專利名稱：冠狀病毒特異性t－細(xì)胞抗原決定簇的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一組與重癥急性呼吸道綜合征相關(guān)的冠狀病毒(SARS-CoV)的T-細(xì)胞抗原決定簇譜，以及所述抗原決定簇作為潛在的免疫治療藥物、疫苗或者治療性疫苗抗原，可用于研究開發(fā)用于預(yù)防或治療與重癥急性呼吸道綜合征相關(guān)的冠狀病毒感染的藥物和疫苗的用途。
背景技術(shù)：
與人類相關(guān)的冠狀病毒(Severe Acute Respiratory SyndromeCoronavirus(SARS-CoV))已經(jīng)被確認(rèn)為新的一類病毒，人類以迄今最快的速度測定了其基因序列，主要由RNA-依賴性RNA聚合酶、刺突(S)、膜(M)、被膜(E)、核殼(N)、聚合酶(P)等蛋白組成(1、MarraMA等人，SARS相關(guān)冠狀病毒的基因組序列，Sciencexpress，www.sciencexpress.org，2003年5月1日；2、Rota PA等人，與重癥急性呼吸道綜合征相關(guān)的新冠狀病毒的表征，Sciencexpress，www.sciencexpress.org，2003年5月1日；3、Qin E’de，等人，SARS相關(guān)病毒的完整序列和比較分析(Isolate BJ01)，Chinese ScienceBulletin 2003，48(10)941-948；4、Peoros JS，等人，重癥急性呼吸道綜合征的可能病因-冠狀病毒，The Lancet，www.nejm.org，2003年4月8日；5、Ksiazek TG等人，與重癥急性呼吸道綜合征相關(guān)的新冠狀病毒，N Engl J Med，2003，348(20)1953～1966；6、Dorsten C等人，重癥急性呼吸道綜合征患者中新冠狀病毒的鑒定，N Engl J Med，www.nejm.org，2003年4月10日；Anand K等人，冠狀病毒主要蛋白酶(3CLpro)結(jié)構(gòu)設(shè)計抗SARS藥物的基礎(chǔ)，Sciencexpress，www.sciencexpress.org，2003年5月13日)。其中刺突(S)蛋白、膜(M)蛋白和被膜(E)蛋白組成了病毒外殼，是病毒識別、結(jié)合并進(jìn)入宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)。尤其是刺突S蛋白是關(guān)鍵性蛋白(圖1)。
雖然文獻(xiàn)研究結(jié)果表明HCoV-229E刺突S蛋白的417-546序列是宿主受體結(jié)合的部位，但同時也指出不同的冠狀病毒通過使用不同的受體進(jìn)入宿主細(xì)胞。這很可能與刺突S蛋白的變異有關(guān)(Marra MA等人，出處同前)。核殼(N)蛋白屬于胞漿內(nèi)蛋白，處于病毒顆粒的核心部分，和基因組RNA以結(jié)合的形式存在。病毒RNA在細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制完成后會和N蛋白結(jié)合，結(jié)合產(chǎn)物可以被M蛋白識別并被包裝到病毒顆粒中。所以N和M蛋白與病毒在宿主細(xì)胞中的復(fù)制具有明顯的關(guān)系。N蛋白是宿主T-細(xì)胞識別的主要位點(diǎn)之一(見圖1)。因而，發(fā)展合成病毒蛋白的多肽化合物化學(xué)庫，對于尋找病毒表面蛋白的多重最小多肽抗原決定簇(包括B-細(xì)胞和T-細(xì)胞抗原決定簇)，進(jìn)而尋求和發(fā)展合成多肽疫苗、臨床診斷試劑和血清治療方案有極其重要的意義。同時，該化學(xué)庫還可用于篩選并發(fā)現(xiàn)病毒結(jié)合受體的多重配基，進(jìn)而阻斷冠狀病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞，發(fā)展治療藥物(特別是對于耐藥病毒的藥物治療)有極大的參考價值。
