專利名稱：一種抗白內(nèi)障眼藥和角膜滲透促進(jìn)劑氮酮的眼科應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于眼科藥物治療技術(shù)領(lǐng)域。
(2)另一種方法是通過破壞角膜上皮的屏障功能增加水溶性藥物的角膜通透性，此方法對眼組織具有潛在的的危險(xiǎn)。
因此，進(jìn)一步研制配方增加水溶性藥物的角膜通透性，提高藥物的生物利用度具有較大的實(shí)用價(jià)值。
氮酮(azone，化學(xué)名為1-正十二烷基氮雜環(huán)庚烷酮-2)是許多外用藥劑的強(qiáng)效透皮吸收促進(jìn)劑，且對人的皮膚、粘膜幾乎無毒無刺激性。已用于開發(fā)系列外用藥，系列經(jīng)皮吸收控釋藥物及系列化妝品。azone能否增加滴眼劑的角膜滲透，有無眼科臨床應(yīng)用價(jià)值一直是大家近年來關(guān)注的課題。
1994年美國Tang-liu等的研究表明，0.1％azone在體外實(shí)驗(yàn)中(仿眼角膜結(jié)構(gòu)模型)可使一些水溶性藥物(乙酰唑胺、甲氰咪呱、呱乙啶、磺醋酰胺)的角膜通透性增加20倍左右，中等親脂性藥物(強(qiáng)的松龍)的角膜通透性至少增加2-5倍，這一結(jié)果非常令人鼓舞。但他們指出azone最終能否應(yīng)用于眼科臨床取決于它對眼組織有無毒性。
Newton等將環(huán)孢霉素溶解于5％azone中，給兔點(diǎn)眼6周，通過臨床、放射免疫測定、組織病理和免疫組織學(xué)研究，在觀察環(huán)孢霉素對角膜移植排斥反應(yīng)發(fā)生率和嚴(yán)重程度影響的同時(shí)，未發(fā)現(xiàn)高濃度azone對角膜上皮細(xì)胞的毒性作用。但是，Duand-Cavagna等的研究卻發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用1％～2％的azone滴兔眼一天3次，持續(xù)29天，裂隙燈檢查發(fā)現(xiàn)，約1/3-1/2兔眼角膜輕度水腫，掃描電鏡發(fā)現(xiàn)角膜內(nèi)皮形態(tài)改變。但不能確定角膜內(nèi)皮的損害是azone的直接作用還是配方中氯芐烷胺(陽離子表面活性劑及防腐劑)所致。
1999年徐巖、陳祖基等應(yīng)用0.3％、0.6％、0.9％azone給家兔點(diǎn)眼，每天3次，連續(xù)4周，發(fā)現(xiàn)全部實(shí)驗(yàn)眼和對照眼結(jié)膜、角膜均無損害，其它眼組織形態(tài)正常，角膜內(nèi)皮形態(tài)和細(xì)胞活性均正常。因而認(rèn)為Duand-Cavagna實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的角膜內(nèi)皮改變，不能排除與其配方中加入的氯芐烷胺有關(guān)，從而提示azone有希望用于眼藥配方。
但是，迄今為止所見研究報(bào)道主要還限于體外實(shí)驗(yàn)研究和azone對角膜及其眼組織結(jié)構(gòu)的毒性影響方面。盡管Newton等將環(huán)孢霉素溶解于5％azone中，但是他們只不過是將azone作為一種眼科溶劑，在觀察環(huán)孢霉素對角膜移植排斥反應(yīng)影響的同時(shí)，觀察了高濃度azone(5％)對角膜上皮細(xì)胞的毒性反應(yīng)。
本發(fā)明的技術(shù)方案由芐達(dá)賴氨酸、氮酮、聚乙二醇等藥物按一定比例配制而成。具體配方如下必備成分配比幅度A.芐達(dá)賴氨酸(主藥) 0.500gB.氮酮(促滲透劑)0.220g～1.102gC.聚乙二醇--400(非離子表面活性劑) 1.160ml～3.850mlD.羥丙甲基纖維素(助懸劑)0.500gE.磷酸二氫鈉(緩沖液)0.018gF.磷酸氫二鈉(緩沖液)0.190gG.氯化鈉0.300g～0.800gH.硫柳汞(防腐劑)0.001gI.注射用水 加至100ml本發(fā)明采用高效液相色譜法(high pressure liquid chromatography，HPLC)測定兔房水中芐達(dá)賴氨酸含量，實(shí)驗(yàn)組房水中芐達(dá)賴氨酸含量為對照組2.14倍和2.43倍。
