不局限于，通過任何修飾和/或氨基酸取代，缺失和添加而與PLCγ不同的蛋白或肽。修飾可以在任何地方進行，包括多肽主鏈(即，所述氨基酸序列)，氨基酸側(cè)鏈和氨基末端或羧基末端。所述取代，缺失或添加可能涉及一個或多個氨基酸。片段包括PLCγ的片段或一部分或PLCγ的同系物或變體的片段或一部分。
抗體可以是重組的，例如嵌合的(例如，由來源于鼠類的可變區(qū)與人類恒定區(qū)結(jié)合構成)人源化的(人免疫球蛋白恒定主鏈與動物，例如，來自鼠類的高變區(qū)一起構成)，和/或單鏈。多克隆和單克隆抗體還可以是免疫球蛋白片段形式的，例如，F(xiàn)(ab)′2，F(xiàn)ab或Fab′片段。所述抗體可以是任何同種型的，例如，IgG或IgA，并且多克隆抗體是單一同種型或混合同種型?？?PLCγ抗體可以使用標準免疫學測定方法生產(chǎn)和鑒定，例如，Western印跡分析，斑點印跡分析，或ELISA。
可用于限制PLCγ表達的另一種類型的化合物是能降低PLCγ轉(zhuǎn)錄物含量的化合物。這樣一來，這些化合物限制了可以生產(chǎn)的PLCγ多肽的數(shù)量，并因此可用于治療或預防疼痛。這些化合物包括，但不局限于，dsRNA，siRNA，siRNA-樣分子，反義寡核苷酸或核糖酶。
在一種實施方案中，編碼感興趣的多肽的核酸或它的片段的表達可以使用RNA干擾(RNAi)技術抑制或阻止，這種技術是一種類型的轉(zhuǎn)錄后基因沉默。可以將RNAi用于產(chǎn)生假″剔除″，即這樣的系統(tǒng)，其中，由感興趣的基因或編碼區(qū)編碼的產(chǎn)物的表達減弱了，導致該系統(tǒng)中所述編碼產(chǎn)物的活性的總的降低。這樣，可以進行RNAi，以便靶定感興趣的核酸或它的片段或變體，從而減弱它的表達和它所編碼的產(chǎn)物的活性水平。這樣的系統(tǒng)可用于所述產(chǎn)物的功能性研究，以及用于治療與所述產(chǎn)物的活性相關的疾病。例如，RNAi披露于以下文獻中Hammond et al.(2001)，Sharp(2001)，Caplen et al.(2001)，Sedlak(2000)和公開的美國專利申請20020173478(Gewirtz；
公開日為2002年11月21日)和20020132788(Lewiset al.；
公開日為2002年11月7日)。用于進行RNAi的制劑和試劑盒可以通過商業(yè)渠道獲得，例如，從Ambion有限公司(Austin，TX，USA)和New England Biolabs有限公司(Beverly，MA，USA)購買。
在某些系統(tǒng)中，用于RNAi的某些起始制劑被認為是相對于靶核酸的dsRNA分子。然后所述dsRNA被認為裂解成短的干擾RNAs(siRNAs)，它的長度為21-23個核苷酸(19-21bp的雙鏈體，各自具有兩個核苷酸的3′突出末端)。被認為能實施該裂解步驟的酶被稱作″Dicer″，并且被歸類為dsRNA-雙鏈體核糖核酸酶的RNaseIII家族的成員。另外，RNAi可以通過直接導入細胞實現(xiàn)，或者通過將所述siRNA或siRNA-樣分子的合適的前體(例如，編碼前體的載體等)導入細胞在細胞內(nèi)產(chǎn)生。SiRNA隨后可以與其他細胞內(nèi)成分結(jié)合，以便形成RNA-誘導的沉默復合物(RISC)。由此形成的RISC隨后可以通過它的siRNA部分和目標轉(zhuǎn)錄物之間的，由于同源性引起的堿基配對相互作用靶定感興趣的轉(zhuǎn)錄物，導致從所述siRNA的3′末端裂解目標轉(zhuǎn)錄物的大約12個核苷酸。因此，裂解了目標mRNA，并且降低了它所編碼的蛋白產(chǎn)物的含量。
RNAi可以通過將合適的體外合成的siRNA或siRNA-樣分子導入細胞實現(xiàn)。例如，RNAi可以使用化學合成的RNA進行(Brown et al.，2002)。另外，可以將合適的表達載體用于在體外或體內(nèi)轉(zhuǎn)錄所述RNA。在正義和反義鏈(由出現(xiàn)在相同載體或出現(xiàn)在不同載體上的序列編碼)的體外轉(zhuǎn)錄可以使用，例如T7 RNA聚合酶進行，在這種場合下，所述載體可以包括可操作地與T7啟動子連接的合適的編碼序列。在實施方案中，所述體外轉(zhuǎn)錄的RNA可以在體外加工(例如，使用大腸桿菌RNase III)到能進行RNAi的大小。將正義和反義轉(zhuǎn)錄物結(jié)合在一起，以便形成RNA雙鏈體。將雙鏈體導入感興趣的靶細胞?？梢允褂闷渌d體，這些載體能表達小的發(fā)夾RNAs(shRNAs)，可以將它加工siRNA-樣分子。例如，各種基于載體的方法披露于以下文獻中Brummelkamp et al.(2002)，Lee et al.(2002)，Miyagashi和Taira(2002)，Paddison et al.(2002)Paul et al.(2002)Sui et al.(2002)和Yuet al.(2002)。用于將所述載體導入細胞的各種體外或體內(nèi)方法(例如，基因治療)為本領域所公知。
因此，在一種實施方案中，編碼PLCγ的核酸，或它的片段的表達可以將相當于編碼感興趣的多肽的核酸或它的片段，或相當于與它同源的核酸的siRNA或siRNA-樣分子導入細胞或在細胞內(nèi)產(chǎn)生進行抑制?！錽iRNA-樣分子″表示類似于siRNA的核酸分子(例如，在大小和結(jié)構方面類似)，并且能夠產(chǎn)生siRNA活性，即實現(xiàn)RNAi-介導的表達抑制作用。在各種實施方案中，這種方法使得可以將所述siRNA或siRNA-樣分子直接使用到細胞中，或者使用所述基于載體的方法。在一種實施方案中，所述siRNA或siRNA-樣分子長度為小于大約30個核苷酸。在其他實施方案中，所述siRNA或siRNA-樣分子長度為大約21-23個核苷酸。在一種實施方案中，siRNA或siRNA-樣分子包括19-21bp的雙鏈體部分，每一股鏈具有2個核苷酸的3′突出末端。在實施方案中，所述siRNA或siRNA-樣分子大體上與編碼PLCγ的核酸，或它的片段或變體(或變體的片段)相同。所述變體能夠編碼具有類似于PLCγ的活性的蛋白。在實施方案中，所述siRNA或siRNA-樣分子的正義鏈大體上與SEQ ID NOs1或3，或它的片段(RNA在所述DNA序列的T殘基的位置上具有U)相同。
在另一種實施方案中，用反義構建體轉(zhuǎn)化的細胞可用于抑制PLCγ表達。反義構建體是核酸分子，它可以轉(zhuǎn)錄以便提供大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的全部或一部分的反義分子，以便反義構建體的表達受到PLCγ的表達的干擾。在一種實施方案中，上述反義分子相對編碼PLCγ的DNA序列是反義的，在一種實施方案中，是人PLCγ。在某些實施方案中，本發(fā)明的反義構建體因此能夠編碼五個或更多個連續(xù)的核酸殘基，這些殘基大體上互補于編碼PLCγ核酸序列的連續(xù)部分。
在其他實施方案中，大體上與本文所述多肽相同的多肽和核苷酸可用于本發(fā)明中。
″同源性″和″同源的″表示兩個肽或兩個核酸分子之間的序列相似性。同源性可以通過比較比對序列上的每一個位置確定，核酸序列之間或氨基酸序列之間的同源性程度是所述序列所共同擁有的位置上相同或匹配的核苷酸或氨基酸數(shù)量的函數(shù)。本文在使用所述術語時，如果兩個序列大體上相同并且所述序列的功能性活性是保守性的，這樣的核酸序列就是與其他序列″同源的″(在本文中，術語′同源的′不表示進化上的關系)。當進行最佳比對(省略缺口)時，如果兩個核酸序列具有至少大約50％的序列相似性或相同性，或者如果所述序列擁有特定的功能性基序，就認為這兩個序列是大體上相同的。在其他實施方案中，在最佳比對中大體上相同的序列的序列相似性可以為至少60％，70％，75％，80％，85％，90％或95％。在本文中，序列之間特定的同源性百分比，是最佳比對序列上的序列相同性程度?！宀幌嚓P的″或″不同源的″序列與SEQ ID NOs 1-4中任意一個擁有低于40％的相同性，不過，優(yōu)選擁有低于大約25％的相同性。
大體上互補的核酸是這樣的核酸，其中，一個分子的″互補體″大體上與另一個分子相同。為了比較相同性而進行的序列的最佳比對可以使用各種算法進行，如Smith和Waterman的局部同源性算法，1981，Adv.Appl.Math 2482，Needleman和Wunsch的同源性比對算法，1970，J.MoI.Biol.48443，Pearson和Lipman的檢索相似性方法，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 852444，以及上述算法的計算機化工序(如Wisconsin Genetics軟件包中的GAP，BESTFIT，F(xiàn)ASTA和TFASTA，Genetics Computer Group，Madison，WI，U.S.A.)。序列相同性還可以使用BLAST算法測定，參見Altschul et al.，1990，J.MoI.Biol.215403-10(使用公開的設置默認值)。用于進行BLAST分析的軟件可以從National Center for BiotechnologyInformation獲得(通過互聯(lián)網(wǎng)獲得，網(wǎng)址為http//www.ncbi.nlm.nih.gov/)。BLAST算法涉及首先確定高得分序列對(HSPs)，包括在查詢序列上確定短字長W，在它與數(shù)據(jù)庫序列中的相同的字長進行比對時吻合或滿足某些正的閾值得分T。T被稱作相鄰的字得分閾值。將最初的相鄰字命中用作開始檢索的種子，以便發(fā)現(xiàn)正常的HSPs。將所述字的命中沿每一個序列的兩個方向延長到盡可能地短，以便能夠增加累計比對得分。當滿足以下參數(shù)時，沿每一個方向的字命中的延長終止累計比對得分減少到從它的最大獲得值中減少了數(shù)量X；由于一個或多個不得分殘基比對的積累，累計得分接近于0或以下?；蛘叩竭_任意一個序列的末端。BLAST算法的參數(shù)W，T和X決定了比對的靈敏度和速度。BLAST程序可用于預設為11的字長(W)，BLOSUM62評分矩陣(Henikoff and Henikoff，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8910915-10919)比對(B)為50，預期值(E)為10(或1或0.1或0.01或0.001或0.0001)，M＝5，N＝4，并且比較兩股鏈。利用BLAST算法在兩個序列之間進行的統(tǒng)計學相似性的測定是最小總和可能性(P(N))，它提供了兩個核苷酸或氨基酸序列之間偶爾出現(xiàn)的匹配的可能性的指標。在本發(fā)明的其他實施方案中，如果在實驗序列的比較中最小組合可能性低于大約1，優(yōu)選低于大約0.1，更優(yōu)選低于大約0.01，最優(yōu)選低于大約0.001的相關核苷酸或氨基酸序列就被認為是大體上相同的。
表明兩種核酸序列大體上互補的其他指標是，這兩種序列彼此能在中等嚴格或優(yōu)選嚴格條件下雜交。例如，濾膜結(jié)合的序列在中等嚴格條件下的雜交，可以在65℃下，在0.5M NaHPO4，7％十二烷基硫酸鈉(SDS)，1mM EDTA中進行，并且在42℃下用0.2×SSC/0.1％SDS洗滌(參見Ausubel，et al.(eds)，1989，CurrentProtocols in Molecular Biology，Vol.1，Green Publishing Associates，Inc.，和John Wiley& Sons，Inc.，New York，at p.2.10.3)。另外，濾膜結(jié)合的序列在嚴格條件下的雜交，例如，可以在0.5M NaHPO4，7％SDS，1mM EDTA中進行，并且在68℃下用0.1×SSC/0.1％SDS洗滌(參見Ausubel，et al.(eds)，1989，同上)。雜交條件可以根據(jù)感興趣的序列按照已知方法進行改進(參見Tijssen，1993，LaboratoryTechniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic AcidProbes，Part I，Chapter 2″Overview of principles of hybridization and the strategy ofnucleic acid probe assays″，Elsevier，New York)。一般，嚴格條件選擇為比在特定離子長度和pH條件下特定序列的熱熔點低大約5℃。
在其他實施方案中，本發(fā)明提供了用于外源使用的反義分子和核糖酶，以便結(jié)合，降解和/或抑制PLCγmRNA的翻譯。被收作本文參考的治療性反義寡核苷酸應用的例子，包括美國專利號5,135,917，授權日為1992年8月4日；美國專利號5,098,890，授權日為1992年3月24日；美國專利號5,087,617，授權日為1992年2月11日；美國專利號5,166,195，授權日為1992年11月24日；美國專利號5,004,810，授權日為1991年4月2日；美國專利號5,194,428，授權日為1993年3月16日；美國專利號4,806,463，授權日為1989年2月21日；美國專利號5,286,717授權日為1994年2月15日；美國專利號5,276,019和美國專利號5,264,423；BioWorld Today，1994年4月29日，p.3。
