專利名稱：余甘子對與細(xì)胞色素p－450有關(guān)的肝毒性的治療作用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療肝病的組合物及其在治療藥物引起的肝毒性中的用途，所述組合物可對抗由藥物所致的CYP 450(細(xì)胞色素P-450)生物活化肝毒性，所述組合物含有余甘子提取物和可選擇的藥用添加劑。
背景技術(shù)：
在世界城鄉(xiāng)各地，肝病仍是危害健康的主要疾患。盡管我們對肝毒性的認(rèn)識(shí)有了科學(xué)的發(fā)展，而且傳統(tǒng)的醫(yī)藥體系也提供了這方面的線索，但我們尚無有效的藥物組合物來治療肝病，特別是那些由各種藥物引起的肝病。位于新德里的印度醫(yī)藥研究委員會(huì)(Indian Council ofMedical Research)在其傳統(tǒng)藥物研究計(jì)劃(修訂版)中，已將肝病列為多學(xué)科研究的六個(gè)重點(diǎn)突破領(lǐng)域之一。
肝病可分為急性或慢性肝炎(炎性肝病)和肝功能障礙(非炎性肝病)。急性肝炎通常會(huì)導(dǎo)致肝硬化和具有嚴(yán)重預(yù)后的肝昏迷。這種肝硬化是世界十大致命疾病之一。據(jù)認(rèn)為，具有易感狀況的人接觸諸如化學(xué)試劑和藥物(外界生物)、許多天然化合物、病毒和細(xì)菌病原體等物質(zhì)是肝機(jī)能失調(diào)的原因。
長期服用的很多種藥物會(huì)產(chǎn)生肝毒性。主要是通過生物活化作用而使這些藥物形成了有毒的產(chǎn)物。另一類藥物是通過引起膜破裂或DNA損壞以及通過干擾蛋白合成而引起毒性。一類重要的藥物是抗結(jié)核病(TB)藥物，經(jīng)常服用會(huì)產(chǎn)生肝毒性。
世界上所有處于熱帶、亞熱帶和寒帶的國家都有結(jié)核病流行。對結(jié)核病采取化學(xué)療法很重要，但同時(shí)這種療法也有難度，因?yàn)檫@種疾病通常是慢性的，而且抗結(jié)核病藥物的毒性會(huì)給治療帶來麻煩。采用已知的抗生素藥物治療結(jié)核病所導(dǎo)致的肝病有黃疸和肝纖維化等。有些情況會(huì)發(fā)展為慢性疾病形式或具有爆發(fā)過程，這是致命的。治療結(jié)核病的首選藥物有三種，即利福平、吡嗪酰胺和異煙肼。這些藥是需要長期服用的，它們會(huì)引起肝功能紊亂，導(dǎo)致中毒。
黃疸是其最為嚴(yán)重的不利反應(yīng)之一。其病理學(xué)特征是橋接壞死和多葉性壞死。對這些藥物的過敏導(dǎo)致肝炎。采用多種藥物治療也會(huì)帶來特殊問題。利福平引起肝損害。如果它與異煙肼聯(lián)合使用，則肝功能損害更嚴(yán)重。三種抗結(jié)核病藥物中吡嗪酰胺的毒性最大。肝功能紊亂癥狀出現(xiàn)后，持續(xù)聯(lián)合使用這些藥物會(huì)進(jìn)一步加重?fù)p害的嚴(yán)重程度。有報(bào)道稱，有的患者接受這些藥物后出現(xiàn)嚴(yán)重的肝損害而導(dǎo)致死亡(Slivka，IL，F(xiàn)armakol Toksikol-198952；82-85)。
我們的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)體系(印度草醫(yī)學(xué))中記載，可以采用幾種藥用植物來減輕肝臟病變。據(jù)稱，來自100多種本土植物的近四十種多草藥配方可作為保肝藥物。然而已經(jīng)確認(rèn)，它們均不能作為保護(hù)肝臟免受抗結(jié)核藥物損傷的治療藥劑。其部分原因在于，評價(jià)專門治療由生物活化產(chǎn)生毒性的藥物所引起的肝損傷的植物/植物產(chǎn)品的報(bào)道很少。
于是，人們越來越關(guān)注被認(rèn)為相對安全的草藥組合物的開發(fā)，由此來治療特別是由抗結(jié)核藥物所致肝臟疾病。
余甘子(Emblica officinalis Gaertn.)(印地語稱Amla)(大戟屬植物)廣泛分布于印度、斯里蘭卡、馬來半島和中國。在印度，高達(dá)4500英尺的山上的混合落葉林中這種樹很常見，在花園和庭院中也有種植。它是一種小型或中等大小的落葉樹，果實(shí)呈扁球形，直徑0.5到1英寸，多果肉，內(nèi)有六個(gè)三棱形種子。果實(shí)是酸的，有時(shí)可以生吃。果漿含有水分81.2％、蛋白質(zhì)0.5％、脂肪0.1％、礦物質(zhì)0.7％、鈣0.005mg/100gm、磷0.02mg/100gm和鐵1.2mg/100gm、煙酸0.2mg/100gm和維生素C 600mg/100mg(Medicinal plants of India(印度藥用植物)，Satyavati等(編)，ICMR，新德里，1976，p377)。在低分子量的可水解鞣酸中發(fā)現(xiàn)了有效的維生素C樣活性。已經(jīng)從其新鮮果皮中分離出了這類化合物中的四種余甘子素(emblicanin)A、余甘子素B、石榴素(punigluconin)和赤勺素(pedunculagin)。前兩種化合物是天然存在的galloellagi鞣酸(Ghosal等，IndJChem(印度化學(xué)雜志)，1996353941～948；Bhattacharya等，Phytomedicine(植物藥學(xué))，20007173～175)。
