專利名稱：地黃提取物的抗哮喘和抗過(guò)敏的醫(yī)藥用途的制作方法
術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，一種有效地預(yù)防和治療哮喘病、慢性阻塞性肺病(COPD)、過(guò)敏病癥的天然植物提取物的醫(yī)藥用途。本發(fā)明特別適用于治療和預(yù)防哮喘。也可用于治療和預(yù)防過(guò)敏性鼻炎和過(guò)敏性皮膚病。
背景技術(shù)：
哮喘是變應(yīng)原引起的呼吸道過(guò)敏反應(yīng)性炎癥性疾病。變應(yīng)原是引起哮喘的發(fā)病和發(fā)展的重要因素，變應(yīng)原吸入氣道后沉積于氣道黏膜上，通過(guò)局部和全身免疫反應(yīng)而引起氣道變應(yīng)性炎癥。吸入變應(yīng)原引起氣道變應(yīng)性炎癥分致敏和致炎兩個(gè)階段。特應(yīng)性患者開(kāi)始吸入某種變應(yīng)原后產(chǎn)生致敏，機(jī)體即可對(duì)這種變應(yīng)原呈敏感狀態(tài)。在致敏階段，機(jī)體主要變化是氣道產(chǎn)生與變應(yīng)原相應(yīng)的特異性抗體IgE，該抗體IgE與氣道內(nèi)的肥大細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞和巨嗜細(xì)胞均有親和力，這些特異性抗體IgE與氣道內(nèi)的這些細(xì)胞結(jié)合形成了氣道和機(jī)體的致敏狀態(tài)。當(dāng)相同的變應(yīng)原再次吸入氣道時(shí)即可導(dǎo)致肥大細(xì)胞等激活并釋放炎性介質(zhì)，引起氣道變應(yīng)原性炎癥并導(dǎo)致哮喘發(fā)作，這就是致炎階段。也是哮喘病的發(fā)病過(guò)程。
支氣管哮喘是世界范圍內(nèi)最為常見(jiàn)的慢性呼吸道疾病，保守估計(jì)全世界至少有一億以上的人患哮喘病，近年來(lái)，因其患病率和死亡率均呈上升的趁勢(shì)。哮喘已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題而受到世界各國(guó)的極大關(guān)注。因此需要提供有效地治療哮喘病的藥物和方法。
近三十年來(lái)，全世界對(duì)治療哮喘病的藥物進(jìn)行了大量的開(kāi)發(fā)研究工作。已經(jīng)開(kāi)發(fā)出來(lái)的治療哮喘病的藥物有β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑類、α-腎上腺素能受體拮抗劑類、氨茶堿類、膽堿能受體拮抗劑類、鈣離子拮抗劑類、鉀離子通道激動(dòng)劑、糖皮質(zhì)激素、細(xì)胞膜穩(wěn)定劑(色甘酸鈉、尼多考米鈉)、抗組胺藥物、白三烯受體拮抗劑、血小板活化因子(PAF)拮抗劑、特異性免疫治療劑、非特異性免疫治療劑等。哮喘是一種機(jī)理極為復(fù)雜的多因素疾病，是多細(xì)胞多介質(zhì)參與的炎癥性疾病。上述這些藥物(或者治療方法)作用機(jī)理單一(對(duì)一種或二、三種介質(zhì)、因子、受體或通道起作用)，這些藥物或者治療效果不明顯、或者口服無(wú)效須特殊途徑給藥、或者副作用大無(wú)法長(zhǎng)期使用。目前臨床上普遍采用的也是最有效的治療方法是長(zhǎng)期吸入糖皮質(zhì)激素(輕中度吸入色甘酸鈉、尼多考米鈉)抗炎治療，哮喘發(fā)作時(shí)吸入β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑、膽堿能受體拮抗劑等支氣管擴(kuò)張劑。這些治療方法對(duì)緩解哮喘癥狀，改善哮喘病人的生活質(zhì)量有一定的效果，但沒(méi)有使哮喘病的發(fā)病率和死亡率有所降低。降低哮喘病的發(fā)病率和死亡率、改善哮喘病的預(yù)后仍然缺乏有效手段(李明華等，哮喘病學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1998，p2)。治療哮喘病需要更有效的和更安全的藥物。
