專利名稱：透明質(zhì)酸鉍及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種透明質(zhì)酸鉍鹽及其制備方法和其在制備預(yù)防和治療胃腸道疾病藥物和保健藥品方面的應(yīng)用。
透明質(zhì)酸又稱玻璃酸(hyaluronic acid，以下簡稱HA)。HA是由D-葡糖醛酸和N-乙?；咸墙M成的雙糖單位有規(guī)律重復(fù)構(gòu)成的大分子鏈狀多糖，分子量從幾萬到幾百萬，具有良好的潤滑性、黏彈性、非免疫原性和高度的保濕性。目前，商品HA來源于自動物提取或細(xì)菌發(fā)酵制備，主要以鈉鹽的形式應(yīng)用于臨床治療(主要在眼科、骨科、皮膚病、手術(shù)后防粘連等方面的應(yīng)用)和化妝品中。透明質(zhì)酸的鉀、鈣、鎂、鋁、銨、銀和金鹽制備及其應(yīng)用已在多個(gè)專利中公開，透明質(zhì)酸與元素周期表第4周期第3族金屬的離子成鹽(絡(luò)合)，如透明質(zhì)酸鋅和透明質(zhì)酸鈷已證實(shí)對皮膚潰瘍、褥瘡有療效(WO9010020)，透明質(zhì)酸鋅具有顯著的胃保護(hù)活性，可用于預(yù)防和治療消化性潰瘍(CN1126548)。透明質(zhì)酸鉍鹽(復(fù)合物)及其制備和應(yīng)用還未見文獻(xiàn)公開報(bào)道。
胃腸道疾病包括慢性胃炎、消化性潰瘍、功能性消化不良和胃癌等，其中消化性潰瘍是一種嚴(yán)重困擾現(xiàn)代人身體健康的高發(fā)病種。據(jù)我國流行病學(xué)調(diào)查表明，10％的人群在其一生中患過此病，發(fā)病年齡以青壯年最高(20歲～50歲約占70％)。消化性潰瘍的發(fā)病機(jī)理較為復(fù)雜，至今尚未完全闡明，概括其基本原理即胃腸局部黏膜損害(致潰瘍)因素和黏膜保護(hù)(黏膜屏障)因素失衡所致，當(dāng)損害因素增強(qiáng)或保護(hù)因素削弱時(shí)，就出現(xiàn)了潰瘍。近年來的新發(fā)現(xiàn)認(rèn)為，人體消化性潰瘍的發(fā)生與感染幽門螺旋桿菌有關(guān)。目前公認(rèn)抗生素、制酸劑和黏膜保護(hù)劑聯(lián)合用藥是治療消化性潰瘍病的最佳方法，其中黏膜保護(hù)劑是一類具有成膜性和抗酸性、能夠阻止胃酸和胃蛋白酶通過黏膜的物質(zhì)，包括硫糖鋁、鉍化合物和前列腺素衍生物等。由于鉍化合物與硫、氧、氮具有較高的親和性，對金屬硫蛋白、黏膜糖蛋白、酶及肽類有較強(qiáng)的結(jié)合能力，而且有試驗(yàn)表明它可有效抑制幽門螺旋桿菌的生長，因此鉍劑是臨床使用最多的一類黏膜保護(hù)劑，常用的有枸櫞酸鉍鉀、次水楊酸鉍、次硝酸鉍和膠體果膠鉍等。鉍劑的藥理作用可歸納為在胃酸條件下產(chǎn)生沉淀，黏附于胃黏膜表面形成保護(hù)層，保護(hù)胃黏膜(潰瘍面)，減少胃的不良刺激，促進(jìn)潰瘍黏膜再生和潰瘍愈合；調(diào)節(jié)分泌作用，如降低胃蛋白酶的活性、增加黏蛋白分泌、促進(jìn)黏膜釋放PGE2；吸附細(xì)菌素(如大腸埃希氏菌產(chǎn)生的毒素或霍亂弧菌產(chǎn)生的腸毒素)和對病原性微生物(幽門螺旋桿菌)的直接抗菌活性。生物大分子鉍劑，如膠體果膠鉍以其較強(qiáng)的黏附選擇性，即對胃腸潰瘍面及炎癥表面特殊的親和力，在胃及十二指腸潰瘍、慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、消化道出血等疾病的治療中療效明顯超過其他小分子鉍劑。HA是動物體固有的大分子生物黏多醣，其結(jié)構(gòu)無種屬區(qū)別，具有良好的黏彈性、潤滑性和成膜性。