專利名稱：大環(huán)內(nèi)酯抗感染藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及擴(kuò)大紅霉素樣抗生素清單的抗菌化合物。更具體的，本發(fā)明涉及含有至少在C-13的取代基處修飾的紅霉內(nèi)酯核的大環(huán)內(nèi)酯抗生素。
背景技術(shù)：
人們認(rèn)識到獲得對現(xiàn)在已知的抗生素化合物的抗性的微生物菌株數(shù)量遞增，是對公眾健康的一種威脅。隨著這些化合物的使用激增，用于治療各式各樣微生物引起的病情的選擇需要也越來越大。對于抗微生物化合物的更大需要超過了人類感染的治療，并擴(kuò)展到保存食物和其他易腐貨物的需要。新的抗生素對于抗性植物和動(dòng)物也是必需的，并且對會(huì)受到微生物腐蝕的物質(zhì)提供保護(hù)。
因此，清楚的需要擴(kuò)大能提供多方面防御不良微生物活動(dòng)的化合物的武庫。
1998年3月12日出版的WO98/09978(在此引入以供參考)公開了紅霉素的修飾形式，它們在3-位沒有克拉定糖，在大環(huán)內(nèi)酯環(huán)的9-12位用各種方法衍生。類似的，1998年5月12日提交的美國專利號5,750,510(在此引入以供參考)公開了修飾的紅霉素衍生物。
天然存在的紅霉素具有結(jié)構(gòu) 其中R’可以是H或OH，R″可以是H或CH3。
上述引用的專利文獻(xiàn)中公開的所有化合物在大環(huán)內(nèi)酯環(huán)的13位都具有乙基。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)改變13位的取代基導(dǎo)致許多具有優(yōu)異抗菌活性的化合物。
發(fā)明公開本發(fā)明涉及含有修飾的天然結(jié)構(gòu)的紅霉內(nèi)酯衍生物。本發(fā)明的所有化合物都至少在13位被修飾，在11和12位有一個(gè)環(huán)。
因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及下式的化合物 其中Ra是H；取代或未取代的烷基(1-10C)；取代或未取代的鏈烯基(2-10C)；取代或未取代的炔基(2-10C)；取代或未取代的芳基(4-14C)；取代或未取代的芳烷基(5-20C)；或ORa可被H替換；
Rb是H或鹵素；Rc是H或保護(hù)基團(tuán)；Rd是甲基；未取代的烷基(3-10C)；取代的烷基(1-10C)；取代或未取代的鏈烯基(2-10C)；取代或未取代的炔基(2-10C)；取代或未取代的芳基(4-14C)；取代或未取代的芳烷基(5-20C)；取代或未取代的芳基鏈烯基(5-20C)；取代或未取代的芳基炔基(5-20C)；取代或未取代的酰氨基芳烷基(5-20C)；取代或未取代的酰氨基芳基鏈烯基(5-20C)；或取代或未取代的酰氨基芳基炔基(5-20C)；Re是H或保護(hù)基團(tuán)；L是亞甲基或羰基；T是-O-、-N(R)-、-N(OR)-、-N(NHCOR)-、-N(N＝CHR)-、或-N(NHR)-，其中R是H或Ra如上定義，條件是當(dāng)L是亞甲基時(shí)，T是-O-；Z和Y之一是H，另一個(gè)是OH或保護(hù)的OH，或氨基，單-或二烷基氨基，保護(hù)的氨基，或氨基雜環(huán)或Z和Y合起來是＝O、＝NOH或衍生的肟；包括任何其藥物學(xué)上可接受的鹽和任何立體異構(gòu)形式，及其立體異構(gòu)形式的混合物。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及含有式(1)-(3)的化合物的藥物或防腐組合物，以及施用這些化合物治療感染性疾病，或提供它們保存物質(zhì)的方法。
附圖簡述

圖1顯示了本發(fā)明化合物的中間物的合成圖。
圖2顯示了從這些中間物合成化合物的圖解。
圖3顯示了從中間物(7)合成本發(fā)明化合物的另選圖解。
圖4a和4b顯示了本發(fā)明化合物合成圖。
圖5顯示了顯示了本發(fā)明化合物(其中T是-O-)的合成圖。
圖6顯示了紅霉素的PKS后生物合成。在本發(fā)明中如圖1所示使用了該途徑。
圖7顯示了式(4)的中間化合物(其中Ra是甲基)的合成。
圖8顯示了式(6)的中間化合物及其10，11-脫水形式的合成。
圖9顯示了式(6)的中間化合物(脫水形式)(其中ORa被H替換)的合成。
圖10說明了15-疊氮基紅霉素A轉(zhuǎn)化成15-酰氨基紅霉素。
圖11說明了15-酰氨基紅霉素A轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的15-酰氨基-6-O-烷基-酮內(nèi)酯(ketolide)11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
圖12顯示15-酰氨基-6-O-烷基-酮內(nèi)酯11，12-環(huán)氨基甲酸酯的特別優(yōu)選例的結(jié)構(gòu)。在此，X可以是H或F。
圖13說明15-乙烯基紅霉素A轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的15-乙烯基-6-O-烷基-酮內(nèi)酯(ketolide)11，12-環(huán)氨基甲酸酯，以及在C2位的任選氟化。
圖14說明芳基與15-乙烯基-6-O-烷基-酮內(nèi)酯的乙烯基連結(jié)，形成15-(2-芳基乙烯基)酮內(nèi)酯，以及任選的氫化形成15-(2-芳乙基)酮內(nèi)酯。
圖15顯示15-(2-芳基乙烯基)-6-O-甲基-酮內(nèi)酯11，12-環(huán)氨基甲酸酯和15-(2-芳基乙烯基)酮內(nèi)酯11，12-環(huán)氨基甲酸酯的特別優(yōu)選例的結(jié)構(gòu)。在此，X可以是H或F。
圖16顯示通過烯烴置換合成15-乙烯基酮內(nèi)酯。
實(shí)施本發(fā)明的方式可聯(lián)合合成化學(xué)技術(shù)和與基因工程改造的微生物有關(guān)的微生物過程方便的合成本發(fā)明的化合物。簡單說，在實(shí)施本發(fā)明的優(yōu)選模式中，用重組表達(dá)系統(tǒng)提供了一種微生物宿主，優(yōu)選本身不產(chǎn)生大環(huán)內(nèi)酯抗生素的宿主，用于產(chǎn)生修飾的6-脫氧紅霉內(nèi)酯B(6-dEB)，在某些情況下其表達(dá)系統(tǒng)將會(huì)通過在第一組件中的酮合成酶部分催化功能域的分裂而改變。對于Rd是甲基的取代基，用不具有酮合成酶部分分裂的功能域的宿主細(xì)胞。在6-dEB聚酮化合物合成酶(PKS)中的這一改變使得該P(yáng)KS不能利用其天然起始單元，從而能在導(dǎo)致修飾的6-dEB的反應(yīng)序列中包容合成的二酮化合物硫酯用于起始縮合產(chǎn)物，而不用與天然產(chǎn)生的二酮化合物競爭。因此，該重組宿主可提供一種合成的二酮化合物硫酯用于摻入得到的聚酮化合物中。將這一二酮化合物摻入得到的聚酮化合物，得到在13位具有可按需選擇的取代基的聚酮化合物。制備該合成性聚酮化合物硫酯的優(yōu)選方法在申請中的1999年1月27日提交的美國系列申請?zhí)?0/117,384和2000年1月27日提交的09/492,733中列出，在此引入以供參考。
1997年1月28日出版的PCT申請WO97/02358和1999年1月28日出版的WO99/03986描述了在第一組件(KS1)中含有失活的酮合成酶(KS)結(jié)構(gòu)域的6-dEBPKS的重組形式，和經(jīng)修飾的含有該P(yáng)KS表達(dá)系統(tǒng)的合適生物體，在此引入以供參考。
然后如需要，從重組修飾的生物體中分離并純化出修飾的PKS表達(dá)得到的聚酮化合物，將其喂給紅色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea)，它具有聚酮化合物后修飾功能，包括糖基化。其他修飾包括在6和/或12位羥基化。然后分離得到的修飾紅霉素并進(jìn)行化學(xué)修飾，獲得本發(fā)明的化合物。WO98/09978和美國專利號5,750,510描述了提供這些修飾的合成方法，在此引入以供參考。
圖1顯示了合成本發(fā)明化合物的中間物的通用方法。
圖2顯示了從本發(fā)明的中間物合成化合物的方法。
得到的抗感染化合物在體外和體內(nèi)對于一組代表性微生物都具有活性。因此，本發(fā)明的化合物展示了專一性上的充分多樣性，覆蓋所需的抗生素活性譜。
為了用于治療感染性疾病，將本發(fā)明的化合物配制成合適的組合物，它將包括典型的賦形劑，如果化合物是鹽，還包括藥物學(xué)上可接受的平衡離子；如需要，還包括其他添加劑，如抗氧化劑、緩沖劑等，并施給動(dòng)物或人。適用于這些化合物的制劑類型與一般的大環(huán)內(nèi)酯抗生素的類似?？稍诶鏡emington’sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，最新版中發(fā)現(xiàn)這些制劑?？捎萌魏涡枰耐緩?包括注射、口腔給藥、透皮給藥、透粘膜給藥或任何組合)施用化合物。如需要，本發(fā)明的化合物還可與其他活性成分一起施用。
本發(fā)明的化合物具有上面提出的式(1)-(3)，以及所示的這些化合物的任何立體異構(gòu)形式。描述的具體的立體異構(gòu)體是從上述合成的優(yōu)選方法得到的，并在文中例證；然而，通過修改PKS的表達(dá)系統(tǒng)，或通過改變二酮化合物的手性，或通過合成化學(xué)轉(zhuǎn)化，還可制備其他異構(gòu)體。還可在取代基中存在附加的手性中心，如Rd和Rf。這些異構(gòu)體可作為混合物施用，或可如本領(lǐng)域已知那樣分離和利用各異構(gòu)體。
式(1)-(3)的化合物的性質(zhì)由取代基Ra-Re、L、T、Y和Z限定。下文列出了這些取代基的優(yōu)選例。它們含有如下限定的基團(tuán)“鹵素”包括氟、氯、溴和碘，最優(yōu)選是氟。
“烷基”指飽和直鏈、支鏈或環(huán)烴基，含有特定數(shù)目的碳，并可含有一個(gè)或多個(gè)合適的雜原子；類似的，鏈烯基和炔基指直鏈或支鏈或環(huán)狀烴類取代基，分別含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵或一個(gè)或多個(gè)三鍵，并含有一個(gè)或多個(gè)合適的雜原子。
“芳基”指芳族取代基，可能含有一個(gè)或多個(gè)雜原子，如苯基、萘基、喹啉基、或菲基。
“芳烷基”、“芳基鏈烯基”、或“芳基炔基”指取代基，其中芳基分別通過烷基、鏈烯基或炔基鍵合與被取代的基團(tuán)連接。在芳烷基、芳基鏈烯基或芳基炔基中的碳數(shù)目也被限定。
“酰氨基芳烷基”、“酰氨基芳基鏈烯基”、或“酰氨基芳基炔基”指取代基，其中芳基分別通過酰氨基和烷基、鏈烯基或炔基鍵合與被取代的基團(tuán)連接。在酰氨基芳烷基、酰氨基芳基鏈烯基或酰氨基芳基炔基中的碳數(shù)目也被限定。
因此，本文限定的取代基中包括“雜烷基”、“雜鏈烯基”、“雜炔基”、“雜芳基”、“雜芳烷基”等。合適的雜原子包括N、O和S。
所有前述取代基可以是未被取代或被進(jìn)一步取代。典型取代基包括R、-OR、-SR、-NR2、-COR、-COOR、-CONR2、-OOCR、-NRCOR、-OCONR2、-CN、-CF3、-NO2、-SOR、-SO2R、鹵素，其中各R分別是H或烷基、鏈烯基、炔基、芳基、芳烷基或如上定義的這些基團(tuán)的雜形式。另外、烷基、鏈烯基和炔基可被芳基或雜芳基取代，它們本身還可被進(jìn)一步取代。芳基和雜芳基還可被烷基、鏈烯基或炔基、或其他芳基或雜芳基取代。
“衍生的肟”是式＝N-O-R，其中R不是H，并如上限定。
羥基的“保護(hù)基團(tuán)”包括?；?、甲硅烷基等。在Greene，T.W.等，Protect Groupsin Organic Synthesis，第二版，John Wiley & Sons，Inc.(1991)中描述了合適的取代基，在此引入以供參考。
本發(fā)明包括如上限定的更優(yōu)選的實(shí)施例。Rd優(yōu)選是丁基、戊基、甲氧基乙氧基甲基、異丁基、甲基環(huán)己基、苯基、芐基、乙基苯基、3-(芐氧基)丙基、2-(嘧啶-2-基硫代)乙基、丙基、氟乙基、氯乙基、乙烯基、3-丁烯基或疊氮基乙基，更優(yōu)選的是丙基、氟乙基、氯乙基、乙烯基、3-丁烯基或疊氮基乙基。1999年1月27日提交的美國專利號60/117,384和2000年1月27日提交的美國專利號09/492,733(都在此引入以供參考)描述了各種寡酮化合物硫酯，優(yōu)選二酮化合物硫酯，可在C-13位摻入?？蓪⑽闹兴龅亩衔锪蝓饺氡景l(fā)明的化合物，并確定C-13位的優(yōu)選Rd基團(tuán)。
在另一個(gè)優(yōu)選例中，Ra是H或低級C1-C3烷基，更優(yōu)選的是甲基。Ra還優(yōu)選芳基鏈烯基或芳基炔基，如3-芳基丙-2-烯基或3-芳基丙-2-炔基。在優(yōu)選的芳基鏈烯基或芳基炔基實(shí)施例中優(yōu)選的芳基是3-喹啉基、4-喹啉基、5-喹啉基、苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-甲氧基苯基、6-喹啉基、6-喹噁啉基、6-氨基-3-喹啉基、或4-異喹啉基。
當(dāng)T-L-O形成氨基甲酸酯環(huán)時(shí)，特別優(yōu)選在氨基甲酸酯氮(R)、6-O位(Ra)、和13位(Rd)上取代基的組合。在第一個(gè)優(yōu)選組合中，Ra優(yōu)選芳烷基、芳基鏈烯基或芳基炔基；R優(yōu)選H或取代或未取代的低級烷基；Rd優(yōu)選取代或未取代的烷基。在這些化合物中，Ra更優(yōu)選是芳丙基、芳基丙-2-烯基、或芳基丙-2-炔基；R更優(yōu)選是氫或甲基；和Rd更優(yōu)選是丙基、氟乙基或氯乙基。
在第二個(gè)優(yōu)選組合中，Ra是H或取代或未取代的低級烷基；R優(yōu)選芳烷基、芳基鏈烯基或芳基炔基；和Rd是取代或未取代的烷基。在這些化合物中，Ra更優(yōu)選是甲基；R更優(yōu)選是芳丙基、芳基丙-2-烯基或芳基丙-2-炔基；和Rd更優(yōu)選是丙基、氟乙基或氯乙基。
在第三個(gè)優(yōu)選組合中，當(dāng)Rd是未取代的、能進(jìn)一步衍生化的取代基(如鏈烯基或炔基或其他基團(tuán)，如疊氮基烷基)時(shí)，優(yōu)選Ra是氫或取代或未取代的低級烷基；R是H或取代或未取代的低級烷基；Ra更優(yōu)選是H或甲基，R更優(yōu)選是H。說明性的不飽和取代基，Rd更優(yōu)選是乙烯基、炔丙基或丁烯基，和其他可衍生的取代基，包括疊氮基乙基?？捎帽景l(fā)明的方法容易的衍生這些化合物，從不飽和取代基形成芳烷基、芳基鏈烯基或芳基炔基取代基，從疊氮基取代基形成酰氨基芳烷基、酰氨基芳基鏈烯基、或酰氨基芳基炔基取代基。
圖12和15顯示了優(yōu)選的15-酰氨基酮內(nèi)酯、15-乙烯基酮內(nèi)酯和其他優(yōu)選的芳基取代酮內(nèi)酯。
另外，在化合物(1)的一個(gè)實(shí)施例中，T不是(N-R)。在另一個(gè)化合物(1)的實(shí)施例中，T-L-O不形成氨基甲酸酯環(huán)。
本發(fā)明化合物的合成如上所述，優(yōu)選通過將合適的二酮化合物喂給經(jīng)修飾的微生物(含有剔除了KS1的6-dEB PKS表達(dá)系統(tǒng))或能在C-13位提供甲基的宿主細(xì)胞，然后將得到的聚酮化合物喂給紅色糖多孢菌重組菌株(已經(jīng)改變，不產(chǎn)生6-dEB)，制備用于任何進(jìn)一步化學(xué)合成的本發(fā)明的抗生素起始材料?？芍苽淠芰u基化6-和12-位或僅羥基化12-位的菌株。在后一種情況中，-H替換了-ORf。通過用含有突變的eryA1序列(編碼失活的KS1結(jié)構(gòu)域)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化產(chǎn)生高水平紅霉素A的紅色糖多孢菌菌株，獲得了重組紅色糖多孢菌K40-67。通過同源重組，現(xiàn)在得到的轉(zhuǎn)化株不能產(chǎn)生作為底物聚酮化合物競爭物的6-dEB，而是在鏈霉菌或其他產(chǎn)聚酮化合物轉(zhuǎn)化株產(chǎn)生的修飾聚酮化合物的6-位和12-位羥基化，3-位和5-位糖基化。如果大環(huán)內(nèi)酯僅有12-位羥基化，而不需要6-位羥基化(ORf被H替換)，可通過打斷菌株K40-67中的eryF羥化酶基因來構(gòu)建紅色糖多孢菌菌株。另外，可使eryK基因失去功能，可容易產(chǎn)生化合物(1)-(3)的實(shí)施例。
式(1)-(3)的化合物的形成需要產(chǎn)生在12-位具有羥基的紅霉內(nèi)酯。起始物質(zhì)可包括化合物(4)-(6)的任一個(gè) 產(chǎn)生紅霉素的糖基化反應(yīng)生成與本文式(4)中列出化合物類似的二糖基化形式。如果式(4)的化合物要從最初產(chǎn)物制備，那么需要保護(hù)克拉定糖環(huán)(與3位連結(jié))的羥基，以適于大環(huán)內(nèi)酯取代基的隨后修飾。
本發(fā)明修飾的紅霉素除了在C-13位修飾外，還在6位含有-OH，除非如上述ORa被H取代。為了最終構(gòu)建式(1)、(2)和(3)的化合物(其中6位是ORa)，提供了具有保護(hù)基團(tuán)的式(I)(圖1)的化合物，具有保護(hù)基團(tuán)，形成Rc和Re的一個(gè)實(shí)施例。用合適的保護(hù)試劑這些保護(hù)是有效的，如乙酸酐、苯甲酸酐、氯甲酸芐酯、六甲基二硅氮烷、或三烷基甲硅烷基氯在非質(zhì)子溶液中實(shí)現(xiàn)。合適的非質(zhì)子溶劑包括二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、N-甲基吡咯烷酮、二甲亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)等。還可用混合物。式(I)中兩個(gè)糖羥基的保護(hù)可同時(shí)或先后進(jìn)行。
除了保護(hù)兩個(gè)糖殘基的2’和4″羥基外，也必須保護(hù)大環(huán)內(nèi)酯環(huán)9位的酮基。通常這是通過將酮基轉(zhuǎn)化成衍生的肟實(shí)現(xiàn)的。式＝NOR中R的特別優(yōu)選例包括未取代或取代的烷基(1-12C)、取代或未取代的芳基(6-10C)、烷基(1-12C)、取代或未取代的雜芳基(6-10C)、烷基(1-12C)、和雜烷基(例如式CR’2OR的取代基，其中各R’，除了上述的R分別例證的那樣，可與其他合起來形成環(huán)烷基環(huán)(3-12C))。優(yōu)選衍生的肟是式＝NOR，其中R是異丙氧基環(huán)己基。
9-酮基和2’和4″羥基受到保護(hù)后，可以通過與烷基化試劑在堿存在下反應(yīng)，烷基化式(1)化合物的6-羥基。烷基化試劑包括烷基鹵化物和磺酸酯。例如，烷基化試劑可包括甲苯磺酸甲酯、2-氟乙基溴、肉桂基溴、巴豆基溴、烯丙基溴、炔丙基溴等。在堿(如氫氧化鉀、氫化鈉、異丙醇鉀、叔丁醇鉀)和非質(zhì)子溶劑存在下進(jìn)行烷基化。
烷基化試劑的選擇視要包括的取代基Ra的性質(zhì)而定。如上所述，Ra可以是取代或未取代的烷基(1-10C)、取代或未取代的鏈烯基(2-10C)、或取代或未取代的炔基(2-10C)。特別優(yōu)選的是未取代的烷基、鏈烯基或炔基，或這些基團(tuán)的取代形式，其中取代基包括一個(gè)或多個(gè)鹵素、羥基、烷氧基(1-6C)、氧代、SO2R(1-6C)、N3、CN和NR2，其中R是H、取代或未取代的烷基(包括環(huán)烷基)(1-12C)、取代或未取代的鏈烯基(包括環(huán)鏈烯基)(2-12C)、炔基(包括環(huán)炔基)(2-12C)、取代或未取代的芳基(6-10C)，包括上述的雜形式。
特別優(yōu)選的是甲基、烯丙基和乙基。
一旦完成了6-羥基的烷基化，糖基和大環(huán)內(nèi)酯環(huán)可去保護(hù)。糖苷部分的去保護(hù)如Green，T.W.等，Protect Groups in Organic Synthesis，下文所述。類似的條件導(dǎo)致將衍生的肟轉(zhuǎn)化成＝NOH。如果未衍生的肟的形成不與去保護(hù)同時(shí)發(fā)生，可單獨(dú)進(jìn)行肟的轉(zhuǎn)化。
然后可脫肟并用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法轉(zhuǎn)化成酮基。脫肟劑包括無機(jī)的硫氧化物，如亞硫酸氫鈉、焦硫酸鈉、硫代硫酸鈉等。就此，可使用質(zhì)子性溶劑，如水、甲醇、乙醇、異丙醇、三甲基硅烷醇和它們的混合物。一般說，在有機(jī)酸存在下進(jìn)行脫肟反應(yīng)。
過程中在該點(diǎn)或以后，式(4)的化合物被轉(zhuǎn)化成下文進(jìn)一步描述的式(5)或(6)，或化合物(1)-(3)任一的化合物后，可進(jìn)一步操作在6-羥基引入的基團(tuán)。最初取代可方便的提供6-O-烯丙基(即O-CH2CH＝CH2)，它可進(jìn)一步通過還原衍生化，得到6-O丙基化合物，或用四氧化鋨處理，得到2，3-二羥基丙基化合物，它可進(jìn)一步在各氧原子上酯化。還可用間氯過氧苯甲酸在非質(zhì)子溶劑中氧化O-烯丙基衍生物，得到環(huán)氧化合物，它可用胺或含N的雜芳基化合物開環(huán)，得到含N的側(cè)鏈的化合物，或可在Wacker條件下氧化，得到取代基O-CH2-C(O)-CH3，或可臭氧化得到醛。然后可將醛轉(zhuǎn)化成肟，或與合適的胺反應(yīng)，并在氫硼化合物還原劑的存在下還原，得到胺。還可通過與脫水試劑在非質(zhì)子溶劑中反應(yīng)將肟轉(zhuǎn)化成腈。還可使O-烯丙基與芳基鹵在Heck條件(Pd(II)或Pd(O)，膦和胺或無機(jī)堿)下反應(yīng)，得到3-芳基丙-2-烯基衍生物。然后用氫氣和鈀碳還原該衍生物，得到3-芳基丙基衍生物。如果最初取代基Ra是2-丙炔，可用類似反應(yīng)改變側(cè)鏈，包括芳基化。
為了將式(4)的化合物轉(zhuǎn)化成式(1)的化合物，通過首先除去克拉定糖部分，用弱酸水溶液或去糖苷酶處理式(4)的化合物。合適的酸包括鹽酸、硫酸、氯乙酸、三氟乙酸等的醇溶液。反應(yīng)時(shí)間通常是0.5-24小時(shí)，溫度是-10-35℃。在該反應(yīng)過程中，如上所述保護(hù)留下的糖的2’基團(tuán)，然后在去克拉定糖反應(yīng)后去保護(hù)。然后將得到的大環(huán)內(nèi)酯環(huán)3-位的羥基用改良的Swern氧化法氧化成酮。在該方法中，使用氧化劑，如N-氯琥珀酰亞胺-二甲硫醚或碳化二酰胺-二甲亞砜。通常，在氯化溶劑如二氯甲烷中，-10-25℃下在預(yù)形成的N-氯琥珀酰亞胺和二甲硫醚復(fù)合物中加入式(4)的化合物。攪拌0.5-4小時(shí)后，加入叔胺(如三乙胺)，產(chǎn)生相應(yīng)的酮，然后除去2’保護(hù)基團(tuán)。
為了在2位鹵化大環(huán)內(nèi)酯(將Rb從H轉(zhuǎn)化到鹵素)，用堿和親電鹵化劑(如全溴吡啶鎓或N-氟苯磺酸)處理式(6)的化合物(其中Rb＝H)。在制備了3酮化合物后，可在任何時(shí)候鹵化2位，優(yōu)選在11，12環(huán)形成后。
可進(jìn)一步操作C-13位的合適取代基，如乙烯基(vinyl)、次乙基(ethenyl)、丁烯基或疊氮基。例如，可用芳基乙酰氯衍生本發(fā)明化合物的酰胺基乙酸鹽，在C-13位上(如圖10所示)得到芳基氨基烷基。優(yōu)選疊氮基的C13衍生在酮化合物形成前發(fā)生。鏈烯基如次乙基的衍生化可在酮化合物形成前或后發(fā)生，優(yōu)選在11，12環(huán)形成之后，如圖14和16所示。
為了獲得式(5)的化合物，用脫水劑(如羰基二咪唑和堿)處理從式(4)去糖基化反應(yīng)得到的化合物。
然后可從中間物(4)-(6)制備中間物(7)-(9)。 應(yīng)注意12-羥基的存在是必需的。糖部分的羥基如上被保護(hù)，然后使得到的保護(hù)的化合物與六甲基二硅氮烷化鈉和羰基二咪唑反應(yīng)，進(jìn)行脫水，獲得10-11位的π鍵和12-羥基的衍生，在化合物(7)-(9)所示的大環(huán)內(nèi)酯環(huán)中提供了官能團(tuán)。圖2說明了從化合物(4)到化合物(9)的第一步反應(yīng)順序。
化合物(7)-(9)與氨的水溶液反應(yīng)得到式(1)-(3)的化合物(其中L是羰基，T是NH)，如圖2對于化合物(9)和(3)的第二步中所示。
使化合物(7)-(9)和式H2NR、H2NOR、H2NNHCOR、H2NN＝CHR或H2NNHR(其中R是H或Ra)的化合物反應(yīng)，得到相應(yīng)的式(1)-(3)的化合物(其中T是如Rf取代基所述衍生的氮，包括-R、-OR、-NHCOR、-N＝CHR或-NHR)。在圖2中，Rf是H，因?yàn)槭褂昧税?。這些是式(10)-(12)的化合物 其中Rf代表如上所述氮上的取代基。圖3類似的描述了化合物(7)與H2NRf的反應(yīng)，形成化合物(10)。制備是按照Baker等，J Org Chem(1988)532340描述的方法，在此引入以供參考。特別是，用式H2N-Rf的氨基化合物處理化合物(7)，形成環(huán)狀氨基甲酸酯，其中Rf如上所述?？扇缟纤鰧ΡＷo(hù)的2’-羥基去保護(hù)。
可用其他或另外的方法制備化合物(10)-(12)，其中Rf不是H。
例如，式(10)-(12)的化合物(其中Rf是H)可與烷基化試劑(式R-鹵素)反應(yīng)，用烷基替換環(huán)上氮上的氫。
