專(zhuān)利名稱(chēng)：脲取代的咪唑并吡啶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在1-位上具有脲或硫脲官能基的咪唑并吡啶化合物，和涉及含有所述化合物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及這些化合物作為免疫調(diào)節(jié)劑以誘導(dǎo)動(dòng)物中細(xì)胞因子的生物合成和治療疾病包括病毒性疾病和腫瘤疾病的用途。本發(fā)明還提供了制備這種化合物和在其合成中所用中間體的方法。
背景技術(shù)：
關(guān)于1H-咪唑并[4，5-c]喹啉環(huán)系的首篇可靠的報(bào)道，是由Backman等在J.Org.Chem.15，1278-1284(1950)中描述可能能夠用作抗瘧疾劑的1-(6-甲氧基-8-喹啉基)-2-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉的合成。隨后報(bào)道了多種取代的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉的合成。例如，由Jain等人，J.Med.Chem.11，pp87-92(1968)，合成了可以作為抗驚厥藥和心血管藥的1-[2-(4-哌啶基)乙基]-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉化合物。此外，Baranov等在Chem.Abs.85，94362(1976)中公開(kāi)了幾個(gè)2-氧代咪唑并[4，5-c]喹啉化合物，以及Berenyi等在J.Heterocyclic Chem.18，1537-1540(1981)中公開(kāi)了某些2-氧代咪唑并[4，5-c]喹啉。
后來(lái)發(fā)現(xiàn)某些1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺及其1-和2-取代的衍生物可用作抗病毒劑，支氣管擴(kuò)張劑和免疫調(diào)節(jié)劑。這些還具體在美國(guó)專(zhuān)利US 4,689,338；4,698,348；4,929,624；5,037,986，5268,376；5,346,905；和5,389,640進(jìn)行了描述。
在美國(guó)專(zhuān)利US 5,446,153；5,494,916；和5,644,063中公開(kāi)了用作免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的取代的1H-咪唑并吡啶-4-胺化合物。但這些專(zhuān)利中描述的化合物沒(méi)有在1-位的胺取代。在PCT申請(qǐng)WO 00/76505，WO 00/76518和美國(guó)專(zhuān)利US6,331,539中公開(kāi)了某些在1-位具有酰胺，磺酰胺和脲官能基的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺。所有上述專(zhuān)利和專(zhuān)利公開(kāi)說(shuō)明書(shū)都引入本文中作參考。
盡管有近期新發(fā)現(xiàn)的作為免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的化合物，但是對(duì)借助誘導(dǎo)細(xì)胞因子生物合成或其它機(jī)理而具有調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)能力的化合物的需求一直是存在的。
本發(fā)明概述我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一組新的可誘導(dǎo)動(dòng)物中細(xì)胞因子生物合成的化合物。因此，本發(fā)明提供了在1-位上具有脲或硫脲官能基的咪唑并吡啶-4-胺化合物。我們發(fā)現(xiàn)這些化合物可以用作細(xì)胞因子生物合成的誘導(dǎo)劑，這些化合物如式(I)所示，更具體的如下文所示。式(I)如下所示 其中X，Y，Z，R1，R2，R3，R4和R5如這里所述。
式(I)化合物可以用作免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑是因?yàn)楫?dāng)給動(dòng)物施用時(shí)，這些化合物表現(xiàn)出誘導(dǎo)細(xì)胞因子生物合成和另外調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的能力。這使得該化合物可用于治療對(duì)免疫反應(yīng)的這些變化有響應(yīng)的一系列疾病如病毒性疾病和腫瘤。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了含有免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)化合物的藥物組合物，提供了通過(guò)給動(dòng)物施用式(I)化合物來(lái)誘導(dǎo)動(dòng)物中細(xì)胞因子生物合成，治療動(dòng)物病毒感染，和/或治療腫瘤疾病的方法。
此外，本發(fā)明還提供了合成本發(fā)明化合物的方法和在合成這些化合物時(shí)所采用的中間體。
本發(fā)明詳述如前所述，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了某些可以誘導(dǎo)細(xì)胞因子生物合成和調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫反應(yīng)的化合物。所述化合物為如下式(I)所示的化合物或其可藥用鹽 其中X表示亞烷基或亞烯基；Y表示-CO-或-CS-；Z表示-NR6-；-NR6-CO-，-NR6-SO2-或-NR7-；R1表示芳基，雜芳基，雜環(huán)基，烷基或烯基，各個(gè)基團(tuán)可以是未被取代的或者被一或多個(gè)各自獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的取代基所取代-烷基；-烯基；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的環(huán)烷基；-取代的芳基；
-取代的雜芳基；-取代的雜環(huán)基；-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-取代芳基；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-取代雜芳基；-O-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-O-(烷基)0-1-取代雜環(huán)基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代雜環(huán)基；-(烷基)0-1-N(R6)2；-(烷基)0-1-NR6-CO-O-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-取代芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-雜芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-取代雜芳基；-P(O)(O烷基)2；-N3；-鹵素；-鹵代烷基；
-鹵代烷氧基；-CO-鹵代烷基；-CO-鹵代烷氧基；-NO2；-CN；-OH；-SH；和在烷基，烯基和雜環(huán)基情況下可以是氧代的；R2選自下述基團(tuán)-氫；-烷基；-烯基；-芳基；-取代芳基；-雜芳基；-取代雜芳基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一或多個(gè)各自獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；
-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-取代芳基；-雜芳基；-取代雜芳基；-雜環(huán)基；-取代雜環(huán)基；-CO-芳基；-CO-取代芳基；-CO-雜芳基；和-CO-取代雜芳基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫，烷基，烯基，鹵素，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；R5是H或C1-10烷基，或者R5與X連接形成含有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的環(huán)；每個(gè)R6各自獨(dú)立地表示H或C1-10烷基；R7表示H或C1-10烷基，它可以被一個(gè)或多個(gè)雜原子斷開(kāi)，或者當(dāng)R1是烷基時(shí)，R7和R1連接形成環(huán)。
化合物的制備本發(fā)明化合物可以按照反應(yīng)流程I制備，其中R1，R2，R3，R4，R5，X，Y和Z的定義如上所述，Bn表示芐基，R’表示1-4個(gè)碳原子的烷基、1-4個(gè)碳原子的全氟烷基、苯基或被鹵素或1-4個(gè)碳原子烷基取代的苯基。
在反應(yīng)流程I步驟(1)中，式X所示的3-硝基吡啶-2，4-二磺酸酯與式R1-Z-Y-N(R5)-X-NH2所示的胺反應(yīng)得到式XI所示的3-硝基-4-氨基吡啶-2-磺酸酯。由于存在原則上可以被置換的兩個(gè)磺酸基，反應(yīng)可能產(chǎn)生產(chǎn)物混合物，可利用常規(guī)技術(shù)如柱色譜法容易地分離該反應(yīng)混合物。該反應(yīng)優(yōu)選在叔胺如三乙胺存在下、通過(guò)向式X化合物在合適的溶劑如二氯甲烷的溶液中，加入胺而進(jìn)行的。由于磺酸基是相對(duì)易于離去的基團(tuán)，反應(yīng)可在低溫(0℃)下進(jìn)行以減少不需要的2-氨基化和2，4-二氨基化的副產(chǎn)物的量。3-硝基吡啶-2，4-二磺酸酯是已知的，通過(guò)已知的合成方法很容易制備，參見(jiàn)例如Lindstom等人的美國(guó)專(zhuān)利US5,446,153和其中引述的參考文獻(xiàn)。
在反應(yīng)流程I步驟(2)中，使式XI所示3-硝基-4-氨基吡啶-2-磺酸酯與二芐基胺反應(yīng)得到式XII所示的2-二芐基氨基-3-硝基吡啶-4-胺。該反應(yīng)是在惰性溶劑如苯、甲苯或二甲苯中，混合式XI化合物、二芐基胺以及叔胺如三乙胺并加熱所得混合物而進(jìn)行的。
在反應(yīng)流程I步驟(3)中，將式XII 2-二芐基氨基-3-硝基吡啶-4-胺中的硝基還原為氨基。還原反應(yīng)優(yōu)選采用NiB2，它在甲醇中由硼氫化鈉和氯化鎳水合物就地產(chǎn)生。該反應(yīng)優(yōu)選在室溫下進(jìn)行。
在反應(yīng)流程I步驟(4)中，使式XIII所示2-二芐基氨基吡啶-3，4-二胺與羧酸或其等同物反應(yīng)得到式XV所示的4-二芐基氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶。合適的羧酸的等同物包括原酸酯和鏈烷酸1，1-二烷氧基烷酯。要選擇羧酸或其等同物使得能夠在式XV化合物中得到需要的R2取代基。例如，原甲酸三乙酯可以制得其中R2是氫的化合物，和原乙酸三乙酯可以制得其中R2是甲基的化合物。該反應(yīng)可在沒(méi)有溶劑或在惰性溶劑如甲苯存在下進(jìn)行。應(yīng)充分加熱以除去反應(yīng)中生成的任何副產(chǎn)物醇或水?？梢匀芜x加入催化劑如鹽酸吡啶。
或者式XV化合物可以通過(guò)兩步制備(a)使式XIII所示二胺與式R2C(O)Cl或R2C(O)Br所示的酰鹵反應(yīng)得到式XIV化合物，然后(b)環(huán)化。在步驟(4a)中，將酰鹵加到二胺在惰性溶劑中的溶液中，惰性溶劑如乙腈、吡啶或二氯甲烷。反應(yīng)可在室溫進(jìn)行。在步驟(4b)中，在堿存在下將步驟(4a)產(chǎn)物在醇性溶劑中加熱。優(yōu)選的在過(guò)量三乙胺存在下在乙醇中加熱回流步驟(4a)產(chǎn)物或?qū)⑵渑c氨甲醇一起加熱?；蛘卟襟E(4b)也可以通過(guò)在吡啶中加熱步驟(4a)產(chǎn)物進(jìn)行。如果步驟(4a)就是在吡啶中進(jìn)行的，那么步驟(4b)就可在進(jìn)行分析顯示步驟(4a)已經(jīng)完成后直接加熱反應(yīng)混合物來(lái)進(jìn)行。
在反應(yīng)流程I步驟(5)中，氫解式XV所示的4-二芐基氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶得到式I所示4-氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶。優(yōu)選的，在氫氧化鈀/炭存在下在甲酸中加熱式XV化合物。采用常規(guī)技術(shù)可以分離所得到的產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程I
本發(fā)明化合物可以根據(jù)反應(yīng)流程II制備，其中R1，R2，R3，R4，R5和X的定義如上所述，Bn為芐基，BOC是叔丁氧羰基和W是O或S。
在反應(yīng)流程II步驟(1)中，除去式XVI的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶上的氨基保護(hù)基得到式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶。優(yōu)選地，在室溫下用三氟甲磺酸(triflic acid)處理式XVI化合物在合適溶劑如二氯甲烷中的溶液。采用在反應(yīng)流程I中所述的合成方法可以制備得到式XVI化合物。在步驟(1)中，式X的2，4-二磺酸酯與式為BOC-NR5-X-NH2的胺反應(yīng)，然后如上所述進(jìn)行步驟(2)-(4)得到式XVI化合物，它是式XV的下位組。
在反應(yīng)流程II步驟(2a)中，式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與式R1-C(O)Cl酰氯或式R1-C(O)OC(O)-R1酸酐反應(yīng)得到式XVII所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基酰胺。反應(yīng)優(yōu)選在堿如三乙胺存在下將酰氯或酸酐加到式II化合物在合適溶劑如二氯甲烷或乙腈的溶液中而進(jìn)行。反應(yīng)可在低溫(0℃)或室溫下進(jìn)行。采用常規(guī)方法可以分離產(chǎn)物或其可藥用鹽。
在反應(yīng)流程II步驟(2b)中，式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與式R1-N＝C＝O所示的異氰酸酯或式R1-N＝C＝S所示的異硫代氰酸酯反應(yīng)，得到式XVIII所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基脲或硫脲，它是式I的下位組。反應(yīng)優(yōu)選在低溫(℃)下將異氰酸酯或異硫代異氰酸酯加到式II化合物在合適溶劑如二氯甲烷的溶液中而進(jìn)行。采用常規(guī)方法可以分離產(chǎn)物或其可藥用鹽。
在反應(yīng)流程II步驟(2c)中，式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與式R1-S(O)2-Cl所示的磺酰氯或式R1-S(O)2-O-S(O)2-R1所示的磺酸酐反應(yīng)，得到式XIX所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺。反應(yīng)優(yōu)選在堿如三乙胺存在下，將磺酰氯或磺酸酐加到式II化合物在合適溶劑如二氯甲烷的溶液中而進(jìn)行。反應(yīng)可在低溫(0℃)或室溫下進(jìn)行。采用常規(guī)方法可以分離產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程II 本發(fā)明化合物可以根據(jù)反應(yīng)流程III制備，其中R1，R2，R3，R4，R5，R6和X的定義如上所述。
在反應(yīng)流程III步驟(1)中，式II所示1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與式R1-N(R6)S(O)2-Cl氨磺酰氯反應(yīng)，得到式XXI所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺。反應(yīng)優(yōu)選在堿如三乙胺存在下，將氨磺酰氯加到式II化合物在合適溶劑如1，2-二氯乙烷的溶液中而進(jìn)行。反應(yīng)可在升溫下進(jìn)行。采用常規(guī)方法可以分離產(chǎn)物或其可藥用鹽。