目前，尋找抗原決定簇最為常用的方法是利用各種計算機(jī)軟件，通過已經(jīng)發(fā)表的序列采用親水性、疏水性、轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)、HPLC滯留系數(shù)、螺旋結(jié)構(gòu)、保守性等參數(shù)進(jìn)行預(yù)測。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這種預(yù)測方法與實(shí)際測得的序列僅有30％～50％的重復(fù)性(1、ZHANG XM，LIU G和SUN MJ，Brain Research，2000，868157-164；2、ZHANGXM，LIU G和SUN MJ，Brain Research，2001，895277-282.)。另一種方法是采用組合化學(xué)技術(shù)對蛋白抗原決定簇譜的研究(“交叉重疊”多肽化合物)組合化學(xué)把化學(xué)合成、計算機(jī)設(shè)計選結(jié)為一體，能同時產(chǎn)生許多種結(jié)構(gòu)相關(guān)但有序變化的化合物，并采用高度靈敏和高通量的生物學(xué)方法對這些化合物同時進(jìn)行篩選，從中確定具有生物活性的物質(zhì)，或者全新的先導(dǎo)化合物的技術(shù)。因而，本技術(shù)涉及了許多種類的“似藥”分子，如小分子雜環(huán)化合物、天然產(chǎn)物、生物寡聚體及其模擬物等。本發(fā)明是在前述專利(一種肽文庫、其合成方法及從該文庫中篩選的活性片段，申請?zhí)?00310101892.6。)所組合合成的SARS-CoV“交叉重疊”生物寡聚體多肽化學(xué)庫基礎(chǔ)上完成的。該法的特點(diǎn)是以一定數(shù)目的氨基酸殘基肽(比如1到50個氨基酸殘基)為合成“交叉重疊”片段，將蛋白序列通過逐個錯位(或者間隔錯位，包括從2到合成肽片段的氨基酸的總位數(shù))的方式全部合成出來，然后進(jìn)行多肽與抗體、受體、酶、或者細(xì)胞等反應(yīng)，進(jìn)而有可能發(fā)現(xiàn)抗原決定簇、配基、酶的底物或者抑制和激活劑、以及誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子等。
本發(fā)明人采用固相合成技術(shù)、射頻編碼技術(shù)短時間內(nèi)合成了大量的“交叉重疊”多肽化合物，在首次合成與SARS-CoV相關(guān)的S、M、E和N蛋白的全部“交叉重疊”多肽的基礎(chǔ)上，通過采用ELISPOT實(shí)驗(yàn)技術(shù)從在先專利申請(200310101892.6)中所得的“交叉重疊”多肽化學(xué)庫中分四步篩選得到了如下的特異性T-細(xì)胞抗原決定簇，從而完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個方面，涉及一組冠狀病毒SARS-CoV的T-細(xì)胞抗原決定簇，其選自至少一種下列多肽序列，或其任一組合，包括T-1KKISNCVADY(S343-352)(SEQ ID NO1)T-2VADYSVLYNS(S349-358)(SEQ ID NO2)T-3DQLTPAWRI(S613-621)(SEQ ID NO3)T-4IIRGHLRMAG(M143-152)(SEQ ID NO4)T-5IPIGAGICAS(S650-659)(SEQ ID NO5)T-6MAGHSLGRCD(M150-159)(SEQ ID NO6)T-7TALALLLLDR(N218-227)(SEQ ID NO7)T-8TVTKKSAAEA(N246-255)(SEQ ID NO8)本發(fā)明的完成是在化學(xué)合成了冠狀病毒(SARS-CoV)結(jié)構(gòu)蛋白“交叉重疊”肽庫的基礎(chǔ)上完成的。
具體的，本發(fā)明首先通過采用物理編碼法依據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中公開的相關(guān)信息，合成了“交叉重疊”多肽化學(xué)庫。在此基礎(chǔ)上，通過采用ELISPOT實(shí)驗(yàn)技術(shù)從“交叉重疊”多肽化學(xué)庫中分四步篩選得到了上述的特異性T-細(xì)胞抗原決定簇步驟一將肽庫中單一多肽化合物順序按照每10個多肽(25微克/孔)為一組進(jìn)行混合，并與含一定細(xì)胞數(shù)的新鮮分離得到的外周血單核細(xì)胞(3×105細(xì)胞/孔，從SARS康復(fù)患者采取血樣中分離得到)在37℃下共孵育24小時，陰性和陽性對照分別為(0.1％DMSO)和(Con A 8.0μg/孔)，再加入生物基化的檢測抗體，并顯色。IFN-γ-釋放細(xì)胞數(shù)由Bio-Reader 4000(Bio-Sys Inc.德國)讀取。本實(shí)驗(yàn)中以新鮮分離的正常人外周血單核細(xì)胞做對照。
