專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療慢性結(jié)腸炎的藥物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
慢性結(jié)腸炎大多病程長(zhǎng)、病情纏綿難愈，尤其是潰瘍性結(jié)腸炎，大便帶粘液和膿血，患者十分痛苦，這些癥狀不是通過(guò)調(diào)理脾胃、健脾益腸就能解決的，以中醫(yī)辯證和西醫(yī)辨病相結(jié)合的“整體觀念”為指導(dǎo)。減輕炎癥反應(yīng)，從而達(dá)到治療結(jié)腸炎的目的。本方適合脾腎兩虛的久治不愈的非特異性潰瘍型結(jié)腸炎。
特發(fā)性潰瘍性結(jié)腸炎又稱(chēng)為非特異性潰瘍性結(jié)腸炎，是一種原因不明的主要發(fā)生在結(jié)腸粘膜層的炎癥性腸病，以潰瘍糜爛為主，主要累及直腸、乙狀結(jié)腸粘膜，向上擴(kuò)展可至左半、右半結(jié)腸，甚至全結(jié)腸和回腸末端。本病多見(jiàn)于青、中年，其主要的臨床表現(xiàn)有血性粘液便、腹痛、腹瀉、里急后重等。本病可發(fā)生嚴(yán)重的并發(fā)癥。
目前伴隨著社會(huì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，人們生活節(jié)奏也不斷加快，同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致生活的不規(guī)律，脾胃功能失調(diào)，腹瀉伴有持續(xù)性或反復(fù)發(fā)作粘液血便、腹痛及不同程度的全身癥狀。因此研究一種高效、無(wú)毒的治療藥物，就顯得非常重要，它對(duì)改善人民生活質(zhì)量，提高工作效率，造福人類(lèi)具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種治療慢性結(jié)腸炎的藥物及制備方法。取古代治療腹瀉的經(jīng)驗(yàn)名方《傷寒論》中白頭翁湯配合《傷寒論》芍藥甘草湯加減化裁而來(lái)。結(jié)腸炎中醫(yī)應(yīng)屬于“泄瀉”、“腸癖”、“休息痢”等范疇。病因病機(jī)一般認(rèn)為因情志不遂，濕熱蘊(yùn)結(jié)腸腔，日久不化，釀成熱毒，損傷腸壁。水失運(yùn)化則為濕，蘊(yùn)久化熱，濕熱膠結(jié)，阻礙氣機(jī)，升降失司，濕熱毒與腸胃氣血相搏結(jié)，化為膿血與粘液，日久成便下膿血。同時(shí)由于脾居中焦，職司運(yùn)化，若脾失健運(yùn)，不能腐熟水谷并運(yùn)化精微，遂致瀉泄之證。
其致病原因，有感受外邪、飲食所傷，七情不和及臟腑虛弱等。慢性結(jié)腸炎大多病程長(zhǎng)、病情纏綿難愈，尤其是潰瘍性結(jié)腸炎，大便帶粘液和膿血，患者十分痛苦。本病為本虛標(biāo)實(shí)之癥。急性期以標(biāo)實(shí)為主，主要臨床表現(xiàn)腹瀉、腹痛、腹脹、里急后重、乏力、血性粘液便，大便不爽，舌苔黃膩，以濕熱為主。應(yīng)當(dāng)清熱解毒，燥濕健脾。本方適用于濕熱蘊(yùn)結(jié)，脾虛夾濕型潰瘍性結(jié)腸炎。
本方以白頭翁、黃柏為君藥，白頭翁其性苦寒，歸胃、大腸經(jīng)。清熱解毒，涼血止痢，苦能燥濕，寒能泄熱，氣質(zhì)輕清，可清散郁火清熱解毒。是治療熱毒痢疾的要藥?！侗窘?jīng)》“主溫瘧狂易寒熱，逐血止痛”。《藥性論》“止腹痛及赤毒痢”。《傷寒蘊(yùn)要》“熱毒下痢紫血鮮血者益之”?！侗静菔斑z》“去腸垢，消積滯”。
黃柏苦寒。歸腎、膀胱經(jīng)。清熱燥濕，瀉火除煩解毒。是治療濕熱蘊(yùn)結(jié)、下痢的要藥?！侗窘?jīng)》“主五臟腸胃中結(jié)氣熱，濕熱犯胃腸，用之”?！堕L(zhǎng)沙藥解》“黃柏，瀉己土之濕熱，清乙木之郁蒸，熱痢下重，理黃疸、腹?jié)M、傷寒”?！夺t(yī)學(xué)啟源》“凡去下焦?jié)駸嶙髂[及痛，并膀胱有火邪，小便不利及黃澀者”?！吨貞c堂隨筆》“黃柏治下焦?jié)駸嶂T癥”。中醫(yī)有″無(wú)濕不成瀉″之說(shuō)，感受濕邪，影響脾的運(yùn)化，能導(dǎo)致腹瀉?！堕L(zhǎng)沙藥解》“黃柏苦寒迅利，疏肝脾而瀉濕熱，清膀胱而排瘀濁，殊有捷效”。白頭翁苦寒降瀉，入胃、大腸經(jīng)，能入血分，清腸熱，善除腸胃熱毒蘊(yùn)結(jié)，黃柏善治下焦，長(zhǎng)于瀉腎火而清濕熱。
臣藥為白術(shù)，白術(shù)與白頭翁二藥相配，相須為用，瀉火燥濕清腸解毒之力大增。白術(shù)苦、甘溫、入脾、胃經(jīng)。健脾益氣，燥濕利水，止瀉。為補(bǔ)脾燥濕之要藥。《珍珠囊》“除濕益氣，和中補(bǔ)陽(yáng)，消疾逐水，生津止渴，止瀉痢”。《本草經(jīng)疏》“安脾胃之神品，除脾胃虛，濕熱瘀滯”?！侗静輳男隆贰鞍仔g(shù)，甘補(bǔ)脾，溫和中，苦燥濕”?！侗静輩R言》“白術(shù)，乃扶植脾胃，散濕除痹。潰瘍之癥用白術(shù)，可以托膿”?！侗静莘暝贰鞍仔g(shù)，生用除濕益燥”。《本草求真》“白術(shù)，味苦而甘，既能燥濕健脾，復(fù)能緩脾生津”。
白芍苦酸歸肝、脾經(jīng)為佐藥。養(yǎng)血柔肝，斂陰止痛。白術(shù)與白芍配伍，益脾柔肝，療效顯著。《本經(jīng)》“主邪氣腹痛，除血痹，止痛，利小便，益氣”。《珍珠囊》“白補(bǔ)赤散，瀉肝補(bǔ)脾胃，安脾經(jīng)，治腹痛，收胃氣，止瀉痢，和血脈，固腠理”?！秳e錄》“通順血脈，緩中，散惡血，逐賊血，去水氣，利膀胱、大小腸”?！夺t(yī)學(xué)啟源》“安脾經(jīng)，治腹痛，受胃氣，止瀉痢，和血，固腠理，瀉肝，補(bǔ)脾胃”?！兜崮媳静荨贰盀a脾熱，止腹痛，止水瀉”。白術(shù)與白芍配伍，益脾柔肝療效顯著。
使藥為炙甘草。甘草甘平，入脾、肺、腎經(jīng)，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，補(bǔ)脾瀉火解毒，調(diào)和諸藥。炙用性溫，能益氣補(bǔ)虛，可治中氣不足，氣虛血少?！侗窘?jīng)》“主五臟六腑寒熱邪氣，堅(jiān)筋骨，長(zhǎng)肌肉，解毒”?！端幮哉摗贰爸鞲怪欣渫?，除腹脹滿，補(bǔ)益五臟，制諸藥毒，養(yǎng)腎氣內(nèi)傷，虛而多熱，加而用之”。《日華子本草》“安魂定魄”，“補(bǔ)五勞七傷，一切虛損，驚悸、煩悶、健忘。通九竅、利百脈，解冷熱”。《珍珠囊》“補(bǔ)血，養(yǎng)胃”?！秳e錄》“溫中下氣…通經(jīng)脈、利血?dú)?，解百藥毒”。《本草通玄》“甘草，甘平之品，?dú)入脾胃”。《本經(jīng)疏證》“甘草非主病之多，乃諸方必合甘草，始能曲當(dāng)病情也…甘草之用生用炙，確有不同，大率除邪氣、治金瘡、解毒，皆宜用生。緩中補(bǔ)虛、止渴，宜炙用”。調(diào)和藥性，合以補(bǔ)中，和脾氣。甘草與熱藥同用可以緩其熱，與寒藥同用，可以緩其寒，能使補(bǔ)而不聚，是瀉而不速，起到調(diào)和諸藥，解百藥之毒功效。與白術(shù)合用，甘草補(bǔ)中能促進(jìn)白術(shù)健脾作用的發(fā)揮，并緩其剛燥之性；白術(shù)健脾能助甘草補(bǔ)中益氣之力，有較平和的健脾和中和緩脾止痛作用。白芍與炙甘草配伍，可以起到養(yǎng)血養(yǎng)陰，緩急止痛的作用。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過(guò)發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在下述重量范圍內(nèi)都具有較好療效白頭翁750～850份黃 柏250～350份白 術(shù)550～650份白 芍250～350份炙甘草200～280份優(yōu)選地，本發(fā)明藥物活性組分的制備方法如下1)黃柏用5～7倍量85％乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，減壓回收乙醇至無(wú)醇味并濃縮至相對(duì)密度為1.30～1.35的稠膏，備用；2)藥渣與白頭翁、白術(shù)、白芍、炙甘草加7～9倍藥材量水煎煮3次，每次3小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.30～1.35的稠膏，與1)所得稠膏合并；3)將上述2)所得稠膏減壓干燥，控制真空度≤0.08MPa，溫度70～80℃，粉碎成細(xì)粉，即得。
