專利名稱：C2,5′－二取代的和n的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及C2，5′-二取代的和N6，C2，5′-三取代的腺苷衍生物、藥物組合物及其用途。
現(xiàn)有技術(shù)下列是現(xiàn)有技術(shù)清單，它們適于描述本發(fā)明領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)，所有文獻(xiàn)也包括在本說明書末權(quán)利要求前出現(xiàn)的出版物清單中。本文中對這些文獻(xiàn)的引用以其在出版物清單中的序號(hào)標(biāo)記，該序號(hào)也標(biāo)記于下文的括號(hào)中。
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背景技術(shù)：
腺苷通過激活特異性膜結(jié)合受體P1-嘌呤受體(purinoceptors)作用于細(xì)胞外。這些腺苷受體可以分為4該亞類，A1，A2A，A2B和A3受體。所有的4類受體與腺苷酸環(huán)化酶結(jié)合。腺苷A1和A3受體的激活導(dǎo)致腺苷酸環(huán)化酶的抑制，而活化的A2A和A2B受體激活腺苷酸環(huán)化酶。腺苷受體普遍地分布在整個(gè)身體中。因此，要求配體在發(fā)揮作用時(shí)對有治療價(jià)值的受體亞型和組織具有高度的選擇性。
受體亞型的選擇性可以通過取代腺苷分子來獲得。例如，在腺苷N6位的修飾耐受性很好。N6-取代基如環(huán)戊基提高了腺苷A1受體相對于其它亞型的選擇性1，2，而3-碘代芐基帶來腺苷A3受體選擇性3-5。大的取代基如(芳)烷基氨基6、同位亞烷基肼基7和鏈炔基8，在腺苷部分的2位產(chǎn)生相對于A1的對腺苷A2A受體的選擇性。最近，已評(píng)價(jià)了2-(芳)鏈炔基腺苷衍生物對腺A3受體的選擇性。令人驚奇的是，此類化合物中的一些似乎對腺苷A3受體具有選擇性，而不是對A2A9，10。
組織選擇性常常是部分激動(dòng)的結(jié)果11，12。由于不同組織內(nèi)受體-效應(yīng)子中的不同，可以獲得體內(nèi)作用的選擇性。腺苷受體的部分激動(dòng)劑可以用作抗精神病藥，例如，通過對腺苷A2A受體的刺激導(dǎo)致基底神經(jīng)節(jié)中多巴胺D2受體的抑制13，14并當(dāng)長期給藥時(shí)通過腺苷A3受體作為心腦保護(hù)劑15，16。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了通式(I)的化合物或其鹽 其中
-W表示氧原子或硫原子；-R1表示低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；-R2表示鹵素，低級(jí)鏈烯基，低級(jí)鏈炔基或低級(jí)同位亞烷基肼基；-R3表示氫原子、低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、芳基、酰基苯胺或(芳)烷基；所述環(huán)烷基、芳基或(芳)烷基可以被選自鹵素、羥基或羥基烷基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。
術(shù)語“烷基”，其可以在本文中與術(shù)語“低級(jí)烷基”交互使用，表示在其骨架上含有1至約10該碳原子的、直鏈或支鏈的、任何飽和的烴。
因此，術(shù)語“鏈烯基”和“鏈炔基”，它們也分別與“低級(jí)鏈烯基”和“低級(jí)鏈炔基”交互使用，指在骨架上含有2至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴，其中至少兩個(gè)碳原子分別通過雙鍵或三鍵相連。
因此，應(yīng)理解術(shù)語“低級(jí)”用作前綴來定義烴時(shí)，其指在其骨架上具有不超過10該碳原子的任何烴。
當(dāng)提及本發(fā)明化合物的鹽時(shí)，它指任何生理可接受的鹽。術(shù)語“生理可接受的鹽”指常用于制藥工業(yè)中的任何無毒堿金屬鹽、堿土金屬鹽和銨鹽，包括鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋇鹽、銨鹽和魚精蛋白鹽、鋅鹽，它們可以通過本領(lǐng)域已知方法制備。該術(shù)語還包括無毒的酸加成鹽，它們一般通過本發(fā)明的化合物與適宜的有機(jī)酸或無機(jī)酸反應(yīng)制備。酸加成鹽保持游離堿的生物作用和性質(zhì)，且它們在生物學(xué)方面或其它方面沒有副作用。實(shí)例包括得自無機(jī)酸的酸，并特別包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等。有機(jī)酸特別包括酒石酸、乙酸、丙酸、桔櫞酸、蘋果酸、丙二酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、乙醇酸、葡糖酸、丙酮酸、琥珀酸、水楊酸和芳基磺酸，如對甲苯磺酸。
本發(fā)明還提供了含有有效量的上述通式(I)的化合物作為活性組分的藥物組合物。
此外，本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物作為腺苷受體配體優(yōu)選腺苷，受體激動(dòng)劑，的用途。
附圖簡述為了理解本發(fā)明并探求其如何實(shí)施，現(xiàn)參照附圖對優(yōu)選的實(shí)施方案進(jìn)行非限制性的描述，其中

圖1是顯示體外試驗(yàn)結(jié)果的條框圖，其中檢測了在50μM藥物存在下人臍血樣品中G-CSF產(chǎn)生的水平。具體地講，檢測了化合物34、37、69和70(參見下文)對G-CSF產(chǎn)生的作用，同時(shí)腺苷A3受體激動(dòng)劑IB-MECA作為對照。
圖2是體外試驗(yàn)結(jié)果的條框圖，其中檢測了在10μM化合物的存在下骨髓細(xì)胞的增殖。具體地講，與作為對照的腺苷A3受體激動(dòng)劑IB-MECA相比，檢測化合物34、37、69和70(參見下文)對[3H]胸苷摻入的作用。
圖3A-3C是顯示體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果的條框圖，其中檢測了在接受兩個(gè)日劑量化合物34、37、69和70(參見下文)(150μmol/kg體重每劑量)的小鼠中，本發(fā)明的一些化合物白細(xì)胞計(jì)數(shù)(圖3A)、純中性白細(xì)胞計(jì)數(shù)(ANC)(圖3B)和血清G-CSF水平(圖3C)的作用。
發(fā)明詳述本發(fā)明是為了開發(fā)若干種新的腺苷受體激動(dòng)劑。因此，按照本發(fā)明的第一個(gè)方面，其提供了通式(I)的化合物或其鹽
其中-W表示氧原子或硫原子；-R1表示低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；-R2表示鹵素，低級(jí)鏈烯基，低級(jí)鏈炔基或低級(jí)同位亞烷基肼基；-R3表示低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、(芳)烷基、芳基和?；桨?；所述環(huán)烷基、芳基或(芳)烷基可以被選自鹵素、羥基或羥基烷基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。
更具體地講，本發(fā)明提供了通式(I)的化合物，其中取代基定義如下-W表示氧原子或硫原子；-R1表示低級(jí)烷基或環(huán)烷基；-R2表示鹵素，鏈炔基或同位亞烷基肼基；-R3表示環(huán)烷基或(芳)烷基，其中所述芳烷基任選地鋇至少一個(gè)鹵原子取代。
按照一些特殊的實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物是如下化合物，其中-W表示氧原子；-R1表示烷基；-R2表示鹵原子；而-R3表示氫原子。
按照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，W表示硫原子，R1是選自甲基、乙基、正丙基和異丙基的低級(jí)烷基；R2是碘；而R3是氫原子。
按照第二個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，W是硫原子，R1是選自甲基、乙基、正丙基和異丙基的低級(jí)烷基；R2是鏈炔基；而R3是氫原子。按照此實(shí)施方案，R2優(yōu)選是1-己炔基。
按照第三個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，W為硫原子，R1是選自甲基、乙基、正丙基和異丙基的低級(jí)烷基；R2是同位亞烷基肼基；而R3是氫原子。按照此實(shí)施方案，R2優(yōu)選是N′-3-甲基-1-亞丁基肼基。
按照第四個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，W是氧原子，R1是烷基，R2是鹵原子；而R3選自氫原子、環(huán)烷基或者被取代的或未被取代的(芳)烷基。更優(yōu)選，R1是選自甲基、乙基或環(huán)丙基的低級(jí)烷基，R2是氯，而R3是鹵代芐基，優(yōu)選3-碘代芐基。
本發(fā)明特定化合物包括-5′-脫氧-2-碘-5′-甲硫基腺苷(下文中化合物33)；-5′-脫氧-2-碘-5′-乙硫基腺苷(下文中化合物34)；-5′-脫氧-2-碘-5′-丙硫基腺苷(下文中化合物35)；-5′-脫氧-2-碘-5′-異丙硫基腺苷(下文中化合物36)；-5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-甲硫基腺苷(下文中化合物37)；-5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-乙硫基腺苷(下文中化合物38)；-5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-丙硫基腺苷(下文中化合物39)；-5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-異丙硫基腺苷(下文中化合物40)；-5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-甲硫基腺苷(下文中化合物45)；-5′-脫氧-2-(N ′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-乙硫基腺苷(下文中化合物46)；-5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-丙硫基腺苷(下文中化合物47)；-5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-異丙硫基腺苷(下文中化合物48)；-N6-環(huán)戊基-5′-O-甲基腺苷(下文中化合物67)；-N6-(3-碘芐基)-5′-O-甲基腺苷(下文中化合物68)；-2-氯-5′-O-甲基腺苷(下文中化合物69)；-N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-甲基腺苷(下文中化合物70)；-N6-(3-碘芐基)-2-氯-5′-O-甲基腺苷(下文中化合物7 1)；-N6-環(huán)戊基-5′-O-乙基腺苷(下文中化合物73)；-N6-(3-碘芐基)-5′-O-乙基腺苷(下文中化合物74)；-2-氯-5′-O-乙基腺苷(下文中化合物75)；-N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-乙基腺苷(下文中化合物76)；-N6-(3-碘芐基)-2-氯-5′-O-乙基腺苷(下文中化合物77)；
-N6-環(huán)戊基-5′-O-環(huán)丙基腺苷(下文中化合物78，79)；-N6-(3-碘芐基)-5′-O-環(huán)丙基腺苷(下文中化合物80)；-2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷(下文中化合物81)；-N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷(下文中化合物82)；-N6-(3-碘芐基)-2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷(下文中化合物83)；本發(fā)明的化合物可以通過若干合成方法制備。例如，獲得C2，5′-二取代的衍生物33-40和45-48的合成路線描述于下文方案1中 R′＝SCH3、SC2H5、S-n-C3H7或S-i-C3H7；37-40 R＝C≡C(CH2)3CH3；45-48 R＝NHN＝CHCH2CH(CH3)2；(a)HMPA，SOCl2，Dowex 50W(H+)；(b)i)RSH，2M NaOH，回流ii)乙酸；(c)i)DMAP，CH3CN，Et3N，乙酸酐ii)MeOH；(d)CH3CN，Et4NCl，N，N-二甲基苯胺，POCl3，回流；(e)I2，CH2I2，CuI，異戊基腈，THF；(f)EtOH/NH3；(g)CH3CN，Et3N，CuI，PdCl2，PH3P，1-己炔；(h)i)異丙醇，腈一水合物，回流ii)MeOH，異戊醛，回流按照此方案，由2-碘腺苷(1)開始，該起始物是文獻(xiàn)中描述的合成若干腺苷衍生物的重要中間體18。通過將1與腈一水合物在80℃下攪拌由1合成2-肼基腺苷(2)。按照Niiya等的方法，縮合2和異戊醛產(chǎn)生2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-腺苷(3)7。1與1-己炔反應(yīng)，以良好的收率(88％)制備了2-(1-己炔基)腺苷(4)8，19?；衔?3-40和45-48的部分合成路線類似于化合物2-4，不同的是C-2取代前，引入5′-烷硫基取代基。事實(shí)上，在該路線的早期階段是如此進(jìn)行的，即對于商購的鳥苷，其用作2-碘腺苷(1)本身的起始物。5′-(烷硫基)-取代的衍生物17-20通過5′-氯-5′-脫氧-鳥苷(16)與適當(dāng)?shù)牧虼荚?MNaOH中反應(yīng)來制備1，5，20。接著，2′，3′-羥基進(jìn)行乙?；Ｗo(hù)以避免在進(jìn)一步合成中反應(yīng)，以定量的收率獲得了化合物21-24。
用磷酰氯(POCl3)，氯化化合物21-24的6位18，21，得到2-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-烷硫基-5-脫氧-α-D-呋喃核糖基)-嘌呤衍生物25-28，收率從合理至良好(40-74％)。接著，通過重氮化-碘取代反應(yīng)將化合物25-28的2-氨基取代位碘22。此方法似乎是制備29-32的有效途經(jīng)。攪拌29-32與用氨氣飽和的乙醇，得到5′-烷硫基-2-碘腺苷中間體33-36。在這些條件下乙?；Ｗo(hù)基容易被除去。但是，6位只有在幾天后才胺化。最后，對于化合物38，在33-36中很容易引入2-(1-己炔基)，以良好的收率得到5′-烷硫基-5′-脫氧-2-(1-己炔基)腺苷衍生物37-40。如上所述，通過縮合5′-烷硫基-5′-脫氧-2-肼基腺苷衍生物(41-44)與異戊醛合成5′-烷硫基-5′-脫氧2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)腺苷衍生物(45-48)7。
或者，本發(fā)明的N6，C2，5′-三取代的腺苷衍生物66-83可以按照如下方案2來制備
反應(yīng)條件a丙酮，MeOH，2，2-二甲氧基丙烷，HCl氣體，bNaH，DMF，烷基鹵化物，ci)0.04M NaOH ii)BaCO3，d)吡啶，DMAP，醋酸酐，e1，2-二氯乙烷，硅烷化的堿，TMSOTf，f.i)EtOH/NH3或ii)純EtOH，適當(dāng)?shù)陌钒凑沾朔桨?，讓HCl氣體通過起始物D-核糖(49)在丙酮、MeOH和2，2-二甲氧基丙烷混合物的溶液中，制備被保護(hù)的核糖(50)48。在標(biāo)準(zhǔn)條件下將50的羥基烷基化，即用NaH在DMF中在冷卻下處理，接著分別加入烷基鹵化物碘甲烷、碘乙烷或環(huán)丙基溴。接著，通過在鹽酸(0.04M)中回流2小時(shí)，除去烷基化的化合物51-53的保護(hù)基，得到化合物54-5649。然后，用乙?；Ｗo(hù)保護(hù)54-56的羥基。然后，按照Vorbrggen方法45，將完全保護(hù)的化合物57-59與適當(dāng)?shù)碾s環(huán)堿如6-氯嘌呤或2，6-二氯嘌呤偶合，得到化合物60-65，收率良好(48-84％)。用EtOH/NH3、環(huán)戊基胺或3-碘代芐基胺胺化，得到未保護(hù)的、被取代的腺苷衍生物68-831，5。
正如在下列特定實(shí)施例中詳述的那樣，本發(fā)明的化合物具有生物活性。
術(shù)語“生物活性”指本發(fā)明的化合物具有生物活性，例如，對靶受體具有可檢測的作用。作為下文中將詳細(xì)描述的那樣，本發(fā)明的化合物可以誘發(fā)對腺苷受體的生物作用，因此作為腺苷受體激動(dòng)劑。
術(shù)語“激動(dòng)劑”在本文中指生物活性配體，其結(jié)合其互補(bǔ)的生物活性受體并激活后者，引起該受體的生物反應(yīng)或提高該受體的已存在的生物活性。實(shí)際上，激動(dòng)劑模擬天然配體(在本情況中是腺苷)的作用，或在某些情況下，與天然配體引起的作用相比甚至增加或延長生物作用的時(shí)間。
更優(yōu)選，并正如在下列特定實(shí)施例中所示，本發(fā)明的化合物是腺苷受體的部分激動(dòng)劑。
如果本發(fā)明的化合物不論其濃度如何高卻不能使受體產(chǎn)生最大的活化，則本發(fā)明的化合物被看做是“部分激動(dòng)劑”。
本發(fā)明還提供了含有有效量的一種或多種通式(I)化合物或其鹽作為活性組分的藥物組合物 其中-W表示氧原子或硫原子；-R1表示低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；
-R2表示鹵素，低級(jí)鏈烯基，低級(jí)鏈炔基或低級(jí)同位亞烷基肼基；-R3表示低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、(芳)烷基、芳基和?；桨罚凰霏h(huán)烷基、芳基或(芳)烷基可以被一個(gè)或多個(gè)鹵素、羥基或羥基烷基取代。
術(shù)語“有效量”在本文中通過本領(lǐng)域已知的一些因素確定。該量必須有效地達(dá)到所需的治療作用，例如，通過本發(fā)明的化合物結(jié)合腺苷受體，激活或抑制cAMP。該有效量特別依賴于所治療疾病的類型和嚴(yán)重性以及治療方案。有效量一般在適當(dāng)設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn)(劑量范圍研究)中確定，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)知道如何正確地進(jìn)行此類試驗(yàn)以便確定此有效量。眾所周知，有效量依賴于多種因素，包括配體對受體的親合性、其在體內(nèi)的分布曲線、多種藥學(xué)參數(shù)如體內(nèi)半衰期，依賴于副作用(如果有)，依賴于年齡和性別等因素。
術(shù)語“治療”指使用治療量的本發(fā)明的化合物或組合物(其有效減輕與疾病有關(guān)的不良癥狀)，以便在發(fā)病前預(yù)防這些癥狀的出現(xiàn)，以便減緩疾病的惡化，以便減緩癥狀的惡化，以便減緩疾病的慢性期引起的不可逆的損傷，以便減輕疾病的嚴(yán)重程度或者治愈疾病，以便改善存活率或者更快地康復(fù)，以便防止發(fā)病，或者上述兩種或多種情況的結(jié)合。
按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，該疾病優(yōu)選需要通過本發(fā)明化合物結(jié)合腺苷受體來激活或抑制cAMP，達(dá)到治療目的。例如，優(yōu)先結(jié)合和激活A(yù)1受體的本發(fā)明化合物可以作為，例如，睡眠調(diào)節(jié)劑、抗高血壓藥、止痛藥、抗糖尿病化合物、組織保護(hù)劑，結(jié)合并激活A(yù)2A受體的化合物可以作為，例如，抗高血壓藥和精神安定劑，而結(jié)合并激活A(yù)3受體的化合物可以作為，例如，組織保護(hù)劑和抗腫瘤劑。
本發(fā)明的藥物組合物還可以含有藥用添加劑。
此外，術(shù)語“藥用添加劑”在本文中指與所述化合物混合的任何物質(zhì)，包括但不限于，稀釋劑、賦形劑、載體、固體或液體填充劑或包囊物質(zhì)，當(dāng)其作為特定劑型中的組分時(shí)，其一般加入到制劑中使制劑具有某種形狀或均勻性，例如，在丸劑中，作為單方糖漿、芳香粉末以及其它多種酏劑。添加劑還可以是給制劑提供穩(wěn)定性、無菌性和等滲性的物質(zhì)(例如，抗菌防腐劑、抗氧劑、螯合劑和緩沖劑)，以防止微生物作用(可溶，抗微生物和抗真菌劑，如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)或賦予該制劑可食性芳香味等。
優(yōu)選添加劑是惰性、無毒物質(zhì)，其不與本發(fā)明的活性組分反應(yīng)。另外，添加劑可以用來提高活性劑與其受體的結(jié)合。此外，術(shù)語添加劑還可以包括輔劑，作為以可預(yù)計(jì)的方式影響活性組分作用的物質(zhì)。
添加劑可以是任何便于使用的物質(zhì)，且只是受限于理化方面的考慮如溶解度并缺乏與本發(fā)明化合物的反應(yīng)性，以及給藥途經(jīng)。
本發(fā)明的活性劑可以給患者口服。可以使用常規(guī)方法，如以片劑、混懸劑、溶液劑、乳液、膠囊、散劑、糖漿等形式使用化合物(一種或多種)。
為了口服給藥，本發(fā)明的組合物可以含有加速本發(fā)明化合物(一種或多種)口服轉(zhuǎn)運(yùn)的添加劑。適于口服給藥的制劑可以包括(a)液體溶液，如溶解于稀釋劑如水、鹽水或桔汁中的有效量的化合物；(b)膠囊、小藥囊、片劑、錠劑和糖錠劑，其中都含有預(yù)定量的活性組分，該組分為固體或顆粒；(c)散劑；(d)在適當(dāng)液體中的混懸劑；及(e)適當(dāng)?shù)娜橐?。液體制劑可以含有稀釋劑，如水和醇，如乙醇、芐醇和聚乙二醇，可以添加或不添加藥用表面活性劑、助懸劑或乳化劑。膠囊形式可以是普通硬明膠膠囊或軟明膠膠囊，其中含有，例如，表面活性劑、潤滑劑和惰性填充劑如乳糖、蔗糖、磷酸鈣和玉米淀粉。片劑形式可以含有以下一種或多種組分乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、瓜兒膠、硅膠、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酸，以及其它賦形劑、著色劑、稀釋劑、緩沖劑、崩解劑、潤濕劑、防腐劑、較味劑和藥用載體。錠劑形式的活性劑可以含于芳香物質(zhì)中，一般是蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠，而潤喉糖錠劑的活性組分可以含于惰性基質(zhì)中，如明膠和甘油、或蔗糖和阿拉伯膠、乳液、凝膠等。此類添加劑是本領(lǐng)域已知的。
或者，本發(fā)明化合物(一種或多種)可以給患者非腸道給藥。在此情況下，組合物一般配制為單位劑量注射形式(溶液劑、混懸劑、乳液)。適于注射的藥物制劑可以包括滅菌水溶液或分散液以及在滅菌注射溶液或分散液中重構(gòu)的滅菌粉末。載體可以是溶劑或者分散介質(zhì)，例如，其中含有水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、脂類、聚乙二醇等)、其適當(dāng)?shù)幕旌衔?；植物油如綿籽油、芝麻油、橄欖油、豆油、玉米油、葵花籽油或花生油；脂肪酸酯如油酸乙酯和棕櫚酸異丙基酯以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種其它溶劑系統(tǒng)。可以基于活性劑的理化性質(zhì)選自載體。
對于活性組分水溶性差并因此使用油性載體的情況，可以維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性，例如，通過使用乳化劑如磷脂，例如，卵磷脂或多種其它藥用乳化劑。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，可以適當(dāng)選擇表面活性劑和處理?xiàng)l件以控制乳液滴的粒徑。
