專利名稱：參麥凍干粉針及其質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥凍干粉針及其質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種參麥凍干粉針及其質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
中藥質(zhì)量控制是中藥現(xiàn)代化進程中亟待解決的關(guān)鍵問題之一。目前指紋圖譜已成為國際公認的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的最有效手段之一。通過現(xiàn)代分析手段，用指紋圖譜特征可反映出中藥的內(nèi)在化學成分及其含量。按應(yīng)用對象，可分為中藥材(原料藥材)指紋圖譜、中藥原料藥(包括飲片、配伍顆粒)指紋圖譜、中間體(中間產(chǎn)物)指紋圖譜以及中藥制劑指紋圖譜。中藥指紋圖譜是推動中藥行業(yè)全面進步的關(guān)鍵技術(shù)之一，其應(yīng)用研究，對保證中成藥功效，提高中藥行業(yè)整體水平，促進中藥農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化，推動中藥走向世界，具有重要的現(xiàn)實意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種注射用參麥凍干粉針，本發(fā)明的另一目的在于提供該凍干粉針的質(zhì)量控制方法，包括鑒別、含量測定和/或指紋圖譜測定方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的。
本發(fā)明注射用參麥凍干粉針是由如下重量份的原料制成紅參總皂苷10-19重量份、麥冬總皂苷4-10重量份。
本發(fā)明注射用參麥凍干粉針的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)紅參總皂苷18重量份、麥冬總皂苷9重量份。
本發(fā)明注射用參麥凍干粉針的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)紅參總皂苷17重量份、麥冬總皂苷4.25重量份。
本發(fā)明注射用參麥凍干粉針的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)紅參總皂苷18重量份、麥冬總皂苷6重量份。
本發(fā)明注射用參麥凍干粉針的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)紅參總皂苷10重量份、麥冬總皂苷10重量份。
上述本發(fā)明注射用參麥凍干粉針的制備方法為按上述重量份稱取紅參總皂苷和麥冬總皂苷，加注射用水適量使溶解，用活性炭去除熱原，濾除活性炭，調(diào)節(jié)pH，除菌過濾，用注射用水補足體積，灌裝，冷凍干燥，即得。本發(fā)明凍干粉針每支15-45mg。
本發(fā)明參麥凍干粉針由紅參和麥冬兩味藥物組成。紅參具大補元氣、復(fù)脈固脫，益氣攝血之功能，麥冬具有養(yǎng)陰生津，潤肺清心之功能，二者合用共奏益氣固脫，養(yǎng)陰生津之功效，達到回陽救逆之目的。適用于治療氣陰兩虛型之休克及冠心病的治療。用法與用量靜脈滴注，每次1～2支，一日1～2次，或遵醫(yī)囑。臨用前，先以適量滅菌注射用水充分溶解，再用5％葡萄糖注射液100ml稀釋。10～15日為一療程。
上述本發(fā)明凍干粉針的質(zhì)量控制方法包括如下指紋圖譜測定、鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種。
本發(fā)明凍干粉針的指紋圖譜測定方法為照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈(A)-水(B)進行梯度洗脫，流速為1mL/min；柱溫30℃；使用蒸發(fā)光散射檢測器；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計，應(yīng)不低于3000；人參皂苷Rg1對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得；麥冬皂苷D對照品溶液的制備取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，即得；供試品溶液的制備方法取本發(fā)明凍干粉針一支，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取以上對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，記錄90分鐘的圖譜，即得；供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜應(yīng)在相應(yīng)保留時間處出現(xiàn)相同色譜峰，兩者相似度不低于0.9，對照指紋圖譜見附圖1；共有峰峰號的相對保留時間按分鐘計分別為1號峰為0.0647，2號S峰為1，3號峰為1.0309，4號峰為1.4906，5號峰為1.5701，6號峰為1.6002，7號峰為1.6309，8號峰為1.6987，9號峰為1.8062，10號峰為1.8709，10號峰為麥冬皂苷D的特征峰，11號峰為1.8906，12號峰為1.9104，13號峰為1.9448，14號峰為1.9772，15號峰為2.0281，16號峰為2.0489，17號峰為2.1261，18號峰為2.1556，19號峰為2.2827，20號峰為2.3111；部分共有峰的峰形描述12和13號峰不能達到基線分離，15號峰前有一小尖峰，15、16、17號峰基本能達到基線分離，而且依次遞減；除13和14號峰外，8號峰以后的峰都較小，都能達到基線分離。
上述所使用蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為40℃，氣體壓力為2.0bar。
上述測定方法中梯度洗脫程序為0～18min流動相A體積比由15％線性上升到20％，流動相B體積比由85％線性下降到80％，18～35min流動相A體積比由20％線性上升到21％、流動相B體積比由80％線性下降到79％，35～50min流動相A體積比由21％線性上升到37％、流動相B體積比由79％線性下降到63％，50～85min流動相A體積比由37％線性上升到60％、流動相B體積比由63％線性下降到40％；85～95min流動相A體積比由60％線性上升到80％、流動相B體積比由40％線性下降到20％。
本發(fā)明凍干粉針的鑒別方法為取本發(fā)明凍干粉針粉末50mg，加60％甲醇5ml，超聲使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1和Re對照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；取麥冬皂苷D對照品，加甲醇制成每1ml含0.375mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以比例為12-18∶32-48∶18-26∶8-12的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的三個斑點。
所述展開劑還可以是比例為12-18∶4-6∶1-2∶0.1的乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸的混合溶液。