慢性阻塞性肺病的病因目前還不太清楚，但與氣道炎癥有關(guān)是肯定的，目前使用長(zhǎng)期吸入糖皮質(zhì)激素抗炎治療和吸入β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑、膽堿能受體拮抗劑等支氣管擴(kuò)張劑治療，是有一定的效果的。但這些藥物的治療效果并不是十分理想，尋找更有效的治療慢性阻塞性肺病的藥物是非常必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及治療哮喘病和其它過(guò)敏性疾病的中藥藥物組合物，特別涉及以中藥地黃中所含有的環(huán)烯醚萜苷為其藥物有效成分的天然藥物制劑。
地黃是玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libsch.的新鮮塊莖或干燥塊莖，多年生草本，主要為栽培品，亦野生于海拔50-1100米的山坡及路旁荒地。分布于遼寧、內(nèi)蒙古、河北、河南、山西、陜西、山東、安徽、浙江、湖北、湖南、四川等地。文獻(xiàn)記載，地黃中含有環(huán)烯醚萜苷類、單萜及其苷、酚苷、有機(jī)酸和有機(jī)酸酯苷、多糖、氨基酸、甾醇等多種化學(xué)成分，及鈣、鎂、鉀、鐵、鋅、錳等二十種金屬元素。
現(xiàn)行藥典記載，地黃有鮮地黃、生地黃、熟地黃之分，鮮地黃具有清熱生津，涼血，止血的功效。用于熱風(fēng)傷陰，舌絳煩渴，發(fā)斑發(fā)疹，吐血，衄血，咽喉腫痛。生地黃具有清熱涼血，養(yǎng)陰，生津的功效。用于熱病舌絳煩渴，陰虛內(nèi)熱，骨蒸勞熱，內(nèi)熱消渴，吐血，衄血，發(fā)斑發(fā)疹。熟地具有滋陰補(bǔ)血，益精填髓的功效。用于肝腎陰虛，腰膝酸軟，骨蒸潮熱，盜汗遺精，內(nèi)熱消渴，血虛萎黃，心悸怔忡，月經(jīng)不調(diào)，崩漏下血，眩暈，耳鳴，須發(fā)早白。均無(wú)抗哮喘、抗過(guò)敏功效的記載。用于制備治療哮喘病、治療慢性阻塞性肺病、過(guò)敏性疾病的地黃提取物的地黃，是鮮地黃、生地黃以及鮮地黃自然干燥品(曬干或風(fēng)干)或者鮮地黃用沸水煮5-10分鐘(殺酶)后，曬干或風(fēng)干的干燥品。用于制備治療哮喘病、治療慢性阻塞性肺病、過(guò)敏性疾病的地黃總苷提取物使用的地黃，是鮮地黃、生地黃以及鮮地黃自然干燥品(曬干或風(fēng)干)或者鮮地黃用沸水煮5-10分鐘(殺酶)后，曬干或風(fēng)干的干燥品。
本發(fā)明的目的是提供地黃提取物在制備治療哮喘病、治療慢性阻塞性肺病、過(guò)敏性疾病和炎癥性疾病的藥物制劑中的應(yīng)用。地黃提取物是從中藥地黃中提取的，包括地黃的水提取物、醇提取物、水醇提取物，以及用其它溶劑從地黃中提取出來(lái)的物質(zhì)。特別地，是指從地黃中提取出來(lái)的含地黃環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分為有效成分的地黃總苷提取物，地黃總苷提取物主要由以下化學(xué)成分組成梓醇(catalpol)、地黃苷A，B，C，D(rehmannioside A，B，C，D)、乙酰梓醇(acetylcatalpol)、二氫梓醇(dihydrocatalpol等，以及其它環(huán)烯醚萜類成分、酚苷和其它微量成分，并且以梓醇為主要有效成分。所述地黃總苷提取物總苷含量可以不低于50％，梓醇含量可以不低于20％。
地黃提取物是一種新型的具有治療哮喘、治療慢性阻塞性肺病、抗過(guò)敏藥理活性的植物提取物，具有毒性小，長(zhǎng)期使用療效較佳等特點(diǎn)。
地黃總苷提取物是一種新型的具有抗哮喘、抗過(guò)敏藥理活性的植物提取物，具有用藥劑量小，毒性小，長(zhǎng)期使用療效較佳等特點(diǎn)。
地黃提取物急性毒性試驗(yàn)，用Wistar健康小鼠，口服最大給藥量相當(dāng)于地黃生藥150g/kg以上，未見(jiàn)動(dòng)物死亡；腹腔注射給藥LD50相當(dāng)于生藥50/kg，靜脈注射給藥LD50為20～30g/kg。
環(huán)烯醚萜總苷含量大于50％，梓醇含量大于20％的地黃總苷提取物，用Wistar健康小鼠做急性毒性試驗(yàn)，口服最大給藥量為56.5g/kg，未見(jiàn)動(dòng)物死亡；腹腔注射給藥LD50為18.5～25.5g/kg，靜脈注射給藥LD50為2.47～3.15g/kg。
