專利名稱：治療冠狀病毒感染和sars的組合物與方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及冠狀病毒感染和嚴(yán)重急性呼吸道綜合征領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
冠狀病毒是一病毒科，其特征為1)直徑60-220納米形狀不規(guī)則的顆粒，外包膜有獨(dú)特的棒狀包膜突起，此外包膜賦予了病毒冠狀外觀而獲得此科名。冠狀病毒科包括冠狀病毒屬和Toro病毒屬。冠狀病毒屬包括禽傳染性支氣管炎病毒、牛冠狀病毒、犬冠狀病毒、人冠狀病毒299E、人冠狀病毒OC43、小鼠肝炎病毒、大鼠冠狀病毒、豬血凝性腦脊髓炎病毒等；而Toro病毒屬包括Berne病毒和雅司病毒。冠狀病毒科的病毒能感染廣泛多種的哺乳動(dòng)物和鳥類，引起呼吸道感染和腸道感染等疾病。
最近，世界衛(wèi)生組織和美國(guó)疾病控制和預(yù)防中心警告發(fā)生了一種新的呼吸道疾病稱為嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(“SARS”)，一種非典型病毒性肺炎。此病發(fā)病時(shí)有38℃以上的發(fā)熱，有時(shí)伴有寒戰(zhàn)或其它癥狀，包括頭痛、不適或身體疼痛。最終，被感染者可發(fā)生非生產(chǎn)性干咳，感染者可有呼吸困難，10-20％的病例需要機(jī)械換氣輔助，1600個(gè)病例中約60人死亡。此病目前尚無(wú)治療藥物。
因此該領(lǐng)域需要治療冠狀病毒感染的方法，該領(lǐng)域需要治療SARS的方法。本發(fā)明致力滿足了這些需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供治療冠狀病毒感染的方法，在冠狀病毒感染患者中減少病毒負(fù)荷、減少病毒清除時(shí)間、降低臨床發(fā)病率或死亡率的方法。本發(fā)明還提供降低個(gè)體發(fā)生具有臨床后遺癥的致病性冠狀病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)的方法。本發(fā)明還提供降低個(gè)體發(fā)生SARS的風(fēng)險(xiǎn)的方法。本發(fā)明還提供治療SARS的方法。這些方法通常包括給予治療有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑來(lái)治療冠狀病毒感染。
本發(fā)明的特征是治療冠狀病毒感染的方法，此方法通常包括給予個(gè)體a)II型干擾素受體激動(dòng)劑；b)I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，或c)同時(shí)給予II型干擾素受體激動(dòng)劑和I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，其劑量能有效緩解此病的臨床病程。本發(fā)明另一個(gè)特征是給予個(gè)體協(xié)同性有效劑量的II型干擾素受體激動(dòng)劑和I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，以緩解此病的臨床病程。
本發(fā)明的特征是治療冠狀病毒感染的方法，所述方法通常包括給予個(gè)體I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑、II型干擾素受體激動(dòng)劑，或同時(shí)給予II型干擾素受體激動(dòng)劑和I型或III干擾素受體激動(dòng)劑，其劑量能有效減少病毒清除時(shí)間，或降低臨床發(fā)病率或死亡率。本發(fā)明另一特征是給予個(gè)體協(xié)同性有效劑量的II型干擾素受體激動(dòng)劑和I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，以減少病毒清除時(shí)間或降低臨床發(fā)病率或死亡率從而治療冠狀病毒感染。
本發(fā)明的特征是治療SARS的方法，所述方法通常包括給予個(gè)體I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑、II型干擾素受體激動(dòng)劑，或同時(shí)給予II型干擾素受體激動(dòng)劑和I型或III干擾素受體激動(dòng)劑，其劑量能有效減少病毒清除時(shí)間，或降低臨床發(fā)病率或死亡率。本發(fā)明另一特征是給予個(gè)體協(xié)同性有效劑量的II型干擾素受體激動(dòng)劑和I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，以減少病毒清除時(shí)間或降低臨床發(fā)病率或死亡率從而治療SARS。
如上所述，實(shí)施聯(lián)合治療個(gè)體冠狀病毒感染的方法時(shí)，給予個(gè)體I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑。在一些實(shí)施方案中，在同一制劑中給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑。在其它實(shí)施方案中，在分開的制劑中給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑。當(dāng)以分開的制劑給予時(shí)，可依次，同時(shí)給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑，或可在24小時(shí)內(nèi)順次給予。在許多實(shí)施方案中，皮下多劑給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑。任選的，以可控藥物輸送裝置給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑。任選的，基本上連續(xù)地或經(jīng)可控藥物輸送裝置連續(xù)地給予個(gè)體I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑。任選的，此可控制藥物輸送裝置是一種可植入的灌注泵，此灌注泵可通過(guò)皮下灌注向個(gè)體輸送I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。
在一些實(shí)施方案中，采用聯(lián)合療法在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療的整個(gè)期間給予II型干擾素受體激動(dòng)劑。在其它實(shí)施方案中，給予II型干擾素受體激動(dòng)劑的時(shí)間與I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療期相重疊。例如，II型干擾素受體激動(dòng)劑治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療開始前進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療結(jié)束前結(jié)束；II型干擾素受體激動(dòng)劑治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療開始后進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療結(jié)束后結(jié)束；II型干擾素受體激動(dòng)劑治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑開始后進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑結(jié)束前結(jié)束；或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療開始前進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療結(jié)束后結(jié)束。
在某些實(shí)施方案中，I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療，II型干擾素受體激動(dòng)劑治療，或用I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療，可與給予能有效抵御冠狀病毒感染的其它特定抗病毒藥劑共同進(jìn)行。在這些實(shí)施例中，用其它抗病毒藥劑治療的時(shí)間可與用I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療的時(shí)間相重合。在其它實(shí)施方案中，其它抗病毒藥劑的治療進(jìn)程可與I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療進(jìn)程相重疊。例如，其它抗病毒藥治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療開始前進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療結(jié)束前結(jié)束；其它抗病毒藥治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療開始后進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑結(jié)束前結(jié)束；或其它抗病毒藥治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療開始前進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療結(jié)束后結(jié)束。
在許多實(shí)施方案中，上述方法之一包括給予IFN-γ。在其中一些實(shí)施例中，單用IFN-γ治療或IFN-γ聯(lián)合治療，是同時(shí)給予能有效治療冠狀病毒感染的一種或多種其它抗病毒藥。
在許多實(shí)施方案中，上述方法之一包括給予IFN-α。在其中一些實(shí)施例中，單用IFN-α治療或IFN-α聯(lián)合治療，是同時(shí)給予能有效治療冠狀病毒感染的一種或多種其它抗病毒藥。
在許多實(shí)施方案中，上述方法之一包括給予共有序列干擾素(CIFN)。在其中一些實(shí)施例中，CIFN治療與能有效治療冠狀病毒感染的一種或多種其它抗病毒藥同時(shí)給予。
在許多實(shí)施方案中，上述方法之一包括給予IFN-γ和IFN-α，在其中一些實(shí)施例中，所述方法包括同時(shí)給予IFN-α、IFN-γ和其它能有效治療冠狀病毒感染的抗病毒藥。
在許多實(shí)施方案中，上述方法之一包括給予CIFN和IFN-γ。在其中一些實(shí)施例中，所述方法包括同時(shí)給予CIFN、IFN-γ和其它能有效治療冠狀病毒感染的抗病毒藥。
在許多實(shí)施方案中，上述方法之一包括給予聚乙二醇化的(PEG化的)IFN-α偶聯(lián)物，在一些實(shí)施方案中，PEG化IFN-α偶聯(lián)物是單PEG化(monoPEGylated)IFN-α。在其它實(shí)施方案中，該單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽通過(guò)其賴氨酸殘基或N-末端氨基酸殘基共價(jià)連接于一個(gè)PEG分子。在其它實(shí)施方案中該單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽，通過(guò)其賴氨酸殘基的ε-氨基或α-氨基與PEG分子的活化羧基之間的酰胺鍵共價(jià)連接于一個(gè)PEG分子。在其它實(shí)施方案中，該單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽共價(jià)連接于一個(gè)線性PEG分子。在其它實(shí)施方案中，該單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽共價(jià)連接于一個(gè)線性30 kD PEG分子。在其它實(shí)施方案中，該單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽通過(guò)其賴氨酸殘基的ε-氨基或α-氨基與PEG分子的活化羧基之間的酰胺鍵共價(jià)連接于一個(gè)線性30kD PEG分子。在其它實(shí)施方案中，該單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽通過(guò)其賴氨酸殘基的ε-氨基或α-氨基與PEG分子的活化丙酰基之間的酰胺鍵共價(jià)連接于一個(gè)線性30kDPEG。其它實(shí)施方案中，該單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽共價(jià)連接于一個(gè)線性單甲氨基-PEG(mPEG)。在其它實(shí)施方案中，單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽和線性琥珀酰亞胺丙酸酯活化的30kD mPEG之間縮合反應(yīng)的產(chǎn)物。在采用PEG化IFN-α偶聯(lián)物的上述方法之一中，該IFN-α多肽可以是共有序列干擾素(CIFN)多肽，在采用PEG化IFN-α偶聯(lián)物的上述方法之一中，該IFN-α多肽可以是干擾素α-1的CIFN多肽。
術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”、“宿主”、“對(duì)象”和“患者”本文可互換使用，指哺乳動(dòng)物，包括但不限于靈長(zhǎng)動(dòng)物，包括猿猴和人。
本文所用術(shù)語(yǔ)“冠狀病毒”包括冠狀病毒科的任何成員，包括但不限于冠狀病毒屬任何成員和Toro病毒屬任何成員。
術(shù)語(yǔ)“冠狀病毒”還包括天然產(chǎn)生的(如野生型)冠狀病毒、天然產(chǎn)生的冠狀病毒變種和實(shí)驗(yàn)室中產(chǎn)生的冠狀病毒變種，包括通過(guò)選擇產(chǎn)生的變種，化學(xué)修飾產(chǎn)生的變種和基因修飾的變種(如實(shí)驗(yàn)室中用重組DNA方法修飾的冠狀病毒)。
本文所用術(shù)語(yǔ)“治療”等，指獲得理想的藥理和/或生理效果，此效果可以是預(yù)防性的，可完全或部分預(yù)防疾病或其癥狀，和/或可以是治療性的，可部分或完全治愈疾病和/或疾病所致的附作用。本文所用的“治療”，包括治療哺乳動(dòng)物特別是人，包括a)預(yù)防可能易感染此病或處于發(fā)生此病的風(fēng)險(xiǎn)中，但尚未作出患此病診斷的對(duì)象發(fā)生此?。籦)抑制此病，即制止此病發(fā)展；和c)緩解此病，即導(dǎo)致此病消退。
本文所用術(shù)語(yǔ)“I型干擾素受體激動(dòng)劑”，指人的I型干擾素受體的任何天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的，能通過(guò)該受體而結(jié)合引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的配體。I型干擾素受體激動(dòng)劑包括的干擾素有天然產(chǎn)生的干擾素、修飾的干擾素、合成的干擾素、PEG化干擾素、含有干擾素和異源蛋白的融合蛋白、改組的干擾素、干擾素受體的特異性抗體、非肽化學(xué)激動(dòng)劑等。
本文所用術(shù)語(yǔ)“III型干擾素受體激動(dòng)劑”，指人IL-28受體α(“IL-28R”)的任何天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的配體，其氨基酸序列見Sheppark等人描述，能通過(guò)該受體而結(jié)合引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
文本所用術(shù)語(yǔ)“II型干擾素受體激動(dòng)劑”，指人II型干擾素受體的任何天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的能通過(guò)該受體而結(jié)合引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的配體。II型干擾素受體激動(dòng)劑包括的干擾素有天然產(chǎn)生的干擾素、修飾的干擾素、合成的干擾素、PEG化干擾素、含有干擾素和異源蛋白質(zhì)的融合蛋白、改組的干擾素、干擾素受體的特異性抗體、非肽化學(xué)激動(dòng)劑等。
本文所用術(shù)語(yǔ)“劑量”，指給予需要治療的病人的抗病毒藥量，此劑量包括抗病毒藥從藥物分配裝置中一次或多次釋放的量。
本文所用術(shù)語(yǔ)“持續(xù)輸送”(如“向某組織持續(xù)輸送”)，意思指將藥物運(yùn)送至要輸送的部位，如組織中；其方式是，在所選時(shí)間期間向該組織不斷輸送所需量的藥物，在所選時(shí)間內(nèi)病人每分鐘接受大約相同量的藥物。
本文所用“可控性釋放”(如“可控性藥物釋放”)，意為基本上不受使用環(huán)境影響以選擇的速度或可控制的速度、間隔、和/或劑量釋放藥物(如I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，如IFN-α；II型干擾素受體激動(dòng)劑如IFN-γ)。因此“可控性釋放”包括但不一定限于基本上持續(xù)地遞送和模式遞送(如一段時(shí)間的間歇性輸送，定期或不定期間隔)。
本文所用“模式的”或“暫時(shí)的”藥物輸送，指通常以基本上有規(guī)律的模式在預(yù)先選擇的時(shí)間內(nèi)輸送藥物(如非藥物注射所需的時(shí)間)。“模式的”或“暫時(shí)的”藥物輸送，包括以遞增、遞減，基本恒定或脈沖性速度輸送藥物(如每單位時(shí)間的給藥量、每單位時(shí)間給藥的體積)，還包括持續(xù)或基本上持續(xù)或長(zhǎng)期輸送藥物。