其果實(shí)苦澀、性寒，可利尿。干果可用于出血、腹瀉和痢疾?？梢詮V泛用于貧血癥、肝病和消化不良。果實(shí)發(fā)酵所制得的汁液可用于黃疸。果實(shí)是有名的印度草藥rasayan(激活藥物，即生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑)(SharmaP.V. Dravyaguna vijnana，Chaukhamba Sanskrit Sansthan，Varanasi，1978)。還報(bào)道了幾種藥理學(xué)特性。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，其葉的浸出物可以抗炎(Summanen等，Planta Medica，199359666)、抗氧化(Jose和Kuttan，Clin.Biochem.Nutr，19951963～70)、促進(jìn)血清脂質(zhì)減少(Mathweta\，J.Ethnopharmacol 19965061～68)和抑制細(xì)胞生長(Psatima等，ACS Symp.Ser，1998，p701)。已經(jīng)證明，余甘子提取物對化學(xué)物質(zhì)即四氯化碳引起的肝毒性具有保肝活性(Jose JK & Kutten R，J.Ethnopharmacology200072；135～40；Bhattacharya等，Phytomerdicine 20007173～5)。
Sharma等人的文章指出，余甘子可以防止苯并芘所致的基因毒性。苯并芘是重要的環(huán)境致癌物質(zhì)之一，它是CYP 450 1A1的特異性底物。它們都屬于斷裂劑。然而，由包括抗結(jié)核藥物在內(nèi)的各種藥物引起的肝毒性在很大程度上依賴于這些藥物被多種CYP異構(gòu)體生物活化，這些CYP異構(gòu)體中最重要的是CYP 450 3A4。有幾種可以降低CYP水平或逆轉(zhuǎn)微核形成的藥劑，但它們不具有保肝作用。舉例來說，申請人開發(fā)了一種胡椒堿分子，它是CYP 450 1A1的特異性抑制劑，但不具有保肝作用。類似地，有幾種已知的化合物可以逆轉(zhuǎn)基因毒性，但不具有保肝作用。所以CYP 1A1的減少和斷裂的逆轉(zhuǎn)不能認(rèn)為是保肝作用。例如，黃疸(肝-膽的功能紊亂)與基因毒性無關(guān)，然而它是發(fā)生肝毒性的早期事件。本文中，CYP下降與基因毒性之間的不確定聯(lián)系與肝毒性癥狀中常見的臨床病理現(xiàn)象的減弱無關(guān)。
本發(fā)明中，申請人提供了對所有這些藥物引起的肝毒性的保護(hù)作用，血清/肝的臨床參數(shù)表明，這些藥物可被多種CYP異構(gòu)體生物活化。此外，我們認(rèn)為，即使沒有出現(xiàn)基因毒性的癥狀，但顯示毒性的臨床參數(shù)也會(huì)逆轉(zhuǎn)。例如，肝細(xì)胞原代單層培養(yǎng)顯示，異常升高的血清膽紅素的下降可歸因于產(chǎn)生了保護(hù)作用，也可歸因于其他的細(xì)胞因素，例如膜的穩(wěn)定化。
于是，我們要求保護(hù)余甘子制劑，這種制劑在與保肝作用有關(guān)的臨床方面(血清/肝的參數(shù))表現(xiàn)出優(yōu)良的綜合效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是開發(fā)一種治療肝病的組合物，該組合物可對抗由藥物所致的CYP 450生物活化肝毒性。
本發(fā)明的另一個(gè)主要目的是開發(fā)一種治療肝病的組合物，該組合物可對抗由抗結(jié)核藥物所致的CYP 450生物活化肝毒性。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是開發(fā)一種源自余甘子果實(shí)的治療肝病的組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是開發(fā)一種源自余甘子果實(shí)的治療肝病的組合物，該組合物可對抗CYP 450生物活化肝毒性。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是開發(fā)一種制備余甘子果實(shí)提取物的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是開發(fā)一種采用含有余甘子提取物的組合物來治療受驗(yàn)者的用途，該受驗(yàn)者具有由藥物引起的CYP 450和自由基介導(dǎo)的肝毒性。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是開發(fā)一種采用肝細(xì)胞來研究余甘子果實(shí)提取物的效果的方法。