或者，式XXI所示磺酰胺可通過(guò)兩步制備，(a)式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與磺酰氯反應(yīng)就地生成式XX所示氨磺酰氯，然后(b)使所得到的氨磺酰氯與式R1-N(R6)H所示胺反應(yīng)。在步驟(1a)中，反應(yīng)在1當(dāng)量4-(二甲基氨基)吡啶存在下，將磺酰氯的二氯甲烷溶液加到式II化合物的溶液中。反應(yīng)優(yōu)選在低溫(-78℃)下進(jìn)行。添加完成后，可使得反應(yīng)混合物任選地恢復(fù)到室溫。在步驟(1b)中，將含有2當(dāng)量R1-N(R6)H和2當(dāng)量三乙胺的二氯甲烷溶液加到步驟(1a)的反應(yīng)混合物中。反應(yīng)優(yōu)選在低溫(-78℃)下進(jìn)行。采用常規(guī)方法可以分離產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程III 本發(fā)明化合物可以按照反應(yīng)流程IV制備，其中R1，R2，R3，R4，R5和X的定義如上所述，BOC表示叔丁氧羰基。
在反應(yīng)流程IV步驟(1)中，采用常規(guī)氯化試劑氯化式XXII所示2，4-二羥基-3-硝基吡啶得到式XXIII所示2，4-二氯-3-硝基吡啶。優(yōu)選地，式XXII化合物與磷酰氯混合并一起加熱。許多式XXII所示2，4-二羥基-3-硝基吡啶是已知的而其他的化合物通過(guò)已知的合成方法很容易制備，參見(jiàn)例如Lindstom等人的美國(guó)專(zhuān)利US 5,446,153和其中引述的參考文獻(xiàn)。
在反應(yīng)流程IV步驟(2)中，使式XXIII所示2，4-二氯-3-硝基吡啶與式BOC-NR5-X-NH2胺反應(yīng)得到式XXIV所示的2-氯-3-硝基吡啶。該反應(yīng)優(yōu)選在叔胺如三乙胺存在下，將胺加到式XXIII化合物在合適的溶劑如N，N-二甲基甲酰胺的溶液中而進(jìn)行的，并任選地加熱。
在反應(yīng)流程IV步驟(3)中，式XXIV所示的2-氯-3-硝基吡啶與苯酚反應(yīng)得到式XXV所示的3-硝基-2-苯氧基吡啶。苯酚與氫化鈉在合適的溶劑如二甘醇二甲醚或四氫呋喃中反應(yīng)得到酚鹽。然后所得到的酚鹽在室溫或任選的升溫下與式XXIV化合物反應(yīng)。
在反應(yīng)流程IV步驟(4)中，還原XXV所示的3-硝基-2-苯氧基吡啶得到XXVI所示的3-氨基-2-苯氧基吡啶。優(yōu)選地，上述還原反應(yīng)采用常規(guī)的多相氫化催化劑如鉑/炭，或鈀/炭。反應(yīng)在帕爾(Parr)反應(yīng)器中在合適的溶劑如異丙醇或甲苯或它們的混合物中進(jìn)行。
在反應(yīng)流程IV步驟(5)中，XXVI所示的3-氨基-2-苯氧基吡啶與羧酸或其等同物反應(yīng)得到式IV所示的4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶。合適的羧酸的等同物包括原酸酯和鏈烷酸1，1-二烷氧基烷酯。要選擇羧酸或其等同物使得能夠在式IV化合物中得到需要的R2取代基。例如，原甲酸三乙酯可以制得其中R2是氫的化合物，和原戊酸三甲酯可以制得其中R2是丁基的化合物。該反應(yīng)可在沒(méi)有溶劑或在惰性溶劑如甲苯存在下進(jìn)行。反應(yīng)進(jìn)行時(shí)應(yīng)充分加熱以除去反應(yīng)中生成的任何副產(chǎn)物醇或水?？梢匀芜x加入催化劑如鹽酸吡啶。
或者步驟(5)可以通過(guò)下述步驟進(jìn)行(i)使式XXVI化合物與式R2C(O)Cl或R2C(O)Br的酰鹵反應(yīng)，然后(ii)環(huán)化。在步驟(i)中，將酰鹵加到式XXVI化合物在惰性溶劑中的溶液中，惰性溶劑如乙腈、吡啶或二氯甲烷。反應(yīng)可在室溫進(jìn)行?？梢匀芜x地加入催化劑如鹽酸吡啶。在步驟(ii)中，在吡啶中加熱步驟(i)產(chǎn)物。如果步驟(i)是在吡啶中進(jìn)行的，那么兩個(gè)步驟可以合并為一個(gè)步驟。
在反應(yīng)流程IV步驟(6)中，從式IV化合物中除去BOC基團(tuán)得到式V所示4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶。優(yōu)選地，在低溫下用三氟乙酸或鹽酸處理式IV化合物在合適的溶劑如二氯甲烷中的溶液。
在反應(yīng)流程IV步驟(7)中，采用反應(yīng)流程II步驟(2c)的方法將式V所示4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶轉(zhuǎn)化為式VI所示4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺。
在反應(yīng)流程IV步驟(8)中，氨化式VI所示4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺得到式XIX所示的4-氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺。反應(yīng)可通過(guò)混合式VI化合物與乙酸銨在密封管中并加熱(～150℃)進(jìn)行。采用常規(guī)方法可以分離產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程IV 本發(fā)明化合物可以按照反應(yīng)流程V制備，其中R1，R2，R3，R4，R5和X的定義如上所述，BOC表示叔丁氧羰基。
在反應(yīng)流程V步驟(1)中，氨化式IV所示4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶得到式XXVIII所示的N-(4-氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙酰胺，它是式I的下位組。優(yōu)選高溫下(140℃-160℃)混合式IV化合物和乙酸銨。任選地，反應(yīng)可在壓力容器中進(jìn)行。
在反應(yīng)流程V步驟(2)中，酸性條件下水解式XXVIII所示N-(4-氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙酰胺得到式II所示1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺。優(yōu)選混合式XXVIII所示化合物和鹽酸/乙醇水溶液并加熱。
在反應(yīng)流程V步驟(3)中，利用常規(guī)方法將式II所示1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺轉(zhuǎn)變?yōu)槭絀的脲或硫脲。例如式II的化合物與式R1N＝C＝O所示異氰酸酯反應(yīng)。室溫下，任選在堿如三乙胺存在下，通過(guò)向式II所示化合物在合適溶劑如氯仿的溶液中加入異氰酸酯進(jìn)行該反應(yīng)?；蛘撸絀I所示化合物與式R1N＝C＝S所示異硫氰酸酯，式R1S(O2)N＝C＝O所示磺酰基異氰酸酯或式R1R6NC(O)Cl所示氨基甲酰氯反應(yīng)。采用常規(guī)方法可以分離產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程V 本發(fā)明還提供了可用于合成式I化合物的新中間體化合物。這些中間體的結(jié)構(gòu)式(II)-(VI)將詳述如下。
式(II)所示的一組中間體化合物或其可藥用鹽 其中X表示亞烷基或亞烯基；R2選自下述基團(tuán)-氫；-烷基；-烯基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一或多個(gè)各自獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；
-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫，烷基，烯基，鹵素，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基，或者R與X連接形成含有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的環(huán)；每個(gè)R6各自獨(dú)立地表示H或C1-10烷基。
式(III)所示的另一組中間體化合物或其可藥用鹽 其中Q表示NO2或NH2；X表示亞烷基或亞烯基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫，烷基，烯基，鹵素，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基，或者R5和X連接形成含有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的環(huán)。
式(IV)所示的另一組中間體化合物或其可藥用鹽 其中X表示亞烷基或亞烯基；R2選自下述基團(tuán)-氫；-烷基；-烯基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一或多個(gè)各自獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；
-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫，烷基，烯基，鹵素，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基，或者R5與X連接形成含有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的環(huán)；每個(gè)R6各自獨(dú)立地表示H或C1-10烷基。
式(V)所示的另一組中間體化合物或其可藥用鹽
其中X表示亞烷基或亞烯基；R2選自下述基團(tuán)-氫；-烷基；-烯基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一或多個(gè)各自獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；
-CO-芳基；和-CO-雜芳基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫，烷基，烯基，鹵素，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基，或者R5和X連接形成含有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的環(huán)；每個(gè)R6各自獨(dú)立地表示H或C1-10烷基。
式(VI)所示的另一組中間體化合物或其可藥用鹽 其中X表示亞烷基或亞烯基；R1表示芳基，雜芳基，雜環(huán)基，C1-20烷基或C2-20烯基，各個(gè)基團(tuán)可以是未被取代的或者被一或多個(gè)各自獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的取代基所取代-烷基；-烯基；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的環(huán)烷基；
-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-(烷基)0-1-N(R6)2；-(烷基)0-1-NR6-CO-O-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-雜芳基；-N3；-鹵素；-鹵烷基；-鹵代烷氧基；-CO-鹵代烷基；-CO-鹵代烷氧基；-NO2；-CN；-OH；-SH；和在烷基、烯基和雜環(huán)基情況下，可以是氧代的；R2選自下述基團(tuán)-氫；-烷基；-烯基；
-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一或多個(gè)各自獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫，烷基，烯基，鹵素，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基，或者R5與X連接形成含有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的環(huán)；每個(gè)R6各自獨(dú)立地表示H或C1-10烷基。
這里所用的術(shù)語(yǔ)“烷基”、“烯基”和前綴“烷”包括直鏈和支鏈基團(tuán)也包括環(huán)狀基團(tuán)，即環(huán)烷基和環(huán)烯基。除非另外說(shuō)明，這些基團(tuán)含有1-20個(gè)碳原子，烯基含有2-20個(gè)碳原子。優(yōu)選的基團(tuán)含有至多10個(gè)碳原子。環(huán)狀基團(tuán)可以是單環(huán)或多環(huán)的，優(yōu)選含3-10個(gè)環(huán)碳原子。環(huán)狀基團(tuán)的實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)丙基甲基、金剛烷基。
這里的術(shù)語(yǔ)“鹵烷基”是指被一個(gè)或多個(gè)鹵原子取代的基團(tuán)，包括全氟化基團(tuán)。該定義也適合于含前綴“鹵”的基團(tuán)。合適的鹵烷基的實(shí)例包括氯甲基，三氟甲基等。
這里的術(shù)語(yǔ)“芳基”包括碳芳環(huán)或環(huán)系。芳基的實(shí)例包括苯基、萘基、聯(lián)苯基、芴基和茚基。術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指包括含至少一個(gè)環(huán)雜原子(如O，S，N)的芳環(huán)或環(huán)系。合適的雜芳基包括呋喃基，噻吩基，吡啶基，喹啉基，異喹啉基，吲哚基，異吲哚基，三唑基，吡咯基，四唑基，咪唑基，吡唑基，噁唑基，噻唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，咔唑基，苯并噁唑基，嘧啶基，苯并咪唑基，喹喔啉基，苯并噻唑基，1，5-二氮雜萘基，異噁唑基，異噻唑基，嘌呤基，喹唑啉基等。
“雜環(huán)基”是指包括含至少一個(gè)環(huán)雜原子(如O，S，N)的非芳香環(huán)或環(huán)系并且包括上述雜芳基的全飽和或部分飽和的全部衍生物。雜環(huán)基的實(shí)例包括吡咯烷基，四氫呋喃基，嗎啉基，硫代嗎啉基，哌啶基，哌嗪基，噻唑烷基，異噻唑烷基和咪唑烷基。
這里的芳基、雜芳基和雜環(huán)基可以是未取代的或被選自下述基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代烷基，烷氧基，亞甲基二氧，亞乙基二氧，烷硫基，鹵代烷基，鹵代烷氧基，鹵代烷硫基，鹵素，硝基，羥基，巰基，氰基，羧基，甲酰基，芳基，芳氧基，芳硫基，芳基烷氧基，芳基烷硫基，雜芳基，雜芳氧基，雜芳硫基，雜芳基烷氧基，雜芳基烷硫基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，雜環(huán)基，雜環(huán)烷基，烷基羰基，烯基羰基，烷氧基羰基，鹵代烷基羰基，鹵代烷氧基羰基，烷硫基羰基(alkylthiocarbonyl)，芳基羰基，雜芳基羰基，芳氧基羰基，雜芳氧基羰基，芳硫基羰基(arylthiocarbonyl)，雜芳硫基羰基，烷酰基氧基，烷酰基硫基，烷酰基氨基，芳基羰基氧基，芳基羰基硫基，烷基氨基磺?；?，烷基磺?；蓟酋；?，雜芳基磺?；?，芳基二嗪基，烷基磺?；被蓟酋；被蓟榛酋；被榛驶被?，烯基羰基氨基，芳基羰基氨基，芳基烷基羰基氨基，雜芳基羰基氨基，雜芳基烷基羰基氨基，烷基磺?；被?，烯基磺?；被?，芳基磺酰基氨基，芳基烷基磺酰基氨基，雜芳基磺酰基氨基，雜芳基烷基磺酰基氨基，烷基氨基羰基氨基，烯基氨基羰基氨基，芳基氨基羰基氨基，芳基烷基氨基羰基氨基，雜芳基氨基羰基氨基，雜芳基烷基氨基羰基氨基，在雜環(huán)基情況下，也可以氧代的。如果其它基團(tuán)被描述為“取代的”或“任選取代的”，那么這些基團(tuán)可以被一個(gè)或多個(gè)上面列舉的取代基所取代。
通常某些取代基是優(yōu)選的。例如，Y優(yōu)選-CO-，Z優(yōu)選-NR6-；和R1優(yōu)選表示C1-4烷基，芳基，或取代的芳基。優(yōu)選的R2包括含有1-4個(gè)碳原子的烷基(即甲基，乙基，丙基，異丙基，正丁基，仲丁基，異丁基和叔丁基)，甲氧基乙基，乙氧基甲基和環(huán)丙基甲基。R3和R4優(yōu)選表示甲基。如果存在，一個(gè)或多個(gè)上述優(yōu)選的取代基可以任何組合方式在本發(fā)明化合物中存在。
本發(fā)明化合物包括其可藥用的形式，包括異構(gòu)體如非對(duì)映異構(gòu)體和對(duì)映異構(gòu)體、鹽、溶劑化物、多晶型物等。特別的，如果某一化合物是旋光性的，那么本發(fā)明還具體包括各個(gè)化合物的對(duì)映異構(gòu)體以及對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物。
藥物組合物和生物活性本發(fā)明藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明上述化合物和可藥用載體。