本發(fā)明提供的地黃總苷，可以與一種或多種藥學(xué)上可接受的鋪料成分混合，以及含地黃總苷的組合物中進(jìn)一步含有β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑。
本發(fā)明提供了治療哺乳動(dòng)物呼吸道免疫介導(dǎo)的炎性疾病的方法，所述方法包括給所述的哺乳動(dòng)物施用治療有效量的地黃總苷提取物，或施用含有地黃總苷提取物的藥物組合物，或進(jìn)一步含有β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑的所述組合物。
地黃總苷提取物的藥物組合物可以是各種形式，包括口服劑型，吸入形式以及可注射和輸注的溶液。當(dāng)以吸入劑或氣霧劑形式使用時(shí)，地黃總苷提取物與藥學(xué)上可接受的載體溶液或可轉(zhuǎn)化成氣霧劑的形式的干粉結(jié)合使用。與此類似，當(dāng)以口服給藥使用時(shí)，地黃總苷提取物與使用于口服給藥的藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合使用。當(dāng)用于治療免疫介導(dǎo)的炎性皮膚病時(shí)，地黃總苷提取物可以與無(wú)毒的、藥學(xué)上可接受的局部用載體結(jié)合使用。地黃總苷提取物可以與哮喘治療劑，如β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑、膽堿能受體拮抗劑、氨茶堿類、糖皮質(zhì)激素、抗組胺藥物等結(jié)合使用。
地黃總苷提取物用于預(yù)防和治療免疫介導(dǎo)的炎性疾病，特別是包括哮喘在內(nèi)的與呼吸道相關(guān)的疾病，以及特別是與慢性哮喘相關(guān)的應(yīng)答過(guò)強(qiáng)和變應(yīng)性鼻炎。因此本發(fā)明也提供了治療免疫介導(dǎo)的炎性疾病的方法，該方法包括給有免疫介導(dǎo)的炎性疾病患者用治療有效劑型和劑量的地黃總苷提取物。
本發(fā)明的地黃提取物的給藥量，因患者的狀態(tài)、體重、給藥方式等不同而異。比如在非口服情況下、肌內(nèi)、靜脈、腸內(nèi)給藥，以地黃生藥計(jì)算0.20mg-2000mg/kg.日，優(yōu)選2.0mg-200mg/kg.日，口服情況下以地黃生藥計(jì)算2.0-20g/kg.日，優(yōu)選20-2000mg/kg.日。
本發(fā)明的環(huán)烯醚萜總苷含量大于50％，梓醇含量大于20％的地黃總苷提取物的給藥量，因患者的狀態(tài)、體重、給藥方式等不同而異。比如在非口服情況下、肌內(nèi)、靜脈、腸內(nèi)給藥0.01mg-100mg/kg.日，優(yōu)選0.1mg-10mg/kg.日，口服情況下0.1-1000mg/kg.日，優(yōu)選1-100mg/kg.日。
具體實(shí)施例方式
用以下的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作具體說(shuō)明，但本發(fā)明并不限于下列實(shí)施例包含的內(nèi)容。
取地黃20kg，用水160升煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加水120升煮沸提取2小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加水120升煮沸提取2小時(shí)，濾取提取液，合并水提取液，真空濃縮至20升，得地黃提取液，置于冰箱中保存。
地黃提取液治療哮喘病的臨床研究1、病例選擇60例，男30例，女30例，年齡16-60歲，按照李明華等主編《哮喘病學(xué)》(人民衛(wèi)生出版社，1998年，p165)的標(biāo)準(zhǔn)診斷，均為支氣管哮喘病人。隨機(jī)分成2組，每組30例，男15例，女15例；A組為治療組，B為對(duì)照組。2、治療方法，治療組用地黃提取液口服，每日3次，每次8ml，連續(xù)服用30天；對(duì)照組用丙酸倍氯米松氣霧劑，每日2次，每次200μg，連續(xù)服用30天。3、治療結(jié)果，治療結(jié)束時(shí)，治療組治愈22例，有效8例；對(duì)照組治愈10例，有效20例。治療結(jié)束后1個(gè)月，治療組治愈14例，有效13例；對(duì)照組治愈5例，有效18例。
