專利名稱：純化大環(huán)內酯類化合物的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及通過使用吸附樹脂的分離方法純化大環(huán)內酯類化合物尤其是他克莫司、子囊霉素、西羅莫司、依維莫司或吡美莫司的方法。
相關申請本申請要求2003年7月24日提交的美國臨時申請順序號60/490,070和2004年1月26日提交的美國臨時申請順序號60/539,363的權益，這些申請的所有內容通過引用結合到本文中。
背景技術：
大環(huán)內酯類化合物為具有一種或多種脫氧糖作為取代基的多元內酯環(huán)化合物。紅霉素、阿奇霉素和克拉霉素為有抑菌和/或殺菌活性的大環(huán)內酯類化合物。
他克莫司(FK 506)也為大環(huán)內酯抗生素，也為免疫抑制劑。他克莫司比環(huán)孢菌素更有效，據(jù)報道它對T-淋巴細胞有選擇性抑制作用。
吡美莫司為大環(huán)內酰胺并為子囊霉素衍生物，據(jù)報道它抑制T細胞和肥大細胞生成促炎細胞因子。默克索引(The Merck Index)1331(Maryadele J.O′Neil等編輯，第13版，2001)。據(jù)報道吡美莫司用作免疫抑制劑。同上。
另一種大環(huán)內酯類化合物西羅莫司據(jù)報道為免疫抑制劑。在移植后給予西羅莫司與環(huán)孢菌素和皮質類固醇以避免移植排斥。Martindale(馬丁代爾藥典)The Complete Drug Reference 568(Sean C.Sweetman編輯，Pharmaceutical Press 33版，2002)。
依維莫司為西羅莫司衍生物，據(jù)報道為用于器官移植的免疫抑制劑。馬丁代爾藥典，539。
盡管已知一些合成路線，但大環(huán)內酯類化合物一般經(jīng)發(fā)酵獲得。所得大環(huán)內酯類化合物一般包含幾種雜質，這些雜質可用各種方法檢測，如高效液相色譜法(HPLC)。藥用化合物中存在雜質是不合需要的，許多管轄機構(如美國的食品藥品管理局)的衛(wèi)生當局已制定關于藥物中雜質可接受水平的準則。不言而喻，任何藥物需要降低雜質水平的商業(yè)實用方法。
發(fā)明概述在一方面，本發(fā)明涉及一種從大環(huán)內酯尤其是他克莫司、子囊霉素、西羅莫司(雷帕霉素)、依維莫司和吡美莫司中分離雜質(即降低其中的雜質水平)的方法。該方法包括以下步驟制備大環(huán)內酯裝料(loading charge)；將裝料裝到濕吸附樹脂床上；用洗脫劑洗脫樹脂床，該洗脫劑包含THF或乙腈、水和任選的其他有機溶劑；收集洗脫液的主要組分(中心組分)，從主要組分中分離雜質減少的大環(huán)內酯。
在另一方面，本發(fā)明涉及通過上述方法制備的大環(huán)內酯類化合物，尤其是他克莫司、子囊霉素、西羅莫司(雷帕霉素)、依維莫司和吡美莫司。
發(fā)明詳述本文使用的術語環(huán)境溫度指約0℃至約40℃的溫度，優(yōu)選約10℃至約35℃。
本文使用的術語減壓指壓力小于約760mm Hg。
本文使用的術語反溶劑指在環(huán)境溫度下通常為液體，大環(huán)內酯在其中最多有少量溶解的物質。
本文使用的術語“雜質”涉及保留時間不同于所需大環(huán)內酯的任何化合物。例如可通過下文描述的HPLC方法測量不同的保留時間。
本文使用的術語RRT 0.95和RRT 1.25分別指在HPLC分析中，子囊霉素和二氫他克莫司(它們?yōu)樗四镜碾s質)的相對保留時間(相對于他克莫司)為約0.95和1.25，如下文所描述。
本文使用的與混合物或液體組合有關的術語體積百分比或％體積指體積分數(shù)，用下式計算(以A類物質為例)％體積A＝WtA×ρA/(WtA×ρA+WtB×ρB)其中WtA和WtB分別為A和B類物質的重量(克)，且ρA和ρB分別為A和B類物質的密度(g/ml)。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種分離大環(huán)內酯類化合物中雜質(即降低其中雜質水平)的層析方法。通過將大環(huán)內酯裝到吸附樹脂床上并用洗脫劑洗脫實現(xiàn)分離(降低雜質)，該洗脫劑包含THF或乙腈、水和任選的其他有機溶劑。實施本發(fā)明優(yōu)選的大環(huán)內酯類化合物包括他克莫司、子囊霉素、西羅莫司、依維莫司和吡美莫司。當他克莫司為大環(huán)內酯時，減少的雜質至少包括子囊霉素和二氫他克莫司，用下文描述的HPLC定量。當子囊霉素為大環(huán)內酯時，減少的雜質至少包括他克莫司。使用的大環(huán)內酯可來自任何來源。
在實施本發(fā)明中，用洗脫劑洗脫負載大環(huán)內酯裝料的吸附樹脂床，得到洗脫液，從而實現(xiàn)減少(分離)雜質。本領域熟知用于實施本發(fā)明的吸附樹脂，且優(yōu)選交聯(lián)、非離子苯乙烯-二乙烯基苯材料，但可進行化學修飾。也已知丙烯酸型吸附樹脂。吸附樹脂有大量孔結構，其表面可吸附-然后解吸-各種化學物質。吸附和解吸受環(huán)境如所用溶劑的影響。在極性溶劑(如水)的存在下，吸附樹脂表現(xiàn)為疏水行為。當使用非極性溶劑(如烴)時，吸附樹脂可表現(xiàn)一些極性行為。一般吸附樹脂有大網(wǎng)絡結構，并有至少約300m2/g的表面面積。