術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指足以產(chǎn)生治療效果的化合物量，這里的治療效果是指例如產(chǎn)生細(xì)胞因子誘導(dǎo)作用、抗腫瘤活性和/或抗病毒活性。盡管在本發(fā)明藥物組合物中采用的活性化合物的具體量取決于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的一些因素如化合物的理化性質(zhì)、載體的性質(zhì)和所采用的治療方案，但是本發(fā)明組合物應(yīng)當(dāng)含有足夠的活性成分使受者能夠得到劑量為約100ng/kg-約50mg/kg，優(yōu)選約10μg/kg-約5mg/kg。可以采用任何常規(guī)劑型如片劑、錠劑、非腸道制劑、糖漿、霜?jiǎng)?、膏劑、氣霧劑、透皮貼劑、透粘膜貼劑等。
在施用時(shí)，本發(fā)明化合物可以作為治療方案中單獨(dú)的治療劑使用，也可以與一種或多種其它活性劑聯(lián)合用藥，這些活性劑包括其它的免疫調(diào)節(jié)劑、抗病毒劑、抗菌劑、抗體、蛋白質(zhì)、肽、寡核苷酸等。
根據(jù)下述試驗(yàn)，證明本發(fā)明化合物在進(jìn)行的試驗(yàn)中可誘導(dǎo)某些細(xì)胞因子產(chǎn)生。這些結(jié)果表明本發(fā)明化合物可用作以多種不同方式調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，使得它們可以用于多種疾病的治療中。
可由施用本發(fā)明化合物誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子包括干擾素(α)(IFN-α)和/或腫瘤壞死因子(α)(TNF-α)以及某些白細(xì)胞介素(IL)。其生物合成可由本發(fā)明化合物誘導(dǎo)的細(xì)胞因子包括IFN-α，TNF-α，IL-1，IL-6，IL-10和IL-12以及其它多種細(xì)胞因子。在這些作用中，上述細(xì)胞因子和其它細(xì)胞因子可以抑制病毒產(chǎn)生和腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，使得這些化合物可用于治療病毒性疾病和腫瘤。因此，本發(fā)明提供了誘導(dǎo)動(dòng)物中細(xì)胞因子生物合成的方法，包括向動(dòng)物施用有效量的本發(fā)明化合物或組合物。
已發(fā)現(xiàn)某些本發(fā)明化合物可以在不伴隨產(chǎn)生顯著水平炎性細(xì)胞因子的情況下，優(yōu)先誘導(dǎo)含有pDC2細(xì)胞(前體樹(shù)突細(xì)胞-2型)的造血細(xì)胞種群，例如PBMC(周?chē)獑魏思?xì)胞)中的IFN-α的表達(dá)。
除了誘導(dǎo)細(xì)胞因子產(chǎn)生的能力，本發(fā)明化合物也影響到先天免疫反應(yīng)的其它方面，例如可以刺激天然殺傷細(xì)胞的活性，這種作用也可能是基于細(xì)胞因子的誘導(dǎo)作用。本發(fā)明化合物也可以激活巨噬細(xì)胞，而巨噬細(xì)胞刺激氮氧化物的分泌和更多細(xì)胞因子的產(chǎn)生。進(jìn)一步的，本發(fā)明化合物可以造成B-淋巴細(xì)胞的增殖和分化。
本發(fā)明化合物對(duì)獲得性免疫反應(yīng)也有影響。例如，雖然不確信對(duì)T-細(xì)胞有直接的作用和對(duì)T-細(xì)胞細(xì)胞因子有直接的誘導(dǎo)作用，但當(dāng)施用本發(fā)明化合物時(shí)，可以間接誘導(dǎo)1型輔助T細(xì)胞(Th1)細(xì)胞因子IFN-γ的產(chǎn)生和抑制2型輔助T細(xì)胞(Th2)細(xì)胞因子IL-4，IL-5和IL-13的產(chǎn)生。這里活性是指化合物可用于治療如下疾病，在這些疾病中需要促進(jìn)Th1反應(yīng)和/或抑制Th2反應(yīng)?？紤]到本發(fā)明化合物抑制Th2免疫反應(yīng)的能力，本發(fā)明化合物可用于治療特應(yīng)性疾病例如特應(yīng)性皮炎、哮喘、過(guò)敏癥、過(guò)敏性鼻炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡；也可用作對(duì)細(xì)胞調(diào)節(jié)免疫的疫苗佐劑；和可能會(huì)用于治療復(fù)發(fā)的真菌疾病和衣原體疾病。
本發(fā)明化合物的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)作用使得它可以用于治療許多的疾病。因?yàn)樗鼈冇姓T導(dǎo)細(xì)胞因子IFN-α和/或TNF-α產(chǎn)生的能力，本發(fā)明化合物可特別用于治療病毒性疾病和腫瘤。本發(fā)明化合物的免疫調(diào)節(jié)活性表明本發(fā)明化合物可以治療的疾病例如包括但不限于下面例舉的疾病病毒性疾病包括生殖器疣；普通疣；跖疣；乙型肝炎；丙型肝炎；I和II單純皰疹病毒疾病；觸染性軟疣；天花，特別是重型天花；HIV；CMV；VZV；鼻病毒；腺病毒；冠狀病毒疾??；流感；和副流感；上皮內(nèi)瘤形成如頸上皮內(nèi)瘤形成；人乳頭狀瘤病毒(HPV)和相關(guān)的瘤形成疾??；真菌疾病例如念珠菌屬感染疾病，曲霉屬感染疾病和隱球菌性腦膜炎；腫瘤疾病，例如，基底細(xì)胞癌，毛細(xì)胞白血病，卡波西肉瘤，腎細(xì)胞癌，鱗狀細(xì)胞癌，骨髓性白血病，多發(fā)性骨髓瘤，黑色素瘤，非何杰金氏淋巴瘤，皮膚的T-細(xì)胞淋巴瘤，以及其它的癌癥；寄生蟲(chóng)病例如卡氏肺孢子蟲(chóng)病，隱孢子蟲(chóng)病，莢膜組織胞漿菌病，弓形體病，錐蟲(chóng)感染，和利什曼?。缓图?xì)菌感染例如結(jié)核，和鳥(niǎo)分支桿菌感染?？梢圆捎帽景l(fā)明化合物治療的其它疾病和癥狀包括光化性角化?。粷裾?；嗜酸性細(xì)胞增多癥；特發(fā)性血小板增多；麻風(fēng)；多發(fā)性硬化癥；奧門(mén)綜合征；盤(pán)狀狼瘡；鮑恩??；類(lèi)鮑恩丘疹??；斑形脫發(fā)；抑制手術(shù)后瘢痕疙瘩和其它術(shù)后疤痕的形成。此外，這些化合物可以促進(jìn)或刺激傷口的愈合，傷口包括慢性傷口。這些化合物還可以用于治療在例如移植病人、腫瘤病人和HIV病人中對(duì)細(xì)胞調(diào)節(jié)的免疫系統(tǒng)進(jìn)行抑制后出現(xiàn)的機(jī)會(huì)性感染和腫瘤。
有效誘導(dǎo)細(xì)胞因子生物合成的化合物的量是指足以使一種或多種細(xì)胞，例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞和B一細(xì)胞，產(chǎn)生一種或多種細(xì)胞因子如IFN-α、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10和IL-12，使得這些細(xì)胞因子的量在其背景水平上顯示增加。確切的用量取決于本領(lǐng)域公知的因素，但是期望在約100ng/kg-約50mg/kg，優(yōu)選約10μg/kg-約5mg/kg的劑量范圍內(nèi)。本發(fā)明也提供了治療動(dòng)物病毒感染和腫瘤疾病的方法，包括向動(dòng)物施用治療有效量本發(fā)明化合物或組合物。化合物的治療或抑制病毒感染的有效量是指與未接受治療的對(duì)照組動(dòng)物相比能減少一種或多種病毒感染的表現(xiàn)例如病毒損傷、病毒載荷、病毒生產(chǎn)率和死亡率的化合物用量。能有效用于這類(lèi)治療的確切用量取決于本領(lǐng)域公知的因素，但是期望在約100ng/kg-約50mg/kg，優(yōu)選約10μg/kg-約5mg/kg的劑量范圍內(nèi)。化合物的治療腫瘤疾病有效量是指能使腫瘤大小或腫瘤病灶數(shù)目減小的用量。同樣的，確切的用量取決于本領(lǐng)域公知的因素，但是期望在約100ng/kg-約50mg/kg，優(yōu)選約10μg/kg-約5mg/kg的劑量范圍內(nèi)。
通過(guò)下述實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但它們只是為了進(jìn)行說(shuō)明而不是以任何方式限定本發(fā)明。
下述實(shí)施例中，利用Waters Fraction Lynx自動(dòng)純化系統(tǒng)通過(guò)制備高性能液相色譜純化某些化合物。利用Micromass LC-TOFMS分析制備的HPLC級(jí)分，并混合和離心蒸發(fā)合適的級(jí)分得到所需化合物的三氟乙酸鹽。柱子Phenomenex Luna C18(2)，21.2×50mm，粒徑10μm，孔隙100，流速25mL/min，12分鐘內(nèi)非線(xiàn)性梯級(jí)洗脫5-95％B，然后在95％B下停留2分鐘，其中A是0.05％三氟乙酸/水，B是0.05％三氟乙酸/乙腈，通過(guò)質(zhì)量選擇性觸發(fā)收集級(jí)分。
實(shí)施例符號(hào)說(shuō)明Calculated for(calcd for)計(jì)算值；Found檢測(cè)值；Quartet四重峰；Quintet五重峰；Sextet六重峰；Hept七重峰實(shí)施例1N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]苯甲酰胺 步騾A將三乙胺(16.8mL，123.8mmol)加到4-羥基-5，6-二甲基-3-硝基-2(1H)-吡啶酮(7.6g，41.2mmol)的二氯甲烷(200mL)懸浮液中，并在冰浴中冷卻所得的混合物。加入三氟甲磺酸酐(13.7mL，82.5mmol)并攪拌所得的反應(yīng)混合物30分鐘。一次性加入單-叔丁氧羰基-1，4-丁基二胺(7.6g，41.2mmol)并使反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝亍?小時(shí)后用1％碳酸鈉水溶液(2×100mL)洗滌反應(yīng)混合物，用硫酸鎂干燥然后減壓濃縮得到粗產(chǎn)物。將該物質(zhì)溶于二氯甲烷中并通過(guò)硅膠層，先用二氯甲烷洗脫硅膠層以除去一些雜質(zhì)，然后用2-5％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脫以回收所需的產(chǎn)物。合并含有產(chǎn)物的級(jí)分并減壓濃縮得到12g 4-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁基}氨基)-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-2-基三氟甲磺酸酯，為淺黃色油狀物。
步驟B將步驟A所得的物質(zhì)與三乙胺(2.5g，24.7mmol)，二芐基胺(4.8g，24.7mmol)和甲苯(150mL)混合，然后加熱回流4小時(shí)。用1％碳酸鈉水溶液洗滌反應(yīng)混合物，然后減壓濃縮得到粗產(chǎn)物。將該物質(zhì)溶于二氯甲烷中并通過(guò)硅膠層。用2-20％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脫硅膠。合并含有產(chǎn)物的級(jí)分并減壓濃縮得到～13g 4-{[2-(二芐基氨基)-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟C將硼氫化鈉(1.4g，36mmol)緩慢加入到氯化鎳水合物(2.9g，12.3mmol)的甲醇溶液中并攪拌所得到混合物30分鐘。一次性加入步驟B產(chǎn)物的甲醇溶液。緩慢加入硼氫化鈉直到生成的泡沫是無(wú)色的。過(guò)濾反應(yīng)混合物。減壓濃縮濾液。將所得殘留物與二氯甲烷混合并過(guò)濾以除去鹽。減壓濃縮濾液得到約12g 4-{[3-氨基-2-(二芐基氨基)-5，6-二甲基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟D將戊?；?3mL，24.7mmol)加到步驟C產(chǎn)物的乙腈(200mL)溶液中。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物。減壓濃縮反應(yīng)混合物，將所得殘留物與乙醇和三乙胺(5g，49mmol)混合。加熱回流反應(yīng)混合物過(guò)夜，然后減壓濃縮。使所得殘留物在二氯甲烷和水之間分配。分離二氯甲烷層并通過(guò)硅膠柱，用9∶90∶1的乙酸乙酯∶二氯甲烷∶甲醇洗脫該柱。合并含有產(chǎn)物的級(jí)分并減壓濃縮得到6.5g 4-[2-丁基-4-(二芐基氨基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為油狀物。
步驟E將三氟甲磺酸(16g，107mmol)加到步驟D產(chǎn)物(6.5g，11.4mmol)的二氯甲烷(250mL)溶液中。攪拌所得的混合物過(guò)夜。加入氫氧化銨(50mL)和水(100mL)并攪拌所得的混合物30分鐘。分離各層并用二氯甲烷(100mL)萃取水層。合并有機(jī)層，用1％碳酸鈉水溶液，鹽水洗滌并減壓濃縮。將所得殘留物與甲醇(30mL)混合，攪拌30分鐘并過(guò)濾。減壓濃縮濾液并將所得殘留物與1％碳酸鈉水溶液混合并攪拌。用己烷萃取混合物以除去有機(jī)雜質(zhì)。用二氯甲烷萃取含有不溶性油狀物的水層。有機(jī)層與硫酸鎂混合，攪拌5分鐘并過(guò)濾。減壓濃縮濾液得到固體，用甲苯將之重結(jié)晶得到1g 1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺。
步驟F將三乙胺(0.07mL，0.5mmol)加到1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(150mg，0.5mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中。并在冰浴中冷卻反應(yīng)混合物。加入苯甲酰氯(0.07mL，0.5mmol)并將所得的反應(yīng)混合物從冰浴上移開(kāi)。用水洗滌反應(yīng)混合物兩次，然后減壓濃縮。所得的殘留物通過(guò)閃式色譜法純化，以10％甲醇/二氯甲烷洗脫得到油狀棕色的物質(zhì)。將該物質(zhì)溶于最少量異丙醇中，然后在攪拌下加入乙磺酸(55mg，0.5mmol)。在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物～1小時(shí)，然后在沙浴上短時(shí)間加熱直到它變成均相。使溶液冷卻到室溫然后在冰浴中冷卻，通過(guò)過(guò)濾分離所得的沉淀得到111mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]苯甲酰胺，為固體結(jié)晶，熔點(diǎn)127.8-128.8℃。
元素分析Calculated for C23H31N5O％C，70.20；％H，7.94；％N，17.80；Found％C，69.82；％H，7.70；％N，17.68.
實(shí)施例2N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺 將三乙胺(0.07mL，0.5mmol)加到1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(150mg，0.5mmol)的二氯甲烷(160mL)溶液中。并在冰浴中冷卻反應(yīng)混合物。加入甲磺酸酐(90mg，0.5mmol)并將反應(yīng)混合物從冰浴上移開(kāi)。攪拌反應(yīng)混合物35分鐘。用水洗滌反應(yīng)混合物3次，減壓濃縮，并用小體積的乙酸甲酯研磨。過(guò)濾分離所得的固體結(jié)晶，然后在Abderhalden干燥器中干燥得到94mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺，熔點(diǎn)130-130.5℃。
元素分析Calculated for C17H29N5O2S％C，55.56；％H，7.95；％N，19.06；Found％C，55.37；％H，7.89；％N，18.03.
實(shí)施例3N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-氟苯磺酰胺水合物
將三乙胺(0.07mL，0.5mmol)加到1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(150mg，0.5mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中。在冰浴中冷卻反應(yīng)混合物。加入4-氟苯磺酰氯(113mg，0.5mmol)并將所得的反應(yīng)混合物從冰浴上移開(kāi)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物48小時(shí)，用水(2×150mL)洗滌反應(yīng)混合物，然后減壓濃縮。用乙酸甲酯將所得殘留物重結(jié)晶然后在Abderhalden干燥器中干燥得到50mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-氟苯磺酰胺水合物，為白色晶體，熔點(diǎn)133.1-133.7℃。
元素分析Calculated for C22H30FN5O2S·H2O％C 56.75；％H，6.93；％N，15.04；Found％C，56.99；％H，6.58；％N，15.24.
