專利名稱：一種烏頭凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種烏頭凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
川烏是毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的干燥母根；草烏是毛茛科植物北烏頭Aconitum kusnezoffii Reichb.的干燥塊根；兩者均具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛之功效。由川烏和草烏為原料制成的烏頭注射液，有鎮(zhèn)靜、止痛作用，在臨床上用于胃癌、肝癌等晚期癌癥的疼痛治療，有著很好的療效。烏頭注射液[部頒標(biāo)準(zhǔn)十七冊；(WS-11327(ZD-1372)-2002)國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編(口腔 腫瘤 兒科 分冊)。國家中醫(yī)藥管理局，2002，346]的制備方法采用乙醇冷浸，酸水煎煮，乙醇沉淀，水解，活性炭處理的方法制成。此工藝存在以下幾個缺陷1、乙醇冷浸對于脂溶性生物堿的提取效率非常低；2、水煎煮時，提取出的樹脂、鞣質(zhì)、淀粉等雜質(zhì)量多，給后續(xù)的除雜帶來困難；3、乙醇沉淀時，大量的雜質(zhì)在形成、沉積的過程中，會吸附、包裹大量的生物堿，從而使得生物堿的損失很多；4、在使用活性炭處理時，活性炭對生物堿的吸附作用非常強，在除去活性炭的同時除去了大量的生物堿[丘小惠?；钚蕴紝躅^類生物堿的吸附作用。廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，1997，14(4)268]。經(jīng)過上述工藝制成的烏頭注射液，最終得到的生物堿的提取率非常低。這對于原料藥材來說是一種很大的浪費，在工廠的生產(chǎn)中無形中增加了生產(chǎn)成本，增加了患者的負(fù)擔(dān)。而且烏頭注射液中的有效成分會發(fā)生水解，給質(zhì)量的控制也帶來一定的困難。
注射液對穩(wěn)定性要求高，在攜帶、儲藏、運輸時容易破碎，帶來許多麻煩。
在資料檢索中未發(fā)現(xiàn)有關(guān)烏頭凍干粉針劑的任何報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的研究人員在經(jīng)過多次實驗的基礎(chǔ)上，探索出了一種更好的制備方法。將藥材的酸性乙醇提取液經(jīng)過超濾的方法除去大分子的雜質(zhì)后，再利用大孔吸附樹脂進一步分離純化。本發(fā)明的制備方法科學(xué)、合理，對生物堿的損失小。最終保留的有效成分是烏頭注射液的6倍，而且制成凍干粉針劑，使其更加穩(wěn)定，使用更加方便。
本發(fā)明的目的是公開一種富含活性成分、療效好、方便使用的烏頭凍干粉針制劑。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述凍干粉針制劑的制備方法。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)。
一、制備方法(1)原料藥材重量份配比為川烏250，草烏250；(2)取上述重量份藥材，粉碎，加4-10倍量的酸性乙醇溶液提取2-4次，每次1-2小時；合并乙醇提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，高速離心，離心液用超濾膜超濾，濾液煮沸1-2小時，冷卻，過已處理好的非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，先用3-5倍柱體積的5％-15％乙醇溶液洗脫，棄去，再用2-5倍柱體積60％-90％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物3.4-4.8重量份。
(3)將上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入凍干賦型劑55.2-56.6重量份，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至5.0-6.5，灌裝，冷凍干燥，即得。
川烏、草烏用酸性乙醇溶液提取，既有很高的提取率，而且可以大大減少雜質(zhì)的量，為后續(xù)的除雜帶來方便；用合適的超濾膜超濾，生物堿可以順利通過濾膜，而大分子的樹脂、淀粉、黏液質(zhì)、鞣質(zhì)等雜質(zhì)被截留，從而除去了大量的雜質(zhì)；利用生物堿與其它非活性成分在大孔吸附樹脂上保留特性的差異，利用大孔吸附樹脂對其進行進一步的純化，使得最終得到的提取物中生物堿有效部位的含量達到85.0％-92.0％。