本發(fā)明藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用劑型，如丸劑、散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液等。
本發(fā)明藥物適用于濕熱蘊(yùn)結(jié)，脾虛夾濕型慢性潰瘍性結(jié)腸炎。是一種高效、無(wú)毒的治療藥物。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)試驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物的有益效果，這些試驗(yàn)例包括了本發(fā)明藥物(以下簡(jiǎn)稱(chēng)結(jié)腸安腸溶片)的藥效學(xué)試驗(yàn)及急性毒性試驗(yàn)和長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)材料藥物結(jié)腸安腸溶片，包衣灰白色，除去包衣后顯棕色，0.7g/片，2.24g生藥/片，臨床成人2片/次，批號(hào)20030301，由長(zhǎng)春銀諾克藥業(yè)有限公司提供。柳氮磺吡啶片為上海福達(dá)制藥有限公司，批號(hào)030407。補(bǔ)脾益腸丸為中國(guó)深圳三九醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品，一次6g，一日三次，批號(hào)20030314。固本益腸片為沈陽(yáng)綠洲制藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品，批號(hào)20030304。番瀉葉購(gòu)自吉林省中醫(yī)中藥究院中藥房，用開(kāi)水浸泡24小時(shí)，制成20％浸劑。賦形劑由吉林大學(xué)藥學(xué)院提供。
動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22g，購(gòu)自長(zhǎng)春生物制品研究所動(dòng)物室，合格證編號(hào)分別為10-1001。Wstar大鼠，體重180～200g雌性，125～155g雌雄各半，購(gòu)自解放軍農(nóng)牧大學(xué)動(dòng)物室，合格證編號(hào)為10-5112。大耳白兔體重2.5～3.0kg，購(gòu)自解放軍農(nóng)牧大學(xué)動(dòng)物室，合格證編號(hào)為10-5113。
儀器與器材7550紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海分析儀器廠)；LDZ-2型普通離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；手術(shù)器械；精密微量電子天平；高壓消毒鍋。上海752紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本日立高速冷凍離心機(jī)，中性光電GC-2016γ放射免疫計(jì)數(shù)器。
實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果實(shí)驗(yàn)例1 急性毒性研究給小鼠灌胃結(jié)腸安腸溶片，一日內(nèi)2次灌胃給藥，最大給藥量為125.44g(生藥)/kg，相當(dāng)于臨床用藥量980倍。給藥后觀察14日，無(wú)明顯毒性反應(yīng)和死亡發(fā)生。一日內(nèi)灌腸給藥2次，最大灌腸劑量為94.08g(生藥)/kg，此劑量相當(dāng)于臨床用藥量735倍。給藥后觀察14日，由于上述劑量已經(jīng)是最大濃度和最大體積，故末能求出LD50。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 結(jié)腸安腸溶片一日內(nèi)最大劑量給藥對(duì)小鼠體重影響給藥后第7日體重 給藥后第14日體重組 別 性別 給藥前體重(g)(g) (g)對(duì)照組 雄性 20.1±0.45 25.0±1.03 29.3±1.59雌性 20.1±0.43 24.5±1.328.8±1.36結(jié)腸安腸溶片灌胃雄性 20.1±0.55 25.0±0.99 29.1±1.12雌性 20.1±0.41 24.6±1.09 28.5±1.29結(jié)腸安腸溶片灌腸雄性 20.1±0.49 24.8±0.87 28.5±1.51雌性 20.1±0.43 24.3±1.06 28.2±1.42注給藥前后自身比較P＜0.001實(shí)驗(yàn)例2 長(zhǎng)期毒性研究結(jié)腸安腸溶片40、20、10生藥g/kg連續(xù)26周灌胃，大鼠行為活動(dòng)正常，毛色光亮、糞便正常，無(wú)異?，F(xiàn)象發(fā)生。三個(gè)劑量組大鼠體重均增長(zhǎng)，與空白對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異。三個(gè)劑量組大鼠攝食飲水量與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。三個(gè)劑量組心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢臟器指數(shù)，與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。三個(gè)劑量組大鼠的血液生化指標(biāo)(ALT、TP、ALB、UREA、CR、CHOL、ALP、AST、GLU、T-BIL)和血常規(guī)(WBC、LY、MO、GR、RBC、Hgb、MCV、MCH、Pit)檢測(cè)值均在正常范圍內(nèi)，與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。三個(gè)劑量組大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、前列腺、甲狀腺、腦、小腸、結(jié)腸、卵巢、子宮、胃組織病理切片檢查，均是正常組織，與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。結(jié)果見(jiàn)表2、表3、表4、表5、表6。
結(jié)論結(jié)腸安腸溶片給大鼠灌胃結(jié)腸安腸溶片40、20、10生藥g/kg，連續(xù)180日，對(duì)大鼠無(wú)蓄積毒性反應(yīng)，也無(wú)延遲毒性反應(yīng)。
表2 結(jié)腸安腸溶片連續(xù)給藥對(duì)大鼠體重(g)的影響 (X±SD)組 別 給藥前體重 給藥后不同時(shí)間(周)大鼠體重(g)(g)2周 4周6周 8周 10周 12周 14周對(duì)照組♂71.8±5.1126.7±14.6174.2±21.3220.1±24.4248.3±23.8272.0±26.4296.2±27.9310.2±29.7♀71.3±5.1120.3±15.5159.6±22.9196.5±29.9220.7±26.3243.3±28.8260.0±27.7272.0±26.4高劑量♂71.1±4.7123.5±12.2175.5±21.2222.3±25.5247.5±25.9270.0±26.5292.5±26.7307.8±26.1♀71.3±5.4119.9±12.4158.4±17.7192.2±23.2216.6±25.4239.0±25.7258.0±24.6270.7±22.0中劑量♂71.3±5.0127.9±13.7176.5±21.3220.4±25.7252.2±25.9274.9±25.9298.4±26.2311.0±28.1♀71.5±5.7118.0±10.8161.5±17.6194.5±24.9218.2±27.1240.4±23.6259.3±27.0268.3±23.9低劑量♂71.2±4.9129.3±10.9178.2±20.6224.3±25.0254.0±30.3278.0±35.3302.3±36.5316.4±29.4♀71.2±5.9121.7±11.4163.5±19.2200.6±24.8224.0±25.7248.1±27.9265.8±28.1279.6±27.2續(xù)表2組 別 給藥后不同時(shí)間(周)大鼠體重(g) 停藥后3周16周 18周 20周 