眼刺激反應(yīng)評(píng)分、石蠟切片、錐藍(lán)-茜素紅雙重染色及掃描電鏡等表明azone對結(jié)膜、角膜無刺激；角膜(包括上皮和內(nèi)皮細(xì)胞)、晶狀體、虹膜、玻璃體等眼內(nèi)組織形態(tài)與結(jié)構(gòu)無異常改變。
用鈣熒光探針Fluo-3/AM結(jié)合激光共聚焦顯微鏡(LSCM)跟蹤監(jiān)測不同濃度azone對培養(yǎng)兔角膜上皮細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+的變化，表明azone對角膜上皮細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度無明顯影響，細(xì)胞活性正常(

圖1-圖4)。Kitazana等在研究角質(zhì)細(xì)胞生長因子的實(shí)驗(yàn)，即應(yīng)用1000倍體外條件下該生長因子的有效濃度，作為滴眼液濃度。由此可見，對角膜上皮細(xì)胞而言，現(xiàn)有處方中使用的azone濃度十分安全。
本發(fā)明所述華臣眼液正在做進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)并將進(jìn)行臨床驗(yàn)證。
綜上所述，azone作為角膜滲透促進(jìn)劑，有效地促進(jìn)了抗白內(nèi)障藥物-芐達(dá)賴氨酸(醛糖還原酶抑制劑)往眼內(nèi)的滲透，房水中藥物濃度為對照組的2.14倍和2.43倍。同時(shí)眼刺激反應(yīng)評(píng)分、石蠟切片、錐藍(lán)-茜素紅雙重染色、掃描電鏡以及分子細(xì)胞生物學(xué)研究(熒光探針結(jié)合共聚焦顯微鏡)等表明目前使用的azone濃度是十分安全的。與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著效果在于1.低濃度azone在兔體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中安全有效地提高了芐達(dá)賴氨酸等藥物的角膜通透性，為azone用于開發(fā)系列眼藥，提高藥物的生物利用度，造福于眼病患者提供了依據(jù)，從而確定了azone在眼科的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
2.低濃度azone使房水中芐達(dá)賴氨酸濃度明顯提高，必將加強(qiáng)該藥物對醛糖還原酶的抑制，從而提高該藥物對致盲主要疾病-白內(nèi)障的防治效果，使之成為更為理想的抗白內(nèi)障眼藥。
3.由于低濃度azone即能使房水中藥物濃度明顯提高，因而使減少用藥次數(shù)成為可能，這樣不但能提高患者長期用藥的依從性，而且還能避免主藥長期應(yīng)用可能帶來的潛在不良反應(yīng)。對其他可與azone配方的眼科藥物也是如此。
4.同時(shí)由于低濃度azone能使房水中藥物濃度明顯提高，不僅可以增加原來角膜通透較差藥物的角膜滲透性，提高其生物利用度，而且可能使原需口服(如乙酰唑胺)或其它途徑(如球結(jié)膜下注射等)給藥才能吸收的藥物通過局部滴眼即能吸收，從而使給藥途徑趨于簡便，避免全身用藥給肝腎功能和其它方面所帶來的不良影響以及球結(jié)膜下注射等用藥途徑給患者帶來的不便、痛苦和相關(guān)并發(fā)癥。