本發(fā)明涉及一種治療肝病的組合物及其在治療藥物引起的肝毒性中的用途，所述組合物可對抗由藥物所致的CYP 450生物活化肝毒性，該組合物含有余甘子提取物和可選擇的藥用添加劑。
具體實(shí)施例方式
因此，本發(fā)明涉及一種治療肝病的組合物及其在治療藥物引起的肝毒性中的用途，所述組合物可對抗由藥物所致的CYP 450生物活化肝毒性，該組合物含有余甘子提取物和可選擇的藥用添加劑。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種治療肝病的組合物，該組合物可對抗由藥物所致的CYP 450生物活化肝毒性，該組合物含有余甘子提取物和可選擇的藥用添加劑。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述添加劑選自包括蛋白質(zhì)、碳水化合物、糖、滑石、硬脂酸鎂、纖維素、碳酸鈣、淀粉-白明膠糊漿等的營養(yǎng)物質(zhì)，和/或藥用的載體、賦形劑、稀釋劑或溶劑。
在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物是口服給藥的。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述提取物和添加劑的比例在1∶1～1∶10的范圍。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述添加劑對于所述提取物治療肝病的作用沒有影響。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述提取物在選自水、水-乙醇、乙醇、酮、醚或鹵代溶劑等的溶劑中制備。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物顯示的鞣酸含量為8.5～15％。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述口服組合物是膠囊、片劑、糖漿、濃縮物、粉劑、粒劑、氣霧劑和/或丸劑的形式。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，是制備含有余甘子提取物和可選擇的藥用添加劑的組合物的方法，所述方法包括以下步驟在余甘子果實(shí)中加入極性溶劑以得到提取物，和選擇性地加入藥用添加劑。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述果實(shí)在室溫下與極性溶劑溫育約15～25小時(shí)。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述提取物來自新鮮的和/或半干的余甘子果實(shí)。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述提取物和添加劑的比例在1∶1～1∶10的范圍。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述提取物在選自水、水-乙醇、乙醇、酮、醚、鹵化溶劑等的溶劑中制備。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述口服組合物是膠囊、片劑、糖漿、濃縮物、粉劑、粒劑、氣霧劑和/或丸劑的形式。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，是采用所述組合物治療藥物引起的CYP 450和自由基介導(dǎo)的肝毒性的用途，所述組合物含有來自余甘子的提取物和可選擇的藥用添加劑。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，在肝細(xì)胞中引入藥物毒性。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，將所述組合物加入所述接受了藥物肝毒性的肝細(xì)胞中。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，測定肝/血清標(biāo)志物水平的變化，以便評估所述組合物對肝的治療效果。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途對于抗結(jié)核病藥物引起的肝毒性特別有效。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物對于與CYP 450生物活化作用無關(guān)的肝毒性無效。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物是口服給藥的。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述口服組合物是膠囊、片劑、糖漿、濃縮物、粉劑、粒劑、氣霧劑和/或丸劑的形式。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物可用于治療動(dòng)物或人。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物對健康沒有不利作用。