在活性組分水溶性差的情況中，用于非腸道制劑的適宜皂類包括脂肪酸金屬鹽、銨鹽和三乙醇胺鹽，而適宜的洗滌劑包括油酸、硬脂酸和異硬脂酸。油酸乙酯和棕櫚酸異丙基酯是適宜的脂肪酸酯的實(shí)例。
用于非腸道制劑的適宜的洗滌劑包括脂肪酸金屬鹽、銨鹽和三乙醇胺鹽，且適宜的洗滌劑包括(a)陽離子洗滌劑，例如，二甲基二烷基鹵化銨，以及烷基鹵化吡啶，(b)陰離子洗滌劑，例如，烷基、芳基和烯烴磺酸酯，以及甘油單硫酸酯，及磺基琥珀酸酯，(c)非離子洗滌劑，例如，脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇酰胺、及聚氧乙烯聚丙烯共聚物，(d)兩性離子洗滌劑，例如，烷基-β-氨基丙酸酯、及2-烷基-咪唑啉季銨鹽，及(3)其混合物。
此外，為了減小和消除對注射部位的刺激，組合物可以含有一種或多種親水親油平衡(HLB)系數(shù)約12至約17的非離子表面活性劑。適宜的表面活性劑包括聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯，如脫水山梨醇單油酸酯，以及通過1，2-環(huán)氧丙烷與丙二醇縮合形成的氧化乙烯與疏水基質(zhì)的高分子量加成物。
添加劑的選擇部分由本發(fā)明特定的化合物來決定，還要由本發(fā)明組合物給藥的特定方法決定。
盡管如此，本發(fā)明的組合物可以含有一種或多種本發(fā)明的化合物，并可以含有其它生物活性物質(zhì)，以提供聯(lián)合的治療作用。
上下文中給出的本發(fā)明的化合物和組合物按照優(yōu)良的醫(yī)藥實(shí)踐給藥，考慮個(gè)體患者的臨床病癥，給藥的部位和方法，給藥時(shí)間表，個(gè)體的年齡、性別、體重以及醫(yī)生已知的其它因素。
劑量可以是幾天內(nèi)的單劑量或多劑量。治療的時(shí)間一般與疾病的進(jìn)程成和藥物療效及所治療的個(gè)體物種成比例。適宜的劑量和給藥方案可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的常規(guī)劑量范圍探求技術(shù)來確定。一般來說，治療以較小的劑量開始，該劑量小于該化合物的最佳劑量。此后，逐步升高劑量，直到達(dá)到該條件下的最佳作用。示例性的劑量范圍為約0.001mg/kg所治療患者體重約10mg/kg所治療患者體重/天。
本發(fā)明的一些新化合物是A1腺苷受體的激動(dòng)劑(“A1激動(dòng)劑”)，另一些是A2腺苷受體的激動(dòng)劑(“A2激動(dòng)劑”)，而另一些是A3腺苷受體的激動(dòng)劑(“A3激動(dòng)劑”)。一些化合物還可以對一種以上的此類腺苷受體具有激動(dòng)活性。此外，其中一些顯示完全的激動(dòng)活性，而一些顯示部分激動(dòng)活性。因此，基于它們不同的激動(dòng)活性，本發(fā)明的不同化合物可以具有不同的治療用途。特定化合物的激動(dòng)活性可以根據(jù)其結(jié)合性質(zhì)和其生物作用來確定。例如，已知A3激動(dòng)劑一方面可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，另一方面可以誘發(fā)白細(xì)胞和中性白細(xì)胞的增殖(見WO 01/19360)。因此，為了確定化合物是否具有A3激動(dòng)劑活性，該化合物可以與腫瘤細(xì)胞以及白細(xì)胞體外培養(yǎng)，并檢測細(xì)胞增殖，以便顯示其對所述細(xì)胞的雙重作用。此外，體外顯示出A3激動(dòng)活性的化合物，用適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型(見WO01/19360)給動(dòng)物用藥，以確定其體內(nèi)作用。
同樣，已知A1激動(dòng)劑誘發(fā)白細(xì)胞增殖，但是，與A3激動(dòng)劑不同，其不抑制腫瘤細(xì)胞增殖。因此，類似于上述方法，可以確定化合物的A1激動(dòng)活性。
例如，具有A1或A3激動(dòng)活性的化合物可以用于保護(hù)藥物誘發(fā)的骨髓毒性。具有A3激動(dòng)活性的化合物可以用作抗癌藥。
已知具有A2激動(dòng)活性的化合物具有精神安定劑活性，例如，用于治療精神病，或用于傷口愈合。因此，可以使用檢測此活性的適當(dāng)模型以評(píng)價(jià)被測化合物是否是A2激動(dòng)劑。
此外，還可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種結(jié)合試驗(yàn)以確定化合物對任何一種腺苷受體的親合性。
因此，可以根據(jù)這些試驗(yàn)確定被測化合物的治療用途。
已經(jīng)用舉例說明的方式描述了本發(fā)明，應(yīng)理解所使用的術(shù)語，實(shí)際上是為了說明，而不是限制。顯然，基于上述公開內(nèi)容，本發(fā)明的多種改良和變化形式是可能的。因此，應(yīng)理解在權(quán)利要求的范圍內(nèi)，除了下文中具體的描述外，本發(fā)明也是可以實(shí)施的。
在整個(gè)說明書中，多種出版物以數(shù)字標(biāo)注。出版物的全部出處列于說明書之后權(quán)利要求之前。
特定實(shí)施例實(shí)施例1-合成C2，5′-二取代的腺苷衍生物化學(xué)方法總括化學(xué)品和溶劑鳥苷得自Aldrich (Aldrich Chemie，Sigma-Aldrich Chemie BV，Zwijndrecht，The Netherlands)。所有其它試劑得自標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)來源并是分析純。[3H]DPCPX(1，3-二丙基-8-環(huán)戊基黃嘌呤)、[3H]ZM 241385和[125I]AB-MECA購自NEN(Hoofddorp，The Netherlands)。
色譜法薄層色譜(TLC)用購自Merck的覆蓋有硅膠F254鋁片(20×20cm)進(jìn)行。在UV(254nm)下觀察色譜斑。制備柱色譜在硅膠(230-400目ASTM)上進(jìn)行。
儀器和分析對C、H、N進(jìn)行元素分析(Department of AnalyticalChemistry，Leiden University，The Netherlands)。13C NMR光譜在50.1MHz用JEOL JNM-FX 200光譜儀檢測，該光譜儀配備有PG200計(jì)算機(jī)，以傅立葉變換模式操作。1H NMR光譜用上述光譜儀在200MHz檢測，或在300MHz用Bruker WM-300光譜儀檢測，該光譜儀配備有ASPECT 2000計(jì)算機(jī)，以傅立葉變換模式操作。1H和13C NMR的化學(xué)位移相對于四甲基硅烷(TMS)內(nèi)標(biāo)物以ppm(δ)給出。
所有高分辨質(zhì)譜在Finnigan MAT900質(zhì)譜儀上檢測，該質(zhì)譜儀配備有EI試驗(yàn)(70eV，分辨率1000)用直接插入探針，或者在FinniganMAT TSQ-70色譜儀上檢測，該色譜儀配備有ESI試驗(yàn)用電霧化界面。通過恒量注入溶解于80/20甲醇/水的分析物來收集光譜數(shù)據(jù)。ESI是溫和的離子化技術(shù)，以正離子化模式產(chǎn)生質(zhì)子化的、鈉離子化(sodiated)類別，以負(fù)離子形式產(chǎn)生脫質(zhì)子的類別。
通過反相HPLC(Gilson HPLC系統(tǒng)，712系統(tǒng)控制軟件，GilsonNetherlands，Meyvis en Co BV，Bergen op Zoom，the Netherlands)拆分化合物，其中使用65％MeOH/31.5％H2O/3.5％CH3CN(v/v)流動(dòng)相，Alltima C18 5μ(250mm×4.6mm)或核苷酸/核苷7μ(250mm×4.6mm)柱(Alltech Nederland BV，Breda，the Netherlands)以流速0.7ml/min洗脫。通過檢測UV吸光度(254nm)確定峰。給出了滯留時(shí)間。
熔點(diǎn)在Büchi毛細(xì)熔點(diǎn)儀中檢測。
合成方法合成5′-氯-5′-脫氧鳥苷(化合物16)。將鳥苷(43.5g，0.15mol)溶解于六甲基磷酰胺(HMPA，40ml，0.23mol)中。在1小時(shí)內(nèi)加入亞硫酰氯(61.5ml，0.85mol)。將此混合物室溫下攪拌1小時(shí)，用水稀釋并在Dowex 50 W(H+)上進(jìn)行色譜。用水(350mL)洗滌后，用5％氨水(350ml)洗脫來收集產(chǎn)物。將餾分真空濃縮。得到40g(0.13mol，86％)，1H NMR(DMSO-d6)δ10.53(bs，1H，NH)，7.89(s，1H，H-8)，6.50(bs，2H，NH2)，5.72(d，J＝5.84Hz，1H，H-1′)，5.55(d，J＝6.52Hz，1H，OH-2′)，5.39-5.35(m，1H，OH-3′)，4.57(q，J＝5.15Hz，1H，H-2′)，4.1 6-4.05(m，1H，H-3′)，4.05-3.97(m，1H，H-4′)，3.86(dq，J＝11.67Hz，2H，H-5′)。
合成5′-烷硫基衍生物(化合物17-20)的總方法。將適當(dāng)?shù)牧虼?3.32mmol)溶解于10ml 2M NaOH中。攪拌后，緩慢加入5′-氯-5′-脫氧鳥苷(16；100mg，0.33mmol)。將此混合物回流2-2.5小時(shí)，然后冷卻至室溫。用乙酸酸化，形成白色沉淀。將沉淀過濾并干燥。
5′-脫氧-5′-甲硫基鳥苷(化合物17)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行硫代甲醇鈉(27.42g，0.39mol)和16(11.8g，39.1mmol)。得到10.41g(33.2mmol，85％)，1H NMR(DMSO-d6)δ7.85(s，1H，H-8)，7.23(bs，2H，NH2)，5.68(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，4.53-4.51(m，1H，H-2′)，4.05-3.99(m，1H，H-3′)，3.99-3.95(m，1H，H-4′)，2.78(t，J＝6.52 Hz，2H，H-5′)，1.6 7(s，3H，CH3)。
5′-脫氧-5′-乙基硫基鳥苷(化合物18)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行乙硫醇(20.6ml(0.28mol)和16(8.40g，27.8mmol)。得到6.98g(21.3mmol，77％)，1H NMR(DMSO-d6)δ10.70(bs，1H，NH)，7.90(s，1H，H-8)，6.48(bs，2H，NH2)，5.68(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，5.52-5.48(m，1H，OH-2′)，5.32-5.19(m，1H，OH-3′)，4.55-4.52(m，1H，H-2′)，4.05-4.03(m，1H，H-3′)，4.03-3.91(m，1H，H-4′)，2.80(pt，J＝7.21Hz，2H，H-5′)，2.49(m，2H，CH2)，1.13(t，J＝7.21Hz，3H，CH3)。
5′-脫氧-5′-丙硫基鳥苷(化合物19)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行卜丙硫醇(27.0ml，0.30mol)和16(9.0g，29.8mmol)。得到6.1g(17.9mmol，60％)，1H NMR(DMSO-d6)δ10.69(bs，1H，NH)，7.90(s，1H，H-8)，6.51(bs，2H，NH2)，5.67(d，J＝5.84Hz，1H，H-1′)，4.55(t，J＝3.42Hz，1H，H-2′)，4.03(t，J＝3.43Hz，1H，H-3′)，3.93(pt，J＝3.44Hz，1H，H-4′)，2.78(pt，J＝6.18Hz，2H，H-5′)，2.49(m，2H，SCH2)，1.49(q，J＝7.20Hz，2H，CH2CH3)，0.86(t，J＝7.20Hz，3H，CH3)。
5′-脫氧-5′-異丙硫基鳥苷(化合物20)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2-丙硫醇(30.8ml，0.33mol)和16(10.0g，33.2mmol)。得到6.64g(19.5mmol，59％)，1H NMR(DMSO-d6)δ10.68(bs，1H，NH)，7.90(s，1H，H-8)，6.49(bs，2H，NH2)，5.67(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，4.52(t，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，4.03(t，J＝4.46Hz，1H，H-3′)，3.92(pq，J＝6.86Hz，1H，H-4′)，3.04-2.69(m，2H，H-5′)，3.04-2.69(m，1H，CH)，1.17(d，J＝6.53Hz，6H，CH3)。
將衍生物17-20乙?；@得21-24的總方法。向化合物17(0.46mmol)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP；0.03mmol)在乙腈(5.7ml)和三乙胺(154μl，1.1mmol)混合物中的懸浮液中，室溫下加入醋酸酐(95μl，1mmol)。將此混合物攪拌1小時(shí)直到溶液變清。加入甲醇(10ml)并將溶液攪拌5-10分鐘，真空濃縮并與異丙醇一起攪拌。將所得白色漿液過濾，接著與己烷一起攪拌。將白色沉淀過濾并干燥。
2′，3′-二-O-乙?；?5′-脫氧-5′-甲硫基鳥苷(化合物21)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-5′-甲硫基鳥苷(17，10.4g，33.2mmol)。得到10.5g(26.4mmol，79％)，1H NMR(DMSO-d6)δ7.98(s，1H，H-8)，6.59(bs，2H，NH2)，5.99-5.90(m，1H，H-1′)，5.99-5.90(m，1H，H-2′)，5.43(t，J＝3.78Hz，1H，H-3′)，4.24(pq，J＝3.19Hz，1H，H-4′)，2.96-2.88(m，2H，H-5′)，2.11，2.07(2xs，6H，2 x COCH3)，2.00(s，3H，SCH3)。
2′，3′-二-O-乙酰基-5′-脫氧-5′-乙硫基鳥苷(化合物22)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-5′-乙硫基鳥苷(18，6.98g，21.3mmol)。得到7.94g(19.3mmol，91％)，1H NMR(DMSO-d6)δ7.95(s，1H，H-8)，6.86(bs，2H，NH2)，5.97-5.89(m，1H，H-1′)，5.97-5.89(m，1H，H-2′)，5.30(pq，J＝3.26Hz，1H，H-3′)，4.21(pq，J＝3.12Hz，1H，H-4′)，3.00-2.90(m，2H，H-5′)，2.52(pq，J＝7.45Hz，2H，CH2)，2.10，1.99(2xs，6H，2xCOCH3)，1.13(t，J＝7.42Hz，3H，CH3)。
2′，3′-二-O-乙?；?5′-脫氧-5′-丙硫基鳥苷(化合物23)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-5′-丙硫基鳥苷(19，5.74g，16.8mmol)。得到5.71g(13.4mmol，80％)，1H NMR(DMSO-d6)δ10.71(bs，1H，NH)，7.97(s，1H，H-8)，6.55(bs，2H，NH2)，5.95(m，1H，H-1’)，5.95(m，1H，H-2′)，5.41(m，1H，H-3′)，4.20(m，1H，H-4′)，2.95(d，J＝5.83Hz，2H，H-5′)，2.49(m，2H，SCH2)，2.11，1.99(2xs，6H，2x COCH3)，1.49(q，J＝6.86Hz，2H，CH2CH3)，0.86(t，J＝6.18Hz，3H，CH3)。
2′，3′-二-O-乙酰基-5′-脫氧-5′-異丙硫基鳥苷(化合物24)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-5′-異丙硫基鳥苷(20，6.64g，19.5mmol)。得到6.92g(16.3mmol，83％)，1H NMR(DMSO-d6)δ10.80(bs，1H，NH)，7.98(s，1H，H-8)，6.58(bs，2H，NH2)，5.94-5.90(m，1H，H-1′)，5.94-5.90(m，1H，H-2′)，5.42(t，J＝4.12Hz，1H，H-3′)，4.25-4.12(m，1H，H-4′)，2.99-2.93(m，3H，CH，H-5′)，2.10，2.00(2xs，6H，2xCOCH3)，1.16(d，J＝6.18Hz，6H，2xCH3)。
氯化衍生物21-24獲得25-28的總方法。向適當(dāng)?shù)?′，3′-二-O-乙?；?5′-烷硫基-5′-脫氧鳥苷(19.3mmol，預(yù)先干燥)和四乙基氯化銨(6.48g，39.1mmol；預(yù)先在80℃下真空干燥)的乙腈(40ml)懸浮液中，室溫下加入N，N-二甲基苯胺(2.52ml，20.0mmol，干燥并用KOH蒸餾)和磷酰氯(POCl3，10.95ml，0.12mol，新蒸餾)。將燒瓶置于在100℃預(yù)熱的油浴中并將此溶液回流10-15分鐘。立即真空下蒸發(fā)揮發(fā)性物質(zhì)。將所得黃色泡沫溶解于CH2Cl2(100ml)中并用碎冰劇烈攪拌15分鐘。分層，并再次用二氯甲烷(75ml)萃取水相。通過加入碎冰保持合并的有機(jī)層冷卻，并用冷水(3×75mL)、5％NaHCO3/H2O洗滌至pH7，用硫酸鎂干燥并過濾。殘余物通過柱色譜純化。
2-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-脫氧-5-甲硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物25)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2′，3′-二-O-乙?；?5′-脫氧-5′-甲硫基鳥苷(21，5.96g，15.0mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液EtOAc∶PE40/60＝1∶1至2∶1)。得到3.83g(9.21mmol，62％)，Rf0.28(EtOAc∶PE40/60＝2∶1)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.40(s，1H，H-8)，7.08(bs，2H，NH2)，6.10-5.99(m，2H，H-1′，H-2′)，5.49-5.45(m，1H，H-3′)，4.31-4.24(m，1H，H-4′)，2.96(pd，J＝6.86Hz，2H，H-5′)，2.12，2.06(2xs，6H，COCH3)，1.97(s，3H，SCH3)。
2-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-脫氧-5-乙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物26)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2′，3′-二-O-乙?；?5′-脫氧-5′-乙硫基鳥苷(22，7.94g，19.3mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液EtOAc∶PE40/60＝3∶2)。得到4.23g(9.84mmol，51％)，Rf0.51(EtOAc∶PE40/60＝2∶1)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.41(s，1H，H-8)，7.09(bs，2H，NH2)，6.07(d，J＝6.75Hz，1H，H-1′)，6.01(q，J＝6.72Hz，1H，H-2′)，5.46(dd，J＝5.47Hz，J＝3.21Hz，1H，H-3′)，4.26(dt，J＝6.65Hz，J＝3.20Hz，1H，H-4′)，2.98(pd，J＝7.35Hz，2H，H-5′)，2.52(q，J＝7.58Hz，2H，CH2)，2.12，1.99(2xs，6H，2xCOCH3)，1.12(t，J＝4.79Hz，3H，CH3)。
2-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-脫氧-5-丙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物27)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2′，3′-二-O-乙?；?5′-脫氧-5′-丙硫基鳥苷(23，5.71g，13.4mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液EtOAc∶PE40/60＝1∶1)。得到4.41g(9.91mmol，74％)，Rf0.44(EtOAc∶PE 40/60＝2∶1)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.40(s，1H，H-8)，7.08(bs，2H，NH2)，6.10-5.99(m，2H，H-1′，H-2′)，5.46(pt，J＝3.09Hz，1H，H-3′)，4.25(pq，J＝3.09Hz，1H，H-4′)，2.97(d，J＝6.52Hz，2H，H-5′)，2.49(m，2H，SCH2)，2.12，1.99(2xs，6H，2xCOCH3)，1.47(pq，J＝7.55Hz，CH2CH3)，0.84(t，J＝7.21Hz，3H，CH3)。
2-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-脫氧-5-異丙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物28)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2′，3′-二-O-乙酰基-5′-脫氧-5′-異丙硫基鳥苷(24，6.72g，15.8mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液EtOAc∶PE40/60＝1∶1)。得到5.20g(11.7mmol，74％)，Rf0.39(EtOAc∶PE40/60＝2∶1)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.40(s，1H，H-8)，7.07(bs，2H，NH2)，6.09-5.96(m，2H，H-1′，H-2′)，5.48-5.44(m，1H，H-3′)，4.25-4.23(m，1H，H-4′)，3.01-2.92(m，2H，H-5′)，3.01-2.92(m，1H，CH)，2.12，1.99(2xs，6H，2xCOCH3)，1.15(d，J＝6.53Hz，6H，2xCH3)。
將衍生物25-28重氮化獲得29-32的總方法。將異戊基腈(23.2mmol，3.10ml)加入到適當(dāng)?shù)?-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-烷硫基-5-脫氧-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(7.49mmol)、I2(7.49mmol，1.90g)，CH2I2(77.5mmol，6.24ml)和CuI(7.87mmol，1.50g)在40mL四氫呋喃中的混合物中。將暗棕色溶液回流(在強(qiáng)力攪拌下)40-60分鐘，然后冷卻至室溫。將此混合物過濾并真空濃縮濾液。將殘余物溶解于CH2Cl2，并用飽和Na2S2O3溶液萃取，直到顏色消失。將有機(jī)層干燥并濃縮。棕色油狀物通過柱色譜純化。