用于實施本發(fā)明的吸附樹脂包括得自Rohm和Haas的AmberliteXAD樹脂(多孔性芳族聚合物微球樹脂)；XAD 4、XAD 7HP、XAD 16HP、XAD 761和XAD 1180，在此僅提及一些。也有用的有得自Mitsubishi(三菱)的Diaion吸附樹脂；HP10、HP 20、HP 21、HP 30、HP 40、HP 50、SP 800、SP 825、SP 850、SP 875、SP 205、SP 206、SP 207、HP1MG和HP2MG，在此僅提及一些。用于實施本發(fā)明的優(yōu)選吸附樹脂的實例為AmberliteXAD 1180。Amberlite XAD 1180為大網(wǎng)絡交聯(lián)芳族聚合物，它為非離子型疏水性交聯(lián)聚合物，其吸附性能源自它專利的大網(wǎng)絡結構(包含連續(xù)聚合物相和連續(xù)孔相)、高表面面積和其表面的芳族性質。表面面積為500m2/g或更高?？紫堵蕿?.60ml/ml或更高。PDS 0205A-Jan.98-1/2的產(chǎn)品數(shù)據(jù)一覽表給出該樹脂的其他信息。
在本發(fā)明方法的第一步中，將大環(huán)內酯的裝料裝到吸附樹脂床上。裝料可以大環(huán)內酯的有機溶劑溶液提供，所用有機溶劑混有反溶劑。
或者，在裝到吸附樹脂床前，將大環(huán)內酯裝料吸附(沉積)至吸附樹脂的負荷部分(loading portion)。將大環(huán)內酯的任選含水有機溶劑溶液與部分吸附樹脂和反溶劑混合。該吸附樹脂可與用于制備床的樹脂相同，或可為不同吸附樹脂。吸附樹脂的負荷部分可為床體積的約33％至約50％。然后將負荷部分并置在濕吸附樹脂床以提供負載裝料的床。
優(yōu)選用于制備溶液(裝料通過其裝載或沉積)的有機溶劑選自四氫呋喃(THF)、丙酮乙腈(ACN)、甲醇、乙醇、正丁醇、正丙醇、異丙醇、酯(如乙酸乙酯)和偶極非質子溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)。最優(yōu)選有機溶劑為THF、丙酮或CAN。當大環(huán)內酯為他克莫司時，THF和ACN為優(yōu)選溶劑。優(yōu)選反溶劑為水或直鏈或支鏈烷烴或環(huán)烷烴，如己烷、庚烷或環(huán)己烷。加入反溶劑降低大環(huán)內酯在溶液中的溶解度，并且被認為促進樣品吸附至吸附樹脂的負荷部分。緩緩加入反溶劑以避免大的濃度梯度，該梯度可導致大環(huán)內酯部分大量沉淀，這可導致淤塞和堵塞。優(yōu)選溶劑反溶劑比為40％或更小。
可以在配有攪拌器的任何便利容器(如攪拌釜反應器)中混合大環(huán)內酯溶液、吸附樹脂的負荷部分和反溶劑。
在一個具體實施方案中，吸附樹脂的負荷部分包含在柱中，并與在再循環(huán)系統(tǒng)中流經(jīng)柱的大環(huán)內酯溶液接觸。逐漸將反溶劑引入流經(jīng)和環(huán)繞吸附樹脂負荷部分的溶液流，由此大環(huán)內酯樣品逐漸被吸附至吸附樹脂的負荷部分上。
作為實例，當大環(huán)內酯為他克莫司時，溶液可為約100g/L，且反溶劑體積可為溶液體積的至少約五倍。吸附樹脂負荷部分的總體積可約等于溶液體積。熟練技術人員會知道通過常規(guī)試驗優(yōu)化比例，以獲得大環(huán)內酯吸附至吸附樹脂的負荷部分上。
可通過檢測留在溶液中的大環(huán)內酯濃度監(jiān)控吸附，基本上完全吸附后，將裝料從剩余溶液中分離。分離可經(jīng)過濾完成。當使用再循環(huán)柱方法制備裝料時，將柱從再循環(huán)系統(tǒng)中簡單分離。
在該實施方案的下一步中，將已裝載大環(huán)內酯的負荷部分并置到制備好的濕吸附樹脂床。將該床置于合適容器中。優(yōu)選將床置于柱中，優(yōu)選循環(huán)截面。為了制備床，將需要量的吸附樹脂用水或水和溶劑(如THF或ACN)的混合物調成漿。當床直徑較大時，最好采用水-溶劑組合。然后將漿料轉移至所需容器中，優(yōu)選圓柱例如用于柱層析。除去水(或水-溶劑組合)，剩下濕吸附樹脂床。熟練技術人員和常規(guī)類似人員熟知層析柱的制備和裝柱實踐，且這些熟知的實踐容易適用于本發(fā)明的實施。
負荷部分可簡單地以層形式并置于濕吸附樹脂床上。當在再循環(huán)系統(tǒng)中制備裝料時，可通過建立的流體流通的任何方式將含裝料的容器連接至含有濕吸附樹脂床的容器。
大環(huán)內酯(如他克莫司、子囊霉素、西羅莫司、依維莫司或吡美莫司)和雜質的分離可降低大環(huán)內酯中的雜質水平，該分離通過以下方法實現(xiàn)讓洗脫劑流經(jīng)裝料，隨后流經(jīng)與之并置的吸附樹脂床，并隨之進入流體流通中。