實(shí)施例4N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯脲 將異氰酸苯酯(0.056mL，0.5mmol)加到冷卻的1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(150mg，0.5mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中。移開(kāi)冰浴。5分鐘后生成白色沉淀。攪拌反應(yīng)混合物30分鐘然后減壓濃縮得到灰白色固體結(jié)晶。通過(guò)采用少量乙醚過(guò)濾分離以將所需物轉(zhuǎn)移至過(guò)濾器，然后在Abderhalden干燥器中干燥得到185mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯基脲，熔點(diǎn)195.8-196.8℃。
元素分析Calculated for C23H32N6O％C，67.62；％H，7.89；％N，20.57；Found％C，66.84；％H，7.71；％N，20.54.
實(shí)施例5N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯硫脲水合物 采用實(shí)施例4的方法，使1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(100mg，0.35mmol)與異硫代氰酸苯酯(0.041mL，0.35mmol)反應(yīng)，得到97mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯基硫脲水合物，為白色晶體，熔點(diǎn)160.0-160.8℃。
元素分析Calculated for C23H32N6S·H2O％C，62.41；％H，7.74；％N，18.99；Found％C，62.39；％H，7.47；％N，18.52.
實(shí)施例6N’-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N，N-二甲基磺酰胺
將三乙胺(0.031mL，0.23mmol)加到1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(67mg，0.23mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液中。在冰浴中冷卻反應(yīng)混合物。加入二甲基氨磺酰氯(0.025mL，0.23mmol)。將所得的反應(yīng)混合物從冰浴上移開(kāi)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物～113小時(shí)。HPLC分析表明反應(yīng)并未完成。減壓除去二氯甲烷。加入1，2-二氯乙烷(50mL)并將反應(yīng)混合物加熱到60℃。3小時(shí)后加入更多的二甲基氨磺酰氯(2.5μl)并繼續(xù)加熱。22小時(shí)后，升高反應(yīng)溫度以回流，保持反應(yīng)混合物回流100小時(shí)。用水萃取反應(yīng)混合物2次，合并水相并減壓濃縮。用乙酸甲酯重結(jié)晶所得的殘留物得到10mg的N’-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N，N-二甲基磺酰胺，為灰白色晶體，熔點(diǎn)129.5-131℃。M/Z＝397.1(M+H)+。
實(shí)施例7N-[4-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺 步騾A加熱回流5，6-二甲基-3-硝基吡啶-2，4-二醇(60.0g，326mmol)和磷酰氯(600mL)的混合物2小時(shí)。減壓濃縮反應(yīng)混合物。將所得的殘留物與乙酸乙酯(300mL)混合然后過(guò)濾。用碳酸氫鈉水溶液洗滌濾液。分離各層并用乙酸乙酯萃取水層兩次。合并有機(jī)層，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到棕色固體。通過(guò)色譜法純化所得物質(zhì)(用60/40的乙酸乙酯/己烷洗脫硅膠)得到55g 2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶。
步驟B將4-氨基丁基氨基甲酸叔丁酯(60g，339mmol)緩慢加到2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(50g，226mmol)、無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺(500mL)和三乙胺(50mL，339mmol)的混合物中。攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜，然后減壓濃縮得到油狀物。將所得油狀物溶于乙酸乙酯中然后用水洗滌。用硫酸鎂干燥有機(jī)層然后減壓濃縮得到深色油狀物。通過(guò)柱色譜法純化所得物質(zhì)(用40/60乙酸乙酯/己烷洗脫硅膠)得到64.5g 4-(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)丁基氨基甲酸叔丁酯，為鮮橙色油狀物，經(jīng)放置固化。
步驟C將苯酚(18.50g，196mmol)的二甘醇二甲醚(50mL)溶液緩慢滴加到冷卻的(0℃)的氫化鈉(8.28g，60％于礦物油中，207mmol)的二甘醇二甲醚(50mL)的懸浮液中。1小時(shí)后停止放出氣體。向反應(yīng)混合物中緩慢滴加4-(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)丁基氨基甲酸叔丁酯(68.95g，185mmol)的二甘醇二甲醚(200mL)溶液。添加完成后加熱回流反應(yīng)混合物4小時(shí)。減壓濃縮反應(yīng)混合物得到黑色油狀物。將所得油狀物溶于乙酸乙酯中并用1N氫氧化鈉萃取以除去過(guò)量苯酚。用硫酸鎂干燥有機(jī)層然后減壓濃縮。通過(guò)層析純化殘留物(用30/70乙酸乙酯/己烷洗脫硅膠)得到40.67g 4-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為橙色油狀物。
步驟D混合4-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯(9.17g，21.3mmol)、甲苯(50mL)、異丙醇(5mL)和5％鉑/炭(7.0g)并在帕爾裝置中氫氣氣氛(50psi，3.5Kg/cm2)下保持過(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾除去催化劑并減壓濃縮濾液。高真空度下干燥所得棕色油狀物得到7.47g4-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟E加熱回流步驟D產(chǎn)物、原乙酸三乙酯(3.59mL，19.58mmol)、無(wú)水甲苯(75mL)和鹽酸吡啶(0.75g)的混合物1小時(shí)，然后減壓濃縮得到棕色油狀物。將所得油狀物溶于乙酸乙酯中然后用水(×2)洗滌，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥然后減壓濃縮得到6.74g 4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基氨基甲酸叔丁酯，為棕色油狀物。
步驟F將4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基氨基甲酸叔丁酯(6.70g，15.8mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液緩慢滴加到冷卻的(0℃)的三氟乙酸(60mL)和二氯甲烷(100mL)的混合物中，使反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝夭⒎胖眠^(guò)夜。減壓濃縮反應(yīng)混合物得到棕色油狀物。將所得油狀物溶于二氯甲烷中，然后用5％氫氧化鈉水溶液調(diào)成堿性(pH14)。分離各層并用二氯甲烷萃取水層。合并有機(jī)層，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到4.50g 4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基胺，為棕色油狀物。
步驟G加熱步驟F產(chǎn)物，三乙胺(2.0mL，14.6mmol)和無(wú)水乙腈(450mL)的混合物直到得到一均相溶液。向反應(yīng)混合物中緩慢加入甲磺酸酐(2.54g，14.6mmol)，斷定反應(yīng)在10分鐘內(nèi)完成。減壓濃縮反應(yīng)混合物得到棕色油狀物。將所得油狀物溶于二氯甲烷中，然后用5％氫氧化鈉水溶液洗滌。分離水層并用二氯甲烷萃取。合并有機(jī)層，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到棕色固體。通過(guò)層析純化該物質(zhì)(用95/5二氯甲烷/甲醇洗脫硅膠)得到4.49g N-[4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺，為淺棕色固體。
步驟H混合N-[4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺(4.20g，10.4mmol)和乙酸銨(42g)并在密封管中于150℃加熱36小時(shí)，冷卻反應(yīng)混合物，然后溶于氯仿中。用10％氫氧化鈉水溶液萃取所得的溶液。分離水層然后用氯仿萃取多次。合并有機(jī)層，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到黃色油狀物。將該油狀物溶于甲醇中并與1M氫氯酸的乙醚溶液(10.4mL)混合。通過(guò)過(guò)濾分離所得到白色固體然后干燥。將固體溶于水中并用固體碳酸鈉調(diào)至pH10。通過(guò)過(guò)濾分離所得到的白色固體，用乙醚洗滌，然后80℃真空干燥得到2.00g N-[4-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺，熔點(diǎn)228-230℃。
元素分析Calculated for C14H23N5O2S％C，51.67；％H，7.12；％N，21.52；Found％C，51.48；％H，6.95；％N，21.51.
實(shí)施例8N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺 步騾A將三乙胺(3.3mL，23.7mmol)加到冷卻的(0℃)的4-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯(8.60g，21.5mmol)和無(wú)水二氯甲烷(200mL)的混合物中。加入乙氧乙酰氯(2.76g，22.5mmol)。1小時(shí)后反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝夭嚢?小時(shí)。減壓濃縮反應(yīng)混合物得到4-({3-[(乙氧乙?；?氨基]-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基}氨基)丁基氨基甲酸叔丁酯，為棕色油狀物。將該油狀物與吡啶(130mL)混合并加熱回流過(guò)夜。減壓濃縮反應(yīng)混合物得到棕色油狀物。將所得油狀物溶于二氯甲烷中，然后用水洗滌。用硫酸鎂干燥有機(jī)層并減壓濃縮。將殘留物溶于乙醚，然后減壓濃縮得到8.21g的4-[2-(乙氧甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟B采用實(shí)施例7步驟F的方法，水解步驟A產(chǎn)物得到5.76g的4-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁-1-胺，為棕色油狀物。
步驟C采用實(shí)施例7步驟G的方法，使4-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁-1-胺(5.52g，15.0mmol)與甲磺酸酐(2.74g，15.7mmol)反應(yīng)得到6.26g的N-{4-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺，為棕色油狀物。
步驟D采用實(shí)施例7步驟H的一般方法，氨化N-{4-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺(5.86g，13.1mmol)得到1.58g的N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺，為白色固體，熔點(diǎn)165-167℃。
元素分析Calculated for C16H27N5O3S％C，52.01；％H，7.37；％N，18.95；Found％C，51.83；％H，7.39；％N，18.88.
實(shí)施例9N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰胺
步驟A在氮?dú)鈿夥罩校瑢?-(2-丁基-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁-1-胺(122mg，0.33mmol)溶于二氯甲烷和三乙胺(0.093mL，0.67mmol)中。在冰水浴中冷卻該溶液，將4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰氯(106mg，0.33mmol)的二氯甲烷溶液/漿液滴加到上述溶液中。移走冰浴并繼續(xù)攪拌反應(yīng)16小時(shí)。用10％碳酸鈉水溶液使反應(yīng)淬滅。分離水相并用二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，用水，接著用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)，輕輕傾倒并蒸發(fā)得到黃色油狀物。通過(guò)閃式柱色譜法純化(以92∶8二氯甲烷/甲醇至95∶5二氯甲烷/甲醇梯度洗脫硅膠)得到101mg的N-[4-(2-丁基-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰胺，為淺黃色固體。通過(guò)HPLC測(cè)定產(chǎn)物純度為97+％。
MS(CI)648(M+H)步驟B將N-[4-(2-丁基-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰胺(101mg，0.16mmol)和乙酸銨(1.1g)置于帶有攪拌棒的加壓管中。密封該管并在150℃加熱16小時(shí)。冷卻反應(yīng)物至室溫并用水稀釋。用10％氫氧化鈉水溶液將所得的粘稠水溶性混合物調(diào)至堿性并用氯仿(3×25mL)萃取。用水、接著用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(硫酸鈉)，輕輕傾倒并蒸發(fā)得到黃色油狀物。通過(guò)閃式柱色譜法純化(以95∶5二氯甲烷/甲醇至9∶1二氯甲烷/甲醇梯度洗脫，和最后94∶5∶1二氯甲烷/甲醇/三乙胺洗脫硅膠)得到14mg N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰胺，為黃色油狀物。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.41(t，J＝5.5Hz，1H)，7.76(d，J＝8.3Hz，2H)；7.43(d，J＝8.3，2H)，7.37-7.31(m，4H)，7.26-7.22(m，1H)，5.84(bs，2H)，5.52(s，1H)，4.22(t，J＝7.7Hz，2H)，3.49(t，J＝5.8Hz，2H)，3.29(dd，J＝6.4，12.4Hz，2H)，2.76(t，J＝7.7Hz，2H)，2.58(t，J＝5.7Hz，2H)，2.32(s，3H)，2.27(s，3H)，2.22(s，6H)，1.73-1.65(m，4H)，1.61-1.55(m，2H)，1.35(sextet，J＝7.4Hz，2H)，0.86(t，J＝7.4Hz，3H)；13C-NMR(125MHz，DMSO-d6)δ165.9，153.0，148.1，145.4，142.0，138.6，133.5，128.23，127.4，127.3，127.1，126.4，126.1，124.5，103.0，82.0，66.3，58.0，45.2，43.6，38.4，29.5，28.8，26.1，26.0，21.7，21.0，13.6，12.2.
HRMS(CD m/e 571.3763(M+H)，(571.3761 calcd for C34H47N6O2，M+H).