本發(fā)明含量測定方法包括如下方法中的一種或幾種A.人參皂苷Rg1和Re的含量測定，照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為18∶82的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動相，流速為1.0ml/min；檢測波長203nm；理論塔板數(shù)按人參皂苷Re峰計算，應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Re對照品適量，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.45、人參皂苷Re0.25mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取本發(fā)明凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含5mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明凍干粉針每支21mg含人參皂苷Rg1和Re總和應(yīng)為2.24-3.36mg；B、麥冬皂苷D的含量測定，照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為44∶56的乙腈-水溶液為流動相，流速為1.0ml/min；使用蒸發(fā)光散射檢測器；理論塔板數(shù)按麥冬皂苷D峰計算，應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取本發(fā)明凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含6mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液5μl、20μl和供試品溶液各50μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明凍干粉針每支21mg含麥冬皂苷D應(yīng)為0.084-0.156mg；C、總皂苷的含量測定對照品溶液的制備，精密稱取經(jīng)60℃減壓干燥至恒重的人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Re2mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液10、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，揮盡溶劑，精密加入比例為1-3∶9-7的臨用新配的5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸的混合溶液1ml，于60℃水浴中放置15分鐘，取出，置冰浴冷卻，精密加冰醋酸5ml，搖勻，立即照分光光度法，《中國藥典》2000年版一部附錄V B，在544nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，精密稱取本發(fā)明凍干粉針17mg，至100ml量瓶中，加去離子水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取1ml于具塞試管中，蒸干，照標準曲線制備項下的方法，自“精密加入比例為1-3∶9-7的臨用新配的5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸的混合溶液1ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液的濃度，計算，即得；本發(fā)明凍干粉針每支21mg中含總皂苷以人參皂苷Re計應(yīng)為13.6～20.4mg。
其中麥冬皂苷D的含量測定所用蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為40℃，氣體壓力為2.0bar。
本發(fā)明參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法不僅通過對凍干粉針中有效成分人參皂苷和麥冬皂苷進行鑒別和對凍干粉針中人參皂苷Rg1和Re、麥冬皂苷D和總皂苷的含量進行測定的方法來控制凍干粉針的質(zhì)量，還采用了指紋圖譜測定，保證了本發(fā)明凍干粉針的質(zhì)量和療效。
試驗研究表明本發(fā)明所提供的質(zhì)量控制方法尤其是指紋圖譜測定方法簡便、分離效果好，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等都符合要求。
下述實驗和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。
實驗例1 本發(fā)明參麥凍干粉針處方篩選試驗比較篩選了單獨兩種皂苷兩種不同灌裝體積和加入不同量的骨架劑的處方，見表1。
表1 處方篩選結(jié)果
因為本品主要為皂苷類成分，直接凍干即可得到較好的外形。以葡萄糖為骨架劑，出現(xiàn)萎縮現(xiàn)象；以甘露醇為骨架劑，效果較好。最終確定不加入骨架劑，一方面可降低成本，另一方面可簡化鑒別和含量測定的樣品處理過程。
實驗例2 本發(fā)明參麥凍干粉針鑒別方法的研究本品含人參總皂苷和麥冬總皂苷，我們采用有效部位的薄層鑒別條件對粉針鑒別方法進行了研究，確定了粉針溶解所用溶劑和點樣濃度，并在一個條件下同時鑒別人參皂苷和麥冬皂苷。
一、實驗方法(一)對照品溶液及陰性溶液的配制1、對照品溶液的配制人參皂苷Rg1、Re對照品溶液取人參皂苷Rg1和Re對照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液。
麥冬皂苷D對照品溶液取麥冬皂苷D對照品，加甲醇制成每1ml含0.375mg的溶液，作為對照品溶液。
2、陰性溶液的配制以麥冬皂苷計，依照處方的理論值計算，應(yīng)將點樣溶液配制為每1ml含凍干粉9mg，考慮處方配制中的損失，最終確定配制為每1ml含凍干粉10mg的點樣溶液，依照處方比例推算出陰性樣品的濃度。
人參陰性溶液取麥冬總皂苷，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液。
麥冬陰性溶液取人參總皂苷，加60％甲醇制成每1ml含8mg的溶液。
(二)溶解粉針所用溶劑的選擇有效部位的研究表明，人參總皂苷易溶于60％的甲醇，而麥冬總皂苷則在純甲醇中溶解得更好。經(jīng)過凍干后，樣品的溶解行為發(fā)生一定的變化，分別考察以去離子水、60％的甲醇、80％的甲醇和純甲醇溶解樣品，希望找到既易于點樣又利于待鑒別成分的充分溶解和不必要成分的去除的溶劑，分別用上述溶劑配制每1ml含10mg的溶液的粉針溶液，濾過后待用。
吸取上述不同溶劑的粉針溶液和兩個對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。
另取上述不同溶劑的粉針溶液和兩個對照品溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(15∶5∶1∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。
試驗結(jié)果表明隨著溶劑中水比例的增加，人參皂苷Rg1和Re的斑點更加清晰，但點樣難度也加大，因此選擇60％甲醇為溶劑，既可以很好地溶解人參皂苷Rg1和Re，又便于點樣。
(三)鑒別條件的最終確定吸取60％甲醇為溶劑的樣品溶液和對照品溶液及陰性溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。
另吸取60％甲醇為溶劑的樣品溶液和對照品溶液及陰性溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(15∶5∶1∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。
結(jié)果表明以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的混合溶液為展開劑，樣品中人參皂苷Rg1、Re和麥冬皂苷D的斑點更清晰、圓整，互不干擾。
實驗例3 本發(fā)明參麥凍干粉針含量測定方法的研究一、人參皂苷Rg1和Re的含量測定三批中試產(chǎn)品紅參皂苷的含量測定表2 三批中試產(chǎn)品紅參皂苷含量測定結(jié)果
根據(jù)測定結(jié)果，確定本品(每支21mg)含紅參皂苷Rg1和Re總和為2.24-3.36mg。
二、麥冬皂苷D的含量測定三批中試產(chǎn)品麥冬皂苷的含量測定表3 三批中試產(chǎn)品麥冬皂苷含量測定結(jié)果
根據(jù)測定結(jié)果，同時考慮麥冬皂苷D的含量較低，確定本品(每支21mg)含麥冬皂苷D為0.084-0.156mg。