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物選自包括撲熱息痛、CCl4和抗結(jié)核病藥物的組。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗結(jié)核病藥選自利福平、吡嗪酰胺或異煙肼。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物控制由血清/肝標(biāo)志物揭示的臨床病理癥狀的異常加重，并控制膽紅素的高水平，所述血清/肝標(biāo)志物是肝損傷的指標(biāo)。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途采用肝細(xì)胞培養(yǎng)物來進(jìn)行理想的研究。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物以細(xì)胞毒素水平使用，從而在肝細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生有效的和可重現(xiàn)的結(jié)果。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物可用于治療動(dòng)物或人。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物對健康沒有不利作用。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物對肝細(xì)胞的生存能力有恢復(fù)作用。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途是防止細(xì)胞膜的滲漏。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，對于聯(lián)合使用抗結(jié)核藥利福平和異煙肼引起的肝毒性，所述組合物的療效大約為96％。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物可逆轉(zhuǎn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)自肝細(xì)胞的滲漏。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，對于聯(lián)合使用抗結(jié)核藥利福平、異煙肼和吡嗪酰胺引起的肝毒性，所述組合物的療效大約為96％。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，對于聯(lián)合使用抗結(jié)核藥利福平、異煙肼和吡嗪酰胺引起的脂質(zhì)過氧化(LPO)反應(yīng)增加，所述組合物的療效大約為94％。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，對于聯(lián)合使用抗結(jié)核藥利福平、異煙肼和吡嗪酰胺引起的肝毒性，所述組合物的療效為可使血清膽紅素降低大約96％。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途有助于肝功能恢復(fù)正常。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物劑量是50～250mg/kg。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述用途是用于治療包括抗結(jié)核藥物在內(nèi)的藥物所致的肝功能異常。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，申請人提供了對抗各種藥物引起的肝毒性的保護(hù)作用，血清/肝的臨床參數(shù)表明，這些藥物可被多種CYP異構(gòu)體生物活化。此外，申請人認(rèn)為，即使沒有開始出現(xiàn)基因毒性的癥狀，顯示毒性的臨床參數(shù)也會(huì)逆轉(zhuǎn)。例如異常升高的血清膽紅素的下降，經(jīng)肝細(xì)胞原代單層培養(yǎng)顯示，這可歸因于產(chǎn)生了保護(hù)作用，還可歸因于其他的細(xì)胞因素，例如膜穩(wěn)定性。
而且，申請人利用他們的專業(yè)知識(shí)進(jìn)行了多年研究，得到的結(jié)論是，余甘子(Alma)可治療藥物所致的僅限于CYP 450生物活化的肝毒性。