取地黃1kg，用水8000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加水6000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加水6000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，合并水提取液，真空濃縮至干，得地黃粗提取物(1)430g。
卵白蛋白氣霧吸入引喘試驗(yàn)取200-250g豚鼠60只，雌雄各半，先于右后腿外側(cè)肌肉注射4％卵白蛋白生理鹽水溶液0.2ml/只，同時(shí)腹腔注射4％氫氧化鋁凝膠0.2ml致敏。從致敏第二天起，動(dòng)物隨機(jī)分為2組對(duì)照組、治療組(4.0g/kg)。治療組用地黃粗提取物(1)4.0g/kg灌胃給藥，共14天，末次藥后，將動(dòng)物放于密閉的玻璃鐘罩內(nèi)，待安靜后，啟動(dòng)空氣壓縮機(jī)，以53kPa(400mmHg)的恒壓噴入3.5％卵白蛋白生理鹽水30秒鐘，觀察6分鐘內(nèi)豚鼠出現(xiàn)喘息性抽搐的潛伏期與發(fā)生抽搐的動(dòng)物數(shù)。(徐叔云，卞如濂，陳修主編，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1991年11月第二版，1199頁(yè))。
表1、地黃粗提取物(1)對(duì)藥物引豚鼠喘的影響組別 動(dòng)物數(shù)劑量 引喘潛伏期 抽搐動(dòng)物數(shù)(n) (g/kg)(秒)(只)對(duì)照 10- 62.8±31.7 10/10地黃粗提取物(1)104.0 149.5±97.8*9/10
注與空白對(duì)照組比較P＜0.05認(rèn)為差異顯著，(以*表示)。
試驗(yàn)結(jié)果顯示，地黃粗提取物(1)4.0g/kg劑量能顯著延長(zhǎng)卵白蛋白生理鹽水溶液引喘豚鼠的潛伏期，與對(duì)照組相比有顯著差異(P＜0.05)，表明地黃粗提取物(1)具有一定的平喘作用。
被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)(PCA)將大鼠體按重隨機(jī)分為2組，10只/組，♀♂各半，分籠飼養(yǎng)，5只/籠。分別為空白對(duì)照組、試藥組4.0g/kg.d。試驗(yàn)采用治療性給藥地黃粗提取物(1)4.0g/kg.d，在抗原攻擊前連續(xù)給藥地黃粗提取物(1)14d。
抗血清制備將上述天花粉氫氧化鋁懸液四只腳掌注射，每只腳掌注射0.1ml，共0.4ml。10-15d成熟，眼球放血約10ml，以3000轉(zhuǎn)/min離心15min，取上層血清即得抗血清。
被動(dòng)皮膚致敏將試驗(yàn)各組大鼠背部脫毛，脊柱兩側(cè)距中線1.5cm，各取兩點(diǎn)，每點(diǎn)間隔2cm，面積約1×1cm2，共4點(diǎn)。分別在背部皮膚內(nèi)注射抗血清的不同稀釋度(1∶30 1∶40)。48h后進(jìn)行定量的相應(yīng)抗原攻擊。尾靜脈注射天花粉加依文思藍(lán)溶液1mg/kg，30min后斷頭處死。
觀察指標(biāo)皮內(nèi)注射抗血清的局部皮膚反應(yīng)，并測(cè)量依文思藍(lán)滲出的藍(lán)斑直徑大小。計(jì)算PCA抑制百分率(％)。PCA抑制百分率＝(空白對(duì)照組藍(lán)斑直徑-用藥組藍(lán)斑直徑)/空白對(duì)照組藍(lán)斑直徑×100％(徐叔云，卞如濂，陳修主編，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1991年11月第二版，1197頁(yè))表2、地黃粗提取物(1)對(duì)大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)影響組別 動(dòng)物數(shù) 劑量mg/kg不同血清濃度藍(lán)斑直徑(cm)(只) 1∶301∶40空白對(duì)照 10 水 1.45±0.22 0.90±0.25地黃粗提取物(1)10 150.0 0.95±0.21* 0.57±0.22*注與空白對(duì)照組比較P＜0.05認(rèn)為差異顯著，(以*表示)。