二、含量測定分析1、本發(fā)明烏頭凍干粉針劑中生物堿的含量測定測定方法取本發(fā)明烏頭凍干粉針劑50支，精密稱定，用50ml水溶解，加濃氨試液5ml使呈堿性，以下按照烏頭注射液(WS-11327(ZD-1372)-2002)[國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編(口腔腫瘤兒科分冊)。國家中醫(yī)藥管理局，2002，346]標(biāo)準(zhǔn)中含量測定項下方法進行。5批本發(fā)明烏頭凍干粉針劑均由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供。測定結(jié)果見表1。
表1 制劑中生物堿含量測定結(jié)果生物堿含量*批號(mg/支)1 0.6342 0.6483 0.5824 0.6235 0.607注*表示以烏頭原堿(C25H41NO9)計。
烏頭注射液每支含烏頭原堿為標(biāo)示量0.62mg的90％-110％，即0.558-0.682mg/支，本發(fā)明烏頭凍干粉針劑的5批含量測定結(jié)果為0.582-0.648mg/支，在上述范圍內(nèi)，說明本發(fā)明烏頭凍干粉針劑的工藝穩(wěn)定，質(zhì)量可控，劑量準(zhǔn)確，完全符合注射劑有效性的要求。
2、本發(fā)明提取物中生物堿含量測定測定方法取不同批號提取物約20mg，精密稱定，用50ml水溶解，加濃氨試液5ml使呈堿性，以下按照烏頭注射液(WS-11327(ZD-1372)-2002)[國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編(口腔 腫瘤 兒科 分冊)。國家中醫(yī)藥管理局，2002，346]標(biāo)準(zhǔn)中含量測定項下方法進行。5批提取物均由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供。測定結(jié)果見表2。
表2 提取物中生物堿含量測定結(jié)果生物堿含量*批號(％)1 86.32 90.13 85.04 87.45 92.0注*表示以烏頭原堿(C25H41NO9)計。
以上提取物含量測定結(jié)果說明，用本發(fā)明的制備方法得到的提取物中有效部位生物堿的含量為85.0％-92.0％。
三、安全性評價1、本發(fā)明烏頭凍干粉針劑中烏頭堿的限量檢查測定方法按照烏頭注射液(WS-11327(ZD-1372)-2002)[國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編(口腔 腫瘤 兒科 分冊)。國家中醫(yī)藥管理局，2002，346]標(biāo)準(zhǔn)中檢查項下的高效液相色譜法進行。測定結(jié)果見表3。
表3 制劑中烏頭堿限量檢查結(jié)果批號 烏頭堿含量1
2小于對照品峰面積值3-/4小于對照品峰面積值5-/注-表示未檢測到。
以上烏頭堿含量測定結(jié)果，本發(fā)明烏頭凍干粉針劑中烏頭堿含量用上述高效液相色譜方法未檢測到或小于對照品的峰面積值；說明本發(fā)明烏頭凍干粉針劑中有毒成分烏頭堿的含量小于規(guī)定的劑量。
2、異常毒性實驗將本發(fā)明烏頭凍干粉針一支用1ml注射用水溶解。取體重18-20g的健康小白鼠5只，分別由腹腔注射本發(fā)明0.15ml，觀察。結(jié)果48小時內(nèi)未有小白鼠死亡的現(xiàn)象發(fā)生。
異常毒性實驗未有小白鼠出現(xiàn)死亡。說明本發(fā)明烏頭凍干粉針劑的制備方法科學(xué)、合理，完全符合安全性要求。
四、本發(fā)明烏頭凍干粉針劑和烏頭堿注射液比較用同一批川烏、草烏藥材，制成本發(fā)明烏頭凍干粉針劑和烏頭注射液(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供)，進行下列比較。結(jié)果見表4。
表4 本發(fā)明烏頭凍干粉針劑和烏頭堿注射液的比較項目 烏頭注射液本發(fā)明烏頭凍干粉針劑藥材 川烏250g，草烏250g 川烏250g，草烏250g制備工藝 乙醇冷浸，酸水煎煮，乙醇沉淀， 酸性乙醇提取、超濾、水解、水解，活性炭處理過大孔吸附樹脂柱提取物中生物堿含量(％)25％左右85％-92％產(chǎn)品(支) 10006000生產(chǎn)周期 長 短制劑穩(wěn)定性差 好貯藏 密閉、遮光 無要求生產(chǎn)成本 高 低相同量的同一批川烏、草烏藥材，制成的本發(fā)明烏頭凍干粉針劑和烏頭注射液，每支生物堿含量在規(guī)定的范圍內(nèi)的前提下，由于本發(fā)明的制備方法科學(xué)、合理，提取效率高，最終制成的烏頭凍干粉針劑的數(shù)量是烏頭注射液的6倍，從而大大降低了生產(chǎn)成本。說明本發(fā)明的制備方法更加具有實用性。
五、本發(fā)明烏頭凍干粉針劑和烏頭堿注射液鎮(zhèn)痛作用比較烏頭注射液(貴州漢方制藥有限公司)；本發(fā)明烏頭凍干粉針劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司提供)。
