專利名稱：一種泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明用于泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療。
與本發(fā)明相關(guān)的背景技術(shù)泌尿生殖系統(tǒng)疾病通常累及男女兩性，包括泌尿系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)的感染和/或炎癥。例如，根據(jù)美國國家少兒健康和發(fā)育研究所(NICHD)的統(tǒng)計，“大多數(shù)女性一生中至少患過一種類型的陰道炎?！薄蛾幍姥住?Vaginitis)，發(fā)表于《美國國家兒少健康和發(fā)育研究所-在線刊物》(National Institute of Child Health and HumanDevelopment-Publications On-line)，2000年1月12日修定，＜http//www.nichd.nih.gov/publications/pubs/vag 1.html＞)。導(dǎo)致陰道炎的原因包括從細菌、真菌或病毒感染到乳液、噴霧或者貼身衣物所含的化學(xué)物質(zhì)的刺激。同樣地，對于有細菌和真菌感染的女性，這些感染因素經(jīng)常來自肛門區(qū)，從此處經(jīng)過會陰到達陰道或尿道。
常見的一類陰道炎是念珠菌或酵母菌感染，主要由白色念珠菌感染引起。念珠菌屬于人體正常菌群，存在于皮膚、口腔和消化道(Robbins，《疾病的病理學(xué)基礎(chǔ)》第五版(pathologic Basis ofDisease 5thed)，Saunders公司，費城(1994)p.354)，女性陰道也可有少量存在。它們最適合的生長環(huán)境是諸如陰道或口腔的溫暖潮濕環(huán)境。念珠菌通常不致病，但當環(huán)境改變時，例如女性絕經(jīng)后、懷孕期、或應(yīng)激時發(fā)生體內(nèi)激素水平的改變，會過度繁殖造成酵母菌感染。此情況也可見于免疫抑制或身體機能受損的個體，如接受化療、服用免疫抑制劑的病人，或艾滋病患者。
目前對于念珠菌感染的治療包括非處方藥物，其活性成分如布康唑硝酸鹽(Femstat)、克霉唑(Gyne-Lotrimin及其它)、咪康唑(Monistat及其它)和噻康唑(Vagistat)。這些藥物作為陰道感染的局部用藥，可以裂解念珠菌的細胞壁。其它類似的治療包括處方藥物，其活性成分來自與氟康唑(Diflucan)、三康唑(Terazol)和酮康唑(Nizoral)等同一系列。
雖然通常的觀點認為陰道炎與念珠菌有關(guān)，但據(jù)NICHD的調(diào)查(《陰道炎》(Vaginitis))，實際上細菌性陰道炎是育齡婦女最常見的陰道感染疾病。陰道內(nèi)的細菌過度繁殖會導(dǎo)致與念珠菌性陰道炎相似的細菌性陰道炎，其治療藥物不同。
另一方面，男性陰莖也可以感染念珠菌，累及陰莖頭和包皮。陰莖頭包皮炎是陰莖頭和包皮的非特異性感染，由多種微生物引起，包括真菌(如念珠菌)和化膿性細菌(如葡萄球菌)(Robbins，《疾病的病理學(xué)基礎(chǔ)》第五版(Pathologic Basis of Disease 5thed).，Saunders公司，費城(1994)p.1008)。
葡萄球菌為革蘭氏染色陽性細菌，通常存在于人體的皮膚和其它粘膜。特別值得一提的是金黃色葡萄球菌，為毒性致病源，可以引起皮膚損傷、心內(nèi)膜炎、呼吸系統(tǒng)感染、食物中毒、甚至中毒性休克綜合征等多種病癥。對于采用高吸收性月經(jīng)棉條的女性而言，金黃色葡萄球菌可以在陰道內(nèi)形成菌落，并分泌一種稱為中毒性休克綜合征毒素(TSST-1)的毒素。據(jù)FDA的統(tǒng)計，目前報導(dǎo)的大約半數(shù)中毒性休克綜合征病例與月經(jīng)期棉條關(guān)，多為年輕女性(《月經(jīng)棉條與石棉、二惡英以及中毒性休克綜合征》(Tampons andAsbestos，Dioxin，&Toxic Shock Syndrome)，F(xiàn)DA設(shè)備與放射健康中心(July 23，1999)，＜http//www.fda.gov/cdrh/ocd/tamponsabs.html＞)。