另外，在T的氮上不含作為取代基的酰基的化合物(10)-(12)可通過用?；噭┨幚硭龌衔?10)-(12)而形成，這些?；噭┻x自R(CO)-鹵素或(RCO)2O，得到化合物(7)-(9)，其中T是-N-，Rf是-NH-COR。
用醛R-CHO(其中R如前定義)處理化合物(10)-(12)(其中Rf是-NH2)，得到化合物(10)-(12)(其中Rf是-N＝CHR)。
用烷基化試劑(具有式R-鹵素，其中R如前定義)處理化合物(10)-(12)(其中Rf是-NH2)，得到化合物(10)-(12)(其中Rf是R)。
當(dāng)然，如果環(huán)形成的底物是式(4)的化合物，則得到式(3)的化合物；可進(jìn)行修飾，將式(3)的化合物如上所述轉(zhuǎn)化成式(1)和(2)的化合物。在這些情況下，酮基可被衍生的肟保護(hù)。這些修飾包括通過酸水解除去克拉定糖基；氧化3-羥基；和對保護(hù)的羥基和酮基去保護(hù)。
根據(jù)說明性圖解4a(圖4a)所示的另選方法，用稀釋的無機(jī)酸或有機(jī)酸如前所述對中間化合物(I1)(是紅霉素A的9-肟化合物)進(jìn)行酸水解，以除去克拉定糖基，得到中間化合物(I2)。然后通過與合適的取代的肟保護(hù)試劑反應(yīng)，將肟化合物(I2)轉(zhuǎn)化成保護(hù)的肟化合物(I3)，其中V是＝N-O-R1(其中R1是保護(hù)基團(tuán))。然后優(yōu)選用三甲基甲硅烷基保護(hù)基團(tuán)保護(hù)(I3)的3和2’-羥基，得到化合物(I4)。然后如上所述烷基化化合物(I4)，得到化合物(I5)，首先如上所述對化合物(I5)脫肟，然后用說明性圖解2中所述從化合物(4)制備化合物(3)的方法，將脫肟產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成化合物(I6)。圖4b顯示然后去除化合物(I6)的保護(hù)，用前述方法氧化成3-酮內(nèi)酯衍生物，本發(fā)明的化合物(10)，其中L是CO，T是-NRf。中間化合物I6也可以去保護(hù)并脫水，形成本發(fā)明化合物(11)，如圖4b中所述。
如前所述，在形成化合物(1)-(3)后可操作6-位的取代基。例如，可制備化合物(10)(其中Ra是-CH2-CH-N-ORh，Rh是H或C1-C3烷基、芳基取代的C1-C3烷基、或雜芳基取代的C1-C3烷基)。在該方法中，用臭氧處理化合物(10)(其中Ra是-CH2-CH＝CH2)，形成化合物(10)(其中Ra是-CH2-CH＝O)。
進(jìn)一步用羥胺化合物(具有式NH2-O-Rh，其中Rh如前定義)處理化合物(10)(其中Ra是-CH2-CH＝O)；并可任選的去保護(hù)，并分離得到所需化合物。在上述優(yōu)選例中，Rf是H。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，是制備化合物(10)(其中Ra是-CH2-CH2-NH-Ri其中Ri和與其結(jié)合的原子形成3-10元取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán))的一種方法。
該方法包括用胺化合物(具有式-NH2-Ri，其中Ri如前定義)還原氨化化合物(10)(其中Ra是-CH2-CH＝O)；并可任選的去保護(hù)，分離所需化合物。
用Baker等J Org Chem(1988)532340(在此引入以供參考)所述的方法從化合物(4)-(6)制備式(1)-(3)的化合物(其中L是羰基，T是-O-，或其中L是亞甲基，T是-O-)。通過與羰基二咪唑和六甲基二硅氮烷化鈉反應(yīng)，首先將式(4)-(6)的2’或2’，4″-保護(hù)的化合物轉(zhuǎn)化成環(huán)狀羧酸酯。
化合物(13)-(15)代表了化合物(1)-(3)，其中L是亞甲基，T是-O- 圖5中的說明性圖解5顯示了具有式(6)的化合物轉(zhuǎn)化成具有式(1)的化合物。圖11和13說明了紅霉素轉(zhuǎn)化成酮內(nèi)酯。
為了制備式(4)-(6)或式(1)-(3)的化合物(其中Z和Y之一是H，另一個(gè)是OH或保護(hù)的OH或是為上述的氨基衍生物)，羰基或肟或衍生的肟用合適的還原劑還原。還可通過烷基化獲得取代的胺。
還提供了本發(fā)明化合物合成的新方法。
示范性實(shí)施例用不同取代基定義了式(1)、(2)和(3)的化合物。表1表明了本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物，它們是對于式(1)，其中Rb是H、F、Cl或Br，L是CO，Rc是H；
對于式(2)，其中Rc是H，L是CO；和對于式(3)，其中Rc是H，L是CO，Re是H；

實(shí)施例下面的實(shí)施例是為了說明而不是要限制本發(fā)明。
在說明性圖解和前面的公開內(nèi)容中可見化合物號和命名。
在這些實(shí)施例中，在方法的第一通用步驟中，通過重組鏈霉菌宿主細(xì)胞的發(fā)酵制備了6-脫氧紅霉內(nèi)酯B(6-dEB)衍生化合物。
產(chǎn)生15-甲基-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B和14，15-脫氫-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B的發(fā)酵需要喂給發(fā)酵細(xì)胞合成的二酮化合物中間物。在實(shí)施例1中描述了這些合成的二酮化合物的制備。這些合成的二酮化合物是6-脫氧紅霉內(nèi)酯B合成酶(DEBS)的底物，該酶由于DEBS的組件1的酮合成酶結(jié)構(gòu)域中的突變，不能作用于它的天然底物(丙酰CoA)。用天藍(lán)色鏈霉菌(Streptomyces coelicolor)CH999中的質(zhì)粒pJRJ2制備了該重組DEBS。美國專利號5,672,491中描述了天藍(lán)色鏈霉菌CH999，在此引入以供參考。美國專利申請?zhí)?9/181,833(在此引入以供參考)中描述了天藍(lán)色鏈霉菌CH999的衍生物，天藍(lán)色鏈霉菌K39-02，它經(jīng)過基因修飾，含有ptpA基因，也可用于該目的。
質(zhì)粒pJRJ2編碼eryAI、eryAII和eryAIII基因；質(zhì)粒中所含的eryAI基因含有KS1無效突變。KS1無效突變防止野生型基因產(chǎn)生的6-脫氧紅霉內(nèi)酯B的形成，除非提供外源底物。PCT出版物號99/03986和97/02358和1996年7月5日提交的美國專利申請?zhí)?8/675,817；1997年7月17日提交的08/896,323和1999年5月14日提交的09/311,756(均在此引入以供參考)中描述了質(zhì)粒pJRJ2和用該質(zhì)粒制備新穎13-取代的紅霉素的方法?？捎冒l(fā)明人G.Ashley等2000年1月27日提交的PCT專利申請?zhí)朠CT/US00/02397和美國專利申請?zhí)?9/492,733(都要求了1999年提交的美國專利申請60/117,384的優(yōu)先權(quán)，在此引入以供參考)提供的方法制備外源底物，并包括所述的化合物。還可使用除了ery基因外的PKS基因；合適的基因包括含有竹桃內(nèi)酯和巨霉素PKS基因的KS1無效突變，如1999年10月8日提交的美國專利申請?zhí)?0/158,305，1999年10月28日提交的09/428,517和1999年10月22日提交的PCT專利申請?zhí)朥S99/24478(分別在此引入以供參考)描述的那些。
實(shí)施例2中描述了天藍(lán)色鏈霉菌CH999/pJRJ2和天藍(lán)色鏈霉菌CH999/pCK7的發(fā)酵?？赏ㄟ^篩選分離發(fā)酵得到的6-脫氧紅霉內(nèi)酯產(chǎn)物。
然后將分離的產(chǎn)物加到紅色糖多孢菌菌株的發(fā)酵肉湯中，產(chǎn)生本發(fā)明的其他有用的中間化合物。紅色糖多孢菌菌株催化6-dEB衍生化合物的生物合成，以及糖殘基與6-dEB衍生化合物的3和5位結(jié)合。這些菌株還含有功能性eryK基因產(chǎn)物，并可在12位羥基化6-dEB衍生化合物。菌株的不同在于是否產(chǎn)生功能性eryF基因產(chǎn)物。如果產(chǎn)生，生成的化合物在6位羥基化。如果不產(chǎn)生，就產(chǎn)生6-脫氧紅霉素A衍生物。在實(shí)施例3中描述了這些紅色糖多孢菌發(fā)酵，并從發(fā)酵肉湯中分離了紅霉素A衍生化合物。
然后在本發(fā)明其他中間化合物的化學(xué)合成中將分離的產(chǎn)物用作中間物。對于含有6-羥基的紅霉素A衍生物中間物，實(shí)施例4-6描述了烷基化該化合物，產(chǎn)生本發(fā)明的6-O-烷基中間物。這些反應(yīng)的圖解如圖7所示。
實(shí)施例1二酮化合物硫酯的制備該實(shí)施例描述了用于制備喂給重組鏈霉菌宿主細(xì)胞的N-乙酰半胱胺硫酯(NAcS)，來制備15-甲基和14，15-脫氫-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B中間化合物的方法。在1999年1月27日提交的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?0/117,384中也描述了下文描述的合成方案，在此引入以供參考。
因此，使(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羥基己?；鵠-4-芐基-2-噁唑烷酮(制備方法D)和N-乙酰半胱胺(制備方法B)反應(yīng)，制備了(2S，3R)-2-甲基-3-羥基己酸酯NAcS(制備方法E)，用于制備15-甲基-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B中間物。而N-乙酰半胱胺是從N，S-二乙酰半胱胺(制備方法A)制備的。(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羥基己?；鵠-4-芐基-2-噁唑烷酮(制備D)是用(4S)-N-丙?；?4-芐基-2-噁唑烷酮(丙?；?NOx；制備方法C)制備的。
用類似方法，使(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羥基-4-戊?；鵠-4-芐基-2-噁唑烷酮(制備方法F)和N-乙酰半胱胺(制備方法B)反應(yīng)，制備了(2S，3R)-2-甲基-3-羥基-4-戊酸酯NAcS(制備方法G)，后者用于制備14，15-脫氫-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B中間物。(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羥基-4-戊?；鵠-4-芐基-2-噁唑烷酮(制備D)是用(4S)-N-丙?；?4-芐基-2-噁唑烷酮(丙酰基-NOx；制備方法C)制備的。
A.N，S-二乙酰半胱胺在1升3-頸圓底燒瓶(裝有磁性攪棒、2個(gè)加樣漏斗和pH電極)中加入半胱胺鹽酸鹽(50.0克)。加入水(300毫升)，在冰上冷卻攪拌好的溶液。加入8N NaOH，將pH調(diào)節(jié)到8.0。將乙酸酐(125毫升)置于一個(gè)加樣漏斗，將8N KOH(350毫升)置于另一個(gè)加樣漏斗。在半胱胺溶液中滴加乙酸酐，同時(shí)加入8N KOH，將反應(yīng)pH維持在8+/-1。加完乙酸酐后，用1N HCl將pH調(diào)節(jié)到7.0，在冰上攪拌混合物75分鐘。加入固態(tài)NaCl至飽和，用400毫升一份的CH2Cl2抽提溶液4次。合并有機(jī)抽提物，用MgSO4干燥，過濾，減壓濃縮得到68.9克(97％產(chǎn)率)的淡黃色油，在4℃放置后結(jié)晶。
B.N-乙酰半胱胺N，S-二乙酰半胱胺(42.64克)置于2升圓底燒瓶中，其中裝有磁性攪棒，溶于1400毫升水。用N2清洗燒瓶，混合物冷凍在冰浴中。加入氫氧化鉀(49.42克)，在惰性氣氛下在冰上攪拌混合物2小時(shí)。用6N HCl將pH調(diào)節(jié)到7，加入固態(tài)NaCl至飽和。用500毫升一份CH2Cl2抽提混合物7次。合并有機(jī)抽提物，用MgSO4干燥，過濾，減壓濃縮得到30.2克(96％產(chǎn)率)的產(chǎn)物。即將使用前蒸餾該物質(zhì)，熔點(diǎn)138-140℃/7毫米汞柱。
C.(4S)-N-丙?；?4-芐基-2-噁唑烷酮(丙酰基-NOx)在裝有500毫升加樣漏斗和攪棒的干燥1升三頸圓底燒瓶中裝有20克(4S)-4-芐基-2-噁唑烷酮，用反口橡皮塞加蓋，用氮?dú)獯祾?。用插管加入無水THF(300毫升)，在-78℃干冰/異丙醇浴中冷卻得到的溶液。在加樣漏斗中用插管加入78毫升正丁基鋰(1.6M的己烷溶液)，以緩慢液流加到反應(yīng)物中。用針筒迅速加入蒸餾過的丙酰氯(熔點(diǎn)77-79℃)8.0毫升。在干冰/異丙醇浴中攪拌反應(yīng)物30分鐘。
從冰浴中取出反應(yīng)物，溫至＞0℃，并用50毫升飽和NH4Cl水溶液淬滅。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上將混合物濃縮成漿液。用250毫升一份的乙醚抽提漿液3次。合并有機(jī)抽提物，各用50毫升飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并濃縮得到黃色油。該物質(zhì)放置時(shí)結(jié)晶。用冷(-20℃)己烷研磨結(jié)晶一次，得到21.0克(80％產(chǎn)率)白色晶狀物質(zhì)，熔點(diǎn)41-43℃。
APCI-MSm/z＝234(MH+)，178，117.1H-NMR(360 MHz，CDCl3)δ7.2-7.4(5H，m)；4.67(1H，m，H4)；4.14-4.22(2H，m，H5)；3.30(1H，dd，J＝3，13Hz，芐基)；2.89-3.03(2H，m，H2′)；2.77(1H，dd，J＝9，13，芐基)；1.20(3H，t，J＝7Hz，H2′)。
D.(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羥基己?；鵠-4-芐基-2-噁唑烷酮在裝有500毫升加樣漏斗、低溫溫度計(jì)和攪棒的干燥2升三頸圓底燒瓶中裝有19.84克N-丙?；?噁唑烷酮，用反口橡皮塞加蓋，用氮?dú)獯祾?。用插管加入無水二氯甲烷(100毫升)，在干冰/異丙醇浴中冷卻得到的溶液至-65℃。在加樣漏斗中用插管加入100毫升三氟甲磺酸二丁基硼(1.0M的二氯甲烷溶液)，將其以緩慢液流加到反應(yīng)物中。用針筒滴加三乙胺，反應(yīng)溫度保持在-10℃。此后，將反應(yīng)物移至冰浴中，0℃攪拌30分鐘。此后，將反應(yīng)物移至干冰/異丙醇浴中，冷卻到-65℃。用針筒迅速加入丁醛(8.6毫升)，攪拌反應(yīng)物30分鐘。
將反應(yīng)物轉(zhuǎn)移到冰浴中，在加樣漏斗中加入100毫升1M磷酸鹽水溶液，pH7.0(磷酸鹽溶液由等摩爾量的磷酸一和二氫鉀組成)。盡快加入磷酸鹽溶液，同時(shí)將反應(yīng)溫度保持在10℃以下。然后在加樣漏斗中盡快加入300毫升甲醇，同時(shí)將反應(yīng)溫度維持在10℃以下。最后在加樣漏斗中加入300毫升2∶1甲醇∶30％過氧化氫。將其滴加并確保溫度維持在10℃以下。加完后，攪拌反應(yīng)物1小時(shí)。然后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去溶劑，直到剩余漿液。用500毫升一份的乙醚抽提漿液4次。各用250毫升飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)抽提物，然后用MgSO4干燥抽提物，過濾并濃縮得到淡黃色油。在SiO2上用2∶1己烷∶乙酸乙酯(產(chǎn)物Rf＝0.4)層析該物質(zhì)得到22.0克(85％產(chǎn)率)無色油狀標(biāo)題化合物。
APCI-MSm/z 306(MH+)；1H-NMR(360MHz，CDCl3)δ7.2-7.4(5H，m，苯基)；4.71(1H，m，H4)；4.17-4.25(2H，m，H5)；3.96(1H，m，H3′)；3.77(1H，dq，J＝2.5，7Hz，H2′)；3.26(1H，dd，J＝4，13Hz，芐基)；2.79(1H，dd，J＝9，13Hz，芐基)；1.5-1.6(2H，m，H4′)；1.3-1.5(2H，m，H5′)；1.27(3H，d，J＝7Hz，2′-Me)；0.94(3H，t，J＝7Hz，H6′)。
E(2S，3R)-2-甲基-3-羥基己酸酯N-乙酰半胱胺硫酯在130℃/7毫米汞柱下蒸餾N-乙酰半胱胺，得到室溫下無色的液體。用反口橡皮塞密封裝有500毫升加樣漏斗和攪棒的干燥1升三頸圓底燒瓶，用氮?dú)獯祾?。然后用針筒裝入10.7毫升N-乙酰半胱胺，用插管加入400毫升無水THF。用MeOH/冰浴冷卻混合物。用針筒滴加正丁基鋰(64毫升1.6M己烷)，形成白色沉淀。攪拌30分鐘后，用針筒滴加三甲基鋁(51毫升2.0M己烷)。加入三甲基鋁后反應(yīng)物變澄清，并攪拌另30分鐘。在該時(shí)期后，將20.5克(0.068摩爾)的(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羥基己?；鵠-4-芐基-2-噁唑烷酮置于一層氮?dú)庀拢⑷苡?00毫升無水THF；然后用插管以緩慢液流將該溶液轉(zhuǎn)移到反應(yīng)物中。得到的反應(yīng)混合物變成黃綠色，并攪拌1小時(shí)。當(dāng)薄層層析分析不再見到起始物質(zhì)時(shí)(約1小時(shí))，反應(yīng)完成。
用足量飽和草酸處理反應(yīng)物，用pH試紙得到中性反應(yīng)物(約90毫升)。然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去溶劑，得到白色漿液。用250毫升一份的乙醚抽提漿液6次。合并有機(jī)抽提物，并用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并濃縮得到淡黃色油。在SiO2上用1∶1己烷∶EtOAc快速層析純化硫酯產(chǎn)物，直到洗出4-芐基-2-噁唑烷酮。此時(shí)，將溶劑系統(tǒng)切換到100％EtOAc，得到二酮化合物硫酯的純組分。合并產(chǎn)物組分，濃縮，得到14.9克(89％產(chǎn)率)的標(biāo)題化合物。該化合物是實(shí)施例2中的丙基二酮化合物硫酯。
APCI-MSm/z 248(MH+)；1H-NMR(360MHz，CDCl3)δ5.8(brs，1H)；3.94(dt，1H)，3.46(m，2H)，3.03(dt，2H)，2.71(dq，1H)，1.97(s，3H)，1.50(m，2H)，1.37(m，2H)，1.21(d，3H)，0.94(t，3H)F.(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羥基-4-戊酰基]-4-芐基-2-噁唑烷酮在裝有500毫升加樣漏斗、低溫溫度計(jì)和攪棒的干燥的2升三頸圓底燒瓶中加入20.0克丙酰噁唑烷酮A，用反口橡皮塞密封，用氮?dú)獯祾?。加入無水二氯甲烷(100毫升)，在甲醇/冰浴中冷卻得到的溶液至-15℃。通過加樣漏斗以緩慢液流加入三氟甲磺酸二丁基硼(100毫升1.0M的二氯甲烷溶液)，該速率將反應(yīng)溫度保持在低于3℃。用針筒滴加二異丙基乙基胺(17.9毫升)，再將內(nèi)部溫度保持在低于3℃。然后將反應(yīng)用干冰/異丙醇浴冷卻到-65℃。用針筒經(jīng)5分鐘加入丙烯醛。在加完后攪拌反應(yīng)物30分鐘。
然后將反應(yīng)物轉(zhuǎn)移到冰浴中，在加樣漏斗中加入120毫升(0.1摩爾)1M pH7.0的磷酸鹽溶液(磷酸溶液由等摩爾量的一元和二元磷酸鹽構(gòu)成)。盡快加入磷酸鹽溶液，同時(shí)維持反應(yīng)溫度低于10℃。然后盡快在加樣漏斗中加入400毫升甲醇，同時(shí)將反應(yīng)溫度維持在10℃以下。最后，在加樣漏斗中加入400毫升2∶1甲醇∶30％過氧化氫(滴加，保持溫度在10℃以下)。攪拌反應(yīng)物1小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，剩下漿液。用500毫升一份乙醚抽提漿液4次。合并有機(jī)抽提物，各用250毫升飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾并濃縮得到淡黃色油。用己烷研磨引起結(jié)晶。加入己烷從乙醚中重結(jié)晶，得到13.67克(55％產(chǎn)率)的產(chǎn)物。
1H-NMR(360MHz，CDCl3)δ7.2-7.4(m，5H)；5.86(ddd，1H)，5.35(dt，1H)，5.22(dt，1H)，4.71(m，1H)，4.51(m，1H)，4.21(m，2H)，3.89(dq，1H)，3.26(dd，1H)，2.80(dd，1H)，1.25(d，3H)。
G.(2S，3R)-2-甲基-3-羥基-4-戊烯酯N-乙酰半胱胺硫酯在130℃/7毫米汞柱下蒸餾N-乙酰半胱胺，在室溫下得到無色液體。用反口橡皮塞密封裝有500毫升加樣漏斗和攪棒的干燥、1升三頸圓底燒瓶，用氮?dú)鉀_洗。然后在燒瓶中用針筒裝入7.5毫升N-乙酰半胱胺，用插管加入500毫升無水THF。然后用MeOH/冰浴冷卻反應(yīng)物。用針筒滴加丁基鋰(44毫升1.6M的己烷溶液)。隨著正丁基鋰的加入，形成白色沉淀。攪拌30分鐘后，用針筒滴加35.5毫升(0.071摩爾)三甲基鋁(2.0M己烷溶液)。反應(yīng)物在加入三甲基鋁后變澄清，再攪拌30分鐘。在氮?dú)庀录尤雭碜灾苽浞椒‵的(4S)-N-[(2S，3R)-2-甲基-3-羥基-4-戊?；鵠-4-芐基-2-噁唑烷酮，溶于50毫升無水THF，然后將該溶液以緩慢液流用插管轉(zhuǎn)移到反應(yīng)物中。得到的反應(yīng)混合物變成黃綠色，攪拌1小時(shí)。當(dāng)用薄層層析看不到起始物質(zhì)時(shí)(約30分鐘)，判斷反應(yīng)完成。
加入足量飽和草酸(約60毫升)，用pH試紙測試得到中性反應(yīng)物。然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，得到白色漿液。用250毫升乙醚一份抽提漿液6次。合并有機(jī)抽提物，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾，濃縮得到淡黃色油。然后在SiO2上用快速層析純化硫酯。用1∶1己烷∶乙酸乙酯淋洗，直到噁唑烷酮洗出。此時(shí)，淋洗液換成100％EtOAc，洗出純產(chǎn)物組分。合并組分并濃縮，得到7.7克(71％產(chǎn)率)的標(biāo)題化合物產(chǎn)物。該產(chǎn)物在實(shí)施例2中稱為乙烯基二酮化合物硫酯。
1H-NMR(360MHz，CDCl3)δ5.82(ddd，1H)，5.78(br s，1H)，5.32(dt，1H)，5.21(dt，1H)，4.47(m，1H)，3.45(m，2H)，3.04(m，2H)，2.81(dq，1H)，1.96(s，3H)，1.22(d，3H)。
實(shí)施例2紅霉內(nèi)酯的制備A.15-甲基-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B(化合物P、Rd＝丙基)在1997年7月17日提交的美國專利申請?zhí)?8/896，323和1996年7月5日提交的08/675,817(分別在此引入以供參考)中描述了天藍(lán)色鏈霉菌CH999/pJRJ2。質(zhì)粒pJRJ2編碼DEBS的突變形式，其中組件1(KS1)的酮合成酶結(jié)構(gòu)域通過誘變被滅活(KS1°)。喂給含有該質(zhì)粒的天藍(lán)色鏈霉菌菌株實(shí)施例1的(2S，3R)-2-甲基-3-羥基己酸-N-乙酰半胱胺(制備方法E，丙基二酮化合物)產(chǎn)生15-甲基-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B。
融化1毫升小瓶CH999/pJRJ2工作細(xì)胞庫，將小瓶內(nèi)容物加到250毫升有擋板的燒瓶中的50毫升接種培養(yǎng)液1中。燒瓶置于維持在30±1℃和175±25RPM的溫箱/搖床中48±10小時(shí)。然后將50毫升培養(yǎng)物加到2.8升有擋板的燒瓶中，該燒瓶中含有500毫升接種培養(yǎng)液1。該燒瓶在30±1℃和175±25RPM下在溫箱/搖床中培養(yǎng)48±10小時(shí)。將該500毫升培養(yǎng)物等分在10個(gè)2.8升的有擋板燒瓶中，各含有500毫升接種培養(yǎng)液1。然后所有燒瓶如前述培養(yǎng)。
用100升生產(chǎn)培養(yǎng)液1在121℃滅菌45分鐘，準(zhǔn)備了150升發(fā)酵罐。培養(yǎng)后，將所有10升燒瓶合并在5升無菌培養(yǎng)瓶中，無菌加到150升發(fā)酵罐中。將發(fā)酵罐控制在30℃，加入2.5N H2SO4和2.5N NaOH控制在pH6.5，以攪拌速度(500-700RPM)、空氣流速(10-50LPM)和/或背壓控制(0.1-0.4巴)，保持溶解氧≥80％空氣飽和度。間歇加入Antifoam B的50％溶液控制泡沫。
在24±5小時(shí)，加入(2S，3R)-2-甲基-3-羥基己酰基-N-乙?；腚装?丙基二酮化合物，實(shí)施例1的制備方法E)至最終濃度為1克/升。丙基二酮化合物是通過以1∶4(二酮化合物比DMSO)溶于二甲亞砜制備的，然后過濾滅菌(0.2微米，尼龍濾膜)。15-甲基-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B(15-甲基-6dEB)的產(chǎn)生在第7日停止，收集發(fā)酵物。在Alpha Laval AS-26離心機(jī)中，以20,500g離心發(fā)酵肉湯。產(chǎn)物主要在離心液中；丟棄離心的細(xì)胞團(tuán)塊。