取雌性健康昆明種小鼠50只，水溫恒定在55±0.5℃，用熱板法測其基礎(chǔ)痛閾，以小鼠舔后足為指標(biāo)，選其疼痛反應(yīng)潛伏期在10～30s之間的30只供實驗，然后按體重分層均等隨機分3組，即對照組、烏頭注射液組，本發(fā)明烏頭凍干粉針劑組。每組10只，分別腹腔注射給藥，對照組給予等容量生理鹽水。各組分別于給藥前及給藥后30min各測痛閾一次，痛閾超過60s者以60s記。計算痛閾值，結(jié)果見表5。
表5 制劑鎮(zhèn)痛作用(X±SD)鼠數(shù)痛閾值(s)組別(只) 給藥前 給藥后對照組1017.74±3.5821.52±8.74烏頭注射液組 1016.93±3.8236.62±7.62*本發(fā)明烏頭凍干粉針劑組1017.25±3.6438.37±8.35*注與對照組比較*P＜0.01；本發(fā)明烏頭凍干粉針劑和烏頭注射液均能顯著增加小鼠的痛閾值(P＜0.01)；本發(fā)明烏頭凍干粉針劑和烏頭注射液相比，痛閾值提高無差異。說明本發(fā)明烏頭凍干粉針劑和烏頭注射液藥理作用強度相似。
六、制備實施例實施例1(1)原料藥材為川烏250g，草烏250g；(2)取上述藥材，粉碎，加10倍量pH5的鹽酸酸化的80％乙醇溶液提取4次，每次2小時；合并乙醇提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，濾液煮沸2小時，冷卻，過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積的5％乙醇溶液洗脫，棄去，再用5倍柱體積90％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物4.80g。
(3)將上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入聚乙烯吡咯烷酮55.2g，加注射用水至6000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至6.5，灌裝，冷凍干燥，得本發(fā)明烏頭凍干粉針劑6000支。
實施例2(1)原料藥材為川烏250g，草烏250g；(2)取上述藥材，粉碎，加4倍量pH3的硫酸酸化的40％乙醇溶液提取2次，每次1小時；合并乙醇提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以12000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液煮沸1小時，冷卻，過已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的15％乙醇溶液洗脫，棄去，再用2倍柱體積60％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物3.4g。
(3)將上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇和葡聚糖56.6g，加注射用水至6000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至5.0，灌裝，冷凍干燥，得本發(fā)明烏頭凍干粉針劑6000支。
實施例3(1)原料藥材為川烏250g，草烏250g；(2)取上述藥材，粉碎，加8倍量pH4的磷酸酸化的60％乙醇溶液提取3次，每次2小時；合并乙醇提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以16000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為8000的超濾膜超濾，濾液煮沸1.5小時，冷卻，過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的10％乙醇溶液洗脫，棄去，再用4倍柱體積80％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物4.2g。
(3)將上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入葡萄糖和果糖55.8g，加注射用水至6000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至6.0，灌裝，冷凍干燥，得本發(fā)明烏頭凍干粉針劑6000支。
實施例4；(1)原料藥材為川烏250g，草烏250g；(2)取上述藥材，粉碎，加6倍量pH4.5的醋酸酸化的50％乙醇溶液提取4次，每次1小時；合并乙醇提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以14000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為8000的超濾膜超濾，濾液煮沸2小時，冷卻，過已處理好的NKA型大孔吸附樹脂柱，先用5倍柱體積的12％乙醇溶液洗脫，棄去，再用3倍柱體積70％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物3.7g。