步驟二將第一輪發(fā)現(xiàn)的活性孔內(nèi)多肽分別分配到10個檢測板孔內(nèi)，進(jìn)行第二次ELISOPT實(shí)驗(yàn)(重復(fù)第一步)，從而確定單一多肽化合物。代表性結(jié)果見圖3。
步驟三將單一多肽與一定量的非特異性性免疫調(diào)節(jié)劑MDP-C(參見在先申請專利，申請?zhí)?00310101618.9)共孵育，觀察是否有協(xié)同作用。與正常人的外周血單核細(xì)胞對比，只有對SARS康復(fù)患者的外周血單核細(xì)胞產(chǎn)生顯著協(xié)同作用的多肽化合物被確認(rèn)為特異性T-細(xì)胞抗原決定簇。代表性結(jié)果見圖3。
步驟四采用四份SARS康復(fù)患者的外周血單核細(xì)胞重復(fù)實(shí)驗(yàn)，具有統(tǒng)計學(xué)意義的化合物被最終確認(rèn)為特異性T-細(xì)胞抗原決定簇。結(jié)果見圖4。
本發(fā)明的又一方面涉及上述冠狀病毒(SARS-CoV)T-細(xì)胞抗原決定簇作為一種新的細(xì)胞免疫抗原，用于開發(fā)和研制預(yù)防和/或治療重癥急性呼吸道綜合征的藥物和疫苗的用途。


圖1顯示ELISPOT測定中陰性對照和陽性對照檢測結(jié)果。
圖2顯示代表性混合樣品的ELISPOT結(jié)果。左側(cè)圖為空白對照，右側(cè)圖為陽性結(jié)果。
圖3顯示單一多肽(T2)的ELISPOT實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以及與非特異性免疫增強(qiáng)劑MDP-C的協(xié)同作用。其中黑點(diǎn)代表化合物誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-γ的細(xì)胞數(shù)。
圖4顯示多肽刺激產(chǎn)生IFN-γ活性以及與非特異性免疫增強(qiáng)劑MDP-C的協(xié)同刺激作用。A-G代表康復(fù)SARS病人的外周血單核細(xì)胞(PBMC)，(n＝4，代表周姓康復(fù)者、辛姓康復(fù)者、石姓康復(fù)者和蘇姓康復(fù)者)。H-K代表健康者外周血單核細(xì)胞(n＝4)。
A和H為無刺激物對照。BT1，T2，T3，T4各25微克；C代表MDP-C(10.0μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；DMDP-C(3.0μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；EMDP-C(1.0μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；FMDP-C(0.3μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；GMDP-C(0.1μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；IMDP-C(10.0μM)；JT1，T2，T3，T4(各25微克)；KMDP-C(10.0μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)。
a.P＜0.01，b.P＜0.001vs A；c.P＜0.05，d.P＜0.01，e.P＜0.001vs B；f.P＜0.05，g.P＜0.01vs J；h.P＜0.05，i.P＜0.01，j.P＜0.001vs J；k.P＜0.05，l.P＜0.01vs K。
具體實(shí)施例方式
組合化學(xué)研究分三個階段分子多樣性化合物庫的合成；群集篩選(進(jìn)行活性檢測)；活性分子的結(jié)構(gòu)測定。
1、肽庫的建立要建立肽文庫必須事先考慮許多方面設(shè)計模板分子；選擇合適的構(gòu)建單元；確定合成方案；如何完成半自動或者自動合成等。
本發(fā)明中我們的主要目的是尋找針對SARS-CoV病毒的人的T-細(xì)胞抗原決定簇。選擇逐位錯位的合成方式可以直接找到最小的抗原決定簇。高通量地合成方法一般采用固相合成技術(shù)，特點(diǎn)是中間體的純化僅采用簡單的洗滌和過濾操作即可完成。同時，反應(yīng)中可以使用大大過量的構(gòu)建單元來保證反應(yīng)進(jìn)行完全，并易半自動化或者自動化。因而，我們選擇了固相合成技術(shù)，在樹脂上完成了全部多肽化合物的合成。使用20種天然L-構(gòu)型氨基酸為構(gòu)建單元來合成數(shù)千個多肽化合物時，相同的反應(yīng)條件可以在多肽編碼的條件下同步進(jìn)行，如相同的脫保護(hù)步驟、不同的多肽序列與相同的保護(hù)氨基酸進(jìn)行反應(yīng)步驟等。這樣就可以完成大規(guī)模、快速地合成。其中編碼方式有多種，如化學(xué)編碼、物理編碼等。物理編碼的特點(diǎn)是無“化學(xué)污染”，無須多余的化學(xué)解碼步驟等。因而，我們選擇了IRORI編碼-解碼的分類技術(shù)。一次可操作數(shù)千個化合物的合成，本實(shí)驗(yàn)中我們選擇了一次合成600～700個多肽化合物的規(guī)模。