試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。從表中結(jié)果可以看出，試藥地黃粗提取物(1)在抗血清稀釋度1∶30，1∶40時(shí)，表現(xiàn)出顯著性抑制藍(lán)斑直徑(P＜0.05)，抑制率為33.1％和30.％。表明地黃粗提取物(1)對(duì)被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)有一定的抑制作用。
取地黃1kg，用70％的乙醇水溶液8000ml回流提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加70％的乙醇水溶液6000ml回流提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加70％的乙醇水溶液6000ml回流提取1小時(shí)，濾取提取液，合并提取液，真空濃縮至干，得地黃粗提取物(2)230g。
卵白蛋白氣霧吸入引喘試驗(yàn)取200-250g豚鼠60只，雌雄各半，先于右后腿外側(cè)肌肉注射4％卵白蛋白生理鹽水溶液0.2ml/只，同時(shí)腹腔注射4％氫氧化鋁凝膠0.2ml致敏。從致敏第二天起，動(dòng)物隨機(jī)分為2組對(duì)照組、治療組，治療組用地黃粗提取物(2)2.5g/kg灌胃給藥，共14天，末次藥后，將動(dòng)物放于密閉的玻璃鐘罩內(nèi)，待安靜后，啟動(dòng)空氣壓縮機(jī)，以53kPa(400mmHg)的恒壓噴入3.5％卵白蛋白生理鹽水30秒鐘，觀察6分鐘內(nèi)豚鼠出現(xiàn)喘息性抽搐的潛伏期與發(fā)生抽搐的動(dòng)物數(shù)。(徐叔云等主編，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1991年第二版，1199頁(yè))表3、地黃粗提取物(2)對(duì)藥物引豚鼠喘的影響組別 動(dòng)物數(shù) 劑量 引喘潛伏期 抽搐動(dòng)物(n) (g/kg)(秒)數(shù)(只)對(duì)照 10 - 59.8±30.6 10/10地黃粗提取物(2) 10 2.5152.5±101.7* 9/10注與空白對(duì)照組比較P＜0.05認(rèn)為差異顯著，(以*表示)。
試驗(yàn)結(jié)果顯示，地黃粗提取物(2)2.5g/kg劑量能顯著延長(zhǎng)卵白蛋白生理鹽水溶液引喘豚鼠的潛伏期，與對(duì)照組相比有顯著差異(P＜0.05)，表明地黃粗提取物(2)具有一定的平喘作用。
取地黃1kg，用甲醇8000ml回流提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加甲醇6000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加甲醇6000ml回流提取1小時(shí)，濾取提取液，合并提取液，真空濃縮至干，得地黃粗提取物(3)216g。
卵白蛋白氣霧吸入引喘試驗(yàn)取200-250g豚鼠60只，雌雄各半，先于右后腿外側(cè)肌肉注射4％卵白蛋白生理鹽水溶液0.2ml/只，同時(shí)腹腔注射4％氫氧化鋁凝膠0.2ml致敏。從致敏第二天起，動(dòng)物隨機(jī)分為2組對(duì)照組、地黃粗提取物(3)組，地黃粗提取物(3)組用地黃粗提取物(3)2.5g/kg灌胃給藥，共14天，末次藥后，將動(dòng)物放于密閉的玻璃鐘罩內(nèi)，待安靜后，啟動(dòng)空氣壓縮機(jī)，以53kPa(400mmHg)的恒壓噴入3.5％卵白蛋白生理鹽水30秒鐘，觀察6分鐘內(nèi)豚鼠出現(xiàn)喘息性抽搐的潛伏期與發(fā)生抽搐的動(dòng)物數(shù)。(徐叔云，卞如濂，陳修主編，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1991年11月第二版，1199頁(yè))。