洗脫劑包括水和有機溶劑如THF或ACN。尤其當他克莫司為大環(huán)內酯時，優(yōu)選的洗脫劑基本上為THF和水混合物，有約20％體積至約50％體積THF，最優(yōu)選有約31％體積至約40％體積THF。當有機溶劑如甲醇、乙腈、丙酮或正丁醇與THF-水洗脫劑一起使用時，THF含量小于38％體積，優(yōu)選約4％至約38％體積之間。另一種優(yōu)選洗脫劑為乙腈和水混合物，有約30％體積至約70％體積乙腈，最優(yōu)選約40％體積至約65％體積乙腈。當洗脫劑為乙腈和水的混合物時，1份洗脫劑也可包含約0.0005至約0.003份無機酸。優(yōu)選無機酸為磷酸。
洗脫劑洗脫通過負荷部分和與之并置的吸附樹脂床，其速度取決于床的總截面積(按垂直于洗脫劑流測量)。優(yōu)選流速(相對于截面積)小于約25cm/h，優(yōu)選小于約15cm/h。低洗脫速度延長時間，但提高分離效率。用于提高分離效率的優(yōu)選洗脫速度為約90mL/小時。
以一個或多個組分收集從吸附樹脂床流出的洗脫劑(即洗脫液)，如技術人員使用分離方法如層析一樣常見，這取決于在固定相(如固定床)上優(yōu)先保留的化學物質?？上蛳疵撘褐屑尤霟o機酸如磷酸。
用一定量洗脫劑洗脫床后，優(yōu)選將該床置于與第二個床的流體通路中，以便第一個床的洗脫液洗脫通過第二個床。洗脫第一個和第二個床后，第二個床可以并優(yōu)選與第一個床分離(即中斷流體流通)，洗脫通過單獨的第二個床繼續(xù)。洗脫劑為THF和水混合物，有約33％體積至35％體積THF，且優(yōu)選的洗脫劑任選其他柱可連接至該系統(tǒng)。
組分的濃度和成分可由任何便利的方法檢測。大環(huán)內酯中雜質，尤其是他克莫司中的子囊霉素和二氫他克莫司可用下文描述的HPLC方法進行檢測和定量。
此外，根據(jù)柱負荷和洗脫劑組成及流速，收集洗脫液主組分(中心組分)，以溶液中最初存在的大環(huán)內酯計，該主組分包含大于約60％重量，優(yōu)選在約60％重量至約90％重量之間。當他克莫司為大環(huán)內酯且THF-水(31-40％體積THF)為洗脫劑時，收集主組分，最后分離的產(chǎn)品有約0.1％面積或更少(由下面描述的HPLC測定)的雜質RRT 0.95。
如果需要，通過任何常規(guī)方法(如萃取、冷凍干燥、蒸發(fā)、加反溶劑)，大環(huán)內酯可分離雜質并因此具有從洗脫液中分離的低水平雜質。水、烷烴和環(huán)烷烴可作為有用的反溶劑提及。分離方法可組合使用。例如反溶劑可與濃洗脫劑組合。
優(yōu)選的分離方法包括于70℃或更低溫度，優(yōu)選在60℃或更低溫度，優(yōu)選在760mm Hg壓力下濃縮主組分至其初始體積的約50％，從而得到結晶產(chǎn)物。濃縮前，優(yōu)選每升洗脫劑中加入約1至約10mL酸以穩(wěn)定大環(huán)內酯。
濃縮的主組分任選于環(huán)境溫度維持一段保持時間。當采用保持時間時，優(yōu)選保持時間為約1-4天。通過任何常規(guī)方法如過濾(重力或真空)回收雜質減少的大環(huán)內酯結晶。
根據(jù)本發(fā)明方法，通過將回收的產(chǎn)物經(jīng)歷幾種其他處理可獲得進一步減少雜質。
由本發(fā)明方法完成的大環(huán)內酯中雜質的減少可用下文描述的HPLC方法監(jiān)控。
在另一個實施方案中，大環(huán)內酯為他克莫司，且至少降低雜質子囊霉素和二氫他克莫司的水平。其他雜質的水平也降低。該方法包括下列步驟制備他克莫司的裝料，該裝料包含他克莫司溶液和或無吸附樹脂的負荷部分，尤其是大網(wǎng)絡樹脂如AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20；將裝料裝到濕吸附樹脂上，尤其是AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20，吸附樹脂可包含在容器尤其是柱中；用洗脫劑洗脫負荷部分和吸附樹脂，該洗脫劑為四氫呋喃(THF)和水的混合物，約20％體積至約50％體積THF，尤其為約31％體積至約40％體積THF，或為乙腈(ACN)和水的混合物，約30％體積至約70％體積乙腈，且最特別是約40％體積至約65％體積乙腈；至少收集洗脫液的主組分(中心組分)，該組分包含大于約60％、優(yōu)選在約60％至約90％之間的初始他克莫司(取決于初始純度)；任選通過例如濃縮主組分從主組分中分離雜質減少的他克莫司，如在酸存在下減壓濃縮，并任選回收所得產(chǎn)物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供根據(jù)上述方法制備的他克莫司。