實(shí)施例10N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}嗎啉-4-基甲酰胺 步驟A90℃下加熱6-甲基-3-硝基吡啶-2，4-二醇(50g，0.29mol)和磷酰氯(500mL)的混合物過(guò)夜。減壓除去過(guò)量的磷酰氯。將所得黑色油狀物倒入水(1.8L)和冰中。用氯仿(×8，3L總體積)萃取混合物并過(guò)濾除去黑色顆粒并破乳。用10％碳酸鈉(×2)和鹽水洗滌合并的有機(jī)物，干燥，然后減壓下濃縮得到52g琥珀色油。用庚烷(115mL)重結(jié)晶該油狀物得到43.5g2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶，為深琥珀色晶體。
步驟B90分鐘內(nèi)，將4-氨基丁基氨基甲酸叔丁酯(32.12g，170.6mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(200mL)中的溶液加到2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶(35.09g，169.5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(500mL)的溶液中。室溫下攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜。利用24/40短路徑蒸餾頭和溫水通過(guò)真空蒸餾除去溶劑。將殘留物溶解在乙酸乙酯(700mL)中，用水洗滌(3×100mL)，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。利用柱色譜法(50×450mm硅膠，用1∶1的己烷和乙酸乙酯洗脫)純化粗產(chǎn)物，得到59.90g 4-[(2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟C10分鐘內(nèi)，將苯酚(9.45g，100mmol)加到冷卻的(0℃)的氫化鈉(4.24g，60％，106mmol)在無(wú)水四氫呋喃(100mL)的懸浮液中。0℃下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。50分鐘內(nèi)，加入4-[(2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯(33.92g，94.5mmol)在無(wú)水四氫呋喃(250mL)中的溶液，同時(shí)反應(yīng)混合物保持0℃。減壓濃縮之前，使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。將殘留物溶解在乙酸乙酯(500mL)中，用1N氫氧化鈉(300mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，然后濃縮至干燥。利用柱色譜法(400g硅膠，用7∶3的己烷和乙酸乙酯洗脫)純化粗產(chǎn)物，得到25.4g 4-[(6-甲基-3-硝基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟D混合步驟C的產(chǎn)物在甲苯(300mL)和異丙醇(33mL)的混合物中的溶液和催化劑(16.68g的5％Pt/C)，并在帕爾裝置中氫氣氣氛(30psi，2.1Kg/cm2，再充氣一次)下保持5小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)混合物除去催化劑并減壓濃縮得到23.4g 4-[(3-氨基-6-甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為深色油狀物。
步驟E將步驟D產(chǎn)物溶解到二氯甲烷(500mL)中，然后在氮?dú)鈿夥障吕鋮s至0℃。40分鐘內(nèi)，加入乙氧基乙酰氯(7.9g，63.5mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液，同時(shí)使反應(yīng)混合物保持在0℃下。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。用水(2×100mL)和鹽水(100mL)洗滌反應(yīng)混合物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到26.4g 4-({3-[(乙氧基乙酰)氨基]-6-甲基-2-苯氧基吡啶-4-基}氨基)丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟F混合步驟E的產(chǎn)物和吡啶(250mL)和鹽酸吡啶(20.85g，180mmol)，并在氮?dú)鈿夥障录訜峄亓鬟^(guò)夜。真空蒸餾除去大量吡啶。將殘留物分配在乙酸乙酯(600mL)和水(300mL)之間。分層。用水(2×300mL)洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到8.17g 4-[2-(乙氧基甲基)-6-甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為深色油狀物。用15％氫氧化鈉將水層的pH調(diào)整至11，然后用乙酸乙酯(5×250mL)提出。合并萃取液，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到9.46g 4-[2-(乙氧基甲基)-6-甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁-1-胺。
步驟G2分鐘內(nèi)，將氯甲酸芐基酯(2.2mL)加入到4-[2-(乙氧基甲基)-6-甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁-1-胺(4.96g，14mmol)和三乙胺(2.6mL)在氯仿(100mL)的溶液中。室溫下攪拌反應(yīng)混合物2.5小時(shí)，用1N氫氧化鈉(50Ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。通過(guò)柱色譜法(208g硅膠，用2％甲醇在氯仿中的溶液洗脫)純化粗產(chǎn)物得到兩份(2.2g和3.12g)4-[2-乙氧基甲基)-6-甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基氨基甲酸芐酯。
步驟H在壓力容器(75mL)中混合步驟G的第一份(2.2g)和乙酸銨(20.3g)。將容器密封，然后在150℃下加熱21.5小時(shí)。用氯仿(200mL)稀釋反應(yīng)混合物，用10％氫氧化鈉(3×70mL)洗滌。用氯仿(6×100mL)萃取水層。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，然后減壓濃縮。LCMS分析表明，粗產(chǎn)物是N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}乙酰胺和4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基氨基甲酸芐酯的50/50混合物。
步驟I在壓力容器(150mL)中，混合步驟H的產(chǎn)物在乙醇(28mL)中的溶液和濃鹽酸(18.3mL)。將容器密封，然后在90℃下加熱21小時(shí)。減壓濃縮反應(yīng)混合物。將殘余物溶解在水(100mL)中，然后用氯仿(3×50mL)洗滌。用飽和氯化鈉將水層pH調(diào)整為＞11，然后用氯仿(8×100mL)萃取。合并萃取物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。將該粗產(chǎn)物與另一次的粗產(chǎn)物混合，然后通過(guò)柱色譜法(25g硅膠，依次用2％甲醇在含有0.5％三乙胺的二氯甲烷中的溶液(1L)、用4％甲醇在氯仿中的溶液(800mL)和用6％甲醇在氯仿中的溶液(800mL)洗脫)純化得到1.3g 1-(4-氨基丁基)-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺固體，熔點(diǎn)108-111℃。
元素分析Calculated for C14H23N5O·0.05HCl％C，60.23；％H，8.32；％N，25.08；Found％C，59.92；％H，8.26；％N，24.81.
步驟J將4-嗎啉碳酰氯(202μl，1.73mmol)加入到1-(4-氨基丁基)-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(0.435g，1.57mmol)在三乙胺(280μl，2.04mmol)和氯仿(8mL)混合物的溶液中。室溫下攪拌反應(yīng)混合物4小時(shí)，然后用氯仿(20mL)稀釋?zhuān)蔑柡吞妓釟溻c(10mL)洗滌。用硫酸鎂干燥有機(jī)層，然后減壓濃縮。通過(guò)柱色譜法(30g硅膠，用1L2％甲醇在含有0.5％三乙胺的氯仿溶液洗脫)純化該殘余物。用乙腈磨碎所得玻璃狀固體，得到0.417g N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}嗎啉-4-基甲酰胺，為灰白色粉末，熔點(diǎn)156.5-159.5℃。
元素分析C19H30N6O3·0.20HCl％C，57.37；％H，7.65；％Cl，1.78；％N，21.13；Found％C，57.19；％H，7.56；％Cl，1.84；％N，21.14.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.51(s，1H)，5.46(bs，2H)，4.71(s，2H)，4.45(bs，1H)，4.17(t，J＝7.5Hz，2H)，3.68(t，J＝4.9Hz，4H)，3.57(quartet，J＝7.1Hz，2H)，3.32(m，6H)，)，2.49(s，3H)，1.86(quintet，J＝7.5Hz，2H)，1.58(quintet，J＝7.3Hz，2H)，1.22(t，J＝7.2Hz，3H)；MS(CI)m/e 391(M+H)實(shí)施例11N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]嗎啉-4-基甲酰胺 步驟A加熱回流5，6-二甲基-3-硝基吡啶-2，4-二醇(14.87g)在磷酰氯(150mL)中的懸浮液2小時(shí)。通過(guò)蒸餾除去過(guò)量的磷酰氯。將殘余物溶解在水中，用氫氧化銨中和，用乙酸乙酯抽提兩次。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，硫酸鈉上干燥，然后減壓濃縮。用沸騰的己烷將殘余物制成漿體，然后趁熱過(guò)濾。冷卻濾液。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，風(fēng)干得到6.8g 2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶，為白色粉末。
步驟B將4-氨基丁基氨基甲酸叔丁酯(8.52g，45.24mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液加入到2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(10.00g，45.24mmol)和三乙胺(12.6mL，90.5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(320mL)中的溶液中。攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜，然后減壓濃縮。將殘余物分配在水和乙酸乙酯之間。分層，用乙酸乙酯萃取水層。合并有機(jī)物，用鹽水洗滌，然后減壓濃縮得到棕色油狀殘余物。通過(guò)閃式色譜法(400mL硅膠，開(kāi)始用10％乙酸乙酯在己烷中的溶液洗脫，然后梯度增加到15％，然后25％)純化該產(chǎn)物，得到8.1g 4-[(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為黃色固體。
步驟C10分鐘內(nèi)，將苯酚(2.164g，23.00mmol)加入到氫化鈉(0.972g，24.3mmol)在二甘醇二甲醚(24mL)的懸浮液中。攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，然后加入步驟B的產(chǎn)物固體。80℃小攪拌反應(yīng)混合物2.5天，然后使之冷卻至室溫過(guò)夜。減壓除去二甘醇二甲醚得到油狀殘余物。將殘余物與冷水混合，攪拌過(guò)夜。加入乙酸乙酯，并分層。用乙酸乙酯抽提水層。合并有機(jī)層，用水和鹽水洗滌，硫酸鈉上干燥，然后減壓濃縮得到黑色油狀物。通過(guò)閃式色譜法(400mL硅膠，用25％乙酸乙酯在己烷中的溶液洗脫)純化該產(chǎn)物，得到7.1g 4-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為橙色油狀物，隨后固化。
步驟D將4-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯(7.32g，17.00mmol)在甲苯(150mL)和異丙醇(10mL)混合物中的溶液與10％鈀/炭在甲苯中的漿體混合。將混合物放入氫氣氣氛下的帕爾容器中24小時(shí)。在1.5小時(shí)(2.2g)和3小時(shí)(3g)時(shí)再加入催化劑。通過(guò)Celite過(guò)濾劑層過(guò)濾反應(yīng)混合物除去催化劑。用乙醇(1L)、乙醇/甲醇(1L)和甲醇(1L)洗滌過(guò)濾劑層。減壓下濃縮濾液。將殘余物與二氯甲烷和庚烷混合，然后減壓濃縮得到6.17g 4-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為漿狀棕黃色油狀物。
步驟E將乙酸二乙氧基甲酯(2.76mL，16.393mmol)和鹽酸吡啶(0.037g，0.323mmol)加入到步驟D產(chǎn)物在甲苯(72mL)中的溶液中。加熱回流反應(yīng)混合物2小時(shí)，然后冷卻至室溫過(guò)夜。減壓濃縮反應(yīng)混合物，然后將殘余物與甲苯混合并濃縮，重復(fù)兩次。將所得油狀物溶解在氯仿中，用飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌；用硫酸鎂干燥；然后減壓濃縮得到5.37g 4-(6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基氨基甲酸叔丁酯，為非常深的棕色油狀物/固體。
步驟F在試管中混合步驟E的產(chǎn)物和乙酸銨(47g)。將試管密封，150℃下加熱20小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入水中，用10％氫氧化鈉將pH調(diào)整為10。用氯仿(×9)萃取堿性溶液。用固體氯化鈉處理堿性層，然后用氯仿萃取。合并有機(jī)物，硫酸鈉上干燥，然后減壓濃縮得到淺黃色固體。將固體溶解在氯仿和甲醇混合物中，然后與50mL乙醚中的1N鹽酸混合。除去溶劑，并將所得油狀物溶解在水中。用二氯甲烷(×3)萃取該溶液，用50％氫氧化鈉使之呈堿性(pH10)，然后用氯仿(×3)萃取。向水溶液中加入氯化鈉，用氯仿(×3)萃取該水溶液。合并有機(jī)物，硫酸鈉上干燥，減壓濃縮得到黃色固體。用乙醇再結(jié)晶所得固體，得到2.62g固體。將一部分(500mg)溶解在甲醇中，減壓濃縮，然后在70℃下的真空烘箱中干燥一周，得到0.46gN-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]乙酰胺固體，熔點(diǎn)217-219℃。
元素分析Calculated for C14H21N5O％C，61.07；％H，7.69；％N，25.43；Found％C，60.87；％H，7.75；％N，25.43.
步驟G將N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]乙酰胺(～2.1g)在6N鹽酸(30mL)中的溶液密封在燒瓶中，然后在100℃下加熱約30小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后過(guò)濾除去所有顆粒物。用25％氫氧化鈉使濾液呈堿性(pH14)，然后用氯仿(×2)萃取。將水層與氯化鈉(20g)混合，然后用氯仿(×3)萃取。合并有機(jī)物，用鹽水洗滌，硫酸鈉上干燥，然后減壓濃縮得到1.44g 1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺。
步驟H將4-嗎啉碳酰氯(0.250mL，2.14mmol)滴加至1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(0.500g，2.14mmol)在氯仿(10mL)的漿體中。1小時(shí)后，高效液相色譜分析表明反應(yīng)約完成了60％。加入4-嗎啉碳酰氯(0.200mL)并攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜。將該反應(yīng)混合物倒入5％氫氧化鈉中，攪拌10分鐘。分層。用氯仿(×2)萃取水層。用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)層，硫酸鎂上干燥，減壓濃縮得到黃色油狀物。用氯化鈉使水層飽和，然后用二氯甲烷(×3)萃取。合并萃取物，干燥，然后與黃色油狀物合并，并減壓濃縮。通過(guò)柱色譜法(43g硅膠，用2％甲醇在含有1％三乙胺的二氯甲烷溶液洗脫，然后用5％甲醇在含有1％三乙胺的二氯甲烷溶液洗脫)純化該殘余物。將殘余物溶解在二氯甲烷中，并用己烷稀釋該溶液。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀，然后用乙腈再結(jié)晶兩次，得到0.283g N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]嗎啉-4-基甲酰胺，為淺黃色粉末，熔點(diǎn)163.7-167.0℃。
元素分析1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.91(s，1H)，6.51(t，J＝5.5Hz，1H)，5.73(s，2H)，4.29(t，J＝7.1Hz，2H)，3.51(t，J＝4.8Hz，4H)，3.20(t，J＝4.8Hz，4H)，3.04(q，J＝6.8Hz，2H)，2.36(s，3H)，2.30(s，3H)，1.70(quintet，J＝7.4Hz，2H)，1.35(quintet，J＝7.4Hz，2H)；MS(CI)m/e 347.2197(347.2195 calcd for C17H26N6O2，M+H).
實(shí)施例122-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-{2-[1-(嗎啉-4-基羰基)哌啶-4-基]乙基}-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺
步驟A將4-(2-氨基乙基)-1-芐基哌啶(9.88g，45.2mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液滴加到2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(10.00g，45.2mmol)和三乙胺(12.6mL，90.5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(320mL)中的溶液中。室溫下攪拌反應(yīng)混合物約20小時(shí)，然后減壓濃縮。將殘留物分配在乙酸乙酯和水之間。分層，并用乙酸乙酯萃取水層。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，硫酸鈉上干燥，然后減壓濃縮得到橙色油狀物。通過(guò)閃式色譜法(400mL硅膠，先用10％乙酸乙酯在己烷中的溶液洗脫，然后用15％的乙酸乙酯在己烷中的溶液洗脫，最后用40％的乙酸乙酯在己烷中的溶液洗脫)純化油狀物，得到11.00g N-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-胺。
步驟B將氫化鈉(1.196g，60％，29.9mmol)加入到苯酚(2.81g，29.9mol)在二甘醇二甲醚(40mL)中的溶液中。停止放出氣體后，攪拌混合物15分鐘。將N-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-胺(10.9g，27.2mmol)在熱二甘醇二甲醚的溶液加入到酚鹽混合物中。加熱回流該反應(yīng)混合物1.5小時(shí)，冷卻至室溫，然后濃縮除去二甘醇二甲醚(60℃浴，21Pa)。通過(guò)柱色譜法(首先用1％甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脫除去殘余二甘醇二甲醚，然后用5％甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脫產(chǎn)物)純化殘余物。濃縮級(jí)分得到5.91g N-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-胺，為橙棕色油狀物，靜置時(shí)固化。
步驟C20分鐘內(nèi)，分批將氫硼化鈉(0.727g，19.2mmol)加入到氯化鎳(II)六水合物(1.52g，6.40mmol)在甲醇中的溶液中。15分鐘內(nèi)滴加入步驟B產(chǎn)物在甲醇中的溶液。加入更多氫硼化鈉(50mg)。用過(guò)濾試劑層過(guò)濾反應(yīng)混合物，并用甲醇洗滌試劑層。減壓濃縮濾液。色譜法(硅膠填料，用2％甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脫)純化殘余物，得到4.6g N4-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-3，4-二胺，為橙棕色油狀物，靜置時(shí)固化。
步驟D將乙氧基乙酰氯(1.31g，10.7mmol)滴加到步驟C的產(chǎn)物和三乙胺(1.64mL，13mmol)在二氯甲烷(60mL)中的溶液中。攪拌反應(yīng)物約20小時(shí)，然后減壓濃縮得到N-(4-{[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]氨基}-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-3-基)-2-乙氧基乙酰胺粗產(chǎn)物。將該乙酰胺溶解在吡啶(60mL)中，加入鹽酸吡啶(1.17g)，加熱回流反應(yīng)混合物4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后減壓除去吡啶。用5％碳酸鈉(100mL)和水(50mL)稀釋殘余物，然后分配在二氯甲烷(300mL)中。用水和鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。通過(guò)柱色譜法用2％甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脫來(lái)純化該殘余物，得到5.1g 1-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶，為橙紅色固體。
步驟E在耐壓燒瓶(350mL)中混合步驟D的產(chǎn)物和乙酸銨(51g)。密封燒瓶，然后150℃下加熱24小時(shí)，隨后170℃下加熱過(guò)夜。冷卻反應(yīng)混合物，然后倒入水中。用氫氧化銨使所得溶液呈堿性，然后用氯仿(×2)萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。將殘余物溶解在異丙醇(50mL)中。滴加入乙磺酸(21mmol)，并加熱回流混合物30分鐘。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫過(guò)夜，然后減壓濃縮。將所得油狀殘余物溶解在水(200mL)中，用二氯甲烷(×3)萃取，然后用10％氫氧化鈉變?yōu)閴A性(pH14)。用氯仿(×3)萃取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，然后濃縮得到固化棕色油狀物。將該固體用乙腈再結(jié)晶，得到2.54g褐色固體。將該固體溶解在2％甲醇在二氯甲烷中的溶液，通過(guò)硅膠(130g)柱。用2％甲醇在含有1％三乙胺的二氯甲烷中的溶液洗脫該柱子。濃縮級(jí)分得到2.4g 1-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為灰白色固體。
步驟F將步驟E的產(chǎn)物溶解在50/50乙醇/甲醇的沸騰混合物中。緩慢冷卻溶液，然后加入到裝有鈀/炭(0.60g)的帕爾燒瓶中，所述鈀/炭被乙醇濕潤(rùn)。將燒瓶放入氫氣氣氛下約40小時(shí)，其間再加入1.7g催化劑。通過(guò)過(guò)濾試劑層過(guò)濾反應(yīng)混合物，并用甲醇洗滌濾餅。減壓濃縮濾液。將殘余物與二氯甲烷混合，然后濃縮。高真空度下干燥所得固體，得到1.5g 2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺。
步驟G利用實(shí)施例11步驟H的一般方法，使2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(0.304g，0.917mmol)與4-嗎啉碳酰氯(0.107mL，0.917mmol)反應(yīng)，得到0.250g 2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-{2-[1-(嗎啉-4-基羰基)哌啶-4-基]乙基}-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為黃橙色固體，熔點(diǎn)158.1-160.5℃。
元素分析Calculated for C23H36N6O3％C，62.14；％H，8.16；％N，18.90；Found％C，62.02；％H，7.94；％N，18.99.
