專利名稱：一種桑黃保健口服液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種口服液的制備方法，特別是用液體發(fā)酵法制備桑黃保健口服液的方法。
背景技術(shù)：
桑黃(Phellinus igniarius(L.ex Fr.)Quel)，屬擔子菌綱、多孔菌目、多孔菌科、針層孔菌屬(Phellinus)，俗稱火木層孔菌、針層孔菌、桑耳、桑臣、胡孫眼等，是一種珍貴的藥用真菌。在我國傳統(tǒng)中藥中，主要用以治療淋病、崩漏、帶下，疵瘕積聚，癖軟，脾虛泄瀉等，在日本則作為利尿劑使用。近年來，國內(nèi)外學者對桑黃的藥理作用作了較為深入的研究，桑黃子實體及其提取物除了具有傳統(tǒng)上的藥理作用以外，還具有抗癌、抗腫瘤、抗誘變、免疫調(diào)節(jié)、保肝和抗肝硬化等作用。由于野生桑黃越來越稀少，且外銷需求量大。在我國，桑黃的人工栽培研究才剛剛起步，無法滿足市場的需求。桑黃加工品在國際醫(yī)藥市場上價格昂貴、供不應求。研究以大量人工發(fā)酵菌絲體在生產(chǎn)上應用，這對于保護天然資源、解決資源缺乏，具有十分重要的意義。
經(jīng)檢索，該技術(shù)領(lǐng)域有章衛(wèi)民等的“桑黃菌絲體制品及其生產(chǎn)方法和用途”(專利申請?zhí)?1127760.2)以及敖宗華等的“大規(guī)模液體深層發(fā)酵生產(chǎn)桑黃水提取物及多糖工藝”(專利申請?zhí)?00410013869.6)，他們均對桑黃的液體發(fā)酵工藝進行了闡述，并將制成的產(chǎn)品用在肝炎、癌癥上。
目前在該領(lǐng)域的技術(shù)上存在菌絲產(chǎn)量和菌絲粗多糖含量較低、在發(fā)酵產(chǎn)物上沒有作有效的提取利用等問題。目前，尚未見將桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)物制成具有增強免疫功能的口服液的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是利用液體發(fā)酵法制備具有保健功效的桑黃口服液。
本發(fā)明的一種桑黃保健口服液的制備方法，以桑黃菌為出發(fā)菌株，進行液體發(fā)酵，獲得大量的桑黃發(fā)酵醪；然后將發(fā)酵醪中的菌絲用熱水浸提法獲得富含桑黃多糖的提取液，并與發(fā)酵液一起制成濃縮液；最后將此濃縮液調(diào)配成適口性良好的保健口服液。
本發(fā)明的一種桑黃保健口服液的制備方法，包括以下步驟
1.桑黃菌的液體發(fā)酵1.1將桑黃保存種用馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基)進行活化、復壯，置25-32℃恒溫箱靜止培養(yǎng)10-15天，得到生產(chǎn)斜面種，置冰箱中冷藏備用；所述的PDA培養(yǎng)基的配方為(g/L)去皮馬鈴薯200，葡萄糖20，瓊脂20，加水定容至所需體積，pH自然；1.2將生產(chǎn)斜面種用搖瓶培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)，得到生產(chǎn)搖瓶一級種；所述的搖瓶培養(yǎng)基的配方為(g/L)玉米粉30-60、麩皮粉20-40、KH2PO41-3、MgSO4·7H2O 1-2、VB10.05-0.15，加水定容至所需體積，pH自然；培養(yǎng)條件為以100-200mL/500mL裝量，接入1cm2的斜面菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床80-200rpm培養(yǎng)7-10d，溫度25-32℃；1.3將生產(chǎn)搖瓶一級種用5-20％的接種量，按步驟1.2所述的搖瓶培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，再次擴大培養(yǎng)4-6天，得生產(chǎn)搖瓶二級種；1.4將生產(chǎn)搖瓶二級種轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的種子罐進行擴大培養(yǎng)得到發(fā)酵一級種；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為(g/L)黃豆粉30-60、玉米粉20-40、麩皮粉3-6、酵母粉3-5、CaSO45-10、K2SO40-2、Na2HPO40-2、ZnSO4·7H2O 0-0.5、FeSO4·7H2O 0-1、VB10-0.5，加水定容至所需體積，pH 5-8；培養(yǎng)條件為接種量1-10％，罐溫25-32℃，罐壓0.03-0.07MPa，攪拌轉(zhuǎn)速80-200rpm，通氣量1∶0.3-1.0v/v.min，發(fā)酵培養(yǎng)3-4d；1.5按步驟1.4所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，將發(fā)酵一級種轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵4-6天放罐，得發(fā)酵醪。
2.濃縮液的制備2.1將發(fā)酵醪經(jīng)板框壓濾后，得到發(fā)酵液和富含菌絲的濾渣A；2.2將濾渣A加入2-5倍重量的水，置95-100℃水浴中提取1-2h，經(jīng)板框壓濾得提取液C和濾渣B；將該濾渣B再重復提取、過濾1-2次，得提取液D。