術(shù)語(yǔ)“可控藥物輸送裝置”，指包括其中含有的藥物或其它所需物質(zhì)受該裝置本身的控制或決定而釋放(如釋放速度、時(shí)間)，并且基本上不受用藥環(huán)境影響，或在用藥環(huán)境中以可重復(fù)性速度釋放藥物的任何裝置。
本文所用“基本上持續(xù)性”，例如“基本上持續(xù)性輸注”或“基本上持續(xù)性輸送”，指輸送藥物的方式是在預(yù)定的藥物輸送期間基本上不停頓地輸送藥物，病人在該預(yù)定期間任何8小時(shí)間隔內(nèi)所接受的藥量從不下降至零。另外“基本上持續(xù)性”藥物輸送還可包括以基本恒定的、預(yù)先選擇的速度或速度范圍(如每單位時(shí)間的輸藥量，單位時(shí)間輸藥的體積)輸送藥物，在所選的藥物輸送期間基本上不停頓地輸藥。
進(jìn)一步敘述本發(fā)明前應(yīng)理解本發(fā)明不限于具體實(shí)施例所述而當(dāng)然可有所變化，還應(yīng)理解本文所用的專業(yè)術(shù)語(yǔ)目的只是說(shuō)明具體實(shí)施例而非限制，因?yàn)楸景l(fā)明范圍只受附屬權(quán)利要求書的限定。
在提供數(shù)值范圍時(shí)，應(yīng)理解插入下限第10單位的各個(gè)數(shù)值除非文中另有明確說(shuō)明，在該范圍的上下限之間，在所述范圍中的任何其它說(shuō)明的或插入的數(shù)值都包括在本發(fā)明中。這些較小范圍數(shù)值的上下限獨(dú)立地包括在較小范圍內(nèi)，也包括在本發(fā)明中，而在所述范圍的限度之外。所述范圍包括一或二個(gè)界限，不包括這些包括的一或二個(gè)限度的范圍也包括在本發(fā)明之內(nèi)。
除非另有說(shuō)明，本文所用的所有科技術(shù)語(yǔ)與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所共同理解的含義相同，雖然也可采用與本文所述相似的或相等的方法和材料來(lái)實(shí)施或檢驗(yàn)本發(fā)明，但這里所述的是優(yōu)選的方法和材料。以上提及的所有出版物都納入本文參考文獻(xiàn)以公開描述這些出版物所引用的有關(guān)方法和材料。
必須注意，如本文和附屬權(quán)利要求書中所用，除非另有明確說(shuō)明，所用單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)。例如，提及“一種”劑量時(shí)亦包括多個(gè)此劑量，提及“所述”方法時(shí)亦包括一種或多種方法及該領(lǐng)域技術(shù)人員所知道的等價(jià)方法等等。
本文所述的出版物只提供了本申請(qǐng)遞交前它們所公開的內(nèi)容，不應(yīng)認(rèn)為本發(fā)明已承認(rèn)無(wú)權(quán)先于以前發(fā)明所公開的內(nèi)容，而且所提供的
公開日期可以不同于實(shí)際
公開日期，這可能需要獨(dú)立地證實(shí)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供治療冠狀病毒感染的方法，在冠狀病毒感染患者中減少病毒負(fù)荷、減少病毒清除時(shí)間、降低臨床發(fā)病率或死亡率的方法。本發(fā)明還提供降低個(gè)體發(fā)生具有臨床后遺癥的致病性冠狀病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)的方法。本發(fā)明還提供降低個(gè)體發(fā)生SARS的風(fēng)險(xiǎn)的方法。本發(fā)明還提供治療SARS的方法。這些方法通常包括給予治療有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑來(lái)治療冠狀病毒感染。
本發(fā)明的方法通常包括給予a)II型干擾素受體激動(dòng)劑；b)I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，或c)同時(shí)給予II型干擾素受體激動(dòng)劑和I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。為方便起見，本文中的治療a)，b)和c)稱為“干擾素療法”或“干擾素治療”。
本文的描述中以SARS的病原因子為例。然而，用于治療的本方法包括預(yù)防任何冠狀病毒感染。
SARS是一種非典型病毒性肺炎。其特征是38℃以上的發(fā)熱，可伴有頭痛、寒戰(zhàn)或身體疼痛。SARS的其它特征是干咳、呼吸短促、呼吸困難、吸氧不足、或急性呼吸窘迫綜合征的放射照片或其它發(fā)現(xiàn)。某些情況下此病導(dǎo)致死亡。
本發(fā)明提供治療SARS的方法，所述方法通常包括給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑，或聯(lián)合治療給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。
一些實(shí)施例中，預(yù)防性給予個(gè)體干擾素治療，如在出現(xiàn)癥狀前進(jìn)行干擾素治療。當(dāng)個(gè)體無(wú)癥狀或可能或尚不可能受感染，但已密切接觸過(guò)診斷為SARS的患者時(shí)，當(dāng)個(gè)體無(wú)癥狀或尚未受感染，但預(yù)計(jì)會(huì)接觸診斷為SARS的患者(如工作為照料料已診斷為SARS的患者的保健工作者)時(shí)，當(dāng)個(gè)體無(wú)癥狀或尚未受感染但要到已知的SARS高發(fā)區(qū)旅游時(shí)等，給予這種預(yù)防性治療。
其它實(shí)施方案中，當(dāng)出現(xiàn)SARS臨床癥狀后，如出現(xiàn)發(fā)熱超過(guò)38℃時(shí)進(jìn)行干擾素治療。本方法的優(yōu)點(diǎn)是可減輕SARS癥狀的嚴(yán)重程度，如減少病毒負(fù)荷和/或病毒清除時(shí)間，和/或減少其發(fā)病率或死亡率。
本發(fā)明還提供治療在已知或懷疑接觸冠狀病毒后具有冠狀病毒感染癥狀的個(gè)體的冠狀病毒感染。i)曾經(jīng)密切接觸過(guò)已診斷為冠狀病毒感染和ii)存在38℃以上發(fā)熱的個(gè)體認(rèn)為符合用本發(fā)明方法治療。本方法的優(yōu)點(diǎn)是可減輕冠狀病毒感染的嚴(yán)重程度，如減少病毒負(fù)荷和/或病毒清除時(shí)間，和/或減少其發(fā)病率或死亡率。
本發(fā)明提供預(yù)防性治療尚未受冠狀病毒感染和/或未表現(xiàn)出冠狀病毒感染典型癥狀個(gè)體的完?duì)畈《靖腥?。這類個(gè)體包括曾接觸過(guò)SARS患者的個(gè)體，如保健工作者；在SARS患者限制區(qū)工作的人(如民航人員，航空服務(wù)員和飛機(jī)領(lǐng)航員；旅游者；會(huì)議出席者等等)；和SARS患者生活在同一家庭的人。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是可降低個(gè)體發(fā)生致病性冠狀病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。
當(dāng)本方法是預(yù)防性時(shí)，此法可降低個(gè)體發(fā)生致病性冠狀病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑或II型干擾素受體激動(dòng)劑的有效劑量是單獨(dú)或聯(lián)合治療時(shí)，能降低個(gè)體發(fā)生致病性冠狀病毒感染可能性的風(fēng)險(xiǎn)的劑量。例如，與缺乏干擾素治療而發(fā)生該病毒致病性感染相比，有效劑量能至少約10％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、或更多地降低個(gè)體發(fā)生致病性感染的風(fēng)險(xiǎn)。
一些實(shí)施例中，I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑或II型干擾素受體激動(dòng)劑的有效劑量是單獨(dú)或聯(lián)合治療時(shí)，與缺乏治療時(shí)的病毒負(fù)荷相比，能至少約10％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、或更多地減少冠狀病毒的負(fù)荷。
一些實(shí)施例中，I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑或II型干擾素受體激動(dòng)劑的有效劑量是單獨(dú)或聯(lián)合治療時(shí)，與缺乏治療時(shí)的病毒清除時(shí)間相比，能至少約10％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、或更多地減少病毒的清除時(shí)間。
一些實(shí)施例中，I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑或II型干擾素受體激動(dòng)劑的有效劑量是單獨(dú)或聯(lián)合治療時(shí)，與缺乏治療時(shí)的發(fā)病率或死亡率相比，能至少約10％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、或更多地減少冠狀病毒感染的發(fā)病率或死亡率。
一些實(shí)施例中，I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑或II型干擾素受體激動(dòng)劑的有效劑量是單獨(dú)或聯(lián)合治療時(shí)，與缺乏治療時(shí)的發(fā)病率或死亡率相比，能至少約10％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、或更多地降低SARS的發(fā)病率或死亡率。
本領(lǐng)域技術(shù)人員不難確定，本方法在降低致病性冠狀病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)、降低病毒負(fù)荷、減少病毒清除時(shí)間、或降低冠狀病毒感染的發(fā)病率或死亡率上是否有效。通過(guò)測(cè)定血清病毒滴度或水平不難測(cè)定病毒負(fù)荷。血清中病毒的量(病毒顆粒的數(shù)目或病毒基因組的數(shù)量)可用已知方法測(cè)定，如采用被測(cè)冠狀病毒的特異性寡核苷酸引物做定量聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)。通過(guò)測(cè)定與冠狀病毒有關(guān)的癥狀如發(fā)熱、呼吸道癥狀(如咳嗽、呼吸的難易等等)可確定發(fā)病率是否降低。
通常，I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑的單位劑量范圍約1-300μg。通常，II型干擾素受體激動(dòng)劑的單位劑量范圍是25-500μg。許多實(shí)施方案中，將給予多劑的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。例如，可每天二次、每天一次、一周三次、一周二次、每周一次、或每月二次給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑一周至約16周。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供在曾接觸冠狀病毒的個(gè)體(曾接觸過(guò)冠狀病毒感染者)中，減少病毒負(fù)荷、和/或減少病毒清除時(shí)間、和/或降低發(fā)病率或死亡率的方法，所述方法包括給予有效劑量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，II型干擾素受體激動(dòng)劑，或含有I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑的聯(lián)合治療。這些實(shí)施例中，干擾素治療開始于接觸后約1小時(shí)至14天，如接觸冠狀病毒后約1-24小時(shí)、約24-48小時(shí)、約48小時(shí)至3天、約3-4天、約4-7天、約7-10天或約10-14天。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供降低曾接觸冠狀病毒個(gè)體(曾接觸冠狀病毒感染患者)發(fā)生具有臨床后遺癥的致病性冠狀病毒感染(如SARS)的風(fēng)險(xiǎn)的方法，此方法包括給予有效劑量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，II型干擾素受體激動(dòng)劑，或含有I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑的聯(lián)合治療。這些實(shí)施例中，干擾素治療開始于接觸后約1小時(shí)至35天，如接觸冠狀病毒后約1-24小時(shí)、約24-48小時(shí)、約48小時(shí)至3天、約3-4天、約4-7天、約7-10天、約10-14天、約14-21天或約21-35天。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供在可能或不可能感染冠狀病毒或曾接觸過(guò)冠狀病毒的個(gè)體中，減少病毒負(fù)荷、和/或減少病毒清除時(shí)間、和/或降低發(fā)病率或死亡率的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在接觸器冠狀病毒24小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸器冠狀病毒24小時(shí)內(nèi)給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸器冠狀病毒24小時(shí)內(nèi)給予有效量的有效劑量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，與有效劑量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供在未感染冠狀病毒但曾接觸冠狀病毒的個(gè)體中，減少病毒負(fù)荷、和/或減少病毒清除時(shí)間、和/或降低發(fā)病率或死亡率的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在接觸器冠狀病毒48小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸器冠狀病毒48小時(shí)內(nèi)給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸器冠狀病毒48小時(shí)內(nèi)給予有效量的有效劑量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，與有效劑量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供在未感染冠狀病毒但曾接觸冠狀病毒的個(gè)體中，減少病毒負(fù)荷、和/或減少病毒清除時(shí)間、和/或降低發(fā)病率或死亡率的方法。所述方法包括在接觸冠狀病毒72小時(shí)至35天后，例如接觸冠狀病毒48小時(shí)以上，如72小時(shí)、4天、5天、6天、或7天后，或接觸冠狀病毒7-10天、10-14天、14-17天、17-21天、21-25天、25-30天、或30-35天后給予干擾素治療。