優(yōu)選的是，在反義分子上，存在與PLCγmRNA足夠的互補程度，以便避免反義分子與非靶序列在需要專一性結(jié)合的條件下的非-雙鏈體結(jié)合，如在進行體內(nèi)實驗或治療性處理的生理學條件下，或在進行體外分析時，進行分析的條件下。用于反義結(jié)合的靶mRNA可能不僅包括編碼蛋白的信息，而且還包括相關的核糖核苷酸，例如，它形成了5′-非翻譯區(qū)，3′-非翻譯區(qū)，5′帽子區(qū)和內(nèi)顯子/外顯子接合核糖核苷酸。篩選可用于提供所述分子作為本發(fā)明抑制劑的反義和核糖酶核酸的方法披露于美國專利號5,932,435中(被收作本文參考)。
本發(fā)明的反義分子(寡核苷酸)可以包括這樣的分子，它包括糖間主鏈鍵，如磷酸三酯，膦酸甲酯，短鏈烷基或環(huán)烷基糖間鍵或短鏈雜原子或雜環(huán)糖間鍵，硫逐磷酸酯和具有CH2--NH--O--CH2，CH2--N(CH3)--O--CH2(被稱作亞甲基(甲基亞胺)或MMI主鏈)，CH2--O--N(CH3)--CH2，CH2--N(CH3)--CH2和O--N(CH3)--CH2--CH2主鏈(其中，磷酸二酯是O--P--O--CH2)的分子。還可以使用具有嗎啉代主鏈結(jié)構的寡核苷酸(美國專利號5,034,506)。在其他實施方案中，反義寡核苷酸可以具有肽核酸(PNA，有時被稱作″蛋白核酸″)主鏈，其中，所述寡核苷酸的磷酸二酯主鏈可以用聚酰胺主鏈取代，其中，核苷堿基直接或間接與聚酰胺主鏈上的氮雜氮原子或亞甲基(Nielsen et al.，1991，Science 2541497和美國專利號5,539,082)結(jié)合。磷酸二酯可以用手性或?qū)τ丑w特異性結(jié)構取代。本領域普通技術人員能夠選擇其他連鍵用于實施本發(fā)明。
寡核苷酸還可以包括這樣的類型它包括至少一個修飾過的核苷酸堿基。因此，可以使用天然存在以外的嘌呤和嘧啶。類似地，還可以對核苷酸亞基的戊呋喃糖基部分進行修飾。這種修飾的例子是2′-O-烷基-和2′-鹵-取代的核苷酸。可用于本發(fā)明的2′位置上的修飾的某些具體例子包括OH，SH，SCH3，F(xiàn)，OCN，O(CH2)nNH2或O(CH2)nCH3，其中，n為1-大約10；C1-C10低級烷基，取代過的低級烷基，烷芳基或芳烷基；Cl；Br；CN；CF3；OCF3；O-，S-，或N-烷基；O-，S-，或N-烯基；SOCH3；SO2CH3；ONO2；NO2；N3；NH2；雜環(huán)烷基；雜環(huán)烷芳基；氨基烷基氨基；聚烷基氨基；取代過的甲硅烷基；RNA裂解基團；報導基團；插入基團；用于改善寡核苷酸的藥物動力學特征的基團；或用于改善寡核苷酸的藥物動力學特征的基團或其他具有類似特征的取代基團。一個或多個戊呋喃糖基可以被另一個糖，被糖模擬物，如環(huán)丁基取代，或被代替糖的其他部分取代。
在某些實施方案中，本發(fā)明的反義寡核苷酸可以包括大約5-大約100個核苷酸單位。正如可以理解的，核苷酸單位是堿基-糖組合(或類似結(jié)構)，通過磷酸二酯或其他鍵與相鄰的核苷酸單位適當?shù)亟Y(jié)合，形成主鏈結(jié)構。
本發(fā)明還提供了藥用組合物(藥品)，包括能夠調(diào)節(jié)PLCγ的活性和/或表達的制劑，和可以藥用的載體。在一種實施方案中，所述組合物包括治療或預防有效量的制劑，以便治療或緩解疼痛，和可以藥用的載體。
″治療有效量″表示在服用時能在必要的時間內(nèi)有效獲得需要的治療效果的用量，如減輕疼痛。能夠調(diào)節(jié)PLCγ的活性和/或表達的制劑的治療有效量可以根據(jù)諸如疾病狀態(tài)，年齡，性別和個體體重，以及所述制劑在個體內(nèi)誘導需要的反應的能力的因素改變?？梢詫τ盟幏桨高M行調(diào)節(jié)，以便提供最佳治療反應。治療有效量還可以是這樣的用量，其中，所述制劑的任何毒性或有害作用都被治療效果所抵消。
″預防有效量″表示在服用之后的必要時間內(nèi)能有效獲得需要的預防效果的用量，如預防或抑制疼痛發(fā)作或疼痛嚴重程度的加重。預防有效量可以按照上述治療有效量的確定方法確定。對于任何具體對象來說，特殊的用藥方案可以隨時根據(jù)個體需要和管理或監(jiān)督所述組合物使用的人員的專業(yè)判斷進行調(diào)整。
在本文中，″可以藥用的載體″或″賦形劑″包括任何和所有溶劑，分散介質(zhì)，包衣劑，抗細菌劑和抗真菌劑，等滲和吸收延緩制劑，以及生理學上兼容的制劑等。在一種實施方案中，所述載體是適合腸胃外服用的。另外，所述載體可適用于靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，肌內(nèi)，頭顱內(nèi)，鞘內(nèi)，舌下，或口服?？梢运幱玫妮d體包括無菌水溶液或分散液，和無菌粉末，用于臨時制備無菌注射溶液或分散液。上述介質(zhì)和制劑用作藥理學活性物質(zhì)的用途為本領域所熟知。除非任何常規(guī)介質(zhì)或制劑與所述活性制劑不兼容，它們都可用于本發(fā)明的藥用組合物中。還可以將輔助活性化合物添加到所述組合物中。
在生產(chǎn)和儲存條件下，治療組合物通常必須是無菌的和穩(wěn)定的。所述組合物可以制備成溶液，微型乳劑，脂質(zhì)體，或適合高藥物濃度的其他有序結(jié)構。所述載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，例如，水，乙醇，多元醇(例如，甘油，丙二醇，和液體聚乙二醇等)的，以及它們的合適的混合物?？梢员３诌m當?shù)牧鲃有?，例如，通過使用諸如卵磷脂的包衣劑，對于分散液來說通過保持需要的粒度，以及通過使用表面活性劑。在很多場合下，所述組合物優(yōu)選包括等滲劑，例如，糖，多元醇，如甘露糖醇，山梨糖醇，或氯化鈉。通過在所述組合物中添加能延緩吸收的制劑，例如，一硬脂酸鹽和明膠可以延長所述注射組合物的吸收時間。另外，所述能夠調(diào)節(jié)PLCγ的活性和/或表達的制劑能夠以延時釋放制劑的形式服用，例如，存在于組合物中，它包括緩式聚合物。所述活性化合物可以用能防止化合物迅速釋放的載體制備，如控釋制劑，包括植入物和微型膠囊化輸送系統(tǒng)。可以使用生物可降解的，生物兼容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯，聚酐，聚乙醇酸，膠原，聚原酸酯，聚乳酸和聚乳酸，聚乙醇酸共聚物(PLG)。制備所述制劑的很多方法都申請過專利或為本領域技術人員所普遍公知。
無菌注射溶液可以通過以下方法制備將需要數(shù)量的活性劑(例如，能夠調(diào)節(jié)PLCγ的活性和/或表達的制劑)摻入合適的溶劑，根據(jù)需要摻入一種上面所列舉的成分或上述成分的組合，然后進行過濾消毒。一般來說，分散液是通過將活性劑摻入無菌媒介物制備的，媒介物中包含基本分散介質(zhì)和上文所列舉的其他必要的成分。對于用于制備無菌注射溶液的無菌粉末來說，制備的優(yōu)選方法是真空干燥和冷凍干燥。由此得到了活性成分的粉末和來自前面的消毒過濾溶液的任何其他需要的成分。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性和/或表達的制劑可以用能增強它的溶解度的一種或多種其他化合物配制。
在另一種實施方案中，服用本發(fā)明的制劑，以便它與CNS組織或CNS神經(jīng)元接觸。在本文中，″中樞神經(jīng)系統(tǒng)″或CNS是神經(jīng)系統(tǒng)中包括大腦和脊髓(例如，位于腰部)的部分。相反，″外周神經(jīng)系統(tǒng)″或PNS是神經(jīng)系統(tǒng)的除了大腦和脊髓以外的部分。在其他實施方案中，CNS組織是表面背角，在其他實施方案中，是薄層I神經(jīng)元。因此，在實施方案中，本發(fā)明的制劑可用于在體內(nèi)處理CNS細胞，通過直接的顱內(nèi)或鞘內(nèi)注射或注射到腦脊髓液中。另外，所述制劑可以以能夠穿過血腦屏障并且進入CNS的形式系統(tǒng)性服用(例如，靜脈內(nèi)，或口服)?！迳窠?jīng)的″和″神經(jīng)元的″在本文中可以交換使用，并且二者都與神經(jīng)元和神經(jīng)系統(tǒng)相關。
在本發(fā)明的另一種實施方案中，本發(fā)明的治療組合物包括能夠減弱/抑制CNS細胞中PLCγ的活性和/或表達的制劑，它能夠以試劑盒/容器或包裝形式提供(例如，商業(yè)化包裝)，該包裝還包括有關將它們用于治療疼痛的說明書。類似地，本發(fā)明提供了一種包裝，它包括能夠減弱/抑制PLCγ的活性和/或表達的制劑，以及用于預防和/或治療疼痛的說明。
本發(fā)明還提供了將能夠減弱/抑制PLCγ的活性和/或表達的制劑或包括能夠減弱/抑制PLCγ的活性和/或表達的制劑的組合物用于預防和/或治療疼痛的用途，或用于制備用于預防和/或治療疼痛的藥品的用途。
另一方面，本發(fā)明涉及將PLCγ用作篩選方法目標的用途，該方法可用于鑒定和表征能夠減弱/抑制PLCγ的活性和/或表達的制劑。因此，本發(fā)明還提供了確定候選制劑是否能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性和/或表達的方法，并且反過來將它用于預防和治療疼痛。在一種實施方案中，所述方法包括讓細胞(例如，CNS-衍生的細胞)與候選制劑接觸，并且確定在存在測試制劑的條件下，PLCγ的活性是否業(yè)已減弱或受到抑制。在其他實施方案中，所述分析方法可以用無細胞系統(tǒng)進行，包括提供活性PLCγ的合適的制劑或樣品，讓PLCγ與候選制劑接觸，并且同樣確定在存在所述測試化合物的條件下，它的活性是否受到抑制或減弱。在其他實施方案中，所述分析方法可以包括評估候選化合物是否能抑制結(jié)合配偶體或配體與PLCγ結(jié)合。在這種場合下，所述方法包括讓PLCγ或包括PLCγ的細胞與候選制劑和結(jié)合配偶體或配體接觸，并且確定在存在候選或測試化合物的條件下，所述結(jié)合配偶體或配體與PLCγ的結(jié)合是否減弱。在實施方案中，所述結(jié)合配偶體或配體但是有絲分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段(如ERK1或ERK2，或它的同系物或片段)。在一種實施方案中，確定了PLCγ的D-結(jié)構域的結(jié)合。
PLCγ活性或上述結(jié)合的抑制或減弱，是所述測試制劑可用于治療或預防疼痛的指標。
在本文中，″CNS-衍生的細胞″是從CNS組織中分離或衍生的細胞，并且在實施方案中，包括原始神經(jīng)元培養(yǎng)物，永生化神經(jīng)元細胞系，以及得到認可的體外神經(jīng)元模型系統(tǒng)(例如，在體外分化成神經(jīng)元的細胞)。在一種實施方案中，上述細胞具有PLCγ活性。
上述方法可以用一種測試制劑或多種或測試制劑的文庫(例如，組合文庫)進行。在后一種場合下，還可以鑒定并且表征由組合制劑提供的協(xié)同效應。上述制劑可用于預防和/或治療疼痛，或可用作開發(fā)和測試具有改進的專一性，效力和/或藥理學(例如，藥物動力學)特性的其他制劑的前導制劑。在一種實施方案中，所述制劑可以是前體藥物，它能在合適的作用位點，例如，在CNS組織中(例如，在脊髓中)轉(zhuǎn)變成它的活性形式。在某些實施方案中，本發(fā)明篩選/實驗方法的一個或多個步驟可以自動化。
本發(fā)明還涉及用于鑒定和表征能夠減弱/抑制PLCγ基因表達的制劑。所述方法可以包括在存在測試制劑的條件下測定PLCγ基因表達。所述基因表達可以通過檢測相應的RNA或蛋白，或通過使用合適的報導構建體確定，所述構建體包括正常情況下與所述PLCγ基因結(jié)合的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，可操作地與報道基因連接。當?shù)谝粋€核酸序列處在與第二個核酸序列成功能性關系的位置上時，第一個核酸序列就是與第二個核酸序列″可操作地連接的″。例如，如果啟動子能影響編碼序列的或表達的話，該啟動子就是可操作地與編碼序列連接的。一般來說，可操作地連接的DNA序列，并且如果必要的話，在讀框內(nèi)連接兩個蛋白編碼區(qū)。不過，由于，例如增強子一般是在與啟動子間隔幾千個堿基的情況下起作用，并且內(nèi)含子序列可以具有不同的長度，某些多核苷酸因子可以是可操作地連接的，但是不是連續(xù)的?！遛D(zhuǎn)錄調(diào)控因子″是表示DNA序列的通稱，如起始和終止信號，增強子和啟動子，剪接信號，能誘導或控制蛋白編碼序列轉(zhuǎn)錄的聚腺苷酸化信號，這些因子是與編碼序列可操作地連接的。所述報道基因的表達可以在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平上衡量，例如，通過所產(chǎn)生的RNA或蛋白的數(shù)量衡量。RNA可以通過，例如，Northern分析或通過逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法檢測(例如，參見Sambrook et al(1989)MolecularCloningA Laboratory Manual(second edition)，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York，USA)。蛋白含量可以使用親和制劑(例如抗體或它的片段[例如，有關方法可以參見Harlow，E.and Lane，D(1988)AntibodiesALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY]；能結(jié)合蛋白的配體)直接檢測，或通過其他特性(例如，對于綠色熒光蛋白來說利用熒光)或通過測定蛋白活性檢測，它能體現(xiàn)產(chǎn)生可檢測產(chǎn)物的酶促活性(例如，具有改變了的分光鏡檢查特性)或可檢測的表型(例如，細胞生長的改變)。合適的報道基因包括，但不局限于氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶，β-D半乳糖苷酶，熒光素酶，或綠色熒光蛋白。