6-氯-2-碘-9-(2，3-二-O-乙?；?5-脫氧-5-甲硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物29)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-脫氧-5-甲硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(25，3.83g，9.21mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液二氯甲烷-5％MeOH在二氯甲烷中)。得到3.99g(7.58mmol，82％)，Rf0.62(5％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.84(s，1H，H-8)，6.27(d，J＝5.49Hz，1H，H-1′)，5.96(t，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，5.58(t，J＝5.49Hz，1H，H-3′)，4.37-4.32(m，1H，H-4′)，2.98(d，J＝6.86Hz，2H，H-5′)，2.12，2.07(2xs，6H，2xCOCH3)，2.02(s，3H，SCH3)。
6-氯-2-碘-9-(2，3-二-O-乙?；?5-脫氧-5-乙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物30)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-脫氧-5-乙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(26，3.22g，7.49mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液二氯甲烷)。得到2.88g(5.33mmol，71％)，Rf0.71(5％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.48(s，1H，H-8)，5.91(d，J＝5.49Hz，1H，H-1′)，5.61(t，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，5.22(t，J＝4.80Hz，1H，H-3′)，3.97(q，J＝3.77Hz，1H，H-4′)，2.65(d，J＝6.87Hz，2H，H-5′)，2.49(q，J＝7.21Hz，2H，CH2)，1.76，1.66(2xs，6H，2xCOCH3)，0.77(t，J＝7.20Hz，3H，CH3)。
6-氯-2-碘-9-(2，3-二-O-乙?；?5-脫氧-5-丙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物31)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-脫氧-5-丙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(27，4.41g，9.91mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液EtOAc∶PE40/60＝1∶1)得到4.02g(7.23mmol，73％)，Rf0.50(EtOAc∶PE40/60＝2∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.83(s，1H，H-8)，6.27(d，J＝5.49Hz，1H，H-1′)，5.97(t，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，5.58(t，J＝5.15Hz，1H，H-3′)，4.32(q，J＝3.77Hz，1H，H-4′)，2.99(d，J＝6.53Hz，2H，H-5′)，2.12，2.02(2xs，6H，2xCOCH3)，1.54-1.43(m，4H，CH2CH2)，0.84(t，J＝7.21Hz，3H，CH3)。
6-氯-2-碘-9-(2，3-二-O-乙?；?5-脫氧-5-異丙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物32)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2-氨基-6-氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-脫氧-5-異丙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(28，5.20g，11.7mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液EtOAc∶PE 40/60＝1∶1)。)。得到4.88g(8.76mmol，75％)，Rf0.47(EtOAc∶PE40/60＝2∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.82(s，1H，H-8)，6.26(d，J＝5.49Hz，1H，H-1′)，5.96(t，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，5.59(t，J＝5.20Hz，1H，H-3′)，4.31(pt，J＝5.15Hz，1H，H-4′)，3.02-2.95(m，2H，H-5′)，3.02-2.95(m，1H，CH)，2.11，2.02(2xs，6H，2xCOCH3)，1.16(d，J＝4.80Hz，6H，2xCH3)。
將衍生物29-32進(jìn)行N6-胺化和脫保護(hù)獲得33-36的總方法。適當(dāng)?shù)?-氯-2-碘-9-(2，3-二-O-乙?；?5-烷硫基-5-脫氧-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(5.33mmol)與50mL EtOH/NH3攪拌64小時(shí)。將混合物濃縮并通過柱色譜純化。
5′-脫氧-2-碘-5′-甲硫基腺苷(化合物33)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-2-碘-9-(2，3-二-O-乙?；?5-脫氧-5-甲硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(29，3.99g，7.58mmol)。該混合物通過柱色譜純化(10％MeOH在二氯甲烷中)。得到2.21g(5.22mmol，69％)，mp 90-93℃；Rf0.24(10％ MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用乙酸乙酯重結(jié)晶；1HNMR(DMSO-d6)δ8.29(s，1H，H-8)，7.71(bs，2H，NH2)，5.79(d，J＝5.84Hz，1H，H-1′)，5.52(d，J＝6.52Hz，1H，OH-2′)，5.35(d，J＝5.80Hz，1H，OH-3′)，4.69(m，1H，H-2′)，4.11-4.02(m，1H，H-3′)，4.11-4.02(m，1H，H-4′)，2.85-2.80(m，2H，H-5′)，2.06(s，3H，SCH3)；MS m/z 424(M+H)+；元素分析(C11H14IN5O3S·0.35EtOAc)C，H，N。
5′-脫氧-2-5′-乙硫基碘腺苷(化合物34)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-2-碘-9-(2，3-二-O-乙?；?5-脫氧-5-乙硫基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(30，2.88g，5.33mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液EtOAc)。得到2.05g(4.69mmol，88％)，mp 76-79℃；Rf0.15(5％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.29(s，1H，H-8)，7.27(bs，2H，NH2)，5.79(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，5.50(d，J＝6.18Hz，1H，OH-2′)，5.34(d，J＝4.80Hz，1H，OH-3′)，4.69(q，J＝5.15Hz，1H，H-2′)，4.11-4.07(m，1H，H-3′)，4.07-3.96(m，1H，H-4′)，2.86(pt，J＝5.84Hz，2H，H-5′)，2.53(q，J＝7.21Hz，2H，CH2)，1.98，1.74(2xs，6H，2xCOCH3)，1.14(t，J＝7.21Hz，3H，CH3)，MS m/z 438(M+H)+；元素分析(C12H16IN5O3S)C，H，N。
5′-脫氧-2-碘-5′-丙硫基腺苷(化合物35)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-2-碘-9-(2，3-二-O-乙?；?5-脫氧-5-丙硫基-δ-D-呋喃核糖基)-嘌呤(31，4.02g，7.23mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在二氯甲烷中)。得到2.35g(5.21mmol，72％)，mp98-101℃；Rf0.30(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.30(s，1H，H-8)，7.73(bs，2H，NH2)，5.71(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，5.52(d，J＝6.18Hz，1H，OH-2′)，5.35(d，J＝5.15Hz，1H，OH-3′)，4.72(q，J＝5.15Hz，1H，H-2′)，4.15-4.08(m，1H，H-3′)，4.08-3.96(m，1H，H-4′)，2.86(pt，J＝5.84Hz，2H，H-5′)，2.49-2.46(m，2H，SCH2)，1.51(q，J＝7.21Hz，2H，CH2CH3)，0.87(t，J＝7.21Hz，3H，CH3)；MS m/z 452(M+H)+；元素分析(C13H18IN5O3S)C，H，N。
5′-脫氧-2-碘-5′-異丙硫基腺苷(化合物36)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-2-碘-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-脫氧-5-異丙硫基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(32，4.88g，8.76mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在二氯甲烷中)。得到2.77g(6.13mmol，70％)，mp 102-104℃；Rf0.33(10％ MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用乙酸乙酯重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.29(s，1H，H-8)，7.71(bs，2H，NH2)，5.79(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，5.50(d，J＝5.83Hz，1H，OH-2′)，5.34(d，J＝4.80Hz，1H，OH-3′)，4.69(q，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，4.10(pq，J＝3.43Hz，1H，H-3′)，3.97(pq，J＝3.44Hz，1H，H-4′)，2.97-2.82(m，2H，H-5′)，2.97-2.87(m，1H，CH)，1.17(d，J＝6.52Hz，6H，2xCH3)；MS m/z 452(M+H)+；元素分析(C13H18IN5O3S·0.11EtOAc)C，H，N。
在衍生物1和33-36引入1-己炔基團(tuán)獲得4和37-40的總方法。向適當(dāng)?shù)?′-烷硫基-5′-脫氧-2-碘腺苷(0.92mmol)在7ml干燥的乙腈和7ml三乙胺中在氮?dú)夥障录尤隒uI(0.07mmol，13.3mg)、PdCl2(0.05mmol，8.47mg)和PH3P(0.11mmol)。向此懸浮液中加入1-己炔(4.45mmol，511μL)，并將此混合物在氮?dú)夥障聰嚢柽^夜。將淡棕色溶液過濾并濃縮。將此殘余物用水和EtOAc(3×50ml)萃取，將有機(jī)層干燥，濃縮并通過柱色譜純化。
2-碘代腺苷(1)。按照文獻(xiàn)制備18。收率80％；mp 185-187℃；Rf0.21(10％MeOH在二氯甲烷中)。
2-(1-己炔基)腺苷(4)8。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2-碘代腺苷(1，440mg，1.12mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液CH2Cl2至10％MeOH在二氯甲烷中)。得到330mg(0.95mmol，85％)，mp 106-109℃；Rf0.10(10％ MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用二氯甲烷重結(jié)晶；1HNMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H，H-8)，7.41(bs，2H，NH2)，5.84(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，5.45(d，J＝6.18Hz，1H，OH-2′)，5.22-5.16(m，1H，OH-5′)，5.22-5.16(m，1H，OH-3′)，4.52(q，J＝5.15Hz，1H，H-2′)，4.11(q，J＝3.43Hz，1H，H-3′)，3.93(pd，J＝3.43Hz，1H，H-4′)，3.65-3.48(m，2H，H-5′)，2.39(t，J＝6.86Hz，2H，≡CCH2)，1.51-1.39(m，4H，CH2CH2)，0.90(t，J＝6.87Hz，3H，CH3)；MS m/z 348(M+H)+；元素分析(C16H21N5O4·0.22CH2Cl2)C，H，N。
5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-甲硫基腺苷(化合物37)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-2-碘-5′-甲硫基腺苷(33，480mg，1.13mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液二氯甲烷至10％MeOH在二氯甲烷中)。得到257mg(0.68mmol，60％)；mp 64-67℃；Rf0.28(10％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用甲醇重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H，H-8)，7.39(s，2H，NH2)，5.85(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，5.49(d，J＝6.18Hz，1H，OH-2′)，5.32(d，J＝4.81Hz，1H，OH-3′)，4.67(q，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，4.12-3.95(m，1H，H-3′)，4.12-3.95(m，1H，H-4′)，2.84(t，J＝5.49Hz，2H，H-5′)，2.40(t，J＝6.68Hz，2H，≡CCH2)，2.05(s，3H，SCH3)，1.55-1.32(m，4H，≡CCH2CH2CH2)，0.90(t，J＝6.18Hz，3H，CH3)；MS m/z 378(M+H)+；元素分析(C17H23N5O3S0.56CH3OH)C，H，N。
5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-乙硫基腺苷(化合物38)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-5′-乙硫基-2-碘腺苷(34，400mg，0.92mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液二氯甲烷至10％MeOH在二氯甲烷中)。得到161mg(0.41mmol，45％)；mp 72-75℃；Rf0.38(10％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用二氯甲烷重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.38(s，1H，H-8)，7.39(s，2H，NH2)，5.85(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，5.49(d，J＝6.52Hz，1H，OH-2′)，5.32(d，J＝4.81Hz，1H，OH-3′)，4.71-4.69(m，1H，H-2′)，4.11-4.00(m，1H，H-3′)，4.11-4.00(m，1H，H-4′)，2.85(pd，J＝7.55Hz，2H，H-5′)，2.49-2.40(m，2H，SCH2)，2.49-2.40(m，2H，≡CCH2)，1.52-1.43(m，4H，≡CCH2CH2CH2)，1.14(t，J＝7.20Hz，3H，SCH2CH3)，0.90(t，J＝7.21Hz，3H，CH3)，MS m/z 392(M+H)+；元素分析(C18H25N5O3S·0.14二氯甲烷)C，H，N。
5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-丙硫基-腺苷(化合物39)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-2-碘-5′-丙硫基腺苷(35，500mg，1.11mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液二氯甲烷至10％MeOH在二氯甲烷中)。得到320mg(0.79mmol，71％)，mp 68-71℃；Rf0.30(5％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用二氯甲烷重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.38(s，1H，H-8)，7.39(s，2H，NH2)，5.86(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，5.50(d，J＝5.83 Hz，1H，OH-2′)，5.31(d，J＝4.81Hz，1H，OH-3′)，4.73(q，J＝5.15Hz，1H，H-2′)，4.10(pq，J＝4.81Hz，1H，H-3′)，4.01-3.99(m，1H，H-4′)，2.86(pt，J＝5.26Hz，2H，H-5′)，2.49-2.41(m，2H，≡CCH2)，2.49-2.41(m，2H，SCH2)，1.61-1.44(m，4H，≡CCH2CH2CH2)，1.61-1.44(m，2H，SCH2CH2)，0.94-0.83(m，6H，2xCH3)；MSm/z 406(M+H)+；元素分析(C19H27N5O3S 0.12二氯甲烷)C，H，N。
5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-異丙硫基腺苷(化合物40)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-2-碘-5′-異丙硫基腺苷(36，500mg，1.11mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液二氯甲烷至10％MeOH在二氯甲烷中)。得到306mg(0.75mmol，68％)，mp 77-81℃；Rf0.28(5％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用二氯甲烷重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.39(s，1H，H-8)，7.40(bs，2H，NH2)，5.86(d，J＝5.84Hz，1H，H-1′)，5.50(d，J＝6.17Hz，1H，OH-2′)，5.32(d，J＝4.81Hz，1H，OH-3′)，4.74(q，J＝5.83Hz，1H，H-2′)，4.12(pq，J＝3.77Hz，1H，H-3′)，4.09-3.98(m，1H，H-4′)，2.95-2.88(m，2H，H-5′)，2.95-2.88(m，1H，CH)，2.40(t，J＝6.52Hz，2H，≡CCH2)，1.53-1.45(m，4H，CH2CH2)，1.18(d，J＝6.86Hz，6H，(CH3)2)，0.91(t，J＝7.21Hz，3H，CH3)；MSm/z 406(M+H)+；元素分析(C19H27N5O3S·0.17二氯甲烷)C，H，N。
在衍生物1和33-36引入2-肼基獲得2和41-44的總方法。向耐壓試管中充入適當(dāng)?shù)?′-烷硫基-5′-脫氧-2-碘腺苷(1.37mmol)和10ml異丙醇。為了獲得腈一水合物(14.0mmol，678μl)懸浮液，加入1ml異丙醇。將此混合物加熱至80℃，并在30分鐘后獲得清澈溶液。在80℃下將此溶液加熱過夜。出現(xiàn)白色沉淀，并在劇烈攪拌下將此混合物冷卻至室溫。將白色粉末過濾并干燥。
2-肼基腺苷(2)7。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2-碘代腺苷(1，500mg，1.27mmol)。得到310mg(1.04mmol，82％)，1H NMR(DMSO-d6)δ7.95(s，1H，H-8)，7.29(bs，1H，NH)，6.87(bs，2H，NH2)，5.78(d，J＝6.18Hz，1H，H-1′)，5.43-5.29(m，1H，OH-2′)，5.29-5.05(m，1H，OH-5′)，5.29-5.05(m，1H，OH-3′)，4.59-4.56(m，1H，H-2′)，4.14-4.11(m，1H，H-3′)，3.91-3.89(m，1H，H-4′)，3.63-3.54(m，2H，H-5′)。
5′-脫氧-2-肼基-5′-甲硫基腺苷(化合物41)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-2-碘-5′-甲硫基腺苷(33，540mg，1.28mmol)。得到240mg(0.73mmol，57％)，1H NMR(DMSO-d6)δ7.94(s，1H，H-8)，7.30(bs，1H，NH)，6.82(bs，2H，NH2)，5.77(d，J＝5.83Hz，1H，H-1′)，4.70(t，J＝5.83Hz，1H，H-2′)，4.13(t，J＝3.78Hz，1H，H-3′)，4.01-3.92(m，1H，H-4′)，2.81(t，J＝7.20Hz，2H，H-5′)，2.04(s，3H，SCH3)。
5′-脫氧-5′-乙硫基-2-肼基腺苷(化合物42)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-5′-乙硫基-2-碘腺苷(34，600mg，1.37mmol)。得到358mg(1.05mmol，76％)，1H NMR(DMSO-d6)δ7.94(s，1H，H-8)，7.31(bs，1H，NH)，6.83(bs，2H，NH2)，5.77(d，J＝5.83Hz，1H，H-1′)，4.69(t，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，4.13(t，J＝4.11Hz，1H，H-3′)，3.95-3.93(m，1H，H-4′)，2.84(t，J＝6.52Hz，2H，H-5′)，2.49-2.47(m，2H，SCH2)，1.13(t，J＝7.56Hz，3H，CH3)。
5′-脫氧-2-肼基-5′-丙硫基腺苷(化合物43)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-2-碘-5′-丙硫基腺苷(35，700mg，1.55mmol)。得到468mg(1.32mmol，85％)，1H NMR(DMSO-d6)δ7.95(s，1H，H-8)，7.31(bs，1H，NH)，6.84(bs，2H，NH2)，5.77(d，J＝5.15Hz，1H，H-1′)，4.71(t，J＝5.84Hz，1H，H-2′)，4.20-4.10(m，1H，H-3′)，4.07-3.91(m，1H，H-4′)，2.83(pt，J＝6.18Hz，2H，H-5′)，2.49-2.44(m，2H，SCH2)，1.50(pq，J＝7.20Hz，2H，CH2CH3)，0.88(t，J＝7.55Hz，3H，CH3)。