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在接觸冠狀病毒48小時(shí)以上后給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸冠狀病毒48小時(shí)以上后給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸冠狀病毒48小時(shí)以上后給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供降低曾接觸冠狀病毒的個(gè)體(曾與感染冠狀病毒者接觸過(guò)的個(gè)體)發(fā)生具有臨床后遺癥的致病性冠狀病毒感染(如SARS)的風(fēng)險(xiǎn)的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在接觸冠狀病毒24小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸冠狀病毒24小時(shí)內(nèi)給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸冠狀病毒24小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供降低曾接觸冠狀病毒的個(gè)體(曾與感染冠狀病毒者接觸過(guò)的個(gè)體)發(fā)生具有臨床后遺癥的致病性冠狀病毒感染(如SARS)的風(fēng)險(xiǎn)的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在接觸冠狀病毒48小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸冠狀病毒48小時(shí)內(nèi)給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸冠狀病毒48小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供降低具有發(fā)生SARS的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體(曾與診斷為SARS的患者接觸過(guò)的個(gè)體；曾到SARS高發(fā)區(qū)旅游的個(gè)體)發(fā)生SARS的風(fēng)險(xiǎn)的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在個(gè)體接觸SARS患者24小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在個(gè)體接觸SARS患者24小時(shí)內(nèi)給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸SARS患者24小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供降低具有發(fā)生SARS的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體(曾與診斷為SARS的患者接觸過(guò)的個(gè)體；曾到SARS高發(fā)區(qū)旅游的個(gè)體)發(fā)生SARS的風(fēng)險(xiǎn)的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在個(gè)體接觸SARS患者48小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在個(gè)體接觸SARS患者48小時(shí)內(nèi)給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸SARS患者48小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供降低具有發(fā)生SARS的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體(曾與診斷為SARS的患者接觸過(guò)的個(gè)體；曾到SARS高發(fā)區(qū)旅游的個(gè)體)發(fā)生SARS的風(fēng)險(xiǎn)的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在個(gè)體接觸SARS患者后3-7天內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在個(gè)體接觸SARS患者后3-7天內(nèi)給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在接觸SARS患者后3-7天內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供在診斷為SARS、或懷疑患有SARS、或有發(fā)生SARS(曾與診斷為SARS的患者接觸過(guò)的個(gè)體；曾到SARS高發(fā)區(qū)旅游的個(gè)體)的風(fēng)險(xiǎn)和具有至少一種SARS癥狀如38℃以上發(fā)熱的個(gè)體中，治療SARS的方法，如減少病毒負(fù)荷、和/或減少病毒清除時(shí)間、和/或降低發(fā)病率或死亡率的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀24小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀24小時(shí)內(nèi)給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀24小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供在診斷為SARS、或懷疑患有SARS、或有發(fā)生SARS(曾與診斷為SARS的患者接觸過(guò)的個(gè)體；曾到SARS高發(fā)區(qū)旅游的個(gè)體)的風(fēng)險(xiǎn)和具有至少一種SARS癥狀如38℃以上發(fā)熱的個(gè)體中，治療SARS的方法，如減少病毒負(fù)荷、和/或減少病毒清除時(shí)間、和/或降低發(fā)病率或死亡率的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀48小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀48小時(shí)內(nèi)給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀48小時(shí)內(nèi)給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供在診斷為SARS、或懷疑患有SARS、或有發(fā)生SARS(曾與診斷為SARS的患者接觸過(guò)的個(gè)體；曾到SARS高發(fā)區(qū)旅游的個(gè)體)的風(fēng)險(xiǎn)和具有至少一種SARS癥狀如38℃以上發(fā)熱的個(gè)體中，治療SARS的方法，如減少病毒負(fù)荷、和/或減少病毒清除時(shí)間、和/或降低發(fā)病率或死亡率的方法。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀48小時(shí)以上，如72小時(shí)至35天，如72小時(shí)、4天、5天、6天、或7天后，或接觸冠狀病毒7-10天、10-14天、14-17天、17-21天、21-25天、25-30天、或30-35天后給予干擾素治療。這些實(shí)施例的一些中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀后48小時(shí)以上給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀后48小時(shí)以上給予有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，所述方法包括在出現(xiàn)SARS癥狀后48小時(shí)以上給予有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑與有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑聯(lián)合治療。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的上述任一方法中采用I型干擾素受體激動(dòng)劑治療，此I型干擾素激動(dòng)劑是IFN-α或PEG化IFN-α偶聯(lián)物(PEG-IFN-α)。這些實(shí)施例的一些中，此IFN-α是共有序列干擾素(CIFN)或PEG化共有序列干擾素偶聯(lián)物(PEG-CIFN)。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的上述任一方法中采用II型干擾素受體激動(dòng)劑治療，此II型干擾素激動(dòng)劑是IFN-γ。
I型干擾素受體激動(dòng)劑上述方法之一中，某些實(shí)施方案給予I型干擾素受體激動(dòng)劑，I型干擾素受體激動(dòng)劑包括IFN-α、IFN-β、IFN-τ、IFN-ω、I型干擾素受體的特異性抗體激動(dòng)劑；和包括非多肽激動(dòng)劑的其它I型干擾素受體激動(dòng)劑。
干擾素-α任何已知的IFN-α可用于本發(fā)明。本文所用術(shù)語(yǔ)“干擾素-α”，指能抑制病毒復(fù)制和細(xì)胞增殖及調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的相關(guān)多肽家族。術(shù)語(yǔ)“IFN-α”，包括天然產(chǎn)生的IFN-α、合成的IFN-α、衍生的IFN-α(如PEG化IFN-α、糖基化IFN-α等)和天然產(chǎn)生或合成的IFN-α類似物；基本上具有天然產(chǎn)生的IFN-α所述抗病毒性能的任何IFN-α。
合適的α干擾素包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-α(包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-α2a、IFN-α2b)、重組IFN-α2b，如ScheringIntronA公司的Intron-A干擾素(Kenilworth，NJ)、Hoffmanta Roche，Nulley NJ的重組IFN-α2a，如Roferon干擾素；Boehringer Ingelheim制藥公司，Ridgefield Conn的重組IFN-α2c，如Berofor α2干擾素；Sumitomo日本的純化混合天然α干擾素IFNα-n1如Sumiferon、或Glaxo-Wellcome公司，London，Great Britian的Wellferon IFNα-n1(INS)和Interferon Sciences制備的可從Purdue Frederick公司，Norwalk Conn購(gòu)得的天然IFN-α的IFNα-n3混合物，其商標(biāo)名為Alferon。
術(shù)語(yǔ)“IFN-α”，還包括共有序列IFN-α。共有序列IFN-α(也稱為“CIFN”和“IFN-con”和“共有序列干擾素”)包括但不限于美國(guó)專利4,695,623和4,897,471中所公開的命名為IFN-con1、IFN-con2和IFN-con3的氨基酸，和通過(guò)測(cè)定天然產(chǎn)生的IFN-α的共有序列而確定的共有序列干擾素(如Infergen，InterMune，Inc.Brisbane，Calif)。IFN-con1是Infergenα-con1產(chǎn)品中的共有序列干擾素制劑。Infergen共有序列干擾素產(chǎn)品本文以其品牌名(Infergen)或以其屬名(IFN-αcon1)稱呼?？扇缟鲜鰧＠龌蚱渌鼧?biāo)準(zhǔn)方法合成編碼IFN-con的DNA序列。特別感興趣采用CIFN。
也適用于本發(fā)明的是含IFN-α和異源多肽的融合多肽。合適的IFN-α融合多肽包括但不限于Albuferon-αTM(一種人白蛋白和IFN-α的融合產(chǎn)品；Human GencmeSciences；見例如Osborn等，J Pharmacol Exp.Therap 303540-548.2002)。也適合用于本發(fā)明的是IFN-α的基因改組形式，見例如Masci等，Curr.Oncol Rep，5108-113，2003。
PEG化IFN-α術(shù)語(yǔ)“IFN-α”，還包括IFN-α的衍生物，它們經(jīng)過(guò)衍生(如化學(xué)修飾)而改變了某些性能如血清半衰期。因此，術(shù)語(yǔ)“IFN-α”，包括糖基化IFN-α、聚乙二醇衍生的IFN-α(PEG化IFN-α)等。PEG化IFN-α及其制備方法見例如美國(guó)專利5,382,657；5,981,709和5,951,974。PEG化IFN-α包括PEG和上述IFN-α分子之一的偶聯(lián)物，包括但不限于PEG與IFN-α-2a的偶聯(lián)物(Referon Hoffman La-Roche，Nutley，新澤西)與IFN-α-2b的偶聯(lián)物(Intro.Schering-Plough，Madison，新澤西)與IFN-α2c的偶聯(lián)物(Berofor-α，Boehriager，Ingelheim.Ingelbeim，德國(guó))和與通過(guò)測(cè)定天然產(chǎn)生的IFN-α的共同序列所確定的共有序列干擾素的偶聯(lián)物(Infergen，InterMune Inc，Brisbane，Calif)。
上述任何IFN-α多肽可用一個(gè)或多個(gè)聚乙二醇分子修飾，即PEG化。PEG化IFN-α多肽中的PEG分子偶聯(lián)于該IFN-α多肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸側(cè)鏈。某些實(shí)施方案中，PEG化IFN-α只在一個(gè)氨基酸上含有PEG分子。其它實(shí)施方案中，PEG化IFN-α在二個(gè)或多個(gè)氨基酸上含有PEG分子，如該IFN-α含有結(jié)合于2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)或者10個(gè)不同氨基酸殘基的PEG分子。
IFN-α可通過(guò)氨基、巰基、羥基或羧基直接與PEG偶聯(lián)(即無(wú)接頭基團(tuán))。
在某些實(shí)施方案中，PEG化IFN-α是在IFN-α多肽的氨基端(N-端)或附近PEG化。例如，PEG分子偶聯(lián)于IFN-α多肽的氨基酸1-4或氨基酸5-10的1個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。
其它實(shí)施方案中，PEG化IFN-α是10-28位的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的PEG化。
在其它實(shí)施方案中，PEG化IFN-α是IFN-α多肽的羧基端(C-端)或附近的PEG化，例如，氨基酸156-166或150-155位的一個(gè)或多個(gè)殘基處的PEG化。
其它實(shí)施方案中PEG化IFN-α是氨基酸100-114位的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的PEG化。
IFN-α蛋白質(zhì)的受體結(jié)合域和/或活性位點(diǎn)域中或附近的氨基酸殘基的聚乙二醇化衍生，可能破壞這些結(jié)構(gòu)域的功能。本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，要避免被PEG化的氨基酸，包括氨基酸30-40位的氨基酸殘基和氨基酸113-149位的氨基酸殘基。
某些實(shí)施方案中，PEG通過(guò)接頭基團(tuán)結(jié)合于IFN-α。此種接頭基團(tuán)是任何生物相容的接頭基團(tuán)。其中“生物相容性”表示此化合物或基團(tuán)無(wú)毒性，可用于體外或體內(nèi)但不引起損傷、惡心、疾病或死亡，例如，PEG可通過(guò)醚鍵、脂鍵、硫醇鍵或胺鍵與該接頭基團(tuán)結(jié)合。合適的生物相容性接頭基團(tuán)包括但不限于酯基、酰胺基、氨甲?；?、羧基、羥基、糖基、琥珀酰亞胺基(例如包括琥珀酰亞胺琥珀酸(SS)、琥珀酰亞胺丙酸(SPA)、琥珀酰亞胺丁酸(SBA)、琥珀酰亞胺羧甲基鹽(SCM)、琥珀酰亞胺琥珀酰胺(SSA)或N-羥基琥珀酰亞胺(NHSO))、環(huán)氧基、氧羰咪唑基(例如，包括羰基咪唑(CDI))、硝苯基(例如包括硝苯羧酸鹽(NPC)或三氯苯羧酸鹽(TPC))、色氨?；⑷┗?、異氰酸基、乙酰砜基、酪氨酸基、半胱氨酸基、組氨酸基或伯氨基。
制備丙酸琥珀酰亞胺(SPA)和丁酸琥珀酰亞胺(SBA)酯活化的PEG的方法見美國(guó)專利5,672,662(Harris等)和WO 97/03106所述。
使PEG結(jié)合于IFN-α多肽的方法是該領(lǐng)域已知的，可采用任何已知的方法，參見例如Park等，Anticancer Res.，1373-76，1981；Zaplipsky和Lee，PolyethyleneGlycol Chemistry；Biotechnical and Biomedical Applications，J.M.Harris編；Plenum Press NY.第21章，1992；美國(guó)專利5,985,265；5,672,662(Harris等，)和WO 97/03106。
PEG化IFN-α及其制備方法見美國(guó)專利5,382,657；5,981,709；5,985,265和5,951,974中所述。PEG化IFN-α包括PEG與上述IFN-α分子之一的偶聯(lián)物，包括但不限于PEG與IFN-α-2a的偶聯(lián)物(Referon.Hoffman.Laroche.Nutley，N.J.)此PEG化的Roferon稱為Pegasys(Hoffman LaRoche)；與IFN-α-2b的偶聯(lián)物(Intron，Schering-plough，Madison，N.J)此PEG化Intron稱為PEG-Intro(Schering-Plough)；與IFN-α的偶聯(lián)物(Berofor α.Boehringer Ingelheim，Ingelheim，Germany)和與通過(guò)測(cè)定天然產(chǎn)生的IFN-α的共有序列所確定的共有序列干擾素CIFN的偶聯(lián)物(Infergen，Inter Mune，Inc，Brisbane Calif)此PEG化Infergen稱為PEG-Infergen。
許多實(shí)施方案中，此PEG是能與IFN-α多肽的伯氨基反應(yīng)的單甲氧PEG分子。用單甲氧PEG通過(guò)還原性烷化修飾多肽的方法是該領(lǐng)域已知的，可參見如Chamow等，Bioconj Chem，5133-140，1994。
在一非限制性實(shí)施例中，PEG通過(guò)SPA接頭基與IFN-α連接。PEG的SPA酯及其制備方法見美國(guó)專利5,672,662中所述。SPA連接鍵提供了與IFN-α多肽的游離氨基連接。
例如，PEG分子通過(guò)其丙基和IFN-α多肽表面暴露的賴氨酸殘基的ε氨基之間的酰胺鍵接頭而共價(jià)連接。這類鍵可通過(guò)例如PEG的α甲氧基，ω丙酸活化酯的縮合而形成(mPEGspa)。
如一非限制性實(shí)施例，優(yōu)選用于本文的一種單PEG化CIFN偶聯(lián)物具有約30kD的線性PEG分子，通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合于CIFN多肽，其中的共價(jià)鍵是PEG分子的丙基和CIFN多肽中暴露在表面的賴氨酸殘基的ε氨基之間的酰胺鍵，其中暴露在表面的賴氨酸殘基選自lys31、lys50、lys71、lys84、lys121、lys122、lys134、lys135和lys165，通過(guò)PEG的α甲氧基，ω丙酸活化酯的縮合而形成此酰胺鍵。