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.82(s，2H)，4.64(s，2H)，4.34-4.29(m，2H)，3.62-3.54(m，6H)，3.50(q，J＝7.0Hz，2H)，3.1(t，J＝4.4Hz，4H)，2.74(t，J＝11.8Hz，2H)，2.38(s，3H)，2.31(s，3H)，1.67-1.55(m，5H)，1.27-1.1(m，2H)，1.14(t，J＝7.0Hz，3H)；MS(CI)m/e 445.2935(445.2927 calcd for C23H36N6O3，M+H).
實(shí)施例13N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]嗎啉-4-基甲酰胺 步騾A將3-氨基丙基氨基甲酸叔丁酯(121.39g，697mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(200mL)中的溶液緩慢加入到2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(110g，498mmol)和三乙胺(104mL，746mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(900mL)中的溶液中。室溫下攪拌20小時(shí)后，加熱反應(yīng)混合物至55℃。24小時(shí)時(shí)加入0.1當(dāng)量氨基甲酸酯。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫過(guò)夜，然后減壓濃縮。將殘余物溶解在乙酸乙酯(3L)中。將溶液分成3等份(每份1L)。用水(2×1L)洗滌每等份。用碳酸鉀將水洗液的pH調(diào)整至10，然后用乙酸乙酯萃取。合并所有的乙酸乙酯層，硫酸鈉上干燥，然后減壓濃縮得到181g粗產(chǎn)物。用乙腈再結(jié)晶該產(chǎn)物得到138g 3-[(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯，為黃色固體。
步驟B用己烷洗滌氫化鈉(17.23g，60％)以除去礦物油，然后與二甘醇二甲醚(50mL)混合。氮?dú)鈿夥障吕鋮s混合物。滴加入苯酚(35.82g，408mmol)在二甘醇二甲醚(150mL)中的溶液。停止放出氣體后，攪拌反應(yīng)混合物15分鐘。加入步驟A的產(chǎn)物。62℃下加熱反應(yīng)混合物幾天，然后將溫度增加至120℃，攪拌反應(yīng)物過(guò)夜。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后與水(4L)混合，攪拌約4.5小時(shí)，然后使之靜置過(guò)夜。將固體溶解在乙酸乙酯中，然后過(guò)濾除去顆粒物。減壓下濃縮濾液。將殘余物溶解在乙酸乙酯(～2L)中，用飽和碳酸鉀洗滌(3×2L)，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到152.3g 3-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯。
步驟C在氫化燒瓶中，將5％Pt/C和甲苯(50mL)的混合物加入到步驟B產(chǎn)物在甲苯(1850mL)和異丙醇(125mL)混合物的溶液中。將該燒瓶放入氫氣氣氛下過(guò)夜。再加入22.5g催化劑，并把燒瓶放回氫化器中。6小時(shí)后加入催化劑(40g)和異丙醇(50mL)。將燒瓶放在氫化器中過(guò)夜。過(guò)濾反應(yīng)混合物除去催化劑。減壓下濃縮濾液，得到3-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯，為油狀物。將油狀物溶解在吡啶(1300mL)中。
步驟D將一部分(650ml)步驟C的吡啶溶液在冰浴中冷卻10分鐘。5分鐘內(nèi)緩慢加入乙酰氯(12.65mmol，0.1779mmol)。從冰浴中取出反應(yīng)混合物并加熱回流。將溫度降低到110℃，攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜。減壓下除去吡啶。用庚烷將殘余物制成漿體，然后減壓下濃縮。混合殘余物和乙酸乙酯(1L)和水(1L)。用50％氫氧化鈉將pH調(diào)整至12并分層。過(guò)濾有機(jī)層除去顆粒物，然后減壓下濃縮。用乙酸乙酯漿體純化殘余物得到39.8g 3-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基氨基甲酸叔丁酯，為淺棕色絨狀固體。
步驟E在2L燒瓶中混合步驟D的產(chǎn)物和乙酸銨(410g)。將一團(tuán)紙巾塞入瓶頸。145℃下攪拌加熱反應(yīng)混合物20.5小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用氫氧化銨將pH調(diào)整至11，并用氯仿萃取混合物。用1％碳酸鈉(7×1L)洗滌萃取物?；旌献畛醯乃嗪偷谝恢恋谌匆?，過(guò)濾除去顆粒物，然后濃縮至體積約1L。用氯仿在連續(xù)萃取器中將該溶液萃取一整夜。減壓下濃縮氯仿萃取液，得到27.1g灰白色固體。用乙酸甲酯將該產(chǎn)物制成漿體，得到約16.5g N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]乙酰胺。用乙腈再結(jié)晶一部分(0.5g)，得到約0.3g純乙酰胺，為白色固體，熔點(diǎn)181.4-182.1℃。元素分析Calculated for C14H21N5O·0.50H2O％C，59.13；％H，7.80；％N，24.63；Found％C，59.08；％H，8.00；％N，24.73.
步驟F將濃鹽酸(5mL)緩慢加入N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]乙酰胺(15.94g，57.9mmol)在無(wú)水乙醇(100mL)的溶液中。立即形成沉淀物并且混合物變稠。加入乙醇(50mL)，隨后加入濃鹽酸(119.5mL)。加熱回流該反應(yīng)混合物2天。減壓下除去溶劑。將水(250mL)加入到殘余物中，加入固體碳酸鉀直至pH達(dá)到7，此時(shí)加入氯仿(250mL)。再加入碳酸鈉直至pH達(dá)到10，然后加入50％氫氧化鈉直至pH達(dá)到14。用額外的氯仿(500mL)稀釋混合物，然后室溫下攪拌2天。分離有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。用乙腈再結(jié)晶殘余物得到8.42g 1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為灰白色結(jié)晶體，熔點(diǎn)191.5-191.9℃。
元素分析Calculated for C12H19N5·0.25H2O％C，60.61；％H，8.26；％N，29.45；Found％C，60.50；％H，8.28；％N，29.57.
步驟G將三乙胺(0.78mL，5.6mmol)加入到1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(1.00g，4.3mmol)在氯仿(50mL)的溶液中。在冰浴中冷卻該溶液，然后加入4-嗎啉碳酰氯(0.55mL，4.7mmol)。15分鐘后，從冰浴中取出反應(yīng)混合物，室溫下攪拌2天。用水(30mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用碳酸鉀將pH調(diào)整至11。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，然后用異丙醇/水再結(jié)晶得到0.61g N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]嗎啉-4-甲酰胺，為白色固體，熔點(diǎn)128.9-129.7℃。
元素分析Calculated for C17H26N6O2·1.00H2O％C，56.03；％H，7.74；％N，23.06；Found％C，56.10；％H，7.92；％N，23.31.
1H NMR(Bruker 300MHz，DMSO-d6)δ6.63(t，J＝4.9Hz，1H)，5.56(s，2H)，4.19(t，J＝8.1Hz，2H)，3.53(t，J＝4.4Hz，4H)，3.25(t，J＝4.9Hz，4H)，3.14(q，J＝6.2Hz，2H)，2.45(s，3H)，2.35(s，3H)，2.29(s，3H)，1.81(p，J＝7.4Hz，2H).MS(CI)m/e 347(M+H).
實(shí)施例14N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}嗎啉-4-基甲酰胺 步驟A利用實(shí)施例13步驟D的一般方法，用乙氧基乙酰氯(21.81g，178mmol)處理3-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯的吡啶溶液(參見(jiàn)實(shí)施例13步驟C)?；旌显摯之a(chǎn)物和二氯甲烷(2L)和水(2L)。用50％氫氧化鈉將pH調(diào)整為12，并攪拌混合物30分鐘。分離有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。用庚烷稀釋殘余物，然后濃縮除去殘余吡啶。重復(fù)幾次該步驟得到64.8g3-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基氨基甲酸叔丁酯，為棕褐色。
步驟B在2L燒瓶中混合乙酸銨(500g)和3-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基氨基甲酸叔丁酯(35.09g，77mmol)。用一團(tuán)紙巾塞住燒瓶頸。150℃下加熱攪拌反應(yīng)混合物27小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后放入冰浴中。加入氫氧化銨直至pH達(dá)到11。加入氫氧化鈉(50％)直到pH達(dá)到14。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，然后溶解在氯仿(4L)中。將該氯仿溶液分成兩份，用飽和碳酸鉀(2×2L)洗滌每一份。合并有機(jī)物，用硫酸鎂干燥，減壓濃縮得到30.3g粗產(chǎn)物。用乙酸甲酯將產(chǎn)物制成漿體，得到13.7g N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}乙酰銨，為灰色固體，熔點(diǎn)161.8-162.3℃。
元素分析Calculated for C16H25N5O2％C，60.17；％H，7.89；％N，21.93；Found％C，59.97；％H，7.70；％N，22.19.
步驟C利用實(shí)施例13步驟F的一般方法，水解N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}乙酰銨(13.14g，4.1mmol)，純化得到10.81g 1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為棕色固體，熔點(diǎn)126.8-127.2℃。
元素分析Calculated for C14H23N5O％C，60.62；％H，8.36；％N，25.25；Found％C，60.49；％H，8.38；％N，25.33.
步驟D利用實(shí)施例13步驟G的一般方法，使1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(1.00g，3.6mmol)與4-嗎啉碳酰氯(0.46mL，40mmol)反應(yīng)，得到1.05g N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}嗎啉-4-甲酰胺，為灰白色固體，熔點(diǎn)140.5-142.2℃。
元素分析Calculated for C19H30N6O3·1.00H2O％C，55.86；％H，7.90；％N，20.57；Found％C，55.60；％H，7.87；％N，20.59.
1H NMR(Bruker 300MHz，DMSO-d6)δ6.64(t，J＝5.6Hz，1H)，5.75(s，2H)，4.62(s，2H)，4.28(t，J＝8.1Hz，2H)，3.54(t，J＝4.9Hz，4H)，3.51(q，J＝6.9Hz，2H)，3.25(t，J＝4.9Hz，4H)，3.15(q，J＝5.6Hz，2H)，2.36(s，3H)，2.30(s，3H)，1.87(p，J＝8.1Hz，2H)，1.13(t，J＝7.5Hz，3H).
MS(CI)m/e 276(M+H).
實(shí)施例15N-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]嗎啉-4-基甲酰胺 步驟A將2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(60g，271mmol)在無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺(600mL)中的溶液冷卻到0℃。滴加三乙胺(44.8mL，326mmol)，隨后滴加2-氨基乙基氨基甲酸叔丁酯(52.2g，326mmol)。30分鐘后，去掉冰浴，加熱反應(yīng)混合物至60℃。在60℃下加熱反應(yīng)混合物過(guò)夜，然后減壓濃縮得到橙色油狀物。將該油狀物溶解在乙酸乙酯(1L)中，用水(3×500mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到黃色油狀物。用甲醇(～100mL)研磨該油狀物。通過(guò)過(guò)濾分離所得固體，用冷甲醇洗滌，得到72.3g 2-[(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯固體。
步驟B向冰凍(0℃)的氫化鈉(0.52g，60％，13.1mmol)在二甘醇二甲醚(4mL)的懸浮液中分批加入苯酚(1.19g，12.6mmol)。然后攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。加入2-[(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯(3.0g，8.70mmol)在二甘醇二甲醚(6mL)中的溫溶液，90℃下加熱反應(yīng)混合物過(guò)夜。冷卻反應(yīng)混合物，緩慢倒入水(100mL)中。通過(guò)過(guò)濾分離所得褐色固體，用水洗滌，干燥，然后用異丙醇(25mL)再結(jié)晶得到2.07g 2-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯，為白色針狀物。用66.5g起始物重復(fù)該反應(yīng)，得到50.4g白色針狀物產(chǎn)物，熔點(diǎn)158-160℃。
步驟C向2-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯(50.4g)在甲苯(500mL)和甲醇(40mL)混合物中的溫溶液中加入催化劑(5g，5％鉑/炭)。將反應(yīng)混合物放入氫氣氣氛(50psi，3.4×105Pa)下。2小時(shí)后再次加入催化劑(4g)，繼續(xù)氫化過(guò)夜。通過(guò)Celite過(guò)濾助劑層過(guò)濾反應(yīng)混合物，用熱甲苯(1L)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液，得到45.1g 2-[3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯，為白色固體。
步驟D加熱回流2-[3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯(43.7g，117mmol)、原乙酸三乙酯(22.6mL，123mmol)、鹽酸吡啶(4.4g)和甲苯(440mL)的混合物30分鐘。減壓濃縮反應(yīng)混合物，得到棕色油狀物。將油狀物溶解在乙酸乙酯(1L)中，并用水(2×500mL)洗滌。合并水洗液，用乙酸乙酯(2×500mL)萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮，得到46.4g 2-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基氨基甲酸叔丁酯，為白色固體，熔點(diǎn)180-182℃。
步驟E160℃下，在密封管中加熱乙酸銨(95g)和2-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基氨基甲酸叔丁酯(9.5g)的混合物24小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后分配在水和氯仿之間。用50％氫氧化鈉使水層呈堿性(pH13)，然后用氯仿(10×400mL)萃取。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)物，然后減壓濃縮得到棕色固體。將固體溶解在溫異丙醇(80mL)中，然后與1M鹽酸在乙醚(23.7mL)中的溶液混合。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，用冷的異丙醇和乙醚洗滌，然后在80℃真空烘箱中干燥過(guò)夜得到5.0g N-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]乙酰胺鹽酸鹽，為白色固體，熔點(diǎn)＞250℃。
元素分析Calculated forC13H19N5O·1.00HCl％C，52.43；％H，6.77；％N，23.52；Found％C，52.25；％H，6.81；％N，23.41.