5′-脫氧-2-肼基-5′-異丙硫基腺苷(化合物44)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-2-碘-5′-異丙硫基腺苷(36，700mg，1.55mmol)。得到452mg(1.27mmol，82％)，1H NMR(DMSO-d6)δ7.97(s，1H，H-8)，7.37(bs，1H，NH)，6.86(bs，2H，NH2)，5.78(d，J＝5.49Hz，1H，H-1′)，4.70(t，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，4.16(t，J＝4.46Hz，1H，H-3′)，3.95(q，J＝3.78Hz，1H，H-4′)，3.06-2.77(m，2H，H-5′)，3.06-2.77(m，1H，CH)，1.17(d，J＝6.86Hz，6H，2xCH3)。
將衍生物2和41-44中的2-肼基轉(zhuǎn)變?yōu)檠苌?和45-48中的2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)基團(tuán)的總方法。向耐壓試管中加入適當(dāng)?shù)?′-烷硫基-5′脫氧-2-肼基腺苷(1.05mmol)和8ml甲醇。加入1.2摩爾當(dāng)量(1.40mmol，146μl)異戊醛并將此化合物回流18小時(shí)。將此混合物真空濃縮并通過柱色譜純化。
2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)腺苷(化合物3)7。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2-肼基腺苷(2，310mg，1.04mmol)。得到274mg(0.75mmol，72％)，mp 176-179℃；Rf0.20(10％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用甲醇重結(jié)晶；1H NMR(MeOD)δ8.02(s，1H，H-8)，7.34(t，J＝6.18Hz，1H，N＝CH)，5.93(d，J＝5.84Hz，1H，H-1′)，4.67(t，J＝5.49Hz，1H，H-2′)，4.34-4.30(m，1H，H-3′)，4.14(q，J＝3.09Hz，1H，H-4′)，3.81(dq，J＝16.82Hz，J＝3.09Hz，2H，H-5′)，2.26-2.17(m，2H，CH2)，1.89-1.83(m，1H，CH(CH3)2)，0.99(d，J＝6.87Hz，6H，(CH3)2)；MS m/z 366(M+H)+；元素分析(C15H23N7O4·0.54CH3OH)C，H，N。
5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-甲硫基腺苷(化合物45)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-2-肼基-5′-甲硫基腺苷(41，240mg，0.73mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在二氯甲烷中)。得到210mg(0.53mmol，73％)，mp 122-125℃；Rf0.25(10％ MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用二氯甲烷重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ10.02(bs，1H，NH)，7.98(s，1H，H-8)，7.33(t，J＝5.49Hz，1H，N＝CH)，6.91(bs，2H，NH2)，5.77(d，J＝6.17Hz，1H，H-1′)，5.49-5.41(m，1H，OH-2′)，5.24-5.22(m，1H，OH-3′)，4.75-4.71(m，1H，H-2′)，4.10-4.05(m，1H，H-3′)，4.05-3.95(m，1H，H-4′)，2.91-2.83(m，2H，H-5′)，2.91-2.83(m，1H，CH(CH3)2)，2.12-2.08(m，2H，CH2)，2.04(s，3H，SCH3)，0.91(t，J＝6.87Hz，6H，CH3)，MS m/z 396(M+H)+；元素分析(C16H25N7O3S0.33二氯甲烷)C，H，N。
5′-脫氧-5 ′-乙硫基-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)腺苷(化合物46)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-5′-乙硫基-2肼基腺苷(42，358mg，1.05mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在二氯甲烷中)。得到193mg(0.47mmol，45％)，mp 106-109℃；1H NMR(DMSO-d6)δ10.32(bs，1H，NH)，8.02(s，1H，H-8)，7.25-7.09(m，1H，N＝CH)，6.91(bs，2H，NH2)，5.79(d，J＝6.16Hz，1H，H-1′)，5.50-5.36(m，1H，OH-2′)，5.28-5.16(m，1H，OH-3′)，4.79-4.68(m，1H，H-2′)，4.19-4.11(m，1H，H-3′)，4.06-3.95(m，1H，H-4′)，2.98-2.80(m，3H，H-5′，CH(CH3)2)，2.49-2.47(m，2H，SCH2)，2.11(t，J＝6.41Hz，2H，CHCH2)，1.15(t，J＝9.30Hz，3H，SCH2CH3)，0.94-0.83(m，6H，2xCH3)；MS m/z 410(M+H)+；HPLC AlltimaC18 5μ柱(150mm×4.6mm)反相，流速1mL/min。系統(tǒng)A20-100％MeOH在水中，40分鐘；滯留時(shí)間25.31min。系統(tǒng)B20-100％CH3CN在水中，35分鐘；滯留時(shí)間5.59min。
5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′丙硫基腺苷(化合物47)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-2肼基-5′-丙硫基腺苷(43，468mg，1.32mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在二氯甲烷中)。得到364mg(0.86mmol，65％)，mp 150-152℃；1H NMR(DMSO-d6)δ10.02(bs，1H，NH)，7.98(s，1H，H-8)，7.34(t，J＝5.80Hz，1H，N＝CH)，6.91(bs，2H，NH2)，5.76(d，J＝6.16Hz，1H，H-1′)，5.43(pd，J＝4.55Hz，1H，OH-2′)，5.21-5.19(m，1H，OH-3′)，4.75(q，J＝5.28Hz，1H，H-2′)，4.11(pq，J＝3.25Hz，1H，H-3′)，3.96(pq，J＝2.76Hz，1H，H-4′)，2.96-2.80(m，2H，H-5′)，2.96-2.80(m，1H，CH(CH3)2)，2.49-2.47(m，2H，SCH2)，2.09(t，J＝6.52Hz，2H，CHCH2)，1.48(pq，J＝7.29Hz，2H，SCH2CH2)，0.94-0.83(m，9H，3xCH3)，MS m/z 424(M+H)+；元素分析(C18H29N7O3S·0.72H2O)C，H，N。
5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-異丙腺苷(化合物48)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5′-脫氧-2-肼基-5′-異丙硫基腺苷(44，452mg，1.27mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在二氯甲烷中)。得到350mg(0.83mmol，65％)，mp 156-158℃；1HNMR(DMSO-d6)δ10.03(bs，1H，NH)，7.99(s，1H，H-8)，7.33(t，J＝5.86Hz，1H，N＝CH)，6.93(bs，2H，NH2)，5.76(d，J＝6.07Hz，1H，H-1′)，5.45(d，J＝6.07Hz，1H，OH-2′)，5.22(d，J＝4.80Hz，1H，OH-3′)，4.71(q，J＝5.37Hz，1H，H-2′)，4.12(pq，J＝3.38Hz，1H，H-3′)，3.98-3.92(m，1H，H-4′)，2.94(pt，J＝6.38Hz，1H，SCH)，2.86(pq，J＝6.83Hz，2H，H-5′)，2.08(t，J＝6.62Hz，2H，CHCH2)，1.86-1.76(m，1H，CH(CH3)2)，1.15(d，J＝6.70Hz，6H，SCH(CH3)2))，0.90(d，J＝6.54Hz，6H，2x CH3)；MS m/z 424(M+H)+；HPLC Alltima C185μ柱(150mm×4.6mm)反相，流速1ml/min。系統(tǒng)A20-100％MeOH在水中，40分鐘；滯留時(shí)間27.40min。系統(tǒng)B20-100％CH3CN在水中，35分鐘；滯留時(shí)間11.34min。
下表1提供了化合物1、3、4、33-40、45和47的元素分析數(shù)據(jù)。
表1-元素分析No 分子式 原子 理論值 實(shí)測值1 C10H12IN5O4.0.33EtOAc C 32.18％ C 32.48％H 3.49％ H 3.10％N 16.60％ N 16.72％3 C15H23N7O4·0.54CH3OH C 48.77％ C 49.16％H 6.63％ H 6.49％N 25.62％ N 25.41％4 C16H21N5O4·0.22CH2Cl2C 53.25％ C 53.31％H 5.91％ H 5.82％N 19.15％ N 19.05％33 C11H14IN5O3S·0.35EtOAc C 32.82％ C 32.93％H 3.73％ H 3.56％N 15.41％ N 15.51％34 C12H16IN5O3SC 32.96％ C 33.14％H 3.69％ H 3.60％N 16.02％ N 16.01％35 C13H18IN5O3SC 34.60％ C 34.86％H 4.02％ H 4.11％N 15.52％ N 15.20％36 C13H18IN5O3S·0.11EtOAc C 35.00％ C 35.05％H 4.12％ H 4.20％N 15.20％ N 15.29％37 C17H23N5O3S·0.56CH3OH C 53.34％ C 53.28％H 6.43％ H 6.10％N 17.71％ N 17.64％38 C18H25N5O3S·0.14CH2Cl2C 54.04％ C 54.11％H 6.32％ H 5.95％N 17.38％ N 17.30％39 C19H27N5O3S·0.12CH2Cl2C 55.20％ C 55.35％H 6.60％ H 6.22％N 16.83％ N 16.55％40 C19H27N5O3S·0.17CH2Cl2C 54.83％ C 54.86％H 6.56％ H 6.22％N 16.68％ N 16.68％45 C16H25N7O3S·0.33CH2Cl2C 46.31％ C 46.08％H 6.11％ H 6.26％N 23.15％ N 23.44％47 C18H29N7O3S·0.72H2O C 49.53％ C 49.48％H 7.03％ H 6.71％N 22.46％ N 22.50％
總生物學(xué)方法放射性配體結(jié)合研究按照以前公開的方法在GTP不存在條件下用[3H]DPCPX進(jìn)行檢測33。按照Gao等的方法確定腺苷A2A受體親合性34?；旧先缜八龅姆椒ù_定腺苷A3受體親合性4，35。簡言之，在50/10/1緩沖液(50mMTris/10mM MgCl2/1mM乙二胺四乙酸(EDTA)和0.01％3-([3-膽堿基丙基]-二甲基銨)-1-丙基磺酸鹽(CHAPS))中在玻璃試管中進(jìn)行試驗(yàn)，該試管中有50μL的HEK 293細(xì)胞膜混懸液(10-30μg)、25μl[125I]AB MECA(最終濃度0.15nM)和25μL的配體。孵育在37℃下進(jìn)行1小時(shí)，并通過用Whatman GF/B過濾器快速過濾終止，使用Brandell細(xì)胞收集器(Brandell，Gaithersburg，MD)。用3ml緩沖液將試管洗滌3次。用Beckman 5500B γ-計(jì)數(shù)器確定放射性。在10-5M R-PIA存在下確定非特異性結(jié)合。
cAMP試驗(yàn)A2A在24孔組織培養(yǎng)板中以單層形式讓表達(dá)了人腺苷A2A受體的CHO細(xì)胞生長過夜(400μL/孔；2×105細(xì)胞/孔)。在Dulbecco′s改良Eagles培養(yǎng)基(DMEM)/N-2-羥基乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)緩沖液(0.60g HEPES/50mL DMEM pH 7.4)中進(jìn)行cAMP的生成。將每個(gè)孔用DMEM/HEPES緩沖液(250μL)洗滌3次，向每個(gè)孔中加入100μlDMEM/HEPES緩沖液、100μL腺苷脫氨基酶(最終濃度5IU/ml)和100μl洛利普蘭和西洛酰胺的混合物(最終濃度各50μM)。在37℃下孵育40分鐘后，加入100μl激動(dòng)劑。此處，使用完全激動(dòng)劑CGS 21680或化合物1、3、4、33-40或45-48。在37℃下15分鐘后，通過除去培養(yǎng)基并加入200μl 0.1M HCl停止反應(yīng)。細(xì)胞在-20℃下保存直到試驗(yàn)。
cAMP試驗(yàn)A3在24孔組織培養(yǎng)板中以單層形式讓表達(dá)了人腺苷A3受體的CHO細(xì)胞生長過夜(400μL/孔；2×105細(xì)胞/孔)。在Dulbecco′s改良Eagles培養(yǎng)基(DMEM)/N-2-羥基乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)緩沖液(0.60g HEPES/50mL DMEM pH 7.4)中進(jìn)行cAMP的生成。將每個(gè)孔用DMEM/HEPES緩沖液(250μL)洗滌3次，向每個(gè)孔中加入100μL腺苷脫氨基酶(最終濃度5IU/ml)和100μl洛利普蘭和西洛酰胺的混合物(最終濃度各50μM)和100μl激動(dòng)劑(最終濃度約100×Ki值)。在37℃下孵育40分鐘后，加入100μl毛喉素(最終濃度10μM)。在37℃下15分鐘后，通過除去培養(yǎng)基并加入200μl 0.1M HCl停止反應(yīng)。細(xì)胞在-20℃下保存直到試驗(yàn)。按照cAMP結(jié)合蛋白方案36檢測cAMP的量，其中作了如下的小改進(jìn)。緩沖液使用150mM K2HPO4/10mM EDTA/0.2％牛血清白蛋白(BSA)，pH 7.5。樣品(20μl+30μl 0.1M HCl)在通過Whatman GF/B過濾器過濾前至少在0℃下孵育2.5小時(shí)。再用2×2ml Tris HCl緩沖液(pH 7.4，4℃)清洗。在Packard EmulsifierSafe閃爍流體(3.5ml)提取24小時(shí)后對過濾器放射性進(jìn)行計(jì)數(shù)。
數(shù)據(jù)分析用軟件包Prism(Graph Pad，San Diego，CA)通過競爭曲線的非線性回歸法由置換曲線計(jì)算表觀Ki和EC50。
生物學(xué)評(píng)價(jià)在放射性配體結(jié)合試驗(yàn)中檢測所有化合物以確定它們對大鼠腦皮層中腺苷A1受體、大鼠紋狀體中A2A受體和在HEK293細(xì)胞中表達(dá)的人A3受體的親合性(表2)。對于腺苷A1受體，使用氚代拮抗劑[3H]-1，3-二丙基-8環(huán)戊基黃嘌呤([3H]DPCPX)，而對于腺苷A2A受體，使用氚代拮抗劑[3H]ZM 241385。還使用腺苷A3受體激動(dòng)劑[125I]AB-MECA。置換試驗(yàn)在不存在GTP的條件下進(jìn)行。
也在功能試驗(yàn)中檢測所有的化合物。評(píng)價(jià)化合物(1、3、4、33-40和45-48)通過表達(dá)在CHO細(xì)胞中的人腺苷A2A受體刺激cAMP產(chǎn)生的能力，或者抑制在HEK 293細(xì)胞中表達(dá)的人腺苷A3受體中的cAMP產(chǎn)生的能力。
結(jié)果和討論為了合成本發(fā)明的化合物，2-碘代腺苷(1)用作起始物18。注意到在引入5′-取代基之前應(yīng)優(yōu)先引入2-取代基，因?yàn)榍罢咦兓疃?。用所需的取代基替代化合?的2-碘代基團(tuán)非常直接。2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)衍生物(3)通過2-肼基腺苷(2)與異戊醛縮合來合成7。碘代核苷向其2-(1-己炔基)衍生物(4)的完全轉(zhuǎn)變通過傳統(tǒng)鈀催化交聯(lián)反應(yīng)的改良方式進(jìn)行8。但是，在化合物2-4的5′位依次引入良好離去基團(tuán)的嘗試失敗。氯是優(yōu)選的離去基團(tuán)，因?yàn)閷妆交酋；蚣谆酋；母叻磻?yīng)性可能引起與腺苷部分產(chǎn)生閉環(huán)反應(yīng)23。Robins及其同事20描述了改良的氯代反應(yīng)，在5′位引入氯，這在以前已成功使用。在此方法中，形成非對映異構(gòu)形式的亞硫酸酯，其在甲醇氨水溶液中易于水解，使對2′-和3′-羥基的保護(hù)沒有必要。但是，當(dāng)對化合物2、3和4實(shí)施時(shí)，沒有獲得所需的產(chǎn)物5、6和7。不同量的SOCl2和不同溫度導(dǎo)致起始物(2)的分解，或者導(dǎo)致出5′-氯化外氯加成到C2取代基(3或4)的重鍵上。我們推斷該氯化方法的反應(yīng)條件還是太苛刻。但是，用四鹵化碳和三苯基膦24選擇性鹵化未加保護(hù)的核苷的其它氯化方法的反應(yīng)條件似乎太溫和。還嘗試了直接溫和Mitsunobu反應(yīng)條件，首先對商購的鳥苷和腺苷實(shí)施。但是，僅選擇性5′位氯化的反應(yīng)條件難以控制。鳥苷的反應(yīng)(-10℃下1小時(shí))導(dǎo)致所有3個(gè)羥基氯化，而類似條件(-10℃下15-30分鐘)并沒有使腺苷發(fā)生反應(yīng)。在另一種路徑的溫和氯化方法中，不干擾2′-和3′-羥基，其通過使用部分保護(hù)的起始物進(jìn)行。為此，通過2-碘腺苷(1)與丙酮和作為酸催化劑的70％HClO4反應(yīng)成功地制備了2′，3′-O-異亞丙基-2-碘腺苷25，而如上所述引入2-(1-己炔基)得到2-(1-己炔基)-2′，3′-O-異亞丙基腺苷。按照Homma等所述用CCl4和PPh3氯化2-(1-己炔基)-2′，3′-O-異亞丙基腺苷25，得到氯代的化合物，但只是收率低，為15％。遺憾的是，在下步反應(yīng)中遇到了問題。通過與乙硫醇在存在于甲醇中的KOtBu中或2M NaOH中反應(yīng)1，將5′-氯-5′-脫氧-2-(1-己炔基)-2′，3′-O-異亞丙基腺苷轉(zhuǎn)變?yōu)?′-(乙硫基)-取代的衍生物的若干嘗試，沒有成功。對于前一種方法，即使在95℃下反應(yīng)5小時(shí)后，也只是又得到了起始物。后一種方法引起了顯著的分解，起始物或產(chǎn)物都沒有得到。
在另一種途經(jīng)中，在C2-取代前引入5′-取代基，繞開了上述途經(jīng)中的所有問題。Robins的該方法由2-碘腺苷(1)得到5′-氯-5′-脫氧-2-碘腺苷。但是，除了5′-羥基，1的2-碘基團(tuán)在某種程度上也被氯替代，得到了5′-氯-5′-脫氧-2-碘腺苷和2，5′-二氯-5′-脫氧腺苷的混合物。經(jīng)證明，通過柱色譜分離這兩種產(chǎn)物是不可能的。因此，需要進(jìn)一步回到合成路徑中，因?yàn)?-氯腺苷氯化獲得的純2，5′-二氯-5′-脫氧腺苷在不同條件下不與乙硫醇反應(yīng)(不論是在不同溫度下在存在于甲醇中的KOtBu中(其都再次獲得起始物，還是在較高溫度下在2M NaOH中，其得到2，5′-二乙硫基取代的衍生物)。最后，在圖1中，描述了所需化合物的成功合成方法。5′-取代基引入鳥苷，其也是2-碘腺苷(1)的前體。雖然更費(fèi)事，但是該路徑以鳥苷引入5′-烷硫基取代基開始，繞開了所有上述問題。鳥苷的氯化20得到5′-氯-5′-脫氧-鳥苷(16)，收率93％。化合物16與適當(dāng)?shù)牧虼荚?M NaOH1，5中反應(yīng)，而接著保護(hù)化合物17-20的2′-和3′-羥基得到2′，3′-O-乙?；?5′-(烷硫基)-取代的衍生物21-24。一些實(shí)驗(yàn)室描述了用磷酰氯(POCl3)氯化嘌呤核苷的6位18，21。為了防止起始物的分解，使用的化學(xué)物質(zhì)或者適當(dāng)?shù)馗稍锘蛘呓?jīng)新蒸餾，而化合物25-28的收率可以接受至良好(40％-74％)。接著，化合物25-28的2-氨基被碘取代。所用方法26是原重氮化-碘取代方法22的一種變化形式。用此有效的方法，以良好的收率獲得了化合物29-32(71-82％)。在新用氨氣飽和的乙醇中，攪拌化合物29-32，很容易除去保護(hù)基，并將6位緩慢氨基化得到中間體33-36。NMR顯示6位氨基化需要在室溫下攪拌至少2天。接著如上所述7，8引入C2-取代基，以良好的收率獲得了化合物37-40和45-48。
表2顯示了所有合成的終產(chǎn)物1、3、4、33-40和45-48的放射性配體結(jié)合數(shù)據(jù)。在該表中，取代基如本文中所限定(其中R3是氫原子)，參見通式(I)的化合物。
表2-放射性配體結(jié)合試驗(yàn)Ki(nM)和在10-5M的置換％No R1W R2A1aA2AbA3c1 OH I 36.1％ 4200±80297±1733 SCH3I 42.8％ 3900±580257±3534 SC2H5I 386±3841200±120395±6135 S-n-C3H7I 1050±485 440±50 558±17936 S-i-C3H7I 56.2％ 820±180 546±864 OH C≡C(CH2)3CH363.7％ 6±116.9±4.137 SCH3C≡C(CH2)3CH335.9％ 60±20 14.5±3.438 SC2H5C≡C(CH2)3CH32180±1980 110±30 32.3±11.839 S-n-C3H7C≡C(CH2)3CH346.5％ 170±10 88.3±6.640 S-i-C3H7C≡C(CH2)3CH31270±740 220±10 75.4±43.13 OH NHN＝CHCH2CH(CH3)218.9％ 20±738.3±3.345 SCH3NHN＝CHCH2CH(CH3)218.9％ 220±20 253±3646 SC2H5NHN＝CHCH2CH(CH3)221.2％ 500±40 814±13247 S-n-C3H7NHN＝CHCH2CH(CH3)222.0％ 1500±280 697±3148 S-i-C3H7NHN＝CHCH2CH(CH3)213.0％ 1800±230 409±118此表清楚表明大多數(shù)化合物對腺苷A1受體基于非常低或者可以忽略的親合性。另外，大多數(shù)化合物在結(jié)合腺苷A2A受體或A3受體中沒有顯示出孰優(yōu)孰劣，對于這兩種受體亞型的親合性從可以接受到良好。一些化合物對腺苷A2A受體具有輕微的選擇性(3，4)，其A2A/A3選擇性比例顯著小于1，而其它化合物更傾向于腺苷A3受體(1，33-34，38，48)，其A2A/A3選擇性比例高達(dá)15倍(33)。已知在2位的取代增加對腺苷A2A受體的選擇性7，8。最近，對2-(芳)鏈炔基-取代的腺苷衍生物的放射性配體研究已表明除A1/A2A選擇性外，這些2-取代基還增加了A1/A3的選擇性9，10，27。確實(shí)，2-(1-己炔基)取代基對腺苷A2A和A3受體較A1受體產(chǎn)生了高度親合性。2-(N′-3-甲基亞丁基肼基)衍生物也獲得了對腺苷A2A和A3受體的高度親合力，這在只針對A1和A2A受體的功能試驗(yàn)中已經(jīng)檢測7。與2-(N′-3-甲基亞丁基)肼基和2-碘代化合物細(xì)胞，2-(1-己炔基)衍生物(4、37-40)對腺苷A2A和A3受體親合力最高?；衔?對腺苷A2A受體親和力最高(Ki值為6nM)，而化合物37對腺苷A3受體的親和力最高(Ki值為14.5nM)。已知只有腺苷A2A受體能容納C2為取代基中的限制性間隔基28。這解釋了為何2-碘代衍生物(1、33-36)對此受體的親和力非常低，而含有相對剛性化間隔基的較大C2取代基(1-己炔基和N′-3-甲基亞丁基肼基)的化合物具有良好親合力。2-碘代衍生物對腺苷A3受體的親合力明顯比對A2A受體的好，這表明腺苷A3受體的C2區(qū)可能不太受限制。