表4、地黃粗提取物(3)對(duì)藥物引豚鼠喘的影響組別 動(dòng)物數(shù)劑量 引喘潛伏期 抽搐動(dòng)物數(shù)(n) (g/kg)(秒) (只)對(duì)照 10- 59.8±30.6 10/10地黃粗提取物(3)102.5 152.5±101.7*9/10注與空白對(duì)照組比較P＜0.05認(rèn)為差異顯著，(以*表示)。
試驗(yàn)結(jié)果顯示，地黃粗提取物(3)2.5g/kg劑量能顯著延長(zhǎng)卵白蛋白生理鹽水溶液引喘豚鼠的潛伏期，與對(duì)照組相比有顯著差異(P＜0.05)，表明地黃粗提取物(3)具有一定的平喘作用。
取地黃2kg，用水16000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加水12000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加水12000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，合并水提取液，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的純化，得地黃總苷135g，HPLC、TLC檢測(cè)表明含有梓醇(catalpol)、地黃苷A，B，C，D(rehmanniosideA，B，C，D)、乙酰梓醇(acetylcatalpol)、二氫梓醇(dihydrocatalpol等，還含有少量的酚苷。含量測(cè)定表明，梓醇含量為21.3％，環(huán)烯醚萜總苷含量為51.4％。
卵白蛋白氣霧吸入引喘試驗(yàn)取200-250g豚鼠60只，雌雄各半，先于右后腿外側(cè)肌肉注射4％卵白蛋白生理鹽水溶液0.2ml/只，同時(shí)腹腔注射4％氫氧化鋁凝膠0.2ml致敏。從致敏第二天起，動(dòng)物隨機(jī)分為2組對(duì)照組、地黃總苷組，地黃總苷組用地黃總苷150mg/kg灌胃給藥，共14天，末次藥后，將動(dòng)物放于密閉的玻璃鐘罩內(nèi)，待安靜后，啟動(dòng)空氣壓縮機(jī)，以53kPa(400mmHg)的恒壓噴入3.5％卵白蛋白生理鹽水30秒鐘，觀察6分鐘內(nèi)豚鼠出現(xiàn)喘息性抽搐的潛伏期與發(fā)生抽搐的動(dòng)物數(shù)。(徐叔云等主編，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1991年第二版，1199頁(yè))。
表5、地黃總苷對(duì)藥物引豚鼠喘的影響組別 動(dòng)物數(shù)劑量 引喘潛伏期 抽搐動(dòng)物數(shù)(n) (mg/kg)(秒)(只)對(duì)照 10- 58.7±32.3 10/10RGTG5010150.0 145.5±95.3*9/10注與空白對(duì)照組比較P＜0.05認(rèn)為差異顯著，(以*表示)。
試驗(yàn)結(jié)果顯示，地黃地黃總苷150mg/kg劑量能顯著延長(zhǎng)卵白蛋白生理鹽水溶液引喘豚鼠的潛伏期，與對(duì)照組相比有顯著差異(P＜0.05)，表明地黃地黃總苷具有一定的平喘作用。
被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)(PCA)將大鼠體按重隨機(jī)分為2組，10只/組，♀♂各半，分籠飼養(yǎng)，5只/籠。分別為空白對(duì)照組、試藥組150mg/kg.d。試驗(yàn)采用治療性給藥的地黃總苷，在抗原攻擊前連續(xù)給藥地黃總苷14d。
抗血清制備將上述天花粉氫氧化鋁懸液四只腳掌注射，每只腳掌注射0.1ml，共0.4ml.10-15d成熟，眼球放血約10ml，以3000轉(zhuǎn)/min離心15min，取上層血清即得抗血清。
被動(dòng)皮膚致敏將試驗(yàn)各組大鼠背部脫毛，脊柱兩側(cè)距中線1.5cm，各取兩點(diǎn)，每點(diǎn)間隔2cm，面積約1×1cm2，共4點(diǎn)。分別在背部皮膚內(nèi)注射抗血清的不同稀釋度(1∶30 1∶40)。48h后進(jìn)行定量的相應(yīng)抗原攻擊。尾靜脈注射天花粉加依文思藍(lán)溶液1mg/kg，30min后斷頭處死。
觀察指標(biāo)皮內(nèi)注射抗血清的局部皮膚反應(yīng)，并測(cè)量依文思藍(lán)滲出的藍(lán)斑直徑大小。