還在1000升發(fā)酵罐(700升工作體積)中完成了該過程。接種過程與上述過程相同，除了150升發(fā)酵罐裝有接種培養(yǎng)液1，而1000升發(fā)酵罐裝有生產(chǎn)培養(yǎng)液1。將發(fā)酵罐控制在30℃，pH6.5(加入2.5-5N H2SO4和2.5-5N NaOH)，以攪拌速度(140-205RPM)、空氣流速(100-200LPM)和/或背壓控制(0.2-0.5巴)，保持溶解氧≥70％空氣飽和度。按需要加入Antifoam B的50％溶液控制泡沫。在24±5小時(shí)，在1000升發(fā)酵罐中加入外消旋的2-甲基-3-羥基己?；?N-丙?；腚装?300克)。在第4.6日如上所述離心收集發(fā)酵物。
該方法中使用的培養(yǎng)液包括下列接種培養(yǎng)液1

用高壓滅菌器121℃滅菌60分鐘。
滅菌后添加1)每升1毫升50毫克/毫升的硫鏈絲菌肽的100％DMSO溶液，無菌過濾。
2)每升1毫升100％Antifoam B硅乳液(J.T.Baker)，高壓滅菌。
3)40毫升500克/升的葡萄糖，無菌過濾。
生產(chǎn)培養(yǎng)液1


121℃在發(fā)酵罐中滅菌45分鐘。
生產(chǎn)培養(yǎng)液1滅菌后添加1)每升1毫升50毫克/毫升的硫鏈絲菌肽的100％DMSO溶液，無菌過濾。
2)每升1毫升100％Antifoam B硅乳液(J.T.Baker)，高壓滅菌。
離心后，過濾離心液。濾液(約700升)通過含有20升HP20樹脂(Mitsubishi)的Amicon Moduline柱(20×350厘米)。在加樣時(shí)流速是4升/分鐘，壓降小于8psi。加樣后，用20升水，然后用40升30％甲醇洗滌樹脂。用100％甲醇洗脫15-甲基-6dEB。收集4個(gè)12升組分，其中組分2、3和4含有全部可檢測的15-甲基-6dEB。用36.7升水稀釋合并的15-甲基-6dEB產(chǎn)物，得到75升澄清溶液。將該溶液直接加到含有HP20SS樹脂(Mitsubishi)的5升Amicon Vantage柱上。以1升/分鐘上柱。用20升65％甲醇、20升70％甲醇、20升80％甲醇和最終20升100％甲醇洗脫柱。收集全部16×5升組分。合并80％組分和最后的70％組分(25升)并蒸發(fā)至干。將得到的剩余物溶于1升100％甲醇中，過濾，蒸發(fā)，在真空爐中40℃干燥。該過程得到33克固態(tài)產(chǎn)物，含有93％的15-甲基-6dEB。
B.14，15-脫氫-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B(化合物P，Ra＝H，Rd＝烯丙基)當(dāng)根據(jù)上述產(chǎn)生15-甲基-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B的制備方法A制備時(shí)，含有該質(zhì)粒的、并喂給實(shí)施例1的(2S，3R)-2-甲基-3-羥基-4-戊酸NAc半胱胺硫酯(制備方法G)的天藍(lán)色鏈霉菌菌株，產(chǎn)生14，15-脫氫-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B。
C.14-去甲-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B(化合物P，Ra＝H，Rd＝甲基)類似的，當(dāng)根據(jù)實(shí)施例2A描述的方法制備時(shí)，用天藍(lán)色鏈霉菌CH999/pCK7宿主，不用二酮化合物硫酯產(chǎn)生了14-去甲-6-脫氧紅霉內(nèi)酯B。
實(shí)施例3紅霉素的制備將實(shí)施例2中制備方法A-C產(chǎn)生的6-dEB衍生化合物用紅色糖多孢菌的重組菌株轉(zhuǎn)化成紅霉素衍生物。為了產(chǎn)生同時(shí)具有6和12羥基的紅霉素，使用的紅色糖多孢菌菌株是K40-67或K39-14V。用pWHM3-衍生的質(zhì)粒(含有突變的eryAl序列，編碼失活的KS1結(jié)構(gòu)域)轉(zhuǎn)化能產(chǎn)生高水平紅霉素A的紅色糖多孢菌菌株，建立了該菌株。通過同源重組，使得到的轉(zhuǎn)化株不能產(chǎn)生6-脫氧紅霉內(nèi)酯B。因此喂給dEBl類似物不會(huì)遇到6-位羥基化的競爭。為了產(chǎn)生僅具有12-羥基的紅霉素衍生物，所用的紅色糖多孢菌是K39-07。通過打斷eryF羥化酶基因從菌株K40-67構(gòu)建了該菌株；這破壞了羥基化6-位類似物的能力。在基本相同的條件下如下所述發(fā)酵這兩種菌株。
15-甲基-紅霉素A根據(jù)下面的方法產(chǎn)生了15-甲基-紅霉素A融化1毫升小瓶的K39-14V工作細(xì)胞庫，將小瓶內(nèi)容加到250毫升有擋板的燒瓶中的50毫升接種培養(yǎng)液2中。燒瓶置于維持在34±1℃和175±25RPM的溫箱/搖床中48±10小時(shí)。然后將50毫升培養(yǎng)物加到2.8升有擋板的燒瓶中，該燒瓶中含有500毫升接種培養(yǎng)液2。該燒瓶在34±1℃和175±25RPM下在溫箱/搖床中培養(yǎng)48±10小時(shí)。將500毫升培養(yǎng)物等分在10個(gè)2.8升的有擋板燒瓶中，燒瓶中各含有500毫升接種培養(yǎng)液2。然后所有燒瓶如前述培養(yǎng)。
用100升生產(chǎn)培養(yǎng)液2在121℃滅菌45分鐘，準(zhǔn)備了150升發(fā)酵罐。培養(yǎng)后，將所有10個(gè)燒瓶合并在5升無菌培養(yǎng)瓶中，并無菌的加到150升發(fā)酵罐中。將發(fā)酵罐控制在34℃，pH7.0(加入2.5N H2SO4和2.5N NaOH)，以攪拌速度(500-700RPM)、空氣流速(15-50LPM)和/或背壓控制(0.1-0.4巴)，保持溶解氧≥80％空氣飽和度。加入Antifoam B的50％溶液控制泡沫。
在24±5小時(shí)，開始以每小時(shí)58-60毫升加入15％糊精(w/v)。加入期間不斷混合糊精溶液。在24±5小時(shí)，將25克15-甲基-6dEB(實(shí)施例2中的制備A)加入發(fā)酵罐。將25克15-甲基-6dEB(實(shí)施例2中的制備A)溶于400-600毫升100％乙醇中并過濾(0.2微米，尼龍濾膜)，制備了15-甲基-6dEB。15-甲基-6dEB向15-甲基-紅霉素A的轉(zhuǎn)化在60±10小時(shí)后停止，收集發(fā)酵物。在Alpha Laval AS-26離心機(jī)中，以20,500g離心發(fā)酵肉湯。產(chǎn)物主要在離心液中；丟棄離心的細(xì)胞團(tuán)塊。
該方法中使用的培養(yǎng)液包括下列接種培養(yǎng)液2


用高壓滅菌器121℃滅菌60分鐘。
滅菌后添加每升1毫升100％Antifoam B(J.T.Baker)，高壓滅菌。
生產(chǎn)培養(yǎng)液2

121℃在發(fā)酵罐中滅菌45分鐘。
含有34克靶分子的離心過的發(fā)酵肉湯(127升)通過裝填在Amicon P350Moduline 2層析柱上的18.3升HP20吸著劑。在4升/分鐘加樣中，發(fā)現(xiàn)壓降小于5psi。加樣后，用20升去離子水，然后用40升30％甲醇洗滌樹脂。用54升100％的甲醇洗脫15-甲基-紅霉素A。用Buchi旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(R-152)蒸發(fā)合并的產(chǎn)物。將固體溶于最少量的100％甲醇，過濾并蒸發(fā)濾液至干。這得到123克含有30％重量的15-甲基-紅霉素A的物質(zhì)。用1升40℃丙酮抽提80克的該30％物質(zhì)。過濾丙酮抽提液，在20升旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)燒瓶的內(nèi)表面上干燥濾液。用9∶1己烷∶丙酮在40℃抽提固體3次。合并有機(jī)抽提物，蒸發(fā)至干，得到32克固體，富集的(68％)15-甲基-紅霉素A。將丙酮/己烷抽提得到的合并產(chǎn)物溶于1升甲醇(在其中加入等量水)。將甲醇溶液加到已用50％甲醇洗滌并平衡的HP20SS層析柱(Kontes)上。柱的尺寸是4.8×115厘米。對于15-甲基-紅霉素A的柱負(fù)荷是11克/升。用50％(0.8升)和60％(8升)的甲醇水溶液洗滌柱。用70％(8升)、80％(16升)和85％(8升)甲醇水溶液洗脫靶分子。收集1升組分。合并組分11-29，蒸發(fā)并在真空爐中干燥，得到23克93％純度的產(chǎn)物。
該物質(zhì)作為下列實(shí)施例中化學(xué)衍生法的起始材料。用該方法還產(chǎn)生了下列化合物14-去甲紅霉素A(Rd＝Me)；14，15-脫氫-紅霉素A(Rd＝烯丙基)；14-去甲-6-脫氧-紅霉素A；14，15-脫氫-6-脫氧-紅霉素A；和15-甲基-6-脫氧-紅霉素A。當(dāng)用于制備3-去克拉定糖-3-氧代-衍生物時(shí)，紅霉素A衍生物不和紅霉素C衍生物分開；而是用紅霉素A和紅霉素C化合物的混合物作為化學(xué)衍生的起始材料。
抽提和純化這些產(chǎn)物的方法如下通常，加入NaOH將發(fā)酵肉湯調(diào)至pH8.0，加入乙醇(0.1升/1升肉湯)。離心澄清肉湯，以2-4毫升/平方厘米-分鐘的流速加到XAD-16樹脂(Rohm和Haas)柱(1公斤XAD/1克紅霉素類似物)上。用2柱體積的20％(v/v)乙醇水溶液洗滌加樣樹脂，用丙酮從柱上洗脫出紅霉素同類物，以1/2柱體積收集組分。用薄層層析(乙酸乙酯∶己烷1∶1)和HPLC/MS鑒定含有紅霉素類似物的組分。
合并含有紅霉素類似物的丙酮組分，減壓除去揮發(fā)物。用乙酸乙酯抽提得到的水相混合物。用飽和NaHCO3和鹽水溶液洗滌乙酸乙酯抽提物，用硫酸鈉或硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮至干。將粗物質(zhì)溶于二氯甲烷，加到硅膠短柱上，用二氯甲烷∶甲醇(96∶4 v/v)洗滌，直到洗出液不再是黃色。所需的物質(zhì)以二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺(94∶4∶2 v/v)洗脫，收集組分。用薄層層析鑒定含有紅霉素的組分，收集并減壓濃縮。用二氯乙烷/己烷重結(jié)晶該物質(zhì)。
如下說明了通用方法(i)14-去甲紅霉素在每10升發(fā)酵肉湯中加入1升乙醇。離心肉湯，上清液以100毫升/分鐘的流速通過0.6升XAD(柱的尺寸為17厘米×6.5厘米)。加樣后，用1.5升20％(v/v)乙醇水溶液洗滌柱。然后用丙酮洗脫所需物質(zhì)。減壓濃縮含有該物質(zhì)的組分，直到除去揮發(fā)物，用乙酸乙酯抽提水相剩余物。用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌乙酸乙酯層，用硫酸鎂干燥，減壓濃縮得到粗抽提物。
將粗物質(zhì)(0.6克)溶于二氯甲烷，重力濾過在6厘米直徑的砂芯漏斗中的3厘米硅膠墊。用400毫升二氯甲烷，然后用400毫升二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺(90∶10∶2v/v)洗脫物質(zhì)，以每40毫升收集組分。用薄層層析(乙醚∶甲醇∶NH4OH90∶8∶2v/v，Rf～0.35和二氯甲烷∶甲醇95∶5 v/v，Rf～0)鑒定含有紅霉素的組分，減壓濃縮。從二氯甲烷/己烷中重結(jié)晶該物質(zhì)。
(ii)15-甲基-紅霉素將8升乙醇加到約80升發(fā)酵肉湯中。離心肉湯，上清液以230毫升/分鐘通過2.5升XAD。加樣后，用1升水和5升20％(v/v)的乙醇水溶液洗滌柱。然后用丙酮洗脫所需物質(zhì)。減壓濃縮含有該物質(zhì)的組分，直到除去揮發(fā)物，用乙酸乙酯抽提水相剩余物。用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌乙酸乙酯層，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到粗抽提物。
將粗物質(zhì)(8.3克)溶于二氯甲烷，重力濾過9厘米直徑的砂芯漏斗中的3厘米硅膠墊。用200毫升二氯甲烷，然后用600毫升二氯甲烷∶甲醇(96∶4v/v)，然后用900毫升二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺(89∶9∶2 v/v)洗脫物質(zhì)，并收集40毫升組分。用薄層層析(乙醚∶甲醇∶NH4OH 90∶8∶2 v/v，Rf~0.4，二氯甲烷∶甲醇95∶5，Rf~0.05)鑒定含有紅霉素的組分，減壓濃縮。該物質(zhì)重新進(jìn)行上述過程，直到它適合重結(jié)晶。
(iii)14-去甲-6-脫氧-紅霉素在2個(gè)10升發(fā)酵中各加入1升乙醇。離心肉湯，合并上清液，總計(jì)約22升。然后使合并的肉湯以170毫升/分鐘流速通過1升XAD(柱尺寸23.5厘米×6.5厘米(內(nèi)徑))。加樣后，用2升20％(v/v)乙醇水溶液洗滌柱。然后用丙酮洗脫所需物質(zhì)。減壓濃縮含有該物質(zhì)的組分，直到除去揮發(fā)物，用乙酸乙酯抽提水相剩余物。用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌乙酸乙酯層，用硫酸鎂干燥，減壓濃縮得到粗抽提物。
(iv)15-甲基-6-脫氧-紅霉素在3個(gè)各含有10升肉湯的發(fā)酵罐中各加入1升乙醇。離心肉湯，上清液以130毫升/分鐘流速通過1.25升XAD(柱尺寸40厘米×6.5厘米)。然后用3升20％(v/v)乙醇水溶液洗滌柱。然后用丙酮洗脫所需物質(zhì)。減壓濃縮含有該物質(zhì)的組分，直到除去揮發(fā)物，用乙酸乙酯抽提水相剩余物。用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌乙酸乙酯層，用硫酸鎂干燥，減壓濃縮得到粗抽提物。
將粗物質(zhì)(2.8克)溶于二氯甲烷，重力濾過6厘米直徑的砂芯漏斗中的3厘米硅膠墊。用400毫升二氯甲烷∶甲醇(96∶4v/v)，然后用400毫升二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺(89∶9∶2 v/v)洗脫物質(zhì)，并以每40毫升收集組分。用薄層層析(乙醚∶甲醇∶NH4OH 90∶8∶2 v/v，二氯甲烷∶甲醇95∶5)鑒定含有紅霉素的組分，減壓濃縮。該物質(zhì)需要用硅膠層析進(jìn)一步純化。
實(shí)施例46-O-甲基-14-去甲紅霉素A，即式(4)其中Ra＝Me，Rd＝Me，Rc＝H，Re＝H的合成A.14-去甲紅霉素A9-肟將14-去甲紅霉素A(0.621克，80％純度)、羥胺(0.5毫升50％水溶液)和乙酸(0.2毫升)的異丙醇(2毫升)溶液置于50℃22小時(shí)。用氯仿/乙醇(3/2)抽提，用碳酸氫鈉、鹽水洗滌，用MgSO4干燥。過濾并真空蒸發(fā)得到白色固態(tài)粗產(chǎn)物(0.65克)，在下一步轉(zhuǎn)化中直接使用。
B.14-去甲紅霉素A-9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟在上述粗14-去甲紅霉素A9-肟(0.65克)和1，1-二異丙氧基-環(huán)己酮(0.95毫升)的二氯甲烷(2毫升)溶液中加入吡啶鎓對甲苯磺酸鹽(PPTS)(0.333克)的二氯甲烷(2毫升)溶液。攪拌過夜后，抽提(氯仿/乙醇3∶2)混合物，洗滌(NaHCO3-H2O，鹽水)，并干燥(MgSO4)。過濾和真空濃縮后，加甲苯和異丙醇反復(fù)蒸發(fā)粗產(chǎn)物，得到0.74克產(chǎn)物，在下一步反應(yīng)中直接使用。
C.2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲紅霉素A-9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟在14-去甲紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(0.74克)的二氯甲烷(6毫升)溶液中0℃加入三甲基甲硅烷基咪唑(0.33毫升)和三甲基甲硅烷基氯(0.18毫升)的二氯甲烷(2毫升)溶液。5分鐘攪拌后，加入乙酸乙酯，洗滌(NaHCO3-H2O，鹽水)并干燥(MgSO4)。在硅膠(10∶1己烷∶丙酮，1％三乙胺)上快速層析，得到白色固態(tài)純產(chǎn)物(0.50克)。質(zhì)譜顯示[M+H+]＝1020。
D.6-O-甲基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲紅霉素A-9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟用0.3毫升2M甲基溴的乙醚溶液處理2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(0.3克，0.29毫摩爾)的1∶1二甲亞砜/四氫呋喃(DMSO/THF)(1.4毫升)溶液，冷卻到10℃。用注射泵經(jīng)6小時(shí)加入1M叔丁醇鉀的THF(0.6毫升)溶液和DMSO(0.6毫升)的混合物。然后用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3、鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并真空蒸發(fā)得到白色固態(tài)粗產(chǎn)物(0.29克)。質(zhì)譜顯示[M+H+]＝1034。
E.6-O-甲基-14-去甲紅霉素A9-肟在環(huán)境溫度下攪拌6-O-甲基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(0.29克)、乙酸(3.6毫升)、乙腈(6毫升)和水(3毫升)的混合物。加甲苯蒸發(fā)混合物至干，得到白色固態(tài)粗產(chǎn)物(0.24克)，在下一步中不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。
F.6-O-甲基-14-去甲紅霉素A將6-O-甲基-14-去甲紅霉素A 9-肟(0.24克)、亞硫酸氫鈉(0.45克，85％純度)、水(3毫升)、乙醇(3毫升)和甲酸(0.07毫升)的混合物置于85℃8小時(shí)。用1N NaOH將反應(yīng)物調(diào)至pH8，用乙酸乙酯抽提。用鹽水洗滌有機(jī)抽提物，用MgSO4干燥，過濾并濃縮得到白色固態(tài)粗產(chǎn)物(0.2克)。質(zhì)譜顯示[M+H+]＝735。
實(shí)施例56-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A，即式(4)其中Rd＝-CH＝CH2，Ra＝Me，Rc＝H，Re＝H的合成A.14，15-脫氫紅霉素A9-肟用1.97毫升50％羥胺水溶液處理14，15-脫氫紅霉素A(1.984克，47％純度，1.2毫摩爾)的6毫升2-丙醇懸液，攪拌直到溶解。加入乙酸(0.62毫升)，混合物在50℃攪拌25小時(shí)。在環(huán)境溫度下冷卻后，加入飽和NaHCO3，真空濃縮混合物，除去異丙醇。用250毫升一份的CHCl3抽提得到的水相混合物3次。合并有機(jī)抽提物，用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾并濃縮得到0.92克產(chǎn)物。
B.14，15-脫氫紅霉素A-9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟將來自(A)的肟(0.92克)溶于6.2毫升CH2Cl2中，用1，1-二異丙氧基-環(huán)己烷(1.23克)和吡啶鎓對甲苯磺酸鹽(PPTS)(0.464克)在環(huán)境溫度下處理15小時(shí)。用160毫升CH2Cl2稀釋混合物，然后依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)得到棕色漿液。在硅膠(甲苯到1∶1甲苯/丙酮+1％Et3N的梯度)上層析得到0.998克產(chǎn)物。
C.2’，4″-二(O-三甲基甲硅烷基)-14，15-脫氫紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟在冰上，在惰性氣氛下冷卻14，15-脫氫紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(998毫克，9.96)的CH2Cl2(11.25毫升)溶液，并用三甲基氯硅烷(0.24毫升)和1-三甲基甲硅烷基咪唑(0.44毫升)的溶液處理。30分鐘后，用250毫升乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，依次用飽和的NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)得到1.002克產(chǎn)物。
D.2’，4″-二(O-三甲基甲硅烷基)-6-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A-9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟將2’，4″-二(O-三甲基甲硅烷基)-14，15-脫氫紅霉素A 9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(1.00克，20.7毫摩爾)的9.69毫升1∶1四氫呋喃/二甲亞砜的溶液冷卻至10℃，并用0.97毫升2.0M甲基溴的乙醚溶液在惰性氣氛下處理。緩慢加入二甲亞砜(1.94毫升)和1.0M叔丁氧鉀的四氫呋喃(1.94毫升)的混合物。用薄層層析(硅膠，10∶1甲苯/丙酮)監(jiān)測反應(yīng)，在加入1.6摩爾當(dāng)量的堿后判斷完成。用200毫升乙酸乙酯和70毫升飽和NaHCO3稀釋反應(yīng)物。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。用850毫升乙酸乙酯和280毫升飽和NaHCO3稀釋，然后用水和鹽水依次洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，濾過硅藻土并蒸發(fā)，得到21.2克粗6-O-甲基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-14，15-脫氫紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟。不經(jīng)純化使用。
E.6-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A9-肟用5.3毫升乙酸處理6-O-甲基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-14，15-脫氫紅霉素A 9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(1.0克)的9.8毫升2∶1乙腈/水的溶液，在環(huán)境溫度下攪拌8小時(shí)。真空濃縮混合物，然后在加入甲苯后重復(fù)濃縮，得到0.797克粗6-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A9-肟。
F.6-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A將6-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A9-肟(0.797克)和亞硫酸氫鈉(85％，1.02克)的7.5毫升1∶1乙醇/水溶液置于惰性氣氛下。滴加甲酸(0.186毫升)，80℃攪拌混合物3小時(shí)。冷卻到環(huán)境溫度后，用6N NaOH將反應(yīng)物調(diào)至pH10，用150毫升一份的乙酸乙酯抽提3次。合并有機(jī)抽提物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)得到0.68克適用于進(jìn)一步轉(zhuǎn)化的6-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A。
實(shí)施例66-O-甲基-15-甲基紅霉素A，即式(4)其中Rd＝丙基，Ra＝Me，Rc＝H，Re＝H的合成A.15-甲基紅霉素A9-肟用20.5毫升50％羥胺水溶液處理15-甲基紅霉素A(20.0克，85％純度，22.6毫摩爾)的40毫升2-丙醇懸液，攪拌直到溶解。加入乙酸(6.41毫升)，混合物在50℃攪拌15小時(shí)。冷卻到環(huán)境溫度后，加入飽和NaHCO3，真空濃縮混合物，除去異丙醇。用250毫升一份的CHCl3抽提得到的水相混合物3次。合并有機(jī)抽提物，用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾并濃縮得到20.5克粗產(chǎn)物。用LC/MS分析得到94∶6的E和Z肟的混合物，[M+H+]＝764。