本發(fā)明還提供了用于診斷或預測與CNS功能失調(diào)相關的疼痛的方法。在一種實施方案中，所述與諸如CNS功能失調(diào)相關的疼痛是神經(jīng)性疼痛。在一種實施方案中，所述方法包括確定在CNS神經(jīng)細胞中是否存在PLCγ的活性和/或表達相對相應的對照PLCγ的活性和/或表達的調(diào)節(jié)。在該特定方法中，測試水平相對對照水平的差異是所述對象正經(jīng)歷與CNS功能失調(diào)相關的疼痛的指標。在一種實施方案中，所述方法包括確定PLCγ活性和/或表達是否相對對照活性和/或表達得到了調(diào)節(jié)。在另一種實施方案中，所述PLCγ活性和/或表達可選自建立的標準，如早先在對象體內(nèi)測定的相應的PLCγ活性和/或表達水平；在所述對象經(jīng)歷較小的疼痛(相對上述現(xiàn)有的痛覺而言)或基本上沒有疼痛時在所述對象體內(nèi)特定的相應的PLCγ活性和/或表達水平；或在經(jīng)歷較小疼痛(相對上述測試對象體內(nèi)的現(xiàn)有痛覺而言)或基本上沒有疼痛的對照對象體內(nèi)測定的相應的PLCγ活性和/或表達水平。在一種實施方案中，經(jīng)歷較少疼痛或基本上沒有疼痛的對象或?qū)φ諏ο?，它的中樞神?jīng)或外周神經(jīng)系統(tǒng)不存在損傷的明顯證據(jù)(例如，神經(jīng)性疼痛)或持續(xù)性疼痛。
例如，PLCγ活性和/或表達可以通過給對象服用指示化合物(如能指示PLCγ的活性和/或表達的化合物)測定，該化合物能夠接觸所述對象的CNS神經(jīng)細胞。在服用所述指示化合物之后，可以對與這些指示化合物相關的體內(nèi)信號進行評估。在一種實施方案中，可以使用這樣的指示化合物，如免疫檢測型制劑(例如，針對PLCγ多肽的抗體，單鏈抗體或Fab片段)或能夠在PLCγ活性的作用下產(chǎn)生可檢測產(chǎn)物的合適的底物。在注射所述指示化合物之后，可以實施成像技術以便評估與所述指示化合物相關的體內(nèi)信號。所述成像技術能夠評估所述指示化合物的體內(nèi)信號。
在一種實施方案中，上述診斷/預測方法可以與上述治療/預防方法組合進行，用于預防或治療對象的疼痛。因此，所述方法包括診斷或預測疼痛，以及調(diào)節(jié)對象體內(nèi)的PLCγ的活性和/或表達，以便預防或治療疼痛。
盡管本文披露了本發(fā)明的各種實施方案，在本發(fā)明的范圍內(nèi)，按照本領域技術人員的普通知識可以進行各種調(diào)整和改變。這些改變包括已知等同物對本發(fā)明任何方面的替代，以便隨后以大體上相同的方式獲得相同的結(jié)構。數(shù)字范圍是確定所述范圍的包含端點值的數(shù)字。在權利要求書中，單詞″comprising″被用作開放式術語，大體上等同于短語″包括，但不局限于″。以下實施例是用于說明本發(fā)明的各個方面的，并且不限定本文所披露的本發(fā)明的廣義的范圍。
實施例例1十一只成年Sprague-Dawley大鼠的坐骨神經(jīng)接受了實驗性慢性壓縮損傷(Mosconi & Kruger，1996，Pain 6437-57)。在兩周時間內(nèi)，疼痛過敏，神經(jīng)性疼痛的表現(xiàn)逐漸加強，并且使用Von Frey技術(Chaplan et al.，1994，J.Neurosci.Methods 5355-63)進行監(jiān)測。在形成allodynia之后)表現(xiàn)出50％消退限度(WD50)≤2.0g)，通過鞘內(nèi)導管給大鼠服用500ng三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽是用含有10％v/v二甲亞砜的鹽水溶液(0.9％NaCl)制備的。三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽可以從EMD Biosciences(Calbiochem的分公司)購買。將含有10％v/v二甲亞砜的鹽溶液(0.9％NaCl)作為媒介物注射到對照體內(nèi)。所服用的媒介物的體積與PLCγ抑制劑溶液相同。
七只痛覺超敏大鼠接受了一次鞘內(nèi)注射的媒介物，而四只大鼠接受了一次注射的三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽；在注射之前這兩個組的平均WD50為1.9±0.2g。在注射之后僅僅4小時，服用三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽的大鼠的WD50與接受媒介物的大鼠的WD50存在顯著差別(三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，8.8±2.1g與媒介物，4.1±0.7g；p＜0.05)，并且與注射之前的原始WD50存在明顯差別(p＜0.05，混合設計ANOVA)。這種疼痛過敏的顯著減弱持續(xù)超過6小時。
在本說明書中，各份參考文獻用于更全面地說明本發(fā)明所屬領域的現(xiàn)狀。這些文獻的內(nèi)容被收作本說明書的參考。
序列表<110>
LAVALCOULL，Jeffrey A.M.DE KONINCK，Yves<120>磷脂酶Cγ調(diào)節(jié)及其用途<130>85409-49<150>PCT/CA2004/000726<151>2004-05-14<150>US 60/627,174<151>2004-11-15<160>4<170>PatentIn version 3.3<210>1<211>5205<212>DNA<213>智人(Homo sapiens)<220>
<221>CDS<222>(122)..(3997)<400>1gagccgccgc cgggtcccgc tcgtctgccg cctcagcctc agccccaacc tcagccgccg 60ccgttgcgct tgctcccggg cggtcctggc ctgtgccgcc gccgccccca gcgtcggagc120c atg gcg ggc gcc gcg tcc cct tgc gcc aac ggc tgc ggg ccc ggc gcg169Met Ala Gly Ala Ala Ser Pro Cys Ala Asn Gly Cys Gly Pro Gly Ala1 5 10 15ccc tcg gac gcc gag gtg ctg cac ctc tgc cgc agc ctc gag gtg ggc 217Pro Ser Asp Ala Glu Val Leu His Leu Cys Arg Ser Leu Glu Val Gly20 25 30acc gtc atg act ttg ttc tac tcc aag aag tcg cag cga ccc gag cgg 265Thr Val Met Thr Leu Phe Tyr Ser Lys Lys Ser Gln Arg Pro Glu Arg35 40 45aag acc ttc cag gtc aag ctg gag acg cgc cag atc acg tgg agc cgg 313Lys Thr Phe Gln Val Lys Leu Glu Thr Arg Gln Ile Thr Trp Ser Arg50 55 60ggc gcc gac aag atc gag ggg gcc att gac att cgt gaa att aag gag 361Gly Ala Asp Lys Ile Glu Gly Ala Ile Asp Ile Arg Glu Ile Lys Glu65 70 75 80atc cgc cca ggg aag acc tca cgg gac ttt gat cgc tat caa gag gac 409Ile Arg Pro Gly Lys Thr Ser Arg Asp Phe Asp Arg Tyr Gln Glu Asp85 90 95
cca gct ttc cgg ccg gac cag tca cat tgc ttt gtc att ctc tat gga457Pro Ala Phe Arg Pro Asp Gln Ser His Cys Phe Val Ile Leu Tyr Gly100 105 110atg gaa ttt cgc ctg aaa acg ctg agc ctg caa gcc aca tct gag gat505Met Glu Phe Arg Leu Lys Thr Leu Ser Leu Gln Ala Thr Ser Glu Asp115 120 125gaa gtg aac atg tgg atc aag ggc tta act tgg ctg atg gag gat aca553Glu Val Asn Met Trp Ile Lys Gly Leu Thr Trp Leu Met Glu Asp Thr130 135 140ttg cag gca ccc aca ccc ctg cag att gag agg tgg ctc cgg aag cag601Leu Gln Ala Pro Thr Pro Leu Gln Ile Glu Arg Trp Leu Arg Lys Gln145 150 155 160ttt tac tca gtg gat cgg aat cgt gag gat cgt ata tca gcc aag gac649Phe Tyr Ser Val Asp Arg Asn Arg Glu Asp Arg Ile Ser Ala Lys Asp165 170 175ctg aag aac atg ctg tcc cag gtc aac tac cgg gtc ccc aac atg cgc697Leu Lys Asn Met Leu Ser Gln Val Asn Tyr Arg Val Pro Asn Met Arg180 185 190ttc ctc cga gag cgg ctg acg gac ctg gag cag cgc agc ggg gac atc745Phe Leu Arg Glu Arg Leu Thr Asp Leu Glu Gln Arg Ser Gly Asp Ile195 200 205acc tac ggg cag ttt gct cag ctg tac cgc agc ctc atg tac agc gcc793Thr Tyr Gly Gln Phe Ala Gln Leu Tyr Arg Ser Leu Met Tyr Ser Ala210 215 220cag aag acg atg gac ctc ccc ttc ttg gaa gcc agt act ctg agg gct841Gln Lys Thr Met Asp Leu Pro Phe Leu Glu Ala Ser Thr Leu Arg Ala225 230 235 240ggg gag cgg ccg gag ctt tgc cga gtg tcc ctt cct gag ttc cag cag889Gly Glu Arg Pro Glu Leu Cys Arg Val Ser Leu Pro Glu Phe Gln Gln245 250 255ttc ctt ctt gac tac cag ggg gag ctg tgg gct gtt gat cgc ctc cag937Phe Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Glu Leu Trp Ala Val Asp Arg Leu Gln260 265 270gtg cag gag ttc atg ctc agc ttc ctc cga gac ccc tta cga gag atc985Val Gln Glu Phe Met Leu Ser Phe Leu Arg Asp Pro Leu Arg Glu Ile275 280 285gag gag cca tac ttc ttc ctg gat gag ttt gtc acc ttc ctg ttc tcc 1033Glu Glu Pro Tyr Phe Phe Leu Asp Glu Phe Val Thr Phe Leu Phe Ser290 295 300aaa gag aac agt gtg tgg aac tcg cag ctg gat gca gta tgc ccg gac 1081Lys Glu Asn Ser Val Trp Asn Ser Gln Leu Asp Ala Val Cys Pro Asp305 310 315 320acc atg aac aac cct ctt tcc cac tac tgg atc tcc tcc tcg cac aac 1129Thr Met Asn Asn Pro Leu Ser His Tyr Trp Ile Ser Ser Ser His Asn325 330 335