22周 24周 26周 體重對(duì)照組♂323.2±31.7338.7±35.0352.0±38.4367.0±41.1383.5±45.4400.8±46.6413.4±44.6♀283.5±27.1294.4±28.2307.5±27.8318.2±30.7327.8±35.2338.2±38.5350.1±32.4高劑量♂321.8±29.5333.6±30.5348.8±35.3360.7±40.4376.2±46.7394.4±48.4406.3±37.9♀280.3±22.8289.8±23.4300.2±24.7313.1±27.1322.0±32.1331.3±36.1344.1±40.4中劑量♂325.1±28.8335.2±29.4350.4±33.3357.6±34.7381.7±37.0398.3±41.5408.3±32.8♀282.0±27.1292.8±27.9303.6±29.4314.6±28.1325.4±31.7336.5±31.7348.4±31.2低劑量♂330.0±31.2344.4±35.1360.2±38.3376.3±38.6391.0±41.7410.0±44.3424.2±38.0♀291.4±30.6303.2±30.1315.8±29.7327.0±30.0336.8±37.4348.0±36.8360.0±32.4
表3 結(jié)腸安腸溶片連續(xù)給藥對(duì)大鼠攝食(g)飲水(ml)量的影響(X±SD)組別 動(dòng)物數(shù) 給藥后不同時(shí)間(周)大鼠攝食(g)飲水量(ml)動(dòng)物數(shù)(只)二周 四周 六周 八周 十周十二周(只)十四周對(duì)照組♂水 20 444.6±21.3 516.3±65.0 579.0±43.2 616.6±67.9 730.0±22.9 832.3±36.4 (15) 630.0±18.0食 248.3±14.5 288.3±17.5 331.6±7.6 372.6±14.1 414.3±6.0 465.6±12.8353.3±12.5♀水 20 410.0±29.0 485.0±20.5 524.0±42.1 549.6±27.0 674.6±36.4 770.0±30.7 (15) 521.6±23.0食 244.0±10.1 272.0±12.1 310.3±8.3 344.6±5.5 379.3±7.5 415.0±8.8 314.3±14.6高劑量♂水 20 432.3±19.7 504.3±23.5 587.3±53.5 591.6±50.8 724.3±38.1 815.3±23.4 (15) 610.6±16.2食 244.6±15.0 282.3±17.0 326.6±11.7 366.6±12.5 407.6±11.2 457.3±16.6345.6±8.1♀水 20 395.3±25.0 474.6±11.7 506.6±19.4 558.0±35.3 660.3±39.5 753.6±37.6 (15) 512.3±14.0食 242.0±13.7 265.0±11.7 294.3±9.2 335.0±8.6 372.0±13.1 409.3±13.0307.0±12.1中劑量♂水 20 420.6±13.2 510.0±21.0 580.6±31.6 600.0±65.0 736.6±42.1 822.6±33.1 (15) 620.3±33.3食 250.0±10.0 290.0±10.0 323.3±6.1 378.0±9.1 410.3±9.6 460.6±12.8356.6±8.5♀水 20 383.3±26.4 497.6±36.5 514.6±41.0 558.0±35.3 680.6±42.0 760.0±36.0 (15) 533.3±26.3食 240.0±10.0 270.0±18.0 308.3±7.6 340.0±5.0 375.3±14.1 412.3±11.2317.0±8.5低劑量♂水 20 426.6±15.2 498.0±19.9 590.6±39.1 606.3±25.0 717.0±25.1 840.3±25.5 (15) 614.6±14.1食 255.6±7.3 292.6±15.3 336.6±7.6 382.3±6.8 421.6±7.6 475.0±4.3 361.6±12.5♀水 20 418.0±19.4 470.3±31.0 510.6±36.3 539.0±42.2 667.6±30.2 780.0±26.0 (15) 517.3±19.6食 243.3±12.5 275.0±13.2 316.6±5.7 350.0±13.2 388.6±13.3 421.6±7.6 321.6±7.6
續(xù)表3給藥后不同時(shí)間(周)大鼠攝食(g)飲水量(ml)十六周 十八周二十周動(dòng)物數(shù) 二十二周 動(dòng)物數(shù) 二十四周 動(dòng)物數(shù) 二十六周 動(dòng)物數(shù) 停藥后三周(只) (只) (只) (只)677.3±46.4632.3±46.5702.3±22.5726.0±22.5602.0±46.3684.0±35.7 (10) 439.6±19.5388.3±7.6 405.0±15.0420.0±15.1430.6±6.0 442.3±11.6450.0±14.2 292.6±24.1545.0±30.0505.0±45.8552.0±24.2535.0±35.0480.6±35.2579.6±25.4 (10) 361.6±40.7338.3±36.1350.6±11.0360.0±10.0368.3±12.5378.6±12.6380.0±10.0 257.6±7.0656.6±39.0622.3±35.1687.3±31.6719.3±23.7590.0±35.5 (14) 628.0±35.6 (9)368.0±21.2376.3±5.1 390.0±17.4413.0±10.1420.3±5.5 430.6±10.0410.0±13.2 253.3±7.6521.0±26.5495.0±35.5534.6±39.0 (14) 477.6±30.5436.0±28.5525.0±27.8 (9)315.0±30.4323.3±6.1 344.0±7.9 351.6±12.5332.6±12.8343.3±17.5347.0±13.7 227.0±13.1660.0±47.2642.6±26.2699.0±16.5704.6±20.0852.6±43.8659.0±31.1 (10) 428.0±24.9381.6±6.5 406.6±13.3416.6±12.5426.6±10.1435.6±9.2 444.0±6.9 285.0±13.2538.3±36.1500.3±17.8546.6±20.8518.3±34.0488.0±33.7559.6±16.5 (10) 356.3±29.9335.3±11.0344.6±11.5355.3±9.8 361.6±16.0374.3±12.8378.3±15.2 250.6±9.0648.6±39.2615.3±22.4717.3±32.8696.3±26.5 (14) 556.1±52.9622.0±40.0 (9)413.6±33.6395.3±13.7414.3±15.6428.6±10.2439.0±4.5 423.3±12.5431.0±13.4 284.0±10.1530.0±18.0514.3±14.0560.6±20.5528.6±17.9475.6±25.0568.3±22.5 (10) 351.3±44.0345.3±9.0 357.3±5.8 368.3±7.6 378.6±10.4389.0±8.5 391.6±7.6 264.6±14.5