B.15-甲基紅霉素A-9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟將上述肟(20.5克)溶于55毫升CH2Cl2中，用1，1-二異丙氧基-環(huán)己烷(27.3毫升)和吡啶鎓對甲苯磺酸鹽(9.8克)在環(huán)境溫度下處理15小時(shí)。用160毫升CH2Cl2稀釋混合物，然后依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)得到棕色漿液。在硅膠(梯度從2∶1到3∶2己烷/丙酮+1％Et3N)上層析得到18.0克產(chǎn)物。
C.2’，4″-二(O-三甲基甲硅烷基)-15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟在冰上，在惰性氣氛下冷卻15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(9.00克，9.96毫摩爾)的25毫升CH2Cl2溶液，并用三甲基氯硅烷(1.89毫升)和1-三甲基甲硅烷基咪唑(3.65毫升)的8毫升CH2Cl2溶液處理。30分鐘后，用250毫升乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)。用硅膠層析(梯度從己烷到10∶1己烷/丙酮+1％Et3N)純化粗產(chǎn)物，得到7.8克產(chǎn)物。
D.6-O-甲基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟將2’，4″-二(O-三甲基甲硅烷基)-15-甲基紅霉素A 9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(21.7克，20.7毫摩爾)的41.4毫升四氫呋喃的溶液冷卻至10℃，并用41.4毫升二甲亞砜和20.7毫升2.0M甲基溴的乙醚溶液在惰性氣氛下處理。以約20毫升每小時(shí)的速率加入二甲亞砜(41.4毫升)和1.0M叔丁醇鉀的四氫呋喃(41.4毫升)溶液。用薄層層析(硅膠，10∶1甲苯/丙酮)監(jiān)測反應(yīng)，在加入1.6摩爾當(dāng)量的堿后判斷完成。用200毫升乙酸乙酯和70毫升飽和NaHCO3稀釋反應(yīng)物。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。用850毫升乙酸乙酯和280毫升飽和NaHCO3稀釋，然后用水和鹽水依次洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，濾過硅藻土并蒸發(fā)，得到21.2克粗6-O-甲基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟。不經(jīng)純化使用。
E.6-O-甲基-15-甲基紅霉素A9-肟用55毫升水和67毫升乙酸處理6-O-甲基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(21.2克)的110毫升乙腈溶液，在環(huán)境溫度下攪拌8小時(shí)。真空濃縮混合物，然后在加入甲苯后重復(fù)濃縮，得到19.7克6-O-甲基-15-甲基紅霉素A9-肟。
F.6-O-甲基-15-甲基紅霉素A將6-O-甲基-15-甲基紅霉素A9-肟(19.7克)和亞硫酸氫鈉(85％，23.1克)的280毫升1∶1乙醇/水的溶液置于惰性氣氛下。滴加甲酸(3.75毫升)，80℃攪拌混合物4.5小時(shí)。冷卻到環(huán)境溫度后，用飽和NaHCO3處理反應(yīng)物，用400毫升一份乙酸乙酯抽提3次。合并有機(jī)抽提物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)得到15.1克適用于進(jìn)一步轉(zhuǎn)化的6-O-甲基-15-甲基紅霉素A。
實(shí)施例75-O-(2’-乙酰基脫氧糖胺基)-10，11-脫水-3-脫氧-3-氧代-6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A(式(6)的脫水形式，Ra＝Me，Rd＝Me，Rc＝Ac，Rb＝H)的合成
A.5-O-脫氧糖胺基-6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A在環(huán)境溫度下攪拌6-O-甲基-14-去甲紅霉素A(77毫克)、0.073毫升的12N HCl和水(2毫升)的混合物3小時(shí)。用8N KOH將混合物調(diào)至pH8，用乙酸乙酯抽提。用鹽水洗滌有機(jī)抽提物，用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。在硅膠(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)上層析剩余物，得到白色固態(tài)的純產(chǎn)物(42毫克)。質(zhì)譜揭示[M+H+]＝576。
B.5-O-(2’-乙酰基脫氧糖胺基)-6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A在環(huán)境溫度下攪拌5-O-脫氧糖胺基-6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A(73毫克)、碳酸鉀(20毫克)、乙酸酐(14微升)和丙酮(1毫升)的混合物18小時(shí)。加入乙酸乙酯，用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。在硅膠(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)上層析剩余物，得到白色固態(tài)的純產(chǎn)物(71毫克)。質(zhì)譜揭示[M+H+]＝618。
C.5-O-(2’-乙酰基脫氧糖胺基)-3-脫氧-3-氧代-6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A(式(1)，Ra＝OH，Rd＝Me，Rf＝Me，Rb＝H，Rc＝Ac)用DMSO(0.21毫升)處理5-O-(2’-乙?；撗跆前坊?-6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A(99毫克)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)鹽酸鹽(206毫克)的二氯甲烷(2毫升)溶液，冷卻到5℃。通過針筒泵在4小時(shí)內(nèi)加入三氟乙酸吡啶鎓(208毫克)的溶液。然后加入乙酸乙酯，用飽和NaHCO3、水、鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。在硅膠(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)上層析剩余物，得到白色固態(tài)的純產(chǎn)物(94毫克)。質(zhì)譜揭示[M+H+]＝616。
D.5-O-(2’-乙?；撗跆前坊?-3-脫氧-3-氧代-11-O-甲磺?；?6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A在5-O-(2’-乙?；撗跆前坊?-3-脫氧-3-氧代-6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A(93毫克)的無水吡啶(1毫升)溶液中在5℃加入甲磺酰氯(0.057毫升)。5℃3小時(shí)后，將反應(yīng)物溫至環(huán)境溫度，再放置15小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋混合物，用飽和NaHCO3(2x)、水(3x)、鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。在硅膠(2∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)上層析剩余物，得到白色固態(tài)的純產(chǎn)物(72毫克)。質(zhì)譜揭示[M+H+]＝695。
E.5-O-(2’-乙酰基脫氧糖胺基)-10，11-脫水-3-脫氧-3-氧代-6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A用二氮雜二環(huán)十一碳烯(32微升)在環(huán)境溫度下處理5-O-(2’-乙?；撗跆前坊?-3-脫氧-3-氧代-11-O-甲磺?；?6-O-甲基-14-去甲紅霉內(nèi)酯A(73毫克)的丙酮(1毫升)溶液18小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋混合物，用飽和NaHCO3、水、鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。在硅膠(2∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)上層析剩余物，得到白色固態(tài)的純產(chǎn)物(50毫克)。質(zhì)譜揭示[M+H+]＝598。13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ207.02，204.50，169.63，168.72，142.52，139.40，101.87，80.61，80.02，77.14，72.66，71.48，69.09，63.56，51.35，50.56，47.12，40.61，39.73，37.36，30.36，21.32，21.06，20.96，20.67，18.45，14.34，13.89，13.55，13.45。
實(shí)施例82’-O-苯甲?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-10，11-脫水-14，15-脫氫紅霉素A(式(6)的脫水形式，Ra＝烯丙基，Ra＝Me，Rb＝H，Rc＝苯甲?；?的合成A.2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A攪拌6-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A(668毫克)、苯甲酸酐(385毫克)和三乙胺(0.25毫升)的3.6毫升CH2Cl2的溶液2日。加入飽和NaHCO3后，用CH2Cl2抽提混合物3次。合并有機(jī)抽提物，蒸發(fā)至干，用硅膠層析純化產(chǎn)物(90∶9∶1甲苯/丙酮/Et3N)，得到477毫克產(chǎn)物；LC-MS顯示[M+H+]＝850.6。
B.2’-O苯甲?；?6-O-甲基-4″，11-二(O-甲磺?；?-14，15-脫氫紅霉素A攪拌2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-14，15-脫氫紅霉素A(549毫克)和甲磺酰氯(0.50毫升)的2.39毫升吡啶溶液24小時(shí)，然后用CH2Cl2和飽和NaHCO3稀釋。用CH2Cl2抽提混合物3次。合并有機(jī)抽提物并蒸發(fā)至干，用硅膠層析(90∶9∶1甲苯/丙酮/Et3N)純化產(chǎn)物，得到530毫克產(chǎn)物。LC-MS顯示[M+H+]＝1006.5。
C.2’-O苯甲?；?6-O-甲基-4″-O-甲磺酰基-10，11-脫水-14，15-脫氫紅霉素A攪拌2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-4″，11-二(O-甲磺?；?14，15-脫氫紅霉素A(59毫克)和二氮雜二環(huán)十一碳烯(0.018毫升)的0.195毫升丙酮的混合物24小時(shí)，然后真空干燥。用硅膠層析(90∶9∶1甲苯/丙酮/Et3N)純化產(chǎn)物，得到50毫克產(chǎn)物。LC-MS顯示[M+H+]＝910.5。
D.2’-O苯甲?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-10，11-脫水-14，15-脫氫紅霉素A攪拌2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-4″-O-甲磺?；?10，11-脫水-14，15-脫氫紅霉素A(337毫克)、1.5毫升乙腈、和6.9毫升3N HCl的混合物22小時(shí)。真空除去乙腈，加入NaOH將水相剩余物的pH調(diào)至12，用4份CH2Cl2抽提產(chǎn)物。干燥并蒸發(fā)合并的抽提物。用硅膠層析(梯度從96∶4 CH2Cl2/MeOH到95∶4∶1CH2Cl2/MeOH/Et3N)純化產(chǎn)物，得到197毫克，[M+H+]＝674.4。
E.2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-10，11-脫水-14，15-脫氫紅霉素A攪拌2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-10，11-脫水-14，15-脫氫紅霉素A(226毫克)和Dess-Martin高碘烷(periodinane)(427毫克)的14.6毫升CH2Cl2(14.6毫升)1小時(shí)。用CH2Cl2和飽和NaHCO3稀釋混合物。用3份CH2Cl2抽提產(chǎn)物，合并抽提物，干燥并蒸發(fā)。硅膠層析(90∶9∶1甲苯/丙酮/Et3N)得到產(chǎn)物168毫克，[M+H+]＝672.4。13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ206.78，203(溴)，168.19，165.08，141.36，139.58，132.74，131.51，130.46，129.79，128.25，120.18，102.09，80.79，80.40，78.70，72.52，71.91，69.19，63.76，51.10，50.54，47.08，40.73，39.87，37.77，31.23，22.13，20.98，18.52，14.28，14.15，13.55。
實(shí)施例95-O-(2’-乙?；撗跆前坊?-10，11-脫水-3-脫氧-3-氧代-6-O-甲基-15-甲基紅霉內(nèi)酯(式(6)的脫水形式，Ra＝Me，Rd＝丙基，Rb＝H，Rc＝Ac)的合成A.6-O-甲基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A在環(huán)境溫度下攪拌6-O-甲基-15-甲基紅霉素A(15.1克)和280毫升0.5N HCl 3小時(shí)。加入6N NaOH將pH調(diào)節(jié)到9，用真空過濾收集得到的沉淀，用水洗滌并干燥。用400毫升一份的乙酸乙酯抽提濾液3次。合并有機(jī)抽提物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)，得到另一批產(chǎn)物。用硅膠層析合并的粗產(chǎn)物，得到9.35克純6-O-甲基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A；ES-LC/MS顯示[M+H+]＝605。
B.2’-O-乙?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A在6-O-甲基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A(9.35克)的40毫升乙酸乙酯溶液中加入乙酸酐(2.92毫升)的35毫升乙酸乙酯溶液。加完后攪拌混合物30分鐘，然后濃縮。用硅膠層析(2∶1己烷/丙酮)得到8.35克2’-O-乙?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A。ES-LC/MS顯示[M+H+]＝647。
C.2’-O-乙?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-15-甲基紅霉素A將2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A(8.3克)和1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(16.51克)的64毫升二氯甲烷和15.47毫升二甲亞砜的溶液置于惰性氣氛下，在冰上冷卻。以用4小時(shí)加入的速度加入三氟乙酸吡啶鎓(16.63克)的64毫升二氯甲烷溶液，用薄層層析監(jiān)測反應(yīng)。在加入73％溶液后觀察到完全反應(yīng)，然后加入600毫升乙酸乙酯和200毫升飽和NaHCO3淬滅反應(yīng)。收集有機(jī)層，用飽和NaHCO3、水和鹽水依次洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)，得到8.4克粗產(chǎn)物。用硅膠層析(3∶1己烷/丙酮)，得到6.75克2’-O-乙?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-15-甲基紅霉素A。ES-LC/MS顯示[M+H+]＝645。
D.2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺?；?15-甲基紅霉素A在2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-15-甲基紅霉素A(6.73克)的35毫升吡啶中在0℃滴加甲磺酰氯(5.68毫升)。將混合物置于環(huán)境溫度，加入700毫升乙酸乙酯和200毫升飽和NaHCO3淬滅。收集有機(jī)層，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)，得到8.2克粗產(chǎn)物。用硅膠層析(5∶2己烷/丙酮)得到5.04克2’-O-乙酰基-6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺?；?15-甲基紅霉素A。ES-LC/MS顯示[M+H+]＝723。
E.2’-O-乙?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-10，11-脫水-15-甲基紅霉素A在2’-O-乙?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺?；?15-甲基紅霉素A(5.03克)的23毫升丙酮中滴加1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(5.22毫升)。4.5小時(shí)后濃縮該溶液，用硅膠層析(5∶2己烷/丙酮)剩余物，得到3.72克2’-O-乙?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-10，11-脫水-15-甲基紅霉素A。ES-LC/MS顯示[M+H+]＝627。
實(shí)施例105-O-(2’-乙酰基脫氧糖胺基)-10，11-脫水-3，6-二脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉內(nèi)酯A(式(6)，脫水形式，Rd＝丙基，ORa被H替換，Rb＝H，Rc＝Ac)在6-脫氧-15-甲基紅霉素C(220毫克，0.307毫摩爾)的二氯甲烷(5毫升)溶液中加入碳酸鉀(50毫克)和乙酸酐(100升，0.9毫摩爾)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)物16小時(shí)。過濾溶液，加入氫氧化鈉(1N，25毫升)和鹽水(25毫升)，用乙酸乙酯抽提水層6次。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，過濾，真空除去溶劑。在下一步中使用粗產(chǎn)物(起始物質(zhì)的2’-乙?；问?。
將粗產(chǎn)物溶于吡啶(5毫升)，加入甲磺酰氯(70升，0.9毫摩爾)。-20℃攪拌反應(yīng)物2日，傾倒到氫氧化鈉(1N，25毫升)和鹽水(25毫升)中，用乙酸乙酯抽提水層6次。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，過濾，真空除去溶劑。用硅膠(甲苯/丙酮＝3∶1，1％氫氧化銨)純化剩余物，得到11，4″-二甲磺?；问?190毫克，兩步68％)。
將11，4″-二甲磺?；问?190毫克，0.21毫摩爾)溶于丙酮(7毫升)，加入DBU(63升，0.42毫摩爾)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)物過夜。將混合物傾倒到氫氧化鈉(1N，25毫升)和鹽水(25毫升)中，用乙酸乙酯抽提水層6次。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，過濾，真空除去溶劑。在下一步中使用粗產(chǎn)物(6-脫氧-15-甲基紅霉素的10，11-脫氫形式)。
在上述步驟的粗產(chǎn)物中加入鹽酸(30毫升，3N)和乙醇(2毫升)，劇烈攪拌混合物6小時(shí)。加入氫氧化鈉(5毫升，10N)，用乙酸乙酯抽提水層6次。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，過濾，真空除去溶劑。在下一步中使用粗產(chǎn)物(式(6)的脫水形式(但3位是OH)，其中Rd＝丙基，ORa被H替換，Rb＝Rc＝H)。
在上述步驟的粗產(chǎn)物的二氯甲烷(5毫升)溶液中加入乙酸酐(50升，0.45毫摩爾)和碳酸鉀(100毫克)，劇烈攪拌混合物9小時(shí)。過濾反應(yīng)物，加入氫氧化鈉(20毫升，1N)和鹽水(25毫升)，用乙酸乙酯抽提水層6次。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，過濾，真空除去溶劑。用硅膠(甲苯/丙酮＝3∶1，1％氫氧化銨)純化剩余物，得到起始物質(zhì)的2’-乙?；问?110毫克，三步后89％)。
將上述步驟的產(chǎn)物(110毫克，0.184毫摩爾)溶于二氯甲烷(10毫升)，加入Dess-Martin試劑(220毫克，0.53毫摩爾)。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)物45分鐘。用氫氧化鈉(20毫升，1N)和鹽水(25毫升)淬滅反應(yīng)物，用乙酸乙酯抽提水層6次。用硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層，過濾，真空除去溶劑。在硅膠上(甲苯/丙酮，梯度＝6∶1-3∶1，1％氫氧化銨)層析純化剩余物得到式(6)的化合物的脫水形式，其中Rd＝丙基，ORa被H替換，Rb＝H，Rc＝Ac(94毫克，86％)。
實(shí)施例11I.式(4)的化合物Rd＝丙基，Ra＝烯丙基步驟1.中間物抗生素6-OH的烯丙基化在冰上冷卻2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(式(I)，(Ra是OH，Rd是丙基，在2’和4″被三甲基甲硅烷基保護(hù)，在C9＝O被異丙基環(huán)己基肟保護(hù)))(7.8克，7.44毫摩爾)的30毫升四氫呋喃溶液，用30毫升二甲亞砜和2.58毫升新鮮蒸餾的烯丙基溴在惰性氣氛下處理。以1.33摩爾當(dāng)量的堿/小時(shí)速率加入二甲亞砜(29.8毫升)和1.0M叔丁醇鉀的四氫呋喃(29.8毫升)混合物。用薄層層析(硅膠，10∶1甲苯/丙酮)監(jiān)測反應(yīng)，加入3.6摩爾當(dāng)量的堿后判斷反應(yīng)完成。用700毫升乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，依次用飽和的NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)得到8.08克粗6-O-烯丙基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟。不經(jīng)純化使用。
步驟2用21毫升水和24毫升乙酸處理6-O-烯丙基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(8.08克)的42毫升乙腈，環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。加入2-丙醇后濃縮混合物，加入甲苯后重復(fù)，得到7.7克粗產(chǎn)物。硅膠層析(梯度2∶1到1∶1己烷/丙酮+1％Et3N)得到3.75克6-O-烯丙基-15-甲基紅霉素A9-肟。
步驟3將6-O-烯丙基-15-甲基紅霉素A9-肟(3.75克)和亞硫酸氫鈉(85％，5.37克)的66毫升1∶1乙醇/水的溶液置于惰性氣氛下。滴加甲酸(0.845毫升)，80℃攪拌混合物3.5小時(shí)。冷卻到環(huán)境溫度后，用6N NaOH將反應(yīng)物調(diào)節(jié)到pH10，用150毫升一份的乙酸乙酯抽提3次。合并有機(jī)抽提物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到3.42克6-O-烯丙基-15-甲基紅霉素A，適用于進(jìn)一步轉(zhuǎn)化。