acg tac ctg acc ggg gac cag ttc tcc agt gag tcc tcc ttg gaa gcc1177Thr Tyr Leu Thr Gly Asp Gln Phe Ser Ser Glu Ser Ser Leu Glu Ala340 345 350tat gct cgc tgc ctg cgg atg ggc tgt cgc tgc att gag ttg gac tgc1225Tyr Ala Arg Cys Leu Arg Met Gly Cys Arg Cys Ile Glu Leu Asp Cys355 360 365tgg gac ggc ccg gat ggg atg cca gtt att tac cat ggg cac acc ctt1273Trp Asp Gly Pro Asp Gly Met Pro Val Ile Tyr His Gly His Thr Leu370 375 380acc acc aag atc aag ttc tca gat gtc ctg cac acc atc aag gag cat1321Thr Thr Lys Ile Lys Phe Ser Asp Val Leu His Thr Ile Lys Glu His385 390 395 400gcc ttt gtg gcc tca gag tac cca gtc atc ctg tcc att gag gac cac1369Ala Phe Val Ala Ser Glu Tyr Pro Val Ile Leu Ser Ile Glu Asp His405 410 415tgc agc att gcc cag cag aga aac atg gcc caa tac ttc aag aag gtg1417Cys Ser Ile Ala Gln Gln Arg Asn Met Ala Gln Tyr Phe Lys Lys Val420 425 430ctg ggg gac aca ctc ctc acc aag ccc gtg gag atc tct gcc gac ggg1465Leu Gly Asp Thr Leu Leu Thr Lys Pro Val Glu Ile Ser Ala Asp Gly435 440 445ctc ccc tca ccc aac cag ctt aag agg aag atc ctc atc aag cac aag1513Leu Pro Ser Pro Asn Gln Leu Lys Arg Lys Ile Leu Ile Lys His Lys450 455 460aag ctg gct gag ggc agt gcc tac gag gag gtg cct aca tcc atg atg1561Lys Leu Ala Glu Gly Ser Ala Tyr Glu Glu Val Pro Thr Ser Met Met465 470 475 480tac tct gag aac gac atc agc aac tct atc aag aat ggc atc ctc tac1609Tyr Ser Glu Asn Asp Ile Ser Asn Ser Ile Lys Asn Gly Ile Leu Tyr485 490 495ctg gag gac cct gtg aac cac gaa tgg tat ccc cac tac ttt gtt ctg1657Leu Glu Asp Pro Val Asn His Glu Trp Tyr Pro His Tyr Phe Val Leu500 505 510acc agc agc aag atc tac tac tct gag gag acc agc agt gac cag ggc1705Thr Ser Ser Lys Ile Tyr Tyr Ser Glu Glu Thr Ser Ser Asp Gln Gly515 520 525aac gag gat gag gag gag ccc aag gag gtc agc agc agc aca gag ctg1753Asn Glu Asp Glu Glu Glu Pro Lys Glu Val Ser Ser Ser Thr Glu Leu530 535 540cac tcc aat gag aag tgg ttc cat ggg aag cta ggg gca ggg cgt gac1801His Ser Asn Glu Lys Trp Phe His Gly Lys Leu Gly Ala Gly Arg Asp545 550 555 560ggg cgt cac atc gct gag cgc ctg ctt act gag tac tgc atc gag acc1849Gly Arg His Ile Ala Glu Arg Leu Leu Thr Glu Tyr Cys Ile Glu Thr565 570 575
gga gcc cct gac ggc tcc ttc ctc gtg cga gag agt gag acc ttc gtg1897Gly Ala Pro Asp Gly Ser Phe Leu Val Arg Glu Ser Glu Thr Phe Val580 585 590ggc gac tac acg ctc tct ttc tgg cgg aac ggg aaa gtc cag cac tgc1945Gly Asp Tyr Thr Leu Ser Phe Trp Arg Asn Gly Lys Val Gln His Cys595 600 605cgt atc cac tcc cgg caa gat gct ggg acc ccc aag ttc ttc ttg aca1993Arg Ile His Ser Arg Gln Asp Ala Gly Thr Pro Lys Phe Phe Leu Thr610 615 620gac aac ctc gtc ttt gac tcc ctc tat gac ctc atc acg cac tac cag2041Asp Asn Leu Val Phe Asp Ser Leu Tyr Asp Leu Ile Thr His Tyr Gln625 630 635 640cag gtg ccc ctg cgc tgt aat gag ttt gag atg cga ctt tca gag cct2089Gln Val Pro Leu Arg Cys Asn Glu Phe Glu Met Arg Leu Ser Glu Pro645 650 655gtc cca cag acc aac gcc cac gag agc aaa gag tgg tac cac gcg agc2137Val Pro Gln Thr Asn Ala His Glu Ser Lys Glu Trp Tyr His Ala Ser660 665 670ctg acc aga gca cag gct gag cac atg cta atg cgc gtc cct cgt gat2185Leu Thr Arg Ala Gln Ala Glu His Met Leu Met Arg Val Pro Arg Asp675 680 685ggg gcc ttc ctg gtg cgg aag cgg aat gaa ccc aac tca tat gcc atc2233Gly Ala Phe Leu Val Arg Lys Arg Asn Glu Pro Asn Ser Tyr Ala Ile690 695 700tct ttc cgg gct gag ggc aag atc aag cat tgc cgt gtc cag caa gag228lSer Phe Arg Ala Glu Gly Lys Ile Lys His Cys Arg Val Gln Gln Glu705 710 715 720ggc cag aca gtg atg cta ggg aac tcg gag ttc gac agc ctt gtt gac2329Gly Gln Thr Val Met Leu Gly Asn Ser Glu Phe Asp Ser Leu Val Asp725 730 735ctc atc agc tac tat gag aaa cac ccg cta tac cgc aag atg aag ctg2377Leu Ile Ser Tyr Tyr Glu Lys His Pro Leu Tyr Arg Lys Met Lys Leu740 745 750cgc tat ccc atc aac gag gag gca ctg gag aag att ggc aca gct gag2425Arg Tyr Pro Ile Asn Glu Glu Ala Leu Glu Lys Ile Gly Thr Ala Glu755 760 765cct gac tac ggg gcc ctg tat gag gga cgc aac cct ggc ttc tat gta2473Pro Asp Tyr Gly Ala Leu Tyr Glu Gly Arg Asn Pro Gly Phe Tyr Val770 775 780gag gca aac cct atg cca act ttc aag tgt gca gtc aaa gcc ctc ttt2521Glu Ala Asn Pro Met Pro Thr Phe Lys Cys Ala Val Lys Ala Leu Phe785 790 795 800gac tac aag gcc cag agg gag gac gag ctg acc ttc atc aag agc gcc2569Asp Tyr Lys Ala Gln Arg Glu Asp Glu Leu Thr Phe Ile Lys Ser Ala805 810 815
atc atc cag aat gtg gag aag caa gag gga ggc tgg tgg cga ggg gac2617Ile Ile Gln Asn Val Glu Lys Gln Glu Gly Gly Trp Trp Arg Gly Asp820 825 830tac gga ggg aag aag cag ctg tgg ttc cca tca aac tac gtg gaa gag2665Tyr Gly Gly Lys Lys Gln Leu Trp Phe Pro Ser Asn Tyr Val Glu Glu835 840 845atg gtc aac ccc gtg gcc ctg gag ccg gag agg gag cac ttg gac gag2713Met Val Asn Pro Val Ala Leu Glu Pro Glu Arg Glu His Leu Asp Glu850 855 860aac agc ccc cta ggg gac ttg ctg cgg ggg gtc ttg gat gtg ccg gct2761Asn Ser Pro Leu Gly Asp Leu Leu Arg Gly Val Leu Asp Val Pro Ala865 870 875 880tgt cag att gcc atc cgt cct gag ggc aag aac aac cgg ctc ttc gtc2809Cys Gln Ile Ala Ile Arg Pro Glu Gly Lys Asn Asn Arg Leu Phe Val885 890 895ttc tcc atc agc atg gcg tcg gtg gcc cac tgg tcc ctg gat gtt gct2857Phe Ser Ile Ser Met Ala Ser Val Ala His Trp Ser Leu Asp Val Ala900 905 910gcc gac tca cag gag gag ctg cag gac tgg gtg aaa aag atc cgt gaa2905Ala Asp Ser Gln Glu Glu Leu Gln Asp Trp Val Lys Lys Ile Arg Glu915 920 925gtg gcc cag aca gca gac gcc agg ctc act gaa ggg aag ata atg gaa2953Val Ala Gln Thr Ala Asp Ala Arg Leu Thr Glu Gly Lys Ile Met