表4 結(jié)腸安腸溶片連續(xù)給藥對(duì)大鼠臟器指數(shù)的影響(X±SD)時(shí)間 組別 心 肝 脾 肺腎 腎上腺 甲狀腺(g/kg) (g/100g) (g/100g) (g/100g) (g/100g) (g/100g) (mg/100g)(mg/100g)給藥后 對(duì)照組 0.32±0.023.5±0.40.40±0.050.75±0.10.33±0.0415.4±2.214.0±1.813周高劑量組0.34±0.043.3±0.50.41±0.060.79±0.10.34±0.0416.0±3.314.6±1.9中劑量組0.32±0.053.4±0.60.45±0.070.75±0.10.33±0.0314.8±3.213.0±2.1低劑量組0.33±0.033.5±0.60.43±0.100.76±0.20.34±0.0315.0±2.215.0±2.3給藥后 對(duì)照組 0.31±0.063.3±0.40.39±0.070.70±0.20.31±0.0514.1±2.913.5±3.426周高劑量組0.33±0.043.1±0.30.40±0.050.72±0.10.32±0.0615.1±2.714.0±3.2中劑量組0.30±0.033.0±0.50.44±0.100.70±0.10.31±0.0714.0±2.513.6±2.9低劑量組0.31±0.043.2±0.40.42±0.080.71±0.10.32±0.0514.2±2.314.0±2.2停藥后 對(duì)照組 0.30±0.023.2±0.60.39±0.090.68±0.10.30±0.0413.7±3.212.9±1.53周 高劑量組0.31±0.043.2±0.50.40±0.110.68±0.09 0.31±0.0514.0±2.413.0±2.0中劑量組0.30±0.043.1±0.30.44±0.080.66±0.10.30±0.0313.5±2.112.7±1.2低劑量組0.29±0.033.2±0.40.42±0.070.69±0.10.31±0.0613.8±2.413.2±2.3
續(xù)表4時(shí)間 組別 睪丸 附睪 子宮 卵巢 前列腺 胸腺 腦(g/kg) (g/100g) (g/100g) (g/100g) (mg/100g) (g/100g) (g/100g) (g/100g)給藥后 對(duì)照組 0.56±0.030.21±0.030.20±0.0551.4±15.90.14±0.050.15±0.040.58±0.0713周高劑量組0.54±0.070.19±0.010.19±0.0550.9±12.10.13±0.020.16±0.050.60±0.06中劑量組0.54±0.020.20±0.070.20±0.0852.2±14.00.14±0.030.15±0.030.58±0.07低劑量組0.57±0.100.22±0.030.21±0.0553.5±11.90.15±0.030.15±0.050.56±0.08給藥后 對(duì)照組 0.55±0.100.20±0.050.19±0.0549.9±14.60.13±0.050.14±0.030.54±0.0726周高劑量組0.52±0.060.18±0.030.18±0.0448.6±12.80.12±0.030.15±0.030.56±0.06中劑量組0.53±0.100.19±0.050.20±0.0750.7±10.00.14±0.020.14±0.040.53±0.07低劑量組0.54±0.070.20±0.030.20±0.0551.5±14.10.14±0.030.14±0.030.52±0.06停藥后 對(duì)照組 0.53±0.090.17±0.030.18±0.0646.2±7.0 0.13±0.020.13±0.030.50±0.063周 高劑量組0.50±0.060.16±0.020.19±0.0546.6±8.0 0.12±0.040.14±0.020.51±0.07中劑量組0.52±0.080.18±0.020.17±0.0347.4±8.6 0.13±0.020.13±0.020.52±0.05低劑量組0.50±0.050.17±0.020.18±0.0348.8±6.6 0.13±0.020.13±0.030.50±0.07
表5 結(jié)腸安腸溶片連續(xù)給藥對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響(X±SD)時(shí)間 組別 動(dòng)物數(shù)ALTTP ALB ALPAST(只)(U/L) (g/L)(g/L) (U/L) (U/L)給藥對(duì)照組 1053.3±9.264.6±2.330.6±2.8224.1±36.9230.1±32.5后13高劑量組1050.4±9.365.1±2.431.5±3.3237.2±47.3233.7±31.8周 中劑量組1053.6±8.764.9±2.431.0±2.4224.8±40.2226.3±47.1低劑量組1052.0±8.365.0±2.830.3±2.7228.7±44.7230.5±37.1給藥對(duì)照組 1053.5±6.864.9±1.930.8±3.0222.5±46.9220.7±43.4后26高劑量組1051.8±7.864.2±2.230.7±2.6218.3±41.2214.6±46.5周 中劑量組1053.8±6.163.9±2.130.4±2.5219.3±39.7215.8±37.0低劑量組1054.2±6.765.9±2.831.1±2.8225.3±43.0216.3±39.2停藥對(duì)照組 1052.6±9.064.2±1.731.1±2.2224.5±36.5223.0±32.8后3 高劑量組1053.0±6.564.5±2.030.7±2.6220.8±36.8226.6±27.8周 中劑量組1053.1±6.465.2±2.130.5±2.1224.4±37.6219.3±38.5低劑量組1050.1±8.264.5±2.234.5±2.0215.9±38.4220.2±43.0
續(xù)表5時(shí)間 組別 動(dòng)物數(shù)UREA CR CHOLGLU T-BiL(只) (mmol/L)(μmol/L)(mmol/L)(mmol/L)(μmol/L)給藥對(duì)照組 106.8±0.953.8±5.82.0±0.35.6±0.77.1±0.6后13高劑量組106.9±0.953.3±6.32.1±0.35.5±0.97.0±0.7周 中劑量組106.8±1.252.8±7.42.0±0.25.5±0.96.9±0.8低劑量組106.7±1.153.0±8.52.0±0.25.4±0.97.0±1.0給藥對(duì)照組 107.0±1.055.0±6.32.0±0.35.6±0.87.3±0.6后26高劑量組106.9±1.054.0±8.42.1±0.25.5±0.77.0±0.8周 中劑量組107.0±0.953.2±7.82.1±0.35.6±0.77.3±0.9低劑量組107.1±0.756.0±7.72.0±0.35.5±0.77.0±0.8停藥對(duì)照組 107.0±1.051.9±7.02.0±0.25.8±0.77.0±0.8后3 高劑量組107.1±0.953.0±7.32.1±0.25.7±0.66.9±0.9周 中劑量組106.9±1.254.6±7.92.1±0.35.7±0.87.0±1.2低劑量組107.1±0.952.4±9.12.1±0.35.8±0.97.0±0.8
表6 結(jié)腸安腸溶片連續(xù)給藥對(duì)大鼠血常規(guī)的影響(X±SD)時(shí)間 組別動(dòng)物數(shù) WBC LY MO GR RBC HgbPitMCV MCH(只) (×109/L) (％) (％) (％) (×1012/L) (g/L)(×109/L)(fL) (Pg)給藥對(duì)照組 109.2±3.2 77.0±6.77.8±1.114.0±4.87.0±0.5133.9±10.3636.3±162.054.6±1.619.2±0.4后13高劑量組109.6±3.3 78.0±5.47.2±1.215.3±5.87.3±0.3136.2±8.2 681.2±137.054.9±2.019.0±0.2周 中劑量組109.3±2.8 76.7±4.77.3±1.414.8±4.87.1±0.4138.2±7.8 689.8±113.755.0±1.119.1±0.4低劑量組109.4±3.7 76.6±5.57.4±1.216.1±6.37.2±0.4135.2±13.0703.0±143.555.0±1.219.1±0.4給藥對(duì)照組 1011.1±3.676.1±6.18.0±1.215.0±7.57.1±0.4136.7±7.4 685.7±123.555.7±1.619.4±0.4后26高劑量組1011.5±3.675.6±6.77.7±1.016.0±6.27.1±0.2135.7±7.7 694.1±151.654.0±2.419.2±0.5周 中劑量組1011.4±3.874.5±6.17.3±1.418.2±6.96.9±0.3135.0±6.7 673.7±131.155.6±1.519.3±0.5低劑量組1011.0±3.176.0±5.77.5±1.716.9±6.17.1±0.4136.3±7.6 696.4±144.555.5±1.419.4±0.5停藥對(duì)照組 1011.0±4.876.6±7.37.2±1.516.6±8.07.0±0.5144.5±7.0 697.5±150.055.7±1.019.9±1.0后3 高劑量組1011.8±5.275.1±7.07.3±1.717.5±8.27.1±0.4136.9±8.6 712.0±147.755.3±1.719.7±0.4周 中劑量組1011.2±5.076.2±7.47.6±1.216.8±7.37.0±0 4138.7±7.2 680.8±158.755.4±2.019.8±0.4低劑量組1012.0±5.475.4±8.27.5±1.417.6±8.97.1±0.5137.1±8.5 700.6±156.255.7±1.519.5±0.5