2.3合并所述發(fā)酵液、提取液C和提取液D，50-70℃，0.05-0.095MPa低溫真空濃縮至可溶性固形物為2-8％，得濃縮液。
3.口服液的調(diào)制3.1將所述濃縮液煮沸，離心去除其中的不溶物質(zhì)后，按重量比加入蛋白糖100-400ppm，食用磷酸150-300ppm，乙基麥芽酚0-150ppm；
3.2將調(diào)配好的口服液裝瓶、鎖蓋、殺菌，經(jīng)檢驗合格后即為產(chǎn)品。
本發(fā)明的一種桑黃保健口服液的制備方法，工藝穩(wěn)定可靠，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。制備方法的配方成分，篩選了適合桑黃菌絲生長的原料及配比，并且將不溶性原料磨成150目的細粉，原料得到充分的利用，發(fā)酵生產(chǎn)獲得大量產(chǎn)物，其干菌絲得率高達4.5％，菌絲粗多糖含量可達9.89％。
將本發(fā)明的桑黃保健口服液，按徐叔云等的《藥理實驗方法學》(1982年)方法進行增強免疫的藥效學試驗，其結(jié)果如下1、桑黃口服液對小鼠免疫器官重量的影響(見表1)桑黃口服液對小鼠胸腺無明顯影響；桑黃口服液小劑量(10mL/kg)使小鼠腎上腺重量明顯減輕；大劑量(40mL/kg)桑黃口服液使小鼠脾臟重量明顯增加，說明桑黃口服液具有提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)功能的作用。
表1桑黃口服液對小鼠免疫器官重量的影響(mg/10g體重，n＝10)

注*表示顯著性水平達0.05，**表示顯著性水平達0.01，生理鹽水組作對照，下同。
2、桑黃口服液對小鼠碳粒廓清率的影響(見表2)桑黃口服液20和40mL/kg小鼠灌胃給藥可顯著提高小鼠碳粒廓清能力，使廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)a明顯高于生理鹽水組，經(jīng)統(tǒng)計學處理，差異具有顯著性意義。
表2桑黃口服液對小鼠碳粒廓清率的影響(n＝10)

3、桑黃口服液對小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響(見表3)；
桑黃口服液20和40mL/kg小鼠灌胃給藥，可提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力，使巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬百分率由對照組的13.7％分別提高到22.2和34.7％，差別具有顯著性意義，說明桑黃口服液具有提高巨噬細胞吞噬能力的作用。
表3桑黃口服液灌胃給藥對小鼠腹腔巨噬細胞功能的影響(n＝6)

以上實驗表明，桑黃口服液大劑量(40mL/kg)使小鼠脾臟重量顯著增加；桑黃口服液20mL/kg和40mL/kg劑量組能明顯提高碳廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)a，并能明顯提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力，使巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬百分率由對照組的13.7％分別提高到22.2％和34.7％。這些結(jié)果說明，桑黃口服液具有提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)功能的作用，可顯著提高小鼠碳粒廓清能力，并具有提高巨噬細胞吞噬能力的作用，即產(chǎn)品具有顯著提高免疫功能的作用。
本發(fā)明通過液體發(fā)酵的方法，能獲得大量的所需產(chǎn)物，用熱水提取法能獲得富含桑黃多糖的濃縮液，配制成具有顯著增強免疫功能保健口服液。該工藝的應用，還能夠保護天然資源、緩解目前野生桑黃資源嚴重缺乏的問題，部分代替桑黃子實體進行應用。
具體實施例為充分公開本發(fā)明的一種桑黃保健口服液的制備方法，下面結(jié)合實施例加以說明。
實施例一種桑黃保健口服液的制備方法，包括以下步驟1.桑黃菌的液體發(fā)酵1.1將桑黃保存種用馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基)進行活化、復壯，置(28±1)℃恒溫箱靜止培養(yǎng)15天，得到生產(chǎn)斜面種，然后置冰箱中冷藏備用；1.2將生產(chǎn)斜面種用搖瓶培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)，得到生產(chǎn)搖瓶一級種；所述的搖瓶培養(yǎng)基的配方為(g/L)玉米粉50、麩皮粉30、KH2PO43、MgSO4·7H2O 