聚乙二醇適合與IFN-α多肽偶聯(lián)的聚乙二醇是室溫時(shí)水溶性的，具有通式R(O-CH2-CH2)nO-γ，其中R是氫或烷基或鏈烷醇基等保護(hù)基因，n是1-1000之間的整數(shù)。其中R是通常1-8個(gè)碳的保護(hù)基團(tuán)。
許多實(shí)施方案中，PEG至少具有一個(gè)羥基如末端羥基，可修飾此羥基以產(chǎn)生能與氨基如多肽的賴氨酸殘基的ε氨基，N端游離氨基或其它任何氨基如天冬酰胺、谷氨酰胺，精氨酸或組氨酸的氨基反應(yīng)的功能基團(tuán)。
其它實(shí)施方案中，衍生處理PEG，使其能與IFN-α多肽的游離羧基，如IFN-α多肽羧基端的游離羧基反應(yīng)。能與IFN-α羧基端游離羧基反應(yīng)的合適的PEG衍生物包括但不限于PEG的PEG氨和肼衍生物(如PEG-NH-NH2)。
其它實(shí)施方案中，衍生處理PEG，使其含有末端硫代羧酸基-COSH，它能選擇性與氨基反應(yīng)產(chǎn)生酰胺衍生物。由于硫羰酸的反應(yīng)特性，可實(shí)現(xiàn)對(duì)某些氨基的選擇性超過(guò)對(duì)其它氨基的選擇。例如-SH在適合的PH條件下顯示與N端氨基反應(yīng)中成為充分的遺留基團(tuán)能力，這樣質(zhì)子化了賴氨酸中的ε氨基并保留了非親核性。另一方面，在適合于的PH條件下反應(yīng)可選擇性使某些易接近的賴氨酸殘基反應(yīng)。
其它實(shí)施方案中，PEG含有反應(yīng)性酯，如PEG鏈末端處的N-羥基琥珀亞酸酯。這類含N-羥基琥珀酰亞酸酯的PEG分子能在特定PH，如中性6.5-7.5條件下，與選擇的氨基反應(yīng)。例如，可在中性PH條件下選擇性修飾N端氨基。然而，如果該試劑的反應(yīng)性極強(qiáng)，也可與賴氨酸的游離-NH2基反應(yīng)。
可將PEG直接或通過(guò)一接頭偶聯(lián)于IFN-α多肽。某些實(shí)施方案中，在IFN-α多肽上加一接頭，形成接頭修飾的IFN-α多肽。這類接頭提供了多種形式功能基因，如硫氫基或羧基以將PEG試劑與接頭修飾的IFN-α多肽相偶聯(lián)。
某些實(shí)施方案中，偶聯(lián)于IFN-α多肽的PEG是線性的。其它實(shí)施方案中，偶聯(lián)于IFN-α多肽的PEG是分枝的。分枝PEG衍生物見美國(guó)專利5,643,575中所述?！靶切蜳EG(star-PEG)”和多臂PEG(multi-armed PEG)見Shearwater Polymers有限公司的目錄“聚乙二醇衍生物1997-1998”中所述。該領(lǐng)域包括美國(guó)專利6,046,305中描述的星形PEG。
通常所用的PEG分子量范圍為約5kDa-100kDa。PEG術(shù)語(yǔ)“約”，指聚乙二醇化制劑中某些分子的分子量高于或略低于標(biāo)明的分子量，例如適合于與IFN-α交聯(lián)的PEG分子的分子量約2kDa-5kDa，約5kDa-10kDa，約10kDa-15kDa，約15kDa-20kDa，約20kDa-25kDa，約25kDa-30kDa，約30kDa-40kDa，約40kDa-50kDa，約50kDa-60kDa，約60kDa-70kDa，約70kDa-80kDa，約80kDa-90kDa，約90kDa-100kDa。
制備PEG-IFN-α偶聯(lián)物如上所述，PEG分子可直接或通過(guò)一接頭與IFN-α多肽N端或附近，內(nèi)部或C端或附近的氨基酸殘基連接，可在溶液中或固相中進(jìn)行此種偶聯(lián)。
N-末端連接鍵使PEG分子連接于IFN-α多肽N端或附近的氨基酸殘基的方法是該領(lǐng)域已知的，例如見美國(guó)專利5,985,265。
一些實(shí)施例中，采用了已知的選擇性獲得N端化學(xué)修飾的IFN-α的方法。例如，可采用還原性烷化修飾蛋白質(zhì)的方法，使具體蛋白質(zhì)中可用于衍生的不同類型伯氨基(賴氨酸的非N端)發(fā)生差異反應(yīng)性。在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下可實(shí)現(xiàn)該蛋白質(zhì)N端與含羧基聚合物的基本上選擇性衍生。此反應(yīng)在有利于賴氨酸殘基的ε氨基和蛋白質(zhì)N端殘基的α氨基之間存在pKa差異的PH條件下進(jìn)行。通過(guò)此選擇性衍生可控制PEG分子與IFN-α的結(jié)合點(diǎn)，與PEG聚合物的偶聯(lián)優(yōu)先發(fā)生在IFN-α的N端，而其它反應(yīng)基團(tuán)如賴氨酸側(cè)鏈氨基不發(fā)生明顯修飾。
C-末端連接鍵美國(guó)專利5,985,265描述的N端特異性偶聯(lián)方法提供了占優(yōu)勢(shì)的單PEG化產(chǎn)物。然而，此方法的目的是去除過(guò)量的試劑和少量的多種PEG化產(chǎn)物，去除N端受封閉的多肽。就治療而言，此法使制造成本明顯增加。例如，對(duì)特異性已明確的InfergenAlfacon-1 CIFN多肽氨基酸序列結(jié)構(gòu)的檢測(cè)，揭示其羧基端的回文約為5％，因而只有一條主要的C端序列。因此一些實(shí)施例中未采用N端PEG化的IFN-α，代替的是C端PEG化的IFN-α多肽。
因此預(yù)想獲得單PEG化Infergen產(chǎn)品的有效合成和治療方法如下可選擇性制備C端帶或不帶空間臂的PEG試劑。如一端為甲酯另一端具有氨基的修飾的聚乙二醇可用作起始材料。
可制備或獲得水溶性碳二亞胺作為縮合劑，通常在含適當(dāng)緩沖系統(tǒng)最優(yōu)PH值的水溶液中進(jìn)行，能有效形成酰胺鍵。用水溶性碳二亞胺作為縮合劑偶聯(lián)IFN-α(如InfergenAlfacon-1 CIFN或共有序列干擾素)，可將高分子量PEG共價(jià)加到此蛋白質(zhì)上提高其分子量。
試劑選擇取決于優(yōu)化研究的方法。適合試劑的非限制性實(shí)施例中，采用EDAC或1-乙基-(3-二甲氨丙基)碳二亞胺。EDAC的水溶性使其可直接加入反應(yīng)物中無(wú)須先溶于有機(jī)溶劑。過(guò)量試劑和形成的交聯(lián)反應(yīng)副產(chǎn)品異脲都是水溶性的，可通過(guò)透析或凝膠滲濾不難去除。制備濃縮的EADC水溶液有利于在反應(yīng)物中加入小量EDAC。鑒于該試劑的水不穩(wěn)定性，制備貯備液并立即使用。文獻(xiàn)中大多數(shù)合成方案提出最佳反應(yīng)液的PH在4.7-6.0之間，然而此縮合反應(yīng)在高達(dá)PH7.5時(shí)進(jìn)行，產(chǎn)量不會(huì)明顯損失?？捎盟鳛槿軇?。鑒于考慮采用Infergen，優(yōu)選溶液為預(yù)先滴定PH4.7-6.0之間的2-(N-嗎啉)乙烷磺酸緩沖液。然而由于產(chǎn)品也溶于同一緩沖液中，也可采用PH7-7.5的0.1M磷酸緩沖溶液。優(yōu)化PEG胺與IFN-α分子的比例，使C端羧基殘基被選擇性PEG化以產(chǎn)生單PEG化衍生物。
即使采用上述名稱或結(jié)構(gòu)的PEG胺，這類衍生物只是示范性的，其它基團(tuán)如肼基衍生物PEG-NH-NH2也可與IFN-α蛋白質(zhì)的羧基縮合。除水相外，此反應(yīng)也可在固相上進(jìn)行。選擇分子量300-40000范圍的聚乙二醇化合物。也可根據(jù)交聯(lián)效率、純化衍生物的體內(nèi)外生物性能，即血循環(huán)時(shí)間、抗病毒活性等來(lái)選擇不同的聚乙二醇。
此外，可將適當(dāng)?shù)目臻g臂加入該蛋白的C端。此臂可含有反應(yīng)基團(tuán)如SH、NH2或COOH，能與適當(dāng)?shù)腜EG交聯(lián)提供高分子IFN-α衍生物?？稍O(shè)想采用聯(lián)合的固/液相方法來(lái)制備C端PEG化干擾素。例如用Gly-Gly-Cys-NH2臂在固相上延伸IFN-α的C端，然后用分子量適當(dāng)?shù)幕罨€基吡啶PEG試劑，在溶液中單PEG化。由于C端交聯(lián)不依賴于N端封閉，此設(shè)想的方法和產(chǎn)品在成本上(不象N端PEG化方法要浪費(fèi)1/3蛋白質(zhì))有利，并對(duì)治療冠狀病毒感染的經(jīng)濟(jì)治療法有貢獻(xiàn)。
除IFN-α的C端-COOH基因外，在與PEG試劑反應(yīng)導(dǎo)致單PEG化或?qū)е露喾NPEG化的分子中，某位點(diǎn)的氨基酸殘基可能有更具反應(yīng)性的羧基。預(yù)想這些反應(yīng)最好是由于分子C端的空間自由度和碳二亞胺及支鏈分子PEG試劑產(chǎn)生的空間位阻，而降至最小。因此Infergen及其類似的天然或宿主系統(tǒng)中表達(dá)的蛋白質(zhì)的優(yōu)選PEG修飾模式，是其N端可能不同程序被封閉，以提高效率和保持較高的體內(nèi)生物活性。
獲得C端PEG化的另一方法如下；可采用能排斥與埋藏在IFN-α螺旋中或內(nèi)部的羧基反應(yīng)的空間位阻試劑，來(lái)選擇性PEG化C末端。例如，一種這樣的試劑是分子量40KD的支鏈PEG，此試劑可按以下方法合成用適當(dāng)試劑，如二環(huán)己基碳二亞胺或水溶性EDC，縮合OH3C-(CH2CH2O)n-CH2CH2NH2+谷氨酸(即HOCO-CH2CH2CH(NH2)-COOH)以得到支鏈PEG試劑OH3C-(CH2CH2O)n-CH2CH2NHCOCH(NH2)CH2OCH33-(CH2CH2O)n-CH2CH2NHCOCH2。

此試劑可過(guò)量使用，將氨基與IFN-α的游離可彎曲羧基偶聯(lián)形成肽鍵。
如需要可用已知方法使已PEG化的IFN-α與末PEG化的IFN-α相分離。這些方法包括但不限于離子交換層析、分子篩層析、或二者聯(lián)合。例如，當(dāng)PEG-IFN-α偶聯(lián)物是單PEG化IFN-α?xí)r，先用離子交換層析分離產(chǎn)物得到具有單PEG化物質(zhì)電荷特征的PEG-IFN-α(可能存在具有相同表觀電荷的其它多種PEG化物質(zhì))，然后用分子篩層析分離得到單PEG化IFN-α。
IFN-β術(shù)語(yǔ)干擾素-β(“IFN-β”)包括天然產(chǎn)生的，非天然產(chǎn)生的IFN-β多肽及保留了親代天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的IFN-β抗病毒活性的類似物。
可通過(guò)本發(fā)明持續(xù)輸送方法輸送各種IFN-β之任何一種。合適的β干擾素包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-β；IFN-β1a，如Avonex(Biogen Inc.)和Rebif(Serono.SA)；IFN-β1b(Betaseron，Berles)等。
IFN-β制劑可含有N-端封閉的制劑，其中N-端氨基酸被一?；缂柞；?、乙酰基、丙二?；弱；?。也適合采用共有序列IFN-β。
可用任何已知方法生產(chǎn)IFN-β多肽，可用標(biāo)準(zhǔn)方法合成編碼IFN-β的DNA序列。許多實(shí)施方案中，IFN-β多肽是制備的DNA序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染細(xì)菌宿主如大腸桿菌或真核宿主細(xì)胞(如酵母菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞如CHO細(xì)胞等)后表達(dá)的產(chǎn)物。這些實(shí)施例中，IFN-β是“重組IFN-β”，宿主細(xì)胞是細(xì)菌宿主細(xì)胞，IFN-β被修飾而含有N-端甲硫氨酸。
已知如本文所述IFN-β可含有一個(gè)或多個(gè)修飾的氨基酸如糖基化、化學(xué)修飾等。
IFN-τIFN-τ包括天然產(chǎn)生的、非天然產(chǎn)生的IFN-τ多肽、及保留了親代天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的IFN-τ的抗病毒活性的類似物。
合適的τ干擾素包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-τ；Tanferon (Pepgen Corp)等。
IFN-τ可含有GenBank登錄號(hào)P15696，P56828，P56832，P56829，56831，Q29429，Q28595，Q28594，S08072，Q08071，Q08070，Q08053，P56830，P28169，P28172和P28171中任何一項(xiàng)所示的氨基酸序列?？捎迷擃I(lǐng)域已知的各種方法改變?nèi)魏我阎腎FN-τ多肽的序列，以產(chǎn)生序列中的尋靶變化。變體多肽通常基本上類似于本文提供的序列，即至少有一個(gè)氨基酸不同，可能至少有二個(gè)但不超過(guò)10個(gè)氨基酸不同。序列變化可以是取代、插入或缺失。保守性氨基酸取代通常包括以下組內(nèi)的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(絲氨酸、蘇氨酸)；(賴氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改變一級(jí)氨基酸序列的感興趣修飾，包括多肽的化學(xué)衍生，如乙?；螋然粚?dǎo)入或去除糖基化位點(diǎn)的氨基酸序列變化；使蛋白質(zhì)易于PEG化的氨基酸序列變化等。還包括糖基化修飾，如合成和加工時(shí)改變多肽的糖基化模式，或在進(jìn)一步加工步驟如使多肽接觸能影響糖基化的酶(如哺乳動(dòng)物糖基化或去糖基化酶)中，改變多肽的糖基化模式。還包括含磷酸化氨基酸殘基如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸的序列。
IFN-τ制劑可含有N-封閉的制劑，其中N-端氨基酸被一?；缂柞；⒁阴；?、丙二?；弱；策m合采用共有序列IFN-τ。
可用任何已知方法生產(chǎn)IFN-τ多肽?？捎脴?biāo)準(zhǔn)方法合成編碼IFN-τ的DNA序列。許多實(shí)施方案中，IFN-τ多肽是制備的DNA序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染細(xì)菌宿主如大腸桿菌或真核宿主細(xì)胞(如酵母菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞如CHO細(xì)胞等)后表達(dá)的產(chǎn)物。這些實(shí)施例中，IFN-τ是“重組IFN-τ”，宿主細(xì)胞是細(xì)菌宿主細(xì)胞IFN-τ被修飾而含有N-端甲硫氨酸。
已知如本文所述IFN-τ可含有一個(gè)或多個(gè)修飾的氨基酸殘基如糖基化、化學(xué)修飾等。
IFN-ω干擾素ω(“IFN-ω”)包括天然產(chǎn)生的、非天然產(chǎn)生的IFN-ω多肽、及保留了親代天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的IFN-ω的抗病毒活性的類似物。任何已知的ω干擾素可通過(guò)本發(fā)明的持續(xù)輸送方法輸送。合適的IFN-ω包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-ω、重組的IFN-ω，如Biomed510(BioMedicines)等。
IFN-ω可含有GenBank登錄號(hào)NP_002168或AAA70091所示的氨基酸序列?？梢员绢I(lǐng)域域已知的各種方法改變?nèi)魏我阎狪FN-ω多肽的序列。變體多肽通常具有與上述序列基本上相似的序列，即至少有一個(gè)氨基酸不同，可能至少有二個(gè)但不超過(guò)10個(gè)氨基酸不同。序列變化可以是取代、插入或缺失。保守性氨基酸取代通常包括以下組內(nèi)的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(絲氨酸、蘇氨酸)；(賴氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改變一級(jí)氨基酸序列的感興趣修飾，包括多肽的化學(xué)衍生，如乙?；螋然粚?dǎo)入或去除糖基化位點(diǎn)的氨基酸序列變化；使蛋白質(zhì)易于PEG化的氨基酸序列變化等。還包括糖基化修飾，如合成和加工時(shí)改變多肽的糖基化模式，或在進(jìn)一步加工步驟如使多肽接觸能影響糖基化的酶(如哺乳動(dòng)物糖基化或去糖基化酶)中，改變多肽的糖基化模式。還包括含磷酸化氨基酸殘基如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸的序列。
IFN-ω制劑可含有N-封閉的制劑，其中N-端氨基酸被一酰基，如甲?；?、乙酰基、丙二?；弱；?，也適合采用共有序列IFN-ω?？捎萌魏我阎椒ㄉa(chǎn)IFN-ω多肽。
可用標(biāo)準(zhǔn)方法合成編碼IFN-ω的DNA序列。許多實(shí)施方案中，IFN-ω多肽是制備的DNA序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染細(xì)菌宿主如大腸桿菌或真核宿主細(xì)胞(如酵母菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞如CHO細(xì)胞等)后表達(dá)的產(chǎn)物。這些實(shí)施例中，IFN-ω是“重組IFN-ω”，宿主細(xì)胞是細(xì)菌宿主細(xì)胞IFN-ω被修飾而含有N-端甲硫氨酸。
已知如本文所述IFN-ω可含有一個(gè)或多個(gè)修飾的氨基酸殘基如糖基化、化學(xué)修飾等。
III型干擾素受體激動(dòng)劑上述方法之一中，干擾素受體激動(dòng)劑在一些實(shí)施方案中是III型干擾素受體激動(dòng)劑(如III型干擾素激動(dòng)劑)、包括IL-286多肽、IL-28a多肽、IL-29多肽、III型干擾素受體的特異性抗體、和任何其它III型干擾素受體激動(dòng)劑包括非肽激動(dòng)劑。