73秒0.0005％azone；238秒0.005％azone；343秒0.05％azone；413秒0.5％azone；
圖二正常角膜上皮細(xì)胞形態(tài)和鈣熒光強(qiáng)度。
圖三給藥后(0.5％azone)角膜上皮細(xì)胞形態(tài)和鈣熒光強(qiáng)度。
圖四給予過量氯化鉀后角膜上皮細(xì)胞形態(tài)和鈣熒光強(qiáng)度(與圖一604秒同步)。
眼刺激反應(yīng)評(píng)分、石蠟切片、錐藍(lán)-茜素紅雙重染色及掃描電鏡等表明azone對結(jié)膜、角膜無刺激；角膜(包括上皮和內(nèi)皮細(xì)胞)、晶狀體、虹膜、玻璃體等眼內(nèi)組織形態(tài)與結(jié)構(gòu)無異常改變。
用鈣熒光探針Fluo-3/AM結(jié)合激光共聚焦顯微鏡(LSCM)跟蹤監(jiān)測不同濃度azone對培養(yǎng)兔角膜上皮細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+的變化，表明0.5％azone對角膜上皮細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度無明顯影響，細(xì)胞活性正常。Kitazana等在研究角質(zhì)細(xì)胞生長因子的實(shí)驗(yàn)，即應(yīng)用1000倍體外條件下該生長因子的有效濃度，作為滴眼液濃度。由此可見，對角膜上皮細(xì)胞而言，現(xiàn)有處方中使用的azone濃度十分安全。
權(quán)利要求
1.一種抗白內(nèi)障眼藥華臣眼液，其特征在于由芐達(dá)賴氨酸、氮酮和聚乙二醇等藥物按一定比例配制而成。具體配方如下必備成分 配比幅度A.芐達(dá)賴氨酸(主藥)0.500gB.氮酮(促滲透劑) 0.220g～1.102gC.聚乙二醇--400(非離子表面活性劑) 1.160ml～3.850mlD.羥丙甲基纖維素(助懸劑) 0.500gE.磷酸二氫鈉(緩沖液) 0.018gF.磷酸氫二鈉(緩沖液) 0.190gG.氯化鈉 0.300g～0.800gH.硫柳汞(防腐劑) 0.001gI.注射用水 加至100ml
2.一種角膜滲透促進(jìn)劑氮酮的應(yīng)用，其特征為氮酮與芐達(dá)賴氨酸等藥物配方可開發(fā)系列眼藥，提高藥物的生物利用度。
3.一種角膜滲透促進(jìn)劑氮酮的應(yīng)用，其特征在于氮酮與芐達(dá)賴氨酸等藥物配方能使房水中藥物濃度明顯提高，可減少用藥次數(shù)，提高患者用藥的依從性，避免藥物長期應(yīng)用帶來的不良反應(yīng)。
4.一種角膜滲透促進(jìn)劑氮酮的應(yīng)用，其特征在于氮酮與芐達(dá)賴氨酸等藥物配方可使原需口服或其它途徑(如球結(jié)膜下注射等)給藥才能吸收的藥物通過局部滴眼即能吸收，從而使給藥途徑趨于簡便，避免全身用藥給身體帶來的不良影響以及球結(jié)膜下注射等用藥途徑給患者帶來的不便、痛苦和相關(guān)并發(fā)癥。
全文摘要
本發(fā)明屬于眼科藥物治療技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述抗白內(nèi)障眼藥由芐達(dá)賴氨酸、氮酮和聚乙二醇等藥物按一定比例配制而成。角膜滲透劑氮酮與芐達(dá)賴氨酸等藥物配方可用于開發(fā)系列眼藥,提高藥物的生物利用度,減少用藥次數(shù),使原需口服或其它途徑給藥才能吸收的藥物有望通過局部滴眼即能吸收。
文檔編號(hào)A61P27/12GK1389206SQ02137909
公開日2003年1月8日 申請日期2002年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月8日
發(fā)明者朱承華, 王蔚青, 徐唐 申請人:南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院