II.式(4)的化合物Rd＝Me，Ra＝烯丙基步驟1中間物抗生素6-OH的烯丙基化將2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(式(I)，(Ra是OH，Rd是甲基，在2’和4″被三甲基甲硅烷基保護(hù)，在C9＝O被異丙基環(huán)己基肟保護(hù)))(202毫克)的四氫呋喃(0.4毫升)、DMSO(0.4毫升)和乙醚(0.04毫升)溶液冷卻至10℃，用0.035毫升新鮮蒸餾的烯丙基溴在惰性氣氛下處理。以0.22毫升/小時(shí)速率加入甲基亞砜(0.4毫升)和1.0M叔丁醇鉀的四氫呋喃(0.4毫升)的混合物。用薄層層析(硅膠，5∶1甲苯/丙酮)監(jiān)測反應(yīng)。用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，依次用飽和的NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)得到222毫克粗6-O-烯丙基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟。不經(jīng)進(jìn)一步純化使用。
步驟2用2毫升水和2.4毫升乙酸處理6-O-烯丙基-2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-14-去甲紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(222毫克)的4毫升乙腈溶液，環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。加入2-丙醇后濃縮混合物，加入甲苯后重復(fù)，得到220毫克粗6-O-烯丙基-14-去甲紅霉素A9-肟。
步驟3將6-O-烯丙基-14-去甲紅霉素A9-肟(220毫克)和亞硫酸氫鈉(85％，322毫克)的4毫升1∶1乙醇/水的溶液置于惰性氣氛下。滴加甲酸(0.050毫升)，80℃攪拌混合物15小時(shí)。冷卻到環(huán)境溫度后，用6N NaOH將反應(yīng)物調(diào)節(jié)到pH10，用150毫升一份的乙酸乙酯抽提3次。合并有機(jī)抽提物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到156毫克6-O-烯丙基-14-去甲紅霉素A，適用于進(jìn)一步轉(zhuǎn)化。
其他實(shí)施例以相似方式，從中間物(其中Rd是丁基、芐基、乙烯基或3-羥基丁基)制備了式(4)的化合物，其中Y和Z合起來是＝O，Ra是烯丙基。
實(shí)施例12式(4)轉(zhuǎn)化成式(6)步驟1在環(huán)境溫度下攪拌實(shí)施例11，II中制備的化合物(77毫克，粗)、0.073毫升12N HCl和水(2毫升)的混合物3小時(shí)。用8N KOH將混合物調(diào)至pH8，用乙酸乙酯抽提。用鹽水洗滌有機(jī)抽提物，用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。在硅膠(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)上層析剩余物，得到白色固態(tài)純產(chǎn)物(42毫克)。
步驟2為了保護(hù)2’OH，在環(huán)境溫度下攪拌上述化合物(73毫克)、碳酸鉀(20毫克)、乙酸酐(14微升)和丙酮(1毫升)的混合物18小時(shí)。加入乙酸乙酯，用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。在硅膠(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)上層析剩余物，得到白色固態(tài)純產(chǎn)物(71毫克)。
步驟3用DMSO(0.21毫升)處理步驟2得到的化合物(99毫克)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)鹽酸鹽(206毫克)的二氯甲烷(2毫升)溶液，并冷至5℃。用針筒泵以4小時(shí)加入三氟乙酸吡啶鎓(208毫克)的二氯甲烷(2毫升)的溶液。然后加入乙酸乙酯，用飽和NaHCO3、水、鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。用硅膠(3∶1/己烷∶丙酮，1％三乙胺)層析剩余物，得到式(6)的純化合物(94毫克，Ra是烯丙基，Rc是乙酸酯，Rd是CH3)。
步驟4為了去除2’OH的保護(hù)，在室溫下攪拌步驟3得到的化合物(94毫克)的5毫升甲醇溶液24小時(shí)。在真空下除去溶劑，得到所需的式(6)化合物(Ra是烯丙基，Rc是H，Rd是CH3)。
其他實(shí)施例用相似方式，制備了式(4)的化合物，其中Ra是烯丙基，Rc是H，Rd是丙基、丁基、芐基、乙烯基或3-羥基丁基。
實(shí)施例13式(5)的化合物的制備在2’位保護(hù)如實(shí)施例11中6-烯丙基衍生物制備的式(4)的化合物，用酸處理并脫水，然后去保護(hù)，獲得如圖1所示的式(5)的化合物，其中Rc是H，Ra是烯丙基。類似的，如上所述，用式(I)的化合物(其中Rd如上列出)作為起始材料制備了式(6)的化合物(其中Rd是丙基、丁基、芐基、乙烯基或3-羥基丁基)。
實(shí)施例14將9位的＝O轉(zhuǎn)化成＝NOH根據(jù)實(shí)施例6A的方法，將紅霉素9位的羰基轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的肟。
實(shí)施例15-ORf的轉(zhuǎn)化A.烯丙基→丙基用氮?dú)獯祾呷魏紊衔闹苽涞幕衔?0.2毫摩爾)的乙醇溶液，加入10％鈀碳(20毫克)。然后用氫氣吹掃混合物，在氫氣正壓下攪拌反應(yīng)混合物過夜。過濾反應(yīng)混合物，真空濃縮得到玻璃狀物。硅膠層析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到白色固態(tài)丙基化合物。
B.烯丙基→CH2CHO對任何上述得到的化合物(4.0毫摩爾)的二氯甲烷(100毫升)溶液在-78℃用臭氧吹掃45分鐘。然后對反應(yīng)混合物用氮?dú)獯祾?0分鐘。在-78℃加入二甲硫醚(1.46毫升，20毫摩爾)，0℃攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。反應(yīng)混合物真空濃縮，得到白色泡沫狀物，它無需純化就能使用。通過55℃加熱化合物的THF(40毫升，4.0毫摩爾)和三苯膦(2.62克，10.0毫摩爾)的溶液2.5小時(shí)，真空濃縮反應(yīng)混合物，得到白色泡沫。硅膠層析(1∶1丙酮-己烷，然后75∶25∶0.5丙酮-己烷-三乙胺)得到所需白色固態(tài)化合物。
C.烯丙基→CH2CH＝NOH在B中制備的化合物(其中Ra是-CH2CHO，0.08毫摩爾)的甲醇(5毫升)溶液中加入三乙胺(31微升，0.225毫摩爾)和羥胺鹽酸鹽(7.7毫克，0.112毫摩爾)，在環(huán)境溫度下攪拌反應(yīng)混合物6小時(shí)。將反應(yīng)混合物置于乙酸乙酯中，用5％碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，并真空濃縮得到澄清玻璃狀物。在硅膠上層析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到白色固態(tài)化合物。
D.-CH2CH＝NOH→-CH2CN在氮?dú)庀?，在C制備的化合物(0.267毫摩爾)的THF(5毫升)溶液中加入二異丙基碳二亞胺(83微升，0.534毫摩爾)和CuCl(2.7毫克，0.027毫摩爾)，在環(huán)境溫度下攪拌反應(yīng)混合物過夜。將反應(yīng)混合物置于乙酸乙酯中，用5％碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，真空濃縮得到澄清玻璃狀物。硅膠層析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到所需的白色固態(tài)化合物。
E.-CH2CHO→-CH2CH2NH2在B中制備的化合物(0.276毫摩爾)的甲醇(10毫升)溶液中加入乙酸銨(212毫克，2.76毫摩爾)，冷卻混合物至0℃。加入氰基硼氫化鈉(34毫克，0.553毫摩爾)，在0℃攪拌反應(yīng)混合物30小時(shí)。將反應(yīng)混合物置于乙酸乙酯，用5％碳酸鈉水溶液、2％三(羥基甲基)氨基甲烷水溶液和鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，過濾，并真空濃縮。硅膠層析(90∶10∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)得到所需的白色固態(tài)化合物。
F.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2-苯基在0℃的B中制備的化合物(0.200毫摩爾)的甲醇(10毫升)溶液中加入乙酸(114微升，2.00毫摩爾)和芐胺(218微升，2.00毫摩爾)，攪拌混合物10分鐘。加入氰基硼氫化鈉(24.8毫克，0.400毫摩爾)，攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)。然后加入額外的氰基硼氫化鈉(24.8毫克，0.400毫摩爾)，繼續(xù)攪拌5小時(shí)。將反應(yīng)混合物置于乙酸乙酯中，用5％碳酸鈉水溶液、2％三(羥基甲基)氨基甲烷水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮。硅膠層析(95∶50∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)，然后第二次層析(50∶50∶0.5丙酮-己烷-三乙胺)得到所需的白色泡沫。
G.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2CH2-苯基在0℃的B中制備的化合物(0.200毫摩爾)的甲醇(10毫升)溶液中加入乙酸(114微升，2.00毫摩爾)和苯乙基胺(218微升，2.00毫摩爾)，攪拌混合物10分鐘。加入氰基硼氫化鈉(24.8毫克，0.400毫摩爾)，攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)。將反應(yīng)混合物置于乙酸乙酯中，用5％碳酸鈉水溶液、2％三(羥基甲基)氨基甲烷水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮。硅膠層析(90∶10∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)，得到所需的化合物。
H.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH(CO2CH3)CH2-苯基在0℃的B中制備的化合物(0.200毫摩爾)的甲醇(10毫升)溶液中加入L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(129毫克，0.600毫摩爾)，攪拌混合物10分鐘。加入氰基硼氫化鈉(924.8毫克，0.400毫摩爾)，攪拌反應(yīng)混合物22小時(shí)。將反應(yīng)混合物置于乙酸乙酯中，用5％碳酸鈉水溶液、2％三(羥基甲基)氨基甲烷水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮。硅膠層析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)，得到所需的化合物。
I.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2-(4-吡啶基)根據(jù)G的方法制備了所需化合物，除了用4-氨基甲基吡啶代替苯乙胺。
J.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2-(4-喹啉基)在E中制備的化合物(0.15毫摩爾)的甲醇(2毫升)溶液中加入4-喹啉甲醛(23毫克，0.15毫摩爾)、乙酸(8.6微升，0.15毫摩爾)和氰基硼氫化鈉(9.4毫克，0.15毫摩爾)，攪拌混合物15小時(shí)。將反應(yīng)混合物置于乙酸乙酯中，用5％碳酸鈉水溶液、2％三(羥基甲基)氨基甲烷水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮。硅膠層析(95∶10∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)，得到所需的化合物。
K.烯丙基→-CH2CH＝CH-苯基在氮?dú)庀碌膶?shí)施例10中制備的2’保護(hù)的化合物(1.00毫摩爾)、乙酸鈀(II)(22毫克，0.100毫摩爾)和三苯膦(52毫克，0.200毫摩爾)的乙腈(5毫升)溶液中加入碘苯(220微升，2.00毫摩爾)和三乙胺(280微升，2.00毫摩爾)，混合物冷卻到-78℃，脫氣并密封。然后將反應(yīng)混合物溫至60℃0.5小時(shí)，80℃攪拌12小時(shí)，置于乙酸乙酯中，并用5％碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，2％三(羥基甲基)氨基甲烷水溶液洗滌一次，用鹽水洗滌一次，用硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮。硅膠層析(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)，得到所需的化合物。
在甲醇中加熱完成去保護(hù)。
式(4)-(6)的其他實(shí)施例(其中Rb是H，Rc是H，Rd是丙基、丁基、芐基、乙烯基，或3-羥基丁基)是那些其中Ra是


上述任何化合物可用上文實(shí)施例14所述的方法轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的衍生物，其中Y和Z合起來是＝NOH。
實(shí)施例16式(1)化合物的制備L是CO，T是O，Ra＝-CH2CH-CH2，Rc是H步驟1.保護(hù)2’-OH，形成化合物(6)的中間化合物，在C-3具有羥基，Ra是烯丙基，Rc是苯甲?；?。
在實(shí)施例12的產(chǎn)物或其他實(shí)施例(其中Rd是丙基、丁基、芐基、乙烯基或3-羥基丁基)(2.49克，4.05毫摩爾)的二氯甲烷(20毫升)溶液中加入苯甲酸酐(98％，1.46克，6.48毫摩爾)和三乙胺(0.90毫升，6.48毫摩爾)，在環(huán)境溫度下攪拌白色懸液26小時(shí)。加入5％碳酸鈉水溶液，攪拌混合物20分鐘。用二氯甲烷抽提混合物。用5％碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，真空濃縮，得到白色泡沫。硅膠層析(30％丙酮-己烷)得到保護(hù)的化合物。
步驟2.氧化形成化合物(6)，Ra是烯丙基，Rc是苯甲?；?。
在N2下，-10℃的N-氯琥珀酰胺(0.68克，5.07毫摩爾)的二氯甲烷(20毫升)溶液中用5分鐘加入二甲亞砜(0.43毫升，5.92毫摩爾)。-10℃攪拌得到的白色漿液20分鐘，然后加入來自步驟I的化合物(2.43克，3.38毫摩爾)的二氯甲烷(20毫升)溶液，在-10℃和-5℃攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。用5分鐘滴加三乙胺(0.47毫升，3.38毫摩爾)，0℃攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。用二氯甲烷抽提反應(yīng)混合物。用5％碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，鹽水洗滌一次，用硫酸鈉干燥，真空濃縮得到白色泡沫。硅膠層析(30％丙酮-己烷)得到氧化的化合物。
步驟3從說明性圖解5形成式(1)化合物的環(huán)狀羧酸酯Ra是-CH2CH＝CH2，Rc是苯甲?；?br> 在氮?dú)庀碌?35℃的步驟2中制備的化合物(3.58克，5.00毫摩爾)的THF(60毫升)溶液中，加入六甲基二甲硅氮烷化鈉(1.0M的THF溶液，5.5毫升，5.5毫摩爾)，攪拌得到的白色懸液30分鐘。在-35℃用20分鐘滴加羰基二咪唑(4.05克，25毫摩爾)的THF(40毫升)溶液，然后除去冰浴，攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。用乙酸乙酯吸收反應(yīng)混合物，用5％碳酸氫鈉和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，真空濃縮。在硅膠(30％丙酮-己烷)上層析得到白色泡沫狀脫水化合物(2.6克)。(M+H)+是744。
步驟4.去保護(hù)形成式(1)的化合物L(fēng)是CO，T是O，Ra是-CH2CH＝CH2，Rc是H。
回流攪拌步驟3得到的化合物(719毫克，1.0毫摩爾)的甲醇(20毫升)溶液6小時(shí)。真空濃縮反應(yīng)混合物，在硅膠(95∶5∶0.5二氯甲烷-甲醇-氨)上層析純化剩余物，得到所需的化合物。
實(shí)施例17式(1)的化合物L(fēng)是CO，T是O，Ra是-CH2＝CH-苯基A.從說明性圖解5形成式(1)化合物的環(huán)狀碳酸酯Ra是-CH2CH＝CH-苯基，Rc是苯甲?；?br> 將實(shí)施例15，步驟K或其他實(shí)施例制備的化合物(其中Rd是丙基、丁基、芐基、乙烯基或3-羥基丁基(150毫克，0.20毫摩爾))的THF(5毫升)溶液冷卻至-35℃，并用N2吹掃。在-35℃用2分鐘加入六甲基二硅氮烷化鋰(1.0M的THF溶液，0.22毫升，0.22毫摩爾)。-35℃攪拌反應(yīng)混合物10分鐘，然后在2分鐘內(nèi)滴加羰基二咪唑(162毫克，1.00毫摩爾)的THF(3毫升)溶液。除去冷卻浴，攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，加入0.5M KH2PO4水溶液。用乙酸乙酯抽提混合物，用鹽水洗滌有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，真空濃縮。在硅膠上層析(30％丙酮-己烷)得到脫水的化合物。
B.去保護(hù)形成式(1)的化合物L(fēng)是CO，T是O，Ra是-CH2CH＝CH-苯基，Rc是H根據(jù)實(shí)施例16，步驟4的過程在甲醇中加熱，完成了步驟A中制備的化合物的去保護(hù)。
用之前實(shí)施例和圖解中的方法，以及合成有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域已知的方法，可制備式(1)的化合物(其中L是CO，T是O)。這些化合物包括下列的Ra取代基之一

實(shí)施例18式(1)的化合物的制備L是CO，T是NH，Ra是-CH2CH＝CH2，Rc是H步驟1制備中間化合物(6)的10，11脫水形式Ra是-CH2CH＝CH2，Rc是苯甲酰基A.6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-15-甲基-紅霉素A在環(huán)境溫度下攪拌6-O-烯丙基-15-甲基紅霉素A(6.58克)和125毫升0.5N HCl的混合物20小時(shí)。加入6N NaOH，將pH調(diào)節(jié)到10，用225毫升一份的乙酸乙酯抽提混合物3次。合并有機(jī)抽提物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。用硅膠(3∶2甲苯/丙酮+1％Et3N)層析粗產(chǎn)物，得到3.04克純6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A。ES-LC/MS顯示了[M+H]+＝617。
B.2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-15-甲基-紅霉素A將6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-15-紅霉素A(2.43克，3.86毫摩爾，1.00當(dāng)量)和苯甲酸酐(1.78克，7.72毫摩爾，2.00當(dāng)量)置于圓底燒瓶中，用N2吹掃。加入乙酸乙酯(17.5毫升)。攪拌溶液3.5小時(shí)，然后用400毫升EtOAc稀釋，用150毫升飽和NaHCO3水溶液洗滌兩次，用150毫升水和鹽水各洗滌一次。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用硅膠(3∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)快速層析純化得到1.94克(68.1％)所需的白色固態(tài)產(chǎn)物。ES-LC/MS顯示[M+H]+＝721。13C NMR(100.6MHz，CDCl3)δ219.4，174.3，165.4，135.3，132.6，130.8，129.7，128.2，117.2，99.7，80.7，79.0，77.9，77.7，75.1，74.3，72.3，69.0，64.7，63.3，45.6，43.9，40.7，37.9，37.7，35.7，32.1，30.8，21.1，20.2，19.3，18.1，16.3，15.1，14.0，12.4，7.7。
C.2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-3-氧代-15-甲基-紅霉素A將N-氯琥珀酰亞胺(0.510克，3.82毫摩爾，1.50當(dāng)量)溶于13毫升無水CH2Cl2，在N2下冷卻到-10℃。加入二甲硫醚(0.328毫升，4.46毫摩爾，1.75當(dāng)量)，攪拌反應(yīng)物15分鐘。滴加2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-15-甲基-紅霉素A(1.87克，2.55毫摩爾，1.00當(dāng)量)的13毫升無水CH2Cl2溶液。30分鐘后，加入新鮮蒸餾的Et3N(0.355毫升，2.55毫摩爾，1.00當(dāng)量)；反應(yīng)用30分鐘升至0℃。用400毫升EtOAc稀釋反應(yīng)混合物，連續(xù)用100毫升飽和的NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)層，過濾并濃縮，用快速層析(9∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)純化，得到0.931克(49.9％)所需白色固態(tài)產(chǎn)物。ES-LC/MS顯示[M+H]+＝719。13C NMR(100.6MHz，CDCl3)δ219.1，206.1，169.5，165.3，135.3，132.7，129.0，129.7，128.3，117.4，100.7，78.5，76.6，75.3，74.2，72.1，69.2，69.0，64.5，63.7，50.6，45.3，44.8，40.7，38.3，37.8，31.7，31.0，21.1，20.2，19.5，18.1，16.5，14.5，14.0，12.6，12.2。
D.2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-O-甲磺?；?15-甲基-紅霉素A2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-15甲基紅霉素A(904毫克，1.24毫摩爾，1.00當(dāng)量)溶于新鮮蒸餾的吡啶(4毫升)中并冷卻到0℃。滴加甲磺酰氯(0.478毫升，6.17毫摩爾，5.00當(dāng)量)。反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌過夜。用350毫升EtOAc稀釋混合物，用100毫升飽和NaHCO3水溶液淬滅。分離層，各用100毫升水和鹽水連續(xù)洗滌有機(jī)相。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。用硅膠(4∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)快速層析得到741毫克(74.1％)所需的白色固態(tài)化合物。13C NMR(100.6MHz，CDCl3)δ203.0，168.9，165.0，137.6，133.1，130.3，129.8，128.5，114.4，108.8，102.2，91.1，84.4，81.6，78.8，72.2，69.2，64.3，63.9，52.1，46.6，45.8，40.7，38.8，38.2，35.9，31.8，30.9，29.7，24.8，21.0，19.6，18.2，15.5，15.4，13.8，13.5。
E.2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-10，11-脫水-15-甲基-紅霉素A2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-甲磺?；?15-甲基紅霉素A(705毫克，0.870毫摩爾，1.00當(dāng)量)溶于丙酮(3毫升)，滴加1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(0.651毫升，4.35毫摩爾，5.00當(dāng)量)。反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌6小時(shí)。用硅膠(4∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)快速層析得到486毫克(78.0％)所需的白色固態(tài)化合物。13C NMR(100.6 MHz，CDCl3)δ210.1，208.4，170.2，165.2，141.0，140.2，136.3，132.7，130.4，129.8，128.2，115.5，100.6，81.0，78.7，77.2，73.8，72.0，69.1，64.6，63.3，51.0，47.4，40.8，39.4，36.2，31.9，31.3，23.6，21.2，21.1，21.0，19.4，14.1，13.9，13.7，13.1。