目前的研究表明HA參與了多種細(xì)胞活動和生理過程，如細(xì)胞的遷移和分化、傷口愈合、癌細(xì)胞遷徙，影響生長因子的作用、胚胎形成和發(fā)育以及炎癥的發(fā)生。有試驗(yàn)證實(shí)HA在炎癥和損傷部位有定向聚集的趨勢，高分子HA通過抑制巨噬細(xì)胞的功能具有抗炎活性。在酸性條件下，HA溶液黏度增加，形成大分子的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，呈凝膠狀，具有較強(qiáng)的附著性。HA的這些特性對于透明質(zhì)酸鉍作為黏膜保護(hù)劑及其有利，以下的動物試驗(yàn)也證明了透明質(zhì)酸鉍對乙酸和酸化乙醇致大鼠胃潰瘍的抑制率明顯高于膠體果膠鉍。
本發(fā)明的目的是提供一種可用于制備預(yù)防和治療胃腸道疾病藥物或保健食品的鉍劑及其制備方法，這種鉍劑即透明質(zhì)酸鉍鹽，經(jīng)初步動物試驗(yàn)證明，透明質(zhì)酸鉍用于治療胃腸道潰瘍療效好于膠體果膠鉍。
本發(fā)明中透明質(zhì)酸鉍鹽的特征在于，干燥品中鉍含量為0.5％～40％，糖醛酸含量為20％～45％。
本發(fā)明中透明質(zhì)酸鉍的制備方法如下①將鉍鹽溶于含有多元醇的去離子水中；②將可溶性透明質(zhì)酸鹽溶于去離子水中，用氫氧化鉀溶液調(diào)溶液為堿性；③將步驟①得到的溶液緩慢滴加到步驟②得到的溶液中，同時(shí)滴加氫氧化鉀溶液維持溶液為堿性，攪拌反應(yīng)；④在步驟③得到的溶液中加入乙醇，沉淀，固液分離；⑤用乙醇沖洗步驟④得到的固體沉淀，脫鹽，脫水，收集沉淀，常規(guī)減壓干燥制得成品。
上述透明質(zhì)酸鉍的制備方法中，所述鉍鹽可以使用硝酸鉍、氫氧化鉍、氯化鉍或氧化鉍，所述多元醇可以使用山梨醇、甘露醇或甘油，所述可溶性透明質(zhì)酸鹽可以使用其無機(jī)鹽，如透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸鈣或透明質(zhì)酸鋅，也可以使用其有機(jī)鹽，如透明質(zhì)酸的季銨鹽。
上述透明質(zhì)酸鉍的制備方法中，步驟④和⑤中，可以使用丙酮或甲醇代替乙醇進(jìn)行脫鹽、脫水。
采用本發(fā)明方法制備生產(chǎn)的透明質(zhì)酸鉍，產(chǎn)品純度較高、雜質(zhì)含量較少。通過調(diào)節(jié)反應(yīng)物的比例，可以得到鉍含量為0.5％～40％的產(chǎn)品，最好為15％～35％。
本發(fā)明透明質(zhì)酸鉍具有良好的生物相容性和成膜性，在人工胃液和人工腸液中均可形成高黏度溶膠，作為胃腸道黏膜的保護(hù)層，可避免食物、胃酸、消化酶以及某些藥物對受損黏膜的刺激，促進(jìn)潰瘍愈合。由于HA具有在炎癥和損傷部位有定向聚集的趨勢和一定的抗炎活性，與同類產(chǎn)品相比，透明質(zhì)酸鉍預(yù)防和治療胃腸道疾病的效果更加顯著。
本發(fā)明透明質(zhì)酸鉍可以直接口服用于胃腸道炎癥和胃腸道潰瘍的預(yù)防和治療，也可以與其它功能成分和常用輔料組方，制成適于口服的片、丸、膠囊、顆粒、糖漿、凝膠、溶液或混懸液等藥物制劑或保健食品，口服用于預(yù)防和治療胃腸道疾病，包括慢性胃炎、消化性潰瘍、功能性消化不良和胃癌等，可以達(dá)到減輕疼痛、腹瀉和消化不良等癥狀，保護(hù)消化道黏膜、促進(jìn)潰瘍黏膜再生和潰瘍愈合、減少炎癥發(fā)生等目的。