1.5、VB10.1，加水定容至所需體積，pH自然；其培養(yǎng)條件為以160mL/500mL裝量，接入約1cm2的斜面菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床140rpm培養(yǎng)8d，溫度(28±1)℃；1.3將生產(chǎn)搖瓶一級種用15％的接種量，按步驟1.2所述的搖瓶培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，再次用搖瓶培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)5天，得到生產(chǎn)搖瓶二級種；1.4將生產(chǎn)搖瓶二級種轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的200L種子罐進行擴大培養(yǎng)得到發(fā)酵一級種；所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為(kg/100L)黃豆粉4、玉米粉3、麩皮粉0.5、酵母粉0.4、CaSO41、K2SO40.1、Na2HPO40.15、ZnSO4·7H2O 0.01、FeSO4·7H2O 0.05、VB10.01，加水定容至100L，pH為7；其培養(yǎng)條件為接種量4L，罐溫(28±1)℃，罐壓0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm，通氣量10.5v/v.min，發(fā)酵培養(yǎng)4d；1.5按步驟1.4所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，將發(fā)酵一級種全部轉(zhuǎn)接入裝有2500L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L發(fā)酵罐中培養(yǎng)，發(fā)酵6天放罐，得發(fā)酵醪。此時，測定干菌絲得率可達4.5％以上，菌絲粗多糖含量可達9.89％以上。
2.濃縮液的制備2.1將發(fā)酵醪經(jīng)板框壓濾后，得到發(fā)酵液和富含菌絲的濾渣E；2.2將濾渣E加入3倍重量的水，置(95±1)℃水浴中提取1.5h，經(jīng)板框壓濾得提取液G和濾渣F；將濾渣F再重復提取、過濾1次，得提取液H；2.3合并所述發(fā)酵液、提取液G和提取液H，50℃ 0.09MPa低溫真空濃縮至可溶性固形物為3％，得濃縮液。
3.口服液的調(diào)制3.1將所述濃縮液煮沸，離心去除其中的少量不溶物質(zhì)后，按重量比加入蛋白糖300ppm，食用磷酸150ppm，乙基麥芽酚100ppm；3.2調(diào)配好的口服液趁熱用250mL鹽水瓶灌裝、鎖蓋，經(jīng)水浴殺菌并檢驗合格后即成為產(chǎn)品；水浴殺菌的公式為5’-10’/100℃。
所得產(chǎn)品呈淺黃色、酸甜可口；含有豐富的礦物元素和17種以上的氨基酸，多糖含量達5mg/mL以上；具有顯著的增強免疫功能。
以上所有培養(yǎng)基中的不溶性原料，宜磨成150目的細粉；所有培養(yǎng)基配方中的化學原料均為固體分析純。
權(quán)利要求
1.一種桑黃保健口服液的制備方法，其特征在于包括以下步驟1.1桑黃菌的液體發(fā)酵1.1.1將桑黃保存種用馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基)進行活化、復壯，置25-32℃恒溫箱靜止培養(yǎng)10-15天，得到生產(chǎn)斜面種，置冰箱中冷藏備用；1.1.2將生產(chǎn)斜面種用搖瓶培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)，得到生產(chǎn)搖瓶一級種；所述的搖瓶培養(yǎng)基的配方為(g/L)玉米粉30-60、麩皮粉20-40、KH2PO41-3、MgSO4·7H2O 1-2、VB10.05-0.15、pH自然；培養(yǎng)條件為以100-200mL/500mL裝量，接入1cm2的斜面菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床80-200rpm培養(yǎng)7-10d，溫度25-32℃；1.1.3將生產(chǎn)搖瓶一級種用5-20％的接種量，按步驟1.1.2所述的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，再次擴大培養(yǎng)4-6天；得生產(chǎn)搖瓶二級種；1.1.4將生產(chǎn)搖瓶二級種轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的種子罐進行擴大培養(yǎng)得到發(fā)酵一級種；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為(g/L)黃豆粉30-60，玉米粉20-40，麩皮粉3-6，酵母浸出汁3-5，CaSO45-10，K2SO40-2，Na2HPO40-2，ZnSO4·7H2O 0-0.5，F(xiàn)eSO4·7H2O 0-1，VB10-0.5，pH為5-8；培養(yǎng)條件為接種量1-10％，罐溫25-32℃，罐壓0.03-0.07MPa，攪拌轉(zhuǎn)速80-200rpm，通氣量1∶0.3-1.0v/v.min，發(fā)酵培養(yǎng)3-4d；1.1.5按步驟1.1.4所述的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，將發(fā)酵一級種轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵4-6天放罐，得發(fā)酵醪；1.2.