用34g起始物重復(fù)該反應(yīng)，得到18g乙酰胺鹽酸鹽，為淺褐色固體。
步驟F混合N-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]乙酰胺鹽酸鹽(18g)、濃鹽酸(231mL)和乙醇(350mL)，并在90℃下加熱過(guò)夜。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后用乙醚(200mL)稀釋。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，用冷乙醇和乙醚洗滌，然后80℃下真空干燥過(guò)夜，得到17.3g 1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺鹽酸鹽，為白色針狀物。
元素分析Calculated for C11H17N5·2.8HCl·0.25H2O％C，40.32；％H，6.26；％N，30.83；Found％C，40.54；％H，6.15；％N，30.87.
步驟G將4-嗎啉碳酰氯(1.42mL，12.2mmol)加入到1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺鹽酸鹽(4.0g，來(lái)自步驟F，12.2mmol)、三乙胺(85mL，610mmol)和二氯甲烷(400mL)的混合物中，攪拌該反應(yīng)混合物過(guò)夜。第二天再加入4-嗎啉碳酰氯(0.25當(dāng)量)，攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜。減壓除去溶劑，得到白色固體。將該產(chǎn)物溶解再水(200mL)中，用碳酸鈉(5g)處理，然后用氯仿(5×500mL)萃取。硫酸鎂上干燥合并的萃取物，然后減壓濃縮得到白色固體。將該固體溶解在溫的異丙醇中，冷卻然后與12.2mL 1M鹽酸在乙醚中的溶液混合。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，用異丙醇和乙醚洗滌，干燥得到所需產(chǎn)物的鹽酸鹽。將該鹽溶解在水(50mL)中，然后與過(guò)量碳酸鈉(4g)混合。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，用水洗滌，然后90℃下的真空烘箱中干燥過(guò)夜，得到2.3g N-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]嗎啉-4-甲酰胺，為白色固體，熔點(diǎn)219-221℃。
元素分析Calculated for C16H24N6O2％C，57.81；％H，7.28；％N，25.28；Found％C，58.13；％H，7.14；％N，25.56.
實(shí)施例16-26利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(25mg，參見(jiàn)實(shí)施例11步驟G)在氯仿(5mL)中的溶液的試管中加入合適的異氰酸酯(1.1當(dāng)量)。給試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的振動(dòng)器中過(guò)夜。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過(guò)制備HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表表示自由基的結(jié)構(gòu)和觀測(cè)到的精確質(zhì)量(m+H)。結(jié)構(gòu)是通過(guò)1HNMR光譜確定的。

實(shí)施例27N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]嗎啉-4-基甲酰胺 利用實(shí)施例16-26的方法，使4-嗎啉碳酰氯與1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為347.2214。
實(shí)施例28N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-[(1R*，2S*)-2-苯基環(huán)丙基]脲 利用實(shí)施例16-26的方法，使反-2-苯基環(huán)丙基異氰酸酯與1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為393.2425。
實(shí)施例29-31利用實(shí)施例16-26的方法制備下表中的化合物。合適的磺酰基異氰酸酯與1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。
實(shí)施例32-35利用實(shí)施例16-26的方法制備下表中的化合物。合適的磺酰基硫代異氰酸酯與1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。

實(shí)施例36-45利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(4-氨基丁基)-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(25mg，參見(jiàn)實(shí)施例10步驟I)在氯仿(5mL)中的溶液的試管中加入合適的異氰酸酯(1.1當(dāng)量)。給試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的振動(dòng)器中16小時(shí)。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過(guò)制備HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。結(jié)構(gòu)是通過(guò)1H NMR光譜確定的。下表表示，自由基的結(jié)構(gòu)和觀測(cè)到的精確質(zhì)量(m+H)。
實(shí)施例46
N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}-N’-[(1R*，2S*)-2-苯基環(huán)丙基]脲 利用實(shí)施例36-45的方法，使反-2-苯基環(huán)丙基異氰酸酯與1-(4-氨基丁基)-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為437.2666。
實(shí)施例47-48利用實(shí)施例36-45中的方法制備下表中的化合物。使合適的磺酰基異氰酸酯與1-(4-氨基丁基)-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。

實(shí)施例49-52利用實(shí)施例36-45中的方法制備下表中的化合物。使合適的異硫氰酸酯與1-(4-氨基丁基)-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。
實(shí)施例53N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}-N’-(2-糠?；?硫脲 利用實(shí)施例36-45的方法，使2-糠?；惲蚯杷狨ヅc1-(4-氨基丁基)-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為431.887。
實(shí)施例54-65利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有2-乙氧基甲基-6，7-二甲基-1-(2-哌啶基-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(25mg，參見(jiàn)實(shí)施例12步驟F)在氯仿(5mL)中的溶液的試管中加入合適的異氰酸酯(1.1當(dāng)量)。給試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的振動(dòng)器中16小時(shí)。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過(guò)制備HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。結(jié)構(gòu)是通過(guò)1H NMR光譜確定的。下表表示，自由基的結(jié)構(gòu)和觀測(cè)到的精確質(zhì)量(m+H)。

實(shí)施例662-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-{2-[1-(嗎啉-4-基羰基)哌啶-4-基]乙基}-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺 利用實(shí)施例54-65中的方法，使4-嗎啉碳酰氯與2-乙氧基甲基-6，7-二甲基-1-(2-哌啶基-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量是445.2929。
實(shí)施例674-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]乙基}-N-[(1R*，2S*)-2-苯基環(huán)丙基]哌啶-1-甲酰胺 利用實(shí)施例54-65中的方法，使反-2-苯基環(huán)丙基異氰酸酯與2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量是491.3139。
實(shí)施例68
4-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]乙基}-N-甲基-N-苯基哌啶-1-甲酰胺 利用實(shí)施例54-65中的方法，使N-甲基-N-苯基氨基甲酰氯與2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量是465.3006。
實(shí)施例69-70利用實(shí)施例54-65中的方法制備下表中的化合物。合適的磺酰基異氰酸酯與2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。
實(shí)施例71-73
利用實(shí)施例54-65中的方法制備下表中的化合物。合適的異硫氰酸酯與2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。
實(shí)施例74N-[(4-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]乙基}哌啶-1-基)碳硫基]-2-糠酰胺 利用實(shí)施例54-65中的方法制備，合適的2-糠?；惲蚯杷狨ヅc2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量是485.2357。
實(shí)施例75-85利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(25mg，參見(jiàn)實(shí)施例13步驟F)在氯仿(5mL)中的溶液的試管中加入合適的異氰酸酯(1.1當(dāng)量)。給試管蓋上蓋子，渦旋，然后放入室溫下的振動(dòng)器中1 6小時(shí)。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過(guò)制備HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表表示自由基的結(jié)構(gòu)和觀測(cè)到的精確質(zhì)量(m+H)。
實(shí)施例86N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]-N’-[(1R*，2S*)-2-苯基環(huán)丙基]脲
利用實(shí)施例75-85的方法，使反-2-苯基環(huán)丙基異氰酸酯與1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為393.2393。
實(shí)施例87N’-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]-N-甲基-N-苯脲 利用實(shí)施例75-85的方法，使N-甲基-N-苯基氨基甲酰氯與1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為367.2263。
實(shí)施例88-89利用實(shí)施例75-85的方法制備下表中的化合物，使合適的磺?；惽杷狨ヅc1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。
實(shí)施例90-92利用實(shí)施例75-85的方法制備下表中的化合物。使合適的異硫氰酸酯與1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1 H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。
實(shí)施例93N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]-N’-(2-糠?；?硫脲
利用實(shí)施例75-85的方法，使2-糠?；惲蚯杷狨ヅc1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為387.1608。
實(shí)施例94-106利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(25mg，參見(jiàn)實(shí)施例14步驟C)在氯仿(5mL)中的溶液的試管中加入合適的異氰酸酯(1.1當(dāng)量)。給試管蓋上蓋子，渦旋，然后放入室溫下的振動(dòng)器中～17小時(shí)。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過(guò)制備HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表表示自由基的結(jié)構(gòu)和觀測(cè)到的精確質(zhì)量(m+H)。
實(shí)施例106N’-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}-N，N-二甲基脲
利用實(shí)施例94-1 05的方法，使二甲基氨基甲酰氯與1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為349.2340。
實(shí)施例107N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}-嗎啉-4-基甲酰胺 利用實(shí)施例94-105的方法，使4-嗎啉碳酰氯與1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為391.2465。
實(shí)施例108N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}-N’-[(1R*，2S*)-2-苯基環(huán)丙基]脲 利用實(shí)施例94-105的方法，使反-2-苯基環(huán)丙基異氰酸酯與1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為437.2674。
實(shí)施例109N’-[3-(4-氨基-2-乙氧基甲基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]-N-甲基-N-苯脲 利用實(shí)施例94-105的方法，使N-甲基-N-苯基氨基甲酰氯與1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為411.2513。
實(shí)施例110-112利用實(shí)施例94-105的方法制備下表中的化合物。合適的磺酰基異氰酸酯與1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。
實(shí)施例113-116利用實(shí)施例94-105的方法制備下表中的化合物。合適的異硫氰酸酯與1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。
實(shí)施例117
N-[3-(4-氨基-2-乙氧基甲基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]-N’-(2-糠酰基)硫脲 利用實(shí)施例94-105的方法。使2-糠?；惲蚯杷狨ヅc1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為431.1846。
實(shí)施例118-132利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(20mg，參見(jiàn)實(shí)施例15步驟F)在氯仿(5mL)中的溶液的試管中加入合適的異氰酸酯(1.1當(dāng)量)。給試管蓋上蓋子，渦旋，然后放入室溫下的振動(dòng)器中4小時(shí)。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過(guò)制備HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表表示自由基的結(jié)構(gòu)和觀測(cè)到的精確質(zhì)量(m+H)。

實(shí)施例133N’-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]-N，N-二甲基脲 利用實(shí)施例118-133的方法，使二甲基氨基甲酰氯與1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為291.1929。
實(shí)施例134N-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]嗎啉-4-基甲酰胺 利用實(shí)施例118-133的方法，使4-嗎啉碳酰氯與1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為333.2025。
實(shí)施例135N-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]-N’-[(1R，2S)-2-苯基環(huán)丙基]脲 利用實(shí)施例118-133的方法，使反-2-苯基環(huán)丙基異氰酸酯與1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為379.2235。
實(shí)施例136N’-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]-N-甲基-N-苯基脲 利用實(shí)施例118-133的方法，使N-甲基-N-苯基氨基甲酰氯與1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為353.2073。
實(shí)施例137{[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]氨基}羰基氨基磷酸二乙酯
利用實(shí)施例118-133的方法，使二乙氧基氧膦基異氰酸酯與1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為399.1926。
實(shí)施例138-139利用實(shí)施例118-133的方法制備下表中的化合物。合適的磺?；惽杷狨ヅc1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。
實(shí)施例140-146利用實(shí)施例118-133的方法制備下表中的化合物。合適的異硫氰酸酯與1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需化合物。
實(shí)施例147-164步驟A將丙腈(120mL)加入到丙二酰二氯(100g)中，氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物24小時(shí)。加入二噁烷(200mL)。通過(guò)過(guò)濾分離所得固體，用水洗滌并抽吸干燥。將它溶解在甲醇(～75mL)中，然后與二噁烷(300mL)混合。減壓下減少反應(yīng)混合物體積，直至形成稠的白色沉淀物。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，用二噁烷洗滌，干燥得到64.4g鹽酸6-氯-4-羥基-5-甲基-1H-吡啶-2-酮，為白色固體。
步驟B將鹽酸6-氯-4-羥基-5-甲基-1H-吡啶-2-酮(64g)溶解在硫酸(325mL)中，同時(shí)在冰浴中冷卻。90分鐘內(nèi)滴加硝酸。再攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，然后倒入冰水(2L)中。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，用水洗滌，然后干燥得到42.5g 6-氯-4-羥基-5-甲基-3-硝基-1H-吡啶-2-酮，為淺黃色固體。
步驟C將三乙胺(30.2mL，220mmol)加入到冷卻的(冰浴)6-氯-4-羥基-5-甲基-3-硝基-1H-吡啶-2-酮(50.6g，247mmol)在無(wú)水二氯甲烷的懸浮液中，起始物進(jìn)入溶液。滴加三氟甲磺酸酐(8.3mL，48.9mmol)。1小時(shí)后，加入4-氨基丁基氨基甲酸叔丁酯。1小時(shí)后使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝剡^(guò)夜。減壓除去溶劑，通過(guò)色譜法純化得到4-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁基}氨基)-6-氯-5-甲基-3-硝基吡啶-2-基三氟甲磺酸酯，為黑色油狀物。
步驟D混合步驟C的粗產(chǎn)物和甲苯(2L)、三乙胺(25.4mL)和二芐胺(35.5mL)，加熱回流1小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(4×1L)和鹽水(200mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到100g橙色油狀物。通過(guò)柱色譜法(1200mL硅膠，用20/80乙酸乙酯/己烷洗脫)純化一部分產(chǎn)物(70g)，得到52g 4-{[2-氯-6-(二芐基氨基)-3-甲基-5-硝基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯，為淺黃色油狀物。
