專利名稱：具有協(xié)同作用的藥物組合物及其制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種中藥提取物與植物提取物組成的具有協(xié)同作用的組合物及其制備方法，以及在制備保健品或藥品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
剌五加又稱五加參，是中藥五加皮的一種，具有扶正固本、益智安神、補(bǔ)腎健脾等功效?，F(xiàn)代化學(xué)成分及藥理研究證明刺五加中主要活性成分總甙及多糖對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及內(nèi)分泌代謝等有促進(jìn)及調(diào)節(jié)作用。沙棘含有豐富的生物活性物質(zhì)，對(duì)心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、抗炎、抗腫瘤、抗衰老、抗輻射損傷等方面具有顯著的藥理效應(yīng)。
國內(nèi)對(duì)刺五加或沙棘油的藥效、藥理的研究報(bào)道很多，由刺五加與沙棘油各自或者分別與其它成份配伍組方制成的藥品或醫(yī)藥保健品也有很多。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是研制一種中藥提取物與植物提取物組成的具有協(xié)同作用的組合物及其制備方法，以及在制備保健品或藥品中的應(yīng)用。具體為以中藥提取物與植物提取物為主藥，添加或不添加適當(dāng)輔料，制備各類保健組合物或藥用組合物，用于提高免疫、增加人體對(duì)有毒物質(zhì)或不利于人體環(huán)境的抵御能力，如解毒能力等。
為解決上述問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案。
一種具有免疫調(diào)節(jié)、抗應(yīng)激、抗衰老、解毒作用的組合物，其特征在于基本上由沙棘油與刺五加的乙醇和/或水提取物的浸膏粉組成。沙棘油與刺五加浸膏粉的重量比為1.5～3∶1份。沙棘油與刺五加浸膏粉的較好的重量比為2∶1份。
一種具有免疫調(diào)節(jié)、抗應(yīng)激、抗衰老、解毒作用的組合物，是基本上由沙棘油與刺五加浸膏粉以及食品添加劑或藥學(xué)上可接受的輔料組成的口服制劑。如基本上由沙棘油與刺五加浸膏粉以及助懸劑與乳化劑組成的常規(guī)軟膠囊。
所述組合物，其特征在于軟膠囊內(nèi)含沙棘油、刺五加浸膏粉、助懸劑、乳化劑的重量比為1.5～3∶1∶0.15～0.3∶0.01～0.03份；軟膠囊膠皮基本由明膠、增塑劑、水、遮光劑按重量比1∶0.3～0.6∶1～1.5∶0.00045～0.0009份組成。軟膠囊內(nèi)含沙棘油、刺五加浸膏粉、助懸劑、乳化劑的較好的重量比為2～2.5∶1∶0.17～0.25∶0.015～0.02份；軟膠囊膠皮基本由明膠、增塑劑、水、遮光劑按較好的重量比1∶0.4～0.5∶1.2～1.4∶0.00025～0.0005份組成。
前述組合物的特征在于助懸劑是蜂蠟、阿拉伯膠和/或西黃耆膠；乳化劑是司盤類和/或卵磷脂；增塑劑是甘油和/或山梨醇；遮光劑是可食用或藥用色素。
所述組合物的制備方法是按配方量，取沙棘油與助懸劑混合，加熱熔融，冷卻，加入乳化劑，混勻，加入研細(xì)的刺五加浸膏粉，制成混懸藥液；取明膠、增塑劑、水、遮光劑配成明膠液；用軟膠囊壓制機(jī)將混懸藥液與明膠液制成軟膠囊。
較好的制備方法為按重量比，取沙棘油1.5～3份與蜂蠟0.15～0.3份混合，加熱熔融，冷卻至60℃～30℃，加入卵磷脂0.01～0.03份，混勻，加入研細(xì)的刺五加浸膏粉1份，制成混懸藥液；取明膠、甘油、水、遮光劑按重量比1∶0.3～0.6∶1～1.5∶0.00045～0.0009份配成明膠液；用軟膠囊壓制機(jī)將混懸藥液與明膠液制成軟膠囊。
沙棘系胡頹子科植物沙棘Hippophae rhamnades L.的干燥成熟果實(shí)。秋、冬二季果實(shí)成熟或凍硬時(shí)采收，除去雜質(zhì)，干燥或蒸后干燥備用。沙棘的主要成分為不飽和醛類，維生素類，五環(huán)三萜類，甾醇類等?？扇∩臣稍锕麑?shí)，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，以二氧化碳為工作介質(zhì)，以較低的加工溫度(＜58℃和加工工藝過程全部受二氧化碳?xì)怏w保護(hù)的獨(dú)立工藝特點(diǎn)，最大限度防止有效生物活性物質(zhì)的受熱分解和氧化破壞作用，提出純天然沙棘籽油，不含任何有機(jī)溶劑及其它化學(xué)合成物質(zhì)。沙棘油亦可市購，生產(chǎn)商有北京星龍萃取工程有限公司。
刺五加本品系五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms的干燥，根及根莖或莖，春秋二季采收，洗凈，干燥備用。刺五加主要成分為刺五加苷、甾醇、三萜皂苷、多糖等?？扇〈涛寮?000g，粉碎成粗粉，加7倍量的75％乙醇連續(xù)回流提取12小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，干燥成浸膏粉50g。刺五加浸膏粉亦可市購(生產(chǎn)商有黑龍江省沙河子農(nóng)場(chǎng))。