于是，申請人要求保護(hù)余甘子制劑，這種制劑在與保肝作用有關(guān)的臨床方面(血清/肝的參數(shù))表現(xiàn)出優(yōu)良的綜合效果。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，涉及這樣一種產(chǎn)品的制備和用途，這種產(chǎn)品對于藥物的生物活化所引起的肝毒性，尤其是對于抗結(jié)核藥物所致的肝毒性，具有修復(fù)肝功能的作用。本發(fā)明的組合物和方法可增加組織的生物防御機(jī)制，有利于長期使用抗結(jié)核藥物所引起的肝功能紊亂的恢復(fù)。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物含有余甘子果實(shí)的提取物/成分作為主要組分。這些提取物/成分可以來自新鮮的或半干的余甘子果實(shí)。這些組合物由一種以上提取物以任何重量比配置而成。優(yōu)選的重量比包括1∶1、1∶2、1∶1∶1、1∶2∶2、2∶1∶2、2∶2∶1。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，涉及來自余甘子的產(chǎn)物的制備及其用途，這種產(chǎn)物對于藥物的生物活化所引起的肝毒性，尤其是對于抗結(jié)核藥物所致的肝毒性，具有修復(fù)肝功能的作用。本發(fā)明的產(chǎn)品包括源自余甘子的新鮮或半干果實(shí)的水、水-乙醇、乙醇、酮、醚、鹵化溶劑的提取物/成分。所述產(chǎn)品含有8.5％～15％的鞣酸成分。本發(fā)明還涉及含有不同比例的多種成分的這類產(chǎn)物的組合物的制備。這些產(chǎn)物單獨(dú)或聯(lián)合用于對抗藥物引起的肝毒性，所述肝毒性以特定機(jī)制的肝臟病變?yōu)榇恚R床上通常表現(xiàn)為肝功能障礙。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑被單獨(dú)或聯(lián)合用于對抗抗結(jié)核藥物。使用本發(fā)明所開發(fā)的這些產(chǎn)品除了可控制膽紅素水平的升高外，還可控制作為肝損害指標(biāo)的血清/肝臟標(biāo)記物所顯示的臨床病理癥狀的異常增加。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，申請人在本發(fā)明的開發(fā)中利用了大量有利于理解藥物所致肝毒性損害的機(jī)制的信息。更重要的是，選擇合適的模型來評價(jià)各種物質(zhì)的解毒特性也是很關(guān)鍵的。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，有利于本發(fā)明的大量信息是通過采用肝細(xì)胞培養(yǎng)物而得到的，借助這些細(xì)胞培養(yǎng)物對肝-膽功能障礙的毒性損害機(jī)制進(jìn)行了深入的研究，因?yàn)檫@種模型可以以細(xì)胞毒性水平施用試驗(yàn)化合物(例如抗結(jié)核藥物)，以便產(chǎn)生有效的且可再現(xiàn)的毒性。這種體外細(xì)胞培養(yǎng)模型對于探明毒性機(jī)制以及由保護(hù)性制劑的逆轉(zhuǎn)機(jī)制有重要的意義。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，在評價(jià)化學(xué)物質(zhì)和藥物的細(xì)胞累積生理毒性時(shí)，肝細(xì)胞被認(rèn)為是具有多種用途的可選擇體系(Nakagawa和Tayama，Arch Toxicol，199569208)，肝細(xì)胞同樣用于本發(fā)明的保肝作用的評價(jià)。肝細(xì)胞的臨界生化功能揭示了上述機(jī)制，該臨界生化功能是藥物毒性的敏感指標(biāo)。(Tomasi等，Toxicol/Vtf/zo/15178～183)。細(xì)胞溶解(通過細(xì)胞轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶的滲漏來測定)和組織代謝能力被轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬锍掷m(xù)時(shí)間和濃度的函數(shù)(Goethals等，F(xiàn)undm Appl Toxicol19844441～450)。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，這些制劑(單獨(dú)或聯(lián)合)以特定方式發(fā)揮作用。它們可對抗包括抗結(jié)核藥物在內(nèi)的藥物所致的毒性，所述藥物需要依賴于肝臟細(xì)胞色素P450的混合功能氧化酶的生物活化。細(xì)胞色素P450參與引起肝毒性(Anundi I，Lindros KO，Pharmacol Toxicol1992；70；453～458)。曾有報(bào)道，在肝臟中，包括抗結(jié)核藥物利福平、異煙肼和吡嗪酰胺在內(nèi)的藥物的氧化依賴于CYP 450的參與(Ono等，Biol Pharm Bull 199821421～425)。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，通過觀察進(jìn)一步證明，本發(fā)明所提到的制劑以特定的方式發(fā)揮作用，這些制劑對于半乳糖胺所致的毒性無效，所述毒性不依賴于混合功能氧化酶的參與。需重點(diǎn)考慮的是聯(lián)合使用一些藥物例如抗結(jié)核藥物所致的毒性。