雖然5′-取代基主要顯示引發(fā)部分激動(dòng)作用，但是它們對這些化合物的親合力也有影響。對于腺苷A2A和A3受體多觀察到類似的變化。在大多數(shù)情況下，大的5′-取代基導(dǎo)致對這兩種受體亞型的親合力降低。只有在5′-取代的2-碘代腺苷系列(1、33-36)中，腺苷A2A受體親合力似乎隨著取代基的增大而增加。5′-羥基衍生物1、3和4，對A2A和A3受體都具有最高的親合力，而帶有較大5′-丙硫基和5′-異丙硫基取代基的化合物對兩種受體亞型的親合力最低。在2-碘代腺苷系列中，增加5′-取代基的大小導(dǎo)致A3/A2A選擇性增加10倍。另一方面，在2-(1-己炔基)和2-(N′-3-甲基亞丁基肼基)系列中，較大的5′-取代基增加腺苷A3受體的選擇性，A3/A2A書寫者分別有9和10倍的增加。這與以前報(bào)告的N6，5′-二取代的腺苷衍生物的數(shù)據(jù)一致。腺苷衍生物5中5′-烷硫基取代基的引入也增加了較A2A受體而言腺苷A3受體的選擇性?？臻g作用似乎不能解釋腺苷A2A受體親合力的降低，因?yàn)樘貏e是5′-乙硫基的大小與5′-N-乙基甲酰氨基取代基的相當(dāng)匹配，如在NECA和CGS21680中。雖然已知MECA對腺苷A3受體比NECA具有更高的親合力，29但是本文中給出的結(jié)果表明腺苷A3受體比A2A受體能夠更好地容納較大的5′-烷硫基基團(tuán)。在文獻(xiàn)中，已經(jīng)研究了5′-烷硫基和5′-N-烷基甲酰氨基外的其它修飾對腺苷A2A或A3受體的親合力。Mogensen等已經(jīng)闡明，與5′-甲基甲酰氨基衍生物相比，腺苷衍生物的5′-位上的較大3-異惡唑基取代基，確實(shí)降低了腺苷A2A受體親合力30。相反，對于用5-異惡唑基取代基進(jìn)行多取代的腺苷衍生物，已聲明這些化合物具有非常高的腺苷A2A受體親合力，且較A3相比更具選擇性31。
表3表明在cAMP試驗(yàn)中合成的化合物的作用。取代基如通式(I)所示，其中R3表示氫原子。
表3cAMP試驗(yàn)No R1W R2Emax(％) EC50(μM)Emax(％)A3bA2AaCHO細(xì)胞A2ACGS21680 100 - -NECA 102±23 0.04±0.004 -Cl-IB-MECA - - 83±2(10)1 OHI 112±7 5.4±0.7 68±7(30)33 SCH3I n.a.c- 41±17(30)34 SC2H5I n.a.c- 14±10(30)35 S-n-C3H7I n.a.c- 10±6(30)36 S-i-C3H7I n.a.c- 17±13(30)4 OHC≡C(CH2)3CH3105±4 0.010±0.0003 79±8(3)37 SCH3C≡C(CH2)3CH345±6 0.7±0.1 72±9(3)38 SC2H5C≡C(CH2)3CH379±100.5±0.02 50±21(3)39 S-n-C3H7C≡C(CH2)3CH382±7 0.8±0.1 33±29(10)40 S-i-C3H7C≡C(CH2)3CH332±4 3.6±1.5 49±22(10)3 OHNHN＝CHCH2CH(CH3)292±21.1±0.2 24±17(3)45 SCH3NHN＝CHCH2CH(CH3)244±45.0±0.6 41±16(30)46 SC2H5NHN＝CHCH2CH(CH3)2101±47.5±0.3 7±37(100)47 S-n-C3H7NHN＝CHCH2CH(CH3)2126±312.9±0.9 16±14(100)48 S-i-C3H7NHN＝CHCH2CH(CH3)256±1 10.4±1.0 26±8(30)
a在A2ACHO細(xì)胞中與CGS21680的Emax相比的Emax(±SEM，n＝3；10μM)；b與Cl-IB-MECA相比，對毛喉素誘導(dǎo)的(10μM)cAMP產(chǎn)生的抑制百分率。括號(hào)中，檢測了起作用的濃度(μM，約100×Ki值)；c沒有活性(在30μM或100μM沒有產(chǎn)生cAMP(35)；約100×Ki值)。
所有化合物先在濃度1-100μM(Ki值的25至166倍)試驗(yàn)，檢測通過腺苷A2A受體產(chǎn)生的cAMP的量。對于化合物1、4、37-40、3和45-48記錄了完全的劑量反應(yīng)曲線。由擬定的曲線確定Emax值，并與參照完全激動(dòng)劑CGS21680(10μM)產(chǎn)生的cAMP的最大量(Emax)比較。
令人驚奇的是，5′-取代的2-碘代衍生物33-36不產(chǎn)生任何cAMP。這暗示在此試驗(yàn)中它們表現(xiàn)為拮抗劑，或者它們是試驗(yàn)中腺苷脫氨基酶(ADA)的底物。但是，后一種解釋似是而非，因?yàn)樵谙佘誂3受體的cAMP試驗(yàn)中這些化合物似乎不是ADA的底物，腺苷A3受體試驗(yàn)中也存在ADA。所有的腺苷衍生物(1、3和4)產(chǎn)生與完全激動(dòng)劑CGS21680類似量的cAMP，這表明它們是完全激動(dòng)劑。2-(1-己炔-1-基)系列中的5′-取代的衍生物與4和CGS21680相比是部分激動(dòng)劑。5′-取代的2-(N′-3-甲基亞丁基肼基)衍生物在cAMP產(chǎn)生中顯示了類似的趨勢，但它們具有較高的效果?；衔?6和47的效果與完全激動(dòng)劑CGS21680相似，因此，46和47是該受體的完全激動(dòng)劑?？傊蠖鄶?shù)C2，5′-二取代的腺苷衍生物在此試驗(yàn)中表現(xiàn)為腺苷A2A受體的部分激動(dòng)劑。帶有5′-乙硫基或5′-異丙硫基取代基(37，40，45和48)的化合物效果最差。對于腺苷A2A受體的EC50值比Ki值高出54倍。但是，效力和親合力的級(jí)別相同。必須注意到EC50值由在CHO細(xì)胞中表達(dá)的人腺苷A2A受體檢測，而Ki值在大鼠紋狀體中檢測32。
還研究了化合物通過腺苷A3受體已知毛喉素刺激的(10μM)cAMP產(chǎn)生的能力。所有化合物以單一(最終)濃度3-100μM(Ki值的73至200倍)試驗(yàn)。2-碘代衍生物(1、33-36)通過腺苷A3受體抑制毛喉素誘導(dǎo)的cAMP產(chǎn)生，證明了化合物激動(dòng)特性，而其對腺苷A2A受體沒有反應(yīng)。化合物1和4，帶有完整的5′-羥基，與對照完全激動(dòng)劑Cl-IB-MECA相比，對cAMP產(chǎn)生顯示出幾乎完全抑制。化合物3只給出了對cAMP產(chǎn)生的24％抑制，表明它表現(xiàn)為腺苷A3受體的部分激動(dòng)劑。5′-取代的衍生物都顯示出亞最高水平的對毛喉素誘導(dǎo)的cAMP產(chǎn)生的抑制，其與三個(gè)2-取代系列的趨勢相同(表3)。這表明二取代的腺苷衍生物在此試驗(yàn)中都是腺苷A3受體的部分激動(dòng)劑。對于腺苷A3受體，帶有5′-甲硫基取代基的化合物(33、37、45)具有最高的內(nèi)在效果，而帶有較大5′-取代基(正丙硫基，35和39)的化合物具有最低的內(nèi)在活性。
實(shí)施例2-合成C2，5′，N6-取代的腺苷衍生物化學(xué)方法總括化學(xué)品和溶劑鳥苷得自Aldrich(Aldrich Chemie，Sigma-Aldrich Chemie BV，Zwijndrecht，The Netherlands)。所有其它試劑得自標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)來源并是分析純。[3H]DPCPX(1，3-二丙基-8-環(huán)戊基黃嘌呤)、[3H]ZM 241385和[125I]AB-MECA購自NEN(Hoofddorp，The Netherlands)。
色譜法薄層色譜(TLC)用購自Merck的覆蓋有硅膠F254鋁片(20×20cm)進(jìn)行。在UV(254nm)下觀察色譜斑。制備柱色譜在硅膠(230-400目ASTM)上進(jìn)行。
儀器和分析對C、H、N進(jìn)行元素分析(Department of AnalyticalChemistry，Leiden University，The Netherlands)。13C NMR光譜在50.1MHz用JEOL JNM-FX 200光譜儀檢測，該光譜儀配備有PG200計(jì)算機(jī)，以傅立葉變換模式操作。1H NMR光譜用上述光譜儀在200MHz檢測，或在300MHz用Bruker WM-300光譜儀檢測，該光譜儀配備有ASPECT 2000計(jì)算機(jī)，以傅立葉變換模式操作。1H和13C NMR的化學(xué)位移相對于四甲基硅烷(TMS)內(nèi)標(biāo)物以ppm(λ)給出。
所有高分辨質(zhì)譜在Finnigan MAT900質(zhì)譜儀上檢測，該質(zhì)譜儀配備有EI試驗(yàn)(70eV，分辨率1000)用直接插入探針，或者在FinniganMAT TSQ-70色譜儀上檢測，該色譜儀配備有ESI試驗(yàn)用電霧化界面。通過恒量注入溶解于80/20甲醇/水的分析物來收集光譜數(shù)據(jù)。ESI是溫和的離子化技術(shù)，以正離子化模式產(chǎn)生質(zhì)子化的、鈉離子化(sodiated)類別，以負(fù)離子形式產(chǎn)生脫質(zhì)子的類別。
熔點(diǎn)在Büchi毛細(xì)熔點(diǎn)儀中檢測。
合成方法合成甲基2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖苷(化合物50)。攪拌88g(0.59mol)的干燥D-核糖在丙酮(400ml)、二甲氧基丙烷(176ml)和MeOH(380ml)中的懸浮液，在冰浴中冷卻。在4小時(shí)期間內(nèi)，每30分鐘讓氯化氫氣體通過溶液，然后室溫下將混合物攪拌過夜。殘余物用水和乙醚萃取。合并有機(jī)層，干燥(MgSO4)并濃縮。得到115g(0.56mol，95％)；Rf0.38(PE40/60∶EtOAc 1∶1)。1H NMR(CDCl3)δ4.97(s，1H，H-1)，4.82-4.57(2xd，2H，J＝6.18Hz，H-2，3)，4.42-4.39(m，1H，H-4)，3.71-3.62(m，2H，H-5)，3.41(s，3H，OCH3)，1.48，1.31(2xs，6H，2xCCH3)ppm13C NMR(CDCl3)δ112.02(C(CH3)2)，109.8(C-1)，88.13，85.64，81.38(C-2，3，4)，63.80(C-5)，55.24(OCH3)，26.24，24.61(2xCH3)ppm將化合物50烷基化為甲基5-O-烷基-2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖苷衍生物51-53的總方法。將甲基2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖苷(50，53.0g，0.26mol)溶解于干燥的二甲基甲酰胺(DMF，300ml)中。冷卻(0℃)并緩慢加入NaH(60％在礦物油中，11.5g，0.29mol)。讓此混合物升溫至室溫，再次冷卻，并非常緩慢地加入適當(dāng)?shù)耐榛u化物(0.31mol)。將此混合物室溫下攪拌過夜。將混合物用MeOH(100ml)處理并真空濃縮。與甲苯(2x)共蒸發(fā)。用水和EtOAc(各250ml)萃取(黑色)混合物。水層隨后用二氯甲烷萃取。合并有機(jī)層，干燥(MgSO4)并濃縮。殘余物通過柱色譜純化。
甲基5-O-甲基-2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖苷(化合物51)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行50(53.0g，0.26mol)和甲基碘(CH3I，0.31mol，19.4ml)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液梯度PE40/60，PE40/60∶EtOAc 2∶1)。得到55.1g(0.25mol，97％)Rf0.56(PE40/60∶EtOAc 1∶1)。13C NMR(CDCl3)δ111.71(C(CH3)2)，108.79(C-1)，84.76，84.47，81.70(C-2，3，4)，73.18(C-5)，58.38(OCH3)，54.03(CH2OCH3)，25.98，24.49(2xC(CH3)2)ppm。
甲基5-O-乙基-2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖苷(化合物52)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行50(33.4g，0.16mol)和碘代乙烷(0.20mol，15.9ml)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液梯度PE40/60，PE40/60∶EtOAc 1∶1)。得到35.2g(0.15mol，92％)；Rf0.62(PE40/60∶EtOAc 1∶1)。13C NMR(CDCl3)δ111.41(C(CH3)2)，108.55(C-1)，84.50，81.55(C-2，3，4)，70.78(CH2CH3)，65.91(C-5)，53.85(OCH3)，25.77，24.31(C(CH3)2)，14.48(CH2CH3)ppm。
甲基5-O-環(huán)丙基-2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖苷(化合物53)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行50(43.6g，0.21mol)和環(huán)丙基溴(0.26mol，20.6ml)。用甲醇處理前，該混合物在室溫下攪拌。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液梯度PE40/60，PE40/60∶EtOAc 1∶1)。得到19.5g(79.8mmol，38％)；Rf0.70(PE40/60∶EtOAc 1∶1)。13C NMR(CDCl3)δ111.94(C(CH3)2)，108.90(C-1)，84.88，84.65，81.85(C-2，3，4)，71.19(C-5)，54.38(OCH)，53.21(OCH3)，26.15，24.72(C(CH3)2)，5.37(CH2CH2)ppm。
化合物51-53脫保護(hù)轉(zhuǎn)變?yōu)?-O-烷基-β-D-呋喃核糖衍生物54-56的總方法。適當(dāng)?shù)募谆?-O-烷基-2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖(4.48mmol)溶解于15mL HCl(0.04M)并回流2小時(shí)。溶液用BaCO3中和，過濾并濃縮?；旌衔锿ㄟ^柱色譜純化。
5-O-甲基-α，β-D-呋喃核糖(化合物54)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行甲基5-O-甲基-2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖苷(51，1g，4.58mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在EtOAc中)。得到0.44g(2.68mmol，59％)；Rf0.34(10％MeOH在EtOAc中)。13C NMR(MeOD)δ103.12(C-1，β)，97.78(C-1，α)，83.94，82.36，77.37，76.88，72.61，72.12(C-2，3，4，α+β)，73.93(C-5)，59.51，59.39(OCH3，α+β)ppm。
5-O-乙基-α，β-D-呋喃核糖(化合物55)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行甲基5-O-乙基-2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖苷(52，1.0g，4.85mmol)。該混合物通過柱色譜純化(10％MeOH在EtOAc中)。得到0.56g(3.14mmol，65％)；Rf0.40(10％MeOH在EtOAc中)。13C NMR(MeOD)δ102.88(C-1，β)，97.51(C-1，α)，84.09，82.42，76.60，72.53，72.03(C-2，3，4，α+β)，73.40(C-5)，67.83(CH2CH3)，15.34(CH3)ppm。
5-O-環(huán)丙基-α，β-D-呋喃核糖(化合物56)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行甲基5-O-環(huán)丙基-2，3-O-異亞丙基-β-D-呋喃核糖苷(53，4.4g，18mmol)。該混合物通過柱色譜純化(10％MeOH在EtOAc中)。得到2.09g(11mmol，61％)；Rf0.43(10％MeOH在EtOAc中)。13C NMR(MeOD)δ101.60(C-1，β)，96.41(C-1，α)，80.77，79.42，74.40，73.53，72.03(C-2，3，4，α+β)，69.40(C-5)，56.97(CH)7.83(CH2CH2)ppm。
將化合物54-56?；癁?，2，3-三-O-乙?；?5-O-烷基-α，β-D-呋喃核糖衍生物57-59的總方法。將適當(dāng)?shù)?-O-烷基-α，β-D-呋喃核糖(2.68mmol)溶解于25ml吡啶中。加入催化劑量的二甲基氨基吡啶(DMAP)和醋酸酐(8.84mmol，843μl)。將此混合物室溫下攪拌2小時(shí)，真空濃縮并與甲苯共蒸發(fā)。油狀物用水和EtOAc(各25ml)除去。將有機(jī)層干燥(MgSO4)并濃縮，通過柱色譜純化。
1，2，3-三-O-乙?；?5-O-甲基-α，β-D-呋喃核糖(化合物57)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5-O-甲基-α，β-D-呋喃核糖(54，0.44g，2.68mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在EtOAc中)。得到0.70g(2.41mmol，90％)；Rf0.76(10％MeOH在EtOAc中)。13C NMR(CDCl3)δ168.98，168.68，168.39(3x C＝O，α+β)，97.64(C-1，β)，93.64(C-1，α)，82.81，80.30，73.99，73.67，70.20，69.67(C-2，3，4，α+β)，71.75(C-5)，58.67(OCH3)，20.26，19.70(3xCOCH3)ppm。
1，2，3-三-O-乙酰基-5-O-乙基-α，β-D-呋喃核糖(化合物58)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5-O-乙基-α，β-D-呋喃核糖(7，0.56g，3.14mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在EtOAc中)。得到0.85g(2.79mmol，89％)；Rf0.75(10％MeOH在EtOAc中)；13CNMR(CDCl3)δ168.68，168.42，168.02(3x C＝O)，97.43(C-1，β)，93.40(C-1，α)，82.69，80.24，73.50，70.08，69.53(C-2，3，4，α+β)，69.38，68.94(C-5，α+β)，66.05(CH2CH3)，19.96，19.41(3xCOCH3)，14.18(CH2CH3)ppm。
1，2，3-三-O-乙?；?5-O-環(huán)丙基-α，β-D-呋喃核糖(化合物59)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行5-O-環(huán)丙基-α，β-D-呋喃核糖(56，3.42 g，18.0mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液10％MeOH在EtOAc中)。得到4.74g(15.0mmol，83％)；Rf0.72(10％MeOH在EtOAc中)；13C NMR(CDCl3)δ169.27，168.98，168.74(3xC＝O)，97.81(C-1，β)，93.78(C-1，α)，82.84，80.36，73.91，70.43，69.88(C-2，3，4，α+β)，69.79，69.38(C-5，α+β)，53.50(CH)，20.55，20.02(3xCOCH3)，5.22(CH2CH2)ppm。
偶合化合物57-59與6-氯嘌呤或2，6-二氯嘌呤得到化合物60-65的總方法堿的硅烷基化適當(dāng)?shù)膲A(193.8mg，1.27mmol)用1，1，1，3，3，3-六甲基二硅胺烷(HMDS，5ml，23.7mmol)和12.5μl氯三甲基硅烷(TMSCl，0.1mmol)在130℃下處理20小時(shí)。將硅烷基化的化合物濃縮，并不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
Vorbrüggen偶聯(lián)向適當(dāng)?shù)墓柰榛膲A(12.9mmol)中加入存在于15ml干燥的1，2-二氯乙烷中的適當(dāng)?shù)暮颂?10.3mmol)。將殘余物與干燥的1，2-二氯乙烷共蒸發(fā)兩次，接著溶解于75ml干燥的1，2-二氯乙烷中。將溶液溫和地回流，5分鐘后加入三甲基硅烷基-三氟甲磺酸鹽(TMS三氟甲磺酸鹽)(997μl，5.16mmol)。將此混合物回流2小時(shí)，冷卻至室溫并用二氯甲烷稀釋。用5％NaHCO3和水萃取。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，濃縮并通過柱色譜純化。
6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-甲基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物60)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行硅烷基化的6-氯嘌呤(12.9mmol)和1，2，3-三-O-乙?；?5-O-甲基-α，β-D-呋喃核糖(57，3.0g，10.3mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液3％丙酮在二氯甲烷中)。得到1.9g(4.94mmol，48％)；Rf0.11(3％丙酮在二氯甲烷中)。1H NMR(CDCl3)δ8.75(s，1H，H-8)，8.56(s，1H，H-2)，6.41(d，1H，J＝6.18Hz，H-1′)，5.80(t，1H，J＝5.49Hz，H-2′)，5.60-5.56(m，1H，H-3′)，4.39(q，1H，J＝2.41Hz，H-4′)，3.69(dq，2H，J＝7.21Hz，J＝2.40Hz，H-5′)，3.48(s，3H，OCH3)，2.16，2.03(2xs，6H，2xCOCH3)ppm。
2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-甲基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物61)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行硅烷基化的2，6-二氯嘌呤(10.3mmol)和1，2，3-三-O-乙酰基-5-O-甲基-α，β-D-呋喃核糖(57，2.39g，8.24mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液梯度4％-6％丙酮在二氯甲烷中)。得到2.91g(6.94mmol，84％)；1H NMR(CDCl3)δ8.41(s，1H，H-8)，6.18(d，1H，J＝6.52Hz，H-1′)，5.60(dd，1H，J＝6.18Hz，J＝5.49Hz，H-2′)，5.39(dd，1H，J＝5.15Hz，J＝2.06Hz，H-3′)，4.25-4.23(m，1H，H-4′)，3.58-3.48(m，2H，H-5′)，3.33(s，3H，OCH3)，2.00，1.88(2xs，6H，2xCOCH3)ppm。