2、群集篩選總的來講，篩選可分為隨機(jī)篩選和定向篩選。但無論是隨機(jī)篩選還是定向篩選，都要考慮選定篩選模式為固相篩選或者液相篩選，或用何法(細(xì)胞功能篩選、受體篩選、抗體篩選等)進(jìn)行篩選，用何種指示劑(同位素標(biāo)記、熒光標(biāo)記、染料染色)等。具體的篩選方法有三種固相篩選、液相篩選和兩者的結(jié)合。
3、確認(rèn)活性分子結(jié)構(gòu)編碼技術(shù)已應(yīng)用于解析組合庫中高活性化合物的結(jié)構(gòu)。最早提出此技術(shù)的是Brenner和Lerner，Nicolaou等提出了射頻編碼合成儀突破了以往的編碼形式，它是建立在射頻信號及應(yīng)用多功能微反應(yīng)儀的半導(dǎo)體記憶裝置基礎(chǔ)上的。
本發(fā)明中使用的射頻編碼技術(shù)可以直接將裂解到96孔板中多肽化合物編碼對應(yīng)孔號。因而，篩選得到的活性孔經(jīng)過與編碼子序號對比即可給出多肽的序列。
具體的，在下面的實(shí)施例中分別通過采用ELISPOT技術(shù)篩選所述肽化學(xué)庫，獲得了本發(fā)明所述的針對SARS-CoV病毒T-細(xì)胞的抗原決定簇。
實(shí)施例1多肽化合物的合成1)加樹脂及射頻子選取9個Microkan并分別裝入15毫克Rink樹脂和射頻子并蓋緊蓋子；2)合并Microkan，在一個適當(dāng)?shù)娜萜髦杏?0％哌啶/DMF脫Fmoc保護(hù)基15min×2；3)洗滌樹脂DMF 3min×6，DCM 3min×3，重蒸DMF 3min×3；IRORI射頻子編碼(或解碼)采用IRORI Sorting程序，按照多肽編碼次序?qū)icrokan分配至不同氨基酸反應(yīng)瓶中；4)在每一個反應(yīng)瓶中加入溶解于DMF中計算量的Fmoc-保護(hù)氨基酸、HOBt、HBTU，振搖反應(yīng)3h；5)合并Microkan并洗滌樹脂DMF 3min×3次；6)重復(fù)步驟3～7，直至連接全部氨基酸；7)合并Microkan，重復(fù)3～4步；8)采用15％Ac2O/CH2Cl2乙?；嚯牡陌被?5min；9)用CH2Cl23min×3次后，室溫晾干；10)采用IRORI Sorting解碼Microkan并分配到對應(yīng)的15毫升裂解管中；11)每一個Microkan用1mL在室溫下裂解液裂解2h；12)再用1mL裂解液浸泡洗滌Microkan 5min；13)合并裂解液和洗滌液；14)惰性氣體流吹干濃縮至殘留少量裂解液；15)加入事先用冰水浴充分冷卻的甲基叔丁基醚/石油醚(v/v3/1)，放入冰水浴中冷卻20min；16)離心沉淀多肽化合物(3000rpm以上)，10min后小心傾去上清液；
17)再加入冷卻的甲基叔丁基醚/石油醚，充分洗滌、離心，傾去上清夜，共兩次；18)將多肽殘余物置于室溫下，直至完全干燥；19)將多肽化合物用10％HOAc/H2O或30％CH3CN/H2O或60％CH3CN/H2O溶解后，經(jīng)HPLC-MS檢測純度和正確的分子量。
實(shí)施例2ELISPOT方法篩選SARS-CoV特異性的T-細(xì)胞抗原決定簇根據(jù)人類IFN-γELISPOT試劑盒(5個裝)(R&D Systems)檢測說明書，將包被抗體用1ml PBS溶解，稀釋50倍后均勻加入96孔PVDF(Millipore)板，100μl/孔，過夜。第二天，甩棄孔內(nèi)液體，PBS洗板4次，扣干后待用。無菌采取SARS康復(fù)病人及正常人外周血，淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心分離其PBMC，用完全RPMI-1640培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞至所需濃度，均勻加入96孔PVDF板中，3×105細(xì)胞/孔。