金黃色葡萄球菌感染一般用甲氧西林(methicillin)治療。此藥雖然很有效，但金黃色葡萄球菌的一些菌株已經(jīng)產(chǎn)生抗藥性，只有少數(shù)抗生素能有效治療耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)。常用于治療MRSA的抗生素之一是萬古霉素(vancomycin)。但是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)對萬古霉素敏感性下降的金黃色葡萄球菌菌株(Khuishid，M.A.等，《對萬古霉素敏感性下降的金黃色葡萄球菌》(Staphylococcus aureus with Reduced susceptibility to Vancomycin)，發(fā)表于伊利諾斯1999《發(fā)病率與死亡率周報》(Morbidity andMortality Weekly Report)，48(51)1165-1167(2000)，＜http//www.cdc.gov/epo/mmwr/preview/mmwrhtml/mm4851al.htm＞)。抗藥性菌株的出現(xiàn)使應(yīng)用其他方法用于治療細菌感染成為必要。
除真菌和細菌感染外，病毒性陰道炎也比較常見。此類感染大多通過性交傳播，包括單純皰疹病毒(HSV)或人類乳頭狀病毒(HPV)引起的感染。例如，HSV病毒，在生殖系統(tǒng)的入口處復(fù)制，也感染支配生殖器的神經(jīng)。為了躲避機體免疫系統(tǒng)，HSV病毒潛伏在這些神經(jīng)元中，在某些環(huán)境條件下活化，如應(yīng)激、免疫抑制、放射或病毒感染等。目前治療HSV感染的藥物包括阿昔洛韋(acyclovir)、法昔洛韋(famciclovir)、或伐昔洛韋(valacyclovir)等。
對于泌尿系統(tǒng)，根據(jù)美國醫(yī)藥協(xié)會的調(diào)查數(shù)據(jù)，泌尿道感染(UTIs)是促使就醫(yī)的最常見疾患之一(《女性健康》－《尿道感染治療的患者指導(dǎo)》(Women’s Health，Urinary Tract infectionsAPatient’s Guide to Treatment)，《在線健康信息-AMA健康透視》(AMA Health Insight，On-line Health Information for Everyone)，1998年10月30日更新，＜http//www.ama-assn.org/insight/h_focus/wom_hlth/uti/uti.html＞。此類感染性疾患主要是由埃希氏大腸桿菌(E.coli.)引起，但念珠菌和葡萄球菌也有參與。同樣地，這些感染始于尿道，向膀胱發(fā)展引起膀胱炎。最后，病菌可沿輸尿管上行至雙腎，導(dǎo)致腎盂腎炎。男性和女性均可感染。
既然泌尿-生殖系統(tǒng)疾病不局限于單一病因，那么目前的治療就需要針對特定病因采用不同的藥物。當然，要先確定病因。檢測病源需要時間，但更重要的是對女性要進行婦科檢查以確定是否有特異感染因素存在。
隨著抗生素和其它藥物應(yīng)用的增加，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌這類的微生物就越容易對目前所用藥物產(chǎn)生抗藥性。這樣，就持續(xù)需要新的廣譜抗菌藥物。
發(fā)明簡述本發(fā)明用于治療泌尿生殖系統(tǒng)疾病，它的一個方面涉及的由單一或多種肽組成的用于泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療體系，其中多肽的氨基酸序列有KPV(序列號1號)，MEHFRWG(序列號2號)，HFRWGK(序列號3號)，SYSMEHFRWGLPV(序列號4號)。單個或多個多肽也可以通過上述氨基酸序列形成二聚體。泌尿生殖系統(tǒng)疾病包括感染、炎癥，或者二者兼有。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，泌尿-生殖系統(tǒng)疾病包括陰道、外陰、尿道、陰莖和/或直腸的感染和/或炎癥。在另一個優(yōu)選實施例中，單一或多種多肽溶于載體內(nèi)。在第三個優(yōu)選實例中，一種或多種多肽與棉條結(jié)合，以避免中毒性休克綜合征。在第四個優(yōu)選實施例中，一種或多種多肽與避孕工具相結(jié)合，以防止性傳播疾病或感染。在第五個實施例中，一種或多種多肽與栓劑結(jié)合，以便于插入陰道或肛門。在本發(fā)明的第六個實施例中，一種或多種多肽溶于液體載體中，以用于陰道灌注。
附圖簡要描述

圖1α-MSH和/或其衍生物對金黃色葡萄球菌生長的抑制效應(yīng)。
圖2α-MSH和/或其衍生物對尿激酶(UK)誘導(dǎo)的金黃色葡萄球菌生長的影響。
圖3α-MSH和/或其衍生物對白色念珠菌(C.albicans)生長的抑制效應(yīng)。
圖4α-MSH和/或其衍生物與氟康唑抗真菌活性的比較。
圖5A-5Dα-MSH和/或其衍生物對白色念珠菌芽管形成的抑制效應(yīng)。
圖6α-MSH和/或其衍生物抗念珠菌的強化中性粒細胞殺傷力的效應(yīng)。
圖7、8、9α-MSH和/或其衍生物抑制白色念珠菌生長的機制。
圖10-13α-MSH和/或其衍生物對慢性感染細胞內(nèi)病毒復(fù)制和表達的抑制效應(yīng)。
圖14α-MSH和/或其衍生物抑制病毒復(fù)制、表達和活化的機制。