單一制劑或多種制劑的聯(lián)合不僅可治療(a)利福平、(b)異煙肼和(c)吡嗪酰胺所致的毒性，還可治療這些藥物的各種組合所致的毒性，例如(a)利福平+異煙肼、(b)利福平+吡嗪酰胺、(c)異煙肼+吡嗪酰胺和(d)利福平+異煙肼+吡嗪酰胺所致的毒性。藥物(包括單一的抗結(jié)核藥物或聯(lián)合使用的抗結(jié)核藥物)的代謝活化還伴有活性中間體，所述活性中間體可以是通過多種細(xì)胞內(nèi)氧化代謝途徑產(chǎn)生的自由基/活性代謝物/氧自由基。變化了的氧化/抗氧化作用與產(chǎn)生藥物引起的肝損害密切相關(guān)(Sodhi等，Hum ExpToxicol 1997；16；315～321)。本發(fā)明產(chǎn)品的抗脂質(zhì)過氧化(抗氧化)作用進(jìn)一步顯示了其效果。通過使用本發(fā)明的制劑，發(fā)現(xiàn)氧代謝產(chǎn)物的過量積聚下降了。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，還包括本發(fā)明所開發(fā)產(chǎn)品對于細(xì)胞膜滲漏的防止作用和由于毒性所致的受損肝組織細(xì)胞生存能力的恢復(fù)。這些制劑以特定的方式發(fā)揮作用，可最大限度地預(yù)防由上述現(xiàn)有技術(shù)中的所述藥物和藥物組合的生物活化所產(chǎn)生的毒性。所述產(chǎn)品沒有細(xì)胞毒性，另一方面，所述產(chǎn)品可增強(qiáng)生物本身的整體防御能力。


圖1顯示肝毒性，其中植物提取物減弱了利福平所致的肝毒性，使肝功能恢復(fù)正常(95％有效)。圖1中所示的細(xì)胞毒性指標(biāo)是，毒素?fù)p傷后，乳酸脫氫酶(LDH)自完整細(xì)胞的滲漏和提取物對此滲漏的逆轉(zhuǎn)。
圖2顯示谷丙轉(zhuǎn)氨酶的滲漏，其中所述植物提取物聯(lián)合使用可減弱利福平+異煙肼所致的肝毒性，使肝功能恢復(fù)正常(96％)。圖2中所示的細(xì)胞毒性指標(biāo)是，毒素?fù)p傷后，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)自完整細(xì)胞的滲漏以及聯(lián)合使用提取物對此滲漏的逆轉(zhuǎn)。(模型肝細(xì)胞的原代單層培養(yǎng)物)。
圖3顯示毒素?fù)p傷后，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)的滲漏以及余甘子成分對此滲漏的逆轉(zhuǎn)，其中余甘子可逆轉(zhuǎn)利福平+異煙肼+吡嗪酰胺所致的肝毒性，使肝功能恢復(fù)正常(96％)。圖3中顯示的細(xì)胞毒性指標(biāo)是，毒素?fù)p傷后，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的滲漏以及余甘子成分對此滲漏的逆轉(zhuǎn)。
圖4顯示了對細(xì)胞滲漏的保護(hù)，其中聯(lián)合使用余甘子成分可消除利福平+異煙肼所致的毒性。圖4顯示，根據(jù)對血清GPT水平的測量，余甘子成分對抗細(xì)胞滲漏的保護(hù)作用為96％，并且提高了細(xì)胞的抵抗力。觀察到谷胱甘肽水平(肝)增加了75％。
圖5顯示余甘子提取物可使利福平+異煙肼+吡嗪酰胺所致的肝毒性逆轉(zhuǎn)。圖5顯示，用本發(fā)明的提取物進(jìn)行治療時(shí)，對脂質(zhì)過氧化(LPO，肝)的保護(hù)為94％，而且血清膽紅素降低了96％。
圖6顯示由余甘子果實(shí)制備提取物的流程圖。
實(shí)施例通過以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本申請的發(fā)明，然而，這不應(yīng)解釋為對本發(fā)明范圍的限制。以下實(shí)施例絕非用來限制本發(fā)明，只是用來說明本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施方案。本領(lǐng)域的任何技術(shù)人員可以設(shè)計(jì)更多的組合，用于對抗藥物所致毒性，這些均可視為本發(fā)明的一部分。
實(shí)施例1表1顯示植物產(chǎn)品可有效對抗撲熱息痛的肝毒性，這種作用主要有賴于對抗CYP 450介導(dǎo)的生物活化機(jī)制。保護(hù)百分率通過釋放到血清中的LDH和GPT的綜合水平來顯示。
表1植物產(chǎn)品對抗撲熱息痛所致肝毒性的效果治療撲熱息痛毒性93％由對抗LDH和GPT滲漏的綜合效果所測定的保護(hù)百分率提取物 97％保護(hù)成分96％保護(hù)實(shí)施例2表2顯示，本發(fā)明的制劑對于基本上不依賴于CYP 450生物活化的藥物所致的肝毒性無效。
表2植物產(chǎn)品對抗半乳糖胺所致肝毒性的效果治療半乳糖胺毒性93％由對抗LDH和GPT滲漏的綜合效果所測定的保護(hù)百分率提取物 3％成分7％實(shí)施例3植物提取物可減弱利福平所致的肝毒性，使肝功能恢復(fù)正常(96％有效)。圖1中顯示的細(xì)胞毒性指標(biāo)是，毒素?fù)p傷后，乳酸脫氫酶(LDH)自完整細(xì)胞的滲漏以及提取物對這種滲漏的逆轉(zhuǎn)。(模型肝細(xì)胞的原代單層培養(yǎng)物)。