三、總皂苷的含量測定三批中試產(chǎn)品紅參皂苷的含量測定精密稱取供試品適量制成供試品溶液，微孔濾膜濾過，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，計算，即得。測定結(jié)果見表4。
表4 三批中試產(chǎn)品總皂苷含量測定結(jié)果
根據(jù)測定結(jié)果，確定本品每支21mg含總皂苷為13.6～20.4mg。
實驗例4 本發(fā)明參麥凍干粉針指紋圖譜的研究1.參照物的選擇選擇2個主要原料中的特征成分人參皂苷Rg1和麥冬皂苷D較為合適。
2.供試品的制備方法按技術(shù)方案所述方法制備。本品為凍干粉針制劑，制劑中除了紅參總皂苷和麥冬總皂苷的成分外，沒有加輔料，因此在供試品的制備過程中沒有必要除雜，可將樣品直接溶解即可。
3.檢測方法的選擇根據(jù)紅參總皂苷中主要含的皂苷類化學成分的理化性質(zhì)，選擇HPLC方法最為合適，HPLC方法較其他方法有準確定量，誤差小，重現(xiàn)性好，應(yīng)用廣泛的優(yōu)點，因此優(yōu)選HPLC方法。
4.檢測器的選擇由于紅參的皂苷類成分絕大多數(shù)都沒有紫外吸收，盡管用紫外檢測器在200-210nm之間做檢測，也會影響皂苷類成分的檢測，因此選用蒸發(fā)光散射檢測器做檢測，這類檢測器屬于質(zhì)量型檢測器，特別適用于沒有紫外吸收的化學成分的檢測，試驗證明此檢測器檢測效果好，干擾少，較為理想。
5.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱的考察選擇了Agilent公司的ZOBAX Eclipse XDB-C18色譜柱、ZOBAX Eetend-C18色譜柱和Waters C18色譜柱三種色譜柱進行了考察，結(jié)果以Agilent公司的ZOBAX Eclipse XDB-C18色譜柱分離效果好，峰形較好，故選用Agilent公司的ZOBAX Eclipse XDB-C18色譜柱。
流動相的考察選擇三種流動相系統(tǒng)乙腈-水梯度系統(tǒng)、乙腈-1％冰醋酸梯度系統(tǒng)和甲醇-水梯度系統(tǒng)，結(jié)果以乙腈-水梯度系統(tǒng)為佳，各色譜峰分離度好，保留時間適中，故選擇乙腈-水梯度系統(tǒng)為流動相。
流速和柱溫的考察流速和柱溫對分離的影響較小，以1ml/min和30℃為流速和溫度較為合適。
6.注射用參麥凍干粉針的指紋圖譜相似度檢測按供試品指紋圖譜檢測方法，對10批參麥凍干粉針的指紋圖譜進行了檢測，結(jié)果10批參麥凍干粉針的指紋圖譜與共有模式比較的相似度均大于90％，故規(guī)定藥品的指紋相似度不低于90％。
實驗例5 本發(fā)明參麥凍干粉針指紋圖譜穩(wěn)定性試驗取樣品(批號040725)，按正文供試品溶液的制備方法制備，分別在0，5，10，15，20小時檢測指紋圖譜，相似度計算結(jié)果見圖2。結(jié)果表明各色譜峰的相似度均符合指紋圖譜的要求。
實驗例6 本發(fā)明參麥凍干粉針指紋圖譜精密度試驗取樣品(批號040725)，按正文供試品溶液的制備方法制備，連續(xù)進樣5次，檢測指紋圖譜，相似度計算結(jié)果見圖3。結(jié)果表明各色譜峰的相似度均符合指紋圖譜的要求。
實驗例7 本發(fā)明參麥凍干粉針指紋圖譜重現(xiàn)性試驗取樣品(批號040725)，按正文供試品溶液的制備方法制備供試品5份，檢測指紋圖譜，相似度計算結(jié)果見圖4。結(jié)果表明各色譜峰的相對保留時間和色譜峰的相似度均符合指紋圖譜的要求。
圖1本發(fā)明凍干粉針對照指紋圖譜；圖2本發(fā)明穩(wěn)定性試驗結(jié)果；圖3本發(fā)明精密度試驗結(jié)果；圖4本發(fā)明重現(xiàn)性試驗結(jié)果。
下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果。
實施例1 本發(fā)明參麥凍干粉針的制備處方紅參總皂苷17g麥冬總皂苷4.25g制法取紅參總皂苷和麥冬總皂苷，加注射用水適量使溶解，用活性炭去除熱原，濾除活性炭，調(diào)節(jié)pH，除菌過濾，用注射用水補足體積，灌裝，冷凍干燥，即得1000支粉針，每支21mg。
用法與用量靜脈滴注，每次1~2支，一日1~2次，或遵醫(yī)囑。臨用前，先以適量滅菌注射用水充分溶解，再用5％葡萄糖注射液100ml稀釋。10～15日為一療程。
實施例2 本發(fā)明參麥凍干粉針的指紋圖譜測定方法照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈(A)-水(B)梯度洗脫，15％～20％A(0～18min)，20％～21％A(18～35min)，21％～37％A(35～50min)，37％～60％A(50～85min)，60％～80％A(85～95min)；流速為1mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器(漂移管溫度40℃，氣體壓力2.0bar)；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計，應(yīng)不低于3000。
人參皂苷Rg1對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。
麥冬皂苷D對照品溶液的制備取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備方法取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針一支，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取以上對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，記錄90分鐘的圖譜，即得。
供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜應(yīng)在相應(yīng)保留時間處出現(xiàn)相同色譜峰，兩者相似度不低于0.9。對照指紋圖譜見附圖1。
共有峰的峰號(相對保留時間)1(0.0647)，2(S峰)(1)，3(1.0309)，4(1.4906)，5(1.5701)，6(1.6002)，7(1.6309)，8(1.6987)，9(1.8062)，10(1.8709)(麥冬皂苷D)，11(1.8906)，12(1.9104)，13(1.9448)，14(1.9772)，15(2.0281)，16(2.0489)，17(2.1261)，18(2.1556)，19(2.2827)，20(2.3111)。
部分共有峰的峰形描述12和13號峰不能達到基線分離，15號峰前有一小尖峰，15、16、17號峰基本能達到基線分離，而且依次遞減。除13和14號峰外，8號峰以后的峰都較小，都能達到基線分離。
實施例3 本發(fā)明參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法鑒別取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針粉末50mg，加60％甲醇5ml，超聲使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1和Re對照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；取麥冬皂苷D對照品，加甲醇制成每1ml含0.375mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的三個斑點。
指紋圖譜照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈(A)-水(B)梯度洗脫，15％～20％A(0～18min)，20％～21％A(18～35min)，21％～37％A(35～50min)，37％～60％A(50～85min)，60％～80％A(85～95min)；流速為1mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器(漂移管溫度40℃，氣體壓力2.0bar)；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計，應(yīng)不低于3000。