6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-乙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物62)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行硅烷基化的6-氯嘌呤(11.6mmol)和1，2，3-三-O-乙酰基-5-O-乙基-α，β-D-呋喃核糖(58，2.82g，9.28mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液梯度4-6％丙酮在二氯甲烷中)。得到3.03g(7.60mmol，82％)；Rf0.17(3％丙酮在二氯甲烷中)；1H NMR(CDCl3)δ8.51(s，1H，H-8)，8.45(s，1H，H-2)，6.20(d，1H，J＝6.18Hz，H-1′)，5.64(t，1H，J＝5.15Hz，H-2′)，5.40-5.36(m，1H，H-3′)，4.24-4.18(m，1H，H-4′)，3.53(dq，2H，J＝13.73Hz，J＝2.06Hz，H-5′)，3.42(q，2H，J＝6.86Hz，CH2CH3)，1.94，1.81(2xs，6H，2xCOCH3)，1.07(t，3H，J＝6.86Hz，CH2CH3)；13C NMR(CDCl3)δ169.33，168.89(2xC＝O)，151.70，151.32，150.56，143.26，131.41(C-2，4，5，6，8)，85.46，82.78，74.08，74.86(C-1′，2′，3′，4′)，69.35，66.90(OCH2，C-5′)，20.28，19.19(2xCOCH3)，14.71(CH3)ppm。
2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-乙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物63)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行硅烷基化的2，6-二氯嘌呤(10.3mmol)和1，2，3-三-O-乙?；?5-O-乙基-α，β-D-呋喃核糖(58，2.51g，8.24mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液梯度4％-6％丙酮在二氯甲烷中)。得到2.93g(6.76mmol，82％)；1H NMR(CDCl3)δ8.66(s，1H，H-8)，6.39(d，1H，J＝6.53Hz，H-1′)，5.81(dd，1H，J＝6.86Hz，J＝5.49Hz，H-2′)，5.58(dd，1H，J＝7.21Hz，J＝2.06Hz，H-3′)，4.43-4.41(m，1H，H-4′)，3.75(dq，2H，J＝10.64Hz，J＝2.41Hz，H-5′)，3.64(t，2H，J＝6.87Hz，CH2CH3)，2.19，2.06(2xs，6H，2xCOCH3)，1.32(t，3H，J＝6.86Hz，CH2CH3)ppm。
6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-環(huán)丙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(化合物64)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行硅烷基化的6-氯嘌呤(9.79mmol)和1，2，3-三-O-乙?；?5-O-環(huán)丙基-α，β-D-呋喃核糖(59，2.48g，7.83mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液梯度4％-6％丙酮在二氯甲烷中)。得到2.09g(5.10mmol，65％)；1H NMR(CDCl3)δ8.76(s，1H，H-8)，8.59(s，1H，H-2)，6.42(d，1H，J＝6.18Hz，H-1′)，5.83-5.77(m，1H，H-2′)，5.57-5.53(m，1H，H-3′)，4.45-4.42(m，1H，H-4′)，3.87-3.77(m，2H，H-5′)，3.45-3.42(m，1H，CH)，2.19，2.06(2xs，6H，2xCOCH3)，0.67-0.55(m，4H，CH2CH2)ppm。
2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-環(huán)丙基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(化合物65)。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行硅烷基化的2，6-二氯嘌呤(8.95mmol)和1，2，3-三-O-乙?；?5-O-環(huán)丙基-α，β-D-呋喃核糖(59，2.26g，7.16mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液梯度4％-6％丙酮在二氯甲烷中)。得到2.55g(5.73mmol，80％)；1H NMR(CDCl3)δ8.32(s，1H，H-8)，6.10(d，1H，J＝6.18Hz，H-1′)，5.52-5.46(m，1H，H-2′)，5.28-5.25(m，1H，H-3′)，4.20-4.17(m，1H，H-4′)，3.60(q，2H，J＝7.56Hz，H-5′)，3.24-3.19(m，1H，OCH)，1.91，1.82(2xs，6H，2xCOCH3)，0.43-0.32(m，4H，CH2CH2)ppm。
氨基化化合物60-65為取代的腺苷衍生物66-83的總方法方法A(合成化合物66，69，72，75，78和81)將適當(dāng)?shù)?-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-烷基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤或適當(dāng)?shù)?，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-烷基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(1.53mmol)溶解于EtOH/NH3(30ml)，并將混合物室溫下攪拌過夜。將混合物濃縮并通過柱色譜純化。
方法B(化合物67，68，70，71，73，74，76，77，79，80，82和84)適當(dāng)?shù)?-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-烷基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤或適當(dāng)?shù)?，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-烷基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(1.53mmol)溶解于純EtOH(10ml)。加入適當(dāng)?shù)陌?2.3mmol)和Et3N(1.91mmol)并將混合物回流過夜。將混合物濃縮并溶解于EtOH/NH3(30ml)并室溫下攪拌過夜。將混合物再次濃縮并通過柱色譜純化。
5′-O-甲基腺苷(化合物66)。方法A。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-O-甲基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(60，682mg，1.77mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到393mg(1.40mmol，79％)，mp 112-114℃；Rf0.43(10％MeOH在二氯甲烷中)；1HNMR(DMSO-d6)δ8.28(s，1H，H-8)，8.14(s，1H，H-2)，7.26(bs，2H，NH2)，5.87(d，1H，J＝5.49Hz，OH-2′)，5.25(d，1H，J＝5.15Hz，OH-3′)，4.57(q，1H，J＝6.18Hz，H-2′)，4.13(q，1H，J＝4.47Hz，H-3′)，3.99-3.98(m，1H，H-4′)，3.57-3.48(m，2H，H-5′)，3.28(s，3H，OCH3)ppm；MS m/z 282(M+H)+；元素分析(C11H15N5O4·0.5H2O)C，H，N。
N6-環(huán)戊基-5′-O-甲基腺苷(化合物67)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-甲基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(60，589mg，1.53mmol)和環(huán)戊基胺(2.3mmol，227μl)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到476mg(1.36mmol，89％)，mp 164-166℃；Rf0.51(洗脫液10％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用乙腈重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.28(s，1H，H-8)，8.18(s，1H，H-2)，7.70(d，1H，J＝7.55Hz，NH)，5.89(d，1H，J＝4.80Hz，H-1′)，5.50(d，1H，J＝5.15Hz，OH-2′)，5.26(d，1H，J＝5.15Hz，OH-3′)，4.56(q，1H，J＝4.12Hz，H-2′)，4.13(q，1H，J＝4.46Hz，H-3′)，3.99(q，1H，J＝4.12Hz，H-4′)，3.57-3.42(m，2H，H-5′)，3.28(s，3H，OCH3)，2.01-1.83(m，2H，環(huán)戊基)，1.73-1.52(m，4H，環(huán)戊基)；MS m/z350(M+H)+；元素分析(C16H23N5O4·0.7CH3CN)C，H，N。
N6-(3-碘代芐基)-5′-O-甲基腺苷(化合物68)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-O-甲基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(60，363mg，0.94mmol)和3-碘代芐基胺·HCl(1.41mmol，380mg)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到397mg(0.80mmol，85％)，mp 155-157℃；Rf0.54(洗脫液10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.40(bs，1H，NH)，8.33(s，1H，H-8)，8.21(s，1H，H-2)，7.70(s，1H，CCHCI)，7.57(d，1H，J＝6.52Hz，CCHCHCH)，7.34(d，1H，J＝5.15Hz，CCHCH)，7.08(t，1H，J＝8.93Hz，CCHCH)，5.89(d，1H，J＝4.12Hz，H-1′)，5.50-5.47(m，1H，OH-2′)，5.27-5.25(m，1H，OH-3′)，4.68-4.56(m，3H，H-2′，NHCH2)，4.14-4.13(m，1H，H-3′)，4.01-3.98(m，1H，H-4′)，3.57-3.53(m，2H，H-5′)，3.31(s，3H，OCH3)；MS m/z 498(M+H)+；元素分析(C18H20N5O4)C，H，N。
2-氯-5 ′-O-甲基腺苷(化合物69)。方法A。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-O-甲基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(61，667mg，1.59mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到382mg(1.21mmol，76％)，mp 200-202℃；Rf0.49(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.30(s，1H，H-8)，7.83(bs，2H，NH2)，5.80(d，1H，J＝5.15Hz，H-1′)，5.53(d，1H，J＝6.18Hz，OH-2′)，5.29(d，1H，J＝5.49Hz，OH-3′)，4.52(q，1H，J＝5.84Hz，H2′)，4.11-3.99(m，2H，H-3′，4′)，3.55-3.46(m，2H，H-5′)，3.28(s，3H，OCH3)；MS m/z316(M+H)+；元素分析(C11H14ClN5O4·1.0二氯甲烷)C，H，N。
N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-甲基腺苷(化合物70)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-O-甲基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(61，505mg，1.2mmol)和環(huán)戊基胺(1.8mmol，178μL)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液2％MeOH在二氯甲烷中)。得到364mg(0.95mmol，79％)，mp 124-126℃；Rf0.15(洗脫液2％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.33(bs，1H，NH)，8.30(s，1H，H-8)，5.81(d，1H，J＝4.46Hz，H-1′)，5.51(d，1H，J＝3.36Hz，OH-2′)，5.29(d，1H，J＝3.32Hz，OH-3′)，4.59-4.29(m，2H，CH，H-2′)，4.41-3.99(m，2H，H-3′，4′)，3.56-3.52(m，2H，H-5′)，1.94-1.92(m，2H，環(huán)戊基)，1.7 1-1.50(m，4H，環(huán)戊基)；MS m/z 384(M+H)+；元素分析(C16H22ClN5O4·0.1CH2Cl2)C，H，N。
N6-(3-碘代芐基)-2-氯-5′-O-甲基腺苷(化合物71)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-甲基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(61，372mg，0.89mmol)和3-碘代芐基胺·HCl(1.34mmol，360mg)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液2％MeOH在二氯甲烷中)。得到383mg(0.72mmol，81％)，mp 84-86℃；Rf0.59(10％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用丙酮重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.89(bs，1H，NH)，8.35(s，1H，H-8)，7.73(s，1H，CCHCI)，7.60(d，1H，J＝5.83Hz，CCHCHCH)，7.33(d，1H，J＝6.12Hz，CCHCH)，7.12(t，1H，J＝7.55Hz，CCHCH)，5.82(d，1H，J＝5.15Hz，H-1′)，5.54(d.1H，J＝5.84Hz，OH-2′)，5.30(d，1H，J＝5.49Hz，OH-3′)，4.61-4.51(m，3H，NHCH2，H-2′)，4.09-4.00(m，2H，H-3′，4′)，3.56-3.52(m，2H，H-5′)，3.28(s，3H，OCH3)；MS m/z 532(M+H)+；元素分析(C18H19ClIN5O4·0.3CH3COCH3)C，H，N。
5′-O-乙基腺苷(化合物72)。方法A。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-乙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(62，663mg，1.70mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到407mg(1.38mmol，81％)，mp 110-112℃；Rf0.48(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.32(s，1H，H-8)，8.14(s，1H，H-2)，7.27(bs，2H，NH2)，5.89(d，1H，J＝4.80Hz，H-1′)，5.49(d，1H，J＝5.84Hz，OH-2′)，5.24(d，1H，J＝5.15Hz，OH-3′)，4.54(q，1H，J＝5.14Hz，H-2′)，4.15(q，1H，J＝4.81Hz，H-3′)，4.00(q，1H，J＝4.46Hz，H-4′)，3.58(dq，2H，J＝9.27Hz，J＝3.78Hz，H-5′)，3.47q，2H，J＝7.21Hz，CH2)，1.12(t，3H，J＝7.20Hz，CH3)；MS m/z 296(M+H)+；元素分析(C12H17N5O4·0.2CH2Cl2)C，H，N。
N6-環(huán)戊基-5′-O-乙基腺苷(化合物73)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-乙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(62，502mg，1.26mmol)和環(huán)戊基胺(1.89mmol，187μL)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到316mg(0.87mmol，69％)，mp 134-136℃；Rf0.49(洗脫液10％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用乙腈重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.31(s，1H，H-8)，8.19(s，1H，H-2)，7.72(d，1H，J＝7.55Hz，NH)，5.89(d，1H，J-5.15Hz，H-1′)，5.55-5.25(m，2H，OH-2′，3′)，4.53(t，1H，J＝4.81Hz，H-2′)，4.15(t，1H，J＝2.40Hz，H-3′)，4.01-3.96(m，1H，H-4′)，3.62-3.48(m，2H，H-5′)，3.46(q，2H，J＝7.21Hz，CH2CH3)，1.99-1.82(m，2H，環(huán)戊基)，1.78-1.52(m，4H，環(huán)戊基)，1.11(t，3H，J＝7.21Hz，CH3)；MS m/z 364(M+H)+；元素分析(C17H25N5O4·0.6CH3CN)C，H，N。
5 ′-O-乙基-N6-(3-碘代芐基)-腺苷(化合物74)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-乙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(62，367mg，0.92mmol)和3-碘代芐基胺·HCl(1.38mmol，372mg)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到339mg(0.66mmol，72％)，mp 164-166℃；Rf0.40(10％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用乙腈重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.45(bs，1H，NH)，8.37(s，1H，H-8)，8.21(s，1H，H-2)，7.71(s，1H，CCHCI)，7.57(d，1H，J＝7.90Hz，CCHCHCH)，7.34(d，1H，J＝6.52Hz，CCHCH)，7.09(t，1H，J＝＝6.87Hz，CCHCH)，5.91(d，1H，J＝4.46Hz，H-1′)，5.53(d，1H，J＝5.49Hz，OH-2′)，5.27(d，1H，J＝4.80Hz，OH-3′)，4.67-4.64(m，2H，NHCH2)，4.56(q，1H，J＝4.81Hz，H-2′)，4.17(q，1H，J＝4.81Hz，H-3′)，4.00(q，1H，J＝4.12Hz，H-4′)，3.60(dq，2H，J＝9.61Hz，J＝3.43Hz，H-5′)，3.47(q，2H，J＝6.52Hz，OCH2CH3)，1.12(t，3H，J＝6.52Hz，CH3)；MS m/z 512(M+H)+；元素分析(C19H22IN5O4·0.3 CH3CN)C，H，N。
2-氯-5 ′-O-乙基腺苷(化合物75)。方法A。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-乙基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(63，656mg，1.51mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到388mg(1.18mmol，78％)，mp 117-119℃；Rf0.50(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.34(s，1H，H-8)，7.83(bs，2H，NH2)，5.81(d，1H，J＝5.49Hz，H-1′)，5.53(d，1H，J＝5.83Hz，OH-2′)，5.28(d，1H，J＝5.14Hz，OH-3′)，4.49(q，1H，J＝4.81Hz，H-2′)，4.13-4.01(m，1H，H-3′)，4.01-3.99(m，1H，H-4′)，3.62-3.42(m，2H，H-5′)，3.47(q，2H，J＝6.87Hz，OCH2)，1.12(t，3H，J＝6.87Hz，CH3)；MS m/z 330(M+H)+；元素分析(C12H16ClN5O4·0.4CH2Cl2)C，H，N。
2-氯-N6-環(huán)戊基-5′-O-乙基腺苷(化合物76)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-乙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(63，505mg，1.16mmol)和環(huán)戊基胺(1.74mmol，172μL)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到323mg(0.81mmol，70％)，mp 114-116℃；Rf0.55(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.34(s，1H，H-8)，8.32(bs，1H，NH)，5.82(d，1H，J＝5.15Hz，H-1′)，5.53(d，1H，J＝5.18Hz，OH-2′)，5.29(d，1H，J＝5.15Hz，OH-3′)，4.47-4.37(m，2H，CH，H-2′)，4.11-4.10(m，1H，H-3′)，4.00(q，1H，J＝4.47Hz，H-4′)，3.62-3.58(m，2H，H-5′)，3.47(q，2H，J＝7.21Hz，CH2CH3)，2.00-1.83(m，2H，環(huán)戊基)，1.71-1.51(m，4H，環(huán)戊基)，1.12(t，3H，J＝7.21Hz，CH3)；MS m/z 399(M+H)+；元素分析(C17H24ClN5O4)C，H，N。