在還另一個實施方案中，大環(huán)內酯為子囊霉素，且至少降低雜質他克莫司的水平。其他雜質水平也降低。該方法包括下列步驟制備子囊霉素的裝料，該裝料包含子囊霉素溶液和或無吸附樹脂的負荷部分，尤其是大網(wǎng)絡樹脂如AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20；將裝料裝到濕吸附樹脂尤其是AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20上，吸附樹脂可包含在容器尤其是柱中；用洗脫劑洗脫負荷部分和吸附樹脂，該洗脫劑為四氫呋喃(THF)和水的混合物，約20％體積至約50％體積THF，尤其為約31％體積至約40％體積THF，或為乙腈(ACN)和水的混合物，約30％體積至約70％體積乙腈且最特別是約40％體積至約65％體積乙腈；至少收集洗脫液的主組分(中心組分)，該組分包含大于約60％、優(yōu)選在約60％至約90％之間的初始子囊霉素(取決于初始的純度)；任選通過例如濃縮主組分從主組分中分離雜質減少的子囊霉素，例如在酸存在下減壓濃縮，并任選回收所得產(chǎn)物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供根據(jù)上述方法制備的子囊霉素。
在還另一個實施方案中，大環(huán)內酯為西羅莫司。從西羅莫司分離雜質的方法包括下列步驟制備西羅莫司的裝料，該裝料包含西羅莫司溶液和或無吸附樹脂的負荷部分，尤其是大網(wǎng)絡樹脂如AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20；將裝料裝到濕吸附樹脂尤其是AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20上，吸附樹脂可包含在容器尤其是柱中；用洗脫劑洗脫負荷部分和吸附樹脂，該洗脫劑為四氫呋喃(THF)和水的混合物，約20％體積至約50％體積THF，尤其為約31％體積至約40％體積THF，或為乙腈(ACN)和水的混合物，約30％體積至約70％體積乙腈且最特別是約40％體積至約65％體積乙腈；至少收集洗脫液的主組分(中心組分)，該組分包含大于約60％、優(yōu)選在約60％至約90％之間的初始西羅莫司(取決于初始的純度)；任選通過例如濃縮主組分從主組分中分離雜質減少的西羅莫司，如在酸的存在下減壓濃縮，并任選回收所得產(chǎn)物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供根據(jù)上述方法制備的西羅莫司。
在還另一個實施方案中，大環(huán)內酯為依維莫司。從依維莫司分離雜質的方法包括下列步驟制備依維莫司的裝料，該裝料包含依維莫司溶液和或無吸附樹脂的負荷部分，尤其是大網(wǎng)絡樹脂如AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20；將裝料裝到濕吸附樹脂尤其是AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20上，吸附樹脂可包含在容器尤其是柱中；用洗脫劑洗脫負荷部分和吸附樹脂，該洗脫劑為四氫呋喃(THF)和水的混合物，約20％體積至約50％體積THF，尤其為約31％體積至約40％體積THF，或為乙腈(ACN)和水的混合物，約30％體積至約70％體積乙腈且最特別是約40％體積至約65％體積乙腈；至少收集洗脫液的主組分(中心組分)，該組分包含大于約60％、優(yōu)選在約60％至約90％之間的初始依維莫司(取決于初始的純度)；任選通過例如濃縮主組分從主組分中分離雜質減少的依維莫司，如在酸存在下減壓濃縮，并任選回收所得產(chǎn)物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供根據(jù)上述方法制備的依維莫司。
在還另一個實施方案中，大環(huán)內酯為吡美莫司。從吡美莫司分離雜質的方法包括下列步驟制備吡美莫司的裝料，該裝料包含吡美莫司溶液和或無吸附樹脂的負荷部分，尤其是大網(wǎng)絡樹脂如AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20；將裝料裝到濕吸附樹脂尤其是AmberliteXAD 1180和Diaion HP 20上，吸附樹脂可存在于容器尤其是柱中；用洗脫劑洗脫負荷部分和吸附樹脂，該洗脫劑為四氫呋喃(THF)和水的混合物，約20％體積至約50％體積THF，尤其為約31％體積至約40％體積THF，或為乙腈(ACN)和水的混合物，約30％體積至約70％體積乙腈且最特別是約40％體積至約65％體積乙腈；至少收集洗脫液的主組分(中心組分)，該組分包含大于約60％、優(yōu)選在約60％至約90％之間的初始吡美莫司(取決于初始的純度)；任選通過例如濃縮主組分從主組分中分離雜質減少的吡美莫司，如在酸的存在下減壓濃縮，并任選回收所得產(chǎn)物。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供根據(jù)上述方法制備的吡美莫司。
色譜條件柱ZORBAX SB-C18 75×4.6mm；3.5μm預柱SymmetryShield RP183.9×20mm；5μm洗脫劑A量取200ml乙腈置于2000mL容量瓶中，然后用蒸餾水稀釋至2000mL總體積，然后加入100μ150％乙酸。