人參皂苷Rg1對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。
麥冬皂苷D對照品溶液的制備取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備方法取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針一支，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取以上對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，記錄90分鐘的圖譜，即得。
供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜應(yīng)在相應(yīng)保留時間處出現(xiàn)相同色譜峰，兩者相似度不低于0.9。對照指紋圖譜見附圖1。
共有峰的峰號(相對保留時間)1(0.0647)，2(S峰)(1)，3(1.0309)，4(1.4906)，5(1.5701)，6(1.6002)，7(1.6309)，8(1.6987)，9(1.8062)，10(1.8709)(麥冬皂苷D)，11(1.8906)，12(1.9104)，13(1.9448)，14(1.9772)，15(2.0281)，16(2.0489)，17(2.1261)，18(2.1556)，19(2.2827)，20(2.3111)。
部分共有峰的峰形描述12和13號峰不能達到基線分離，15號峰前有一小尖峰，15、16、17號峰基本能達到基線分離，而且依次遞減。除13和14號峰外，8號峰以后的峰都較小，都能達到基線分離。
實施例4 本發(fā)明參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法鑒別取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針粉末50mg，加60％甲醇5ml，超聲使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1和Re對照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；取麥冬皂苷D對照品，加甲醇制成每1ml含0.375mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1∶0.1的乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的三個斑點。
指紋圖譜
照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈(A)-水(B)梯度洗脫，15％～20％A(0～18min)，20％～21％A(18～35min)，21％～37％A(35～50min)，37％～60％A(50～85min)，60％～80％A(85～95min)；流速為1mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器(漂移管溫度40℃，氣體壓力2.0bar)；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計，應(yīng)不低于3000。
人參皂苷Rg1對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。
麥冬皂苷D對照品溶液的制備取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備方法取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針一支，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取以上對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，記錄90分鐘的圖譜，即得。
供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜應(yīng)在相應(yīng)保留時間處出現(xiàn)相同色譜峰，兩者相似度不低于0.9。對照指紋圖譜見附圖1。
共有峰的峰號(相對保留時間)1(0.0647)，2(S峰)(1)，3(1.0309)，4(1.4906)，5(1.5701)，6(1.6002)，7(1.6309)，8(1.6987)，9(1.8062)，10(1.8709)(麥冬皂苷D)，11(1.8906)，12(1.9104)，13(1.9448)，14(1.9772)，15(2.0281)，16(2.0489)，17(2.1261)，18(2.1556)，19(2.2827)，20(2.3111)。
部分共有峰的峰形描述12和13號峰不能達到基線分離，15號峰前有一小尖峰，15、16、17號峰基本能達到基線分離，而且依次遞減。除13和14號峰外，8號峰以后的峰都較小，都能達到基線分離。
實施例5 本發(fā)明參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法含量測定A.人參皂苷Rg1和Re的含量測定 照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.05％磷酸溶液(18∶82)為流動相，流速為1.0ml/min；檢測波長203nm；理論塔板數(shù)按人參皂苷Re峰計算，應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Re對照品適量，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.45、人參皂苷Re0.25mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含5mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液。
測定法，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發(fā)明凍干粉針每支21mg含人參皂苷Rg1和Re總和應(yīng)為2.24-3.36mg。
B、麥冬皂苷D的含量測定 照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水溶液(44∶56)為流動相，流速為1.0ml/min；使用蒸發(fā)光散射檢測器(漂移管溫度40℃，氣體壓力2.0bar)。理論塔板數(shù)按麥冬皂苷D峰計算，應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備 精密稱取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含6mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液5μl、20μl和供試品溶液各50μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發(fā)明凍干粉針每支21mg含麥冬皂苷D應(yīng)為0.084-0.156mg；C、總皂苷的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)60℃減壓干燥至恒重的人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Re2mg的溶液，即得。
標準曲線的制備 精密量取對照品溶液10、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，揮盡溶劑，精密加5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸(2∶8)(臨用新配)的混合溶液1ml，于60℃水浴中放置15分鐘，取出，置冰浴冷卻，精密加冰醋酸5ml，搖勻，立即照分光光度法(《中國藥典》2000年版一部附錄V B)，在544nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