本發(fā)明將沙棘油與刺五加浸膏粉組配，制備的組合物產(chǎn)生協(xié)同的藥理作用。與單獨(dú)使用沙棘油或刺五加浸膏粉相比，本發(fā)明保健組合物或藥物組合物的毒性顯著減小，增強(qiáng)免疫功能及抗應(yīng)激的有效劑量顯著減小，且可降低血漿LPO含量，增強(qiáng)老年鼠SOD活性，具有相對(duì)廣泛的解毒譜，解毒作用增強(qiáng)，解毒范圍擴(kuò)大。具體數(shù)據(jù)如下1.急性毒性試驗(yàn)本發(fā)明組合物的最大給藥量為62.0g/kg(其中含沙棘油41.3g/kg，刺五加20.6g/kg)，為臨床人日用量的2000倍。
而沙棘油最大給藥量為25g/kg，LD50＞45.0g/kg，刺五加流浸膏LD50為14.5g/kg。說明合用后毒性減小。
2.藥效試驗(yàn)表明2.1對(duì)免疫功能的影響沙棘油與刺五加合用0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg(其中每個(gè)劑量含刺五加1份，沙棘油2份)劑量，即可增強(qiáng)免疫功能的作用。
而文獻(xiàn)報(bào)道刺五加醇提取物25g/kg和50g/kg，沙棘油50％混懸液具有增強(qiáng)免疫功能的作用，參見黑龍江省中國醫(yī)藥研究所《中草藥》1980，11(7)313；許維楨等，《中草藥》1987，18(10)22；鐘飛等，《中國藥理學(xué)通報(bào)》1989，5(5)307；《山西醫(yī)藥》1989，18(1)9。說明本發(fā)明組合物對(duì)免疫功能具有協(xié)同作用，劑量減少。
2.2抗應(yīng)激試驗(yàn)沙棘油與刺五加合用0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg具有抗應(yīng)激作用。而刺五加20g/kg，3g/kg具有抗應(yīng)激作用，說明本發(fā)明組合物對(duì)抗應(yīng)激具有協(xié)同作用。
2.3抗衰老作用沙棘油與刺五加合用0.31g/kg，0.62g/kg和1.24g/kg能增強(qiáng)老年鼠SOD活力，使血漿LPO含量降低。
據(jù)江蘇省科技查新咨詢中心的查新報(bào)告及文獻(xiàn)未見刺五加和沙棘油有類似的報(bào)導(dǎo)。
2.4解毒作用沙棘油和刺五加合用可延長二甲苯、甲醛、敵百蟲，偏二甲肼致小鼠的存活時(shí)間，減少死亡數(shù)，具有解毒作用。
而文獻(xiàn)報(bào)道刺五加多糖可提高機(jī)體對(duì)磷酸二甲酚酯，士的寧和吉他林的解毒能力，延長存活時(shí)間，未見有報(bào)道對(duì)二甲苯、甲醛、敵百蟲的解毒作用。說明本發(fā)明組合物解毒作用增強(qiáng)，解毒譜更廣。
具體實(shí)施例方式
沙棘油購于北京星龍萃取工程有限公司，批號(hào)]000316。
刺五加成浸膏粉購于黑龍江省沙河子農(nóng)場(chǎng)，批號(hào)000503。
實(shí)施例1內(nèi)容物處方刺五加 110g沙棘油 228g蜂蠟 16.5g卵磷脂 1.1g制成軟膠囊 1000粒膠皮配方明膠1000份、甘油300份、水1350份、亮藍(lán)0.45份1.取蜂蠟1份與沙棘油12.8份加熱熔融，冷卻至60度以下，加入卵磷脂，研磨使混勻，備用。
2.取刺五加浸膏粉6.1份研細(xì)，過180目篩，加入1中，研磨制成混懸液，密閉備用。
3.取明膠1000份、甘油300份、水1350份、亮藍(lán)0.45份適量配制明膠溶液。藥液與明膠液用軟膠囊壓制機(jī)制成膠丸。
實(shí)施例2內(nèi)容物處方刺五加110g沙棘油236g蜂蠟 20g卵磷脂2.3g制成軟膠囊1000粒膠皮配方明膠1000份、甘油500份、水1500份、蘋果綠0.50份制法同上。
實(shí)施例3內(nèi)容物處方刺五加110g沙棘油250g蜂蠟 22g卵磷脂1.5g制成軟膠囊1000粒膠皮配方明膠1000份、甘油250份、山梨醇150份、水1000份、亮藍(lán)0.55份制法同上。
實(shí)施例4內(nèi)容物處方刺五加110g沙棘油286g蜂蠟 24g卵磷脂1.9g制成軟膠囊1000粒膠皮配方明膠1000份、甘油200份、山梨醇120份、水1200份、亮藍(lán)0.48份制法同上。
實(shí)施例5前述實(shí)施例中制備的本發(fā)明組合物的軟膠囊制劑經(jīng)質(zhì)量檢測(cè)，質(zhì)量符合2000版藥典規(guī)定項(xiàng)目下的各項(xiàng)規(guī)定。外觀整潔，無破損、滲漏、粘結(jié)、變形等現(xiàn)象。含量測(cè)定采用高效液相色譜法和分光光度法測(cè)定，有效部位含量穩(wěn)定。穩(wěn)定性試驗(yàn)表明本發(fā)明軟膠囊常溫下放樣3個(gè)月后考察，質(zhì)量符合2000版藥典規(guī)定項(xiàng)目下的各項(xiàng)規(guī)定，性質(zhì)穩(wěn)定可靠，無崩解遲緩現(xiàn)象發(fā)生。