B向2000ml乙腈加入100μl 50％乙酸。
梯度表
流速2.3ml/min檢測波長210nm注射體積20μl樣品溶劑乙腈柱溫60℃分析時間27min他克莫司的保留時間約14min雜質子囊霉素(RRT 0.95)和二氫他克莫司(RRT 1.25)的保留時間相對于他克莫司，并以相對于色譜圖中所有峰面積的面積百分比表示。
雜質他克莫司的保留時間(RRT 1.00)相對于子囊霉素，并以相對于色譜圖中所有峰面積的面積百分比表示。
本發(fā)明方法可用下列非限定性實施例舉例說明。
實施例1面積百分比指用上文所述方法所得的HPLC色譜圖的面積百分比。
以下方法于28℃-32℃進行。
柱(45cm直徑)中制備吸附樹脂(AmberliteXAD 1180)床用水THF裝柱(約100L濕吸附樹脂)。
一邊攪拌一邊將水(86L)緩緩加至他克莫司(1227g)的乙腈(10L)溶液中，其中吸附樹脂(AmberliteXAD 1180；9L)攪拌下懸浮。使用的他克莫司包含約2.6％面積、RRT 0.95和約2.9％面積、RRT 1.25。當加完水后，過濾，收集吸附樹脂裝料。
將收集的裝料以層形式裝到(并置)濕吸附樹脂床頂部。
首先用由THF/水(33％體積THF)組成的約1800L第一洗脫劑洗脫柱。然后用由THF/水(40％體積THF)組成的第二洗脫劑洗脫柱。洗脫速度為約11-13L/hr(6.9-8.2cm/hr)。收集含約820g他克莫司(67％產(chǎn)率)的主組分約460L。也收集含約190g他克莫司的前組分約80L。
將主組分(460L)與85％磷酸(460mL)混合并減壓濃縮至約230L體積。濃縮液于環(huán)境溫度下保持一天。(注意，在接下來的實驗中嘗試更長的保持時間。所得結晶比這里所得結晶更容易過濾)。用己烷洗滌結晶并于40℃干燥。
從主組分分離的產(chǎn)物有約0.1％面積、RRT 0.95和約1.7％面積、RRT 1.25。
從前組分分離的產(chǎn)物有約3％面積、RRT 0.95和約0.3％面積、RRT1.25。
實施例2重復實施例1的通用方法以研究洗脫劑組成和流速的影響。
通過這些實驗，我們可確定降低洗脫流速增加層析的分離效率。增加洗脫流速降低層析的效率。25cm/cm2.小時流速(代替6.9-8.2cm/cm2.小時)導致效率顯著降低，但可收集到實施例1中描述質量的主組分。
還確定34％體積THF(代替33％體積)的第一洗脫劑增加層析的產(chǎn)率。產(chǎn)率為69％。主組分的雜質RRT0.95水平為0.10％面積。
當使用有31％體積THF的洗脫劑時，增加他克莫司的洗脫時間。發(fā)現(xiàn)提及的洗脫劑濃度(31％、33％、34％、40％體積四氫呋喃)可用于他克莫司的洗脫，而不必增加溶劑濃度。
這些另外的實驗也確定水四氫呋喃溶劑的洗脫劑混合物也有效。用于水四氫呋喃溶劑洗脫劑的供試溶劑為甲醇、乙腈、丙酮、正丙醇和正丁醇。在所有情況中得到合適的質量。
實施例3面積百分比指由上文描述的方法所得的HPLC色譜圖的面積百分比。
于20℃-25℃進行以下操作。
柱(3.2cm直徑)中制備吸附樹脂(Diaion SP207)床用水裝柱(約550mL濕吸附樹脂)。
將他克莫司(7.2g)溶于乙腈(30mL)和水(20mL)的混合物中。他克莫司包含約2.6％面積、RRT 0.95(子囊霉素)和約2.9％面積、RRT 1.25(二氫他克莫司)。
將他克莫司溶液以層形式裝到濕吸附樹脂床頂部。
用由乙腈/水/磷酸(600∶400∶1)組成的約8L洗脫劑洗脫柱。洗脫速度為90mL/小時。
合并組分32-45。合并的組分包含1.9g他克莫司。合并組分的雜質含量為約2.9％面積、RRT 0.95(子囊霉素)和約1.2％面積、RRT1.25(二氫他克莫司)。
描述的純化方法適用于減少二氫他克莫司。優(yōu)選洗脫劑中乙腈含量為約30％-70％，優(yōu)選約40％-65％。
使用無機酸防止他克莫司在層析期間分解。優(yōu)選無機酸為磷酸。優(yōu)選磷酸含量為1份洗脫劑約0.0005-0.003份酸。
描述的純化方法增加實施例1和2所述方法的效率。
實施例4根據(jù)實施例1制備層析用的兩根柱。層析前，按照以下方法將含3000g活性物質的他克莫司吸附至吸附樹脂XAD 1180上。將他克莫司溶于15L丙酮中。向該溶液中加入吸附樹脂(33L)，并一邊持續(xù)攪拌一邊向溶液/樹脂混合物中緩緩加入90L水。將吸附樹脂的裝料以層形式裝到(并置)第一根柱中所含吸附樹脂頂部。
第一根柱用四氫呋喃水混合物(34％體積THF)洗脫。洗脫速度為15L/小時。收集組分，每組分20L。每組分體積為20L。洗脫第35個組分后，將第二根柱串聯(lián)(流體連接)至第一根柱，洗脫繼續(xù)在串聯(lián)柱上進行。
洗脫第95個組分后，斷開第一根柱，洗脫僅在第二根柱上繼續(xù)進行。合并純化的合適組分。
