專利名稱：治療病毒感染的聯(lián)合方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療病毒感染，例如人免疫缺陷病毒(HIV)感染的聯(lián)合療法和方法。
背景技術(shù)：
毫無疑問獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的致因物HIV引起全球性健康危機，雖然近年來在藥物治療方面的進(jìn)展成功證明AIDS的進(jìn)程，但是仍然存在對發(fā)現(xiàn)一種更安全更便宜的控制這種病毒的方法的需求。
HIV感染是通過病毒與靶細(xì)胞膜接觸通過與細(xì)胞受體CD4和第二趨化因子輔助受體分子的相互作用而開始的。其通過被感染細(xì)胞通過血液和其它組織的復(fù)制和傳播而發(fā)展。有各種各樣的趨化因子，但是對于親巨噬細(xì)胞HIV，相信作為感染早期體內(nèi)復(fù)制的關(guān)鍵病原毒株，HIV進(jìn)入細(xì)胞所需要的主要趨化因子受體是CCR5。還有人報道過CCR5基因在抵抗HIV感染中起作用，因為具有CCR5基因同型缺失的個體對HIV感染的抵抗力非常強。因此，干擾病毒受體CCR5和HIV之間的相互作用可以阻斷病毒進(jìn)入細(xì)胞而沒有任何顯著的副作用。
人們還注意到HIV-1包膜蛋白，例如，gp160，gp120和gp41，它們是AIDS患者體內(nèi)存在的抗-HIV抗體的主要抗原。美國專利No.5,464,933和6,020,459和國際專利公開WO 96/40191描述了H1Vgp41蛋白質(zhì)的一部分(已知為DP-178，T-20，和pentafuside)，它是病毒獲許進(jìn)入CD4+細(xì)胞所必需的。該蛋白質(zhì)片段可以阻止HIV獲許進(jìn)入宿主CD4+細(xì)胞，并且還防治病毒的細(xì)胞與細(xì)胞間傳遞。
有人將T-20以連續(xù)輸液或者一天兩次(bid)皮下給藥，一般劑量是100毫克/天。這使得接受這種肽治療的患者生活大大不方便，因為接受這種抗-HIV治療的患者必須一天兩次到醫(yī)生那里接受肽注射。
Vandamme等[抗病毒化學(xué)和化療(Antiviral Chemistry&Chemotherapy)9187-203(1998)]公開了當(dāng)前對人HIV-1感染的臨床治療方法，包括至少三種藥物聯(lián)合或者稱為高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(″HART″)；HAART包括核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，和HIV蛋白酶抑制劑的各種組合。適用于單純藥物的患者，HAART在降低死亡率和HIV-1發(fā)展成AIDS中是有效的。但是，這些多種藥物治療方案不會消除HIV-1，并且長期治療通常導(dǎo)致廣譜抗藥性。此外，NIV療法昂貴，每年花費上萬美元。提供通過不同的機理阻斷HIV融合并進(jìn)入CD4+細(xì)胞之中，有更方便的給藥方案，并且與已知的治療方法相比抗HIV更有效，花費更低的抗-HIV治療方法是有益的。因此，保持優(yōu)先的是開發(fā)提供更好的HIV-1治療的新的藥物療法。
發(fā)明概述本發(fā)明提供改進(jìn)的治療病毒感染特別是HIV感染的方法。提供新的藥物聯(lián)合治療法，包括有效量的第一種抗病毒劑，它是一種結(jié)構(gòu)式I或II的哌啶衍生物或者其藥學(xué)可接受鹽，和有效量的第二種抗病毒劑，它是一種DP-178多肽或者其藥學(xué)可接受衍生物。應(yīng)用適合抑制病毒活性，病毒表達(dá)，病毒傳播，或者減少病毒負(fù)載的劑量和給藥方案對感染病毒優(yōu)選HIV的個體施用本發(fā)明的組合。本發(fā)明的聯(lián)合療法優(yōu)選提供與其它已知的抗-HIV聯(lián)合療法或者只含有本發(fā)明組合中存在的抗病毒劑中的一種的療法相比具有改進(jìn)的功效的療法。更優(yōu)選地，本發(fā)明的聯(lián)合療法是一種協(xié)同組合。
本發(fā)明的一個優(yōu)點是本發(fā)明的聯(lián)合治療使得臨床醫(yī)生減少DP-178多肽給藥頻率(即，比每天兩次少)，并且，如果期望，如下所述與一種或多種另外的治療化合物聯(lián)合給藥。
因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療HIV感染的方法，包括聯(lián)合給與治療有效量的CCR5拮抗劑，或者其藥學(xué)可接受鹽，和治療有效量的DP-178多肽，或者其藥學(xué)可接受衍生物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療HIV感染的方法，包括施用下面結(jié)構(gòu)式的CCR5拮抗劑 或者其藥學(xué)可接受鹽，和T-20，其中以25-400毫克/天的日劑量每天1-2次給與CCR5拮抗劑，并且以3-200毫克的劑量或者以將受感染個體的病毒負(fù)載量減小1或2個對數(shù)的其倍數(shù)每隔一天一次(qd)或者每周一次(qd)兩次，三次或四次給與T-20。
另一方面，本發(fā)明提供用于聯(lián)合治療HIV感染的單一包裝藥物組合物的試劑盒，其包括在第一容器中含有在藥學(xué)可接受載體中含有CCR5拮抗劑或其藥學(xué)可接受鹽的藥物組合物，每周1-3次或隔天一次給藥的口服劑量是25-600毫克，和在第二容器中含有藥學(xué)可接受載體中含有DP-178多肽或其藥學(xué)可接受衍生物的藥物組合物，以3-200毫克的皮下劑量，或?qū)⒉《据d量減小1或2個對數(shù)的其倍數(shù)。
本發(fā)明的詳細(xì)描述使用術(shù)語″病毒感染″來描述一種疾病狀態(tài)，其可能是潛伏的，病毒侵入細(xì)胞，利用細(xì)胞的復(fù)制機器繁殖或復(fù)制，最終溶解細(xì)胞引起細(xì)胞死亡，并且產(chǎn)生后代病毒顆粒，接著通過繁殖進(jìn)一步感染其它細(xì)胞。
與病毒感染相關(guān)使用的術(shù)語″治療″或″預(yù)防″意思是抑制病毒活性，表達(dá)，病毒的復(fù)制或傳播，或者防止病毒在宿主細(xì)胞中自我繁殖，這些導(dǎo)致病毒感染引起的疾病綜合癥的改善或減輕。如果有病毒載量的減少或死亡率或發(fā)病率降低，則認(rèn)為處理或療法是治療性的。
DP-178多肽或CCR5拮抗劑化合物，或者它們的衍生物的“治療有效量”是根據(jù)合適的給藥方案足以治療或預(yù)防病毒感染的量，即，量和給藥方案表現(xiàn)出抗病毒活性，從而將受感染個體血清中HIV RNA血漿水平降低至每毫升血清少于500個拷貝，優(yōu)選至每毫升血清少于200個拷貝，更優(yōu)選至每毫升血清少于50個拷貝，最優(yōu)選拷貝數(shù)是根據(jù)定量多循環(huán)逆轉(zhuǎn)錄酶PCR方法測定檢測不到的。優(yōu)選使用Amplicor-1Monitor 1.5(從Roche Diagnsotics獲得)或Nuclisens HIV-1 QT-1方法測定HIV RNA。
術(shù)語″聯(lián)合療法″指治療病毒感染優(yōu)選HIV感染的療法，其包括施用有效量的CCR5拮抗劑和DP-178多肽。本發(fā)明的聯(lián)合療法可以包括一種或多種抗病毒劑，例如，HAART。另外，本發(fā)明的聯(lián)合療法可以被用作以前未感染個體在可能嚴(yán)重接觸HIV病毒之后的預(yù)防措施。肽的這種預(yù)防性應(yīng)用的例子包括但不限于預(yù)防病毒從母體傳播給嬰兒和存在HIV傳播可能的其它環(huán)境，象，例如，工作人員暴露給含有HIV的血產(chǎn)品下健康護(hù)理環(huán)境中的偶發(fā)事件。
術(shù)語″協(xié)同″指比任何兩種或多種單一物質(zhì)的加和效果更有效的組合?！鍏f(xié)同作用″指在治療或預(yù)防病毒感染的單一療法中使用更低量或劑量的抗病毒劑的能力。更低劑量一般導(dǎo)致毒性降低而功效不降低。另外，協(xié)同作用能夠提高功效，例如，提高的抗病毒活性，或者避免或降低抵抗抗病毒劑的任何病毒抗性的程度。用常規(guī)的抗病毒測試方法，例如如下所述，能夠測定DP-178多肽或者其藥學(xué)可接受衍生物，和CCR5拮抗劑或者其藥學(xué)可接受鹽之間的協(xié)同作用。利用獲得聯(lián)合系數(shù)(Chou和Talalay，1984，Adv.Enzyme Regul.2227-55)和使用計算機軟件的劑量效果分析(Chou和Chou，1987，Software andManual.p19-64.Elsevier Biosoft，Cambridge，UK)的Chou和Talalay聯(lián)合方法能夠分析測試的結(jié)果。聯(lián)合系數(shù)值小于1表明協(xié)同作用，大于1表明拮抗作用，等于1表明加和作用。利用Pritchard和Shipman的方法(Pritchard和Shipman，1990，抗病毒研究(Antiviral Research)14181206)也能分析這些測試的結(jié)果。