實(shí)施例6本發(fā)明組合物與沙棘籽油和刺五加浸膏的對(duì)比實(shí)驗(yàn)一、急性毒性試驗(yàn)比較1.沙棘籽油最大給藥為25g/kg，48h未見死亡及異常，LD50＞45.0g/kg。參見程娟等，沙棘果油的急性毒性及其對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用《中國中藥雜志》1990，15(1)452.刺五加流浸膏灌胃的LD50為14.5g/kg。參見黃正良，刺五加的藥理研究，《陜西新醫(yī)藥》1982，11(10)52；王本祥主編，《現(xiàn)代中藥藥理學(xué)》天津科學(xué)技術(shù)出版社，1997，11月，第11版3.本發(fā)明組合物未能測(cè)出LD50，最大給藥量為62.0g/kg，其中刺五加20.6g/kg，沙棘油41.3g/kg。(既每個(gè)劑量含刺五加1份，沙棘油2份)該劑量為臨床人日用量2000倍，等效量181倍。
方法取昆明種小鼠40只，體重18.0-22.0g，按體重分層隨機(jī)分為2組，(1)本發(fā)明組合物組；(2)空白對(duì)照組，試驗(yàn)前禁食(不禁水)12h，用1.55g/ml(最大濃度)灌胃給藥，灌胃容量0.4ml/10g鼠重，24小時(shí)內(nèi)灌藥1次，空白對(duì)照組給予等量生理鹽水，連續(xù)觀察1周，記錄受試小鼠活動(dòng)，行為，攝食量，體重，及死亡情況，未死小鼠1周后處死進(jìn)行尸檢。
結(jié)果按62.0g/kg劑量經(jīng)口服給予本發(fā)明組合物的20只小鼠，當(dāng)日及以后見小鼠活動(dòng)行為無異常，攝食量、體重等與空白對(duì)照組無明顯差異，1周內(nèi)無死亡及其它異常發(fā)生，2組同時(shí)處死進(jìn)行尸檢，各主要臟器(心、肝、脾、肺、腎)經(jīng)肉眼觀察無異常改變，與空白對(duì)照組無明顯差異。
毒性評(píng)價(jià)本發(fā)明組合物小鼠經(jīng)口給藥未能測(cè)出LD50，小鼠經(jīng)口最大給藥量試驗(yàn)結(jié)果表明，20只小鼠給藥后無明顯毒性反應(yīng)，1周內(nèi)無死亡，因此本發(fā)明組合物經(jīng)口給藥的小鼠最大給藥量為62.0g/kg.如按臨床1日口服1.86g/60kg計(jì)算，則該藥的小鼠1日灌胃藥量為臨床1日口服量的2000倍，即等效劑量的181.8倍。
二、對(duì)免疫功能的影響1、刺五加醇提取物25g/kg和50g/kg，給小鼠灌胃14d，可明顯增強(qiáng)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬碳粒的功能。刺五加醇提取物20g/kg，給小鼠灌胃7d，用SRBC免疫小鼠，可增強(qiáng)免疫功能。
2、沙棘籽油50％混懸液0.4ml/只，連續(xù)給藥7d，對(duì)小鼠血清溶血素，腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)均有顯著提高。參見許維楨等，沙棘籽油對(duì)但胺氧化酶及免疫功能的影響《中草藥》1987，18(10)22鐘飛等，沙棘總黃酮對(duì)動(dòng)物非特異性免疫功能的影響《山西醫(yī)藥》1989，18(1)9。
3、本發(fā)明組合物0.78g/kg，1.55g/kg，3.10g/kg(既每個(gè)劑量含刺五加1份，沙棘油2份)能促進(jìn)所致免疫功能低下小鼠溶血素抗體生成，促進(jìn)網(wǎng)狀細(xì)胞吞噬功能，促進(jìn)DTH反應(yīng)，增加小鼠外周血中T淋巴細(xì)胞數(shù)量。
方法對(duì)環(huán)磷酰胺(Cy)所致免疫功能低下小鼠免疫器官的影響取KM小鼠60只，體重18--20g，雌雄各半，隨機(jī)分6組(1)空白對(duì)照組等量NS，(2)模型對(duì)照組等量NS，(3)左旋咪唑組0.1g/kg(4)本發(fā)明組合物低劑量組0.78g/kg(5)本發(fā)明組合物中劑量組1.55g/kg，(6)本發(fā)明組合物高劑量組3.10g/kg，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。除空白對(duì)照組外，其余各組于給藥第4天和第8天分別iP50mg/kgCy，以造成免疫功能低下動(dòng)物模型，并與末次給藥后2h處死，分離脾臟和胸腺稱重，比較各組間差異。
結(jié)果本發(fā)明組合物三個(gè)劑量組均可增加Cy所致免疫功能低下小鼠脾和胸腺的重量，具有對(duì)抗Cy的免疫抑制作用。