計(jì)算PCA抑制百分率(％)。PCA抑制百分率＝(空白對(duì)照組藍(lán)斑直徑-用藥組藍(lán)斑直徑)/空白對(duì)照組藍(lán)斑直徑×100％(徐叔云等主編，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1991年第二版，1197頁(yè))。
表6、地黃總苷對(duì)大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)影響組別動(dòng)物數(shù) 劑量不同血清濃度藍(lán)斑直徑(cm)(只)mg/kg 1∶30 1∶40空白對(duì)照10 水1.42±0.28 0.85±0.28地黃總苷10 150.0 0.95±0.21*0.59±0.22*注與空白對(duì)照組比較P＜0.05認(rèn)為差異顯著，(以*表示)。
試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。從表中結(jié)果可以看出，試藥地黃總苷在抗血清稀釋度1∶30，1∶40時(shí)，表現(xiàn)出顯著性抑制藍(lán)斑直徑(P＜0.05)，抑制率為33.1％和30.％。表明試藥對(duì)被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)有一定的抑制作用。
遲發(fā)性足墊反應(yīng)試驗(yàn)將小鼠按體重隨機(jī)分組，10只/組，♀♂各半，分籠飼養(yǎng)，5只/籠，共2組，分別為空白對(duì)照組、地黃總苷組。采用治療性給藥。，致敏前給藥5d至致敏后繼續(xù)給藥5d，共10d。
致敏5d后NIH小鼠頸部s.c5％綿羊紅細(xì)胞(SRBC)0.05ml/只致敏。6d后右足墊s.c5％綿羊紅細(xì)胞(SRBC)0.02ml，進(jìn)行攻擊。左足注射等量生理鹽水作對(duì)照。24h后，末次給藥50min后處死動(dòng)物。從踝關(guān)節(jié)部位剪下兩足稱重。求出兩足的重量差，計(jì)算足腫脹抑制率。足腫脹抑制率＝空白對(duì)照組足腫脹程度-用藥組足腫脹程度)/空白對(duì)照組足腫脹程度×100％，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。(徐叔云等主編，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，1991年第二版，1226頁(yè)，1228頁(yè))表7、地黃總苷對(duì)綿羊紅細(xì)胞引起的小鼠遲發(fā)性足墊反應(yīng)的影響動(dòng)物數(shù)劑量 足腫脹程度 抑制率組別(只) (mg/kg)(g)(％)空白對(duì)照組9 水 2.51±0.73 ---地黃總苷 10400.0 1.72±0.76*31.47注與空白對(duì)照組比較P＜0.05認(rèn)為差異顯著，(以*表示)。
從表中結(jié)果可以看出，地黃總苷與空白對(duì)照組比較表現(xiàn)出顯著性抑制足腫脹程度(P＜0.05)，抑制率為31.47％。表明地黃總苷對(duì)抑制綿羊紅細(xì)胞引起的小鼠遲發(fā)性免疫反應(yīng)效果較明顯。
取地黃30kg，用水240000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加水180000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，藥渣再加水180000ml煮沸提取1小時(shí)，濾取提取液，合并水提取液，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的純化，真空干燥后得地黃總苷2.12kg，HPLC、TLC檢測(cè)表明含有梓醇(catalpol)、地黃苷A，B，C，D(rehmannioside A，B，C，D)、乙酰梓醇(acetylcatalpol)、二氫梓醇(dihydrocatalpol等，還含有少量的酚苷。含量測(cè)定表明，梓醇含量為21.4％，環(huán)烯醚萜總苷含量為51.5％。
地黃總苷膠囊的制備，地黃總苷1200克，分裝于4000粒膠囊。即為本發(fā)明的地黃苷膠囊制劑。規(guī)格為每粒含地黃總苷300mg。