術(shù)語″藥學(xué)可接受載體″指不干擾活性成分的生物活性的效力，是化學(xué)惰性的并且一般對受體無毒的載體介質(zhì)。
術(shù)語″藥學(xué)可接受衍生物″指表現(xiàn)出抗病毒活性并且一般是無毒的多肽的截短物，類似物或其它修飾。
術(shù)語″抗病毒活性″指HIV向未感染CD4+細(xì)胞傳遞的抑制作用，HIV復(fù)制的抑制作用，防止HIV在宿主中自我繁殖，或者改善或減輕HIV感染引起的疾病癥狀。通過下文所述測試中病毒載量的減少或死亡率和/或發(fā)病率的降低能證實這些作用?？共《緞?，或抗-HIV-1藥物，具有抗病毒活性，并且用于治療單純HIV-1感染，或者作為多種藥物聯(lián)合治療例如，HAART三聯(lián)和四聯(lián)聯(lián)合治療的部分。
″治療劑″是改善對病毒感染或者病毒感染引起的疾病的治療的任何分子，化合物或療法。優(yōu)選地，所述治療劑具有抗病毒活性。
其傳播可以被本發(fā)明聯(lián)合療法的抗病毒活性抑制的病毒包括，例如人逆轉(zhuǎn)錄病毒，特別是HIV-1和HIV-2和人T-淋巴細(xì)胞病毒(HTLV-I和II)；非人逆轉(zhuǎn)錄病毒，包括牛造白血病組織增生病毒，貓科動物病毒和白血病病毒，和羊進(jìn)行性肺炎病毒；非逆轉(zhuǎn)錄病毒，包括人呼吸合胞體病毒，犬科溫?zé)岖F病病毒，新城疫病毒，人副流感病毒，流感病毒，麻疹病毒，埃-巴二氏病毒，乙肝病毒，和猿Mason-Pfizer病毒；和沒有包膜病毒，包括細(xì)小核糖核酸病毒，例如脊髓灰質(zhì)炎病毒，甲肝病毒，腸道病毒，艾可病毒和柯薩奇病毒，乳多空病毒例如乳頭狀瘤病毒，細(xì)小病毒，腺病毒和呼腸病毒。
哌啶衍生物CCR5拮抗劑化合物具有下面結(jié)構(gòu)式I和II的化合物，和其藥學(xué)可接受鹽，這里通稱為″CCR5拮抗劑″。這些化合物對抗CC5趨化因子受體，并且描述于美國專利申請順序號Nos.09/562,815和09/562,814和WO 00/66559和WO 00/11632中，這些專利文獻(xiàn)在此分別全文引作參考。
在一個實施方案中，本發(fā)明的聯(lián)合療法包括結(jié)構(gòu)式I的化合物，或者其藥學(xué)可接受鹽 其中R6，X和R2如表1中定義表1 在一個具體的實施方案中，本發(fā)明的聯(lián)合療法包括下面結(jié)構(gòu)式的化合物 或者其藥學(xué)可接受鹽。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的聯(lián)合療法中使用的CCR5拮抗劑化合物具有結(jié)構(gòu)式II，或者其藥學(xué)可接受鹽 其中R，R3，R6和R2如表2中定義表2 在一個具體的實施方案中，本發(fā)明的聯(lián)合療法包括下面結(jié)構(gòu)式的化合物 或者其藥學(xué)可接受鹽。
本發(fā)明中使用的一些CCR5拮抗劑化合物可以以不同的異構(gòu)體形式存在，例如，對映異構(gòu)體，非對映異構(gòu)體和阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體。本發(fā)明包括純形式和混合物的所有這樣的異構(gòu)體，包括外消旋混合物。
一些化合物在自然狀態(tài)下是酸性的，例如，帶有羧基或酚羥基的化合物。這些化合物可以形成藥學(xué)可接受鹽。這樣的鹽的例子包括鈉鹽，鉀鹽，鈣鹽，鋁鹽，金鹽和銀鹽。還包括與藥學(xué)可接受胺例如氨，烷基胺，羥基烷基胺，N-甲基葡糖胺等形成的鹽。
一些堿性化合物也形成藥學(xué)可接受鹽，例如，酸加成鹽。例如，吡啶并-氮原子可以和強酸形成鹽，而帶有堿性取代基例如氨基的化合物也和弱酸形成鹽。用于生成鹽的合適的酸的例子是鹽酸，硫酸，磷酸，乙酸，檸檬酸，草酸，丙二酸，水楊酸，蘋果酸，富馬酸，琥珀酸，抗壞血酸，馬來酸，甲磺酸和本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它無機酸和羧酸。通過使游離堿形式以常規(guī)方式接觸足夠量的期望的酸產(chǎn)生鹽來制備鹽。通過用合適的堿稀水溶液例如NaOH，碳酸鉀，氨和碳酸氫鈉稀水溶液處理鹽可以再生游離堿形式。游離堿形式與它們的各種鹽在一些物質(zhì)性質(zhì)上多少有些不同，例如在極性溶劑中的溶解度，另外，就本發(fā)明目的來說，酸和堿鹽等價于它們各自的游離堿形式。
所有的這樣的酸和堿鹽是本發(fā)明范圍內(nèi)的藥學(xué)可接受鹽，并且認(rèn)為所有的酸和堿鹽就本發(fā)明目的來說等價于相應(yīng)化合物的游離形式。
根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法能夠制備本發(fā)明中使用的CCR5拮抗劑化合物，例如，應(yīng)用USP 5,883,096，USP 6,037,352，USP 5,889,006，USP5,952,349，和USP 5,977,138中描述的方法，這些專利文獻(xiàn)在此全文引作參考。美國專利申請No.09/562,815和09/562,814和WO00/66559和WO 00/11632提供了制備在本發(fā)明中使用的CCR5拮抗劑的具體方法。
DP-178多肽DP-178多肽(即，全長DP-178和其藥學(xué)可接受衍生物)描述于USP5,464,933，USP 6,020,459和WO 96/40191，這些專利文獻(xiàn)各自在此全文引作參考。通過和病毒與靶細(xì)胞融合所必需的gp41上的遠(yuǎn)側(cè)區(qū)(可能是DP-107)形成復(fù)合體，病毒gp41的DP-178區(qū)可以介導(dǎo)HIV和靶細(xì)胞膜的融合。本發(fā)明中使用的DP-178多肽表現(xiàn)出抗融合活性，(抑制病毒與宿主細(xì)胞膜融合)抗病毒活性，和/或調(diào)節(jié)涉及螺旋肽結(jié)構(gòu)的胞內(nèi)進(jìn)程的能力，并且被USP 6,020,459中描述的ALLMOTI5，107X178X4和PLZIP檢索主題鑒定或識別。
全長DP-178多肽以分離的來自HIV-1LAI的跨膜蛋白gp41的跨越殘基638-673的36個氨基酸殘基為基礎(chǔ)，并且具有氨基酸序列YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(T-20；SEQ ID NO1)。
本發(fā)明中使用的DP-178多肽的類似物在全長DP-178多肽中包含一個或多個氨基酸取代(保守的或不保守的)，插入和/或缺失。來自其它病毒分離物或物種，或者來自其它生物體的DP-178類似物也是DP-178的類似物。除了全長DP-178多肽(SEQ ID NO1)之外，本發(fā)明中使用的DP-178多肽包括包括3-35個連續(xù)的氨基酸殘基的全長DP-178的截短物。DP-178類似物也可以是截短的。USP 5,464,933，USP6,020,459，和WO 96/40191中描述了DP-178的截短物和類似物。
本發(fā)明中使用的DP-178多肽中氨基酸取代作用可以是保守的或不保守的取代作用。保守的氨基酸取代作用置換DP-178多肽序列中的一個或多個氨基酸，所述氨基酸有相似電荷，大小，和/或疏水性特征，象，例如，谷氨酸(E)與天冬氨酸(D)。非保守取代作用置換DP-178多肽序列中的一個或多個氨基酸，所述氨基酸有不同的電荷，大小，和/或疏水性特征，象，例如，谷氨酸(E)與纈氨酸(V)。
HIV-1和HIV-2包膜蛋白結(jié)構(gòu)上不同，但是HIV-1和HIV-2的DP178-相應(yīng)區(qū)中存在驚人的氨基酸保守性。氨基酸保守性是一種周期性性質(zhì)，提示結(jié)構(gòu)和/或功能的某些保守性。因此，一類氨基酸取代作用包括預(yù)計穩(wěn)定本發(fā)明DP-178肽的結(jié)構(gòu)的氨基酸改變。利用這里描述的和USP 6,020,459中描述的DP-178全長和DP178類似物序列，本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易地確定DP-178共有序列，并且確定代表優(yōu)選的氨基酸取代作用的保守氨基酸殘基。