對(duì)Cy所致免疫功能低下小鼠溶血素抗體(IgM)生成的影響取KM小鼠60只，體重17-21g，隨機(jī)分6組，雌雄各半，每組10只，分組同上，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。于給藥第四天，每鼠腹腔注射20％SRBC懸液進(jìn)行免疫，除空白對(duì)照組，其余各組于免疫第二天iP 60mg/kgCy，一次造成免疫功能低下動(dòng)物模型，末次給藥后1h，眼球取血，分離血清，取50ul，加至2mlSA液中混勻。取1ml，加10％SRBC，0.5ml，10％豚鼠血清1ml，另取不加血清的對(duì)照管，置37℃恒溫水浴箱30min后，立即置冰浴中終止反應(yīng)，2000rpm離心10min，取上清液1ml加入都氏液2ml，搖勻后放置10min，于540nm處測(cè)OD值，SRBC半數(shù)溶血值為10％SRBC 0.25ml加都氏試劑4ml，于540nm處測(cè)定OD值。
結(jié)果本發(fā)明組合物三個(gè)劑量組均可促進(jìn)Cy致免疫功能低下小鼠溶血素抗體的生成，具有增強(qiáng)體液免疫的作用。
對(duì)Cy致免疫功能低下小鼠單核細(xì)胞吞噬功能的影響取KM小鼠60只，體重18--22g，雌雄各半，隨機(jī)分6組，分組同上，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。除空白對(duì)照組外，其余各組于給藥第4天和第8天分別iP60mg/kgCy，并與末次給藥后30min處死，尾靜脈注入墨汁(0.1ml/10g鼠重)，于注射后2min、12min分別從眼眶后靜脈從取血20ul，立即置2ml 0.1％Na2CO3溶液中，搖勻后，于680nm處測(cè)OD值，并處死小鼠，取肝脾稱重，計(jì)算廓清指數(shù)K和廓清系數(shù)a，比較各組間差異。
結(jié)果本發(fā)明組合物1.55g/kg和3.10g/kg劑量組可明顯增強(qiáng)小鼠碳粒廓清指數(shù)K值和廓清系數(shù)a值，0.78g/kg劑量組可增強(qiáng)碳粒廓清指數(shù)K值，提示本發(fā)明組合物具有促進(jìn)血液中異物的廓清速度，能對(duì)抗Cy的所致免疫功能低下小鼠單核細(xì)胞吞噬功能減退的作用，并隨劑量增加作用增強(qiáng)。
本發(fā)明組合物對(duì)Cy致免疫功能低下小鼠DNCB致DTH反應(yīng)取KM小鼠60只，體重18--22g，雌雄各半，隨機(jī)分6組，分組同上，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。于給藥5天后，用8％Na2S脫去小鼠腹部皮膚毛，面積約1cm2，并均勻涂布1％DNCB溶液50ul，致敏，次日同法加強(qiáng)一次，并于致敏當(dāng)日iP50mg/kg Cy，次日加強(qiáng)一次，并于末次給藥30min后，于各組小鼠右耳兩面均勻涂布1％DNCB溶液20ul，攻擊，20h后脫頸椎處死小鼠，用8mm打孔器取下同部位左右兩耳片，稱重，以兩耳稱重差異表示DTH反應(yīng)的強(qiáng)弱。
結(jié)果本發(fā)明組合物三個(gè)劑量組均可增強(qiáng)DNCB致DTH反應(yīng)，1.55g/kg 3.10g/kg劑量組可增加胸腺重量，提示本發(fā)明組合物能使Cy誘導(dǎo)小鼠DTH過低模型調(diào)節(jié)至正常水平，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫的作用。
本發(fā)明組合物對(duì)免疫功能低下小鼠外周血中T淋巴細(xì)胞脂酶的作用取KM小鼠60只，體重18--22g，雌雄各半，隨機(jī)分6組，分組同上，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。除空白對(duì)照組外，其余各組于給藥第4天和第8天分別iP60mg/kgCy造成免疫功能低下動(dòng)物模型，并與末次給藥后1h小鼠尾梢取血推片，浸入孵育液37℃，1％孔雀綠染色，油鏡檢查，計(jì)數(shù)100個(gè)淋巴細(xì)胞，計(jì)算T淋巴細(xì)胞％。(ANAE陽性細(xì)胞)。
結(jié)果本發(fā)明組合物三個(gè)劑量組可明顯增強(qiáng)外周血中T淋巴細(xì)胞數(shù)量，對(duì)抗Cy的免疫抑制作用。
三、抗應(yīng)激試驗(yàn)1、刺五加醇浸膏按3g/kg灌服，能增強(qiáng)小鼠對(duì)高溫(45-48℃)和低溫(0-10℃)的耐受力，刺五加浸膏20g/kg(生藥)，給小鼠灌胃，具有抗疲勞作用。參見吳秉純等，刺五加扶正固本藥理作用的研究I《黑龍江中醫(yī)藥》1981，(4)37；吳秉純等，刺五加藥理作用研究《中醫(yī)藥學(xué)報(bào)》1985，(2)29；周楚，李文寧，師海波等，刺五加藥理研究進(jìn)展《中藥藥理與臨床》1992，8(6)36。
2、本發(fā)明組合物0.78g/kg，1.55g/kg，3.10g/kg能明顯延長小鼠耐常壓缺氧時(shí)間，延長小鼠游泳時(shí)間，延長斷頭小鼠喘氣時(shí)間，提高高溫和寒冷條件下小鼠的存活率。