下面通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)施例1將100克透明質(zhì)酸鈉(平均分子量109萬)分散于5升去離子水中，攪拌溶解，滴加10％氫氧化鉀溶液調(diào)pH值為10～12。另取133克硝酸鉍[Bi(NO3)3·5H2O]和250克甘露醇，加入5升去離子水中，攪拌溶解后緩慢加入上述透明質(zhì)酸鈉堿性溶液，同時(shí)滴加10％氫氧化鉀溶液維持反應(yīng)液pH值在12左右，反應(yīng)完畢加入3倍(V/V)乙醇，攪拌，沉淀，用80％乙醇水溶液充分洗滌沉淀，最后用無水乙醇脫水，35℃～40℃減壓干燥，得成品。成品經(jīng)測定，按干燥品計(jì)，糖醛酸含量為27.9％(W/W)，鉍含量為30.7％(W/W)。
實(shí)施例二將100克透明質(zhì)酸鈉(平均分子量141萬)]分散于5升去離子水中，攪拌溶解，滴加10％氫氧化鉀溶液調(diào)pH值為10～12。另取121克硝酸鉍[Bi(NO3)3·5H2O]和240克山梨醇，攪拌下加入5升去離子水中，溶解后緩慢加入上述透明質(zhì)酸鈉堿性溶液，同時(shí)滴加10％氫氧化鉀溶液維持反應(yīng)液pH值在12左右，反應(yīng)完畢加入3～4倍乙醇(V/V)，攪拌，沉淀，用80％乙醇水溶液充分洗滌沉淀，最后用無水乙醇脫水，35℃～40℃減壓干燥，得成品。成品經(jīng)測定，按干燥品計(jì)，糖醛酸含量為30.1％(W/W)，鉍含量為26.3％(W/W)。
實(shí)施例三將100克透明質(zhì)酸鈉(平均分子量75萬)]分散于5升去離子水中，攪拌溶解，滴加10％氫氧化鉀溶液調(diào)pH值為10～12。另取35克氫氧化鉍[Bi(OH)3]加入5升含60克甘油的水溶液，攪拌下緩慢加入上述透明質(zhì)酸堿性溶液，同時(shí)滴加10％氫氧化鉀維持反應(yīng)液pH值在12左右，反應(yīng)完畢加入2～3倍(V/V)丙酮，沉淀，用70％～80％丙酮水溶液充分洗滌沉淀，最后用丙酮脫水，35℃～40℃減壓干燥，得成品。成品經(jīng)測定，按干燥品計(jì)，糖醛酸含量為34.7％(W/W)，鉍含量為16.9％(W/W)。
本發(fā)明制備的透明質(zhì)酸鉍的初步藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果如下。
1.透明質(zhì)酸鉍對乙酸致大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用。
選用體重150～200g的雌性Wistar大鼠，參考文獻(xiàn)方法〔①藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，第2版.北京人民衛(wèi)生出版社，1991；1158～1160。②中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局，新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編(藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué))，1993；88～89〕制作乙酸燒灼型胃潰瘍模型。在乙醚麻醉的大鼠胃體漿膜面直徑5mm的范圍，用0.2ml冰醋酸處理1.5min來誘發(fā)胃潰瘍。手術(shù)次日將動物隨機(jī)分為6組并開始口服給藥，陰性對照為蒸餾水，陽性對照為膠體果膠鉍原料藥，試驗(yàn)樣品為按本發(fā)明實(shí)施例1制備的透明質(zhì)酸鉍(糖醛酸含量為27.9％，鉍含量為30.7％)和透明質(zhì)酸鈉原料(平均分子量91萬，糖醛酸含量38.9％)。大鼠每天灌胃一次，每次約10ml，連續(xù)給藥10天后處死動物，取胃，用甲醛溶液固定，解剖后，在顯微鏡下測量胃黏膜潰瘍面的大小，測量通過潰瘍中心的最大縱徑(d1)和最大橫徑(d2)，用下列公式計(jì)算潰瘍面積S＝π×(d1/2)×(d2/2)，潰瘍抑制率以對照組與實(shí)驗(yàn)組的差值百分?jǐn)?shù)表示。試驗(yàn)結(jié)果列于下表。