(3)將上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入右旋果糖和乳糖56.3g，加注射用水至6000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至5.5，灌裝，冷凍干燥，得本發(fā)明烏頭凍干粉針劑6000支。
實施例5
(1)原料藥材為川烏2500g，草烏2500g；(2)取上述藥材，粉碎，加7倍量pH3.5的冰醋酸和鹽酸酸化的70％乙醇溶液提取2次，每次2小時；合并乙醇提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以18000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為10000的超濾膜超濾，濾液煮沸1小時，冷卻，過已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的8％乙醇溶液洗脫，棄去，再用4倍柱體積75％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物45g。
(3)將上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮和右旋果糖555g，加注射用水至60000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至5.8，灌裝，冷凍干燥，得本發(fā)明烏頭凍干粉針劑60000支。
肌肉注射，一次1-2支，一日1-2次。
權(quán)利要求
1.一種烏頭凍干粉針劑，其特征在于它是由川烏、草烏提取物3.4-4.8重量份和藥用輔料55.2-56.6重量份制備而成；其特征還在于提取物中生物堿有效部位重量百分含量為85.0％-92.0％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干粉針劑，其特征在于藥用輔料為凍干賦型劑，它是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一種、兩種或幾種的混合物。
3.一種烏頭凍干粉針劑的制備方法，其特征包括以下步驟(1)原料藥材重量份配比為川烏250，草烏250；(2)取上述重量份藥材，粉碎，加4-10倍量的酸性乙醇溶液提取2-4次，每次1-2小時；合并乙醇提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，高速離心，離心液用超濾膜超濾，濾液煮沸1-2小時，冷卻，過已處理好的大孔吸附樹脂柱，先用3-5倍柱體積的5％-15％乙醇溶液洗脫，棄去，再用2-5倍柱體積60％-90％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物。(3)將上述提取物加注射用水溶解，濾過，加入凍干賦型劑，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)pH值至5.0-6.5，灌裝，冷凍干燥，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，酸性乙醇的濃度為40％-80％。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，酸性乙醇中的酸使用但不限于鹽酸、硫酸、磷酸、醋酸、冰醋酸等中的一種、兩種或幾種的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，酸性乙醇的pH值為3-5。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，高速離心速度以12000-20000轉(zhuǎn)/分為宜。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所用的超濾膜截留分子量為5000-10000。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，大孔吸附樹脂為非極性或弱極性。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種烏頭凍干粉針劑，它是由川烏、草烏提取物和藥用輔料制備而成。本發(fā)明還公開了其制備方法。生物堿有效部位采用酸性乙醇提取、超濾、水解、過大孔吸附樹脂除雜的方法獲得，含量占到了提取物的85.0％－92.0％。含量測定和藥理實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的制備方法科學(xué)、合理，有效成分損失小，生產(chǎn)成本低，鎮(zhèn)靜止痛效果好，具有更好的實用性。
文檔編號A61P25/20GK1616039SQ20041007822
公開日2005年5月18日 申請日期2004年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月21日
發(fā)明者張平 申請人:張平