方法對(duì)小鼠耐常壓缺氧時(shí)間的影響取ICR小鼠50只，體重15--17g，雌雄各半，隨機(jī)分5組(1)空白對(duì)照組等量NS，(2)生脈液組10ml/kg，(3)本發(fā)明組合物低劑量組0.78g/kg(4)本發(fā)明組合物中劑量組1.55g/kg，(5)本發(fā)明組合物高劑量組3.10g/kg，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。末次給藥后45min，將小鼠放入盛有15g鈉石灰的的廣口瓶內(nèi)，每次每組各取1只小鼠放入瓶內(nèi)，用凡士林抹瓶口蓋嚴(yán)，立即記錄密封瓶口至呼吸停止的時(shí)間。
結(jié)本發(fā)明組合物三個(gè)劑量組均可使小鼠耐常壓缺氧時(shí)間延長，提示本發(fā)明組合物具有耐缺氧作用。
對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響取ICR小鼠50只，體重15--18g，雌雄各半，隨機(jī)分5組，分組同上，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。末次給藥后30min，將小鼠置玻璃缸內(nèi)(水深20cm，水溫20±0.5℃)小鼠負(fù)重10％。游泳，記錄小鼠自投入水中至頭部不浮出水面的時(shí)間為游泳時(shí)間。
結(jié)果本發(fā)明組合物三個(gè)劑量組均可明顯延長小鼠游泳時(shí)間，提示本發(fā)明組合物具有抗疲勞作用，并隨劑量增加效應(yīng)增強(qiáng)。
對(duì)小鼠斷頭后張口喘氣時(shí)間的影響取ICR小鼠50只，體重15--18g，雌雄各半，隨機(jī)分5組，分組同上，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。末次給藥后1h，將小鼠逐只斷頭，立即按秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時(shí)間。
結(jié)果本發(fā)明組合物三個(gè)劑量組均能明顯延長小鼠斷頭張口喘氣時(shí)間，提示本發(fā)明組合物具有對(duì)腦缺血的保護(hù)作用。
對(duì)小鼠耐高溫試驗(yàn)的影響取ICR小鼠80只，體重15--17g，雌雄各半，隨機(jī)分5組，每組16只，分組同上，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。末次給藥后1h，各組取8只小鼠，每只小鼠放入單籠后置45±1℃恒溫箱內(nèi)，90min后取出，統(tǒng)計(jì)各組小鼠存活數(shù)，計(jì)算存活百分率。
結(jié)果本發(fā)明組合物三個(gè)劑量組均可明顯提高小鼠在高溫條件下的存活數(shù)，存活率分別為81.3％，87.5％，87.5％。提示本發(fā)明組合物具有改善機(jī)體器官生理功能，增強(qiáng)機(jī)體耐高溫的能力。
對(duì)小鼠耐寒試驗(yàn)的影響取ICR小鼠80只，體重15--17g，雌雄各半，隨機(jī)分5組，每組16只，分組同上，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天，連續(xù)10天。末次給藥后1h，各組取8只小鼠，每只小鼠放入單籠后置-15±1℃冰箱內(nèi)，90min后取出，統(tǒng)計(jì)各組小鼠存活數(shù)，計(jì)算存活百分率。
結(jié)果本發(fā)明組合物三個(gè)劑量組均可明顯提高小鼠在寒冷環(huán)境中的存活數(shù)，存活率分別為81.3％，87.5％，93.8％，提示本發(fā)明組合物具有增強(qiáng)機(jī)體氧化分解產(chǎn)熱過程，提高機(jī)體對(duì)寒冷刺激的反應(yīng)。
四、抗衰老試驗(yàn)本發(fā)明組合物0.31g/kg，0.62g/kg和1.24g/kg能顯著提高老年大鼠血清SOD活力，使血漿LPO含量降低。
方法本發(fā)明組合物對(duì)老年大鼠SOD和LPO的影響取老年SD大鼠，11月齡，雌雄各半，體重250-350g，隨機(jī)分5組，每組10只。(1)空白對(duì)照組，等量NS(2)生脈液組10ml/kg(3)低劑量組0.31g/kg(4)中劑量組0.62g/kg(5)高劑量組1.24g/kg 以上各組大鼠均灌胃給藥，灌胃容量10ml/kg，1次/天×90天，給藥期間，每隔10天記錄各組動(dòng)物進(jìn)食量和體重，并觀察動(dòng)物活動(dòng)及健康情況。末次給藥后禁食(不禁水)12小時(shí)。次日晨腹腔注入2％戊巴比妥鈉0.1ml/100g鼠重，麻醉后，固定分離頸動(dòng)脈，取血，測(cè)RBC值和Hb含量，分離血清，測(cè)定SOD活力和LPO含量，比較各組間差異。
結(jié)果本發(fā)明組合物的三個(gè)劑量組均可顯著提高老年大鼠血清SOD活力，使血漿LPO含量顯著降低，與生理鹽水組比較(P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001)。同時(shí)能明顯升高RBC值和Hb含量，與生理鹽水組比較(P＜0.01，p＜0.001)，提示本發(fā)明組合物具有加速清除體內(nèi)自由基及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，減少細(xì)胞損傷，抗衰老和促進(jìn)骨髓造血功能的作用。