本發(fā)明中使用的DP-178多肽中氨基酸插入包括一個或多個單個氨基酸殘基或一段殘基插入DP178多肽中。DP-178多肽的氨基或羧基末端或者在多肽的中間位置可以有一處或多處插入。優(yōu)選地，內(nèi)部插入長度是2-15個氨基酸。優(yōu)選地，氨基或羧基末端插入是大約2至大約50個氨基酸并且相應(yīng)于是全長DP-178氨基酸序列的氨基或羧基的gp41的多肽序列。
本發(fā)明中使用的DP-178多肽可以包含一處或多處缺失。DP-178多肽中的缺失可以是去除一個或多個單一的氨基酸殘基或一個或多個連續(xù)的氨基酸段，和它們的組合。包含缺失的DP-178多肽有至少4-6個氨基酸。
本發(fā)明中使用的DP-178多肽類似物是來自除HIV-1LAI之外的來源例如其它HIV-1和HIV-2分離物，非-HIV-1LAI有包膜病毒，沒有包膜病毒和非病毒生物體的全長或截短DP-178。DP-178類似物也能包含如上所述的一個或多個缺失，插入或取代。DP-178類似物可以包括，例如，有包膜病毒的跨膜蛋白中存在的肽序列或者沒有包膜病毒和非病毒生物體中存在的多肽序列。USP 5,464,933，USP 6,020,459，和WO 96/40191中描述了DP-178類似物，并且包括YTNTIYTLLEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(DP-185；SEQ ID NO3)；YTGIIYNLLEESQNQQEKNEQELLELDKWANLWNWF(SEQ ID NO4)；YTSLIYSLLEKSQIQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO5)；和LEANISQSLEQAQIQQEKNMYELQKLNSWDVFTNWL(SEQ ID NO6)，它們分別從HIV-1SF2，HIV-1RF，HIV-1MN，和HIV-2NIHZ分離物衍生。
本發(fā)明中使用的DP-178多肽可以存在對氨基和/或羧基末端的修飾作用，提供，例如，提高的生物可利用率，穩(wěn)定性，或者降低的宿主免疫識別。例如，末端NH2基團(tuán)可以被疏水性基團(tuán)，羧芐基，丹酰，或叔丁氧羰基，乙酰基，或者9-芴基甲氧-羰基(FMOC)置換。大分子基團(tuán)，例如，脂質(zhì)-脂肪酸偶合物，聚乙二醇，碳水化合物或肽基，能夠與NH2或者與修飾物共價連接。例如酰氨基，叔丁氧羰基，或共價連接的大分子基團(tuán)，例如，脂質(zhì)-脂肪酸偶合物，聚乙二醇，碳水化合物或另外一個多肽基團(tuán)可以置換末端COOH基團(tuán)。大分子基團(tuán)可以與COOH或修飾物連接。
下表提供了可以在本發(fā)明中使用的DP-178多肽的例子表3YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO1)；YTNTIYTLLEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(DP-185；SEQ ID NO3)；YTGIIYNLLEESQNQQEKNEQELLELDKWANLWNWF(SEQ ID NO4)；YTSLIYSLLEKSQIQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO5)；LEANISQSLEQAQIQQEKNMYELQKLNSWDVFTNWL(SEQ ID NO6)；CGGNNLLRAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARILAVERYLKDQ(SEQ ID NO7)；WMEWDREINNYTSLIGSLIEESQNQQEKNEQELLE(SEQ ID NO8)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWFNITNWLWLIKFI(SEQ IDNO9)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNAF(SEQ ID NO10)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLANWF(SEQ ID NO11)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQQLLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO12)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLQLDKWASLWNWF(SEQ ID NO13)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNQQELLQLDKWASLWNWF(SEQ ID NO14)；YTSLIHSLQEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO15)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNW(SEQ ID NO16)；YTSLIHSLIEQSQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO17)；YTSLIHSLIQESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO18)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQQLLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO19)；YTSLIQSLIEESQNQQEKNEQQLLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO20)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLFNFF(SEQ ID NO21)；YTSLIHSLIEESQNLQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO22)；YTSLIHSLIEESQNQQEKLEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO23)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLEFDKWASLWNWF(SEQ ID NO24)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASPWNWF(SEQ ID NO25)；YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNSF(SEQ ID NO26)；NKSLEQIWNNMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKASLWNW F(SEQ ID NO27)；SLEQIWNNMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQ(SEQ ID NO28)；LEQIWNNMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQE(SEQ ID NO29)；EQIWNNMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEK(SEQ ID NO30)；QIWNNMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKN(SEQ ID NO31)；IWNNMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNE(SEQ ID NO32)；WNNMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQ(SEQ ID NO33)；NNMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQE(SEQ ID