專利名稱：2－甲氧基雌二醇在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol，即2-ME)，特別是2-甲氧基雌二醇在制藥中的應(yīng)用。
對(duì)于男性，特別是40多歲以上的男性，前列腺癌的發(fā)病率也是排列各類惡性腫瘤之前。隨著人口老齡化和死亡率的下降，使得前列腺癌的發(fā)病率以平均8％的速率增長(zhǎng)，預(yù)計(jì)到2011年，前列腺癌的發(fā)病率將翻一番。僅美國(guó)將達(dá)290萬(wàn)人左右，中國(guó)也將在800萬(wàn)人左右。
乳腺癌，前列腺癌和其他癌癥一樣，發(fā)病原因目前也尚不清楚，所以還不能預(yù)防。乳腺癌和前列腺癌目前的治療手段比較相似，一般是[1]手術(shù)；[2]內(nèi)分泌；[3]化療；[4]放射治療；或者是上述方法的綜合使用。目前世界上治療這兩種癌癥的化學(xué)藥物主要有環(huán)磷酰胺(CTX)；5-氟尿嘧啶(5-Fu)；甲胺喋呤(MTX)；阿霉素(ADM)；長(zhǎng)春新堿(UCR)。目前也利用從天然植物紅杉中提取而成的TAXOL作為的抗癌藥物。
2-甲氧基雌二醇(2ME)是雌二醇(E2)的內(nèi)源性代謝物，在人的血液和尿液中均可測(cè)得，但含量很低。
2-甲氧基雌二醇(2ME)的結(jié)構(gòu)式如下(Yue TL，Wang X，Louden CS，GuptaS，Pillarisetti K，Gu JL，Hart TK，Lysko PG，F(xiàn)euerstein GZ.MolPharmacol.1997Jun；51(6)951-62.) 2-methoxyestradiol(2-ME)分子式為C19H26O4，分子量為318.4。
經(jīng)試驗(yàn)表明，所述的2ME可誘導(dǎo)胰腺癌，肺癌，白血病細(xì)胞，胃癌細(xì)胞和神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡，對(duì)乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期有影響，低劑量的2ME使乳腺癌癌細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯，大量的體外實(shí)驗(yàn)同時(shí)表明，2ME對(duì)前列腺癌細(xì)胞均有凋亡作用。同時(shí)，所述的2ME可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞Bcl-2(一種癌基因)磷酸化，這一功能與目前治療乳腺癌最有效的TAXOL相似，而2ME為機(jī)體內(nèi)源性物質(zhì)，其毒性很小或無(wú)毒。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明，患有乳腺癌的大鼠在經(jīng)過(guò)2ME的治療后，腫瘤組織細(xì)胞出現(xiàn)廣泛的凋亡現(xiàn)象，腫瘤組織中的血管內(nèi)皮細(xì)胞也出現(xiàn)凋亡。2ME誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路為2ME--G蛋白-JNK(應(yīng)激激活蛋白激酶)-Bcl-2-細(xì)胞凋亡，2ME可短時(shí)間內(nèi)(10-40分鐘不等)激活JNK，使其磷酸化，JNK是促有絲分裂源(MAPKs)系統(tǒng)中的一個(gè)重要通路，2ME可使Bcl-2磷酸化，磷酸化的Bcl-2將不能與BAX結(jié)合，從而失去了Bcl-2的致癌作用，Bcl-2的表達(dá)為2ME誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡所必須，從而促使腫瘤細(xì)胞凋亡。本發(fā)明對(duì)照已有技術(shù)，因?yàn)樵谒幬镏胁捎昧?-甲氧基雌二醇，所述的2-甲氧基雌二醇是雌二醇內(nèi)源性代謝物，因此所述的這種治療癌癥的藥物毒性最小，是一種效果好，使用方便的新型化學(xué)抗癌藥。
圖2為2-甲氧基雌二醇對(duì)腫瘤的作用后的對(duì)比照片。
圖3為2-甲氧基雌二醇對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用的對(duì)比照片。
圖4為經(jīng)過(guò)2-甲氧基雌二醇處理過(guò)的PC3、LNCaP、MDA-MB-468和MCF-7的DNA凝膠電泳圖，其中，PC3和LNCaP為前列腺癌細(xì)胞，MDA-MB-468和MCF-7為乳腺癌細(xì)胞。
圖5為TUNEL檢測(cè)經(jīng)過(guò)2-甲氧基雌二醇處理過(guò)的PC3、LNCaP、MDA-MB-468和MCF-7的細(xì)胞凋亡的照片。
圖6為流式細(xì)胞儀檢測(cè)經(jīng)過(guò)2-甲氧基雌二醇處理過(guò)的PC3、LNCaP、MDA-MB-468和MCF-7的細(xì)胞凋亡的照片。其中E2為雌二醇。
圖7為經(jīng)過(guò)2ME處理的PC3、LNCaP、MDA-MB-468和MCF-7的細(xì)胞激活JNK，使其磷酸化后的Western blot分析圖。圖中O-S為高滲性休克，作為陽(yáng)性對(duì)照。
圖8為Curcumine(CUR)阻斷2ME誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的DNA凝膠電泳圖。
圖9為百日咳毒素(Ptx)阻斷了2ME激活JNK的電泳圖。


圖10為Ptx阻斷了2ME誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的電泳圖。
圖11為2ME使Bcl-2磷酸化后，能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的電泳圖。
圖12為2ME對(duì)PC3、LNCaP和DU145(細(xì)胞名字)處理后的電泳圖。
圖13為2ME誘導(dǎo)DU145細(xì)胞JNK磷酸化后的電泳圖。
圖14為2ME不能誘導(dǎo)DU145細(xì)胞凋亡和TGFβ1(促轉(zhuǎn)錄因子β1)誘導(dǎo)DU145細(xì)胞凋亡的電泳對(duì)照?qǐng)D。