實(shí)施例4聯(lián)合使用植物的各種提取物可減弱利福平+異煙肼所致的肝毒性，使肝功能恢復(fù)正常(96％)。圖2中顯示的細(xì)胞毒性指標(biāo)是，毒素?fù)p傷后，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)自完整細(xì)胞的滲漏以及聯(lián)合使用各種提取物對這種滲漏的逆轉(zhuǎn)。(模型肝細(xì)胞的原代單層培養(yǎng)物)。
實(shí)施例5余甘子可逆轉(zhuǎn)利福平+異煙肼+吡嗪酰胺所致的肝毒性，使肝功能恢復(fù)正常(96％)。圖3中顯示的細(xì)胞毒性指標(biāo)是，毒素?fù)p傷后，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)的滲漏以及余甘子成分對這種滲漏的逆轉(zhuǎn)。
實(shí)施例6聯(lián)合使用余甘子的各種成分可預(yù)防利福平+異煙肼所致的毒性，圖4顯示，用血清GPT水平來衡量，這些成分對細(xì)胞滲漏提供96％的保護(hù)，而且可增加細(xì)胞的抵抗力。觀察到谷胱甘肽的水平(肝)增加了75％。
實(shí)施例7余甘子提取物可逆轉(zhuǎn)利福平+異煙肼+吡嗪酰胺所致的毒性。圖5顯示，作為采用本發(fā)明提取物處理的結(jié)果，對防止脂質(zhì)過氧化(LPO，肝)的增加提供94％保護(hù)，而且血清膽紅素降低了96％。
權(quán)利要求
1.一種具有肝治療作用的組合物，該組合物對抗由藥物所致的CYP450生物活化肝毒性，該組合物含有余甘子提取物和可選擇的藥用添加劑。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述添加劑選自包括蛋白質(zhì)、碳水化合物、糖、滑石、硬脂酸鎂、纖維素、碳酸鈣、淀粉-白明膠糊漿的營養(yǎng)物質(zhì)，和/或藥用的載體、賦形劑、稀釋劑或溶劑。
3.如權(quán)利要求1所述的組合物，該組合物是口服給藥的。
4.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述提取物和添加劑的比例為1∶1～1∶10。
5.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述添加劑對于所述提取物的肝治療的作用沒有影響。
6.如權(quán)利要求1所述的組合物，所述提取物在選自以下的溶劑中制備水、水-乙醇、乙醇、酮、醚或鹵化溶劑。
7.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物顯示的鞣酸含量為8.5％～15％。
8.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述口服組合物是膠囊、片劑、糖漿、濃縮物、粉劑、粒劑、氣霧劑和/或丸劑的形式。
9.制備含有余甘子提取物和可選擇的藥用添加劑的組合物的方法，所述方法包括以下步驟在余甘子果實(shí)中加入極性溶劑以得到提取物，和選擇性地加入藥用添加劑。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述果實(shí)在室溫下與極性溶劑溫育15～25小時(shí)。
11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述提取物來自新鮮的或/和半干的余甘子果實(shí)。
12.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述提取物和添加劑的比例為1∶1～1∶10。
13.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述提取物在選自以下的溶劑中制備水、水-乙醇、乙醇、酮、醚、鹵化溶劑。
14.如權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述口服組合物是膠囊、片劑、糖漿、濃縮物、粉劑、粒劑、氣霧劑和/或丸劑的形式。
15.包含余甘子提取物和可選擇的藥用添加劑的組合物在治療藥物引起的CYP 450和自由基介導(dǎo)的肝毒性中的用途，所述用途包括以下步驟(a)在肝細(xì)胞中引入藥物毒性，(b)將所述組合物加入所述接受了藥物肝毒性的肝細(xì)胞中，(c)測定肝/血清標(biāo)志物水平的變化，以便評估所述組合物對肝的治療效果。
16.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述用途對于由抗結(jié)核藥物引起的肝毒性特別有效。
17.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物對與CYP 450生物活化作用無關(guān)的肝毒性無效。
18.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物是口服給藥的。