測定法 精密稱取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針17mg，至100ml量瓶中，加去離子水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取1ml于具塞試管中，蒸干，照標準曲線制備項下的方法，自“精密加入5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸(2∶8)(臨用新配)的混合溶液1ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液的濃度，計算，即得。
本發(fā)明凍干粉針每支21mg中含總皂苷以人參皂苷Re計應(yīng)為13.6-20.4mg；指紋圖譜照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈(A)-水(B)梯度洗脫，15％～20％A(0～18min)，20％～21％A(18～35min)，21％～37％A(35～50min)，37％～60％A(50～85min)，60％～80％A(85～95min)；流速為1mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器(漂移管溫度40℃，氣體壓力2.0bar)；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計，應(yīng)不低于3000。
人參皂苷Rg1對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。
麥冬皂苷D對照品溶液的制備取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備方法取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針一支，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取以上對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，記錄90分鐘的圖譜，即得。
供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜應(yīng)在相應(yīng)保留時間處出現(xiàn)相同色譜峰，兩者相似度不低于0.9。對照指紋圖譜見附圖1。
共有峰的峰號(相對保留時間)1(0.0647)，2(S峰)(1)，3(1.0309)，4(1.4906)，5(1.5701)，6(1.6002)，7(1.6309)，8(1.6987)，9(1.8062)，10(1.8709)(麥冬皂苷D)，11(1.8906)，12(1.9104)，13(1.9448)，14(1.9772)，15(2.0281)，16(2.0489)，17(2.1261)，18(2.1556)，19(2.2827)，20(2.3111)。
部分共有峰的峰形描述12和13號峰不能達到基線分離，15號峰前有一小尖峰，15、16、17號峰基本能達到基線分離，而且依次遞減。除13和14號峰外，8號峰以后的峰都較小，都能達到基線分離。
實施例6 本發(fā)明參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法鑒別取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針粉末50mg，加60％甲醇5ml，超聲使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1和Re對照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；取麥冬皂苷D對照品，加甲醇制成每1ml含0.375mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1∶0.1的乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的三個斑點。
含量測定A.人參皂苷Rg1和Re的含量測定 照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.05％磷酸溶液(18∶82)為流動相，流速為1.0ml/min；檢測波長203nm；理論塔板數(shù)按人參皂苷Re峰計算，應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Re對照品適量，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.45、人參皂苷Re0.25mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含5mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液。
測定法，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發(fā)明凍干粉針每支21mg含人參皂苷Rg1和Re總和應(yīng)2.24-3.36mg。
B、麥冬皂苷D的含量測定 照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水溶液(44∶56)為流動相，流速為1.0ml/min；使用蒸發(fā)光散射檢測器(漂移管溫度40℃，氣體壓力2.0bar)。理論塔板數(shù)按麥冬皂苷D峰計算，應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備 精密稱取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含6mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液5μl、20μl和供試品溶液各50μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發(fā)明凍干粉針每支21mg含麥冬皂苷D應(yīng)為0.084-0.156mg。
C、總皂苷的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)60℃減壓干燥至恒重的人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Re2mg的溶液，即得。
標準曲線的制備 精密量取對照品溶液10、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，揮盡溶劑，精密加5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸(2∶8)(臨用新配)的混合溶液1ml，于60℃水浴中放置15分鐘，取出，置冰浴冷卻，精密加冰醋酸5ml，搖勻，立即照分光光度法(《中國藥典》2000年版一部附錄V B)，在544nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
測定法 精密稱取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針17mg，至100ml量瓶中，加去離子水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取1ml于具塞試管中，蒸干，照標準曲線制備項下的方法，自“精密加入5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸(2∶8)(臨用新配)的混合溶液1ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液的濃度，計算，即得。
本發(fā)明凍干粉針每支21mg中含總皂苷以人參皂苷Re計應(yīng)為13.6-20.4mg。