NO34)；NMTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQEL(SEQ ID NO35)；MTWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNW(SEQ IDNO36)；TWMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLE(SEQ ID NO37)；WMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLEL(SEQ ID NO38)；WMEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLE(SEQ ID NO39)；MEWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELD(SEQ ID NO40)；EWDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDK(SEQ ID NO41)；WDREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKW(SEQ ID NO42)；DREINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWA(SEQ ID NO43)；REINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWAS(SEQ ID NO44)；EINNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASL(SEQ ID NO45)；INNYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLW(SEQ ID NO46)；NYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNW(SEQ ID NO47)；TSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWFN(SEQ ID NO48)；SLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWFNI(SEQ ID NO49)；LIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWFNIT(SEQ ID NO50)；TSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO51)；LIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO52)；ESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO53)；NQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO54)；EKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO55)；LRAIEAQQHLLQLTVWQIKQLQARILAV(SEQ ID NO56)；YTSLIYSLLEKSQIQQEKNEQELLELDKWASLWNWF(SEQ ID NO57)；NNLLRAIEAQQGLLQLTVWGIKQLQARILAVERYLKDQ(SEQ ID NO58)；NNLLRAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARILAVERYLKDQGGC(SEQ ID NO59)；NNLLRAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARILAVERYLKDQGGC(SEQ ID NO60)；CGGNNLLRAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARILAVERYKDQGGC(SEQ ID NO61)；和LSGIVQQQNNLLRAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARILAV(SEQ ID NO62)。
DP-107肽任意地，DP-178多肽可以和DP-107多肽使用，這描述于USP6,020,459和WO 96/40191。因為跨膜蛋白gp41的DP-107和DP178部分形成正常病毒感染所必需的非共價的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，DP178和DP-107肽的化合可以與病毒gp41形成復(fù)合體，并且干擾融合過程。因此，可以預(yù)期在本發(fā)明的聯(lián)合療法中使用DP-107多肽。
全長DP-107多肽是相應(yīng)于HIV-1LAI跨膜gp41蛋白的558-595殘基的38個氨基酸，如下所示NNLLRAIEAQQHLLQLTVWQIKQLQARILAVERYLKDQ(SEQ ID NO2)。
本發(fā)明中使用的DP-107多肽包括全長DP-107多肽的截短物，并且包含3-38個連續(xù)的氨基酸殘基。DP-107截短物的實施例描述于USP 6,020,459和WO 96/40191。
本發(fā)明中使用的DP-107多肽包括全長的和截短的DP-107的類似物，這些類似物包含如上文對于DP-178所述的一個或多個氨基酸取代(保守的或不保守的)，插入和/或缺失。DP-107的類似物描述于USP6,020,459和WO 96/40191。DP107多肽還可以在氨基末端或羧基末端包含修飾作用以提供例如提高的生物可利用率，穩(wěn)定性，或降低的宿主免疫識別，如上文對于DP-178和USP 6,020,459和WO 96/40191中所述。來自其它病毒分離物或物種的或者來自其它生物體的DP-107類似物也是DP-107類似物，并且描述于USP 6,020,459和WO96/40191。
本發(fā)明中使用的DP-107多肽，不管是全長的，截短的，類似物(即，包含DP-107的插入，缺失，取代，或類似物)，或者另外修飾的，都表現(xiàn)出抗病毒活性，抗融合活性，或調(diào)節(jié)涉及螺旋肽結(jié)構(gòu)的胞內(nèi)進(jìn)程的能力，并且具有與DP-107類似的結(jié)構(gòu)和/或氨基酸基序，并且能夠被USP 6,020,459中詳細(xì)描述的ALLMOTI5，107X178X4和PLZIP檢索基序鑒定或識別。多肽的制備通過本領(lǐng)域公知的技術(shù)能夠合成或制備本發(fā)明中使用的多肽。參見，例如，Creighton，1983，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和分子原理(ProteinsStructures and Molecular Principles)，W.H.Freeman and Co.，NY。例如，在固相載體上或者在溶液中可以合成短肽。較長的肽可以利用重組DNA技術(shù)制備。根據(jù)本領(lǐng)域公知的技術(shù)可以合成，和/或克隆，和表達(dá)編碼本發(fā)明的肽的核苷酸序列。參見，例如，Sambrook，等，1989，分子克隆實驗手冊(Molecular Cloning，A LaboratoryManual)，Vols.1-3，冷泉港出版社，NY。
如上所述，用連接肽的氨基酸殘基的一個或多個鍵是非肽鍵的方式能夠合成本發(fā)明中使用的多肽。通過本領(lǐng)域公知的常規(guī)反應(yīng)，例如通過亞氨基，酯，酰肼，氨基脲，和偶氮鍵，能夠形成非肽鍵。還可以合成氨基末端和/或羧基末端有另外的化學(xué)基團(tuán)(即如上所述的修飾作用)的在本發(fā)明中使用的肽，以提高根據(jù)常規(guī)方法的多肽的穩(wěn)定性，生物可利用度，和/或抑制活性。
用改變的空間構(gòu)型也能合成本發(fā)明中使用的多肽，例如，使用多肽的氨基酸殘基的一個或多個的D-異構(gòu)體對L-異構(gòu)體。如果期望，本發(fā)明中使用的多肽的一個或多個氨基酸殘基能夠被非天然存在的氨基酸殘基取代。象這樣的改變可以用來提高本發(fā)明肽的穩(wěn)定性，生物可利用度和/或抑制作用。