濃縮液的制備1.2.1將發(fā)酵醪經(jīng)板框壓濾后，得到發(fā)酵液和富含菌絲的濾渣A；1.2.2將濾渣A加入2-5倍重量的水，置95-100℃水浴中提取1-2h，經(jīng)板框壓濾得提取液和濾渣B；將該濾渣B再重復提取、過濾1-2次，得提取液。1.2.3合并所述發(fā)酵液和提取液，50-70℃，0.05-0.095MPa低溫真空濃縮至可溶性固形物為2-8％，得濃縮液；1.3.口服液的調(diào)制1.3.1將所述濃縮液煮沸，離心去除其中的不溶物質(zhì)后，按重量比加入蛋白糖100-400ppm，食用磷酸150-300ppm，乙基麥芽酚0-150ppm；1.3.2將調(diào)配好的口服液裝瓶、鎖蓋、殺菌經(jīng)檢驗合格后即為產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桑黃保健口服液的制備方法，其特征在于包括以下步驟2.1.桑黃菌的液體發(fā)酵2.1.1將桑黃保存種用馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基)進行活化、復壯，置(28±1)℃恒溫箱靜止培養(yǎng)15天，得到生產(chǎn)斜面種，然后置冰箱中冷藏備用；2.1.2將生產(chǎn)斜面種用搖瓶培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)，得到生產(chǎn)搖瓶一級種；所述的搖瓶培養(yǎng)基的配方為(g/L)玉米粉50、麩皮粉30、KH2PO43、MgSO4·7H2O 1.5、VB10.1、pH自然；其培養(yǎng)條件為以160mL/500mL裝量，接入約1cm2的斜面菌種，旋轉(zhuǎn)式搖床140rpm培養(yǎng)8d，溫度(28±1)℃；2.1.3將生產(chǎn)搖瓶一級種用15％的接種量，按步驟2.1.2所述的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，再次用搖瓶培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)5天，得到生產(chǎn)搖瓶二級種；2.1.4將生產(chǎn)搖瓶二級種轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的種子罐進行擴大培養(yǎng)得到發(fā)酵一級種；所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為(g/L)黃豆粉40，玉米粉30，麩皮粉5，酵母浸出汁4，CaSO410，K2SO41，Na2HPO41.5，ZnSO4·7H2O 0.1，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.5，VB10.1，pH為7；其培養(yǎng)條件為接種量4％，罐溫(28±1)℃，罐壓0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速100rpm，通氣量1∶0.5v/v.min，發(fā)酵培養(yǎng)4d；2.1.5按步驟2.1.4所述的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，將發(fā)酵一級種轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵6天放罐，得發(fā)酵醪；2.2.濃縮液的制備2.2.1將發(fā)酵醪經(jīng)板框壓濾后，得到發(fā)酵液和富含菌絲的濾渣C；2.2.2將濾渣C加入3倍重量的水，置(95±1)℃水浴中提取1.5h，經(jīng)板框壓濾得提取液E和濾渣D；將濾渣D再重復提取、過濾1次，得提取液F；2.2.3合并所述發(fā)酵液、提取液E和提取液F，50℃ 0.09MPa低溫真空濃縮至可溶性固形物為3％，得濃縮液；2.3.口服液的調(diào)制2.3.1將所述濃縮液煮沸，離心去除其中的少量不溶物質(zhì)后，按重量比加入蛋白糖300ppm，食用磷酸150ppm，乙基麥芽酚100ppm；2.3.2調(diào)配好的口服液趁熱用250mL鹽水瓶灌裝、鎖蓋，經(jīng)水浴殺菌并檢驗合格后即成為產(chǎn)品；水浴殺菌的公式為5’-10’/100℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種桑黃保健口服液的制備方法，其特征在于所有培養(yǎng)基中的不溶性原料，宜磨成150目的細粉。
全文摘要
一種桑黃保健口服液的制備方法，以桑黃菌為出發(fā)菌株，進行液體發(fā)酵，獲得大量的桑黃發(fā)酵醪；然后將發(fā)酵醪中的菌絲用熱水浸提法獲得富含桑黃多糖的提取液，并與發(fā)酵液一起制成濃縮液；最后將此濃縮液調(diào)配成適口性良好的口服液。本發(fā)明工藝穩(wěn)定可靠，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。通過液體發(fā)酵其干菌絲得率高達4.5％，菌絲多糖含量可達9.89％。產(chǎn)品經(jīng)藥效學試驗，表明具有很好的增強免疫效果。
文檔編號A61P1/00GK1907301SQ20051004435
公開日2007年2月7日 申請日期2005年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月2日
發(fā)明者傅海慶, 陳紹軍 申請人:福建農(nóng)林大學