實(shí)驗(yàn)例3 藥效學(xué)研究一、結(jié)腸安腸溶片對(duì)醋酸型潰瘍性腸炎的影響取180～220g雌性大鼠70只，禁食12小時(shí)，不禁水，隨機(jī)分6組，分別為正常對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性藥組，結(jié)腸安腸溶片高、中、低劑量組。除正常對(duì)照組外，其余5組均灌胃番瀉葉浸劑15ml/kg，每日一次，連續(xù)3日。禁食不禁水35小時(shí)，用20％氨基甲酸乙酯0.5g/kg腹腔注射輕度麻醉，用0.5％肥皂水2ml灌腸沖洗，20分鐘后，自肛門(mén)約8厘米處注入冰醋酸1ml，計(jì)時(shí)30秒鐘。大鼠清醒后正常飼養(yǎng)，自造模后第3日，取6只模型大鼠結(jié)腸光鏡下觀察。其余大鼠開(kāi)始給藥。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌腸(早晨禁食6小時(shí)，擠壓腸道，灌胃后用棉栓塞住肛門(mén)2小時(shí)，下午4點(diǎn)開(kāi)始進(jìn)食)給予賦形劑2g/kg；陽(yáng)性藥組灌胃補(bǔ)脾益腸丸1.62g/kg，結(jié)腸安腸溶片高、中、低劑量組分別灌腸10、5、2.5g(生藥)/kg(3.12、1.56、0.78g結(jié)腸安腸溶片粉/kg)。每日一次，連續(xù)7日。每日觀察大鼠的外觀情況等。末次給藥后，禁食12小時(shí)，不禁水，稱(chēng)體重后，戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈采血，用于測(cè)定腫瘤壞死因子(TNF)、白細(xì)胞介素—2(IL—2)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)。取全部結(jié)腸，肉眼觀察結(jié)腸變化(充血評(píng)分0分無(wú)充血；1分充血小于1/3；2分充血在全長(zhǎng)1/3～2/3之間；3分充血大于全長(zhǎng)2/3)(總評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0分無(wú)損傷；1分局部充血水腫，但未出現(xiàn)糜爛；2分輕度糜爛，長(zhǎng)度＜0.5cm；3分糜爛長(zhǎng)度在1.0cm～0.5cm之間；4分糜爛長(zhǎng)度＞1.0cm。注即充血水腫又有糜爛累計(jì)加分)，取近肛門(mén)8厘米結(jié)腸段(1cm)甲醛液固定，進(jìn)行組織切片檢查。
結(jié)果(1)外觀模型組大鼠給予番瀉葉后陸續(xù)出現(xiàn)稀便、拱腰，體重下降，活動(dòng)減少，毛失光澤，精神倦怠，給予醋酸后2～3天，有的大鼠出現(xiàn)腹脹、粘液便或血性便，有的大鼠腸道穿孔死亡。經(jīng)藥物治療后，大鼠脾虛癥狀有不同程度好轉(zhuǎn)，稀便逐漸減少，體重回升，活動(dòng)增加，精神狀態(tài)較好。見(jiàn)表7。
(2)結(jié)腸先處死的6只模型大鼠，肉眼觀察結(jié)腸粘膜水腫、充血。鏡下觀察；粘膜和粘膜下充血水腫，彌漫炎細(xì)胞浸潤(rùn)，粘膜大面積壞死，結(jié)構(gòu)破壞，出現(xiàn)大面積潰瘍，表明模型成立。給藥7日后的大鼠肉眼觀察給藥組結(jié)腸水腫面積和潰瘍面積與模型組比較顯著縮小，充血情況稍有好轉(zhuǎn)，綜合評(píng)分顯著低于模型組。光鏡下觀察，正常對(duì)照組結(jié)腸粘膜細(xì)胞排列整齊，粘膜完整，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組結(jié)腸粘膜層和粘膜下層有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體結(jié)構(gòu)破壞明顯，細(xì)胞大部分壞死脫落，形成潰瘍。陽(yáng)性藥組炎細(xì)胞大量減少，粘膜上皮基體恢復(fù)。結(jié)腸安腸溶片高劑量組炎細(xì)胞大量減少，粘膜上皮基本恢復(fù)，粘膜下肌層增厚。結(jié)腸安腸溶片中劑量組炎細(xì)胞多于高劑量組，大部分粘膜上皮基本恢復(fù)，粘膜下肌層大部分增厚。結(jié)腸安腸溶片低劑量組炎細(xì)胞仍有很多，但少于模型組，粘膜上皮修復(fù)不完全，仍可見(jiàn)腺體缺損。見(jiàn)表8。
(3)生化指標(biāo)結(jié)腸安腸溶片組血清中TNF、IgG明顯降低，IL-2明顯升高。見(jiàn)表9。
二、結(jié)腸安腸溶片對(duì)免疫型潰瘍型結(jié)腸炎的影響取125～155g大鼠80只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(10只)，模型組(70只)?？乖苽淙〈蠖?只，血栓致死，取結(jié)腸(距肛門(mén)10厘米至橫結(jié)腸處)粘膜，用生理鹽水研磨，冷凍3日，低溫離心3000轉(zhuǎn)30分鐘，取上清液，測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，按每次所需濃度與弗氏完全佐劑配成乳液。分別在首次、7日、14日、21日、28日在不同部位(足跖、皮下、腹股溝、腹腔)注射抗原(末次不加佐劑)4mg，于21日和28日各取3只大鼠，檢查模型是否成立。觀察大鼠外觀癥狀。將模型大鼠隨機(jī)分6組，模型對(duì)照組(11只)，灌腸給予賦形劑2g/kg，西藥對(duì)照組(10只)灌腸給予柳氮磺吡啶片0.86g/kg，中藥對(duì)照組(10只)灌胃給予固本益腸片1.64g/kg，結(jié)腸安腸溶片組(10、10、10只)，分別灌腸給予結(jié)腸安腸溶片10、5、2.5kg(生藥)/kg(3.12、1.56、0.78g結(jié)腸安腸溶片粉/kg)。每日一次，連續(xù)4周，末次給藥后，禁食12小時(shí)，不禁水，稱(chēng)體重后，戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈采血，用于測(cè)定一氧化氮(NO)丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)，取全部結(jié)腸，肉眼觀察結(jié)腸變化(充血評(píng)分0分無(wú)充血；1分充血小于全長(zhǎng)1/3；2分充血在全長(zhǎng)1/3～2/3之間；3分充血大于全長(zhǎng)2/3)，(總評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0分無(wú)損傷；1分局部充血水腫，但未出現(xiàn)糜爛；2分有輕度糜爛長(zhǎng)度＜0.5cm；3分糜爛長(zhǎng)度在1.0cm～0.5cm之間；4分糜爛長(zhǎng)度＞1.0cm。注即充血水腫又有糜爛累計(jì)加分)，取近肛門(mén)8厘米結(jié)腸段(1cm)甲醛液固定，進(jìn)行組織切片檢查，剩下結(jié)腸取近肛門(mén)9～13cm處，測(cè)定結(jié)腸粘膜中NO、MDA和SOD含量。
結(jié)果(1)造型21日3只大鼠結(jié)腸光鏡下可見(jiàn)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，粘膜和粘膜下充血水腫，杯狀細(xì)胞減少，造型28日3只大鼠結(jié)腸大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，粘膜和粘膜下充血水腫，杯狀細(xì)胞減少，腺體大部分破壞，粘膜脫落壞死。證明免疫型潰瘍性結(jié)腸炎模型成立。