實施例7 本發(fā)明參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法鑒別取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針粉末50mg，加60％甲醇5ml，超聲使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1和Re對照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；取麥冬皂苷D對照品，加甲醇制成每1ml含0.375mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的三個斑點。
含量測定A.人參皂苷Rg1和Re的含量測定 照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.05％磷酸溶液(18∶82)為流動相，流速為1.0ml/min；檢測波長203nm；理論塔板數(shù)按人參皂苷Re峰計算，應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Re對照品適量，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.45、人參皂苷Re0.25mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含5mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液。
測定法，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發(fā)明凍干粉針每支21mg含人參皂苷Rg1和Re總和應(yīng)為2.24-3.36mg。
B、麥冬皂苷D的含量測定 照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水溶液(44∶56)為流動相，流速為1.0ml/min；使用蒸發(fā)光散射檢測器(漂移管溫度40℃，氣體壓力2.0bar)。理論塔板數(shù)按麥冬皂苷D峰計算，應(yīng)不低于3000。
對照品溶液的制備 精密稱取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含6mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液5μl、20μl和供試品溶液各50μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發(fā)明凍干粉針每支21mg含麥冬皂苷D應(yīng)為0.084-0.156mg。
C、總皂苷的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)60℃減壓干燥至恒重的人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Re2mg的溶液，即得。
標準曲線的制備 精密量取對照品溶液10、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，揮盡溶劑，精密加5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸(2∶8)(臨用新配)的混合溶液1ml，于60℃水浴中放置15分鐘，取出，置冰浴冷卻，精密加冰醋酸5ml，搖勻，立即照分光光度法(《中國藥典》2000年版一部附錄V B)，在544nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
測定法 精密稱取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針17mg，至100ml量瓶中，加去離子水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取1ml于具塞試管中，蒸干，照標準曲線制備項下的方法，自“精密加入5％香草醛冰醋酸溶液-高氯酸(2∶8)(臨用新配)的混合溶液1ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液的濃度，計算，即得。
本發(fā)明凍干粉針每支21mg中含總皂苷以人參皂苷Re計應(yīng)為13.6-20.4mg。
指紋圖譜照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定。
色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為乙腈(A)-水(B)梯度洗脫，15％～20％A(0～18min)，20％～21％A(18～35min)，21％～37％A(35～50min)，37％～60％A(50～85min)，60％～80％A(85～95min)；流速為1mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器(漂移管溫度40℃，氣體壓力2.0bar)；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計，應(yīng)不低于3000。
人參皂苷Rg1對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。
麥冬皂苷D對照品溶液的制備取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備方法取實施例1制備的本發(fā)明凍干粉針一支，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取以上對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，記錄90分鐘的圖譜，即得。
供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜應(yīng)在相應(yīng)保留時間處出現(xiàn)相同色譜峰，兩者相似度不低于0.9。對照指紋圖譜見附圖1。
共有峰的峰號(相對保留時間)1(0.0647)，2(S峰)(1)，3(1.0309)，4(1.4906)，5(1.5701)，6(1.6002)，7(1.6309)，8(1.6987)，9(1.8062)，10(1.8709)(麥冬皂苷D)，11(1.8906)，12(1.9104)，13(1.9448)，14(1.9772)，15(2.0281)，16(2.0489)，17(2.1261)，18(2.1556)，19(2.2827)，20(2.3111)。
部分共有峰的峰形描述12和13號峰不能達到基線分離，15號峰前有一小尖峰，15、16、17號峰基本能達到基線分離，而且依次遞減。除13和14號峰外，8號峰以后的峰都較小，都能達到基線分離。
權(quán)利要求
1.一種注射用參麥凍干粉針，其特征在于該凍干粉針是由如下重量份的原料制成的紅參總皂苷10-19重量份、麥冬總皂苷4-10重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的注射用參麥凍干粉針，其特征在于該凍干粉針是由如下重量份的原料制成的紅參總皂苷18重量份、麥冬總皂苷9重量份。
3.如權(quán)利要求1所述的注射用參麥凍干粉針，其特征在于該凍干粉針是由如下重量份的原料制成的紅參總皂苷17重量份、麥冬總皂苷4.25重量份。
4.如權(quán)利要求1所述的注射用參麥凍干粉針，其特征在于該凍干粉針是由如下重量份的原料制成的紅參總皂苷18重量份、麥冬總皂苷6重量份。
5.如權(quán)利要求1-4所述的任意一種注射用參麥凍干粉針，其特征在于按上述重量份稱取紅參總皂苷和麥冬總皂苷，加注射用水適量使溶解，用活性炭去除熱原，濾除活性炭，調(diào)節(jié)pH，除菌過濾，用注射用水補足體積，灌裝，冷凍干燥，即得。
6.如權(quán)利要求5所述的注射用參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下鑒別方法取參麥凍干粉針粉末50mg，加60％甲醇5ml，超聲使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1和Re對照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；取麥冬皂苷D對照品，加甲醇制成每1ml含0.375mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以比例為12-18∶32-48∶18-26∶8-12的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的三個斑點。