減壓蒸發(fā)除去合并組分中的大部分THF。用乙酸乙酯萃取濃縮液，分離各相。減壓濃縮分離的乙酸乙酯相(約1份他克莫司和1份乙酸乙酯)。向濃縮的乙酸乙酯萃取液中緩緩加入環(huán)己烷和水。于0-30℃從混合物中回收沉淀他克莫司。過濾結晶并干燥。
起始物質包含約0.5％面積子囊霉素(RRT 0.95)和約1.3％二氫他克莫司(RRT 1.25)。所得結晶包含小于0.1％面積的子囊霉素和約0.4％面積二氫他克莫司。
實施例5將他克莫司溶于水四氫呋喃(67體積33體積)混合物中。得到的溶劑濃度為約30g/升。將溶液經(jīng)過吸附樹脂XAD 1180上。吸附樹脂吸附了他克莫司。
吸附后，按實施例1連續(xù)洗脫他克莫司。
實施例6將他克莫司溶于水四氫呋喃(67體積33體積)混合物中。得到的溶劑濃度為約30g/升。將溶液經(jīng)過吸附樹脂HP20。吸附樹脂吸附他克莫司。
吸附后，按實施例1連續(xù)洗脫他克莫司。
實施例7以下方法于28℃-32℃進行。
柱(45cm直徑)中制備吸附樹脂(AmberliteXAD 1180)床，用水THF裝柱(約100L濕吸附樹脂)。
一邊攪拌一邊將水(86L)緩緩加至子囊霉素(1227g)的乙腈(10L)溶液中，其中吸附樹脂(AmberliteXAD 1180；9L)攪拌下懸浮。使用的子囊霉素包含RRT 1.00(他克莫司)。當加完水后，過濾，收集吸附樹脂裝料。
將收集的裝料以層形式裝到(并置)濕吸附樹脂床頂部。
首先用由THF/水(33％體積THF)組成的約1800L第一洗脫劑洗脫柱。然后用由THF/水(40％體積THF)組成的第二洗脫劑洗脫柱。洗脫速度為約11-13L/hr(6.9-8.2cm/hr)。收集含子囊霉素的主組分約460L。也收集含子囊霉素的前組分約80L。
將主組分(460L)與85％磷酸(460mL)混合并減壓濃縮至約230L體積。濃縮液于環(huán)境溫度下保持一天。用己烷洗滌結晶并于40℃干燥。
實施8根據(jù)實施例1制備層析用的兩根柱。
層析前，按照以下方法將含子囊霉素的3000g活性物質吸附至吸附樹脂XAD 1180上。將子囊霉素溶于15L丙酮中。向該溶液中加入吸附樹脂(33L)，并一邊持續(xù)攪拌一邊向溶液/樹脂混合物中緩緩加入90L水。將吸附樹脂的裝料以層形式裝到(并置)第一根柱中所含吸附樹脂頂部。
第一根柱用四氫呋喃水混合物(34％體積THF)洗脫。洗脫速度為15L/小時。收集組分，每組分20L。每組分體積為20L。洗脫第35個組分后，將第二根柱串聯(lián)(流體連接)至第一根柱，洗脫繼續(xù)在串聯(lián)柱上進行。
洗脫第95個組分后，斷開第一根柱，洗脫僅在第二根柱上繼續(xù)進行。合并純化的合適組分。
減壓蒸發(fā)除去合并組分中的大部分THF。用乙酸乙酯萃取濃縮液，分離各相。減壓濃縮分離的乙酸乙酯相(約1份子囊霉素和1份乙酸乙酯)。向濃縮的乙酸乙酯萃取液中緩緩加入環(huán)己烷和水。于0-30℃從混合物中回收沉淀子囊霉素。過濾結晶并干燥。
實施例9以下方法于28℃-32℃進行。
柱(45cm直徑)中制備吸附樹脂(AmberliteXAD 1180)床，用水THF裝柱(約100L濕吸附樹脂)。
一邊攪拌一邊將水(86L)緩慢加入至西羅莫司(1227g)的乙腈(10L)溶液中，其中吸附樹脂(AmberliteXAD 1180；9L)攪拌下懸浮。使用的西羅莫司包含雜質。當加完水后，過濾，收集吸附樹脂裝料。
將收集的裝料以層形式裝到(并置)濕吸附樹脂床頂部。
首先用由THF/水(33％體積THF)組成的約1800L第一洗脫劑洗脫柱。然后用由THF/水(40％體積THF)組成的第二洗脫劑洗脫柱。洗脫速度為約11-13L/hr(6.9-8.2cm/hr)。收集含西羅莫司的主組分約460L。也收集含西羅莫司的前組分約80L。
將主組分(460L)與85％磷酸(460mL)混合并減壓濃縮至約230L體積。濃縮液于環(huán)境溫度下保持一天。用己烷洗滌結晶并于40℃干燥。
實施例10根據(jù)實施例1制備層析用的兩根柱。
層析前，按照以下方法將含西羅莫司的3000g活性物質吸附至吸附樹脂XAD 1180上。將西羅莫司溶于15L丙酮中。向該溶液中加入吸附樹脂(33L)，并一邊持續(xù)攪拌一邊向溶液/樹脂混合物中緩緩加入90L水。將吸附樹脂的裝料以層形式裝到(并置)第一根柱中所含的吸附樹脂頂部。
第一根柱用四氫呋喃水混合物(34％體積THF)洗脫。洗脫速度為15L/小時。收集組分，每組分20L。每組分體積為20L。洗脫第35個組分后，將第二根柱串聯(lián)(流體連接)至第一根柱，洗脫繼續(xù)在串聯(lián)柱上進行。
洗脫第95個組分后，斷開第一根柱，洗脫僅在第二根柱上繼續(xù)進行。合并純化的合適組分。
減壓蒸發(fā)除去合并組分中的大部分THF。用乙酸乙酯萃取濃縮液，分離各相。減壓濃縮分離的乙酸乙酯相(約1份西羅莫司和1份乙酸乙酯)。向濃縮的乙酸乙酯萃取液中緩緩加入環(huán)己烷和水。于0-30℃從混合物中回收沉淀西羅莫司。過濾結晶并干燥。
實施例11以下方法于28℃-32℃進行。