圖15α-MSH和/或其衍生物對急性感染細胞內(nèi)病毒復(fù)制和表達的抑制效應(yīng)。
圖16用于本發(fā)明一方面的一種KPV二聚體形式的化學(xué)結(jié)構(gòu)示例。
發(fā)明詳述以下所引用的文獻在此作為參考文獻。本發(fā)明是關(guān)于采用α-黑素細胞刺激素(α-MSH)和/或其衍生物治療泌尿生殖系統(tǒng)疾病的一種方法和系統(tǒng)。α-MSH是經(jīng)典的由13個氨基酸組成的肽(序列號4號)，由較大的前體分子－－前黑阿皮素原經(jīng)翻譯后修飾產(chǎn)生。它與同是來自前黑阿皮素原的促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的1-13氨基酸序列相同。許多種細胞均可分泌α-MSH，包括垂體細胞、單核細胞、黑素細胞和角化細胞。α-MSH可見于大鼠皮膚、人體表皮以及正常和垂體切除術(shù)大鼠消化道的粘膜屏障(可參閱Eberie，A.N.，《促黑激素》(The Melanotrophins)，瑞士巴塞爾Karger(1998)；Lipton，J.m.等，《α-MSH神經(jīng)免疫調(diào)質(zhì)的抗炎影響》(Anti-inflammatory influence of the Neuroimmunomodulatot α-MSH)，《今日免疫學(xué)》(Immunol.Today)18，140-145(1997)；Thody，A.J.等，《α-MSH的免疫反應(yīng)性，在正常和垂體切除大鼠消化道的分布》(Immunoreactiveα-Melanocyte Stimulating Hormone，Its Distribution in the Gastrointestinal Tract of Intact andHypophysectomized Rats)，《生命科學(xué)》(Life.Sci.)18,2127-2132(1981))。
現(xiàn)已知道α-MSH及其衍生物具有很強的解熱和抗炎特性，而且毒性極低。它可以降低宿主細胞的離體前炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，并且可以降低動物炎癥模型的局部和全身反應(yīng)。例如，α-MSH的核心序列(4-10)(序列號2號)具有學(xué)習(xí)和記憶行為效應(yīng)，但解熱和抗炎活性很低。相反，解熱和抗炎活性的活化信息序列位于α-MSH的C-末端氨基酸序列，即賴氨酸-脯氨酸-纈氨酸(“Lys-Pro-Val”或“KPV”)(序列號1號)。此三肽在體和離體情況下與母體分子有相同的活性。α-MSH和/或其衍生物的抗炎活性在下述兩項專利有闡述，并包括在所列的參考中美國專利第5,028,592號，1991年7月2日提交于Lipton，J.M.，題為《Lys Pro Val解熱和抗炎成分及其使用方法》(Antipyretic and Anti-inflammatory Lys Pro ValCompositions and Method of Use)；美國專利第5,157,023號，1992年10月20日提交于Lipton，J.M.，題為《Lys Pro Val解熱和抗炎成分及其使用方法》(Antipyretic and Anti-inflammatory Lys Pro ValCompositions and Method of Use)。(參閱Catania，A.等，《α-MSH對宿主機體反應(yīng)的調(diào)節(jié)》(α-Melanocyte Stimulating Hormone in theModulation of Host Reactions)，《內(nèi)分泌綜述》(endocr.Rev.)14,564-576(1993)；Lipton，J.M.等，《α-MSH神經(jīng)免疫調(diào)質(zhì)的抗炎影響》(Anti-inflammatory influence of the Neuroimmunomodulatorα-MSH)，《今日免疫學(xué)》(Immunol.Today)18,140-145(1997)；Rajora，N.等，《α-MSH產(chǎn)生受體及其對新喋呤的影響，在人單核/巨噬細胞系》(α-MSH Production Receptors and Influence onNeopterin in a human Monocyte/macrophage Cell Line)，《白血病生物學(xué)雜志》(J.Leukoc.Biol.)59,248-253(1996)；Star，R.A.等，《α-MSH對巨噬細胞一氧化氮合成酶自分泌調(diào)節(jié)的證明》(Evidence ofAutocrine Modulation of Macrophage Nitric Oxide Synthase by α-MSH)，Proc.Nat’l.Acad.Sci.