五、解毒試驗(yàn)1、刺五加可減少青蛙因注入洋地黃毒甙引起的死亡率，提高機(jī)體對(duì)磷酸二甲酚酯，士的寧和吉他林的解毒能力，刺五加高糖對(duì)硫代乙酰胺所致小鼠肝中毒有明顯改善。刺五加能使每日給予絕對(duì)致死量的硝苯硫磷脂酰胺(40mg/kg)的動(dòng)物平均壽命從對(duì)照組的3.6日延長到5.7日。
2、本發(fā)明組合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg能明顯延長二甲苯致小鼠死亡時(shí)間，減少死亡率，保護(hù)率分別為68.4％，63.2％和63.2％?？墒辜兹┲滦∈笏劳雎式档?，保護(hù)率分別為75％、80％和90％。并可延長存活時(shí)間。明顯降低敵百蟲致小鼠死亡數(shù)，保護(hù)率分別為63.16％，63.16％和84.21％，并可延長存活時(shí)間，可明顯降低偏二甲肼致小鼠死亡數(shù)，保護(hù)率分別為75.0％和81.2％。
方法本發(fā)明組合物對(duì)二甲苯致小鼠死亡的保護(hù)作用取ICR小鼠76只，♀♂兼用，體重18～22，隨機(jī)分4組，每組19只。(1)空白對(duì)照組等量NS，(2)生脈液組10ml/kg，(3)本發(fā)明組合物低劑量組0.78g/kg(4)本發(fā)明組合物中劑量組1.55g/kg，(5)本發(fā)明組合物高劑量組3.10g/kg，以上各組動(dòng)物均灌胃給藥，給藥容量20ml/kg，1次/d×15d，末次給藥45min后，取各組動(dòng)物置4×4L的有機(jī)玻璃箱內(nèi)，將二甲苯用超聲波霧化器霧化后緩緩噴入，連續(xù)15min，觀察各組小鼠死亡時(shí)間和死亡數(shù)，比較各組間差異。
結(jié)果本發(fā)明組合物0.78g/kg、1.55g/kg和3.10g/kg劑量組能明顯延長二甲苯致小鼠死亡的時(shí)間，減少死亡數(shù)，存活率分別為68.42％、63.16％和63.16％，與生理鹽水組比較具有非常顯著性差異，提示本發(fā)明組合物對(duì)二甲苯致小鼠死亡具有明顯保護(hù)作用。
本發(fā)明組合物對(duì)甲醛致小鼠死亡的保護(hù)作用取ICR小鼠80只，♀♂兼用，體重18～22，隨機(jī)分4組，每組20只。分組同上，以上各組動(dòng)物均灌胃給藥，給藥容量20ml/kg，1次/d×15d，末次給藥45min后，取各組動(dòng)物置4×4L的有機(jī)玻璃箱內(nèi)，將甲醛霧化后緩緩噴入，連續(xù)10min，觀察各組小鼠死亡時(shí)間和死亡數(shù)，比較各組間差異。
結(jié)果本發(fā)明組合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg劑量組均可使甲醛致小鼠死亡率降低，保護(hù)率分別為75％、80％和90％。并可延長存活時(shí)間，與生理鹽水組比較具有非常顯著性差異，提示本發(fā)明組合物對(duì)甲醛致小鼠死亡具有明顯的保護(hù)作用。
本發(fā)明組合物對(duì)敵百蟲致小鼠死亡的保護(hù)作用取ICR小鼠76只，♀♂兼用，體重18～22，隨機(jī)分4組，每組19只。分組同上，以上各組動(dòng)物均灌胃給藥，給藥容量20ml/kg，1次/d×15d，末次給藥45min后，取敵百蟲適量，配成0.1038g/ml濃度，灌胃給予敵百蟲，灌胃容量0.2ml/10g，立即觀察動(dòng)物活動(dòng)、行為及死亡情況，觀察時(shí)間為72小時(shí)。比較各組間差異。
結(jié)果本發(fā)明組合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg劑量組均可明顯降低敵百蟲致小鼠死亡數(shù)，保護(hù)率分別為63.16％，63.16％和84.21％，并可延長存活時(shí)間，與生理鹽水組比較具有顯著性差異，提示本發(fā)明組合物對(duì)敵百蟲致小鼠死亡具有明顯的保護(hù)作用。
本發(fā)明組合物對(duì)偏二甲肼致小鼠死亡的影響取ICR小鼠64只，♀♂兼用，體重18～22，隨機(jī)分4組，每組16只。分組同上，以上各組動(dòng)物均灌胃給藥，給藥容量20ml/kg，1次/d×15d，末次給藥45min后，取偏二甲肼適量，配成10.43×10-3g/ml濃度，灌胃給予偏二甲肼，灌胃容量0.2ml/10g，立即觀察動(dòng)物活動(dòng)、行為及死亡情況，觀察時(shí)間為72小時(shí)。給予偏二甲肼后，小鼠行為興奮，死亡時(shí)呈驚厥狀態(tài)，可見翹尾，奔跑現(xiàn)象。
結(jié)果本發(fā)明組合物1.55g/kg和3.10g/kg劑量組均可明顯降低偏二甲肼致小鼠死亡數(shù)，保護(hù)率分別為75.0％和81.2％，與生理鹽水組比較具有顯著性差異，提示本發(fā)明組合物對(duì)偏二甲肼致小鼠死亡具有明顯的保護(hù)作用。