IL-28A、IL-28B和L-29(本文統(tǒng)稱為“III型干擾素”或“III型IFN”)見Sheppard等，Nature 463-68.2003所述。各多肽能結(jié)合由IL-10受體β鏈和IL-28受體α鏈組成的異二聚體受體。(Sheppard等，Nature 463-68.2003)。可分別在GenBank登錄號(hào)NP_742150、NP_742151和NP_151中找到IL-28A、IL-28B和IL-29的氨基酸序列。
可用該領(lǐng)域已知的各種方法改變III型IFN多肽的氨基酸序列。變體多肽通常具有與上述序列基本上相似的序列，即至少有一個(gè)氨基酸不同，可能至少有二個(gè)但不超過(guò)10個(gè)氨基酸不同。序列變化可以是取代、插入或缺失。保守性氨基酸取代通常包括以下組內(nèi)的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(絲氨酸、蘇氨酸)；(賴氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改變一級(jí)氨基酸序列的感興趣修飾，包括多肽的化學(xué)衍生，如乙?；螋然?；導(dǎo)入或去除糖基化位點(diǎn)的氨基酸序列變化；使蛋白質(zhì)易于PEG化的氨基酸序列變化等。還包括糖基化修飾，如合成和加工時(shí)改變多肽的糖基化模式，或在進(jìn)一步加工步驟如使多肽接觸能影響糖基化的酶(如哺乳動(dòng)物糖基化或去糖基化酶)中，改變多肽的糖基化模式。還包括含磷酸化氨基酸殘基如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸的序列。
本發(fā)明包括用常規(guī)化學(xué)技術(shù)修飾多肽，以改進(jìn)其對(duì)蛋白酶降解的抗性、優(yōu)化溶解性能或使它們更適合用作治療藥物。例如，可環(huán)化肽的骨架以提高其穩(wěn)定性(見Friedler等，J Boil Chem，27523783-9.2000)。可采用的類似物含有天然產(chǎn)生的L氨基酸以外的殘基，如D-氨基酸或非天然產(chǎn)生的合成氨基酸?？蒔EG化此蛋白以提高穩(wěn)定性，可將此多肽與白蛋白融合。
可用該領(lǐng)域已知的常規(guī)方法如重組方法，體外合成制備此多肽；或可從導(dǎo)入的細(xì)胞或天然產(chǎn)生此蛋白的細(xì)胞分離此多肽。具體序列和制備方式，可根據(jù)方便性、經(jīng)濟(jì)性、純度要求等確定，如需要可在合成或表達(dá)時(shí)在該多肽中導(dǎo)入各種基團(tuán)，使其能與其它分子或表面連接?？衫冒腚装彼嶂苽淞蛑媒M氨酸與金屬離子復(fù)合物連接，利用羧基形成酰胺或酯鍵，利用氨基形成酰胺鍵等。
II型干擾素受體激動(dòng)劑II型干擾素受體激動(dòng)劑包括天然或非天然產(chǎn)生的，能結(jié)合此受體和通過(guò)此受體引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的人II型干擾素受體的配體。II型干擾素受體激動(dòng)劑包括天然產(chǎn)生的干擾素、修飾的干擾素、合成的干擾素、PEG化干擾素、含有干擾素和異源蛋白的融合蛋白質(zhì)、改組干擾素、干擾素受體的特異性抗體、非肽化學(xué)激動(dòng)劑等。
II型干擾素受體激動(dòng)劑的具體例子是IFN-γ及其變體。雖然本發(fā)明舉例采用IFN-γ多肽，但不難明白任何II型干擾素受體激動(dòng)劑都可用于此方法。
干擾素γ編碼IFN-γ多肽的核酸序列可從公共數(shù)據(jù)庫(kù)如GenBank、發(fā)表的雜志中獲得。雖然治療人疾病感興趣的有各種哺乳動(dòng)物IFN-γ多肽，但通常采用人的此蛋白質(zhì)。人IFN-γ的編碼序列可在GenBank登錄號(hào)X13274，V00543和NM_000619中找到。相應(yīng)的基因組序列可在GenBank登錄號(hào)J00219，M37265和V00536中找到。參見例如Gray等，Nature 295501，1982(GenBank X 13274)和Rinderknecht等，J.B.C.2596790，1984。
IFN-γ1b(Actimmune，人干擾素)是140個(gè)氨基酸的單鏈多肽，在大腸桿菌中重組產(chǎn)生和無(wú)糖基化。Ninderknecht等，J.Biol.Chem，2596790-6797，1984。重組IFN-γ見美國(guó)專利6,497,871所述，也適合用于本方法。
本文方法中所用的IFN-γ可以是天然IFN-γ、重組IFN-γ或它們的衍生物，只要它們具有IFN-γ的活性，特別是人IFN-γ活性。人IFN-γ顯示具有干擾素特征性的抗病毒和抗增殖性能，以及許多其它免疫調(diào)節(jié)活性，為本領(lǐng)域所知曉。雖然根據(jù)以上提供的序列，但I(xiàn)FN-γ的生產(chǎn)和蛋白水解加工可能導(dǎo)致產(chǎn)生其變體。Gray等(同上)提供的未加工序列由166個(gè)氨基酸組成。雖然最初大腸桿菌產(chǎn)生的重組IFN-γ為146個(gè)氨基酸(從氨基酸20開始)，后來(lái)發(fā)現(xiàn)天然的人IFN-γ在殘基23被切割后產(chǎn)生一143個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，如存在末端甲硫氨酸，為144個(gè)氨基酸，其為在細(xì)菌中表達(dá)所必須。純化時(shí)，該成熟蛋白質(zhì)可在殘基162后的C端再被切割(參見Gray等，的序列)產(chǎn)生-139個(gè)氨基酸的肽，或如果原先的甲硫氨酸存在(細(xì)菌表達(dá)所必須)，為140個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。N-端甲硫氨酸是mRNA翻譯“起始”信號(hào)AUG所編碼的，在大腸桿菌表達(dá)時(shí)不被加工去除；而在其它微生物系統(tǒng)或真核表達(dá)系統(tǒng)中，此甲硫氨酸被去除。
為用于本方法，可采用任何天然的IFN-γ肽，其修飾物和變體、或一種或多種肽的組合。感興趣的IFN-γ肽包括其片段，可相對(duì)其全長(zhǎng)序列在羧基端作各種截短。這類片段仍顯示了人IFN-γ的特性，只要存在24位至約149位的氨基酸(未加工多肽殘基編號(hào))。氨基酸155以后的序列也可用外源序列替代而不損失活性。例如見美國(guó)專利5,690,925。天然IFN-γ分子包括氨基酸殘基24-150、24-151、24-152、24-153、24-155和24-157等各種延伸分子。本領(lǐng)域知道任何這種變體和其它變體，只要具有IFN-γ活性都可用于本方法。
可用該領(lǐng)域已知的各種方法改變IFN-γ多肽的氨基酸序列以產(chǎn)生序列的靶向變化。變體多肽通常具有與上述序列基本上相似的序列，即至少有一個(gè)氨基酸不同，可能至少有二個(gè)但不超過(guò)10個(gè)氨基酸不同。序列變化可以是取代、插入或缺失。保守性氨基酸取代通常包括以下組內(nèi)的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(絲氨酸、蘇氨酸)；(賴氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改變一級(jí)氨基酸序列的感興趣修飾，包括多肽的化學(xué)衍生，如乙?；螋然?；導(dǎo)入或去除糖基化位點(diǎn)的氨基酸序列變化；使蛋白質(zhì)易于PEG化的氨基酸序列變化等。一實(shí)施例中，本發(fā)明考慮采用具有一處或多處非天然產(chǎn)生的糖基化和/或PEG化位點(diǎn)的IFN-γ變體，對(duì)其進(jìn)行工程改造產(chǎn)生具有血清清除減慢的糖基化和/或PEG化多肽，國(guó)際專利出版物WO 01/36001中描述了這種IFN-γ多肽變體。還包括糖基化修飾，如合成和加工時(shí)改變多肽的糖基化模式，或在進(jìn)一步加工步驟如使多肽接觸能影響糖基化的酶(如哺乳動(dòng)物糖基化或去糖基化酶)中，改變多肽的糖基化模式。還包括含磷酸化氨基酸殘基如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸的序列。
本發(fā)明包括用常規(guī)化學(xué)技術(shù)修飾多肽，以改進(jìn)其對(duì)蛋白酶降解的抗性、優(yōu)化溶解性能或使它們更適合用作治療藥物。例如，可環(huán)化肽的骨架以提高其穩(wěn)定性(見Friedler等，J Boil Chem，27523783-23789)?？刹捎玫念愃莆锖刑烊划a(chǎn)生的L氨基酸以外的殘基，如D-氨基酸或非天然產(chǎn)生的合成氨基酸。可PEG化此蛋白以提高穩(wěn)定性，可將此多肽與白蛋白融合。
可用該領(lǐng)域已知的常規(guī)方法如重組方法，體外合成制備此多肽；或可從導(dǎo)入的細(xì)胞或天然產(chǎn)生此蛋白的細(xì)胞分離此多肽。具體序列和制備方式，可根據(jù)方便性、經(jīng)濟(jì)性、純度要求等確定，如需要可在合成或表達(dá)時(shí)在該多肽中導(dǎo)入各種基團(tuán)，使其能與其它分子或表面連接?？衫冒腚装彼嶂苽淞蛑媒M氨酸與金屬離子復(fù)合物連接，利用羧基形成酰胺或酯鍵，利用氨基形成酰胺鍵等。
此多肽也可按常規(guī)重組合成方法分離和純化。可制備表達(dá)宿主的裂解液，用HPLC、排阻層折、凝膠電泳親和層析或其它純化技術(shù)純化裂解液。大多數(shù)情況，所用的組合物含有至少20％重量，更常含至少約75％重量，優(yōu)選含至少約95％重量的所需產(chǎn)物。對(duì)于治療目的通常含至少99.5％重量的干擾素。污染物的多少涉及產(chǎn)品制備和純化的方法。通常所述百分比是根據(jù)總蛋白質(zhì)量計(jì)算的。
劑量、配方和給藥途徑I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑、II型干擾素受體激動(dòng)劑、或II或III型干擾素受體激動(dòng)劑加II型干擾素受體激動(dòng)劑可與藥學(xué)上可接受的賦形劑一起配制給予病人。各種藥學(xué)上可接受的賦形劑是本領(lǐng)域已知的，無(wú)須在本文中詳述。藥學(xué)上可接受的賦形劑可參見各種出版物，例如包括Gennaro(2000)“RemingtonTheScience and Practice of Pharmacy”第20版，Lippincott Williams和Wilkins；Pharmacentical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(1999).H.C.Ansel等編，第7版Lippineott Williams & Wilkins；和Handbook of PharmacenticalExcipients(2000).A.H.Kibbe等，編第3版Amer Pharmacentical Assoc。
藥學(xué)上可接受的賦形劑如運(yùn)載體、輔佐劑、載體或稀釋劑公眾不難獲得。此外藥學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)，如PH調(diào)節(jié)和緩沖劑、強(qiáng)化調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑等公眾也不難獲得。
本文中，可采用能產(chǎn)生所需治療效果的任何方便方法給予宿主此活性藥物，可將這些藥物加入到治療用的各種配方中。更具體說(shuō)，本發(fā)明的制劑可與適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體或稀釋劑組合配制成藥物組合物，可配制成固體、半固體、液體或氣體形式的制品，如藥片、膠囊、藥粉、顆粒、藥膏、溶液、檢劑、注射劑、吸入劑和氣溶膠。
可以各種途徑實(shí)現(xiàn)該制劑的給藥，包括口服、口頰部、直腸、非腸胃道、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、皮下，肌肉內(nèi)、透皮、鼻內(nèi)、肺內(nèi)、鞘內(nèi)等給藥。一些實(shí)施例中，可采用兩種不同途徑給藥。一些實(shí)施例中，皮下給予IFN-α；其它實(shí)施方案中，皮下給予IFN-γ。其它實(shí)施方案中，皮下給予IFN-γ和IFN-α二種。
可采用標(biāo)準(zhǔn)方法和裝置；如針頭和注射器、皮下注射罐輸送系統(tǒng)等進(jìn)行I型、III型或II型干擾素受體激動(dòng)劑的皮下給藥。參見美國(guó)專利3,547,119；4,755,173；4,531,937；4,311,137和6,017,328。將干擾素受體激動(dòng)劑通過(guò)貯罐給予病人的皮下注射罐和裝置組合，本文稱為“皮下注射罐輸送系統(tǒng)”。一些實(shí)施例中，可通過(guò)針頭和注射器輸送藥物，然后用持續(xù)輸送系統(tǒng)組合進(jìn)行皮下給藥。
一些實(shí)施例中，通過(guò)持續(xù)輸送系統(tǒng)輸送I型或III型或II型干擾素受體激動(dòng)劑。本文中術(shù)語(yǔ)“持續(xù)輸送系統(tǒng)”可與“可控輸送系統(tǒng)”互換使用。包括持續(xù)(可控的)輸送裝置(如泵)與導(dǎo)管注射裝置和該領(lǐng)域已知的各種各樣裝置的組合。
機(jī)械泵或電子機(jī)械灌注泵也可能適合用于本發(fā)明。這類裝置的例子包括例如美國(guó)專利4,692,147；4,360,019；4,487,603；4,725,852；5,820,589；5,643,207；6,198,966等中所述的裝置。總之，可用各種可再填裝泵系統(tǒng)進(jìn)行本發(fā)明的藥物輸送方法。泵可按時(shí)間提供均勻一致的可控性藥物釋放。通常，此制劑(如II型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，如IFN-α或II型干擾素受體激動(dòng)劑如IFN-γ)以液體劑型裝在藥物不能滲透的貯罐中持續(xù)輸送給個(gè)體。
一實(shí)施例中，此藥物輸送系統(tǒng)至少是一種可部分植入的裝置，可用該領(lǐng)域熟知的方法和設(shè)備將此可植入裝置植入在適合植入的部位。植入部位是患者體內(nèi)導(dǎo)入和安置藥物輸送裝置的部位?？芍踩氩课话ǖ灰欢ㄏ抻谡嫫は拢は?、肌肉內(nèi)或患者體內(nèi)其它適合的部位。通常優(yōu)選皮下植入部位，因?yàn)橹踩牒腿〕鲈撍幬镙斔脱b置很方便。
適合用于本發(fā)明的藥物釋放裝置可依據(jù)各種操作模式之任何一種。例如，此藥物釋放裝置可依據(jù)一種擴(kuò)散系統(tǒng)、傳送系統(tǒng)或易腐蝕系統(tǒng)(如基于腐蝕的系統(tǒng))。例如，此藥物釋放裝置可以是電子化學(xué)泵、滲透泵、電子滲透泵、蒸氣壓力泵或滲透崩裂基質(zhì)。如當(dāng)將藥物加入一聚合物中，隨著充滿藥物的聚合物材料(如生物可降解性充滿藥物的多聚體材料)降解的同時(shí)，此聚合物釋放出藥物制劑。其它實(shí)施方案中，此藥物釋放裝置依據(jù)電子擴(kuò)散系統(tǒng)，一種電解泵、發(fā)泡泵、壓電泵、水解系統(tǒng)等。
以機(jī)械或電子機(jī)械灌注泵為基礎(chǔ)的藥物釋放裝置也適合用于本發(fā)明。此裝置的例子包括例如美國(guó)專利4,692,147；4,360,0196；4,487,603；4,725,852等中所述的裝置?？傊刹捎酶鞣N可再填充的、非互換泵系統(tǒng)進(jìn)行本發(fā)明的藥物輸送方法。通常優(yōu)選泵和其它傳遞系統(tǒng)，因?yàn)樗鼈兛砂磿r(shí)間提供均勻一致的可控性釋放。特別優(yōu)選滲透泵，因?yàn)樗鼈兟?lián)合了更一致的可控釋放和較小體積二種優(yōu)點(diǎn)(例如見PCT出版物WO97/27840和美國(guó)專利5,985,305和5,728,396)。適合用于本發(fā)明的示范性滲透壓驅(qū)動(dòng)裝置包括但不一定限于美國(guó)專利3,760,984；3,845,770；3,916,899；3,923,426；3,987,790；3,995,631；4,016,880；4,036,288；4,111,202；4,222,203；4,203,440；4,203,442；4,210,139；4,327,725；4,627,850；4,865,845；5,507,318；5,059,423；5,112,614；5,137,727；5,234,692；5,234,693；5,728,396等中所述裝置。
一些實(shí)施例中，此藥物輸送裝置是一種可植入裝置?？捎迷擃I(lǐng)域熟知的方法和設(shè)備將此可植入裝置植入在適合植入的部位。植入部位是患者體內(nèi)導(dǎo)入和安置藥物輸送裝置的部位?？芍踩氩课话ǖ灰欢ㄏ抻谡嫫は拢は?、肌肉內(nèi)或患者體內(nèi)其它適合的部位。通常優(yōu)選皮下植入部位，因?yàn)橹踩牒腿〕鲈撍幬镙斔脱b置很方便。
一些實(shí)施例中，用可植入藥物輸送系統(tǒng)，如可編程的給予干擾素受體激動(dòng)劑的系統(tǒng)，輸送I型或II型干擾素受體激動(dòng)劑或II型干擾素受體激動(dòng)劑。示范性的可編程系統(tǒng)包括可植入入灌注泵。用于與此類泵連接的示范性可植入泵或裝置見例如美國(guó)專利4,350,155；5,443,459；5,814,019；5,976,109；6,017,328；6,171,276；6,241,704；6,464,687；6,475,180和6,512,954中所述。其它可能適用于本發(fā)明的示范性裝置是同步灌注泵(Medtronic)。
藥物劑量形式中，此制劑可以其藥學(xué)上可接受的鹽形式給藥，它們可單獨(dú)使用或與其它藥物學(xué)活性化合物組合使用。以下方法和賦形劑只是示范性而非任何方式限于這些方法。