(2)一般外觀給予抗原2周后，大鼠陸續(xù)開(kāi)始出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢(體重降低)，多數(shù)大鼠糞便不成形，個(gè)別有溏便，特臭，倦怠，活動(dòng)減少，毛皮不潔，有些出現(xiàn)拱背現(xiàn)象，隨著時(shí)間延長(zhǎng)癥狀加重。經(jīng)過(guò)4周藥物活動(dòng)治療后，模型組大鼠，外觀癥狀變化不明顯；西藥對(duì)照組大鼠第四周消瘦死亡1只，其余大鼠4只仍有溏便，其他基本恢復(fù)正常，體重較模型組增加，但無(wú)明顯差異，活動(dòng)有所增加；中藥對(duì)照組還有2只大鼠溏便，整體體重增加；結(jié)腸安腸溶片高劑量組大鼠無(wú)溏便現(xiàn)象，體重均增加，與模型組比較有顯著差異，外觀與正常大鼠相似；結(jié)腸安腸溶片中劑量組還有1只大鼠溏便，1只稀便，體重增加；結(jié)腸安腸溶片低劑量組3只有溏便現(xiàn)象，體重增長(zhǎng)緩慢，見(jiàn)表10。
(3)肉眼觀察結(jié)腸安腸溶片各劑量組結(jié)腸水腫面積、糜爛面積明顯小于模型組，充血評(píng)分值和總評(píng)分值，明顯低于模型組，見(jiàn)表11。
(4)光鏡下觀察正常組大鼠結(jié)腸粘膜上皮完整，腺體排列整齊，結(jié)構(gòu)正常。模型對(duì)照組有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，杯狀細(xì)胞減少，表面粘膜細(xì)胞脫落、壞死。西藥對(duì)照組仍可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，還有4只大鼠結(jié)腸粘膜細(xì)胞沒(méi)有完全修復(fù)好，中藥對(duì)照組有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，除3只大鼠結(jié)腸粘膜細(xì)胞沒(méi)有完全修復(fù)好外，其余大鼠結(jié)腸粘膜細(xì)胞基本修復(fù)。結(jié)腸安腸溶片高劑量組個(gè)別可見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，粘膜細(xì)胞基本修復(fù)正常。結(jié)腸安腸溶片中劑量組有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，3只大鼠結(jié)腸沒(méi)有完全修復(fù)完全，其余大鼠結(jié)腸粘膜細(xì)胞基本修復(fù)正常。結(jié)腸安腸溶片低劑量組粘膜修復(fù)狀況不如高劑量組，炎細(xì)胞浸潤(rùn)較上兩組多，但都有好于模型組。
(5)生化指標(biāo)結(jié)腸安腸溶片三個(gè)劑量組結(jié)腸粘膜NO和MDA含量明顯低于模型組，SOD含量顯著高于模型組，見(jiàn)表12。
表7結(jié)腸安腸溶片對(duì)醋酸型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠體重的影響組別 動(dòng)物數(shù) 體重(g)(g/kg) (只) 開(kāi)始 給醋酸前 結(jié)束前后差值正常對(duì)照組 10207.1±14.2215.6±14.8*226.6±12.7*19.5±6.8*模型組 10208.2±13.5194.5±10.8 210.7±19.1 1.8±19.4補(bǔ)脾益腸丸1.62 10207.8±13.9194.4±12.0 225.5±14.2 17.7±4.6*結(jié)腸安腸溶片10207.1±11.4193.7±13.3 228.2±15.1*19.1±6.9*3.12結(jié)腸安腸溶片10207.6±11.1194.8±14.1 227.0±12.6*17.2±6.8*1.56結(jié)腸安腸溶片10207.5±11.6195.5±12.6 226.6±15.8 15.7±8.70.78(注與模型組比較*表示P＜0.05，**P＜0.05，***P＜0.05下同)表8結(jié)腸安腸溶片對(duì)醋酸型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸的影響組別 動(dòng)物數(shù) 水腫面積充血積分糜爛面積 總評(píng)分(g/kg) (只) (cm2) (cm2)正常對(duì)照組 10 0***0.1±0.32***0***0.1±0.32***模型組 10 2.15±0.57 2.6±0.51 0.38±0.10 4.9±0.32補(bǔ)脾益腸丸1.62 10 1.20±0.76**1.0±0.47***0.17±0.12*** 3.8±1.13*結(jié)腸安腸溶片10 1.18±0.36*** 0.9±0.56***0.16±0.13*** 3.7±1.16**3.12結(jié)腸安腸溶片10 1.13±0.62**1.0±0.47***0.18±0.10*** 4.0±0.81**1.56結(jié)腸安腸溶片10 1.40±0.39**1.3±0.48***0.24±0.13* 4.2±0.79*0.78
表9結(jié)腸安腸溶片對(duì)醋酸型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清中TNF、IL-2、IgG含量的影響組別動(dòng)物數(shù) TNFIL-2IgGIgA(g/kg) (只) (ng/ml) (ng/ml)(μg/ml) (μg/ml)正常對(duì)照組100.86±0.23**2.41±0.71**1.62±0.41*0.12±0.02模型組101.15±0.16 1.44±0.31 1.95±0.22 0.14±0.03補(bǔ)脾益腸丸1.62100.91±0.22* 2.05±0.38**1.56±0.39*0.11±0.05結(jié)腸安腸溶片3.12 100.61±0.19*** 2.18±0.61**1.63±0.22** 0.11±0.02*結(jié)腸安腸溶片1.56 100.79±0.21**1.93±0.32**1.65±0.36*0.12±0.06結(jié)腸安腸溶片0.78 100.92±0.13**1.79±0.39* 1.84±0.32 0.13±0.03
表10結(jié)腸安腸溶片對(duì)免疫型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠體重的影響組 別 動(dòng)物數(shù) 體重(g) 動(dòng)物數(shù) 體重(g)(g/kg) (只) 造型前 造型后 前后差值 (只) 給藥前 給藥后 前后差值正常對(duì)照組10♀145.6±7.6 235.4±17.1**89.8±13.6***10♀236.4±17.7292.8±23.5**56.4±15.9*♂143.8±8.6 254.6±18.3* 110.8±15.7** ♂255.2±19.5330.0±20.9* 74.8±5.9*模 型 組70♀143.2±8.6 209.3±18.8 66.1±16.6 10♀212.4±12.4249.0±17.2 36.6±6.2♂144.0±11.2 223.5±31.67 79.5±27.5 ♂234.6±29.2277.6±50.2 43.0±25.0柳氮磺吡啶片9 ♀210.6±12.2247.7±24.8 41.0±18.20.86 ♂234.8±19.5305.0±38.6 70.2±24.6固本益腸片 10♀209.6±8.0 251.6±15.3 42.0±9.41.64 ♂236.8±45.7294.8±64.1 58.0±22.8結(jié)腸安腸溶片10♀212.2±8.4 267.8±21.6 55.6±15.1*3.12 ♂235.2±34.6311.8±48.9 76.6±16.1*結(jié)腸安腸溶片10♀212.4±15.9259.4±17.9 47.0±20.41.56 ♂235.0±19.6308.0±24.9 73.0±12.4*結(jié)腸安腸溶片10♀210.6±17.3253.6±15.1 43.0±5.50.78 ♂235.8±16.6296.8±17.6 61.0±11.8注動(dòng)物數(shù)均雌雄各半，柳氮磺吡啶片組給藥期間死亡1只。