試驗(yàn)結(jié)果表明1、對(duì)免疫功能的影響試驗(yàn)結(jié)果表明(1)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組能增加環(huán)磷酰胺(Cy)所致免疫功能低下小鼠免疫器官脾和胸腺的重量，與模型對(duì)照組比較，P＜0.05、P＜0.01較，提示本發(fā)明組合物具有對(duì)抗Cy的免疫抑制作用。
(2)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組能促進(jìn)Cy所致免疫功能低下小鼠溶血素抗體(IgM)的生成。HC50與模型對(duì)照組比較P＜0.01、P＜0.001，提示本發(fā)明組合物具有增強(qiáng)體液免疫的作用。
(3)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組能促進(jìn)Cy所致免疫功能低下小鼠單核細(xì)胞吞噬功能的作用。廓清指數(shù)K值和廓清系數(shù)a值與模型對(duì)照組比較P＜0.05、P＜0.01。提示本發(fā)明組合物具有對(duì)抗Cy所致免疫功能低下小鼠單核細(xì)胞吞噬功能減退的作用。并隨劑量增加，作用增強(qiáng)。
(4)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組能增加Cy所致免疫功能低下小鼠DNCB所致DTH反應(yīng)具有明顯的調(diào)節(jié)作用，胸腺系數(shù)和兩耳重量差異與模型對(duì)照組比較，P＜0.01和P＜0.05。提示本發(fā)明組合物能將Cy誘導(dǎo)小鼠DTH過低模型調(diào)節(jié)到正常水平，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫的作用。
(5)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組能增加Cy所致免疫功能低下小鼠外周血中T淋巴細(xì)胞數(shù)量，ANAE陽性細(xì)胞數(shù)分別為29.9±6.39，30.1±6.39，34.0±7.14。提示本發(fā)明組合物具有對(duì)抗Cy的免疫抑制作用，增強(qiáng)免疫功能的作用。
2、抗應(yīng)激試驗(yàn)結(jié)果表明(1)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組能明顯延長小鼠耐常壓缺氧時(shí)間，與生理鹽水組比較P＜0.05、P＜0.01。提示本發(fā)明組合物具有明顯增強(qiáng)小鼠耐缺氧能力。
(2)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組能明顯延長小鼠游泳時(shí)間，與生理鹽水組比較P＜0.05、P＜0.01和P＜0.001。提示本發(fā)明組合物具有抗疲勞作用。
(3)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組能明顯延長小鼠喘氣時(shí)間，與生理鹽水組比較P＜0.01。提示本發(fā)明組合物具有降低腦耗氧的作用。
(4)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組可明顯提高小鼠在高溫條件下的存活率，與生理鹽水組比較P＜0.05、P＜0.01，提示本發(fā)明組合物具有改善機(jī)體器官生理功能，增強(qiáng)機(jī)體耐高溫的能力。
(5)本發(fā)明組合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg劑量組可明顯提高小鼠在寒冷環(huán)境中的存活率，與生理鹽水組比較P＜0.001，提示本發(fā)明組合物具有增強(qiáng)機(jī)體氧化分解產(chǎn)熱過程，提高機(jī)體耐對(duì)寒冷刺激的反應(yīng)。
3.本發(fā)明組合物0.31g/kg，0.62g/kg和1.24g/kg劑量組可顯著提高老年大鼠血清SOD活力，使血漿LPO含量顯著降低，與生理鹽水組比較P＜0.05，P＜0.01和P＜.001)，同時(shí)能明顯升高RBC值和HB含量(P＜0.01和P＜0.001)提示本發(fā)明組合物具有加速清除體內(nèi)自由基及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，減少細(xì)胞損傷，抗衰老和促進(jìn)骨髓造血功能的作用。
4、本發(fā)明軟膠囊抵御有毒物質(zhì)對(duì)哺乳動(dòng)物侵害(1)本發(fā)明組合物0.78g/kg、1.55g/kg和3.10g/kg劑量組能明顯延長二甲苯致小鼠死亡的時(shí)間，減少死亡數(shù)，存活率分別為68.42％、63.16％和63.16％，與生理鹽水組比較具有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)，提示本發(fā)明組合物對(duì)二甲苯致小鼠死亡具有明顯保護(hù)作用。