USP 6,015,881中描述了本發(fā)明中使用的DP-178或DP-107多肽的具體合成方法，其利用固相和液相合成方法合成并化合具體的多肽片段基團(tuán)，得到感興趣的肽。一般情況下，這些方法包括在固相上合成具體的側(cè)鏈被保護(hù)的肽片段中間體，在溶液中偶聯(lián)被保護(hù)的片段，生成被保護(hù)的肽，接著將側(cè)鏈去保護(hù)，得到最終多肽。另外的治療物質(zhì)的應(yīng)用本發(fā)明的聯(lián)合療法進(jìn)一步包括一種或多種，優(yōu)選一種至三種另外的在抗-HIV治療中使用的抗病毒劑。作用于病毒復(fù)制中涉及的不同的靶分子的，作用于病毒傳播中涉及的不同的靶分子的，防止或減少病毒抗性發(fā)生的，并且作用于相同分子的不同位置的抗病毒劑可以和本發(fā)明的聯(lián)合療法一起使用。這類物質(zhì)包括引起病毒逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制作用，病毒mRNA封閉反應(yīng)的抑制作用，HIV蛋白酶的抑制作用，蛋白糖基化作用的抑制作用，病毒融合的抑制作用的那些(例如，如上所述的DP-107)，和其它抗病毒藥物，其中的一些在這里討論，不局限在上述活性內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能確定使用表現(xiàn)出這些活性模式之一的抗病毒劑的各種各樣的抗病毒療法。特別地，可以與本發(fā)明的組合一起使用已知為HAART的組合。優(yōu)選地，在本發(fā)明的聯(lián)合療法中使用較低劑量的抗病毒劑，這樣減小與那種物質(zhì)相關(guān)的毒性，而不降低抗病毒活性，同時減小或避免病毒抗性。
這里使用的術(shù)語″核苷和核苷酸逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑″(″NRTIs″)意思是抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶的活性，催化病毒基因組向病毒原HIV-1 DNA轉(zhuǎn)化的核苷和核苷酸和其類似物。核苷衍生物包括但不限于2′，3′-雙脫氧腺苷(ddA)；2′，3′-雙脫氧鳥苷(ddG)；2′，3′-雙脫氧肌苷(dd1)；2′，3′-雙脫氧胞苷(ddC)；2′，3′-雙脫氧胸苷(ddT)；2′，3′-雙脫氧-雙脫氧胸苷(d4T)和3′-疊氮基-2′，3′-雙脫氧胸苷(AZT)。
或者，可以使用鹵化核苷衍生物，優(yōu)選2′，3′-雙脫氧-2′-氟代核苷，例如，2′，3′-雙脫氧-2′-氟代腺苷；2′，3′-雙脫氧-2′-氟代肌苷；2′，3′-雙脫氧-2′-氟代胸苷；2′，3′-雙脫氧-2′-氟代胞苷；和2′，3′-雙脫氧-2′，3′-雙脫氫-2′-氟代核苷，包括但不限于2′，3′-雙脫氧-2′，3′-雙脫氫-2′-氟代胸苷(Fd4T)。優(yōu)選地，本發(fā)明的2′，3′-雙脫氧-2′-氟代核苷是其中氟鍵是β構(gòu)型的那些，例如，2′，3′-雙脫氧-2′-β-氟代腺苷(F-ddA)，2′，3′-雙脫氧-2′-β-氟代肌苷(F-dd1)，和2′，3′-雙脫氧-2′-β-氟代胞苷(F-ddC)。
典型的合適的NRTIs包括從Glaxo-Wellcome Inc.，(ResearchTriangle，NC)購得的商品名是RETROVIR的疊氮胸苷(AZT)；從Bristol-Myers Squibb Co.(Princeton，NJ)購得的商品名是VIDEX的2′，3′-雙脫氧肌苷(dd1)；從Roche Pharmaceuticals，(Nutley，NJ)購得的商品名是HIVID的2′，3′-雙脫氧胞苷(ddC)；從Bristol-MyersSquibb Co.購得的商品名是ZERIT的雙脫氧胸苷(d4T)；從Glaxo-Wellcome購得的商品名是EPIVIR的lamivudine(3TC)；WO 96/30025中公開的以商品名ZIAGEN購得的abacavir(1592U89)；從GileadSciences(Foster City，CA)購得的商品名是PREVON的adefovirdipivoxil[bis(POM)-PMEA]；lobucavir(BMS-180194)，EP-0358154和EP-0736533中公開的Bristol-Myers Squibb，(Princeton，NJ)開發(fā)的一種核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑；BCH-10652，Biochem Pharma，(Laval，魁北克，加拿大)開發(fā)的一種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(BCH-10618和BCH-10619外消旋混合物形式)；EmoryUniversity’s美國專利No.5,814,639許可并且由TrianglePharmaceuticals，(Durham，NC)開發(fā)的emitricitabine[(-)-FTC]；耶魯大學(xué)對Vion Pharmaceutical，(New Haven CT)許可的β-L-FD4(也稱為β-L-D4C并且名稱是β-L-2′，3′-雙脫氧-5-氟代胞苷)；DAPD，嘌呤核苷，EP 0656778公開的并且由Emory University和University of Georgia對Triangle Pharmaceutical許可的(-)-β-D-2，6-二氨基-嘌呤二氧戊環(huán)；和lodenosine(FddA)，9-(2，3-雙脫氧-2-氟-b-D-蘇-呋喃戊糖苷)腺嘌呤，NIH發(fā)現(xiàn)并且由U.S.Bioscience Inc.，(West Conshohoken，PA)開發(fā)的酸穩(wěn)定性嘌呤為基礎(chǔ)的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。
這里使用的術(shù)語″非-核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑″(″NNRTI″s)意思是抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶活性的非-核苷。典型的合適的NNRTIs包括從Roxane Laboratories(Columbus OH)生產(chǎn)商Boehringer Ingelheim購得的商品名是VIRAMUNE的nevirapine(BI-RG-587)；從Pharmacia& Upjohn Co.(Bridgewater NJ)購得的商品名是RESCRIPTOR的delaviradine(BHAP，U-90152)；WO94/03440公開的從DuPontPharmaceutical Co.(Wilmington DE)獲得的商品名是SUSTIVA的efavirenz(DMP-266)，一種苯并嗪-2-酮；PNU142721，Pharmacia& Upjohn Co.開發(fā)的呋喃吡啶-硫代-嘧啶；AG-1549(以前稱為Shionogi & num；S-1153)；WO 96/10019中公開的并且由AgouronPharmaceuticals，Inc.(LaJolla CA)臨床開發(fā)的5-(3，5-二氯苯基)-硫代-4-異丙基-1-(4-吡啶基)甲基-1H-咪唑-2-基甲基碳酸酯；Mitsubishi Chemical Co.發(fā)現(xiàn)的并且由Triangle Pharmaceuticals開發(fā)的MKC-442(1-(乙氧基-甲基)-5-(1-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-(2，4(1H，3H)-嘧啶二酮)；和美國專利No.5,489,697公開的對Med Chem Research許可的(+)-calanolide A(NSC-675451)和B，香豆素衍生物，Vita-Invest將(+)calanolide A共同開發(fā)為口服給藥產(chǎn)品。
術(shù)語″蛋白酶抑制劑″描述抑制HIV-1蛋白酶的抗病毒劑，而HIV-1蛋白酶是病毒多蛋白母體(例如，病毒GAG和GAG Pol多蛋白)蛋白水解裂解成感染HIV-1中發(fā)現(xiàn)的各種功能蛋白所必需的。Pis主要可以在病毒裝配(即病毒發(fā)育)期間或之后工作，來抑制病毒體熟化成成熟感染狀態(tài)。HIV蛋白酶抑制劑包括具有模擬肽結(jié)構(gòu)，高分子量(7600道爾頓)和實際上肽特征的化合物，例如，CRIXIVAN(從Merck獲得)和非肽蛋白酶抑制劑，例如，VIRACEPT(從Agouron獲得)。