如圖1所示，以哥本哈根乳腺癌大鼠模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，設(shè)空白對(duì)照組，肝油組(肝油)和2ME組，2ME組劑量為1μg/kg體重/天，肝油組，肝油0.25μl/kg體重/天，空白對(duì)照組，予以生理鹽水0.25μl/kg體重/天，以腹腔注射給藥，療程為10天。動(dòng)物處死后做病理檢查及TUNEL(Kumi-DiakaJ.Biol Cell.2002Feb；94(1)37-44.)檢測(cè)，2ME組瘤體較治療前縮小25％，肝油組瘤體較治療前增長(zhǎng)50％，如圖2所示，2ME組瘤體肉眼觀呈暗紅色(較肝油組瘤體)，中心出現(xiàn)壞死灶，如圖3所示，TUNEL檢測(cè)顯示2ME治療后腫瘤組織細(xì)胞出現(xiàn)廣泛的凋亡現(xiàn)象，腫瘤組織中的血管內(nèi)皮細(xì)胞也出現(xiàn)凋亡。
如圖4所示，經(jīng)過(guò)2ME處理過(guò)的PC3、LNCaP、MDA-MB-468和MCF-7的DNA凝膠電泳圖(Guseva NV，Taghiyev AF，Rokhlin OW，Cohen MB.Prostate.2002Jun1[epub ahead of print])，10-6M 2ME處理后分別在6-36小時(shí)出現(xiàn)凋亡，如圖5和圖6所示，分別為TUNEL和流式細(xì)胞儀(Amsellem C，Durieu，Chambe MT，Peyrol S，Pacheco Y.Respir Med.2002Apr；96(4)244-9.)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的結(jié)果，均表明2ME可誘導(dǎo)上述四種腫瘤細(xì)胞凋亡，其中E2為雌二醇，是卵巢分泌的重要雌激素，E2對(duì)前列腺癌具有凋亡作用，但遠(yuǎn)較2ME為弱(同劑量，同時(shí)間)。由此表明，2ME對(duì)乳腺癌和前列腺癌細(xì)胞均有凋亡作用。
2ME誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路為2ME--G蛋白-JNK-Bcl-2-細(xì)胞凋亡。如圖7所示，為經(jīng)過(guò)2ME處理的PC3、LNCaP、MDA-MB-468和MCF-7的細(xì)胞激活JNK，使其磷酸化后的Western blot分析圖(Wu X，Jackson S.J Clin Immunol.2002Mar；22(2)106-15.)，2ME可短時(shí)間內(nèi)(10-40分鐘不等)激活JNK，使其磷酸化，JNK是促有絲分裂源(MAPKs)系統(tǒng)中的一個(gè)重要通路，其阻斷劑為(CUR)(Mukhopadhyay A，Bueso-Ramos C，Chatterjee D，Pantazis P，Aggarwal BB.Oncogene.2001Nov15；20(52)7597-609.)，如圖8所示，CUR可阻斷2ME誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。百日咳毒素(Ptx)是G蛋白的阻斷劑，如圖9和10所示，Ptx阻斷了2ME激活JNK和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。如圖11所示，2ME可使Bcl-2磷酸化，從而解除了Bcl-2的抑凋亡作用。Bcl-2的表達(dá)為2ME誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡所必須。前列腺癌細(xì)胞株DU145不表達(dá)Bcl-2，經(jīng)2ME處理的DU145細(xì)胞，雖然有JNK的磷酸化，但沒(méi)有腫瘤細(xì)胞凋亡，如圖12所示為DU145不表達(dá)Bcl-2，如圖13所示，為2ME使DU145細(xì)胞JNK磷酸化，如圖14所示，為2ME不能誘導(dǎo)DU145細(xì)胞凋亡，TGFβ1誘導(dǎo)凋亡為陽(yáng)性對(duì)照。
權(quán)利要求
1，2-甲氧基雌二醇在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
2，如權(quán)利要求1所述的2-甲氧基雌二醇在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，其特征在于2-甲氧基雌二醇在制備治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
3，如權(quán)利要求1所述的2-甲氧基雌二醇在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，其特征在于2-甲氧基雌二醇在制備治療前列腺癌的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
2－甲氧基雌二醇在制藥中的應(yīng)用，所述的2－甲氧基雌二醇用于在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，特別是用于在制備治療乳腺癌和前列腺癌的藥物中的應(yīng)用，所述的這種2－甲氧基雌二醇藥物的制備可以從人體的尿樣或者通過(guò)有機(jī)合成的方法制備。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)表明，患有乳腺癌的大鼠在經(jīng)過(guò)2ME的治療后，腫瘤組織出現(xiàn)壞死灶，細(xì)胞出現(xiàn)廣泛的凋亡現(xiàn)象，腫瘤組織中的血管內(nèi)皮細(xì)胞也出現(xiàn)凋亡。大量的體外實(shí)驗(yàn)同時(shí)表明，2ME對(duì)乳腺癌和前列腺癌細(xì)胞均有凋亡作用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1457788SQ02111720
公開日2003年11月26日 申請(qǐng)日期2002年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月17日
發(fā)明者步世忠, 步爭(zhēng)鳴 申請(qǐng)人:步世忠, 步爭(zhēng)鳴