Glu930 935 940cgg agg aag aag att gcc ctg gag ctc tct gaa ctt gtc gtc tac tgc3001Arg Arg Lys Lys Ile Ala Leu Glu Len Ser Glu Leu Val Val Tyr Cys945 950 955 960cgg cct gtt ccc ttt gat gaa gag aag att ggc aca gaa cgt gct tgc3049Arg Pro Val Pro Phe Asp Glu Glu Lys Ile Gly Thr Glu Arg Ala Cys965 970 975tac cgg gac atg tca tcc ttc ccg gaa acc aag gct gag aaa tac gtg3097Tyr Arg Asp Met Ser Ser Phe Pro Glu Thr Lys Ala Glu Lys Tyr Val980 985 990aac aag gcc aaa ggc aag aag ttc ctt cag tac aat cga ctg cag ctc3145Asn Lys Ala Lys Gly Lys Lys Phe Leu Gln Tyr Asn Arg Leu Gln Leu995 10001005tcc cgc atc tac ccc aag ggc cag cga ctg gat tcc tcc aac tac3190Ser Arg Ile Tyr Pro Lys Gly Gln Arg Leu Asp Ser Ser Asn Tyr101010151020gat cct ttg ccc atg tgg atc tgt ggc agt cag ctt gtg gcc ctc3235Asp Pro Leu Pro Met Trp Ile Cys Gly Ser Gln Leu Val Ala Leu102510301035aac ttc cag acc cct gac aag cct atg cag atg aac cag gcc ctc3280Asn Phe Gln Thr Pro Asp Lys Pro Met Gln Met Asn Gln Ala Leu104010451050
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Thr Ser Ser Lys Ile Tyr Tyr Ser Glu Glu Thr Ser Ser Asp Gln Gly515 520 525Asn Glu Asp Glu Glu Glu Pro Lys Glu Val Ser Ser Ser Thr Glu Leu530 535 540His Ser Asn Glu Lys Trp Phe His Gly Lys Leu Gly Ala Gly Arg Asp545 550 555 560Gly Arg His Ile Ala Glu Arg Leu Leu Thr Glu Tyr Cys Ile Glu Thr565 570 575Gly Ala Pro Asp Gly Ser Phe Leu Val Arg Glu Ser Glu Thr Phe Val580 585 590Gly Asp Tyr Thr Leu Ser Phe Trp Arg Asn Gly Lys Val Gln His Cys595 600 605Arg Ile His Ser Arg Gln Asp Ala Gly Thr Pro Lys Phe Phe Leu Thr610 615 620Asp Asn Leu Val Phe Asp Ser Leu Tyr Asp Leu Ile Thr His Tyr Gln625 630 635 640Gln Val Pro Leu Arg Cys Asn Glu Phe Glu Met Arg Leu Ser Glu Pro645 650 655Val Pro Gln Thr Asn Ala His Glu Ser Lys Glu Trp Tyr His Ala Ser660 665 670Leu Thr Arg Ala Gln Ala Glu His Met Leu Met Arg Val Pro Arg Asp675 680 685Gly Ala Phe Leu Val Arg Lys Arg Asn Glu Pro Asn Ser Tyr Ala Ile690 695 700Ser Phe Arg Ala Glu Gly Lys Ile Lys His Cys Arg Val Gln Gln Glu705 710 715 720Gly Gln Thr Val Met Leu Gly Asn Ser Glu Phe Asp Ser Leu Val Asp725 730 735Leu Ile Ser Tyr Tyr Glu Lys His Pro Leu Tyr Arg Lys Met Lys Leu740 745 750
Arg Tyr Pro Ile Asn Glu Glu Ala Leu Glu Lys Ile Gly Thr Ala Glu755 760 765Pro Asp Tyr Gly Ala Leu Tyr Glu Gly Arg Asn Pro Gly Phe Tyr Val770 775 780Glu Ala Asn Pro Met Pro Thr Phe Lys Cys Ala Val Lys Ala Leu Phe785 790 795 800Asp Tyr Lys Ala Gln Arg Glu Asp Glu Leu Thr Phe Ile Lys Ser Ala805 810 815Ile Ile Gln Asn Val Glu Lys Gln Glu Gly Gly Trp Trp Arg Gly Asp820 825 830Tyr Gly Gly Lys Lys Gln Leu Trp Phe Pro Ser Asn Tyr Val Glu Glu835 840 845Met Val Asn Pro Val Ala Leu Glu Pro Glu Arg Glu His Leu Asp Glu850 855 860Asn Ser Pro Leu Gly Asp Leu Leu Arg Gly Val Leu Asp Val Pro Ala865 870 875 880Cys Gln Ile Ala Ile Arg Pro Glu Gly Lys Asn Asn Arg Leu Phe Val885 890 895Phe Ser Ile Ser Met Ala Ser Val Ala His Trp Ser Leu Asp Val Ala900 905 910Ala Asp Ser Gln Glu Glu Leu Gln Asp Trp Val Lys Lys Ile Arg Glu915 920 925Val Ala Gln Thr Ala Asp Ala Arg Leu Thr Glu Gly Lys Ile Met Glu930 935 940Arg Arg Lys Lys Ile Ala Leu Glu Leu Ser Glu Leu Val Val Tyr Cys945 950 955 960Arg Pro Val Pro Phe Asp Glu Glu Lys Ile Gly Thr Glu Arg Ala Cys965 970 975Tyr Arg Asp Met Ser Ser Phe Pro Glu Thr Lys Ala Glu Lys Tyr Val980 985 990
Asn Lys Ala Lys Gly Lys Lys Phe Leu Gln Tyr Asn Arg Leu Gln Leu995 10001005Ser Arg Ile Tyr Pro Lys Gly Gln Arg Leu Asp Ser Ser Asn Tyr101010151020Asp Pro Leu Pro Met Trp Ile Cys Gly Ser Gln Leu Val Ala Leu102510301035Asn Phe Gln Thr Pro Asp Lys Pro Met Gln Met Asn Gln Ala Leu104010451050Phe Met Thr Gly Arg His Cys Gly Tyr Val Leu Gln Pro Ser Thr105510601065Met Arg Asp Glu Ala Phe Asp Pro Phe Asp Lys Ser Ser Leu Arg107010751080Gly Leu Glu Pro Cys Ala Ile Ser Ile Glu Val Leu Gly Ala Arg108510901095His Leu Pro Lys Asn Gly Arg Gly Ile Val Cys Pro Phe Val Glu110011051110Ile Glu Val Ala Gly Ala Glu Tyr Asp Ser Thr Lys Gln Lys Thr111511201125Glu Phe Val Val Asp Asn Gly Leu Asn Pro Val Trp Pro Ala Lys113011351140Pro Phe His Phe Gln Ile Ser Asn Pro Glu Phe Ala Phe Leu Arg114511501155Phe Val Val Tyr Glu Glu Asp Met Phe Ser Asp Gln Asn Phe Leu116011651170Ala Gln Ala Thr Phe Pro Val Lys Gly Leu Lys Thr Gly Tyr Arg117511801185Ala Val Pro Leu Lys Asn Asn Tyr Ser Glu Asp Leu Glu Leu Ala119011951200Ser Leu Leu Ile Lys Ile Asp Ile Phe Pro Ala Lys Gln Glu Asn120512101215
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<221>CDS<222>(153)..(3911)<400>3gaattcggcg ctgagtgacc cgagtcggga cgcgggctgc gcgcgcggga ccccggagcc 60caaacccggg gcaggcgggc agctgtgccc gggcggcacg gccagcttcc tgatttctcc120cgattccttc cttctccctg gagcggccga ca atg tcc acc acg gtc aat gta 173Met Ser Thr Thr Val Asn Val1 5gat tcc ctt gcg gaa tat gag aag agc cag atc aag aga gcc ctg gag 221Asp Ser Leu Ala Glu Tyr Glu Lys Ser Gln Ile Lys Arg Ala Leu Glu10 15 20ctg ggg acg gtg atg act gtg ttc agc ttc cgc aag tcc acc ccc gag 269Leu Gly Thr Val Met Thr Val Phe Ser Phe Arg Lys Ser Thr Pro Glu25 30 35cgg aga acc gtc cag gtg atc atg gag acg cgg cag gtg gcc tgg agc 317Arg Arg Thr Val Gln Val Ile Met Glu Thr Arg Gln Val Ala Trp Ser40 45 50 55aag acc gcc gac aag atc gag ggc ttc ttg gat atc atg gaa ata aaa 365Lys Thr Ala Asp Lys Ile Glu Gly Phe Leu Asp Ile Met Glu Ile Lys60 65 70gaa atc cgc cca ggg aag aac tcc aaa gat ttc gag cga gca aaa gca 413Glu Ile Arg Pro Gly Lys Asn Ser Lys Asp Phe Glu Arg Ala Lys Ala75 80 85