7.如權(quán)利要求6所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于鑒別方法中所述展開劑由比例為12-18∶4-6∶1-2∶0.1的乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸的溶液代替。
8.如權(quán)利要求6所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于鑒別方法中所述展開劑為比例為15∶40∶22∶10的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水的溶液。
9.如權(quán)利要求7所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于鑒別方法中所述展開劑為比例為15∶5∶1∶0.1的乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸的溶液。
10.如權(quán)利要求6-9所述任意一種注射用參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法還包括如下含量測定方法中的一種或幾種A、人參皂苷Rg1和Re的含量測定，照《中國藥典》2000年版一部附錄VID高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為18∶82的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動相，流速為1.0ml/min；檢測波長203nm；理論塔板數(shù)按人參皂苷Re峰計算，應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Re對照品適量，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.45、人參皂苷Re0.25mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取參麥凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含5mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；參麥凍干粉針每支含人參皂苷Rg1和Re總和應(yīng)為2.24-3.36mg；B、麥冬皂苷D的含量測定，照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為44∶56的乙腈-水溶液為流動相，流速為1.0ml/min；使用蒸發(fā)光散射檢測器，檢測器的漂移管溫度為40℃，氣體壓力為2.0bar；理論塔板數(shù)按麥冬皂苷D峰計算，應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取參麥凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含6mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液5μl、20μl和供試品溶液各50μl，注入液相色譜儀，測定，即得；參麥凍干粉針每支含麥冬皂苷D應(yīng)為0.084-0.156mg；C、總皂苷的含量測定對照品溶液的制備，精密稱取經(jīng)60℃減壓干燥至恒重的人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Re2mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液10、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，揮盡溶劑，精密加入比例為1-3∶9-7的臨用新配的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液1ml，于60℃水浴中放置15分鐘，取出，置冰浴冷卻，精密加冰醋酸5ml，搖勻，立即照分光光度法，《中國藥典》2000年版一部附錄V B，在544nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，精密稱取參麥凍干粉針17mg，至100ml量瓶中，加去離子水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取1ml于具塞試管中，蒸干，照標準曲線制備項下的方法，自“精密加入比例為1-3∶9-7的臨用新配的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液1ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液的濃度，計算，即得；參麥凍干粉針每支含總皂苷以人參皂苷Re計應(yīng)為13.6～20.4mg。
11.如權(quán)利要求5所述的注射用參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下指紋圖譜測定方法照《中國藥典》2000年版一部附錄VID高效液相色譜法測定；色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B進行梯度洗脫，流速為1mL/min；柱溫30℃；使用蒸發(fā)光散射檢測器，檢測器的漂移管溫度為40℃，氣體壓力為2.0bar；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計，應(yīng)不低于3000；人參皂苷Rg1對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得；麥冬皂苷D對照品溶液的制備取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，即得；供試品溶液的制備方法取參麥凍干粉針一支，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取以上對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，記錄90分鐘的圖譜，即得；供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜應(yīng)在相應(yīng)保留時間處出現(xiàn)相同色譜峰，兩者相似度不低于0.9；對照指紋圖譜的共有峰峰號的相對保留時間分別為1號峰為0.0647，2號S峰為1，3號峰為1.0309，4號峰為1.4906，5號峰為1.5701，6號峰為1.6002，7號峰為1.6309，8號峰為1.6987，9號峰為1.8062，10號峰為1.8709，10號峰為麥冬皂苷D的特征峰，11號峰為1.8906，12號峰為1.9104，13號峰為1.9448，14號峰為1.9772，15號峰為2.0281，16號峰為2.0489，17號峰為2.1261，18號峰為2.1556，19號峰為2.2827，20號峰為2.3111；對照指紋圖譜的部分共有峰的峰形描述12和13號峰不能達到基線分離，15號峰前有一小尖峰，15、16、17號峰基本能達到基線分離，而且依次遞減；除13和14號峰外，8號峰以后的峰都較小，都能達到基線分離。
12.如權(quán)利要求11所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于指紋圖譜測定方法中梯度洗脫程序為0～18min流動相A體積比由15％線性上升到20％，流動相B體積比由85％線性下降到80％，18～35min流動相A體積比由20％線性上升到21％、流動相B體積比由80％線性下降到79％，35～50min流動相A體積比由21％線性上升到37％、流動相B體積比由79％線性下降到63％，50～85min流動相A體積比由37％線性上升到60％、流動相B體積比由63％線性下降到40％；85～95min流動相A體積比由60％線性上升到80％、流動相B體積比由40％線性下降到20％。