地黃總苷治療哮喘病的臨床研究1、病例選擇60例，男30例，女30例，年齡16-60歲，按照李明華等主編《哮喘病學(xué)》(人民衛(wèi)生出版社，1998年，p165)的標(biāo)準(zhǔn)診斷，均為支氣管哮喘病人。隨機(jī)分成2組， 每組30例，男15例，女15例；A組為治療組，B為對(duì)照組。2、治療方法，治療組用地黃總苷膠囊口服，每日3次，每次1粒，連續(xù)服用30天；對(duì)照組用丙酸倍氯米松氣霧劑，每日2次，每次200μg，連續(xù)服用30天。3、治療結(jié)果，治療結(jié)束時(shí)，治療組治愈21例，有效9例；對(duì)照組治愈12例，有效18例。治療結(jié)束后1個(gè)月時(shí)，治療組治愈15例，有效13例；對(duì)照組治愈5例，有效18例。4、療效分析，對(duì)治療組和對(duì)照組治療后的肺功能進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表8。用藥前后的IgE濃度，嗜酸細(xì)胞計(jì)數(shù)，白細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表9。
表8、治療組和對(duì)照組治療前后的肺功能指標(biāo)的變化


注*表示p＜0.05；注**表示p＜0.01；注***表示p＜0.001表9、治療組和對(duì)照組治療前后的血液指標(biāo)的變化

注*表示p＜0.05；注**表示p＜0.01；注***表示p＜0.001從上述結(jié)果可以看出，治療組用地黃總苷膠囊口服，每日3次，每次1粒，連續(xù)服用30天的治療效果與用丙酸倍氯米松氣霧劑，每日吸人2次，每次200μg，連續(xù)服用30天的治療效果相當(dāng)。某些治療指標(biāo)還優(yōu)于吸人丙酸倍氯米松氣霧劑的治療效果。
權(quán)利要求
1一種可用于治療哮喘、慢性阻塞性肺病、過(guò)敏性鼻炎和其它過(guò)敏性疾病的中藥。其特征是用地黃制備，是地黃用液體溶劑提取得到的液體提取物或者固體提取物。
2.按照權(quán)利要求1中所述的中藥，其特征是從地黃中提取得到的地黃總苷提取物，主要含有梓醇、地黃苷A，B，C，D、乙酰梓醇、二氫梓醇等環(huán)烯醚萜成分為有效成分。并含有少量的酚性成分。
3.按照權(quán)利要求2中所述的地黃總苷提取物，其特征是梓醇含量大于20％，環(huán)烯醚萜總苷含量大于50％。
4.按照權(quán)利要求2中所述地黃總苷提取物，其特征是可用于治療哮喘、慢性阻塞性肺病、過(guò)敏性鼻炎和其它過(guò)敏性疾病的中藥藥物組合物。
5.按照權(quán)利要求1中所述的中藥，其特征是治療哮喘、慢性阻塞性肺病、過(guò)敏性鼻炎和其它過(guò)敏性疾病時(shí)，地黃的用量范圍為0.2mg/kg-20g/kg。
6.按照權(quán)利要求1中所述的中藥在治療過(guò)敏性疾病中的應(yīng)用。
7.按照權(quán)利要求1中所述的中藥在治療哮喘病中的應(yīng)用。
8.按照權(quán)利要求1中所述的中藥在治療慢性阻塞性肺病中的應(yīng)用。
9.按照權(quán)利要求3中所述的地黃總苷提取物，其特征是治療哮喘、慢性阻塞性肺病、過(guò)敏性鼻炎和其它過(guò)敏性疾病時(shí)，地黃總苷提取物的用量范圍為0.5mg/kg-100mg/kg。
10.按照權(quán)利要求2中所述，一種可用于治療哮喘、過(guò)敏性鼻炎和其它過(guò)敏性疾病的藥物組合物，其特征是包含地黃總苷提取物的活性組分。
全文摘要
本發(fā)明涉及從中藥地黃中提取制備治療和預(yù)防哮喘病、慢性阻塞性肺病、過(guò)敏病癥的藥物，地黃提取物和地黃總苷具有明顯的抗炎、抗過(guò)敏活性，是治療和預(yù)防哮喘病、慢性阻塞性肺病、過(guò)敏病癥的天然藥物，療效好，無(wú)現(xiàn)有的抗哮喘類藥物的毒副作用。
文檔編號(hào)A61P11/02GK1631404SQ200310121148
公開(kāi)日2005年6月29日 申請(qǐng)日期2003年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月22日
發(fā)明者羅何生 申請(qǐng)人:羅何生