加入不同濃度的SARS多肽(或SARS多肽混合物)，終體積為100μl/孔。以正常人PBMC為陰性對照，以PMA為陽性對照。PVDF板置于37℃、5％CO2完全濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。甩棄孔內(nèi)細(xì)胞和液體，PBST洗板4次?？鄹珊蠹尤肷锼貥?biāo)記的檢測抗體(R&D Systems)后繼續(xù)孵育過夜。甩棄孔內(nèi)細(xì)胞和液體，PBST洗板4次?？鄹珊笥肊LISPOT Blue Color Module(R&D system)顯色，Bio-Reader 4000(Bio-Sys Inc.Germany)進(jìn)行檢測，計算SFC(Spot-forming cells)的數(shù)量，即IFN-γ分泌細(xì)胞的數(shù)量。
根據(jù)SARS-CoV多肽在SARS-CoV基因組的位置構(gòu)建多肽池(Pooled peptide)，即將錯位合成的多肽1-10混合在一起，作為多肽池1，將多肽11-20混合在一起，作為多肽池2，多肽21-30混合在一起，作為多肽池3，依此類推。第一輪篩選時先針對這些多肽池篩選出陽性后，再將陽性多肽池中10個多肽分為單個逐一篩選陽性多肽。最后再用純化的多肽進(jìn)行驗(yàn)證。代表性結(jié)果參見圖2。
實(shí)施例3胞壁酰二肽衍生物MDP-C的協(xié)同作用胞壁酰二肽衍生物MDP-C的學(xué)名為Nα-(1-α-芐基-N-乙酰基-胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰胺酰)-Nε-(3-硝基-反式苯乙烯基羰基)-L-賴氨酰胺(專利申請?zhí)?00310101618.9)，具有非特異性免疫增強(qiáng)作用。本實(shí)驗(yàn)中在實(shí)施例2的每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的多肽中都加入0.1μM～10μM的MDP-C，觀察其對多肽化合物刺激SARS康復(fù)病人PBMC產(chǎn)生IFN-γ的協(xié)同效果，實(shí)驗(yàn)步驟同實(shí)施例2。結(jié)果參見圖3。
采用四份SARS康復(fù)患者的外周血單核細(xì)胞重復(fù)實(shí)驗(yàn)，具有統(tǒng)計學(xué)意義的化合物被最終確認(rèn)為特異性T-細(xì)胞抗原決定簇。結(jié)果見圖4。
其中，A-G代表康復(fù)SARS病人的外周血單核細(xì)胞(PBMC)，(n＝4，代表周姓康復(fù)者、辛姓康復(fù)者、石姓康復(fù)者和蘇姓康復(fù)者)。H-K代表健康者外周血單核細(xì)胞(n＝4)。
A和H為無刺激物對照。BT1，T2，T3，T4各25微克；C代表MDP-C(10.0μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；DMDP-C(3.0μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；EMDP-C(1.0μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；FMDP-C(0.3μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；GMDP-C(0.1μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)；IMDP-C(10.0μM)；JT1，T2，T3，T4(各25微克)；KMDP-C(10.0μM)+T1，T2，T3，T4(各25微克)。
aP＜0.01，bP＜0.001vs A；cP＜0.05，dP＜0.01，eP＜0.001vs B；fP＜0.05，gP＜0.01vs J；hP＜0.05，iP＜0.01，jP＜0.001vs J；kP＜0.05，lP＜0.01vs K。
實(shí)施例4SARS康復(fù)病人的HLA分型檢測八位SARS康復(fù)病人的HLA基因分型是根據(jù)帕弗瑞公司臨床系統(tǒng)(PEL-FREEZ Clinical Systems)ABDR-SSP UniTray試劑盒的說明書的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行的。即，先用RNA提取試劑盒(PEL-FREEZ)分別從SARS康復(fù)病人外周血中提取mRNA，然后對每份RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，再根據(jù)AB-DR匹配的可能所有基因亞型設(shè)計的多種引物在相同外界條件(Tm值除外)下、在同一塊512孔板上進(jìn)行PCR，進(jìn)行35個循環(huán)。相同外界條件下凝膠電泳，紫外光下成像。用PEL-FREEZ自主開發(fā)的軟件計算出相應(yīng)的HLA基因亞型。