表11結(jié)腸安腸溶片對(duì)免疫型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸的影響組 別動(dòng)物數(shù) 水腫面積 充血積分 糜爛面積 總評(píng)分(g/kg) (只) (cm2) (cm2)正常對(duì)照組 100***0.1±0.32***0***0.1±0.32***模 型 組 104.33±1.90 2.3±0.48 0.67±0.25 4.6±0.52柳氮磺胺砒啶0.869 2.62±1.39* 0.3±0.50***0.43±0.05**3.3±0.50***固本益腸片1.64 102.17±0.95** 0.2±0.42***0.46±0.09* 3.2±0.42***結(jié)腸安腸溶片3.12101.30±0.96***0.1±0.32***0.26±0.12*** 2.2±0.92**結(jié)腸安腸溶片1.56101.67±0.55***0.4±0.70***0.39±0.14**3.2±0.79***結(jié)腸安腸溶片0.78101.82±0.87** 0.7±0.82***0.41±0.17* 3.4±1.26*
表12結(jié)腸安腸溶片對(duì)免疫型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸粘膜和血中NO、MDA、SOD的影響組 別 動(dòng)物數(shù) NOMDA SOD NOMDA SOD(g/kg) (只)(μmol/mgProt)(nmol/mgProt) (U/mgProt)(μmol/L) (nmol/L) (U/L)正常對(duì)照組10 1.16±0.47***3.71±1.29***130.8±10.3*** 5.34±1.73***4.25±0.99 202.0±8.75**模 型 組10 3.33±1.136.97±1.53 65.9±24.3 12.46±4.85 8.21±2.16 187.9±10.28柳氮磺胺砒啶 9 2.24±0.58* 5.05±1.49* 94.6±25.7* 7.39±4.51* 5.68±1.43**204.2±6.39***0.86固本益腸片1.6410 1.95±1.08* 5.17±1.06** 97.1±19.9** 7.39±3.19* 3.59±1.45*** 226.6±13.7***結(jié)腸安腸溶片 10 1.72±0.57*** 4.18±1.01***113.5±20.5*** 6.44±3.81** 3.81±0.99*** 203.2±8.91**3.12結(jié)腸安腸溶片 10 1.92±0.72** 5.06±1.18** 100.7±25.0**7.74±3.65* 5.25±1.43**197.7±8.35*1.56結(jié)腸安腸溶片 10 2.11±0.72* 5.65±0.86* 93.8±29.3*0.78
三、鎮(zhèn)痛作用結(jié)腸安腸溶片對(duì)熱板法致小鼠疼痛的影響取雌性小鼠放于熱板上(55±1℃ GJ-8402型熱板測(cè)痛儀，浙江產(chǎn))篩選。以自小鼠放于熱板上至出現(xiàn)舔足所用的時(shí)間(秒)作為該鼠痛閾值，取痛閾值在8～22秒的小鼠60只，隨機(jī)分6組，對(duì)照組分別灌胃和灌腸交替進(jìn)行給予2.2/kg賦型劑，陽(yáng)性藥組灌胃補(bǔ)脾益腸丸2.34g/kg，結(jié)腸安腸溶片組灌胃15、7.5g(生藥)/kg(4.68、2.34g結(jié)腸安腸溶片粉/kg)、灌腸7.5、3.75g(生藥)/kg(2.34、1.17g結(jié)腸安腸溶片粉/kg)。每日1次，連續(xù)7日，末次給藥后1、2、3、4小時(shí)，測(cè)小鼠痛閾值，結(jié)果見(jiàn)表13。
結(jié)果表明結(jié)腸安腸溶片灌胃4.68、2.34g/kg和灌腸2.34g/kg給藥，均可以延長(zhǎng)小鼠痛閾值，與正常對(duì)照組比較差異顯著。
表13結(jié)腸安腸溶片對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用(熱板法)組別動(dòng)物數(shù)給藥途徑 分組痛閾 給藥不同時(shí)間痛閾值(秒)(只) 值(秒) 123 4正常對(duì)照 10 灌胃灌腸15.6±3.5316.5±3.41 17.2±3.12 16.5±2.79 17.8±3.55交替補(bǔ)脾益腸丸10 灌胃15.4±3.9526.0±4.76###31.4±7.58###28.8±5.75##27.0±7.54##2.34結(jié)腸安腸溶片 10 灌胃15.5±4.3528.9±9.94##35.1±6.67###29.9±9.41###31.0±8.61###4.68結(jié)腸安腸溶片 10 灌胃15.5±3.6832.0±8.97###29.8±8.20###29.4±9.23###24.6±8.43#2.34結(jié)腸安腸溶片 10 灌腸15.6±4.0334.3±7.83###31.4±4.99###29.2±7.51###24.4±6.62#2.34結(jié)腸安腸溶片 10 灌腸15.6±3.9226.7±9.12##29.4±5.66###22.8±7.17#22.2±6.761.17
結(jié)腸安腸溶片對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)的影響取小鼠60只，隨機(jī)分6組，分別灌胃和灌腸交替給予2.2/kg賦型劑，陽(yáng)性藥組灌胃補(bǔ)脾益腸2.34g/kg，結(jié)腸安腸溶片組灌胃15、7.5g(生藥)/kg、灌腸7.5、3.75g(生藥)/kg。每日1次，連續(xù)7日，末次給藥后1h，腹腔注射1％HAC10ml/kg，觀察15分鐘內(nèi)扭體次數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表14。
表14結(jié)腸安腸溶片對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)的影響15分鐘內(nèi)扭體次組別(g/kg) 動(dòng)物數(shù)(只) 給藥途徑 P數(shù)(次)正常對(duì)照- 10 灌胃灌腸交替20.7±7.2補(bǔ)脾益腸丸10 灌胃13.6±4.2 ＜0.052.34結(jié)腸安腸溶片10 灌胃11.8±5.0 ＜0.014.68結(jié)腸安腸溶片10 灌胃12.5±5.5 ＜0.052.34結(jié)腸安腸溶片10 灌腸12.9±4.25＜0.052.34結(jié)腸安腸溶片10 灌腸13.9±5.3 ＜0.051.17結(jié)果表明結(jié)腸安腸溶片灌胃4.68、2.34g/kg和灌腸2.34g/kg給藥，均能顯著減少醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。
結(jié)腸安腸溶片對(duì)小鼠二甲苯所致耳腫脹的影響取小鼠60只，隨機(jī)分6組，分別灌胃和灌腸交替給予2.2/kg賦型劑，陽(yáng)性藥組灌胃補(bǔ)脾益腸丸2.34g/kg，結(jié)腸安腸溶片組灌胃4.68、2.34g/k灌腸2.34、1.17g/kg。每日1次，連續(xù)7日，末次給藥后1h，給小鼠右耳涂二甲苯0.03ml/只，左耳作對(duì)照，2h拉頸處死小鼠，用直徑7mm打孔器將雙耳同部位的面積切下，用JN-A型精密扭力天平稱(chēng)重，以左右耳重量之差為腫脹程度。結(jié)果見(jiàn)表15。
表15 結(jié)腸安腸溶片對(duì)小鼠二甲苯所致耳腫脹的影響組別(g/kg)動(dòng)物數(shù)(只)給藥途徑 耳腫脹程度(mg)P正常對(duì)照-10 灌胃灌腸交替 9.3±2.26補(bǔ)脾益腸丸10 灌胃 6.4±2.59 ＜0.052.34結(jié)腸安腸溶片10 灌胃 5.9±2.42 ＜0.014.68結(jié)腸安腸溶片10 灌胃 4.8±2.59 ＜0.0012.34結(jié)腸安腸溶片灌腸 4.6±1.94 ＜0.0012.34結(jié)腸安腸溶片10 灌腸 13.9±5.3 ＞0.051.17結(jié)果表明結(jié)腸安腸溶片灌胃4.68、2.34g/kg和灌腸2.34g/kg給藥，均能夠明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹。