19.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述口服組合物是膠囊、片劑、糖漿、濃縮物、粉劑、粒劑、氣霧劑和/或丸劑的形式。
20.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物用于治療動(dòng)物或人。
21.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物對健康沒有不利作用。
22.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述藥物選自包括撲熱息痛、CCl4和抗結(jié)核藥物的組。
23.如權(quán)利要求22所述的用途，其中，所述抗結(jié)核病藥選自利福平、吡嗪酰胺或異煙肼。
24.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物控制由血清/肝標(biāo)志物揭示的臨床病理癥狀的異常加重，并控制膽紅素的高水平，所述血清/肝標(biāo)志物是肝損傷的指標(biāo)。
25.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述用途采用細(xì)胞培養(yǎng)物來進(jìn)行理想的研究。
26.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述藥物以細(xì)胞毒素水平使用，從而在肝細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生有效的和可重現(xiàn)的結(jié)果。
27.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物用于治療動(dòng)物或人。
28.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物對健康沒有不利作用。
29.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物對肝細(xì)胞的生存能力有恢復(fù)作用。
30.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述用途是防止細(xì)胞膜的滲漏。
31.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，對于聯(lián)合使用抗結(jié)核藥利福平和異煙肼引起的肝毒性，所述組合物的療效大約為96％。
32.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物可以逆轉(zhuǎn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)自細(xì)胞的滲漏。
33.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，對于聯(lián)合使用抗結(jié)核藥利福平、異煙肼和吡嗪酰胺引起的肝毒性，所述組合物的療效大約為96％。
34.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，對于聯(lián)合使用抗結(jié)核藥利福平、異煙肼和吡嗪酰胺引起的脂質(zhì)過氧化(LPO)反應(yīng)增加，所述組合物的療效大約為94％。
35.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，對于聯(lián)合使用抗結(jié)核藥利福平、異煙肼和吡嗪酰胺引起的肝毒性，所述組合物的療效為使血清膽紅素降低大約96％。
36.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述用途有助于肝功能恢復(fù)正常。
37.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述組合物的劑量為50～250mg/kg。
38.如權(quán)利要求15所述的用途，其中，所述用途是用于治療包括抗結(jié)核藥物在內(nèi)的藥物所致的肝功能異常。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療肝病的組合物及其治療藥物引起的肝毒性的方法，所述組合物可對抗由藥物所致的CYP 450生物活化肝毒性，所述組合物含有余甘子提取物和可選擇的藥用添加劑。
文檔編號(hào)A61K47/42GK1627955SQ02829030
公開日2005年6月15日 申請日期2002年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月26日
發(fā)明者拉凱什·卡邁勒·約里, 謝赫·塔薩達(dá)克·阿卜杜拉, 庫爾迪普·辛格, 德維得·庫馬爾·古普塔, 巴爾·克里尚·卡帕希, 迪利普·馬尼克勞·蒙齊, 薩蒂德·莫漢·賈殷, 奧姆·帕卡什·蘇里, 卡斯圖里·拉爾·貝迪, 吳拉姆·納比·卡齊 申請人:科學(xué)與工業(yè)研究委員會(huì)