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aac acg tac ctt aca ggt gac cag ctg cgg agc gag tcg tcc cca gaa1181Asn Thr Tyr Leu Thr Gly Asp Gln Leu Arg Ser Glu Ser Ser Pro Glu330 335 340gct tac atc cgc tgc ctg cgc atg ggc tgt cgc tgc att gaa ctg gac1229Ala Tyr Ile Arg Cys Leu Arg Met Gly Cys Arg Cys Ile Glu Leu Asp345 350 355tgc tgg gac ggg ccc gat ggg aag ccg gtc atc tac cat ggc tgg acg1277Cys Trp Asp Gly Pro Asp Gly Lys Pro Val Ile Tyr His Gly Trp Thr360 365 370 375cgg act acc aag atc aag ttt gat gac gtc gtg cag gcc atc aaa gac1325Arg Thr Thr Lys Ile Lys Phe Asp Asp Val Val Gln Ala Ile Lys Asp380 385 390cac gcc ttt gtt acc tcg agc ttc cca gtg atc ctg tcc atc gag gag1373His Ala Phe Val Thr Ser Ser Phe Pro Val Ile Leu Ser Ile Glu Glu395 400 405cac tgc agc gtg gag caa cag cgt cac atg gcc aag gcc ttc aag gaa1421His Cys Ser Val Glu Gln Gln Arg His Met Ala Lys Ala Phe Lys Glu410 415 420gta ttt ggc gac ctg ctg ttg acg aag ccc acg gag gcc agt gct gac1469Val Phe Gly Asp Leu Leu Leu Thr Lys Pro Thr Glu Ala Ser Ala Asp425 430 435cag ctg ccc tcg ccc agc cag ctg cgg gag aag atc atc atc aag cat1517Gln Leu Pro Ser Pro Ser Gln Leu Arg Glu Lys Ile Ile Ile Lys His440 445 450 455aag aag ctg ggc ccc cga ggc gat gtg gat gtc aac atg gag gac aag1565Lys Lys Leu Gly Pro Arg Gly Asp Val Asp Val Asn Met Glu Asp Lys460 465 470aag gac gaa cac aag caa cag ggg gag ctg tac atg tgg gat tcc att1613Lys Asp Glu His Lys Gln Gln Gly Glu Leu Tyr Met Trp Asp Ser Ile475 480 485gac cag aaa tgg act cgg cac tsc tgc gcc att gct gat gcc aag ctg1661Asp Gln Lys Trp Thr Arg His Tyr Cys Ala Ile Ala Asp Ala Lys Leu490 495 500tcc ttc agt gat gac att gaa cag act atg gag gag gaa gtg ccc cag1709Ser Phe Ser Asp Asp Ile Glu Gln Thr Met Glu Glu Glu Val Pro Gln505 510 515gat ata ccc cct aca gaa cta cat ttt ggg gag aaa tgg ttc cac aag1757Asp Ile Pro Pro Thr Glu Leu His Phe Gly Glu Lys Trp Phe His Lys520 525 530 535aag gtg gag aag agg acg agt gcc gag aag ttg ctg cag gaa tac tgc1805Lys Val Glu Lys Arg Thr Ser Ala Glu Lys Leu Leu Gln Glu Tyr Cys540 545 550atg gag acg ggg ggc aag gat ggc acc ttc ctg gtt cgg gag agc gag1853Met Glu Thr Gly Gly Lys Asp Gly Thr Phe Leu Val Arg Glu Ser Glu555 560 565
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Phe Glu Trp Phe Gln Ser Ile Arg Glu Ile Thr Trp Lys Ile Asp Ser900 905 910Lys Glu Asn Asn Met Lys Tyr Trp Glu Lys Asn Gln Ser Ile Ala Ile915 920 925Glu Leu Ser Asp Leu Val Val Tyr Cys Lys Pro Thr Ser Lys Thr Lys930 935 940Asp Asn Leu Glu Asn Pro Asp Phe Arg Glu Ile Arg Ser Phe Val Glu945 950 955 960Thr Lys Ala Asp Ser Ile Ile Arg Gln Lys Pro Val Asp Leu Leu Lys965 970 975Tyr Asn Gln Lys Gly Leu Thr Arg Val Tyr Pro Lys Gly Gln Arg Val980 985 990Asp Ser Ser Asn Tyr Asp Pro Phe Arg Leu Trp Leu Cys Gly Ser Gln995 10001005Met Val Ala Leu Asn Phe Gln Thr Ala Asp Lys Tyr Met Gln Met101010151020ASn His Ala Leu Phe Ser Leu Asn Gly Arg Thr Gly Tyr Val Leu102510301035Gln Pro Glu Ser Met Arg Thr Glu Lys Tyr Asp Pro Met Pro Pro104010451050Glu Ser Gln Arg Lys Ile Leu Met Thr Leu Thr Val Lys Val Leu105510601065Gly Ala Arg His Leu Pro Lys Leu Gly Arg Ser Ile Ala Cys Pro107010751080Phe Val Glu Val Glu Ile Cys Gly Ala Glu Tyr Gly Asn Asr Lys108510901095Phe Lys Thr Thr Val Val Asn Asp Asn Gly Leu Ser Pro Ile Trp110011051110Ala Pro Thr Gln Glu Lys Val Thr Phe Glu Ile Tyr Asp Pro Asn111511201125
Leu Ala Phe Leu Arg Phe Val Val Tyr Glu Glu Asp Met Phe Ser113011351140Asp Pro Asn Phe Leu Ala His Ala Thr Tyr Pro Ile Lys Ala Val114511501155Lys Ser Gly Phe Arg Ser Val Pro Leu Lys Asn Gly Tyr Ser Glu116011651170Asp Ile Glu Leu Ala Ser Leu Leu Val Phe Cys Glu Met Arg Pro117511801185Val Leu Glu Ser Glu Glu Glu Leu Tyr Ser Ser Cys Arg Gln Leu119011951200Arg Arg Arg Gln Glu Glu Leu Asn Asn Gln Leu Phe Leu Tyr Asp120512101215Thr His Gln Asn Leu Arg Asn Ala Asn Arg Asp Ala Leu Val Lys122012251230Glu Phe Ser Val Asn Glu Asn His Ser Ser Cys Thr Arg Arg Asn123512401245Ala Thr Arg Gly1250
權利要求
1.治療或預防患者疼痛的方法，該方法包括抑制對象體內(nèi)的磷脂酶Cγ(PLCγ)活性或表達。
2.如權利要求1的方法，其中，所述對象是人。
3.如權利要求1的方法，其中，所述方法包括調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
4.如權利要求3的方法，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
5.如權利要求3的方法，其中，疼痛信號源自外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
6.如權利要求1的方法，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
7.如權利要求6的方法，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
8.如權利要求6的方法，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
9.如權利要求1的方法，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
10.治療或預防患者疼痛的方法，該方法包括給所述對象服用能夠抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達的制劑。
11.如權利要求10的方法，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
12.如權利要求11的方法，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
13.如權利要求11的方法，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
14.如權利要求10的方法，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
15.如權利要求10的方法，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子，和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
16.如權利要求15的方法，其中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
17.如權利要求16的方法，其中，所述反義分子是大體上互補于包括能夠編碼具有選自SEQ ID NO2和SEQ ID NO4的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的核酸的核酸。
18.如權利要求16的方法，其中，所述反義分子是大體上互補于包括選自SEQID NO1和SEQ ID NO3的核苷酸序列的核酸的核酸。
19.如權利要求16的方法，其中，所述部分mRNA包括至少5個連續(xù)的堿基。
20.如權利要求16的方法，其中，所述其中，所述siRNA或siRNA-樣分子大體上與編碼PLCγ的mRNA的一部分相同。
21.如權利要求20的方法，其中，所述siRNA或siRNA-樣分子大體上與相當于能夠編碼具有選自SEQ ID NO2和SEQ ID NO4的氨基酸序列的多肽的DNA序列的一部分mRNA相同。
22.如權利要求20的方法，其中，所述siRNA或siRNA-樣分子大體上與相當于選自SEQ ID NO1和SEQ ID NO3的DNA序列的一部分mRNA相同。
23.如權利要求10的方法，其中，所述方法包括調(diào)節(jié)CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
24.如權利要求23的方法，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
25.如權利要求23的方法，其中，疼痛信號源自PNS細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
26.如權利要求10的方法，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
27.如權利要求26的方法，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
28.如權利要求26的方法，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
29.如權利要求10的方法，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
30.治療或預防患者疼痛的方法，包括給所述對象服用組合物，包括能夠抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達的制劑；和可以藥用的載體。
31.如權利要求30的方法，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