序列表<110>中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所<120>冠狀病毒特異性T-細(xì)胞抗原決定簇<130>IDC040059<160>8<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>10<212>PRT<213>corona virus<400>1Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr1 5 10<210>2<211>10<212>PRT<213>corona virus<400>2Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser1 5 10<210>3<211>9<212>PRT<213>corona virus<400>3Asp Gln Leu Thr Pro Ala Trp Arg Ile1 5
<210>4<211>10<212>PRT<213>coronavirus<400>4Ile Ile Arg Gly His Leu Arg Met Ala Gly1 5 10<210>5<211>10<212>PRT<213>coronavirus<400>5Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala Ser1 5 10<210>6<211>10<212>PRT<213>coronavirus<400>6Met Ala Gly His Ser Leu Gly Arg Cys Asp1 5 10<210>7<211>10<212>PRT<213>coronavirus<400>7Thr Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp Arg1 5 10
<210>8<211>10<212>PRT<213>coronavirus<400>8Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala1 5 10
權(quán)利要求
1.一組與重癥急性呼吸道綜合征相關(guān)的冠狀病毒的T-細(xì)胞抗原決定簇，其選自至少一種下列多肽序列，或其任一組合，包括T-1KKISNCVADY(S343-352)(SEQ ID NO1)T-2VADYSVLYNS(S349-358)(SEQ ID NO2)T-3DQLTPAWRI(S613-621)(SEQ ID NO3)T-4IIRGHLRMAG(M143-152)(SEQ ID NO4)T-5IPIGAGICAS(S650-659)(SEQ ID NO5)T-6MAGHSLGRCD(M150-159)(SEQ ID NO6)T-7TALALLLLDR(N218-227)(SEQ ID NO7)T-8TVTKKSAAEA(N246-255)(SEQ ID NO8)
2.權(quán)利要求1所述冠狀病毒(SARS-CoV)T-細(xì)胞抗原決定簇的用途，其作為一種新的免疫治療藥物、疫苗或者治療性疫苗抗原，用于開發(fā)和研制預(yù)防和/或治療重癥急性呼吸道綜合征的藥物和疫苗的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一組與重癥急性呼吸道綜合征相關(guān)的冠狀病毒的B－細(xì)胞抗原決定簇。本發(fā)明還涉及上述冠狀病毒(SARS－CoV)T－細(xì)胞抗原決定簇作為一種新的免疫治療藥物、疫苗或者治療性疫苗抗原，用于開發(fā)和研制預(yù)防和/或治療重癥急性呼吸道綜合征的藥物和疫苗的用途。
文檔編號C07K7/08GK1746181SQ20041007456
公開日2006年3月15日 申請日期2004年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月8日
發(fā)明者劉剛, 程桂芳, 李莉, 楊紅振 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所