步驟E將氫硼化鈉(0.40g，10.6mmol)緩慢加入氯化鎳(II)六水合物(0.70g，2.93mmol)在甲醇(75mL)中的溶液中。15分鐘后，向反應(yīng)混合物中加入4-{[2-氯-6-(二芐基氨基)-3-甲基-5-硝基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯(3.25g，5.87mmol)在甲醇(25mL)和二氯甲烷(20mL)混合物中的溶液。緩慢加入氫硼化鈉(0.93g)。30分鐘后，高效液相色譜分析表明反應(yīng)已完成。利用相同條件將反應(yīng)放大到48.7g起始物。合并小規(guī)模和大規(guī)模反應(yīng)混合物，通過(guò)Celite過(guò)濾助劑層過(guò)濾。將濾液通過(guò)硅膠填料，用50/50二氯甲烷/甲醇洗滌填料。減壓濃縮濾液得到46.3g 4-{[3-氨基-6-氯-4-(二芐基氨基)-5-甲基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯，為淺棕色油狀物。
步驟F將三乙胺(12.2mL)加入到冷凍(0℃)的步驟E的產(chǎn)物在二氯甲烷(300mL)中的溶液中。通過(guò)添加漏斗加入乙氧基乙酰氯(10.8g)在二氯甲烷(100mL)中的溶液。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝剡^(guò)夜。分析表明，還有一些起始物，因此加入0.2當(dāng)量?；?。1小時(shí)后，用水(3×500mL)洗滌反應(yīng)混合物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到4-{[2-氯-6-(二芐基氨基)-5-(2-乙氧基乙?；被?-3-甲基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯，為棕色油狀物。將油狀物溶解在吡啶(300mL)中。加入鹽酸吡啶(40g)，加熱回流該反應(yīng)混合物4小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后減壓下濃縮。將殘余物溶解在乙酸乙酯(500mL)中，用水(500mL)洗滌。形成乳液，向水層中加入氯化鈉澄清。將有機(jī)層用硫酸鎂干燥，并減壓濃縮得到52.1g深棕色油狀物。通過(guò)色譜法(硅膠，30/70乙酸乙酯/己烷洗脫)純化該油狀物，得到24.8g 4-[6-氯-4-(二芐基氨基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為淺黃色油狀物。
步驟G15分鐘內(nèi)，將三氟乙酸(160mL)加入到冷凍的(0℃)步驟F產(chǎn)物在二氯甲烷(500mL)中的溶液中。攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜，然后減壓濃縮。將殘余物分配在二氯甲烷(500mL)和10％氫氧化鈉(500mL)之間。用二氯甲烷(×2)萃取堿層。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，然后減壓濃縮，得到棕色油狀物。將油狀物溶解在異丙醇(100mL)中，然后與41mL 1M鹽酸在乙醚中的溶液混合。將乙醚(200mL)緩慢加入混合物中。通過(guò)過(guò)濾分離所得沉淀物，用醚洗滌，80℃真空烘箱中干燥過(guò)夜，得到11.25g所得產(chǎn)物的鹽酸鹽，為白色固體。將固體溶解在水(200mL)中，與碳酸鈉(15g)混合，然后用二氯甲烷(3×500mL)萃取。用硫酸鎂干燥合并的萃取物，然后減壓濃縮得到10.2g1-(4-氨基丁基)-N，N-二芐基-6-氯-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為透明油狀物。
步驟H氮?dú)鈿夥障?，?0％鈀/炭(10g)和乙醇(200mL)混合物中加入甲酸銨(13.7g)。將步驟H的產(chǎn)物溶解在熱的乙醇(600mL)和甲醇(400mL)混合物中，然后加入到反應(yīng)混合物中。加熱回流反應(yīng)混合物4小時(shí)，然后使之冷卻至室溫過(guò)夜。分析表明，反應(yīng)大約僅完成了一半，因此加入催化劑(5g)和甲酸銨(5g)，加熱回流反應(yīng)混合物4小時(shí)。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后通過(guò)Celite過(guò)濾助劑層過(guò)濾。用50/50乙醇/甲醇(1L)洗滌濾餅。減壓下除去溶劑得到透明油狀物。將油狀物分配在二氯甲烷(500mL)和10％氫氧化鈉(200mL)之間。用二氯甲烷抽提水層。用硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，然后減壓濃縮得到4.30g 1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為透明油狀物，靜置時(shí)部分固化。
步驟I利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(23.5mg)在氯仿(5mL)中的溶液的試管中加入合適的異氰酸酯(1.1當(dāng)量)。給試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的振動(dòng)器中4小時(shí)。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過(guò)制備HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表表示自由基的結(jié)構(gòu)和觀測(cè)到的精確質(zhì)量(m+H)。
實(shí)施例165N’-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}-N，N-二甲基脲
利用實(shí)施例147-164的方法，使二甲基氨基甲酰氯與1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為349.2334。
實(shí)施例166N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}-N’-[(1R，2S)-2-苯基環(huán)丙基]脲 利用實(shí)施例147-164的方法，使反-2-苯基環(huán)丙基異氰酸酯與1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為437.2668。
實(shí)施例167N’-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}-N-甲基-N-苯脲
利用實(shí)施例147-164的方法，使N-甲基-N-苯基氨基甲酰氯與1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。觀測(cè)到的精確質(zhì)量為411.2532。
實(shí)施例168-175利用實(shí)施例147-164的方法制備下表中的化合物。使合適的異硫氰酸酯與1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需化合物。

人細(xì)胞中的細(xì)胞因子誘導(dǎo)作用采用體外人血細(xì)胞體系來(lái)評(píng)估細(xì)胞因子誘導(dǎo)作用。如Testerman等在“Cytokine Induction by the Immunomodulators Imiquimod and S-27609”，Journal of Leukocyte Biology，58，365-372(1995年9月)中所述，活性是建立在對(duì)分泌到培養(yǎng)基中的干擾素和腫瘤壞死因子(α)(分別為IFN和TNF)進(jìn)行測(cè)量的基礎(chǔ)上的。
培養(yǎng)用的血液細(xì)胞制備物通過(guò)靜脈穿刺將從健康捐獻(xiàn)者獲得的全血收集于EDTA的抽空(vacutainer)管中，采用Histopaque-1077通過(guò)密度梯度離心從全血中分離周?chē)獑魏思?xì)胞(PBMC)。用Dulbecco氏磷酸鹽緩沖鹽水(DPBS)或Hank氏平衡鹽溶液(HBSS)按1∶1稀釋PBMC。收集PBMC層并用DPBS或HBSS洗滌兩次，然后以4×106細(xì)胞/mL重懸浮在RPMI完全培養(yǎng)基中。將PBMC懸浮液加到放置了等體積含試驗(yàn)化合物的RPMI完全培養(yǎng)基的48孔平底無(wú)菌組織培養(yǎng)板中(Costar，Cambridge，MA或Becton Dickinson Labware，Lincoln Park，NJ)。
化合物制備物將化合物溶解到二甲亞砜(DMSO)中。在向培養(yǎng)孔中加樣時(shí)DMSO的濃度不得超過(guò)最終濃度的1％。通常試驗(yàn)化合物測(cè)試濃度在30-0.014μM。
孵育將濃度為60μM的試驗(yàn)化合物的溶液加到含RPMI完全培養(yǎng)基的孔1中，然后在各孔中制備系列稀釋3倍的稀釋液。隨后，向各孔中加入等體積的PBMC懸浮液，使得試驗(yàn)化合物的濃度在所需的范圍(30-0.014μM)。PBMC懸浮液的終濃度在2×106細(xì)胞/mL。用無(wú)菌塑料蓋子蓋上培養(yǎng)板，輕輕混勻，然后在37℃和5％二氧化碳?xì)夥辗跤?8-24小時(shí)。
分離孵育后在4℃以1000rpm(～200×g)離心培養(yǎng)板10分鐘。用無(wú)菌聚丙烯吸量管移去無(wú)細(xì)胞存在的培養(yǎng)液上清液并轉(zhuǎn)移到無(wú)菌聚丙烯管中。分析前樣品保持在-30℃到-70℃。利用ELISA分析樣品干擾素(α)，利用ELISA或IGEN Assay分析樣品腫瘤壞死因子(α)。
利用ELISA分析干擾素(α)和腫瘤壞死因子(α)采用Human Multi-Species試劑盒(PBL Biomedical Laboratories，New Brunswick，NJ)通過(guò)ELISA測(cè)定干擾素(α)濃度。測(cè)定結(jié)果以pg/mL表示。
采用ELISA試劑盒(得自Biosource International，Camarillo，CA)測(cè)定腫瘤壞死因子(α)(TNF)濃度?；蛘咄ㄟ^(guò)OrigenM-SeriesImmunoassay測(cè)試TNF濃度，并用獲自IGEN International，Gaithersburg，MD的IGEN M-8分析儀讀數(shù)。免疫測(cè)定利用人TNF捕獲和檢測(cè)抗體對(duì)，獲自Biosource International，Camarillo，CA。測(cè)定結(jié)果以pg/mL表示。
下表列出了各個(gè)化合物可誘導(dǎo)干擾素和腫瘤壞死因子的最低濃度。A“*”表示在任何試驗(yàn)濃度下均未觀察到誘導(dǎo)作用產(chǎn)生。

參照一些實(shí)施方案，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述。前面提供的詳細(xì)的說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例只是為了清楚地理解，并非給本發(fā)明加不必要的限制。根據(jù)所公開(kāi)的實(shí)施例進(jìn)行多種多樣的變換而不偏離本發(fā)明的主題和范圍對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。因此，本發(fā)明的范圍不應(yīng)局限于這里具體描述的組合物和結(jié)構(gòu)，而應(yīng)當(dāng)通過(guò)下面權(quán)利要求的文字進(jìn)行限定。
權(quán)利要求
1.下式(I)所示的化合物或其可藥用鹽 其中X表示亞烷基或亞烯基；Y表示-CO-或-CS-；Z表示-NR6-；-NR6-CO-，-NR6-SO2-或-NR7-；R1表示芳基，雜芳基，雜環(huán)基，烷基或烯基，各個(gè)基團(tuán)可以是未被取代的或者被一個(gè)或多個(gè)各自獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的取代基所取代-烷基；-烯基；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的環(huán)烷基；-取代的芳基；-取代的雜芳基；-取代的雜環(huán)基；-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-取代芳基；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-取代雜芳基；-O-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-O-(烷基)0-1-取代雜環(huán)基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代雜環(huán)基；-(烷基)0-1-N(R6)2；-(烷基)0-1-NR6-CO-O-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-取代芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-雜芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-取代雜芳基；-P(O)(O烷基)2；-N3；-鹵素；-鹵代烷基；-鹵代烷氧基；-CO-鹵代烷基；-CO-鹵代烷氧基；-NO2；-CN；-OH；-SH；和在烷基，烯基和雜環(huán)基情況下可以是氧代的；R2選自下述基團(tuán)；-氫；-烷基；-烯基；-芳基；-取代芳基；-雜芳基；-取代雜芳基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一個(gè)或多個(gè)選自下述基團(tuán)的取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-取代芳基；-雜芳基；-取代雜芳基；-雜環(huán)基；-取代雜環(huán)基；-CO-芳基；-CO-(取代芳基)；-CO-雜芳基；和-CO-(取代雜芳基)；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫、烷基、烯基、鹵素、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基和烷硫基；R5是H或C1-10烷基，或者R5與X連接形成含有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的環(huán)；每個(gè)R6各自獨(dú)立地表示H或C1-10烷基；R7表示H或C1-10烷基，它可被雜原子斷開(kāi)，或者當(dāng)R1為烷基時(shí)，R7與R1連接形成環(huán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中Y是-CO-。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中Y是-CO-，R1表示烷基、芳基或取代芳基。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物或鹽，其中R2表示烷基-O-烷基。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物或鹽，其中R2表示表示H或烷基。
6根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中Y表示-CS-。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或鹽，其中Y表示-CS-，R1表示烷基、芳基或取代芳基。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或鹽，其中R2表示烷基-O-烷基。
9.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或鹽，其中R2表示H或烷基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物或鹽，其中R1表示烷基、芳基或取代芳基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中X表示-(CH2)2-4-。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R1和R7連接形成環(huán)。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R1和R7連接形成嗎啉環(huán)。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R5和R6都是氫。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R3和R4都是甲基。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R3和R4獨(dú)立地表示H或烷基。
17.選自下述物質(zhì)的化合物或其可藥用鹽N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯脲；N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯硫脲；N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}嗎啉-4-基甲酰胺；N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]嗎啉-4-基甲酰胺；2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-{2-[1-(嗎啉-4-基羰基)哌啶-4-基]乙基}-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺；N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]嗎啉-4-基甲酰胺；N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}嗎啉-4-基甲酰胺；N-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-1，1-二甲基乙基}-N’-苯脲；N-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-1，1-二甲基乙基}嗎啉-4-基甲酰胺；和N-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]嗎啉-4-基甲酰胺。
18.含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物和可藥用載體的藥物組合物。
19.含有治療有效量的權(quán)利要求2化合物和可藥用載體的藥物組合物。
20.含有治療有效量的權(quán)利要求17化合物和可藥用載體的藥物組合物。
21.誘導(dǎo)動(dòng)物中細(xì)胞因子生物合成的方法，所述方法包括向動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
22.治療動(dòng)物病毒性疾病的方法，所述方法包括向動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
23.治療動(dòng)物腫瘤疾病的方法，所述方法包括向動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
24.誘導(dǎo)動(dòng)物中細(xì)胞因子生物合成的方法，所述方法包括向動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求2化合物。
25.治療動(dòng)物病毒性疾病的方法，所述方法包括向動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求2化合物。
26.治療動(dòng)物腫瘤疾病的方法，所述方法包括向動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求2化合物。
27.誘導(dǎo)動(dòng)物中細(xì)胞因子生物合成的方法，所述方法包括向動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求17化合物。
28.治療動(dòng)物病毒性疾病的方法，所述方法包括向動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求17化合物。
29.治療動(dòng)物腫瘤疾病的方法，所述方法包括向動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求17化合物。
30.式(III)所示化合物或其可藥用鹽 其中Q表示NO2或NH2；X表示亞烷基或亞烯基；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫，烷基，烯基，鹵素，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基；或者R5和X連接形成含有一個(gè)或兩個(gè)雜原子的環(huán)。
全文摘要
在1－位含有脲或硫脲官能基的咪唑并吡啶化合物可以用作免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明的化合物和組合物可以誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子的生物合成，從而可用于治療多種疾病包括病毒性疾病和腫瘤疾病。
文檔編號(hào)A61P37/04GK1599738SQ02824285
公開(kāi)日2005年3月23日 申請(qǐng)日期2002年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月6日
發(fā)明者約瑟夫·F·德拉里亞, 沙達(dá)·A·哈拉德森, 菲利普·D·埃普內(nèi), 凱爾·J·林德斯特倫, 布里翁·A·梅里爾 申請(qǐng)人:3M創(chuàng)新有限公司