典型的合適的PIs包括從Roche Pharmaceuticals購得的商品名是INVIRASE的硬凝膠膠囊和商品名是FORTOVASE的軟凝膠膠囊噻喹努佛(Ro 31-8959)；從Abbott Laboratories(Abbott Park，IL)購得的商品名是NORVIR的ritonavir(ABT-538)；從Merck & Co.，Inc.，(West Point，PA)購得的商品名是CRIXIVAN的indinavir(MK-639)；從Agouron Pharmaceutical，Inc.購得的商品名是VIRACEPT的nelfnavir(AG-1343)；amprenavir(141W94)，商品名AGENERASE，一種Vertex Pharmaceuticals，Inc.，(Cambridge，MA)開發(fā)的并且從行使使用權(quán)程序的Glaxo-Wellcome獲得的非肽蛋白酶抑制劑；從Bristol-Myers Squibb(Novartis發(fā)現(xiàn)的(CGP-61755)獲得的lasinavir(BMS-234475)；DMP-450，一種Dupont發(fā)現(xiàn)的并且由Triangle Pharmaceuticals開發(fā)的環(huán)狀脲；BMS-2322623，Bristol-Myers Squibb開發(fā)的作為第二代HIV-1PI的氮雜肽；Abbott開發(fā)的ABT-378；和AG-1549，Shionogi(Shionogi & num；S-1153)發(fā)現(xiàn)的Agouron Pharmaceuticals，Inc.開發(fā)的口服活性咪唑氨基甲酸酯。
本發(fā)明的聯(lián)合療法可以進(jìn)一步與尿苷磷酸化酶抑制劑組合使用，所述尿苷磷酸化酶抑制劑是例如，無環(huán)尿苷(acyclouridine)化合物，包括芐基無環(huán)尿苷(BAU)，芐基氧基芐基無環(huán)尿苷(BBAU)，氨基甲基芐基無環(huán)鳥苷(AMBAU)，氨基甲基芐基氧基芐基無環(huán)鳥苷(AMB-BAU)，羥甲基芐基無環(huán)鳥苷(HMBAU)，和羥甲基芐基氧基芐基無環(huán)鳥苷(HMBBAU)；細(xì)胞因子或細(xì)胞因子抑制劑，例如，IL-2[PROLEUKIN(aldesleukin)，Chiron Corp.(Emeryville，CA)描述于EP-0142268，EP-0176299，RE 33653，USP 4530787，USP 4569790，USP4604377，USP 4748234，USP 4752585，和USP 4949314]，IL-12(WO96/25171中公開，Roche Pharmaceutical and American HomeProdocts，Madison，NJ)，IFN-α(INTRON-ASchering Plough)IFN-β和IFN-γ及其重組形式，TNF-α抑制劑，和MNX-160；干擾5′-mRNA進(jìn)程的病毒封閉藥物，例如，利巴韋林1-β-D-核糖呋喃糖苷-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺；描述于美國專利No.4,211,771 ICNPharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，CA；)；有抵抗各種脂質(zhì)包被的病毒包括HIV活性的抗病毒劑，例如，兩性霉素B(AmphotericinB)或者作為具有抗病毒(抗-HIV)活性的脂質(zhì)結(jié)合分子的其甲基酯；糖蛋白處理的抑制劑，例如，粟精胺(Boehringer Mannheim)；羥基脲(Droxia；Bristol-Myers Squibb)，它是核糖核苷三磷酸還原酶的抑制劑，臨床前研究表明對2′，3′-雙脫氧肌苷有協(xié)同作用，并且可以和雙脫氧胸苷一起使用；Yissum項目No.11607，它是Yissum ResearchDevelopment Co.(Jerusalem，Israel)臨床前開發(fā)的以HIV-1Vif蛋白為基礎(chǔ)的協(xié)同蛋白。
抗真菌劑和抗任意感染的其他藥物，包括TB，HBV，EBV，和CMV，可以和本發(fā)明的聯(lián)合療法一起用于減輕和治療與HIV-感染的免疫抑制患者相關(guān)的疾病。
本發(fā)明的聯(lián)合療法中使用的優(yōu)選的另外的治療劑包括dd1，DP-107，3TC，利巴韋林，和IFN-β。
抗病毒活性測試HIV感染(急性，共培養(yǎng)，和慢性)的不同階段化合物(抗病毒活性研究的體外測試是本領(lǐng)域公知的，例如，參見Lambert等，抗病毒研究(Antiviral Res.)21327-342，(1993)。利用這些測試來評價本發(fā)明的聯(lián)合療法，如果期望，還有另外的治療劑，的效果。利用體外測試，例如如下所述，能測定本發(fā)明的聯(lián)合療法中使用的抗病毒劑表現(xiàn)出的抗病毒活性，該項測試測定DP-178多肽抑制合胞體syncytia)形成或抑制無細(xì)胞病毒感染的能力，和/或測定CCR5抑制活性和本發(fā)明中使用的CCR5拮抗劑化合物的拮抗活性。應(yīng)用這些測試，象肽的相對抗病毒活性這樣的參數(shù)表現(xiàn)出抗給定病毒株和/或能測定肽的毒株特異性抑制活性。
此外，通過Chou和alalay的多藥物分析方法(Chou和Talalay，1984，Adv.Enzyme Regul.2227-55)和使用微機軟件的劑量-效果分析(Chou和Chou，1987，Software and Manual.p.19-64Elsevier Biosoft，Cambridge，UK)能測定本發(fā)明聯(lián)合療法的效力。通過MacSynergy計算機程序(Pritchard和Shipman，1990，抗病毒研究(Antiviral Research)14181-206)能計算本發(fā)明的聯(lián)合療法中使用的抗病毒劑之間的藥物-藥物相互作用分析，包括協(xié)同作用和拮抗作用。
本發(fā)明的CCR5拮抗劑化合物抑制RANTES(″調(diào)節(jié)激活作用，正常T細(xì)胞表達(dá)分泌″，其是CCR5的天然配體)結(jié)合，活性(Ki)是大約0.1至2000nM，優(yōu)選0.1至1000nM，更優(yōu)選大約0.1至500nM，最優(yōu)選大約0.1至100nM。
CCR5膜結(jié)合測試應(yīng)用CCR5膜結(jié)合測試的高通量篩選鑒定RANTES結(jié)合的抑制劑。該項測試使用從表達(dá)具有結(jié)合RANTES能力的人CCR5趨化因子受體的NIH 3T3細(xì)胞制備的膜。使用96-孔平板形式，化合物存在或不存在下膜制劑與125I-RANTES溫育1小時。以0.001微克/毫升至1微克/毫升范圍系列稀釋化合物，并且三次測試。通過玻璃纖維過濾器收集反應(yīng)混合物，并且充分洗滌。對復(fù)制總量取平均值，并且以抑制總125I-RANTES結(jié)合的50％所需要的濃度報道數(shù)據(jù)。在第二個以細(xì)胞為基礎(chǔ)的HIV-1入侵和重復(fù)測試中進(jìn)一步表征膜結(jié)合測試中具有有效活性的化合物。
HIV-1入侵測試通過編碼HIV-1的NL4-3毒株的質(zhì)粒(已經(jīng)通過包膜基因突變而修飾并且導(dǎo)入熒光素酶報道基因質(zhì)粒)和編碼幾種HIV-1包膜基因之一的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染產(chǎn)生復(fù)制缺陷HIV-1報道病毒體，如Connor等，病毒學(xué)(Virology)206935-944(1995)所述。通過磷酸鈣沉淀轉(zhuǎn)染兩種質(zhì)粒之后，在第三天收集病毒上清液并且測定病毒功能效價。然后使用這些原液感染穩(wěn)定表達(dá)CD4和趨化因子受體CCR5的U87細(xì)胞，它與或不與試驗化合物預(yù)先溫育。37℃下進(jìn)行感染2小時，沖洗細(xì)胞并且用含有CCR5拮抗劑化合物的新鮮培養(yǎng)基置換培養(yǎng)基。將細(xì)胞溫育3天，溶解并且測定熒光素酶活性。以抑制對照培養(yǎng)物中熒光素酶活性的50％所需要的化合物濃度表示結(jié)果。