步驟2從說明性圖解3形成咪唑化物中間物(7)，環(huán)化形成化合物(1)/(10)的環(huán)狀氨基甲酸酯Ra是-CH2CH＝CH2，Rc是苯甲酰基。
將2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-10，11-脫水-3-去克拉定糖基-3-氧代-15-甲基紅霉素A(227毫克，0.317毫摩爾，1.00當(dāng)量)溶于1.3毫升新鮮蒸餾的THF，在N2下冷卻到-15℃。加入氫化鈉(25毫克60％的礦物油分散體，0.634毫摩爾，2.00當(dāng)量)，攪拌反應(yīng)物15分鐘。滴加1，1-羰基二咪唑(140毫克，0.866毫摩爾，3.00當(dāng)量)的1.3毫升新鮮蒸餾的THF溶液。攪拌30分鐘后，將反應(yīng)物用1.5小時(shí)溫至環(huán)境溫度。用100毫升EtOAc稀釋反應(yīng)物，連續(xù)用30毫升飽和NaHCO3水溶液、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮得到275毫克粗產(chǎn)物(100％)，溶于2毫升CAN和0.2毫升無水THF。加入飽和的氫氧化銨水溶液(2毫升)。密封反應(yīng)物，攪拌2日。減壓除去揮發(fā)物。將剩余物重新溶于100毫升EtOAc。連續(xù)用30毫升飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌溶液。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮?？焖賹游龃之a(chǎn)物(4∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)得到184毫克(76.5％)所需的產(chǎn)物。
實(shí)施例19式(3)化合物的制備L是CO，T是NH，Ra是-CH-(2-萘基)步驟1烷基化6-OH，從說明性圖解2形成化合物(4)Ra是-CH2-(2-萘基)，Rc和Re是H。
根據(jù)實(shí)施例11，步驟1-3的方法，除了用(2-萘基)甲基溴代替步驟1的烯丙基溴，制備該化合物。
步驟2保護(hù)2′，4″羥基，從說明性圖解2形成中間化合物(4)Ra是-CH2-(萘基)，Rc和Re是乙?；?br> 根據(jù)實(shí)施例16，步驟1的方法除了步驟1的化合物(2.0克)，除了用乙酸酐代替該實(shí)施例的苯甲酸酐。
步驟3從說明性圖解2形成中間化合物(9)和從說明性圖解2形成化合物(3)的環(huán)狀氨基甲酸酯用NaH和羰基二咪唑處理步驟2的化合物(500毫克)，用氨的乙腈溶液根據(jù)實(shí)施例18，步驟2的方法處理，得到該化合物。
實(shí)施例20式(1)化合物的制備Rc是乙酰基，L是CO，T是NH，Ra是-CH2CH＝CH2步驟1從說明性圖解2制備中間化合物(4)Ra是-CH2CH＝CH2，Rc和Re是乙?；?。
在實(shí)施例11，步驟3或其實(shí)施例的樣品(其中Rd是丙基、芐基、乙烯基或3-羥基丁基)(405.2克，528毫摩爾)的二氯甲烷(20毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(0.488克，4摩爾)和乙酸酐(3.39毫升，36毫摩爾)，室溫?cái)嚢杌旌衔?小時(shí)。用二氯甲烷稀釋混合物，然后用5％碳酸氫鈉水溶液洗滌，用Na2SO4干燥。干燥剩余物并從乙腈重結(jié)晶得到化合物。
步驟2在C-10，11脫水，衍生C-12從說明性圖解2形成中間化合物(9)Ra是-CH2CH＝CH2，Rc和Re是乙?；?。
在冷卻到-40℃，用氮?dú)獯祾叩牟襟E1的化合物樣品(85.8克，100毫摩爾)的無水THF(500毫升)溶液中經(jīng)20分鐘加入二(三甲基甲硅烷基)酰氨化鈉(125毫升，125毫摩爾)，-40℃攪拌混合物40分鐘。在氮?dú)猓?40℃下經(jīng)30分鐘，在該混合物中加入羰基二咪唑(3.65克，22.56毫摩爾)的5∶3THF/DMF(800毫升)溶液，-20℃攪拌混合物30分鐘。室溫?cái)嚢杌旌衔?7小時(shí)，然后用乙酸乙酯稀釋。用5％碳酸氫鈉和鹽水洗滌混合物，用Na2SO4干燥，濃縮得到化合物(9)，直接用于下一步。
步驟3從說明性圖解2形成化合物(3)的環(huán)狀氨基甲酸酯Ra是-CH2CH＝CH2，Rc和Re是乙?；鶎⒉襟E2的化合物(124克)溶于9∶1乙腈/THF(1100毫升)、羥胺(28％，200毫升)，在氮?dú)庀率覝財(cái)嚢杌旌衔?日。除去溶劑，將剩余物溶于乙酸乙酯。用5％碳酸氫鈉和鹽水洗滌該溶液，用Na2SO4干燥，濃縮得到化合物(3)。
步驟4化合物(1)的3-OH形式的制備Ra是-CH2CH＝CH2，Rc和Re是乙?；?。
在懸浮于乙醇(200毫升)中，并用水(400毫升)稀釋的步驟3的樣品(69.0克，78.2毫摩爾)中經(jīng)20分鐘滴加HCl(0.972N，400毫升)。攪拌混合物4小時(shí)，經(jīng)20分鐘加入額外的HCl(4N，100毫升)。攪拌混合物18小時(shí)，冷卻到0℃，然后經(jīng)30分鐘加入NaOH(4N，200毫升)，至大約pH9。過濾分離中間化合物。
步驟5化合物(1)的制備Ra是-CH2CH＝CH2，Rc和Re是乙?；?，L是CO，T是NH在氮?dú)庀?，N-氯琥珀酰亞胺(2.37克，17.8毫摩爾)的二氯甲烷(80毫升)溶液中經(jīng)5分鐘加入二甲亞砜(1.52毫升，20.8毫摩爾)。-10℃攪拌得到的白色漿液10分鐘，加入步驟4的化合物(8.10克，11.9毫摩爾)的二氯甲烷(60毫升)溶液，在-10℃-5℃攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。經(jīng)10分鐘滴加三乙胺(1.99毫升，14.3毫摩爾)，0℃攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)。用二氯甲烷抽提反應(yīng)混合物。用5％碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，真空濃縮得到白色泡沫。硅膠(用50∶50∶0.5丙酮/己烷/羥銨洗脫)層析得到化合物。
實(shí)施例21式(1)化合物的其他制備方法L是CO，T是NH，Ra是-CH2CH＝CH-(3-喹啉基)步驟1式(1)化合物的制備Rb是H，Rd是丙基，L是CO，T是NH，Ra是-CH2CH＝CH-(3-喹啉基)制備A式(1)Rb＝H，Ra是-CH2CH＝CH-(3-喹啉基)。
將2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯(40毫克，0.0528毫摩爾，1.0當(dāng)量)、三(二亞芐基丙酮)和二鈀(O)-氯仿加合物(14毫克，0.014毫摩爾，0.5當(dāng)量)、三-鄰甲苯膦(17毫克，0.055毫摩爾，1.0當(dāng)量)和3-溴喹啉(72微升，0.53毫摩爾，10當(dāng)量)置于圓底燒瓶中，用N2吹掃。加入脫氣乙腈(1毫升)和新鮮蒸餾的Et3N(0.015毫升，0.11毫摩爾，2.0當(dāng)量)?；亓鞣磻?yīng)物63小時(shí)?；旌衔锘氐江h(huán)境溫度，用40毫升EtOAc稀釋。連續(xù)用各10毫升飽和NaHCO3水溶液，水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮?？焖賹游龃之a(chǎn)物(5∶1到2∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)得到34毫克所需產(chǎn)物。
步驟2將上述產(chǎn)物(34毫克)溶于1毫升甲醇，密封，80℃回流16小時(shí)。減壓除去揮發(fā)物?？焖賹游?1∶1己烷∶丙酮+1％Et3N)得到所需的淡黃色固體(25毫克，兩步61％)。ES-LC/MS[M+H]+＝780.5。13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ217.44，205.37，169.48，157.69，149.71，147.61，132.51，129.96，129.56，129.15，129.05，128.49，128.05，126.70，102.90，83.42，78.71，76.42，75.91，70.22，69.53，65.83，64.31，58.12，50.81，46.29，46.12，45.05，40.18(2C)，39.05，37.31，31.64，28.19，21.15，20.18，19.43，18.05，14.38，14.11，13.76，13.63(2C)。
制備B式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(6-氟喹啉基)根據(jù)制備A的方法，用3-溴-6-氟喹啉替換3-溴喹啉制備。ES-LC/MS[M+H]+＝798.5。13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ217.49，205.36，169.54，160.6(JCF＝248Hz)，157.68，149.05，144.69，131.84，131.64(JCF＝9Hz)，130.28，129.63，129.31，128.7(JCF＝10Hz)，119.20(JCF＝27Hz)，110.87(JCF＝22Hz)，102.94，83.42，78.77，76.44，75.91，70.22，69.55，65.84，64.24，58.09，50.83，46.36，46.06，45.05，40.18(2C)39.04，37.32，31.63，28.19，21.16，20.19，19.46，18.04，14.37，14.18，13.76，13.62(2C)。
制備C式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(6-氯喹啉基)根據(jù)制備A的方法，用3-溴-6-氯喹啉替換3-溴喹啉制備。ES-LC/MS[M+H]+＝814.5。13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ217.48，205.35，169.55，157.67，149.90，145.92，132.42，131.49，130.80，130.44，129.92，129.49，129.46，128.71，126.57，102.94，83.41，78.78，76.45，75.91，70.22，69.54，65.83，64.23，58.07，50.83，46.39，45.99，45.04，40.17(2C)，39.03，37.32，31.62，31.53，28.18，21.16，20.17，19.49，18.04，14.36，14.21，13.76，13.61(2C)。
制備D式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(4-(4-異喹啉基)根據(jù)制備A的方法，用4-溴異喹啉替換3-溴喹啉制備。ES-LC/MS[M+H]+＝781。13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ217.19，205.43，169.75，157.39，152.07，140.74，133.61，130.65，130.44，128.07，127.72，127.05，126.89，122.77，102.85，83.28，78.74，75.72，70.22，69.51，65.88，64.45，58.10，50.91，46.07，45.09，40.18(2C)38.99，37.34，31.48，29.66，28.28，21.18，20.39，19.33，14.53，14.01，13.86，13.66，13.62。
制備E式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-吡啶基)根據(jù)制備A的方法，用3-溴吡啶代替3-溴喹啉。13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ217.39，205.27，169.50，157.61，148.81，148.68，132.63，132.16，129.65，128.18，123.46，102.91，83.36，78.63，76.35，75.79，70.20，69.52，65.83，64.17，58.06，50.78，46.28，45.03，40.16(2C)，38.96，37.29，31.64，31.52，28.19，22.58，21.14，20.21，19.42，18.04，1.35，14.12，14.05，13.79，13.61(2C)。
制備F式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(6-甲基喹啉基)根據(jù)制備A的方法，用3-溴-6-甲基喹啉代替3-溴喹啉。ES-LC/MS[M+H]+＝795。13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ217.37，205.35，169.47，157.65，148.82，146.23，136.45，131.87，131.37，130.09，129.51，128.78，128.22，128.06，126.86，102.87，83.40，78.68，75.91，70.20，69.47，65.83，64.33，58.11，50.81，46.28，45.04，40.15(2C)，39.05，37.31，31.64，28.24，21.52，21.14，20.18，19.45，18.05，14.38，14.11，13.77，13.63(2C)。
制備G式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(6-氨基喹啉基)根據(jù)制備A的方法，用3-溴-6-氨基喹啉代替3-溴喹啉。ES-LC/MS[M+H]+＝796制備H式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(5-異噁唑-3-基)噻吩基)根據(jù)制備A的方法，用5-(異噁唑-3-基)-2-溴噻吩代替3-溴喹啉。
制備I式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(6-喹啉基)根據(jù)制備A的方法，用6-溴喹啉代替3-溴喹啉。
制備J式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-喹噁啉-6-基)根據(jù)制備A的方法，用6-溴喹噁啉代替3-溴喹啉。
制備K式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CH＝CH-(5-(N-(2-吡啶基)-2-糠酰氨基)根據(jù)制備A的方法，用N-(2-吡啶基)5-溴-2-糠酰胺代替3-溴喹啉。
制備AA式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-喹啉基)根據(jù)制備A的方法，用2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯。LC/MS[M+H]+＝798.6.19F-NMR(CDCl3，376MHz)δ-163.93.13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ217.97，204.28(JCF＝27Hz)，165.62(JCF＝23Hz)，157.18，149.71，147.70，132.65，130.25，129.53，129.22，129.12，129.06，128.15，128.08，126.78，104.10，98.02(JCF＝206Hz)，83.40，79.59，79.37，77.57，70.41，69.74，65.85，64.36，58.11，44.23，40.83(JCF＝1.5Hz)，40.25(2C)，39.04，37.45，31.37，28.16，25.30(JCF＝22Hz)，21.19，20.86，19.54，17.67，15.46(JCF＝1.7Hz)，，13.82，13.80，13.29。
制備BB式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(6-氟喹啉基))根據(jù)制備B的方法，用2′-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
制備CC式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(6-氯喹啉基)根據(jù)制備C的方法，用2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
制備DD式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(4-異喹啉基)根據(jù)制備D的方法，用2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
制備EE式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-吡啶基)根據(jù)制備E的方法，用2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
制備FF式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(6-甲基喹啉基)根據(jù)制備F的方法，用2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2′-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
制備GG式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(6-氨基喹啉基)根據(jù)制備G的方法，用2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
制備HH式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-(5-異噁唑-3-基)噻吩基)根據(jù)制備H的方法，用2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
制備II式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(6-喹啉基)根據(jù)制備I的方法，用2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2′-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
制備JJ式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(3-喹噁啉-6-基)根據(jù)制備J的方法，用2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯。
制備KK式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CH＝CH-(5-(N-(2-吡啶基)-2-糠酰氨基)根據(jù)制備K的方法，用2′-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2′-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A 11；12-環(huán)氨基甲酸酯。
用上述實(shí)施例、圖解中所述的方法和合成有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域已知的方法，可制備式(1)的環(huán)氨基甲酸酯化合物(其中L是CO和T是NH)。這些具有化合物如下所述的Ra取代基


實(shí)施例22式(1)化合物的制備L是CO，T是N(CH3)，Ra是-CH2CH＝CH2，Rc是H。
步驟1從說明性圖解3制備化合物(10)Rf是甲基，Ra是-CH2CH＝CH2，Rc是苯甲?；?br> 用甲胺代替實(shí)施例18中的氫氧化銨，形成了該化合物。
其他實(shí)施例用上述方法，可制備式(1)-(3)的化合物，其中L是CO，T是-N(CH3)；-NCH2CH2N(CH3)2；-N(CH2CH＝CH2)；-N(CH2CH＝CH-(3-喹啉基))；或-N(NH2)；和Ra是-CH2CH＝CH-(3-喹啉基)；-CH2CH＝CH2；-CH2CH2CH2-(3-喹啉基)；-CH2CH＝CH-萘基；-CH2CH＝CH-(8-氯-3-喹啉基)；-CH2CH＝CH-(4-氯-2-三氟甲基-6-喹啉基)；-CH2CH＝CH-(2-芴基)；-CH2CH＝CH-(3-(2-呋喃基)-6-喹啉基)；-CH2CH＝CH-(9-芴酮-2-基)；-CH2CH＝CH-(6-苯甲?；?2-萘基)；-CH2CH＝CH-(7-甲氧基-2-萘基)；-CH2CH＝CH-(3-苯基-6-喹啉基)；-CH2CH＝CH-(3-(2-吡啶基)-6-喹啉基)；-CH2CH＝CH-(3-(2-噻吩基)-6-喹啉基)；-CH2CH＝CH-(4-甲基萘基)；-CH2CH＝CH-(6-β-D-半乳呋喃糖基-2-萘基)；-CH2CH＝CH-(7-喹啉基)；-CH2CH＝CH-(4-氟萘基)；-CH2CH＝CH-(3-聯(lián)苯基)；-CH2CH＝CH-(5-硝基萘基)；-CH2CH＝CH-(4-吡咯基苯基)；-CH2CH＝CH-(6-甲氧基-2-萘基)；-CH2CH＝CH-(3，5-二氯苯基)；-CH2-(3-碘苯基)；-CH2-(3-(2-呋喃基)苯基)；-CH2CH＝CH-(6-羥基-2-萘基)；-CH2CH＝CH-(6-(2-溴乙氧基)-2-萘基)；-CH2CH＝CH-(6-(2-(四唑基)乙氧基-2-萘基)；-CH2CH＝CH-萘基；-CH2CH＝CH-(5-(3-異噁唑基)-2-噻吩基)；-CH2CH＝CH-(1，3-二甲基-2，4-二氧-5-嘧啶基)；和-CH2CH＝CH-(5-(2-吡啶基)氨基羰基-2-呋喃基)。
另外，根據(jù)實(shí)施例21的方法，除了用下列試劑代替實(shí)施例21的3-溴喹啉，制備了其他化合物。這些是式(1)的化合物，其中L是CO，T是O，具有下列R取代基


*沒有去保護(hù)步驟實(shí)施例23-ORa的轉(zhuǎn)化A.烯丙基→-CH2CHO
將實(shí)施例18的化合物(14.0克)溶于CH2Cl2(200毫升)中，在氮?dú)庀聦⑷芤豪鋮s到-78℃。然后使臭氧冒泡通過溶液，直到出現(xiàn)穩(wěn)定藍(lán)色。然后用N2凈化反應(yīng)物，直到變無色，加入二甲硫醚(14毫升)，將反應(yīng)混合物溫至0℃。攪拌90分鐘后，減壓濃縮反應(yīng)混合物，得到淡黃色泡沫。將該物質(zhì)溶于THF(300毫升)，用三苯膦(8克)回流處理6小時(shí)，然后減壓濃縮反應(yīng)混合物。層析(1∶1丙酮/己烷-3∶1丙酮/己烷和0.5TEA)得到產(chǎn)物。
B.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2苯基將實(shí)施例23A的化合物(120毫克，0.187毫摩爾)和芐胺(40微升，0.366毫摩爾，2當(dāng)量)溶于3毫升無水二氯甲烷。加入分子篩(4)，攪拌反應(yīng)物過夜。然后過濾反應(yīng)物，減壓濃縮。將得到的亞胺溶于MeOH(5毫升)，加入催化量的10％鈀碳，在1個(gè)大氣壓的H2下迅速攪拌反應(yīng)物20小時(shí)。然后將混合物濾過硅藻土墊，減壓濃縮溶液。層析(SiO2，5％MeOH/二氯甲烷和0.2％NH4OH)得到所需的白色固態(tài)物質(zhì)(84毫克)。
C.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2CH2苯基從實(shí)施例23A的化合物(108毫克，0.169毫摩爾)和苯乙胺(42微升，0.344毫摩爾，2當(dāng)量)用實(shí)施例23B的方法制備了該化合物。層析(SiO2，5％MeOH/二氯甲烷和0.5％NH4OH)得到所需物質(zhì)。
D.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2CH2CH2苯基從實(shí)施例23A的化合物(100毫克，0.156毫摩爾)和3-苯基-1-丙基胺(40微升，0.282毫摩爾，1.8當(dāng)量)用實(shí)施例23B的方法制備了該化合物。層析(SiO2，5％MeOH/二氯甲烷和0.5％NH4OH)得到所需物質(zhì)。
E.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2CH2CH2CH2苯基從實(shí)施例23A的化合物(170毫克，0.266毫摩爾)和4-苯基-1-丁基胺(68微升，0.431毫摩爾，1.6當(dāng)量)用實(shí)施例23B的方法制備了該化合物。層析(SiO2，5％MeOH/二氯甲烷和0.2％NH4OH)得到所需物質(zhì)。