32.如權利要求31的方法，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
33.如權利要求31的方法，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
34.如權利要求30的方法，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
35.如權利要求30的方法，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
36.如權利要求35的方法，其中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
37.如權利要求30的方法，其中，所述方法包括調(diào)節(jié)CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
38.如權利要求37的方法，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
39.如權利要求38的方法，其中，疼痛信號源自PNS細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
40.如權利要求30的方法，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
41.如權利要求40的方法，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
42.如權利要求40的方法，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
43.如權利要求30的方法，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
44.預防和/或治療對象疼痛的組合物，包括能夠抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達制劑；和可以藥用的載體。
45.如權利要求44的組合物，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
46.如權利要求45的組合物，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
47.如權利要求45的組合物，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
48.如權利要求46的組合物，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
49.如權利要求46的組合物，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子，和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
50.如權利要求49的組合物，其中，所述反義分子大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
51.如權利要求44的組合物，其中，所述方法包括調(diào)節(jié)CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
52.如權利要求51的組合物，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
53.如權利要求51的組合物，其中，疼痛信號源自PNS細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
54.如權利要求44的組合物，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
55.如權利要求54的組合物，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
56.如權利要求54的組合物，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
57.如權利要求44的組合物，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
58.一種包裝，包括能夠抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達的制劑，以及將它用于治療或預防疼痛的說明書。
59.如權利要求58的包裝，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
60.如權利要求59的包裝，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
61.如權利要求59的包裝，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
62.如權利要求59的包裝，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
63.如權利要求59的包裝，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子，和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
64.如權利要求63的包裝，其中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
65.如權利要求59的包裝，其中，所述方法包括調(diào)節(jié)CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
66.如權利要求65的包裝，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
67.如權利要求65的包裝，其中，疼痛信號源自PNS細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
68.如權利要求59的包裝，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
69.如權利要求68的包裝，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
70.如權利要求68的包裝，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
71.如權利要求58的包裝，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
72.一種包裝，包括組合物，包括能夠抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達的制劑和可以藥用的載體；和將所述組合物用于治療或預防疼痛的說明書。
73.如權利要求72的包裝，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
74.如權利要求73的包裝，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[β-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
75.如權利要求73的包裝，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
76.如權利要求72的包裝，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
77.如權利要求72的包裝，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子，和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
78.如權利要求77的包裝，其中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
79.如權利要求72的包裝，其中，所述方法包括調(diào)節(jié)CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
80.如權利要求79的包裝，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
81.如權利要求79的包裝，其中，疼痛信號源自PNS細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
82.如權利要求72的包裝，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
83.如權利要求82的包裝，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
84.如權利要求82的包裝，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
85.如權利要求72的包裝，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
86.將能夠抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達的制劑用于治療或預防疼痛的用途。
87.如權利要求86的用途，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
88.如權利要求87的用途，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
89.如權利要求87的用途，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
90.如權利要求86的用途，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
91.如權利要求86的用途，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子，和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
92.如權利要求91的用途，其中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
93.如權利要求86的用途，其中，所述方法包括調(diào)節(jié)CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
94.如權利要求93的用途，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
95.如權利要求93的用途，其中，疼痛信號源自PNS細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
96.如權利要求86的用途，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
97.如權利要求96的用途，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
98.′如權利要求96的用途，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
99.如權利要求86的用途，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
100.將能夠抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達的制劑用于制備用于治療或預防疼痛的藥品的用途。
101.如權利要求100的用途，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
102.如權利要求101的用途，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
103.如權利要求101的用途，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
104.如權利要求102的用途，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
105.如權利要求104的用途，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子，和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
106.如權利要求105的用途，其中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