HIV-1復(fù)制試驗該項試驗使用原始外周血單核細(xì)胞或穩(wěn)定的U87-CCR5細(xì)胞系來測定本發(fā)明聯(lián)合療法中使用的抗病毒劑阻斷原發(fā)HIV-1毒株感染的效果。從正常健康供者純化原始淋巴細(xì)胞，并且在感染之前用PHA和IL-2體外刺激三天。使用96-孔平板形式，37℃下用藥物將細(xì)胞預(yù)處理1小時，并且接著用親-M HIV-1分離物感染。感染之后，洗滌細(xì)胞，去除殘留的接種物并且在化合物存在下培養(yǎng)4天。收集培養(yǎng)上清液，并且通過測定病毒p24抗原濃度測定病毒復(fù)制。
鈣流出分析在加入化合物和天然CCR5配體(RANTES)之前對表達(dá)HIV輔助受體CCR5的細(xì)胞加載鈣敏感染料。具有激動性質(zhì)的化合物將誘導(dǎo)細(xì)胞中鈣流出信號，而CCR5拮抗劑被鑒定為其本身不誘導(dǎo)信號的化合物，但是天然配體RANTES能阻斷信號傳導(dǎo)。
GTPγS結(jié)合測試(第二膜結(jié)合測試)GTPγS結(jié)合測試測定CCR5配體的受體激活作用。該項測試測定35S標(biāo)記的-GTP和與G-蛋白偶聯(lián)的受體的結(jié)合，其發(fā)生是合適的配體的受體激活作用的結(jié)果。在該項測試中，CCR5配體RANTES與來自CCR5表達(dá)細(xì)胞的膜溫育，并且通過檢測結(jié)合的35S標(biāo)記來自測定對受體的結(jié)合(或激活作用)。如果化合物通過誘導(dǎo)受體的激活作用而表現(xiàn)出激動性質(zhì)或者通過測定競爭或非競爭方式中RANTES結(jié)合的抑制作用而表現(xiàn)出拮抗劑性質(zhì)，則該項測試是定量進(jìn)行的。
趨化性分析趨化性分析是一項功能測試，其表征試驗CCR5拮抗劑化合物的激動性質(zhì)對拮抗性質(zhì)。該項測試測定沒有附著的表達(dá)人CCR5(BaF-550)的鼠細(xì)胞系響應(yīng)試驗化合物或天然配體(即，RANTES，MIP-1β)遷移過膜的能力。細(xì)胞遷移過可滲透膜朝著具有激動活性的化合物。是拮抗劑的化合物不能誘導(dǎo)趨化性但是能抑制響應(yīng)已知的CCR5配體的細(xì)胞遷移。
細(xì)胞融合試驗用于檢測細(xì)胞融合作用的試驗是本領(lǐng)域公知的，并且能用來測定DP-178多肽和/或CCR5拮抗劑抑制膜融合或病毒-誘導(dǎo)的合胞體。一般通過培養(yǎng)不存在任何處理下一般會經(jīng)歷可觀察水平的合胞體形成的細(xì)胞體外進(jìn)行細(xì)胞融合分析。例如，在誘導(dǎo)細(xì)胞融合的病毒(例如HIV)慢性感染的細(xì)胞的存在下或者在要分析的多肽的存在或不存在下，溫育未感染的細(xì)胞(例如，CD4+細(xì)胞，例如Molt或MEM細(xì)胞)。溫育(例如37℃下溫育24小時)之后，用顯微鏡對細(xì)胞培養(yǎng)物檢查多核巨細(xì)胞的存在，這是細(xì)胞融合和合胞體形成的指征。可以使用公知的染料，例如結(jié)晶紫染料，以有利于合胞體形成的觀察。
藥物組合物，劑量和給藥方案因為DP-178的作用位點在病毒的表面，并且阻止自由病毒感染宿主細(xì)胞以及病毒在細(xì)胞和細(xì)胞間傳播，和阻斷宿主細(xì)胞受體和HIV的CCR5拮抗劑化合物聯(lián)合使用DP178，提供能提供加和或協(xié)同作用的作用機理的不同的治療靶物。優(yōu)選地，用較低濃度的抗病毒劑使用本發(fā)明的聯(lián)合療法，產(chǎn)生降低的毒性。因此，本發(fā)明的聯(lián)合療法不僅可以減小抗病毒活性所需要的藥物的有效劑量，從而降低其毒性，而且作為通過多種機理攻擊病毒的結(jié)果，還可以提高絕對抗病毒作用。本發(fā)明的聯(lián)合療法還提供用于避免或減少產(chǎn)生病毒抗性機會的方法。
“聯(lián)合”給與DP-178多肽，或者其藥學(xué)可接受衍生物，和CCR5拮抗劑化合物，或者其藥學(xué)可接受鹽，包括這樣的方法，其中兩種藥物一起作為混合物給藥(單一劑量形式)，還有這樣的方法，其中兩者藥物分開但是同時給藥，例如，通過分開的靜脈內(nèi)途徑或口服和靜脈內(nèi)給藥。
″聯(lián)合″給藥進(jìn)一步包括分開給藥順序給與DP-178多肽和CCR5拮抗劑化合物，使得首先給與藥物的一種，接著給與第二種，例如，作為循環(huán)治療(即，一段時間給與第一種抗病毒化合物，接著一段時間給與第二種抗病毒劑，并且重復(fù)這種順序給藥以減少發(fā)生對化合物之一的抗藥性)。
使用實現(xiàn)它們想要目的的治療有效量的抗病毒劑和合適的藥學(xué)載體配制適合在本發(fā)明中使用的藥物組合物。對于所有的這樣的目的，通過臨床醫(yī)生對患者狀況的觀察能選擇精確配方，給藥途徑和劑量(參見，例如，F(xiàn)ingl等，1975，治療的藥學(xué)基礎(chǔ)(″The PharmacologicalBasis of Therapeutics″)，第一章)。
配制和給藥方法可以參見“Remington’s制藥科學(xué)”(″Remington’sPharmaceutical Sciences″)，第18版，1990，Mack Publishing Co.，Easton，PA。因此根據(jù)本發(fā)明使用的藥物組合物可以以常規(guī)方法配制，使用一種或多種生理可接受載體，包括能在藥物中使用的有利于將活性化合物加工成制劑的賦形劑和輔助劑。合適的配方取決于選擇的給藥途徑。給藥途徑包括口服，直腸，透粘膜，腸內(nèi)，腸胃外，肌內(nèi)，皮下，髓內(nèi)，鞘內(nèi)，直接心室內(nèi)，靜脈內(nèi)(即，注射或連續(xù)輸注)，腹膜內(nèi)，鼻內(nèi)，吸入，眼內(nèi)，經(jīng)皮，局部，陰道等等。
本發(fā)明聯(lián)合療法中使用的藥物制劑優(yōu)選是單位劑量形式。在這樣的形式中，制劑被分為含有合適量的抗病毒劑的合適大小的單位劑量。要給與的本發(fā)明肽的有效劑量可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的程序確定，尋求象生物半壽期，生物可利用度，和毒性這樣的參數(shù)。
劑量形式包括但不限于片劑，分散體，粉末劑，懸浮劑，栓劑，溶液，乳狀液，膠囊，糖衣藥丸，氣霧劑，植入物，乳膏，貼劑，小唧筒等。最優(yōu)選地，靜脈內(nèi)給藥DP-178多肽。最優(yōu)選地，口服給與CCR5拮抗劑化合物。
CCR5拮抗劑或者其衍生物在單位劑量制劑中的量，特別是對于口服給藥，可以從大約10毫克至大約500毫克變化。CCR5拮抗劑的實際劑量可以根據(jù)象患者的年齡，癥狀和體重，要治療的癥狀的嚴(yán)重程度，HIV分離物的類型而變化，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員能確定的。根據(jù)需要，在給藥的一天中，可以將總的日劑量分開并且分次給藥。一般推薦的總?cè)談┝拷o藥方案范圍是每天給藥大約20毫克至大約800毫克，優(yōu)選25毫克至600毫克，更優(yōu)選大約50毫克至400毫克，最優(yōu)選100毫克至200毫克。
在本發(fā)明的聯(lián)合療法中，可以每天一次或者不到每天一次的頻率，例如每周兩次至四次或者隔天一次，給與治療有效量的CCR5拮抗劑，或者其衍生物。劑量也可以分為兩劑至四劑，或者可以提供一次劑量。優(yōu)選地，每天口服，每天兩次(bid)口服治療有效量的CCR5拮抗劑，或者其衍生物。醫(yī)生可以確定本發(fā)明聯(lián)合療法的效力使得減少CCR5拮抗劑給藥次數(shù)，例如一天一次或更少，例如每周1-3次或者隔天一次。
以單位劑量制劑施用的DP-178多肽，或其藥學(xué)可接受衍生物的量，可以腸胃外給藥，例如，作為連續(xù)灌注或注射。DP-178多肽的劑量范圍是3毫克至200毫克(或者其將病毒載量減小1-2個對數(shù)的倍數(shù))，優(yōu)選7毫克至100毫克，更優(yōu)選20毫克至35毫克，每天給藥。本發(fā)明的一個優(yōu)點在于可以比每天兩次(bid)更少地給與多肽，從前對于臨床試驗中使用T-20有報道。因此，本發(fā)明的聯(lián)合療法允許每天一次(qid)給與治療有效量的DP178多肽，優(yōu)選每周一次(qd)兩次至四次，更優(yōu)選隔天一次(qd)。
根據(jù)包裝說明中核準(zhǔn)的劑量和給藥方案或者特定物質(zhì)記錄中提出的核準(zhǔn)的劑量和給藥方案，考慮患者的年齡，性別和狀況，要治療的癥狀的嚴(yán)重程度和HIV分離物，臨床醫(yī)生能確定與本發(fā)明療法聯(lián)合使用的NRTIs，NNRTIs，PIs和其它治療劑的劑量和給藥方案。