對(duì)于口服制品，此制劑可單獨(dú)服用或與適當(dāng)?shù)奶砑觿┲瞥伤幤⑺幏?、顆粒或膠囊組合服用。例如常規(guī)添加劑有乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉、土豆淀粉；粘合劑有結(jié)晶纖維素、纖維素衍生物、阿拉伯樹膠、玉米淀粉或明膠；崩解劑如玉米淀粉、土豆淀粉或羧甲基纖維素鈉；潤(rùn)滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂。如需要可加入稀釋劑、緩沖劑、防腐劑和調(diào)味劑。
此制劑可配制成注射用制品，通過(guò)溶于懸浮于或乳化于水或非水溶液中，如植物油或其它類似的油，合成的脂肪酸甘油脂，高級(jí)脂肪酸或丙乙醇脂中。如需要可加入常規(guī)的添加劑，如助溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。
另外，此制劑通過(guò)與各種堿如乳化堿或水溶性堿混合可制成栓劑，可通過(guò)栓劑直腸給予本發(fā)明的化合物。栓劑可含有運(yùn)載體如可可脂、聚乙二醇，它們?cè)隗w溫時(shí)融化，在室溫中仍為固體。
可提供口服或直腸給藥的單位劑型如糖漿劑、酏劑和懸液。例如，每劑量單位為一茶匙，一大湯匙，片劑或栓劑，含有預(yù)先定量的此組合物和一種或多種抑制劑。與此相似，注射或靜脈給藥的單位劑型在組合物中含有抑制劑，為無(wú)菌水、生理鹽水或其它藥學(xué)上可接受載體的溶液。
本文中術(shù)語(yǔ)“單位劑型”，指適合人與動(dòng)物患者一次劑量的物理上分開的單位，各單位含有經(jīng)計(jì)算預(yù)先定量的本發(fā)明化合物。當(dāng)與藥學(xué)上可接受的稀釋液、載體或運(yùn)載體合用時(shí)，此含量能充分產(chǎn)生所需的效應(yīng)。本發(fā)明的新的單位劑型的確定，取決于所用的具體化合物和要達(dá)到的效果及各化合物在宿主中的相關(guān)藥物的動(dòng)力學(xué)。
一些實(shí)施例中，給予至少一個(gè)劑量的II型干擾素受體激動(dòng)劑，同時(shí)，給予至少一個(gè)劑量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。本文所用術(shù)語(yǔ)“同時(shí)”，表示II型干擾素受體激動(dòng)劑和I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑分別給予，和相互間隔約5-15秒、約15-30秒、約30-60秒、約1-5分鐘、約5-15分鐘、約15-30分鐘、約30-60分鐘、約1-2小時(shí)、約2-6小時(shí)、約6-12小時(shí)、約12-24小時(shí)、約24-48小時(shí)內(nèi)給予。
一些實(shí)施例中，在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療整個(gè)期間，給予II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，給予II型干擾素受體激動(dòng)劑的時(shí)間與I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療相重疊。例如，II型干擾素受體激動(dòng)劑治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療開始前進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療結(jié)束前結(jié)束；II型干擾素受體激動(dòng)劑治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療開始后進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療結(jié)束后結(jié)束；II型干擾素受體激動(dòng)劑治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑開始后進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑結(jié)束前結(jié)束；或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療可在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療開始前進(jìn)行，并在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療結(jié)束后結(jié)束。
與本文所述每一種方法有關(guān)，本發(fā)明提供的實(shí)施例中，以可控藥物輸送裝置給予病人I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。一些實(shí)施例中，通過(guò)可控藥物輸送裝置基本上持續(xù)地或持續(xù)地向病人輸送I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。任選地，采用可植入性灌注泵向病人基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下灌注輸送I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。
其它實(shí)施方案中，給予病人I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑，以達(dá)到和維持I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑的理想每日平均血清濃度，使其在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療期間，處于基本上穩(wěn)定的狀態(tài)。任選地，采用可植入性灌注泵向病人皮下灌注輸送I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。以達(dá)到和維持I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑的理想每日平均血清濃度，使其在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療期間，處于基本上穩(wěn)定的狀態(tài)。
II型干擾素受體激動(dòng)劑可每日一次、每日二次、隔天一次、一周二次、一周三次或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給藥。II型干擾素受體激動(dòng)劑的有效劑量范圍是約1-1000微克。
一些實(shí)施例中，II型干擾素受體激動(dòng)劑是IFN-γ。其有效量范圍約0.5-500μg/m2，通常為1.5-200μg/m2，取決于病人的塊頭大??；其活性為每50微克蛋白質(zhì)106國(guó)際單位(U)?？擅咳找淮巍⒏籼煲淮?、一周三次或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予IFN-γ。
感興趣的特別實(shí)施例中，給予病人的IFN-γ單位劑型為約25-500μg，約50-400μg，約100-300μg，在具體感興趣實(shí)施例中，此劑量約為200μg IFN-γ。許多感興趣實(shí)施例中，給予IFN-γ1b。
當(dāng)每劑的劑量為200μg IFN-γ時(shí)，每單位體重的IFN-γ給藥量(估計(jì)體重為約45-135kg)范圍約4.4-1.48μg/kg體重。
患者的體表面積范圍通常是約1.33-2.50m2。因此，許多實(shí)施方案中，IFN-γ的劑量范圍是約150-20μg/m2。例如IFN-γ的劑量范圍約20-30μg/m2、30-40μg/m2、40-50μg/m2、50-60μg/m2、60-70μg/m2、70-80μg/m2、80-90μg/m2、90-100μg/m2、100-110μg/m2、110-120μg/m2、120-130μg/m2、130-140μg/m2、140-150μg/m2。一些實(shí)施例中，此劑量范圍約50-100μg/m2。其它實(shí)施方案中，此劑量范圍約25-50μg/m2。
每日二次、每日一次、隔天一次、一周一次、一周二次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。
一些實(shí)施例中，I型干擾素受體激動(dòng)劑是IFN-α，其有效劑量范圍是約3-27μg、約3-10MU、約90-180μg或約18-90μg。
Infergen共有序列IFN-γ的有效劑量，包括每劑藥物約3、6、9、12、15、18、21、24、27或約30μg。IFN-α2a和IFN-α2b的有效劑量范圍每劑3百萬(wàn)單位(MU)到10MU。PEGASYSPEG化IFN-α2α的有效劑量含有每劑約90-270μg或180μg的量。PEG-1NTRONPEG化IFN-α2b的有效劑量每劑約0.5-3.0μg/kg體重的藥量。PEG化共有序列干擾素(PEG-CIFN)的有效劑量含有每劑約18-90μg、或約27-60μg、或約45μg的CIFN氨基酸量。MonoPEG(30KD、線性)化CIFN的有效劑量含有每劑約45-270μg、或約60-180μg、或約90-120μg的藥量?？擅咳找淮巍⒏籼煲淮?、一周一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予IFN-γ。
一些實(shí)施例中，以第一劑量方案，然后以第二劑量方案給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑的第一劑量方案(也稱為“誘導(dǎo)方案”)通常涉及給予較高劑量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。例如，Infergen共有序列IFN-γ(CIFN)，其第一劑量方案包括給予約9、15、18或約27μg的CIFN。此第一劑量方案可包括單劑或至少二劑或更多劑。I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑的第一劑量方案可每日一次、隔天一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑的第一劑量方案一段時(shí)間，此時(shí)間至少約4周、至少約8周、或至少約12周。
I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑的第二劑量方案(“維持劑量”)通常涉及給予較低劑量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。例如。CIFN，其第二劑量方案包括給予3μg、給予9μg、給予至少約18μg劑量的CIFN，此第二劑量可包括單劑或至少二劑或更多劑。
I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑的第二劑量方案可每日一次、隔天一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實(shí)施例中，給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑的“誘導(dǎo)/維持”劑量方案時(shí)，包括給予“初始”劑量的II型干擾素受體激動(dòng)劑(如IFN-γ)。這些實(shí)施例中，給予IFN-γ的時(shí)間在開始用I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑前約1-14天、約2-10天或約3-7天給予。此段時(shí)間稱為“初始”期。這些實(shí)施例中的一些，在用I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療的整個(gè)期間，持續(xù)給予II型干擾素受體激動(dòng)劑治療。其它實(shí)施方案中，在用I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療結(jié)束前停止II型干擾素受體激動(dòng)劑治療。這些實(shí)施例中，用II型干擾素受體激動(dòng)劑治療的總時(shí)間(包括“初始“期)約2-30天、約4-25天、約8-20天、約10-18天、約12-16天。其它實(shí)施方案中，一旦開始I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療即停止II型干擾素受體激動(dòng)劑治療。
其它實(shí)施方案中，以單劑方案給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。例如CIFN，其劑量范圍一般約3-15μg、或約9-15μg。通常每日一次、隔天一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予一劑I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑。給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑的時(shí)間，例如可以至少約24-48周或更長(zhǎng)。
一些實(shí)施例中，給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑的單劑方案包括給予“初始”劑量的II型干擾素受體激動(dòng)劑(如IFN-γ)。這些實(shí)施例中，在開始用I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療前給予IFN-γ約1-14天、約2-10天、約3-7天，此段時(shí)間稱為“初始”期。這些實(shí)施例中的某些中，在用I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療的整個(gè)期間持續(xù)給予II型干擾素受體激動(dòng)劑治療。其它實(shí)施方案中，在用I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療的總時(shí)間(包括“初始”期)約2-30天、約4-25天、約8-20天、約10-18天、約12-16天。其它實(shí)施方案中，一旦開始I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑治療即停止II型干擾素受體激動(dòng)劑治療。
本領(lǐng)域技術(shù)人員不難理解，此劑量水平可以改變，視具體化合物、患者癥狀的嚴(yán)重程序和對(duì)副作用的易感性而變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過(guò)各種方法不難確定某給定化合物的優(yōu)選劑量。
本領(lǐng)域技術(shù)人員不難理解，此劑量水平可以改變，視具體化合物、患者癥狀的嚴(yán)重程序和對(duì)副作用的易感性而變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過(guò)各種方法不難確定某給定化合物的優(yōu)選劑量。優(yōu)選方法是測(cè)定某給定化合物的生理性潛能。
一些實(shí)施例中，在同一制劑中同時(shí)給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，分別例如在分開的制劑中給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。這些實(shí)施例中的某些，分別或同時(shí)給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，II型干擾素受體激動(dòng)劑和I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑分別給予，和相互間隔約5-15秒、約15-30秒、約30-60秒、約1-5分鐘、約5-15分鐘、約15-30分鐘、約30-60分鐘、約1-2小時(shí)、約2-6小時(shí)、約6-12小時(shí)、約12-24小時(shí)、約24-48小時(shí)內(nèi)給予。
可給予多劑I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑。例如，I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑可每月一次、每月二次、每月三次、每周一次、每周二次、每周三次、每周四次、每周五次、每周6次，或每天、一天至一周、二周至四周、一月至二月、二月至四月、四月至6月、6至8月、8月至1年、1年至2年、2年至4年或更多給藥。
某些實(shí)施方案中，給予IFN-α和IFN-γ聯(lián)合治療。這些實(shí)施例中某些，將IFN-α和IFN-γ共同配制在一液體制劑中，其含有藥物輸送裝置所用的一貯存器。因此，本發(fā)明提供的一種藥物制劑含有足量的一劑IFN-α和一劑IFN-γ?？捎帽疚乃鋈我环椒▽FN-α和IFN-γ共同給予治療病人。某些方面，本發(fā)明提供的藥物貯存器或其它容器，它們裝有共同配制在液體中的IFN-α和IFN-γ，該制劑中存在的IFN-α和IFN-γ量適合于每次一劑。此劑量如本文所述?？梢匀魏涡问教峁┵A存器，包括但不限于藥盒、針筒、持續(xù)輸送裝置的貯存器等。本發(fā)明還提供貯存器中含有預(yù)先裝有一劑IFN-α和一劑IFN-γ的液體制劑的藥物輸送裝置。示范性非限制藥物輸送裝置包括注射裝置如筆式注射器、針頭/針筒裝置、持續(xù)輸送裝置等。劑量包括本文所述用于該藥物制劑、貯存器或藥物輸送裝置中的協(xié)同性有效量。
其它實(shí)施方案中，給予IFN-α和IFN-γ聯(lián)合治療，IFN-α和IFN-γ是裝在同一藥物輸送裝置中不同貯存器的分開的藥物制劑。本發(fā)明還提供預(yù)先裝載有分開的貯存器的藥物輸送裝置，一貯存器裝有含一個(gè)劑量的IFN-α的液體制劑，另一貯存器裝有含一個(gè)劑量的IFN-γ的液體制劑。在該藥物制劑、貯存器、或藥物輸送裝置中可采用任何劑量，包括本文所述的協(xié)同有效量。