2-氯-5′-O-乙基-N6-(3-碘代芐基)-腺苷(化合物77)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-乙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(63，375mg，0.87mmol)和3-碘代芐基胺·HCl(1.31mmol，352mg)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到366mg(0.67mmol，77％)，mp 80-82℃；Rf0.53(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.97(bs，1H，NH)，8.40(s，1H，H-8)，7.74(s，1H，CCHCI)，7.60(d，1H，J＝6.87Hz，CCHCHCH)，7.35(d，1H，J＝8.24Hz，CCHCH)，7.12(t，1H，J＝7.21Hz，CCHCH)，5.84(d，1H，J＝4.46Hz，H-1′)，5.56(d，1H，J＝5.49Hz，OH-2′)，5.30(d，1H，J-5.15Hz，OH-3′)，4.60(d，2H，J＝4.46Hz，NHCH2)，4.51(d，1H，J＝5.15Hz，H-2′)，4.14-4.11(m，1H，H-3′)，4.02(q，1H，J＝3.43Hz，H-4′)，3.63-3.58(m，2H，H-5′)，3.49(q，2H，J＝6.52Hz，CH2CH3)，1.13(t，3H，J＝6.52Hz，CH3)；MS m/z546(M+H)+；元素分析(C19H21ClIN5O4·0.8HCON(CH3)2)C，H，N。
5 ′-O-環(huán)丙基腺苷(化合物78)。方法A。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-環(huán)丙基-β-D-呋喃核糖基)嘌呤(64，334mg，0.81mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到172mg(0.56mmol，69％)，mp 130-132℃；Rf0.49(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.27(s，1H，H-8)，8.14(s，1H，H-2)，7.28(bs，2H，NH2)，5.87(d，1H，J＝4.80Hz，H-1′)，5.50(d，1H，J＝5.84Hz，OH-2′)，5.26(d，1H，J＝5.49Hz，OH-3′)，4.56(q，1H，J＝4.81Hz，H-2′)，4.10(q，1H，J＝4.47Hz，H-3′)，3.99(q，1H，J＝3.78Hz，H-4′)，3.67-3.59(m，2H，H-5′)，0.44-0.40(m，4H，OCH2CH2)；MS m/z 308(M+H)+；元素分析(C13H17N5O4·0.2CH2Cl2)C，H，N。
N6-環(huán)戊基-5′-O-環(huán)丙基腺苷(化合物79)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-O-環(huán)丙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(64，273mg，0.66mmol)和環(huán)戊基胺(1.00mmol，98μl)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到173mg(0.46mmol，70％)，mp 126-128℃；Rf0.53(10％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用乙醚重結(jié)晶；1H NMR(MeOD)δ8.17(s，1H，H-8)，8.13(s，1H，H-2)，5.94(d，1H，J＝4.46Hz，H-1′)，4.44(t，1H，J＝4.80Hz，H-2′)，4.18(t，1H，J＝5.15Hz，H-3′)，4.11-4.06(m，1H，H-4′)，3.69(q，2H，J＝9.95Hz，H-5′)，3.24-3.19(m，1H，CH)，2.11-1.82(m，2H，環(huán)戊基)，1.72-1.50(m，6H，環(huán)戊基)，0.48-0.39(m，4H，CH2CH2)；MS m/z 376(M+H)+；元素分析(C18H25N5O4·0.5(C2H5)2O)C，H，N。
N6-(3-碘代芐基)-5′-O-環(huán)丙基-腺苷(化合物80)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-環(huán)丙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(64，196mg，0.48mmol)和3-碘代芐基胺·HCl(0.72mmol，193mg)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到186mg(0.36mmol，74％)，mp 110-112℃；Rf0.49(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.43(bs，1H，NH)，8.31(s，1H，H-8)，8.21(s，1H，H-2)，7.71(s，1H，CCHCI)，7.57(d，1H，J＝7.55Hz，CCHCHCH)，7.34(d，1H，J＝7.89Hz，CCHCH)，7.09(t，1H，J＝7.90Hz，CCHCH)，5.89(d，1H，J＝5.15Hz，H-1′)，5.49(d，1H，J＝5.83Hz，OH-2′)，5.27(d，1H，J＝5.15Hz，OH-3′)，4.68-4.55(m，2H，NHCH2)，4.57(q，1H，J＝5.49Hz，H-2′)，4.11(q，1H，J＝4.46Hz，H-3′)，4.00(q，1H，J＝4.11Hz，H-4′)，3.67-3.62(m，2H，H-5′)，0.45-0.40(m，4H，CH2CH2)；MS m/z 524(M+H)+；元素分析(C20H22IN5O4·0.7CH3OH)C，H，N。
2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷(81)。方法A。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-環(huán)丙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(65，649mg，1.46mmol)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到379mg(1.11mmol，76％)，mp 122-124℃；Rf0.32(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.29(s，1H，H-8)，7.83(bs，2H，NH2)，5.79(d，1H，J＝5.49Hz，H-1′)，5.52(d，1H，J＝6.18Hz，OH-2′)，5.29(d，1H，J＝5.29Hz，OH-3′)，4.51(q，1H，J＝5.84Hz，H-2′)，4.08-3.99(m，2H，H-3′，4′)，3.68-3.63(m，2H，H-5′)，0.45-0.41(m，4H，CH2CH2)；MS m/z 342(M+H)+；元素分析(C13H16ClIN5O4·0.8 HCON(CH3)2)C，H，N。
N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷(82)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-(9-環(huán)丙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(65，543mg，1.22mmol)和環(huán)戊基胺(1.83mmol，180μL)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到400mg(0.98mmol，80％)，mp 104-106℃；Rf0.51(10％MeOH在二氯甲烷中)。產(chǎn)物用乙醚重結(jié)晶；1H NMR(DMSO-d6)δ8.34(bs，1H，NH)，8.28(s，1H，H-8)，5.81(d，1H，J＝5.15Hz，H-1′)，5.53(d，1H，J＝5.84Hz，OH-2′)，5.29(d，1H，J＝5.15Hz，OH-3′)，4.50(q，1H，J＝5.15Hz，H-2′)，4.50-4.47(m，1H，CH)，4.09-3.99(m，2H，H-3′，4′)，3.68 3.63(m，2H，H-5′)，1.94-1.89(m，2H，環(huán)戊基)，1.71-1.50(m，4H，環(huán)戊基)，0.46-0.41(m，4H，OCHCH2CH2)；MS m/z 410(M+H)+；元素分析(C18H24ClN5O4·0.2(C2H5)2O)C，H，N。
N6-(3-碘代芐基)-2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷(83)。方法B。該反應(yīng)用以下物質(zhì)進(jìn)行2，6-二氯-9-(2，3-二-O-乙酰基-5-O-環(huán)丙基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(65，483mg，1.08mmol)和3-碘代芐基胺·HCl(1.63mmol，439mg)。該混合物通過柱色譜純化(洗脫液5％MeOH在二氯甲烷中)。得到435mg(0.78mmol，72％)，mp 94-96℃；Rf0.49(10％MeOH在二氯甲烷中)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.93(t，1H，J＝6.18Hz，NH)，8.33(s，1H，H-8)，7.73(s，1H，CCHCI)，7.59(d，1H，J＝7.90Hz，CCHCHCH)，7.34(d，1H，J＝7.55Hz，CCHCH)，7.11(t，1H，J＝7.55Hz，CCHCH)，5.82(d，1H，J＝5.14Hz，H-1′)，5.54(d，1H，J＝5.84Hz，OH-2′)，5.30(d，1H，J＝5.15Hz，OH-3′)，4.61-4.48(m，3H，H-2′，NHCH2)，4.09-3.98(m，2H，H-3′，4′)，3.68-3.58(m，2H，H-5′)，0.45-0.41(m，4H，環(huán)丙基)；MS m/z 559(M+H)+；元素分析(C20H21ClIN5O4·0.5H2O)C，H，N。
化合物66-83的元素分析數(shù)據(jù)如下表4元素分析No 分子式 原子 理論值 實(shí)測值66 C11H15N5O4·0.5H2OC 45.51％ C 45.46％H 5.56％H 5.94％N 24.13％ N 24.37％67 C16H23N5O4·0.7CH3CN C 55.27％ C 55.08％H 6.69％H 6.56％N 21.11％ N 21.23％68 C18H20IN5O4C 43.48％ C 43.82％H 4.05％H 3.94％N 14.08％ N 13.74％
69 C11H14ClN5O4·1.0CH2Cl2C 35.97％ C 35.97％H 4.03％ H 4.21％N 17.48％ N 17.65％70 C16H22ClN5O4·0.1CH2Cl2C 49.28％ C 49.65％H 5.70％ H 5.52％N 17.85％ N 18.38％71 C18H19ClIN5O4·0.3CH3COCH3C 41.33％ C 41.71％H 3.82％ H 3.45％N 12.75％ N 13.00％72 C12H17N5O4·0.2CH2Cl2C 46.92％ C 46.56％H 5.62％ H 5.90％N 22.43％ N 22.09％73 C17H25N5O4·0.6CH3CNC 56.33％ C 56.19％H 6.96％ H 6.89％N 20.21％ N 20.24％74 C19H22IN5O4·0.3CH3CN C 44.95％ C 45.37％H 4.41％ H 4.60％N 14.18％ N 13.94％75 C12H16ClN5O4·0.4CH2Cl2C 40.94％ C 40.80％H 4.66％ H 5.03％N 19.25％ N 19.29％76 C17H24ClN5O4C 51.32％ C 51.65％H 6.08％ H 5.72％N 17.60％ N 17.85％77 C19H21ClIN5O4·0.8HCON(CH3)2C 42.53％ C 42.89％H 4.44％ H 4.43％N 13.44％ N 13.04％78 C13H17N5O4·0.8H2O C 48.56％ C 48.66％H 5.82％ H 5.69％N 21.78％ N 21.53％79 C18H25N5O4·0.5(C2H5)2O C 58.23％ C 58.50％H 7.33％ H 6.87％N 16.98％ N 17.05％80 C20H22IN5O4·0.7CH3OHC 45.55％ C 45.65％H 4.58％ H 4.38％N 12.83％ N 12.70％81 C13H16ClN5O4·0.8HCON(CH3)2C 46.21％ C 46.21％H 5.44％ H 5.36％N 20.30％ N 20.20％82 C18H24ClN5O4·0.2(C2H5)2OC 53.16％ C 53.08％H 6.17％ H 6.52％N 16.49％ N 16.74％83 C20H21ClIN5O4·0.5H2O C 42.38％ C 42.46％H 3.91％ H 4.11％N 12.36％ N 12.26％總生物學(xué)方法放射性配體結(jié)合研究按照以前公開的方法(大鼠A1)在GTP不存在條件下用[3H]DPCPX進(jìn)行檢測33。按照Gao等的方法確定腺苷A2A受體(大鼠)親合性34?；旧先缜八龅姆椒ù_定腺苷A3受體親合性4，35。簡言之，在50/10/1緩沖液(50mM Tris/10mM MgCl2/1mM乙二胺四乙酸(EDTA)和0.01％3-([3-膽堿基丙基]-二甲基銨)-1-丙基磺酸鹽(CHAPS))中在玻璃試管中進(jìn)行試驗(yàn)，該試管中有50μL的HEK 293細(xì)胞膜混懸液(10-30μg)、25μl[125I]AB MECA(最終濃度0.15nM)和25μL的配體。孵育在37℃下進(jìn)行1小時(shí)，并通過用Whatman GF/B過濾器快速過濾終止，使用Brandell細(xì)胞收集器(Brandell，Gaithersburg，MD)。用3ml緩沖液將試管洗滌3次。用Beckman 5500Bγ-計(jì)數(shù)器確定放射性。在10-5M R-PIA存在下確定非特異性結(jié)合。
cAMP試驗(yàn)A1和A3在24孔組織培養(yǎng)板中以單層形式讓表達(dá)了人腺苷A1或A3受體的CHO細(xì)胞生長過夜(400μL/孔；2×105細(xì)胞/孔)。在Dulbecco′s改良Eagles培養(yǎng)基(DMEM)/N-2-羥基乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)緩沖液(0.60g HEPES/50mL DMEM pH 7.4)中進(jìn)行cAMP的生成。將每個(gè)孔用DMEM/HEPES緩沖液(250μL)洗滌2次，向每個(gè)孔中加入100μL腺苷脫氨基酶(最終濃度5IU/ml)、100μl洛利普蘭和西洛酰胺的混合物(最終濃度各50μM)和100μl激動(dòng)劑(最終濃度±100倍Ki值)。在37℃下孵育40分鐘后，加入100μl的毛喉素(最終濃度10μM)。在37℃下15分鐘后，通過除去培養(yǎng)基并加入200μl 0.1M HCl停止反應(yīng)。細(xì)胞在-20℃下保存直到試驗(yàn)。
按照cAMP結(jié)合蛋白方案28檢測cAMP的量，其中作了如下的小改進(jìn)。緩沖液使用150mM K2HPO4/10mM EDTA/0.2％牛血清白蛋白(BSA)，pH 7.5。樣品(20μl+30μl 0.1M HCl)在通過Whatman GF/B過濾器過濾前至少在0℃下孵育2.5小時(shí)。再用2×2ml Tris HCl緩沖液(pH 7.4，4℃)清洗。在Packard Emulsifier Safe閃爍流體(3.5ml)提取24小時(shí)后對過濾器放射性進(jìn)行計(jì)數(shù)。
數(shù)據(jù)分析用軟件包Prism(Graph Pad，San Diego，CA)通過競爭曲線的非線性回歸法由置換曲線計(jì)算表觀Ki和EC50。
在放射性配體結(jié)合試驗(yàn)中檢測所有化合物以確定它們對大鼠腦皮層中腺苷A1受體、大鼠紋狀體中A2A受體和在HEK293細(xì)胞中表達(dá)的人A3受體的親合性(表5)。對于腺苷A1受體，使用氚代拮抗劑[3H]-1，3-二丙基-8環(huán)戊基黃嘌呤([3H]DPCPX)，而對于腺苷A2A受體，使用氚代拮抗劑[3H]ZM 241385。還使用腺苷A3受體激動(dòng)劑[125I]AB-MECA。置換試驗(yàn)在不存在GTP的條件下進(jìn)行。
也在功能試驗(yàn)中檢測所有的化合物。首先，評(píng)價(jià)化合物(66-83)通過表達(dá)在CHO細(xì)胞中的人腺苷A2A受體或者通過HEK 293細(xì)胞中表達(dá)的人腺苷A3受體，抑制毛喉素(10μM)誘發(fā)的cAMP產(chǎn)生的能力。其次，測定當(dāng)化合物66-83結(jié)合受體時(shí)，對結(jié)合細(xì)胞膜的鳥苷-5′-O-(3-[35S]硫代)三磷酸([35S]GTPγS)的調(diào)節(jié)。使用大鼠腦皮層(A1受體)和用人腺苷A3受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞的膜制品(在結(jié)合研究中使用的由HEK293細(xì)胞制備的膜沒有發(fā)生顯著的刺激)。
結(jié)果和討論在腺苷或其衍生物之一的5′-位進(jìn)行的選擇性烷基化非常困難，因?yàn)楸仨毞浅Ｐ⌒牡胤乐乖谠搲A部分存在的多個(gè)活性氮原子上的烷基化(除了N6氮原子，其反應(yīng)性差)。用KOH、18-冠醚-6和碘代甲烷處理2，3′-O-異亞丙基腺苷或2′，3′-O-異亞丙基肌苷50，51，分別得到N1甲基化的衍生物或者N1-甲基化產(chǎn)物與N1，5′-二甲基化化合物的混合物。在甲醇鹽甲醇中回流5′-氯-5′-脫氧腺苷衍生物又只得到了起始物。因此，先將核糖烷基化，然后將產(chǎn)物與適當(dāng)?shù)碾s環(huán)堿偶聯(lián)是優(yōu)選的方法，隨后進(jìn)行其它反應(yīng)。
D-核糖(49)的1-、2-和3-羥基的保護(hù)按照改良的Leonard等描述的方法進(jìn)行48。將D-核糖溶解于丙酮、甲醇和2，2-二甲氧基丙烷的混合物中，并直接向溶液中通入HCl氣體，而不是加入用HCl氣體飽和的甲醇。以良好的收率(95％)得到了被保護(hù)的β-糖(50)。為了將5-羥基烷基化，將50冷卻下溶解于DMF(在使用環(huán)丙基溴情況下不是這樣)，室溫下加入適當(dāng)?shù)耐榛u化物。得到化合物51-53，收率38-97％。
一般來說，在糖部分的2-、3-和5-位已經(jīng)使用苯甲酰基保護(hù)基在糖基化反應(yīng)中較α-核苷而言促進(jìn)β-核苷的形成，即，當(dāng)被保護(hù)的糖與雜環(huán)堿偶聯(lián)時(shí)44。因此，除去51的異亞丙基保護(hù)基以獲得甲基甲基5-O-甲基-D-呋喃核糖苷衍生物。接著用苯甲酰氯在二氯甲烷和吡啶中處理得到所需的甲基2，3-二-O-苯甲酰基-5-O-甲基-D-呋喃核苷，但是很難除去過量的苯甲酰氯52。用乙酸、醋酸酐和硫酸處理甲基2，3-二-O-苯甲?；?5-O-甲基-D-呋喃核糖苷以可以接受的收率成功地將1-O-甲基轉(zhuǎn)變?yōu)?-O-乙酰基52。由于此方法非常辛苦，還開發(fā)了用乙?；耆Ｗo(hù)糖的方法。用硫酸(0.02M)和乙醇除去化合物51-53的保護(hù)基，除所需產(chǎn)物外，還得到了一定量的1-O-乙基取代的衍生物。相反，用0.04M HCl回流51-53，隨后用BaCO3中和，以良好的收率獲得了化合物54-5649。還完成了乙酰基保護(hù)基的引入，得到57-59。按照Vorbrüggen的方法45將57與6-氯嘌呤偶聯(lián)，導(dǎo)致了6-氯-9-(2，3-二-O-乙?；?5-O-甲基-β-D-呋喃核糖基)-嘌呤(60)的形成，收率令人滿意(48％)，這表明不再需要費(fèi)力的苯甲酰基保護(hù)。以57-59起始以更高的收率(65-84％)獲得了化合物61-65，由NMR光譜推斷只形成了β-同系物。在Vorbrüggen方法中使用Lewis酸，三甲基硅烷基-三氟甲磺酸鹽(TMS三氟甲磺酸鹽)，屬于相對來說新的一類酸。與更傳統(tǒng)的Lewi s酸氯化錫(SnCl4)相比收率更高53。兩種Lewis酸帶來了類似收率的偶合產(chǎn)物，其是6-氯-嘌呤和商購的1-O-乙?；?2，3，5-三-O-苯甲?；?β-D-呋喃核糖的糖基化反應(yīng)的結(jié)果。最后，用EtOH/NH3、環(huán)戊基胺或3-碘代芐基胺將化合物60-65氨基化，得到未保護(hù)的N6，5′-二或N6，C2，5′-三取代的腺苷衍生物66-838，9。
表5顯示了所有合成的二-和三-取代的最終產(chǎn)物的放射性配體結(jié)合數(shù)據(jù)，其中取代基如通式(I)所示，W表示氧原子。
表5放射性配體結(jié)合試驗(yàn)Ki(nM)或在10-5M下置換率％NoR1R2R3A1aA2AbA3cA1/A3CPA HH c-C5H97.14±2.30 45.9％ 281±56 0.022-Cl-CPA HCl c-C5H99.47±0.86 53.1％ 204±44 0.05IB MECA -H CH2(C6H4)-m-I1400±240 39.4％ 6.9±0.2 2082-Cl-IB -Cl CH2(C6H4)-m-I710±41 23.5％ 7.2±0.9 98MECA66Me H H164±37 261±6540.3±8.14.167Me H c-C5H933.7±6.9 366±109 79.0±30.0 0.468Me H CH2(C6H4)-m-I179±40 373±804.2±0.5 42.669Me Cl H169±30 284±5528.3±13.0 6.070Me Cl c-C5H916.3±1.3 1390±140 44.9±4.90.471Me Cl CH2(C6H4)-m-I112±10 527±217.3±0.2 15.372Et H H2300±320 415±6923.3±3.998.773Et H c-C5H927.8±2.2 33.9％ 32.3±9.20.974Et H CH2(C6H4)-m-I198±36 40.4％ 3.3±1.0 60.075Et Cl H327±15 659±168 15.1±6.921.776Et Cl c-C5H927.1±1.8 1730±700 67.0±44.6 0.477Et Cl CH2(C6H4)-m-I254±28 848±607.4±1.0 34.378環(huán)丙基 H H575±52 739±1645.6±7.412.679環(huán)丙基 H c-C5H940.5±6.4 24.3％ 104±20 0.480環(huán)丙基 H CH2(C6H4)-m-I733±36 43.7％ 9.1±1.9 80.581環(huán)丙基 Cl H595±84 885±8926.7±4.322.382環(huán)丙基 Cl c-C5H980.8±12.0 34.6％ 86.0±15.5 0.983環(huán)丙基 Cl CH2(C6H4)-m-I1430±200 38.7％ 20.5±8.169.8a從大鼠皮層膜中置換[3H]DPCPX24，33。
b從大鼠紋狀體膜中置換[3H]ZM24138523，34。
c從在HEK293細(xì)胞中表達(dá)的人A3受體中置換[125I]AB MECA26，35。
由此表中可以明顯看出，大多數(shù)化合物對相同A2A受體比腺苷A1或A3受體的親合力低。帶有未被取代的N6氨基的化合物(66、69、72、75、78、81)較A1而言顯示出腺苷A3受體選擇性，其中A1/A3選擇性比例為4.1(化合物66)至98.7(化合物72)。N6-位的環(huán)戊基帶來高的腺苷A1受體親合力，對A1受體的選擇性也最高，而N6-(3-碘代芐基)腺苷衍生物的腺苷A3受體親合力最高，并具有對此受體的高度選擇性，這與以前報(bào)告的這些N6-取代基一致1，2，5?？偟膩碚f，當(dāng)在2-位引入氯時(shí)，腺苷A1受體親合力沒有變化或增加(高達(dá)2倍)，伴隨腺苷A1受體選擇性稍微增加(高達(dá)4倍)。在2-位引入氯原子對腺苷A3受體的親合力和選擇性方面具有不同作用。N6-未被取代的衍生物的腺苷A3受體親合力稍微增加，而對于N6-(3-碘代芐基)取代的化合物來說，它們有某種程度的降低。當(dāng)在C2引入氯原子時(shí)，對腺苷A3受體的存在下降低至約4倍。2-位氯原子對受體親合力的作用在取代的腺苷中難以預(yù)計(jì)。已表明對于CPA和N6-(3-碘代芐基)腺苷來說，對腺苷A1受體的親合力和選擇性與A2A受體比較而言有所增加54。但是，當(dāng)在5′-N-甲基甲酰氨基-取代的N6-(3-碘代芐基)腺苷55的2-位引入氯原子時(shí)，對腺苷A1和A2A受體的親合力都降低，而對A3受體的親合力增加。相反，在本研究中在5 ′-O-烷基取代的衍生物的2-位引入氯原子時(shí)，與A1受體相比這些化合物對腺苷A3受體的選擇性稍微降低。