典型的合適的多藥物聯(lián)合療法例如(i)選自兩種NRTIs，一種PI，第二種PI，和一種NNRTI的至少三種抗HIV-1藥物；和(ii)至少兩種選自NNRTts和PIs的抗病毒劑。典型的合適的HAART-多藥物聯(lián)合療法包括(a)三聯(lián)聯(lián)合治療，例如兩種NRTIs和一種PI；或(b)兩種NRT1s和一種NNRTI；和(c)四聯(lián)聯(lián)合治療，例如兩種NRTIs，一種PI和第二種PI或一種NNRTI。
這些多藥物聯(lián)合可以與CCR5拮抗劑和DP-178多肽，或它們的藥學(xué)可接受鹽/衍生物聯(lián)合使用。
在對單純性患者的治療中，優(yōu)選使用CCR5拮抗劑和DP-178多肽，或它們的藥學(xué)可接受鹽/衍生物的三聯(lián)多藥物聯(lián)合療法開始抗-HIV-1治療；使用兩種NRTIs和一種PI是優(yōu)選的，除非對PIs有不耐藥性。藥物順應(yīng)性是必需的。應(yīng)該每3-6個月監(jiān)測CD4+和HIV-1-RNA血漿水平。應(yīng)該使病毒載量水平趨穩(wěn)，可以加入另外一種藥物，例如，一種PI或一種NNRTI。下表中進(jìn)一步描述與本發(fā)明聯(lián)合使用的典型的療法抗病毒多藥物聯(lián)合療法A.三聯(lián)聯(lián)合療法1.兩種NRTIs1+一種PI2，2.兩種NRTIs1+一種NNRTI3B.四聯(lián)聯(lián)合療法4兩種NRTIs+一種PI+第二種PI或一種NNRTIC.替代方案5兩種NRTI1一種NRTI5+一種PI2
兩種PIs6+一種NRTI7或NNRTI3一種PI2+一種NRTI7+一種NNRTI3表中腳注1.下面中的一種疊氮胸苷+lamivudine；疊氮胸苷+雙脫氧腺苷；stavudine+lamivudine；stavudine+雙脫氧腺苷；疊氮胸苷+扎西他賓。
2.Indinavir，nelfinavir，ritonavir或噻喹努佛軟凝膠膠囊。
3.Nevirapine或delavirdine。
4.參見Vandamne等，抗病毒化學(xué)和化學(xué)療法(Antiviral Chemistry& Chemotherapy)9193-197(1998)。
5.對由于順應(yīng)性問題或毒性而不能采用推薦的給藥方案的患者，以及對推薦的給藥方案失敗或復(fù)發(fā)的那些患者的替代給藥方案。兩種核苷聯(lián)合可以導(dǎo)致HIV-抗性，并且對很多患者臨床失敗。
6.用噻喹努佛和ritonavir(各400mg bid)獲得大多數(shù)數(shù)據(jù)。
7.疊氮胸苷，stavudine或雙脫氧腺苷。
權(quán)利要求
1.一種對需要這樣的治療的個體治療HIV感染的方法，包括聯(lián)合施用治療有效量的CCR5拮抗劑，或者其藥學(xué)可接受鹽，和治療有效量的DP-178多肽，或者其藥學(xué)可接受衍生物。
2.權(quán)利要求1的方法，其中CCR5拮抗劑，或者其藥學(xué)可接受鹽的劑量是25至600毫克，并且DP-178多肽，或者其藥學(xué)可接受衍生物的劑量是3至200毫克，或者將個體病毒載量減小1-2個對數(shù)的其倍數(shù)。
3.權(quán)利要求1的方法，其中給藥的每一天給與1或2次CCR5拮抗劑，或者其藥學(xué)可接受鹽。
4.權(quán)利要求1的方法，其中每周1-3次或者隔天一次給與CCR5拮抗劑，或者其藥學(xué)可接受鹽。
5.權(quán)利要求1的方法，其中每周1-3次或者隔天一次給與DP-178多肽。
6.權(quán)利要求1的方法，其中每周3次或者隔天一次給與DP-178多肽。
7.權(quán)利要求1的方法，其中口服給與CCR5拮抗劑。
8.權(quán)利要求1的方法，其中皮下給與DP-178多肽。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述CCR5拮抗劑是選自下面的化合物 和
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述DP-178多肽由表3中的氨基酸序列組成。
11.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括聯(lián)合給與用于治療HIV的一種或多種抗病毒劑或治療劑。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述抗病毒劑選自核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，非-核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，和蛋白酶抑制劑。
13.權(quán)利要求11的方法，其中所述抗病毒劑選自DP-107多肽，疊氮胸苷，lamivudine，扎西他賓，雙脫氧腺苷，stavudine，abacavir，adefovir dipivoxil，lobucavir，BCH-10652，emitricitabine，β-LFD4，DAPD，lodenosine，奈韋拉平，delaviridine，efavirenz，PNU-142721，AG-1549，MKC-442，(+)-calanolide A和B，噻喹努佛，indinavir，ritonavir，nelfinavir，lasinavir，DMP-450，BMS-2322623，ABT-378，amprenavir，羥基脲，利巴韋林，IL-2，IL-12，Yissum No.11607和AG-1549。
14.一種對需要這樣的治療的個體治療HIV感染的方法，包括每天一至兩次口服施用25至400毫克/天的下面結(jié)構(gòu)式的CCR5拮抗劑， 或者其藥學(xué)可接受鹽，并且每周一次，兩次，三次或四次皮下給與3至200毫克，或者將個體病毒載量減小1-2個對數(shù)的其倍數(shù)的T-20。
15.權(quán)利要求14的方法，進(jìn)一步包括聯(lián)合給與用于治療HIV的一種或多種抗病毒劑或治療劑。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述抗病毒劑選自核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，非-核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，和蛋白酶抑制劑。
17.權(quán)利要求15的方法，其中所述抗病毒劑選自DP-107多肽，疊氮胸苷，lamivudine，扎西他賓，雙脫氧腺苷，stavudine，abacavir，adefovir dipivoxil，lobucavir，BCH-10652，emitricitabine，β-LFD4，DAPD，lodenosine，奈韋拉平，delaviridine，efavirenz，PNU-142721，AG-1549，MKC-442，(+)-calanolide A和B，噻喹努佛，indinavir，ritonavir，nelfinavir，lasinavir，DMP-450，BMS-2322623，ABT-378，amprenavir，羥基脲，利巴韋林，IL-2，IL-12，Yissum No.11607和AG-1549。
18.一種包括用于聯(lián)合治療HIV感染的單一包裝藥物組合物的試劑盒，其包括在第一容器中含有在藥學(xué)可接受載體中含有CCR5拮抗劑或其藥學(xué)可接受鹽的藥物組合物，每周1-3次或隔天一次給藥的口服劑量是25-600毫克，和在第二容器中含有藥學(xué)可接受載體中含有DP-178多肽或其藥學(xué)可接受衍生物的藥物組合物，以3-200毫克的皮下劑量，或?qū)⒉《据d量減小1或2個對數(shù)的其倍數(shù)。
19.權(quán)利要求18的試劑盒，其包括在附加的容器中含有包括用于治療HIV的藥學(xué)可接受載體中的治療有效量抗病毒劑或治療劑的一種或多種藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療HIV的新的聯(lián)合療法，包括CCR5拮抗劑或其藥學(xué)可接受鹽，和DP－178多肽或其藥學(xué)可接受衍生物。本發(fā)明聯(lián)合療法通過將DP－178多肽給藥頻率從每日皮下兩次減少至每天一次或者只是每周幾次而提供更耐受的治療方案。
文檔編號A61K38/00GK1481251SQ01820919
公開日2004年3月10日 申請日期2001年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月19日
發(fā)明者B·M·巴魯?shù)? B M 巴魯?shù)?申請人:先靈公司