(2)本發(fā)明組合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg劑量組均可使甲醛致小鼠死亡率降低，保護(hù)率分別為75％、80％和90％。并可延長存活時(shí)間，與生理鹽水組比較具有非常顯著性差異(P＜0.01)，提示本發(fā)明組合物對(duì)甲醛致小鼠死亡具有明顯的保護(hù)作用。
(3)本發(fā)明組合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg劑量組均可明顯降低敵百蟲致小鼠死亡數(shù)，保護(hù)率分別為63.16％，63.16％和84.21％，并可延長存活時(shí)間，與生理鹽水組比較具有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)，提示本發(fā)明組合物對(duì)敵百蟲致小鼠死亡具有明顯的保護(hù)作用。
(4)本發(fā)明組合物1.55g/kg和3.10g/kg劑量組均可明顯降低偏二甲肼致小鼠死亡數(shù)，保護(hù)率分別為75.0％和81.2％，與生理鹽水組比較具有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)，提示本發(fā)明組合物對(duì)偏二甲肼致小鼠死亡具有明顯的保護(hù)作用。
綜上所述本發(fā)明組合物具有免疫調(diào)節(jié)，抗應(yīng)激，抗衰老和促進(jìn)骨髓造血功能的作用，且對(duì)受二甲苯、甲醛、敵百蟲、偏二甲肼有毒物質(zhì)影響的哺乳動(dòng)物具有明顯的保護(hù)作用
權(quán)利要求
1.一種具有免疫調(diào)節(jié)、抗應(yīng)激、抗衰老、解毒作用的組合物，其特征在于基本上由沙棘油與刺五加的乙醇和/或水提取物的浸膏粉組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述組合物，其特征在于沙棘油與刺五加浸膏粉的重量比為1.5～3∶1份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述組合物，其特征在于沙棘油與刺五加浸膏粉的重量比為2∶1份。
4.一種具有免疫調(diào)節(jié)、抗應(yīng)激、抗衰老、解毒作用的組合物，其特征在于基本上由沙棘油與刺五加浸膏粉以及食品添加劑或藥學(xué)上可接受的輔料組成的口服制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其特征在于基本上由沙棘油與刺五加浸膏粉以及助懸劑與乳化劑組成的常規(guī)軟膠囊。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述組合物，其特征在于軟膠囊內(nèi)含沙棘油、刺五加浸膏粉、助懸劑、乳化劑的重量比為1.5～3∶1∶0.15～0.3∶0.01～0.03份；軟膠囊膠皮基本由明膠、增塑劑、水、遮光劑按重量比1∶0.3～0.6∶1～1.5∶0.00045～0.0009份組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述組合物，其特征在于軟膠囊內(nèi)含沙棘油、刺五加浸膏粉、助懸劑、乳化劑的重量比為2～2.5∶1∶0.17～0.25∶0.015～0.02份；軟膠囊膠皮基本由明膠、增塑劑、水、遮光劑按重量比1∶0.4～0.5∶1.2～1.4∶0.00025～0.0005份組成。
8.根據(jù)權(quán)利要求4～8之一所述組合物，其特征在于助懸劑是蜂蠟、阿拉伯膠和/或西黃耆膠；乳化劑是司盤類和/或卵磷脂；增塑劑是甘油和/或山梨醇；遮光劑是可食用或藥用色素。
9.根據(jù)權(quán)利要求4～8之一所述組合物的制備方法，其特征在于取沙棘油與助懸劑混合，加熱熔融，冷卻，加入乳化劑，混勻，加入研細(xì)的刺五加浸膏粉，制成混懸藥液；取明膠、增塑劑、水、遮光劑配成明膠液；用軟膠囊壓制機(jī)將混懸藥液與明膠液制成軟膠囊。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述組合物的制備方法，其特征在于按重量比，取沙棘油1.5～3份與蜂蠟0.15～0.3份混合，加熱熔融，冷卻至60℃～30℃，加入卵磷脂0.01～0.03份，混勻，加入研細(xì)的刺五加浸膏粉1份，制成混懸藥液；取明膠、甘油、水、遮光劑按重量比1∶0.3～0.6∶1～1.5∶0.00045～0.0009份配成明膠液；用軟膠囊壓制機(jī)將混懸藥液與明膠液制成軟膠囊。
全文摘要
一種具有免疫調(diào)節(jié)、抗應(yīng)激、抗衰老、解毒作用的組合物，由沙棘油與刺五加提取物為主藥，添加或不添加適當(dāng)輔料，制備各類保健組合物或藥用組合物，如軟膠囊劑，發(fā)明還包括其制備方法。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1449792SQ03113410
公開日2003年10月22日 申請(qǐng)日期2003年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月8日
發(fā)明者芮國嚴(yán), 王廣基, 劉建平, 朱萱萱, 趙陸華 申請(qǐng)人:王廣基, 芮國嚴(yán)