柱(45cm直徑)中制備吸附樹脂(AmberliteXAD 1180)床，用水THF裝柱(約100L濕吸附樹脂)。
一邊攪拌一邊將水(86L)加入至依維莫司(1227g)的乙腈(10L)溶液中，其中吸附樹脂(AmberliteXAD 1180；9L)攪拌下懸浮。使用的依維莫司包含雜質。當加完水后，過濾，收集吸附樹脂裝料。
將收集的裝料以層形式裝到(并置)濕吸附樹脂床頂部。
首先用由THF/水(33％體積THF)組成的約1800L第一洗脫劑洗脫柱。然后用由THF/水(40％體積THF)組成的第二洗脫劑洗脫柱。洗脫速度為約11-13L/hr(6.9-8.2cm/hr)。收集含依維莫司的主組分約460L。也收集含依維莫司的前組分約80L。
將主組分(460L)與85％磷酸(460mL)混合并減壓濃縮至約230L體積。濃縮液于環(huán)境溫度下保持一天。用己烷洗滌結晶并于40℃干燥。
實施例12根據(jù)實施例1制備層析用的兩根柱。
層析前，按照以下方法將含依維莫司的3000g活性物質吸附至吸附樹脂XAD 1180上。將依維莫司溶于15L丙酮中。向該溶液中加入吸附樹脂(33L)，并一邊持續(xù)攪拌一邊向溶液/樹脂混合物中緩緩加入90L水。將吸附樹脂的裝料以層形式裝到(并置)第一根柱中所含的吸附樹脂頂部。
第一根柱用四氫呋喃水混合物(34％體積THF)洗脫。洗脫速度為15L/小時。收集組分，每組分20L。每組分體積為20L。洗脫第35個組分后，將第二根柱串聯(lián)(流體連接)至第一根柱，洗脫在串聯(lián)柱上繼續(xù)進行。
洗脫第95個組分后，斷開第一根柱，洗脫僅在第二根柱上繼續(xù)進行。合并純化的合適組分。
減壓蒸發(fā)除去合并組分中的大部分THF。用乙酸乙酯萃取濃縮液，分離各相。減壓濃縮分離的乙酸乙酯相(約1份依維莫司和1份乙酸乙酯)。向濃縮的乙酸乙酯萃取液中緩緩加入環(huán)己烷和水。于0-30℃從混合物中回收沉淀依維莫司。過濾結晶并干燥。
實施例13以下方法于28℃-32℃進行。
柱(45cm直徑)中制備吸附樹脂(AmberliteXAD 1180)床，用水THF裝柱(約100L濕吸附樹脂)。
一邊攪拌一邊將水(86L)緩緩加入至吡美莫司(1227g)的乙腈(10L)溶液中，其中吸附樹脂(AmberliteXAD 1180；9L)攪拌下懸浮。使用的吡美莫司包含雜質。當加完水后，過濾，收集吸附樹脂裝料。
將收集的裝料以層形式裝到(并置)濕吸附樹脂床頂部。
首先用由THF/水(33％體積THF)組成的約1800L第一洗脫劑洗脫柱。然后用由THF/水(40％體積THF)組成的第二洗脫劑洗脫柱。洗脫速度為約11-13L/hr(6.9-8.2cm/hr)。收集含吡美莫司的主組分約460L。也收集含吡美莫司的前組分約80L。
將主組分(460L)與85％磷酸(460mL)混合并減壓濃縮至約230L體積。濃縮液于環(huán)境溫度下保持一天。用己烷洗滌結晶并于40℃干燥。
實施例14根據(jù)實施例1制備層析用的兩根柱。
層析前，按照以下方法將含吡美莫司的3000g活性物質吸附至吸附樹脂XAD 1180上。將吡美莫司溶于15L丙酮中。向該溶液中加入吸附樹脂(33L)，并一邊持續(xù)攪拌一邊向溶液/樹脂混合物中緩緩加入90L水。將吸附樹脂的裝料以層形式裝到(并置)第一根柱中所含的吸附樹脂頂部。
第一根柱用四氫呋喃水混合物(34％體積THF)洗脫。洗脫速度為15L/小時。收集組分，每組分20L。每組分體積為20L。洗脫第35個組分后，將第二根柱串聯(lián)(流體連接)至第一根柱，洗脫在串聯(lián)柱上繼續(xù)進行。
洗脫第95個組分后，斷開第一根柱，洗脫僅在第二根柱上繼續(xù)進行。合并純化的合適組分。
減壓蒸發(fā)除去合并組分中的大部分THF。用乙酸乙酯萃取濃縮液，分離各相。減壓濃縮分離的乙酸乙酯相(約1份吡美莫司和1份乙酸乙酯)。向濃縮的乙酸乙酯萃取液中緩緩加入環(huán)己烷和水。于0-30℃從混合物中回收沉淀吡美莫司。過濾結晶并干燥。
權利要求
1.一種分離大環(huán)內酯中雜質的方法，所述方法包括下列步驟a)提供大環(huán)內酯裝料，該大環(huán)內酯有初始水平的雜質，b)將該裝料裝到吸附樹脂床上，c)用洗脫劑洗脫該負載的吸附樹脂床得到洗脫液，該洗脫劑包含水和選自四氫呋喃和乙腈的有機溶劑，和d)收集至少一個包含該大環(huán)內酯的洗脫液組分。
2.權利要求1的方法，其中所述大環(huán)內酯裝料還含有吸附樹脂的負荷部分。
3.權利要求2的方法，其中在a步驟中所述裝料從其有機溶劑的溶液中沉積于所述負荷部分上，所述步驟包括將該溶液與反溶劑混合。
4.權利要求3的方法，其中所述有機溶劑選自四氫呋喃、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、正丁醇、正丙醇、異丙醇、酯和偶極非質子溶劑。
5.權利要求4的方法，其中所述有機溶劑選自四氫呋喃、丙酮和乙腈。
6.權利要求3的方法，其中所述反溶劑選自水、直鏈或支鏈烷烴或環(huán)烷烴。
7.權利要求6的方法，其中所述反溶劑為水。