本文所述治療方法的一些實(shí)施例中，本方法給予病人有效量的I型干擾素是IFN-α，本方法在IFN-α治療期間還同時(shí)給予病人有效量的IFN-γ。一實(shí)施例中，給予病人IFN-α藥液注射。另一實(shí)施例中，通過(guò)藥物輸送裝置給予IFN-α和IFN-γ。任選地，用這種裝置向病人基本上連續(xù)地或連續(xù)地給藥輸送IFN-α，并通過(guò)tiw、biw、qod、或qd作藥液主處心積向病人輸送IFN-γ。任選地，用此裝置，以相同給藥方式，如基本上連續(xù)地或持續(xù)地向病人輸送IFN-α和IFN-γ。任選地，IFN-α和IFN-γ含在此藥物輸送裝置的不同貯存器中。任選地，將IFN-α和IFN-γ共同配制在一液體制劑中，裝在該藥物輸送裝置的一貯存器中。
其中，該藥物是多肽、多核苷酸(如編碼I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑、或II型干擾素受體激動(dòng)劑的多核苷酸)，可通過(guò)許多方法，包括病毒感染、顯微注射、或載體融合將其導(dǎo)入組織或宿主細(xì)胞。也可用噴氣注射進(jìn)行肌肉內(nèi)給藥，見Furth等，Anal.Biochem.205365-368.1992.。可將DNA包裹金微粒并用文獻(xiàn)中所述的顆粒轟擊裝置或“基因槍”肌肉內(nèi)輸送(見例如Tang等，Nature.356152-154.1992)，其中，包有治療性DNA的金微粒轟入皮膚細(xì)胞。
其它治療藥物上述干擾素治療可與其它抗病毒藥物聯(lián)合給藥，其它抗病毒藥物如可有效治療致病性冠狀病毒感染的特定抗病毒藥。適合聯(lián)合治療的其它抗病毒藥包括但不限于核苷酸和核苷酸類似物。其非限制性例子包括AZT(疊氮胸苷)、DDI(2‘3’一雙脫氧肌苷)、DDC(2‘3’一雙脫氧胞苷)、D4T(雙脫氧胸苷)、combivir、abacavir、阿德福韋、dipoxil、西多福韋、病毒唑及類似物等。
一些實(shí)施例中，此方法還包括給予病毒唑，即1-D-核糖呋喃糖苷-1H-1.2.4-三唑-3-酰胺，可從ICM藥物(Costa，Mesa Calif)公司購(gòu)得。見Merck索引，化合物NO.8199.11版中所述。其制造和配方見美國(guó)專利4,211,711中所述。本發(fā)明還考慮采用病毒唑的類似物(見美國(guó)專利6,277,830)。以膠囊或片劑形式，或以與干擾素受體激動(dòng)劑相同或不同的劑型和相同或不同的途徑口服給予病毒唑。當(dāng)然，此三種藥物的其它給藥方式如果可行，如鼻噴霧、透皮靜脈內(nèi)、栓劑給藥、緩釋劑型等也可考慮，只要能輸送適當(dāng)劑量而不破壞活性成分。
病毒唑通常給藥量范圍是每kg體重每日約30-60mg、約60-125mg、約125-200mg、約200-300mg、約300-400mg、約400-1200mg、約600-1000mg、約700-900mg、或每日約10mg/kg。
一些實(shí)施例中，在干擾素治療期間給予其它抗病毒藥物。其它實(shí)施方案中，給予其它抗病毒藥物的時(shí)間與干擾素治療相重疊，如其它抗病毒藥物治療可在干擾素治療開始前開始并在干擾素治療結(jié)束前結(jié)束；其它抗病毒藥物治療可在干擾素治療開始后開始并在干擾素治療結(jié)束后結(jié)束；其它抗病毒藥物治療可在干擾素治療結(jié)束后開始并在干擾素治療結(jié)束前結(jié)束；或其它抗病毒藥物治療可在干擾素治療開始前開始并在干擾素治療結(jié)束后結(jié)束。
治療方法1.冠狀病毒感染的治療本發(fā)明提供治療冠狀病毒感染的方法，所述方法通常包括給予需要此治療的個(gè)體治療有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑，給予治療有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑，或給予治療有效量的同時(shí)給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II干擾素受體激動(dòng)劑。
本發(fā)明方法治療的個(gè)體包括臨床診斷為冠狀病毒感染個(gè)體，以及已出現(xiàn)臨床感染的一種或多種體癥和癥狀，但尚未診斷為冠狀病毒感染的個(gè)體。本發(fā)明方法治療的個(gè)體還包括臨床末診斷為冠狀病毒感染和末出現(xiàn)冠狀病毒感染癥狀，但曾密切接觸過(guò)冠狀病毒感染者或預(yù)計(jì)會(huì)接觸冠狀病毒感染者或計(jì)劃到冠狀病毒感染高發(fā)地區(qū)旅游或曾到冠狀病毒感染高發(fā)區(qū)旅游的個(gè)體?！爸委煛卑A(yù)防性治療無(wú)癥狀個(gè)體和未感染個(gè)體?！爸委煛边€包括治療感染的個(gè)體。
在上述個(gè)體中實(shí)行冠狀病毒感染的干擾素治療方法，給予這些個(gè)體治療有效量的II型干擾素受體激動(dòng)劑，或給予治療有效量的同時(shí)給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II干擾素受體激動(dòng)劑。一些實(shí)施例中，在同一制劑中給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II干擾素受體激動(dòng)劑。其它實(shí)施方案中，在分開的制劑中給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II干擾素受體激動(dòng)劑。當(dāng)在分開的制劑中化驗(yàn)時(shí)，I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II干擾素受體激動(dòng)劑可基本上同時(shí)給予，或可彼此在約2 4小時(shí)內(nèi)給予。許多實(shí)施方案中，可同時(shí)多劑給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II干擾素受體激動(dòng)劑。
II型干擾素受體激動(dòng)劑可每天、一天二次、隔天一次、一周二次、一周三次、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。II型干擾素受體激動(dòng)劑的有效劑量范圍約1-1000μg。II型干擾素受體激動(dòng)劑可每天、隔天一次、一周二次、一周三次、隔周、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實(shí)施例中，II型干擾素受體激動(dòng)劑是IFN-γ。IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-30μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑可每天、一天二次、隔天一次、一周二次、一周三次、隔周、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實(shí)施例中，I型干擾素受體激動(dòng)劑是IFN-α。IFN-α的有效劑量范圍約1-30μg、約3-27μg、約1MU-20MU、約3MU-10MU、約90-1800μg、約18-90μg。
Infergen共有序列IFN-α的有效劑量每劑含有約3、6、9、12、15、18、21、24、27、或30μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3百萬(wàn)單位(MU)-10百萬(wàn)單位(MU)的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-270μg或約180μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-3.0μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有序列干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。有效劑量的單一PEG(30kD，線性)化CIFN可含有每劑約45-270μg或約60-180μg或約90-120μg的藥量。
許多實(shí)施方案中，給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和I型和/或II干擾素受體激動(dòng)劑的時(shí)間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長(zhǎng)時(shí)間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月給予。一些實(shí)施例本發(fā)明提供的上述任一方法中，在所需的治療期內(nèi)，給病人qd、tiw、biw、qw、qow、每月三次、或每月皮下注射，或皮下每天基本上持續(xù)地或持續(xù)輸送給予病人所需劑量的IFN-α藥液。其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的上述方法之一中，在所需的治療期內(nèi)，qw、qow、每月三次或每月皮下給予病人輸送所需劑量的PEG化IFN-α(PEG-IFN-α)。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑治療病人的冠狀病毒感染。一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α和IFN-γ治療病人的冠狀病毒感染。一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的共有序列IFN-α和IFN-γ治療病人的冠狀病毒感染。
一般，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效量的共有序列干擾素(CIFN)和IFN-γ，以劑量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均為非PEG化和非糖基化的。
一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療病人的冠狀病毒感染，包括皮下給予病人每劑含有約有1-30μg劑量的INFERGEN藥物，每日一次(qd)、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約200-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療病人的冠狀病毒感染，包括皮下給予病人每劑含有約有1-9μg劑量的INFERGEN藥物，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療病人的冠狀病毒感染，包括皮下給予病人每劑含有約有1μg劑量的INFERGEN藥物，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-50μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療病人的冠狀病毒感染，包括皮下給予病人每劑含有約有9μg劑量的INFERGEN藥物，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約90-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療病人的冠狀病毒感染，包括皮下給予病人每劑含有約30μg劑量的INFERGEN藥物，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約200-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有序列IFN-α和IFN-γ治療病人的冠狀病毒感染，包括皮下給予病人每劑含有約4-60μgCIFN氨基酸量的PEG-CIF NPEG化共有序列IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有序列IFN-α和IFN-γ治療病人的冠狀病毒感染，包括皮下給予病人每劑含有約18-24μgCIFN氨基酸量的PEG-CIFN PEG化共有序列IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
通常，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效劑量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的劑量比為1百萬(wàn)單位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μgIFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療冠狀病毒感染的病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予病人每劑含IFN-α2a或2b或2c約1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約30-600μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療冠狀病毒感染的病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予病人每劑含IFN-α2a或2b或2c約3MU的IFN-α2a；聯(lián)用的每周IFN-γ劑量含每劑約100μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予病人每劑含IFN-α2a或2b或2c約10MU的IFN-α2a；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療冠狀病毒感染的病人，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予病人每劑含約90-360μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療冠狀病毒感染的病人，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予病人每劑含約180μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療冠狀病毒感染的病人，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予病人每劑含約。0.75-3.0μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療冠狀病毒感染的病人，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予病人每劑含約1.5μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
本發(fā)明還提供了治療冠狀病毒感染的方法，其中，治療采用在任何I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑中加入其它抗病毒劑以及IFN-γ單獨(dú)治療或上述療法的聯(lián)合。
2.SARS的治療本發(fā)明通過(guò)給予需要治療的個(gè)體治療有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑治療SARS的方法。待采用本發(fā)明方法治療的個(gè)體包括臨床診斷為SARS的個(gè)體，以及出現(xiàn)一種或多種SARS癥狀和體癥但尚未診斷為SARS的個(gè)體。待用本發(fā)明方法治療的個(gè)體還包括預(yù)計(jì)會(huì)接觸診斷為SARS患者(如保健職業(yè)者；到SARS高發(fā)區(qū)旅游者)的個(gè)體；懷疑曾接觸過(guò)診斷為SARS患者的個(gè)體；已知接觸過(guò)SARS患者的個(gè)體。“接觸”包括密切接觸從而將病原因子從感染者傳播給接觸者。
在實(shí)施上述SARS單一治療的方法中，給予需要此治療的個(gè)體I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑或II型干擾素受體激動(dòng)劑。
II型干擾素受體激動(dòng)劑可每天一次、每天二次、隔天一次、一周二次、一周三次，或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。II型干擾素受體激動(dòng)劑的有效劑量范圍約1-1000μg。II型干擾素受體激動(dòng)劑可每天一次、隔天一次、一周一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實(shí)施例中，II型干擾素受體激動(dòng)劑是IFN-γ。IFN-γ的有效劑量范圍約25-300μg/每劑，約10-100μg/每劑，約100-1000μg/每劑。
I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑可每天一次、隔天一次、一周一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實(shí)施例中，I型干擾素受體激動(dòng)劑是IFN-α。IFN-α的有效劑量范圍約1-30μg，約3-27μg，約1MU(百萬(wàn))-20MU，約3MU-10MU，約90-180μg，或約18-90μg。