結(jié)腸安腸溶片對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響取小鼠60只，隨機(jī)分6組，分別灌胃和灌腸交替給予2.2/kg賦型劑，陽(yáng)性藥組灌胃補(bǔ)脾益腸丸2.34g/kg，結(jié)腸安腸溶片組灌胃4.68、2.34g/k灌腸2.34、1.17g/kg。每日1次，連續(xù)7日，末次給藥后1h，每只小鼠靜脈注射0.5％伊文氏蘭生理鹽水溶液10ml/kg，隨即腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml/只，20分鐘后脫頸椎處死小鼠，剪開(kāi)腹部皮膚肌肉，用6ml生理鹽水溶液沖洗腹腔，用吸管吸出洗滌液，合并生理鹽水至10ml，3000rpm離心15分鐘，取上清，于590nm處比色，用伊文氏蘭標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)出伊文氏蘭含量，結(jié)果見(jiàn)表16。
表16 結(jié)腸安腸溶片對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響伊文氏蘭含量組別(g/kg)動(dòng)物數(shù)(只)給藥途徑 P(μg/ml)正常對(duì)照- 10灌胃灌腸交替3.5±0.54補(bǔ)脾益腸丸10灌胃3.0±0.51＜0.052.34結(jié)腸安腸溶片10灌胃2.5±0.88＜0.014.68結(jié)腸安腸溶片10灌胃2.8±0.55＜0.052.34結(jié)腸安腸溶片灌腸2.74±0.73 ＜0.052.34結(jié)腸安腸溶片10灌腸2.9±0.75＞0.051.17結(jié)果表明結(jié)腸安腸溶片灌胃4.68、2.34g(生藥)/kg和灌腸2.34g(生藥)/kg給藥，均能夠明顯抑制冰醋酸所致的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增加。
本試驗(yàn)認(rèn)為結(jié)腸安腸溶片作用機(jī)制為1.降低血中和腸粘膜中NO含量，促進(jìn)潰瘍面愈合。2.降低血中腸粘膜MDA含量，提高SOD活性，減少粘膜損傷程度。3.降低TNF含量，增加IL-2含量，提高腸道防御功能。4.降低IgG含量，調(diào)節(jié)免疫功能。5.減輕血管水腫，降低血管通透性，利于組織修復(fù)。
以下通過(guò)實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物的制備方法。
實(shí)施例1 本發(fā)明藥物片劑的制備它由下列重量份的原料藥制成白頭翁750g黃 柏250g白 術(shù)550g白 芍250g炙甘草200g1)黃柏用5倍量85％乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，減壓回收乙醇至無(wú)醇味并濃縮至相對(duì)密度為1.35的稠膏，備用；2)藥渣與白頭翁、白術(shù)、白芍、炙甘草加7倍藥材量水煎煮3次，每次3小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.35的稠膏，與1)所得稠膏合并；3)將上述2)所得稠膏減壓干燥，控制真空度≤0.08MPa，溫度70～80℃，粉碎成細(xì)粉；4)將上述步驟3)所得細(xì)粉與適量羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素混合均勻，用75％7醇制粒，干燥后，于顆粒中加入適量硬脂酸鎂，充分混勻，壓片，包衣，即得。
實(shí)施例2 本發(fā)明藥物膠囊劑的制備它由下列重量份的原料藥制成白頭翁800g黃 柏300g白 術(shù)600g白 芍300g炙甘草240g1)黃柏用6倍量85％乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，減壓回收乙醇至無(wú)醇味并濃縮至相對(duì)密度為1.33的稠膏，備用；2)藥渣與白頭翁、白術(shù)、白芍、炙甘草加6倍藥材量水煎煮3次，每次3小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.33的稠膏，與1)所得稠膏合并；3)將上述2)所得稠膏減壓干燥，控制真空度≤0.08MPa，溫度70～80℃，粉碎成細(xì)粉；4)將上述步驟3)所得細(xì)粉與適量羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素混合均勻，用75％乙醇制粒，干燥后，裝入膠囊即得。
實(shí)施例3 本發(fā)明藥物顆粒劑的制備它由下列重量份的原料藥制成白頭翁850g黃 柏350g白 術(shù)650g白 芍350g炙甘草280g1)黃柏用5倍量85％乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，減壓回收乙醇至無(wú)醇味并濃縮至相對(duì)密度為1.30的稠膏，備用；2)藥渣與白頭翁、白術(shù)、白芍、炙甘草加5倍藥材量水煎煮3次，每次3小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.30的稠膏，與1)所得稠膏合并；3)將上述2)所得稠膏減壓干燥，控制真空度≤0.08MPa，溫度70～80℃，粉碎成細(xì)粉；4)將上述步驟3)所得細(xì)粉加入乙醇作粘合劑，加入淀粉作填充劑，壓制成顆粒劑。
權(quán)利要求
1.一種治療慢性結(jié)腸炎的藥物，其特征在于它是由下列重量分的原料藥制成的白頭翁 750～850份 黃 柏 250～350份 白術(shù) 550～650份白 芍 250～350份 炙甘草 200～280份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性結(jié)腸炎的藥物，其中各原料藥的用量為白頭翁 800份黃 柏 300份 白術(shù) 600份白 芍 300份炙甘草 240份。
3.權(quán)利要求1或2所述藥物的制備方法，它包括下列步驟1)黃柏用5～7倍量85％乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，減壓回收乙醇至無(wú)醇味并濃縮至相對(duì)密度為1.30～1.35的稠膏，備用；2)藥渣與白頭翁、白術(shù)、白芍、炙甘草加7～9倍藥材量水煎煮3次，每次3小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.30～1.35的稠膏，與1)所得稠膏合并；3)將上述2)所得稠膏減壓干燥，控制真空度≤0.08MPa，溫度70～80℃，粉碎成細(xì)粉，就制備成了本發(fā)明藥物的活性組分。
4.權(quán)利要求3所述藥物的制備方法，其中將步驟3)制得的活性組分加入制備不同劑型時(shí)所需的各種常規(guī)輔料，制備成任何一種常規(guī)劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療慢性結(jié)腸炎的藥物及制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。它是由下列重量分的原料藥制成的白頭翁750～850份，黃柏250～350份，白術(shù)550～650份，白芍250～350份，炙甘草200～280份。黃柏用5～7倍量85％乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，減壓回收乙醇至無(wú)醇味并濃縮至相對(duì)密度為1.30～1.35的稠膏，備用；藥渣與白頭翁、白術(shù)、白芍、炙甘草加7～9倍藥材量水煎煮3次，每次3小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.30～1.35的稠膏，合并稠膏；將所得稠膏減壓干燥，控制真空度≤0.08MPa，溫度70～80℃，粉碎成細(xì)粉，即得活性組分。本發(fā)明藥物適用于濕熱蘊(yùn)結(jié)，脾虛夾濕型潰瘍性結(jié)腸炎。是一種高效、無(wú)毒的治療藥物。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1631413SQ20041001120
公開(kāi)日2005年6月29日 申請(qǐng)日期2004年11月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月8日
發(fā)明者金向群 申請(qǐng)人:劉曉峰