8.權利要求3的方法，其中混合的溶液與混合的反溶劑比率為40％或更小。
9.權利要求1-8中任一項的方法，所述方法還包括從至少一個組分中分離所述大環(huán)內酯的步驟，其中所述大環(huán)內酯中雜質的最終水平低于雜質的初始水平。
10.權利要求9的方法，其中所述分離包括濃縮至少一個組分的步驟，該步驟于減壓、約70℃或以下的溫度下進行。
11.權利要求10的方法，其中溫度為約60℃或以下。
12.權利要求10的方法，其中壓力為約760mmHg。
13.權利要求10的方法，所述方法還包括濃縮前將至少一個組分與無機酸混合的步驟。
14.權利要求13的方法，其中所述無機酸為磷酸。
15.權利要求13的方法，其中所述酸的量為每升洗脫劑1至約10mL。
1 6.權利要求9的方法，其中所述分離包括將反溶劑與至少一個洗脫液組分混合的步驟。
17.權利要求16的方法，其中在混合前，減壓濃縮所述至少一個洗脫液組分。
18.權利要求1-17中任一項的方法，其中所述吸附樹脂為大網(wǎng)絡樹脂。
19.權利要求18的方法，其中所述大網(wǎng)絡樹脂選自AmberliteXAD樹脂和Diaion吸附樹脂。
20.權利要求19的方法，其中所述大網(wǎng)絡樹脂為AmberliteXAD 1180。
21.權利要求1-20中任一項的方法，其中所述吸附樹脂床在柱中。
22.權利要求1-21中任一項的方法，其中所述至少一個組分收集的洗脫液體積包含約60％至約90％重量的最初存在于所述裝料中的大環(huán)內酯。
23.權利要求1-22中任一項的方法，其中所述洗脫劑流速小于約25cm/h。
24.權利要求23的方法，其中所述洗脫劑流速小于約15cm/h。
25.權利要求1-24中任一項的方法，其中所述大環(huán)內酯選自他克莫司、子囊霉素、西羅莫司、依維莫司和吡美莫司。
26.權利要求25的方法，其中所述大環(huán)內酯為他克莫司。
27.權利要求26的方法，其中所述洗脫劑包含含有約20％體積至約50％體積四氫呋喃的四氫呋喃和水混合物。
28.權利要求27的方法，其中所述洗脫劑含有約31％體積至約40％體積四氫呋喃。
29.權利要求28的方法，其中所述洗脫劑含有約33％體積至約35％體積四氫呋喃。
30.權利要求26的方法，其中所述洗脫劑包含含有約30％體積至約70％體積乙腈的乙腈和水混合物。
31.權利要求30的方法，其中所述洗脫劑含有約40％體積至約65％體積乙腈。
32.權利要求1-31中任一項的方法，其中每1體積份所述洗脫劑包含最高達約0.003體積份無機酸。
33.權利要求32的方法，其中所述無機酸為磷酸。
34.權利要求25的方法，其中所述大環(huán)內酯為子囊霉素。
35.權利要求25的方法，其中所述大環(huán)內酯為西羅莫司。
36.權利要求25的方法，其中所述大環(huán)內酯為依維莫司。
37.權利要求25的方法，其中所述大環(huán)內酯為吡美莫司。
38.權利要求2-37中任一項的方法，其中所述裝料被裝到再循環(huán)系統(tǒng)中吸附樹脂的負荷部分上。
39.權利要求1的方法，其中至少一個另外的吸附樹脂床連接至步驟b的吸附樹脂床。
40.權利要求39的方法，其中在其他系列洗脫劑組分后斷開步驟b的樹脂床。
41.一種分離他克莫司中雜質子囊霉素和二氫他克莫司的方法，所述方法包括步驟a)提供吸附樹脂負荷部分上的他克莫司裝料，該他克莫司裝料含有初始水平的雜質子囊霉素和二氫他克莫司，該吸附樹脂為大網(wǎng)絡樹脂，b)將負載他克莫司裝料的負荷部分并置于吸附樹脂床，c)用洗脫劑洗脫該負荷部分和與之并置的床得到洗脫液，該洗脫劑包含水和選自四氫呋喃和乙腈的有機溶劑，d)收集至少一個洗脫液組分，和e)從至少一個組分中分離含有最終水平的雜質子囊霉素和二氫他克莫司的他克莫司，其中雜質子囊霉素和二氫他克莫司的最終水平低于這些雜質的初始水平。
42.權利要求41的方法，其中所述洗脫劑包含含有約20％體積至約50％體積四氫呋喃的四氫呋喃和水混合物。
43.權利要求42的方法，其中所述洗脫劑包含含有約31％體積至約40％體積四氫呋喃的四氫呋喃和水混合物。
44.權利要求43的方法，其中所述混合物含有約33％體積至約35％體積四氫呋喃。
45.權利要求41的方法，其中所述洗脫劑包含含有約30％體積至約70％體積乙腈的乙腈和水混合物。
46.權利要求45的方法，其中所述洗脫劑含有約40％體積至約65％體積乙腈。
47.權利要求41的方法，其中每體積份所述洗脫劑還包含最高達約0.003體積份無機酸。
48.權利要求47的方法，其中所述無機酸為磷酸。
全文摘要
提供一種純化大環(huán)內酯尤其是他克莫司的方法，所述方法包括將大環(huán)內酯裝到吸附樹脂床上，并用合適洗脫劑如水和四氫呋喃的組合洗脫。
文檔編號C07D498/00GK1856500SQ200480027254
公開日2006年11月1日 申請日期2004年7月26日 優(yōu)先權日2003年7月24日
發(fā)明者V·克里, Z·措維克, F·蘭塔爾, A·措爾瓦西 申請人:特瓦藥廠私人有限公司