107.如權利要求100的用途，其中，所述方法包括調(diào)節(jié)CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
108.如權利要求107的用途，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
109.如權利要求107的用途，其中，疼痛信號源自PNS細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
110.如權利要求100的用途，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
111.如權利要求110的用途，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
112.如權利要求110的用途，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
113.如權利要求100的用途，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
114.用于治療或預防疼痛的組合物，包括能夠調(diào)節(jié)對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達的制劑；和可以藥用的載體。
115.如權利要求114的用途，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
116.如權利要求115的用途，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
117.如權利要求115的用途，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
118.如權利要求114的用途，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
119.如權利要求114的用途，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子，和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
120.如權利要求119的用途，其中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
121.如權利要求114的用途，其中，所述方法包括調(diào)節(jié)CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
122.如權利要求121的用途，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
123.如權利要求121的用途，其中，疼痛信號源自PNS細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
124.如權利要求114的用途，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
125.如權利要求124的用途，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
126.如權利要求124的用途，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
127.如權利要求114的用途，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
128.一種鑒定或表征治療或預防疼痛的制劑的方法，包括讓所述制劑與具有PLCγ的活性或表達的細胞接觸；和在存在所述制劑的條件下，確定是否存在PLCγ的活性或表達的抑制作用；其中，所述所述抑制作用是所述制劑可用于治療或預防疼痛的指標。
129.一種鑒定或表征治療或預防疼痛的制劑的方法，包括讓所述制劑與PLCγ接觸；和確定在存在所述制劑的條件下是否存在對PLCγ活性的抑制作用；其中，所述所述抑制作用是所述制劑可用于治療或預防疼痛的指標。
130.如權利要求128的方法，其中，所述方法包括確定是否存在CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達的抑制作用。
131.如權利要求130的方法，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
132.如權利要求130的方法，其中，疼痛信號源自PNS細胞或通向CNS細胞的感覺纖維跨突觸。
133.如權利要求128的方法，其中，所述疼痛是神經(jīng)性疼痛。
134.如權利要求133的方法，其中，所述神經(jīng)性疼痛與神經(jīng)或?qū)Ч軗p傷。
135.如權利要求133的方法，其中，所述神經(jīng)性疼痛選自下列一組軀體和內(nèi)臟疼痛。
136.如權利要求128的方法，其中，所述疼痛選自下列一組慢性炎性疼痛，與關節(jié)炎相關的疼痛，纖維肌痛，后背疼痛，與癌癥疼痛，與消化系統(tǒng)疾病相關的疼痛，與克羅恩氏病相關的疼痛，與自身免疫性疾病相關的疼痛，與內(nèi)分泌病相關的疼痛，與糖尿病神經(jīng)病變相關的疼痛，幻肢疼痛，自發(fā)痛，慢性手術后疼痛，慢性顳下頜疼痛，灼痛，皰疹后神經(jīng)痛，AIDS-相關的疼痛，I型和II型復雜區(qū)域性疼痛綜合癥，三叉神經(jīng)痛，慢性后背疼痛，與脊髓損傷相關的疼痛和復發(fā)性急性痛。
137.A減輕對象傷害性感受的方法，包括抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達。
138.如權利要求137的方法，其中，所述對象是人。
139.如權利要求137的方法，其中，所述方法包括抑制CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
140.如權利要求139的方法，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
141.A減輕對象傷害性感受的方法，包括給所述對象服用能夠抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達的制劑。
142.如權利要求141的方法，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
143.如權利要求142的方法，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
144.如權利要求142的方法，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
145.如權利要求142的方法，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
146.如權利要求142的方法，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子，和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
147.如權利要求146的方法，其中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
148.如權利要求141的方法，其中，所述方法包括抑制CNS細胞或組織中PLCγ的活性或表達。
149.如權利要求148的方法，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
150.A減輕對象傷害性感受的方法，包括給所述對象服用組合物，包括能夠抑制對象體內(nèi)PLCγ的活性或表達的制劑；和可以藥用的載體。
151.如權利要求150的方法，其中，所述制劑是PLCγ抑制劑。
152.如權利要求151的方法，其中，所述PLCγ抑制劑選自下列一組三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸膽堿，硫酸新霉素，精胺四氫氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亞乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。
153.如權利要求151的方法，其中，所述PLCγ抑制劑是三環(huán)癸烷-9-基-黃原酸鹽。
154.如權利要求150的方法，其中，所述制劑是抗-PLCγ抗體。
155.如權利要求150的方法，其中，所述制劑選自反義分子，核糖酶，siRNA，siRNA-樣分子，和配體與PLCγ結(jié)合的抑制劑。
156.如權利要求155的方法，其中，所述反義分子是大體上互補于編碼PLCγ的mRNA的一部分的核酸。
157.如權利要求150的方法，其中，所述方法包括抑制PLCγ的活性或表達CNS細胞或組織中。
158.如權利要求157的方法，其中，所述CNS細胞或組織是脊髓細胞或組織。
159.一種鑒定或表征用于治療或預防疼痛的化合物的方法，所述方法包括(a)讓測試化合物與細胞接觸，細胞包括第一種核酸，所述核酸包括正常情況下與PLCγ基因結(jié)合的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，并且可結(jié)合地與第二種核酸連接，第二種核酸包括一個能編碼報道蛋白的報道基因；和(b)確定在存在所述測試化合物的條件下，報道基因表達或報道蛋白活性是否減弱；其中，所述報道基因表達或報道蛋白活性的減弱是所述測試化合物可用于治療或預防疼痛的指標。
160.如權利要求159的方法，其中，所述細胞是CNS-衍生的細胞。
161.一種鑒定或表征治療或預防疼痛的制劑的方法，包括讓所述制劑和PLCγ配體與包括PLCγ的細胞接觸；和在存在所述制劑的條件下，確定是否存在配體與PLCγ結(jié)合的減弱；其中，所述減弱是所述制劑可用于治療或預防疼痛的指標。
162.如權利要求161的方法，其中，所述細胞是CNS-衍生的細胞
163.一種鑒定或表征治療或預防疼痛的制劑的方法，包括包括讓所述制劑和PLCγ配體與PLCγ接觸；和確定是否存在減弱配體與PLCγ結(jié)合在存在所述制劑的條件下；其中，所述減弱是所述制劑可用于治療或預防疼痛的指標。
164.如權利要求15，35，146，155，161和163中任意一項的方法，其中，所述配體是有絲分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段。
165.如權利要求164的方法，其中，所述有絲分裂原-激活的蛋白激酶是細胞外信號相關的激酶。
166.如權利要求165的方法，其中，所述細胞外信號相關的激酶是ERK1或ERK2。
167.如權利要求15，35，146，155，161和163-166中任意一項的方法，其中，所述結(jié)合是與所述PLCγ的D-結(jié)構域的結(jié)合。
168.如權利要求49的組合物，其中，所述配體是有絲分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段。
169.如權利要求168的組合物，其中，所述有絲分裂原-激活的蛋白激酶是細胞外信號相關的激酶。
170.如權利要求169的組合物，其中，所述細胞外信號相關的激酶是ERK1或ERK2。
171.如權利要求168的組合物，其中，所述結(jié)合是與所述PLCγ的D-結(jié)構域的結(jié)合。
172.如權利要求49或6，3的包裝，其中，所述配體是有絲分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段。
173.如權利要求172的包裝，其中，所述有絲分裂原-激活的蛋白激酶是細胞外信號相關的激酶。
174.如權利要求173的包裝，其中，所述細胞外信號相關的激酶是ERK1或ERK2。
175.如權利要求174的包裝，其中，所述結(jié)合是與所述PLCγ的D-結(jié)構域的結(jié)合。
176.如權利要求91，105和119中任意一項的用途，其中，所述配體是有絲分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段。
177.如權利要求176的用途，其中，所述有絲分裂原-激活的蛋白激酶是細胞外信號相關的激酶。
178.如權利要求177的用途，其中，所述細胞外信號相關的激酶是ERK1或ERK2。
179.如權利要求179的用途，其中，所述結(jié)合是與所述PLCγ的D-結(jié)構域的結(jié)合。
全文摘要
本發(fā)明提供了通過調(diào)節(jié)，例如，抑制對象體內(nèi)PLC
文檔編號A61P29/00GK101052421SQ200580015416
公開日2007年10月10日 申請日期2005年5月13日 優(yōu)先權日2004年5月14日
發(fā)明者杰佛里A·M·庫爾, 伊薇思·德科寧克 申請人:拉瓦爾大學