Infergen共有序列IFN-α的有效劑量每劑含有約3、6、9、12、15、18、21、24、27或30μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3MU-10MU的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-270μg或約180μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-3.0μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有序列干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。有效劑量的單一PEG(30kD，線性)化CIFN可含有每劑約45-270μg或約60-180μg或約90-120μg的藥量。許多實(shí)施方案中，給予IFN-α或IFN-γ的時(shí)間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長(zhǎng)時(shí)間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次或每月給予。一些實(shí)施例中，皮下給予此劑量。
在上述個(gè)體中實(shí)施SARS聯(lián)合治療方法時(shí)，可每天一次、每天二次、隔天一次、一周二次、一周三次或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑。II型干擾素受體激動(dòng)劑的有效劑量范圍約1-1000μg?？擅刻煲淮?、隔天一次、一周一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予II型干擾素受體激動(dòng)劑。
一些實(shí)施例中，II型干擾素受體激動(dòng)劑是IFN-γ。IFN-γ的有效劑量范圍約25-300μg/每劑，約10-100μg/每劑，約100-1000μg/每劑。
I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑可每天一次、隔天一次、一周一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實(shí)施例中，I型干擾素受體激動(dòng)劑是IFN-α。IFN-α的有效劑量范圍約1-200μg、1-30μg，約3-27μg，約1MU-20MU，約3MU-10MU，約90-180μg，或約18-90μg。
Infergen共有序列IFN-α的有效劑量每劑含有約3、6、9、12、15、18、21、24、27或30μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3MU-10MU的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-270μg或約180μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-3.0μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有序列干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。
有效劑量的單一PEG(30kD，線性)化CIFN可含有每劑約45-270μg或約60-180μg或約90-120μg的藥量。許多實(shí)施方案中，給予IFN-α或IFN-γ的時(shí)間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長(zhǎng)時(shí)間。
劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次或每月給予。一些實(shí)施例本發(fā)明提供的上述任一方法中，在所需的治療期內(nèi)，給病人qd、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月皮下注射，或皮下每天基本上持續(xù)地或持續(xù)輸送給予病人所需劑量的IFN-α藥液。其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的上述方法之一中，在所需的治療期內(nèi)，qw、qow、每月三次或每月皮下給予病人輸送所需劑量的PEG化IFN-α(PEG-IFN-α)。
一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑治療病人的SARS。一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α和IFN-γ治療SARS病人。一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的共有序列IFN-α和IFN-γ治療SARS病人。
通常，本發(fā)明的方法中所適用的協(xié)同有效量的共有序列干擾素(CIFN)和IFN-γ的劑量比為1μgCIFN10μgIFN-γ，其中CIFN和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予病人每劑含約1-30μg的INFERGEN；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約10-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予病人每劑含約1-9μg藥量的INFERGEN；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約10-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予病人每劑含約1μg藥量的INFERGEN；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約10-50μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予病人每劑含約9μg藥量的INFERGEN；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約90-100μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有序列IFN-α和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予病人每劑含約30μg藥量的INFERGEN；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約200-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG化共有序列IFN-α和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qw、qow、每月三次、每月一次給予病人每劑含CIFN氨基酸量約4-60μg的PEG化共有序列IFN-α(PEG-CIFN)；聯(lián)用的IFN-γ總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG化共有序列IFN-α和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qw、qow、每月三次、每月一次給予病人每劑含CIFN氨基酸量約18-24μg的PEG化共有序列IFN-α(PEG-CIFN)；聯(lián)用的IFN-γ總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
通常，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效劑量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的劑量比為1百萬(wàn)單位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μgIFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予病人每劑含IFN-α2a或2b或2c約1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；聯(lián)用的每周IFN-γ劑量含每劑約30-600μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予病人每劑含IFN-α2a或2b或2c約3MU的IFN-α2a；聯(lián)用的每周IFN-γ劑量含每劑約100μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予病人每劑含IFN-α2a或2b或2c約10MU的IFN-α2a；聯(lián)用的每周IFN-γ劑量含每劑約300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予病人每劑含約90-360μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予病人每劑含約180μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予病人每劑含約。0.75-3.0μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療SARS病人，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予病人每劑含約1.5μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
本發(fā)明還提供治療SARS的方法，在I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和II型干擾素受體激動(dòng)劑單一療法中加入其它抗病毒藥物或如上所述的聯(lián)合療法。
雖然本發(fā)明參考具體實(shí)施例進(jìn)行了說(shuō)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉，可對(duì)所述實(shí)施例作各種修改和采用等價(jià)方法代替而不背離本發(fā)明的真正思路和范圍。另外可對(duì)本發(fā)明的對(duì)象、思路和范圍進(jìn)行許多修改以適應(yīng)具體情況、材料、組合物、工藝、工藝步驟。所有這些修改都屬于本文權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種治療冠狀病毒感染的方法，其特征在于，所述方法包括給予個(gè)體有效量的IFN-α。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體已接觸過(guò)冠狀病毒，并在接觸冠狀病毒24小時(shí)之內(nèi)給予IFN-α。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體已接觸過(guò)冠狀病毒，并在接觸冠狀病毒48小時(shí)之內(nèi)給予IFN-α。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體已接觸過(guò)冠狀病毒，并在接觸冠狀病毒后72小時(shí)至35天之內(nèi)給予IFN-α。
5.一種治療冠狀病毒感染的方法，其特征在于，所述方法包括給予個(gè)體有效量的IFN-γ。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體已接觸過(guò)冠狀病毒，并在接觸冠狀病毒24小時(shí)之內(nèi)給予IFN-γ。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體已接觸過(guò)冠狀病毒，并在接觸冠狀病毒48小時(shí)之內(nèi)給予IFN-γ。
8.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體已接觸過(guò)冠狀病毒，并在接觸冠狀病毒后72小時(shí)至35天之內(nèi)給予IFN-γ。
9.一種治療冠狀病毒感染的方法，其特征在于，所述方法包括給予個(gè)體有效量的IFN-γ和有效量的IFN-α。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體已接觸過(guò)冠狀病毒，并在接觸冠狀病毒24小時(shí)之內(nèi)給予IFN-γ和IFN-α。
11.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體已接觸過(guò)冠狀病毒，并在接觸冠狀病毒48小時(shí)之內(nèi)給予IFN-γ和IFN-α。
12.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述個(gè)體已接觸過(guò)冠狀病毒，并在接觸冠狀病毒后72小時(shí)至35天之內(nèi)給予IFN-γ和IFN-α。
13.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，IFN-γ和IFN-α是皮下給予的。
14.一種治療個(gè)體嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(SARS)的方法，其特征在于，所述方法包括給予個(gè)體有效量的IFN-α。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，在個(gè)體出現(xiàn)SARS癥狀24小時(shí)之內(nèi)給予IFN-α。
16.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，在個(gè)體出現(xiàn)SARS癥狀48小時(shí)之內(nèi)給予IFN-α。
17.一種治療個(gè)體嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(SARS)的方法，其特征在于，所述方法包括給予個(gè)體有效量的IFN-γ。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，在個(gè)體出現(xiàn)SARS癥狀24小時(shí)之內(nèi)給予IFN-γ。
19.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，在個(gè)體出現(xiàn)SARS癥狀48小時(shí)之內(nèi)給予IFN-γ。
20.一種治療個(gè)體嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(SARS)的方法，其特征在于，所述方法包括給予個(gè)體有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，在個(gè)體出現(xiàn)SARS癥狀24小時(shí)之內(nèi)給予IFN-α和IFN-γ。
22.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，在個(gè)體出現(xiàn)SARS癥狀48小時(shí)之內(nèi)給予IFN-α和IFN-γ。
23.一種降低個(gè)體發(fā)生嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(SARS)的風(fēng)險(xiǎn)的方法，其特征在于，所述方法包括給予個(gè)體有效量的IFN-α。
24.一種降低個(gè)體發(fā)生嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(SARS)的風(fēng)險(xiǎn)的方法，其特征在于，所述方法包括給予個(gè)體有效量的IFN-γ。
25.一種降低個(gè)體發(fā)生嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(SARS)的風(fēng)險(xiǎn)的方法，其特征在于，所述方法包括給予個(gè)體有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ。
26.如上述權(quán)利要求1、5、9、14、17、20和23-25中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法還包括給予有效量的核苷酸類似物或核苷類似物。
27.如上述權(quán)利要求1、5、9、14、17、20和23-25中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法還包括給予有效量的病毒唑。
28.如上述權(quán)利要求1-4、9-13、14-16、20-23和25中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，IFN-α是一種共有序列干擾素。
全文摘要
本發(fā)明提供治療冠狀病毒感染的方法，和在冠狀病毒感染患者中減少病毒負(fù)荷、或減少病毒清除的時(shí)間、或降低臨床發(fā)病率或死亡率的方法。本發(fā)明還提供了降低個(gè)體發(fā)生具有臨床后遺癥的致病性冠狀病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)的方法。本發(fā)明還提供了降低個(gè)體發(fā)生SARS的風(fēng)險(xiǎn)的方法。本發(fā)明還提供了治療SARS的方法。這些方法通常包括給予治療有效量的I型或III型干擾素受體激動(dòng)劑和/或II型干擾素受體激動(dòng)劑來(lái)治療冠狀病毒感染。
文檔編號(hào)A61K38/21GK1533808SQ20041003244
公開日2004年10月6日 申請(qǐng)日期2004年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月1日
發(fā)明者L·M·布拉特, L M 布拉特 申請(qǐng)人:印特繆恩股份有限公司