13.如權(quán)利要求5所述的注射用參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法為鑒別取參麥凍干粉針粉末50mg，加60％甲醇5ml，超聲使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1和Re對照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；取麥冬皂苷D對照品，加甲醇制成每1ml含0.375mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以比例為15∶40∶22∶10的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的三個斑點。含量測定A.人參皂苷Rg1和Re的含量測定，照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為18∶82的乙腈-0.05％磷酸溶液為流動相，流速為1.0ml/min；檢測波長203nm；理論塔板數(shù)按人參皂苷Re峰計算，應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Re對照品適量，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.45、人參皂苷Re0.25mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取參麥凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含5mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；參麥凍干粉針每支含人參皂苷Rg1和Re總和應(yīng)為2.24-3.36mg；B、麥冬皂苷D的含量測定，照《中國藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為44∶56的乙腈-水溶液為流動相，流速為1.0ml/min；使用蒸發(fā)光散射檢測器，檢測器的漂移管溫度為40℃，氣體壓力為2.0bar；理論塔板數(shù)按麥冬皂苷D峰計算，應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備，精密稱取參麥凍干粉針適量，加去離子水配制成每1ml含6mg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液；測定法，分別精密吸取對照品溶液5μl、20μl和供試品溶液各50μl，注入液相色譜儀，測定，即得；參麥凍干粉針每支含麥冬皂苷D應(yīng)為0.084-0.156mg；C、總皂苷的含量測定對照品溶液的制備，精密稱取經(jīng)60℃減壓干燥至恒重的人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Re2mg的溶液，即得；標準曲線的制備，精密量取對照品溶液10、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，揮盡溶劑，精密加入比例為2∶8的臨用新配的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液1ml，于60℃水浴中放置15分鐘，取出，置冰浴冷卻，精密加冰醋酸5ml，搖勻，立即照分光光度法，《中國藥典》2000年版一部附錄V B，在544nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；測定法，精密稱取參麥凍干粉針17mg，至100ml量瓶中，加去離子水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取1ml于具塞試管中，蒸干，照標準曲線制備項下的方法，自“精密加入比例為2∶8的臨用新配的5％香草醛冰醋酸溶液—高氯酸的混合溶液1ml”起，依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液的濃度，計算，即得；參麥凍干粉針每支含總皂苷以人參皂苷Re計應(yīng)為13.6～20.4mg；指紋圖譜測定照《中國藥典》2000年版一部附錄VID高效液相色譜法測定；色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B按如下程序進行梯度洗脫0～18min流動相A體積比由15％線性上升到20％，流動相B體積比由85％線性下降到80％，18～35min流動相A體積比由20％線性上升到21％、流動相B體積比由80％線性下降到79％，35～50min流動相A體積比由21％線性上升到37％、流動相B體積比由79％線性下降到63％，50～85min流動相A體積比由37％線性上升到60％、流動相B體積比由63％線性下降到40％；85～95min流動相A體積比由60％線性上升到80％、流動相B體積比由40％線性下降到20％；流速為1mL/min；柱溫30℃；使用蒸發(fā)光散射檢測器，檢測器的漂移管溫度為40℃，氣體壓力為2.0bar；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計，應(yīng)不低于3000；人參皂苷Rg1對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得；麥冬皂苷D對照品溶液的制備取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，即得；供試品溶液的制備方法取參麥凍干粉針一支，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取以上對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，記錄90分鐘的圖譜，即得；供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜應(yīng)在相應(yīng)保留時間處出現(xiàn)相同色譜峰，兩者相似度不低于0.9；對照指紋圖譜的共有峰峰號的相對保留時間分別為1號峰為0.0647，2號S峰為1，3號峰為1.0309，4號峰為1.4906，5號峰為1.5701，6號峰為1.6002，7號峰為1.6309，8號峰為1.6987，9號峰為1.8062，10號峰為1.8709，10號峰為麥冬皂苷D的特征峰，11號峰為1.8906，12號峰為1.9104，13號峰為1.9448，14號峰為1.9772，15號峰為2.0281，16號峰為2.0489，17號峰為2.1261，18號峰為2.1556，19號峰為2.2827，20號峰為2.3111；對照指紋圖譜的部分共有峰的峰形描述12和13號峰不能達到基線分離，15號峰前有一小尖峰，15、16、17號峰基本能達到基線分離，而且依次遞減；除13和14號峰外，8號峰以后的峰都較小，都能達到基線分離。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法，該凍干粉針以紅參總皂苷10－19重量份、麥冬總皂苷4－10重量份為原料，加注射用水適量使溶解，用活性炭去除熱原，濾除活性炭，調(diào)節(jié)pH，除菌過濾，用注射用水補足體積，灌裝，冷凍干燥，制得。本發(fā)明參麥凍干粉針的質(zhì)量控制方法不僅通過對凍干粉針中有效成分人參皂苷和麥冬皂苷進行鑒別和對凍干粉針中人參皂苷Rg1和Re、麥冬皂苷D和總皂苷的含量進行測定的方法來控制凍干粉針的質(zhì)量，還采用了指紋圖譜測定，保證了本發(fā)明凍干粉針的質(zhì)量和療效。
文檔編號A61K31/7048GK1939502SQ200510108139
公開日2007年4月4日 申請日期2005年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月29日
發(fā)明者屠鵬飛, 張彤梅, 齊學兵, 姜勇, 逄劍, 王婷 申請人:北京華醫(yī)神農(nóng)醫(yī)藥科技有限公司