5′-取代基也影響化合物的親合力和選擇性。對于腺苷A1受體來說，帶有5′-O-甲基的化合物具有最高的受體親合力，而5′-O-環(huán)丙基取代的衍生物在大多數(shù)情況下顯示出最低的親合力。只有在N6，C2-未被取代的系列(66、72、78)中5′-O-乙基-腺苷對腺苷A1受體具有最低的親合力。對于腺苷A3受體，帶有5′-O-乙基取代基的衍生物具有最高的受體親合力。5′-O-甲基取代的衍生物的腺苷A3受體親合力與5′-O-環(huán)丙基取代的化合物相當(dāng)或比其稍高。雖然5′-O-環(huán)丙基對腺苷A1和A3受體耐受性都非常好(Ki值低至納摩爾范圍)，但是較小的基團(tuán)似乎是優(yōu)選的，例如，對于腺苷A1受體優(yōu)選5′-O-甲基，對于A3受體優(yōu)選5 ′-O-乙基。在大多數(shù)情況下5 ′-O-甲基帶來最高的腺苷A1受體選擇性(在含相同的N6-和C2-取代基的系列中)，而5 ′-O-環(huán)丙基最常見的是帶來較A1而言最高的腺苷A3受體選擇性。帶有5′-O-乙基取代基的化合物比帶有5′-O-甲基的化合物對腺苷A3受體具有更高的親合力，并在多數(shù)情況下與A2A受體相比對此受體具有最高的選擇性。雖然已描述了MECA比NECA對腺苷A3受體比對A2A受體具有較高的親合力(和選擇性)，但是如本文中所示，腺苷A3受體更好地容納大的5′-烷硫基取代基，而不是較小的取代基(5′-甲硫基)。本文中公開的結(jié)果顯示腺苷A3受體能夠恨好地容納大的5′-取代基。最后，化合物74比對照化合物IB-MECA和2-Cl-IB-MECA顯示了對腺苷A3受體較高的親合力(Ki值3.3nM)，雖然其對腺苷A3的選擇性比A1受體的選擇性略低。
在表6中，給出了化合物抑制毛喉素誘發(fā)的(10μM)cAMP產(chǎn)生的能力。
表6抑制a毛喉素誘發(fā)的cAMPNo R1R2R3％抑制A1b％抑制A3cCPA - - - 69±3 -Cl-IB-MECA - - - - 83±166 Me H H75±376±267 Me H c-C5H974±4 58±668 Me H CH2(C6H4)-m-I53±1033±969 Me Cl H78±4 69±370 Me Cl c-C5H973±4 42±671 Me Cl CH2(C6H4)-m-I37±1517±772 Et H H57±1165±773 Et H c-C5H969±6 37±674 Et H CH2(C6H4)-m-I6±21 11±675 Et Cl H67±7 51±576 Et Cl c-C5H962±6 31±977 Et Cl CH2(C6H4)-m-I -72±38#7±478 c-Prop H H61±2 59±679 c-Prop H c-C5H962±4 26±780 c-Prop H CH2(C6H4)-m-I-104±22#10±1281 c-Prop Cl H49±9 44±882 c-Prop Cl c-C5H943±9 19±783 c-Prop Cl CH2(C6H4)-m-I-118±41#-2.6±4
a抑制百分率(±SEM，n＝3)b在A1CHO細(xì)胞中與對照完全激動(dòng)劑CPA(10μM)相比c與對照完全激動(dòng)劑Cl-IB-MECA(10μM)相比所有化合物以±100×Ki值檢測#在此試驗(yàn)中似乎表現(xiàn)為逆(部分)激動(dòng)劑表6表明三種N6-取代的系列中的化合物顯示出通過腺苷A1受體抑制毛喉素誘發(fā)的cAMP產(chǎn)生的類似傾向。在6-位帶有完整氨基的化合物和N6-環(huán)戊基取代的衍生物能夠以類似的程度抑制cAMP產(chǎn)生，幾乎與對照完全激動(dòng)劑CPA相當(dāng)，而N6-(3-碘代芐基)取代的衍生物抑制毛喉素引起的cAMP產(chǎn)生能力稍低?；衔?8比化合物66和67具有較低的內(nèi)在活性，它們僅僅是N6-取代基不同，這暗示3-碘代芐基在N6位可以帶來對腺苷A1受體的部分激動(dòng)作用。此外，在三種N6-取代的系列中，與5′-O-乙基和5′-O-環(huán)丙基取代的化合物相比，5 ′-O-甲基取代的衍生物具有最高的內(nèi)在活性。在此試驗(yàn)中，前兩種化合物表現(xiàn)出最低的內(nèi)在活性，并表現(xiàn)為腺苷A1受體的部分激動(dòng)劑。此處，在C2-位的氯原子的作用對內(nèi)在活性的作用不明確。
實(shí)施例3材料將化合物34、37、69和70溶解于二甲基亞砜(DMSO)中，并進(jìn)一步在RPMI(體外研究)或PBS(體內(nèi)研究)中稀釋。
方法人臍血G-CSF從產(chǎn)房生后立即收集人臍血樣本。按照位于Rabin醫(yī)學(xué)中心(Petah Tikva，以色列)的Helsinky研究會(huì)建立的規(guī)程進(jìn)行試驗(yàn)。將樣本以等體積加到菲可帕克組織液(ficoll histopaque)中，并以1700RPM離心20分鐘。收集單核細(xì)胞，用PBS洗滌兩次并在添加了20％的人AB型血清和50μM的不同化合物的RPMI中孵育(1.5×106細(xì)胞/ml)48小時(shí)。收集上清夜，分成等份并保存在-20℃下。用商購的人ELISA試劑盒(R&D系統(tǒng)，Minneapolis，MN)檢測G-CSF水平。
骨髓細(xì)胞增殖試驗(yàn)由ICR小鼠的股骨獲得骨髓細(xì)胞。讓它們通過25G針頭使細(xì)胞解聚。在96孔微量板中，在10μM濃度的不同化合物存在下，細(xì)胞(3×105/孔)用RPMI培養(yǎng)基培養(yǎng)，該培養(yǎng)基中含有10％胎牛血清(FBS)(Biological Industries，Beit Haemek，以色列)。將含細(xì)胞的培養(yǎng)物懸浮于RPMI培養(yǎng)基中并用10％FBS作為對照。在孵育的最后18小時(shí)，向各孔中加入1μCi3[H]-胸苷，之后收集細(xì)胞，并在LKB液體閃爍計(jì)數(shù)器(LKB，Piscataway，NJ，USA)中測定3[H]-胸苷的吸收。
體內(nèi)研究為了檢測不同化合物提高白細(xì)胞(WBC)和絕對嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(ANC)等血液學(xué)參數(shù)，給小鼠每天口服兩次化合物(每劑量150μg/kg體重)，連續(xù)兩天?；衔镒詈笠淮谓o藥后48小時(shí)，采集血樣。用Coulter計(jì)數(shù)器進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，在用May-Grunvald-Giemsa溶液染色的血涂片樣本上進(jìn)行差示細(xì)胞計(jì)數(shù)。還收集血清樣本進(jìn)行G-CSF檢測，如上所述。
結(jié)果和討論通過檢測它們對G-CSF產(chǎn)生的體外和體內(nèi)作用，及其對骨髓細(xì)胞、白細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞增殖的作用，評(píng)價(jià)化合物34、37、69和70作為A1或A3腺苷受體激動(dòng)劑的活性。
圖1顯示了與對照(無藥物)相比被測化合物能夠誘導(dǎo)G-CSF產(chǎn)生。有時(shí)此誘導(dǎo)作用與抑制A3受體激動(dòng)劑IB-MECA獲得的水平類似。
此外，正如通過與不同化合物或與IB-MECA(作為陽性對照)孵育時(shí)對3[H]-腺苷摻入細(xì)胞的檢測，顯示被測化合物能夠誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞增殖。結(jié)果見圖2。
被測化合物的體內(nèi)作用在圖3A、3B和3C中給出。具體地講，當(dāng)給小鼠口服被測化合物時(shí)，作為治療結(jié)果，白細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和血清G-CSF水平升高。
上述結(jié)果顯示被測化合物，即化合物34、36、69和70，可以是A1或A3腺苷受體的激動(dòng)劑，并因此具有治療用途，例如，在對抗藥物誘導(dǎo)的骨髓毒性中。
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權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物或其鹽 其中-W表示氧原子或硫原子；-R1表示低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；-R2表示鹵素、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)鏈炔基或低級(jí)同位亞烷基肼基；-R3表示氫原子、低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、(芳)烷基、芳基或?；桨?；所述環(huán)烷基、芳基或(芳)烷基可以被選自鹵素、羥基或羥基烷基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中W表示硫原子，R1表示烷基，R2表示鹵素，而R3表示氫原子。
3.權(quán)利要求2所述的化合物，其中W表示硫原子，R1表示選自甲基、乙基、正丙基或異丙基的烷基，R2表示碘原子，而R3表示氫原子。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中W表示硫原子，R1表示烷基，R2表示鏈炔基，而R3表示氫原子。
5.權(quán)利要求4所述的化合物，其中W表示硫原子，R1表示選自甲基、乙基、正丙基和異丙基的低級(jí)烷基，R2表示1-己炔基，而R3表示氫原子。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，其中W表示硫原子，R1表示烷基，R2表示亞烷基肼基，而R3表示氫原子。
7.權(quán)利要求6所述的化合物，其中W表示硫原子，R1表示選自甲基、乙基、正丙基和異丙基的低級(jí)烷基，R2表示N′-3-甲基-1-亞丁基肼基，而R3表示氫原子。
8.權(quán)利要求1所述的化合物，其中W表示氧原子，R1表示烷基，R2表示鹵原子，而R3表示選自氫原子、環(huán)烷基、被取代或未被取代的(芳)烷基的取代基。
9.權(quán)利要求1所述的化合物，其中W表示氧原子，R1表示甲基、乙基或環(huán)丙基，R2表示氯原子，而R3表示氫原子、環(huán)戊基或鹵代芐基。
10.權(quán)利要求9所述的化合物，其中所述鹵代芐基是3-碘代芐基。
11.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-碘-5′-甲硫基腺苷。
12.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-碘-5′-乙硫基腺苷。
13.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-碘-5′-丙硫基腺苷。
14.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-碘-5′-異丙硫基腺苷。
15.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-甲硫基腺苷。
16.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-乙硫基腺苷。
17.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-丙硫基腺苷。
18.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-異丙硫基腺苷。
19.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-甲硫基腺苷。
20.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-5′-乙硫基-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)腺苷。
21.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-丙硫基腺苷。
22.權(quán)利要求1所述的化合物，其是5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-異丙硫基腺苷。
23.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-環(huán)戊基-5′-O-甲基腺苷。
24.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-(3-碘芐基)-5′-O-甲基腺苷。
25.權(quán)利要求1所述的化合物，其是2-氯-5′-O-甲基腺苷。
26.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-甲基腺苷。
27.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-(3-碘芐基)-2-氯-5′-O-甲基腺苷。
28.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-環(huán)戊基-5′-O-乙基腺苷。
29.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-(3-碘芐基)-5′-O-乙基腺苷。
30.權(quán)利要求1所述的化合物，其是2-氯-5′-O-乙基腺苷。
31.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-乙基腺苷。
32.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-(3-碘芐基)-2-氯-5′-O-乙基腺苷。
33.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-環(huán)戊基-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
34.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-(3-碘芐基)-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
35.權(quán)利要求1所述的化合物，其是2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
36.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
37.權(quán)利要求1所述的化合物，其是N6-(3-碘芐基)-2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
38.藥物組合物，其中含有通式(I)的化合物或其鹽作為活性組分以及藥用添加劑 其中-W表示氧原子或硫原子；-R1表示低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；-R2表示鹵素、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)鏈炔基或低級(jí)同位亞烷基肼基；-R3表示氫原子、低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、(芳)烷基、芳基或?；桨?；所述環(huán)烷基、芳基或(芳)烷基可以被選自鹵素、羥基或羥基烷基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。
39.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是通式(I)的化合物，所述化合物中W表示硫原子，R1表示烷基，R2表示鹵素，而R3表示氫原子。
40.權(quán)利要求39所述的組合物，其中所述活性組分是通式(I)的化合物，所述化合物中W表示硫原子，R1表示選自甲基、乙基、正丙基或異丙基的烷基，R2表示碘原子，而R3表示氫原子。
41.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是通式(I)的化合物，所述化合物中W表示硫原子，R1表示烷基，R2表示鏈炔基，而R3表示氫原子。
42.權(quán)利要求41所述的組合物，其中所述活性組分是通式(I)的化合物，所述化合物中W表示硫原子，R1表示選自甲基、乙基、正丙基和異丙基的低級(jí)烷基，R2表示1-己炔基，而R3表示氫原子。
43.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是通式(I)的化合物，所述化合物中W表示硫原子，R1表示烷基，R2表示亞烷基肼基，而R3表示氫原子。
44.權(quán)利要求43所述的組合物，其中所述活性組分是通式(I)的化合物，所述化合物中W表示硫原子，R1表示選自甲基、乙基、正丙基和異丙基的低級(jí)烷基，R2表示N′-3-甲基-1-亞丁基肼基，而R3表示氫原子。
45.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是通式(I)的化合物，所述化合物中W表示氧原子，R1表示烷基，R2表示鹵原子，而R3表示選自氫原子、環(huán)烷基、被取代或未被取代的(芳)烷基的取代基。
46.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是通式(I)的化合物，所述化合物中W表示氧原子，R1表示甲基、乙基或環(huán)丙基，R2表示氯原子，而R3表示氫原子、環(huán)戊基或鹵代芐基。
47.權(quán)利要求46所述的組合物，其中所述鹵代芐基是3-碘代芐基。
48.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-碘-5′-甲硫基腺苷。
49.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-碘-5′-乙硫基腺苷。
50.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-碘-5′-丙硫基腺苷。
51.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-碘-5′-異丙硫基腺苷。
52.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-甲硫基腺苷。
53.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-乙硫基腺苷。
54.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-丙硫基腺苷。
55.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-(1-己炔基)-5′-異丙硫基腺苷。
56.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-甲硫基腺苷。
57.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-5′-乙硫基-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)腺苷。
58.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-丙硫基腺苷。
59.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是5′-脫氧-2-(N′-3-甲基-1-亞丁基肼基)-5′-異丙硫基腺苷。
60.權(quán)利要求37所述的組合物，其中所述活性組分是N6-環(huán)戊基-5′-O-甲基腺苷。
61.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-(3-碘芐基)-5′-O-甲基腺苷。
62.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是2-氯-5′-O-甲基腺苷。
63.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-甲基腺苷。
64.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-(3-碘芐基)-2-氯-5′-O-甲基腺苷。
65.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-環(huán)戊基-5′-O-乙基腺苷。
66.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-(3-碘芐基)-5′-O-乙基腺苷。
67.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是2-氯-5′-O-乙基腺苷。
68.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-乙基腺苷。
69.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-(3-碘芐基)-2-氯-5′-O-乙基腺苷。
70.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-環(huán)戊基-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
71.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-(3-碘芐基)-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
72.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
73.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-環(huán)戊基-2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
74.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述活性組分是N6-(3-碘芐基)-2-氯-5′-O-環(huán)丙基腺苷。
75.如下通式(I)的化合物或其鹽在制備藥物組合物中的用途 其中-W表示氧原子或硫原子；-R1表示低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；-R2表示鹵素、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)鏈炔基或低級(jí)同位亞烷基肼基；-R3表示氫原子、低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、(芳)烷基、芳基或酰基苯胺；所述環(huán)烷基、芳基或(芳)烷基可以被選自鹵素、羥基或羥基烷基的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的C2，5′－二取代的和N
文檔編號(hào)A61P25/04GK1537115SQ02807201
公開日2004年10月13日 申請日期2002年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2001年3月3日
發(fā)明者E·范迪爾伯格, A·伊澤曼, E 范迪爾伯格, 舐 申請人:萊頓大學(xué), 坎-菲特生物藥物有限公司