F.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2CH2-(3-喹啉基)將實(shí)施例23A的化合物(135毫克，0.211毫摩爾)和3-(3-喹啉基)-1-丙基胺(70毫克，0.376毫摩爾，1.8當(dāng)量)溶于4毫升無水二氯甲烷。加入分子篩(4)，攪拌反應(yīng)物過夜。然后過濾反應(yīng)物并減壓濃縮。將得到的亞胺溶于MeOH(5毫升)并用NaCNBH3(約100毫克)和足量AcOH處理，使溴甲酚藍(lán)指示劑由藍(lán)變綠。攪拌4小時(shí)后，將反應(yīng)混合物傾注到飽和NaHCO3溶液中，用二氯甲烷抽提。用飽和NaHCO3、H2O和鹽水洗滌有機(jī)部分，干燥(Na2SO4)，減壓濃縮。層析(SiO2，5％MeOH/二氯甲烷和0.5％NH4OH到10％MeOH/二氯甲烷和1％NH4OH)得到所需物質(zhì)。
G.-CH2CHO→-CH2CH2NHCH2(3-喹啉基)從實(shí)施例23A的化合物(150毫克，0.234毫摩爾)和3-(氨基乙基)喹啉(100毫克，0.633毫摩爾，2.7當(dāng)量)用實(shí)施例23F的方法制備了標(biāo)題化合物。層析(SiO2，5％MeOH/二氯甲烷和0.5％NH4OH)得到所需物質(zhì)。
用本領(lǐng)域已知的方法制備3-(氨基甲基)喹啉試劑。
其他式(1)-(3)的實(shí)施例(其中Rb是H，Rc是H，L是-CO-，T是-NH-和Rd是丙基、丁基、芐基、乙烯基、或3-羥基丁基)是其中Ra從-CH2CHO轉(zhuǎn)化為-CH2CH2NHCH2(6-喹啉基)；-CH2CH＝NO(苯基)；-CH2CH＝NOCH2(苯基)；-CH2CH＝NOCH2(4-NO2-苯基)；-CH2CH＝NOCH2(4-喹啉基)；-CH2CH＝NOCH2(2-喹啉基)；-CH2CH＝NOCH2(3-喹啉基)；-CH2CH＝NOCH2(6-喹啉基)；-CH2CH＝NOCH2(1-萘基)；-CH2CH＝NOCH2(2-萘基)；-CH2CH2NHOCH2(苯基)；-CH2CH2NHOCH2(4-NO2-苯基)；CH2C(O)-苯基；-CH2C(O)-(4-F-苯基)；-CH2CH＝NNHC(O)苯基；或-CH2CH(OH)-苯基。
H.-CH2CH＝CH-(3-喹啉基)→-CH2CH2CH2(3-喹啉基)用氮?dú)獯祾邔?shí)施例18的化合物(其中Ra是-CH2CH＝CH-(3-喹啉基))(230毫克)與10％Pd/C(50毫克)在15毫升乙酸乙酯中的混合物，在1個(gè)大氣壓的氫氣下室溫?cái)嚢?2小時(shí)。過濾混合物，減壓濃縮濾液。用硅膠(5％MeOH/二氯甲烷和5％NH4OH)層析得到所需的物質(zhì)。
I.-CH2CH＝CH-(3-喹啉基)→-CH2(2-(3-喹啉基)環(huán)丙基)在重氮甲烷(0.64M，3.12毫升，2.00毫摩爾)的乙醚溶液中，在0℃，氮?dú)庀录尤雽?shí)施例18的化合物(其中Ra是-CH2CH＝CH-(3-喹啉基))(153毫克，0.200毫摩爾)的二氯甲烷(5.0毫升)溶液。加入少量(2毫克)乙酸鈀，攪拌混合物20分鐘。加入另一部分重氮甲烷(3毫升)，再攪拌混合物1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，硅膠層析純化剩余物(5％MeOH/二氯甲烷和0.5％NH4OH)，得到白色固態(tài)的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例24Rc的轉(zhuǎn)化A.-H→丙?；?Ra是-CH2CH＝CH-(3-喹啉基))在Ra轉(zhuǎn)化的實(shí)施例18的化合物(其中Ra是-CH2CH＝CH(3-喹啉基))(152毫克)的二氯甲烷溶液中加入丙酸酐(52微升)和三乙胺(56微升)，室溫?cái)嚢杌旌衔?4小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋混合物，用5％NaHCO3溶液和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并減壓濃縮。在硅膠(1∶1丙酮/己烷)上層析剩余物得到白色泡沫狀標(biāo)題化合物。
B.-H→乙基琥珀?；?Ra是-CH2CH＝CH-(3-喹啉基))在Ra轉(zhuǎn)化的實(shí)施例18的化合物(其中Ra是-CH2CH＝CH(3-喹啉基))(153毫克，0.200毫摩爾)的二氯甲烷(10毫升)溶液中，在0℃加入乙基琥珀酰氯(29微升)和三乙胺(56微升)，室溫?cái)嚢杌旌衔?4小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋混合物，用5％NaHCO3溶液和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并減壓濃縮。在硅膠(1∶1丙酮/己烷)上層析剩余物，得到白色泡沫狀標(biāo)題化合物。
實(shí)施例25式(1)的化合物的制備L是CO，T是NH，Ra是-CH2C≡C-H，Rc和Re是H步驟1化合物(4)的中間物的制備9位是N-O-(1-異丙氧基環(huán)己基)，Ra是-CH2C≡C-H，Rc和Re是三甲基甲硅烷基在氮?dú)庀碌?′，4″-二-O-三甲基甲硅烷基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(100克，96.9毫摩爾，根據(jù)美國專利號4,990,602的方法制備)的THF(200毫升)溶液中加入無水DMSO(200毫升)，將混合冷卻到0℃。在該溶液中，一邊在N2下攪拌，一邊加入溴丙炔(27毫升，240毫摩爾，80wt％的甲苯溶液)，然后經(jīng)25分鐘加入無水KOH(13.6克，240毫摩爾)的無水DMSO(300毫升)，0℃劇烈攪拌混合物1小時(shí)。加入額外的KOH(10.9克，190毫摩爾)和溴丙炔(21毫升，190毫摩爾)，0℃在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔?.5小時(shí)。每隔1.5小時(shí)重復(fù)加入KOH和溴丙炔，再重復(fù)3次。然后用乙酸乙酯抽提混合物，用水和鹽水洗滌有機(jī)相，并干燥(MgSO4)。在真空下除去溶劑得到粗產(chǎn)物，直接用于下一步。
步驟2在化合物(4)的中間物中，在9位將-N-O-(1-異丙氧基環(huán)己基)轉(zhuǎn)化成-NOHRa是-CH2C≡C-H在步驟1的化合物(108克)的CH3CN(300毫升)溶液中，加入水(150毫升)和乙酸(冰醋酸，200毫升)。室溫?cái)嚢杌旌衔锛s20小時(shí)。然后在40℃真空除去溶劑，將剩余物置于EtOAc中，連續(xù)用5％Na2CO3和鹽水依次洗滌。然后用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮得到棕色泡沫狀化合物，直接用于下一步。
步驟3在9位將-NOH轉(zhuǎn)化成＝O，形成中間化合物(4)Ra是-CH2C≡C-H將步驟2的化合物(74克)溶于乙醇(550毫升)，用水(550毫升)稀釋。在該溶液中加入亞硝酸(33克，0.48摩爾)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物15分鐘。然后在環(huán)境溫度下經(jīng)15分鐘加入4M HCl(125毫升，0.48摩爾)，將混合物加熱到70℃2小時(shí)，然后冷卻至室溫。用乙酸乙酯抽提混合物，用5％Na2CO3和鹽水洗滌有機(jī)相，然后用MgSO4干燥，過濾并濃縮。用硅膠層析純化粗產(chǎn)物，用1％甲醇/二氯甲烷(含有0.5％氫氧化銨)洗脫。從乙腈中結(jié)晶化合物得到該化合物。
步驟4保護(hù)2′和4″羥基，從說明性圖解2形成中間化合物(4)Rc和Re是乙?；?，Ra是-CH2C≡C-H。
在19克(246毫摩爾)的步驟3的化合物的無水二氯甲烷(100毫升)溶液中加入4-二甲基氨基吡啶(105毫克)和三乙胺(7.16毫升，52毫摩爾)。在冷水浴中將混合物冷卻到約15℃，經(jīng)5分鐘加入乙酸酐(5.5毫升，59毫摩爾)。15℃攪拌5分鐘后，除去冷水浴，在環(huán)境溫度下攪拌反應(yīng)物4小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋混合物，依次用5％碳酸鈉(2次)、水(2次)和鹽水洗滌。用硫酸鎂干燥有機(jī)抽提物，過濾并減壓濃縮。用高真空干燥至恒重得到化合物。
步驟510，11位脫水，在位置12衍生化，從說明性圖解2形成中間化合物(9)Rc和Re是乙?；琑a是-CH2C≡C-H。
在0℃的步驟(4)的化合物(21克，24.5毫摩爾)的THF(128毫升)和二甲亞砜(48毫升)溶液中加入1，1′-羰基二咪唑(4.3克，88.3毫摩爾)。攪拌5分鐘后，在氮?dú)庀陆?jīng)1小時(shí)分部加入氫化鈉(60％的礦物油分散體，1.3克，32.5毫摩爾)。加完后，除去冷卻浴，環(huán)境溫度下攪拌混合物3.5小時(shí)。將反應(yīng)物重新冷卻到0℃，用乙酸乙酯(～400毫升稀釋)，用5％碳酸氫鈉(50毫升)水溶液淬滅。依次用水和鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥。過濾溶液并真空濃縮濾液，干燥到恒重，得到化合物，在下一步中直接使用。
步驟6從說明性圖解2形成化合物(3)的環(huán)狀氨基甲酸酯Rc和Re是乙?；?，Ra是-CH2C≡C-H將含有步驟5的化合物(23克，24毫摩爾)的乙腈(250毫升)溶液的耐壓容器冷卻到-78℃。將等體積的液態(tài)氨(250毫升)冷凝到反應(yīng)容器中，然后密封并一邊攪拌，一邊溫至室溫。20小時(shí)后，將反應(yīng)物重新冷卻到-78℃，打開耐壓容器，將反應(yīng)物溫至室溫，一邊攪拌。當(dāng)全部液態(tài)氨氣蒸發(fā)完后，真空除去乙腈，干燥剩余物到恒重得到化合物。
步驟7除去3位的克拉定糖基部分，形成具有3位羥基的化合物(1)Rc是乙?；?，Ra是-CH2C≡C-H在0℃的步驟6的化合物(21克)的1∶1乙醇/水(200毫升)懸液中經(jīng)10分鐘加入4M鹽酸(125毫升)。除去冷卻浴后，在環(huán)境溫度下攪拌反應(yīng)溶液26小時(shí)。用水稀釋，冷卻到0℃，用2N氫氧化鈉調(diào)節(jié)到堿性pH10。然后用乙酸乙酯(400毫升)抽提混合物，用鹽水洗滌有機(jī)層。用硫酸鎂干燥有機(jī)抽提物，真空濃縮。干燥至恒重得到18克粗產(chǎn)物，從乙酸乙酯/己烷中重結(jié)晶得到純化合物。
步驟8氧化化合物(1)的3位羥基到羰基Rc乙?；?，Ra是-CH2C≡C-H
在-10℃的N-氯琥珀酰亞胺(2.3克，0.017摩爾)的二氯甲烷(100毫升)溶液中經(jīng)5分鐘加入甲基硫醚(1.47毫升，0.021摩爾)。-10℃攪拌反應(yīng)物10分鐘。然后經(jīng)30分鐘加入步驟7的化合物(8.3克，0.012摩爾)的二氯甲烷(100毫升)溶液，-10℃攪拌混合物25分鐘。經(jīng)5分鐘加入三乙胺(1.6毫升，0.021摩爾)，-10℃攪拌反應(yīng)物50分鐘。然后用5％碳酸氫鈉水溶液(50毫升)淬滅反應(yīng)，用二氯甲烷(300毫升)抽提。用5％碳酸氫鈉水溶液，然后是鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。在硅膠上用柱層析，依次用30％丙酮/己烷，然后用50％丙酮/己烷洗脫，純化粗產(chǎn)物，得到化合物。
步驟9去保護(hù)形成式(1)的化合物L(fēng)是CO，T是NH，Ra是-CH2C≡C-H將步驟8的化合物樣品(72毫克)溶于甲醇(8毫升)，在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。真空濃縮后在高真空下干燥到恒重，獲得65毫克純標(biāo)題化合物。
可選擇步驟將Ra從-CH2C≡C-(6-甲氧基-2-萘基溴萘啶)轉(zhuǎn)化成Ra是-CH2C≡C-Br，形成化合物(1)Ra是-CH2C≡C-Br，Rc是十六烷基在氮?dú)庀?，環(huán)境溫度下在實(shí)施例25，步驟8的化合物(100毫克)的丙酮(1毫升)溶液中加入乙酸(8.4微升)。制備含有N-溴琥珀酰亞胺(39毫克)和硝酸銀(2.5毫克)的1毫升丙酮中的第二種溶液，然后在氮?dú)庀?，室溫下攪?0分鐘，冷卻到0℃。然后將第一種溶液一次加到第二種溶液中，除去冷卻浴，在氮?dú)庀率覝財(cái)嚢璧玫降姆磻?yīng)混合物2小時(shí)。然后用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)物，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，室溫?cái)嚢杌旌衔镞^夜。分離有機(jī)相，用鹽水洗滌并干燥(MgSO4)。除去溶劑，在硅膠上層析純化剩余物，用40％丙酮、己烷洗脫，得到化合物?？捎眉状既コ齊c基團(tuán)的保護(hù)。
實(shí)施例26式(1)化合物的制備L是CO，T是NH，Ra如下限定，Rc是H，Rb是H，Rd是丙基I.起始材料式(1)的化合物的制備Rb是H，Ra是-O-炔丙基步驟1將2’，4″-二-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基紅霉素A 9-
肟(100毫克)的0.1毫升四氫呋喃、0.1毫升乙醚和0.1毫升DMSO溶液冷卻到10℃，用0.028毫升3-溴-1-(三甲基甲硅烷基)-1-丙炔在惰性氣氛下處理。以2.0摩爾當(dāng)量的堿/小時(shí)加入二甲亞砜(0.19毫升)和1.0M叔丁醇鉀的四氫呋喃(0.38毫升)溶液的混合物。0.5和1小時(shí)后加入額外當(dāng)量(0.014毫升)的TMS-炔丙基溴。用薄層層析(硅膠，10∶1甲苯/丙酮)監(jiān)測反應(yīng)，在加入2.3摩爾當(dāng)量堿后判斷完成。用100毫升乙酸乙酯和30毫升飽和NaHCO3稀釋反應(yīng)物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)。用硅膠(40∶1己烷/丙酮+1％Et3N)層析粗產(chǎn)物，得到部分純化的6-O-(3-三甲基甲硅烷基)炔丙基-2’-4″-二-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟。
步驟2用2.2毫升水和2.5毫升乙酸處理不純的6-O-(3-三甲基甲硅烷基)炔丙基-2’-4″-二-O-三甲基甲硅烷基-15-甲基紅霉素A9-[O-(1-異丙氧基環(huán)己基)]肟(0.88克)的4.4毫升乙腈溶液，在環(huán)境溫度下攪拌24小時(shí)。加入2-丙醇后濃縮反應(yīng)混合物，加入甲苯后重復(fù)。該物質(zhì)與碳酸鉀和甲醇(6毫升)一起攪拌2.5小時(shí)。用乙酸乙酯(200毫升)稀釋混合物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到產(chǎn)物。
步驟3將來自(iii)的產(chǎn)物和亞硫酸氫鈉(0.59克)的7毫升1∶1乙醇/水溶液置于惰性氣氛下。滴加甲酸(0.096毫升)，80℃攪拌混合物5小時(shí)。冷卻到環(huán)境溫度后，用6N NaOH將反應(yīng)物調(diào)節(jié)到pH10，用150毫升一份的乙酸乙酯抽提3次。合并有機(jī)抽提物，依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到6-O-炔丙基-15-甲基紅霉素A，適用于進(jìn)一步轉(zhuǎn)化?？捎霉枘z層析制備純物質(zhì)。
步驟4在環(huán)境溫度下攪拌6-O-炔丙基-15-甲基紅霉素A(0.40克)和6毫升0.6N HCl 17小時(shí)。加入6N NaOH將pH調(diào)節(jié)到9，加入150毫升乙酸乙酯。依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌有機(jī)抽提物，然后用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)得到進(jìn)一步的產(chǎn)物。硅膠層析粗產(chǎn)物得到純6-O-炔丙基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A。
步驟5攪拌6-O-炔丙基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A(0.16克)和苯甲酸酐(0.12克)的1.3毫升乙酸乙酯溶液17小時(shí)，然后依次用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥溶液，過濾并蒸發(fā)。硅膠層析粗產(chǎn)物，得到2’-O-苯甲?；?6-O-炔丙基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A。
步驟6將N-氯琥珀酰亞胺(0.510克，3.82毫摩爾，1.50當(dāng)量)溶于13毫升無水CH2Cl2，在N2下冷卻到-10℃。加入甲硫醚(0.328毫升，4.46毫摩爾，1.75當(dāng)量)，攪拌反應(yīng)物15分鐘。滴加2’-O-苯甲?；?6-O-炔丙基-3-去克拉定糖基-15-甲基紅霉素A(1.87克，2.55毫摩爾，1.00當(dāng)量)的13毫升無水CH2Cl2。30分鐘后，加入新鮮蒸餾的Et3N(0.355毫升，2.55毫摩爾，1.00當(dāng)量)，將反應(yīng)物經(jīng)30分鐘溫至0℃。用400毫升EtOAc稀釋反應(yīng)混合物，依次用100毫升飽和的NaHCO3，水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)層，過濾，濃縮并層析純化。
步驟7將2’-O-苯甲?；?6-O-炔丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-15-甲基紅霉素A(904毫克)溶于新鮮蒸餾的吡啶(4毫升)，并冷卻到0℃。滴加甲磺酰氯(0.478毫升，6.17毫摩爾，5.00當(dāng)量)。將反應(yīng)物溫至室溫，攪拌過夜。用350毫升EtOAc稀釋混合物，依次用100毫升水和鹽水洗滌有機(jī)相。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮?？焖僭诠枘z上層析得到產(chǎn)物。
步驟8將2’-O-苯甲?；?6-O-炔丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-甲磺?；?15-甲基紅霉素A(705毫克)溶于丙酮(3毫升)，滴加1，8-二疊氮基二環(huán)[5.4.0]-十一碳-7-烯(0.651毫升，4.35毫摩爾，5.00當(dāng)量)。在環(huán)境溫度下攪拌反應(yīng)物6小時(shí)，然后濃縮。用硅膠快速層析得到產(chǎn)物。
步驟9將2’-O-苯甲?；?6-O-炔丙基-10，11-脫水-3-去克拉定糖基-3-氧代-15-甲基紅霉素A(227毫克)溶于1.3毫升新鮮蒸餾的THF，并在N2下冷卻到-15℃。加入氫化鈉(25毫克60％礦物油的分散體，0.634毫摩爾，2.00當(dāng)量)。滴加1，1-羰基二咪唑(140毫克)的1.3毫升新鮮蒸餾的THF溶液。攪拌30分鐘后，使反應(yīng)物經(jīng)1.5小時(shí)溫至環(huán)境溫度。用100毫升EtOAc稀釋混合物，依次用30毫升飽和的NaHCO3水溶液、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮，然后將剩余物溶于2毫升CAN和0.2毫升無水THF。加入飽和的氫氧化銨(2毫升)水溶液。密封反應(yīng)物并攪拌2日。減壓除去揮發(fā)物，重新將剩余物溶于100毫升EtOAc。依次用各30毫升飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌溶液。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮?？焖賹游龅玫江h(huán)狀氨基甲酸酯產(chǎn)物。
II.用I的化合物制備化合物制備方法A式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(3-喹啉基)步驟1將2’-O-苯甲?；?6-O-炔丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)狀氨基甲酸酯(40毫克)、三(二亞芐基丙酮)合二鈀(O)-氯仿加合物(14毫克)、三-鄰甲苯膦(17毫克)、碘化銅和3-溴喹啉(72微升，0.53毫摩爾，10當(dāng)量)置于圓底燒瓶中，用N2沖洗。加入脫氣乙腈(1毫升)和新鮮蒸餾的Et3N(0.015毫升，0.11毫摩爾，2.0當(dāng)量)。反應(yīng)物回流63小時(shí)。反應(yīng)物回到環(huán)境溫度，用40毫升EtOAc稀釋。連續(xù)用各10毫升飽和NaHCO3水溶液、水和鹽水洗滌溶液。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮?？焖賹游龅玫剿璁a(chǎn)物。
步驟2將上述產(chǎn)物溶液1毫升甲醇，密封，80℃回流16小時(shí)。減壓除去揮發(fā)物?？焖賹游龅玫剿璁a(chǎn)物。
制備B式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(3-(6-氟喹啉基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用3-溴-6-氟喹啉代替3-溴喹啉制備的。
制備C式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(3-(6-氯喹啉基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用3-溴-6-氯喹啉代替3-溴喹啉制備的。
制備D式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(4-異喹啉基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用4-溴異喹啉代替3-溴喹啉制備的。
制備E式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(3-吡啶基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用3-吡啶代替3-溴喹啉制備的。
制備F式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(3-(6-甲基喹啉基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用3-溴-6-甲基喹啉代替3-溴喹啉制備的。
制備G式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(3-(6-氨基喹啉基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用3-溴-6-氨基喹啉代替3-溴喹啉制備的。
制備H式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(3-(5-異噁唑-3-基)噻吩基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用5-(異噁唑-3-基)-2-溴噻吩代替3-溴喹啉制備的。
制備I式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(6-喹啉基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用6-溴喹啉代替3-溴喹啉制備的。
制備J式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(3-喹噁啉-6-基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用6-溴喹噁啉代替3-溴喹啉制備的。
制備K式(1)Rb＝H，Ra是-CH2-CC-(5-(N-(2-吡啶基)-2-糠酰氨基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用N-(2-吡啶基)5-溴-2-糠酰胺代替3-溴喹啉制備的。