表1透明質(zhì)酸鉍對乙酸致大鼠胃潰瘍的保護(hù)作用
*與對照組比較P＜0.05**與對照組比較比較P＜0.01***與對照組比較比較P＜0.0012.透明質(zhì)酸鉍對鹽酸乙醇所致胃黏膜損傷的防治作用選用體重150～200g的雌性Wistar大鼠，參考文獻(xiàn)方法〔中藥藥理研究方法學(xué)。北京人民衛(wèi)生出版社，1994441〕大鼠禁食不禁水24h，隨機(jī)分組(同上)，灌胃給藥，灌藥30min后，每只大鼠分別灌服鹽酸乙醇(50ml無水乙醇和1ml濃鹽酸的混合物)，劑量為0.5ml/100g體重，酸化乙醇處理1h后將動物處死，摘取胃，甲醛固定后沿胃大彎剪開胃壁，洗滌后觀察胃黏膜損傷情況。測量條索狀出血損傷的長度，結(jié)果見下表。
表2胃對鹽酸乙醇所致大鼠胃黏膜損傷的防治作用
*與對照組比較P＜0.05**與對照組比較比較P＜0.01***與對照組比較比較P＜0.00權(quán)利要求
1.一種透明質(zhì)酸鉍，其特征是干燥品中鉍含量為0.5％～40％，糖醛酸含量為20％～45％。
2.權(quán)利要求1所述透明質(zhì)酸鉍的制備方法包括以下步驟①將鉍鹽溶于含有多元醇的去離子水中；②將可溶性透明質(zhì)酸鹽溶于去離子水中，用氫氧化鉀溶液調(diào)溶液為堿性；③將步驟①得到的溶液緩慢滴加到步驟②得到的溶液中，同時(shí)滴加氫氧化鉀溶液維持溶液為堿性，攪拌反應(yīng)；④在步驟③得到的溶液中加入乙醇，沉淀，固液分離；⑤用乙醇沖洗步驟④得到的固體沉淀，脫鹽，脫水，收集沉淀，常規(guī)減壓干燥制得成品。
3.權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，在所述的步驟①中，所述鉍鹽為硝酸鉍、氫氧化鉍、氯化鉍或氧化鉍。
4.權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，在所述的步驟①中，所述多元醇為山梨醇、甘露醇或甘油。
5.權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，在所述的步驟②中，所述可溶性透明質(zhì)酸鹽為其無機(jī)鹽透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸鈣、透明質(zhì)酸鋅和其有機(jī)鹽透明質(zhì)酸季銨鹽。
6.權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，在所述步驟④和⑤中，用丙酮或甲醇代替乙醇對反應(yīng)液進(jìn)行沉淀、脫鹽、脫水。
7.權(quán)利要求1所述透明質(zhì)酸鉍用于制備預(yù)防和治療胃腸道疾病的藥物或保健藥品。
全文摘要
一種透明質(zhì)酸鉍鹽，其特征是干燥品中鉍含量為0.5％～40％，糖醛酸含量為20％～45％。該透明質(zhì)酸鉍的制備方法可溶性透明質(zhì)酸鹽和鉍鹽在堿性水溶液中反應(yīng)，經(jīng)沉淀，過濾，脫鹽，脫水，干燥等步驟得產(chǎn)品。使用透明質(zhì)酸鉍制備預(yù)防和治療胃腸疾病用途的藥物或保健食品，尤其是制備治療胃腸道潰瘍病的藥物，經(jīng)動物試驗(yàn)證明其療效好于同類產(chǎn)品。
文檔編號A61P1/04GK1765936SQ20051012566
公開日2006年5月3日 申請日期2005年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月2日
發(fā)明者凌沛學(xué), 賀艷麗, 陳建英, 劉杰, 張?zhí)烀? 郭學(xué)平 申請人:凌沛學(xué)