制備AA式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(3-喹啉基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備BB式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(3-(6-氟喹啉基)這是根據(jù)制備方法B的方法，用2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備CC式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(3-(6-氯喹啉基)這是根據(jù)制備方法A的方法，用2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備DD式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(4-異喹啉基)這是根據(jù)制備方法D的方法，用2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備EE式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(3-吡啶基)這是根據(jù)制備方法E的方法，用2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備FF式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(3-(6-甲基喹啉基)這是根據(jù)制備方法F的方法，用2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備GG式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(3-(6-氨基喹啉基)這是根據(jù)制備方法G的方法，用2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備HH式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(3-(5-異噁唑-3-基)噻吩基)這是根據(jù)制備方法H的方法，用2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲酰基-6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備II式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(6-喹啉基)這是根據(jù)制備方法I的方法，用2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備JJ式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(3-喹噁啉-6-基)這是根據(jù)制備方法J的方法，用2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
制備KK式(1)Rb＝F，Ra是-CH2-CC-(5-(N-(2-吡啶基)-2-糠酰氨基)這是根據(jù)制備方法K的方法，用2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯代替2’-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯制備的。
實(shí)施例27式(1)化合物L(fēng)是CO，T是NH，Ra是-CH2-(2，2-二甲基-1，3-二氧環(huán)戊-4-基)，Rc是H步驟1將化合物(1)的3-OH形式從Ra是-CH2CH＝CH2轉(zhuǎn)換成Ra是-CH2CH(OH)CH2OH，Rc是乙酰基在實(shí)施例20，步驟4的化合物的樣品(5.0克，7.32毫摩爾，化合物(1)的3-OH，Ra是-CH2CH＝CH2，Rc是乙酰基)和N-甲基嗎啉N氧化物(1.7克，14.5毫摩爾)的THF(25毫升)溶液中，在室溫下加入OsO4(4％的水溶液，0.090毫升，0.0147毫摩爾)，攪拌混合物24小時(shí)。用亞硫酸氫鈉(1.5克)和水(10毫升)淬滅反應(yīng)，真空除去溶劑。用乙酸乙酯溶解剩余物，用飽和碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)。除去溶劑得到化合物。
步驟2將化合物(1)的3-OH形式從Ra是-CH2CH(OH)CH2OH轉(zhuǎn)化成Ra是-CH2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊烷-4-基)，Rc是乙?；趤碜圆襟E1的化合物的樣品(500毫克，0.070毫摩爾)和2，2-二甲氧基丙烷(0.26毫升，2.1毫摩爾)的甲苯(7毫升)溶液中加入對甲苯磺酸(160毫克，0.84毫摩爾)，55℃攪拌混合物3日。用乙酸乙酯稀釋混合物，用10％碳酸鈉溶液、水和鹽水洗滌該溶液。干燥(Na2SO4)有機(jī)相，除去溶劑得到粗產(chǎn)物，硅膠層析純化，用2∶97∶1甲醇/氯仿/氫氧化銨洗脫得到化合物。
步驟3將3-OH氧化成羰基，形成化合物(1)Ra是-CH2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊烷-4-基)，Rc是乙?；鶕?jù)實(shí)施例16，步驟2的方法，用N-氯琥珀酰亞胺和二甲硫醚氧化步驟2的化合物的樣品(356毫克，0.47毫摩爾)，得到化合物。
步驟4去保護(hù)形成式(1)的化合物L(fēng)是CO，T是NH，Ra是-CH2(2，2-二甲基-1，3-二氧戊烷-4-基)，Rc是H。
在室溫下，在甲醇(4毫升)中攪拌步驟3的化合物的樣品(100毫克，0.13毫摩爾)過夜。除去溶劑，硅膠層析純化剩余物，用0.9∶98∶1甲醇/氯仿/氫氧化銨洗脫，得到化合物。
可選擇步驟將化合物(1)中的Ra從-CH2-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊烷-4-基)轉(zhuǎn)化成-CH2CH(OH)CH2OH回流攪拌步驟4的化合物樣品(100毫克，0.13毫摩爾)和對甲苯磺酸(35毫克，0.18毫摩爾)的4∶1THF/水(2.5毫升)3小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋混合物，將該溶液用10％碳酸鈉溶液、水和鹽水洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)相，除去溶劑得到粗產(chǎn)物，在硅膠上純化，用2∶97∶1甲醇/氯仿/氫氧化銨洗脫得到化合物。
實(shí)施例28在11，12環(huán)形成前氟化C2位2′-O-苯甲?；?6-O-炔丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-10，11-脫氧-2-氟-15-甲基紅霉素A的合成在惰性氣氛下，將2′-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-10，11-脫水-15-甲基-紅霉素A的四氫呋喃溶液冷卻到-78℃，用1.0M叔丁醇鉀的四氫呋喃溶液處理。攪拌混合物5分鐘，分3部經(jīng)2小時(shí)加入N-氟苯磺酰亞胺的四氫呋喃溶液。加完后，將反應(yīng)物溫至環(huán)境溫度，放置5小時(shí)。加入K2CO3水溶液，用CH2Cl2抽提。合并有機(jī)抽提物，用MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)。硅膠層析得到產(chǎn)物。
實(shí)施例29在11，12環(huán)形成后氟化C2位2′-O-苯甲?；?6-O-烯丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-氨基-2-氟-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯的合成在-78℃，在2′-O-苯甲酰基-6-O-炔丙基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-15-甲基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯(100毫克，0.132毫摩爾，1.0當(dāng)量)的THF溶液(0.5毫升)中加入叔丁醇鉀的THF溶液(0.3毫升，1M，2.3當(dāng)量)。然后將反應(yīng)混合物在-60℃到-40℃，，然后在-78℃N-氟苯磺酰亞胺(46毫克，0.146毫摩爾，1.1當(dāng)量)的THF(0.2毫升)溶液中維持20分鐘。將反應(yīng)混合物維持在-70℃到-40℃1小時(shí)，然后在1.5小時(shí)內(nèi)從-70℃溫至0℃。然后用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3水溶液、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮?？焖賹游龃旨和椤帽?1％Et3N)得到76毫克(74％)所需產(chǎn)物。13C-NMR(100.6 MHz，CDCl3)δ217.5，203(d，J＝27.6Hz)，165.5(d，J＝23.8Hz)，165.2，157.5，135.4，132.9，130.4，129.8，128.3，118.0，101.7，98(d，J＝207 Hz)，83.5，79.1，78.6，72.1，69.4，64.6，63.5，57.5，44.2，40.7，40.4，38.5，37.3，31.4，31.3，24.9(d，J＝24.3Hz)，21.0，20.7，19.4，17.7，15.0，13.9，13.7，13.3。
實(shí)施例30C-13位的衍生起始物質(zhì)15-酰氨基紅霉素A二乙酸鹽 用乙酸(2.0毫升)和10％鈀碳(0.1克)處理15-疊氮基紅霉素A(7.75克，10毫摩爾)的50毫升甲醇溶液，在1個(gè)大氣壓的氫氣下攪拌，直到薄層層析分析揭示起始物質(zhì)完全還原。將懸液濾過硅藻土，除去催化劑，然后蒸發(fā)至干得到產(chǎn)物，它用作下列衍生的起始物質(zhì)。
A.15-(喹啉-4-基乙酰氨基)紅霉素A的合成 依次用喹啉-4-基乙酰氯(350毫克)和三乙胺(0.5毫升)在0℃處理15-酰氨基紅霉素A二乙酸鹽(1.0克)的10毫升二氯甲烷溶液。3小時(shí)后，用二氯甲烷稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3水溶液洗滌三次。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物。硅膠層析純化得到純產(chǎn)物。
B.15-(3-(喹啉-4-基)丙酰氨基)紅霉素A的合成 依次用3-(喹啉-4-基)丙酰氯(400毫克)和三乙胺(0.5毫升)在0℃處理15-酰氨基紅霉素A二乙酸鹽(1.0克)的10毫升二氯甲烷溶液。3小時(shí)后，用二氯甲烷稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3水溶液洗滌三次。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物。硅膠層析純化得到純產(chǎn)物。
C.15-(異喹啉-4-基乙酰氨基)紅霉素A的合成 依次用異喹啉-4-基乙酰氯(350毫克)和三乙胺(0.5毫升)在0℃處理15-酰氨基紅霉素A二乙酸鹽(1.0克)的10毫升二氯甲烷溶液。3小時(shí)后，用二氯甲烷稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3水溶液洗滌三次。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物。硅膠層析純化得到純產(chǎn)物。
D.15-(3-(異喹啉-4-基)丙酰氨基)紅霉素A的合成 依次用3-(異喹啉-4-基)丙酰氯(400毫克)和三乙胺(0.5毫升)在0℃處理15-酰氨基紅霉素A二乙酸鹽(1.0克)的10毫升二氯甲烷溶液。3小時(shí)后，用二氯甲烷稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3水溶液洗滌三次。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物。硅膠層析純化得到純產(chǎn)物。
E.15-((喹啉-5-基氨基)乙酰氨基)紅霉素A的合成 依次用(喹啉-5-基氨基)乙酸(0.30克)、二環(huán)己基碳二亞胺(0.4克)、1-羥基苯并三唑(0.25克)和三乙胺(0.5毫升)在0℃處理15-酰氨基紅霉素A二乙酸鹽(1.0克)的10毫升二氯甲烷溶液。3小時(shí)后，用二氯甲烷稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3水溶液洗滌三次。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物。硅膠層析純化得到純產(chǎn)物。
F.15-((喹啉-6-基氨基)乙酰氨基)紅霉素A的合成 依次用(喹啉-6-基氨基)乙酸(0.30克)、二環(huán)己基碳二亞胺(0.4克)、1-羥基苯并三唑(0.25克)和三乙胺(0.5毫升)在0℃處理15-酰氨基紅霉素A二乙酸鹽(1.0克)的10毫升二氯甲烷溶液。3小時(shí)后，用二氯甲烷稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3水溶液洗滌三次。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物。硅膠層析純化得到純產(chǎn)物。
G.15-((喹啉-4-基甲基)氨基甲酰氨基)紅霉素A的合成 依次用喹啉-4-甲氧基羰基氯(400毫克)和三乙胺(0.5毫升)在0℃處理15-酰氨基紅霉素A二乙酸鹽(1.0克)的10毫升二氯甲烷溶液。3小時(shí)后，用二氯甲烷稀釋反應(yīng)物，用飽和NaHCO3水溶液洗滌三次。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物。硅膠層析純化得到純產(chǎn)物。
實(shí)施例316-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-15-(3-(喹啉-4-基)丙酰氨基)紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯 根據(jù)實(shí)施例30所述的方法，用15-(3-喹啉-4-基)丙酰氨基)紅霉素A制備。
實(shí)施例326-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-2-氟-15-(3-(喹啉-4-基)丙酰氨基)紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯 步驟1.在2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-15-(3-(喹啉-4-基)丙酰氨基)紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯的THF溶液中在-78℃加入叔丁醇鉀(2.3當(dāng)量)的THF溶液。然后將反應(yīng)混合物置于-60℃到-40℃20分鐘，然后在-78℃加入N-氟苯磺酰亞胺(1.1當(dāng)量)的THF(0.2毫升)溶液。將反應(yīng)混合物置于-70℃到-40℃1小時(shí)，然后在1.5小時(shí)內(nèi)從-70℃溫至0℃。然后用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮。快速層析得到作為2’-O-苯甲酸酯的所需產(chǎn)物。
步驟2.將步驟1的產(chǎn)物溶于1毫升甲醇，密封，80℃回流16小時(shí)。減壓除去揮發(fā)物?？焖賹游龅玫剿璁a(chǎn)物。
實(shí)施例332’-O-苯甲?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-15-乙烯基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯 根據(jù)上述方法，從15-乙烯基紅霉素A制備。
實(shí)施例346-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-15-乙烯基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯 將來自實(shí)施例33的2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-15-乙烯基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯溶于1毫升甲醇，密封，80℃回流16小時(shí)。減壓除去揮發(fā)物。快速層析得到所需產(chǎn)物。
實(shí)施例356-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-2-氟-15-乙烯基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯 步驟1.在2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-15-乙烯基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯的THF溶液中加入-78℃的叔丁醇鉀(2.3當(dāng)量)的THF溶液。然后將反應(yīng)混合物置于-60℃到-40℃20分鐘，然后在-78℃加入N-氟苯磺酰亞胺(1.1當(dāng)量)的THF(0.2毫升)。將反應(yīng)混合物保持在-70℃到-40℃1小時(shí)，然后在1.5小時(shí)內(nèi)從-70℃溫至0℃。然后用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮?？焖賹游龅玫阶鳛?’-O-苯甲酸酯的產(chǎn)物。
步驟2.將步驟1的產(chǎn)物溶于1毫升甲醇，密封，80℃回流16小時(shí)。減壓除去揮發(fā)物?？焖賹游龅玫剿璁a(chǎn)物。
實(shí)施例366-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-15-(2-(3-喹啉基)乙烯基)紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯 步驟1.將2’-O-苯甲酰基-6-O-甲基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-15-乙烯基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯(40毫克)，三(二亞芐基丙酮)合二鈀(O)-加合物(14毫克)，三-鄰甲苯膦(17毫克)和3-溴喹啉(72微升)置于圓底燒瓶中，用N2沖洗。加入脫氣的乙腈(1毫升)和新鮮蒸餾的Et3N(0.015毫升)。回流反應(yīng)物63小時(shí)。混合物回到環(huán)境溫度，用40毫升EtOAc稀釋。依次各用10毫升飽和NaHCO3水溶液、水和鹽水洗滌溶液。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮?？焖賹游龃之a(chǎn)物得到所需產(chǎn)物。
步驟2將步驟1的產(chǎn)物溶于1毫升甲醇，密封并在80℃回流16小時(shí)。減壓除去揮發(fā)物?？焖賹游龅玫剿璁a(chǎn)物。
實(shí)施例376-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-2-氟-15-(2-(3-喹啉基)乙烯基)紅霉素A 11，12-環(huán)氨基甲酸酯 步驟1將2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-乙烯基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯(40毫克)、三(二亞芐基丙酮)合二鈀(O)-氯仿加合物(14毫克)、三-鄰甲苯膦(17毫克)和3-溴喹啉(72微升)置于圓底燒瓶中，用N2吹掃。加入脫氣乙腈(1毫升)和新鮮蒸餾的Et3N(0.015毫升)?；亓鞣磻?yīng)63小時(shí)。反應(yīng)物回到環(huán)境溫度，用40毫升EtOAc稀釋。連續(xù)用各10毫升NaHCO3水溶液、水和鹽水洗滌溶液。用MgSO4干燥有機(jī)相，過濾并濃縮?？焖賹游龃之a(chǎn)物得到所需產(chǎn)物。
步驟2.將步驟1的產(chǎn)物溶于1毫升甲醇，密封，80℃回流16小時(shí)。減壓除去揮發(fā)物?？焖賹游龅玫剿璁a(chǎn)物。
實(shí)施例386-O-甲基-3-去克拉定糖基-3-氧代-11-脫氧-11-氨基-2-氟-15-(2-(3-喹啉基甲基)乙烯基)紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯 步驟1在回流的苯中加熱2’-O-苯甲?；?6-O-甲基-11-氨基-3-去克拉定糖基-11-脫氧-3-氧代-2-氟-15-乙烯基紅霉素A11，12-環(huán)氨基甲酸酯、3-烯丙基喹啉、和氯化二(三苯膦)亞芐基合銠8小時(shí)。反應(yīng)物回到環(huán)境溫度，用40毫升EtOAc稀釋。連續(xù)用各10毫升飽和的NaHCO3水溶液、水和鹽水洗滌溶液。用MgSO4干燥有機(jī)相?？焖賹游龃之a(chǎn)物得到所需產(chǎn)物。
步驟2將步驟1的產(chǎn)物溶于1毫升甲醇，密封并80℃回流16小時(shí)。減壓除去揮發(fā)物?？焖賹游龅玫剿璁a(chǎn)物。
權(quán)利要求
1.一種化合物，其特征在于，該化合物具有式 其中Ra是H；取代或未取代的烷基(1-10C)；取代或未取代的鏈烯基(2-10C)；取代或未取代的炔基(2-10C)；取代或未取代的芳基(4-14C)；取代或未取代的芳烷基(5-20C)；或ORa被H替換；Rb是H或鹵素；Rc是H或保護(hù)基團(tuán)；Rd是甲基；未取代的烷基(3-10C)；取代的烷基(1-10C)；取代或未取代的鏈烯基(2-10C)；取代或未取代的芳基(4-14C)；取代或未取代的芳烷基(5-20C)；取代或未取代的芳基鏈烯基(5-20C)；取代或未取代的芳基炔基(5-20C)；取代或未取代的酰氨基芳烷基(5-20C)；取代或未取代的酰氨基芳基鏈烯基(5-20C)；或取代或未取代的酰氨基芳基炔基(5-20C)；Re是H或保護(hù)基團(tuán)；L是亞甲基或羰基；T是-O-、-N(OR)-、-N(NHCOR)-、-N(N＝CHR)-、或-N(NHR)-，其中R是H或如上定義的Ra，條件是當(dāng)L是亞甲基時(shí)，T是-O-；Z和Y之一是H，另一個(gè)是OH或保護(hù)的OH，或氨基，單-或二烷基氨基，保護(hù)的氨基，或氨基雜環(huán)或Z和Y合起來是＝O、＝NOH或衍生的肟；包括任何其藥物學(xué)上可接受的鹽和任何立體異構(gòu)形式，及其立體異構(gòu)形式的混合物。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Rd是甲基、丙基或乙烯基。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Ra是芳基鏈烯基或芳基炔基。
4.如權(quán)利要求3所述的化合物，其特征在于，Ra是3-芳基丙-2-烯基或3-芳基丙-2-炔基。
5.如權(quán)利要求4所述的化合物，其特征在于，所述芳基是3-喹啉基、4-喹啉基或5-喹啉基、苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-甲氧基苯基、6-喹啉基、6-喹噁啉基、6-氨基-3-喹啉基或4-異喹啉基。
6.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Ra是H或低級C1-C3烷基。
7.如權(quán)利要求6所述的化合物，其特征在于，Ra是甲基。
8.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Rb是氟。
9.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Rd是可用于衍生化的取代基。
10.如權(quán)利要求9所述的化合物，其特征在于，Rd是鏈烯基、炔基或含疊氮基的取代基。
11.如權(quán)利要求10所述的化合物，其特征在于，Rd是乙烯基、丁烯基、炔丙基或疊氮基烷基。
12.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，Rd是衍生化的取代基。
13.如權(quán)利要求12所述的化合物，其特征在于，Rd是鏈烯基、炔基或含疊氮基的取代基的衍生物。
14.如權(quán)利要求13所述的化合物，其特征在于，Rd是乙烯基、丁烯基、炔丙基或疊氮基烷基的衍生物。
15.如權(quán)利要求12所述的化合物，其特征在于，Rd是取代或未取代的的酰氨基芳烷基、酰氨基芳基鏈烯基、酰氨基芳基炔基或芳烷基。
16.一種藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物含有權(quán)利要求1所述的化合物和藥物學(xué)上可接受的賦形劑。
17.一種控制對象體內(nèi)感染的方法，其特征在于，該方法包括施給需要所述控制的對象有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其藥物組合物。
18.一種保存物質(zhì)免受微生物腐敗的方法，其特征在于，該方法包括對所述物質(zhì)提供有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
全文摘要
式(1)、(2)或(3)的化合物或其10,11－脫水形式,其中R
文檔編號A61P31/04GK1384838SQ00809071
公開日2002年12月11日 申請日期2000年4月14日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月16日
發(fā)明者D·T·W·褚, G·W·阿什利 申請人:高山生物科學(xué)股份有限公司