(USA).92,8015-8020(1995)；Lipton，J.M.等，《神經(jīng)肽α-MSH在急慢性全身性炎癥的抗炎作用》(Anti-inflammatory Effects of the Neuroptide α-MSH in AcuteChronic and systemic inflammation)，Ann.N.Y.Acad.Sci.741，137-148(1994)；Fajora，N.等，《α-MSH調(diào)節(jié)大腦炎癥實驗?zāi)Ｐ偷木植亢脱h(huán)腫瘤壞死因子-α》(α-MSH Modulation Local and CirculatingTumor Necrosis Factor αin Experimental Brain Inflammation)，《神經(jīng)科學(xué)雜志》(J.Neurosci.)17,2181-2186(1995)；Richards，D.B.等，《α-MSH(11-13)(lys-pro-val)對兔發(fā)熱的作用》(Effects ofα-MSH(11-13)(lysine-proline-valine)on Fever in the Rabbit)，《肽物質(zhì)》5,815-817(1984)；Hiltz，M.E.等，《神經(jīng)肽α-MSH COOH末端片斷的抗炎活性》(Anti-inflammatory of a COOH-teminalFragment of the Neuroptide α-MSH)，F(xiàn)ASEB雜志3,2282-2284(1989)。
除了抗炎和解熱功能外，本發(fā)明的另一方面涉及α-MSH和/或其衍生物的抗微生物和抗感染活性。如下所述，α-MSH和/或其衍生物有重要的抗感染用途，包括如下的應(yīng)用降低微生物生存力，降低酵母菌長芽，在不損害中性粒細胞對微生物的殺傷能力的情況下殺傷微生物，治療與微生物感染有關(guān)的炎癥而不降低微生物的殺傷力，增加微生物細胞內(nèi)cAMP的積累，抑制病毒性致病源的復(fù)制與表達。
在本發(fā)明的首選實施例中，這些抗微生物或抗感染活性最主要與C-末端氨基酸序列-KPV有關(guān)。此三肽與α-MSH及其衍生物在很大濃度范圍內(nèi)均有效，包括通常存在于人體漿液的皮摩爾濃度。
正如在技術(shù)背景部分中所討論的，泌尿生殖系統(tǒng)疾病并不局限于單一病因。從細菌、真菌到病毒在內(nèi)的多種微生物和感染因素可以單獨或聯(lián)合引起多種病癥，包括陰道炎、外陰炎、尿道炎、陰莖頭包皮炎、念珠菌病、行傳播疾病以及中毒性休克綜合征。α-MSH和/或其衍生物可局部用于上述疾病狀態(tài)的感染和/或炎癥部位以達到治療目的，可利用現(xiàn)有技術(shù)的施藥方法。例如，α-MSH及其衍生物可以溶于一些溶液中，諸如磷酸鹽緩沖液、透明質(zhì)酸、甲基纖維素、羧甲基纖維素或乙醇。還可以用一般的載體，如油膏、油脂、膠體、可溶性彈丸、氣溶膠噴霧、栓劑、灌注所用液體溶劑或者具吸收性的物質(zhì)，攜帶α-MSH和/或其衍生物作為活性成分治療泌尿生殖系統(tǒng)疾病。這些載體可用敷料器施用于感染或炎癥部位，敷料器可以是注射器或類注射器式的器具、繃帶、導(dǎo)管、帶活塞的管子、涂藥用抹刀或其它類型的平面敷料器、避孕套、海綿、棉簽、或手指。
更明確地說，本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例是將α-MSH和/或其衍生物溶于以液體基底的載體。然后將溶有α-MSH和/或其衍生物的載體儲存于密封加壓箱內(nèi)。打開釋放閥門或通過其它方式將載體從密封加壓箱內(nèi)釋放時，會形成氣溶膠泡沫并被裝進注射器和注射器類的器具。接著，注射器部分插入陰道，其內(nèi)容物也就釋放入陰道腔內(nèi)。注射器或注射器類的器具及其開口也可以有不同的大小、形狀和長度，以插入不同的泌尿生殖區(qū)，如尿道或肛門。
本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施例為包含載體的栓劑。此載體如膠體或甘油在常溫下為固體或半固體，但是插入陰道或肛門后在體溫下便融化。載體融化后，攜帶所溶的α-MSH和/或其衍生物至泌尿生殖系統(tǒng)疾病的發(fā)病部位。
我們采用油脂、油膏、膠體、噴霧、泡沫材料或止痛香膏等形式將α-MSH和/或其衍生物涂于外陰、陰莖頭和陰莖包皮等外生殖器部分。其組分為本技術(shù)領(lǐng)域所熟知。
在本發(fā)明的另一方面，還可以在棉條的生產(chǎn)加工過程中用α-MSH和/或其衍生物進行處理。這樣棉條中存在α-MSH和/或其衍生物，可以抑制分泌中毒性休克綜合征(TSST-1)的微生物的生長，如金黃色葡萄球菌。此種棉條的加工處理技術(shù)為本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)所熟知。采用α-MSH和/或其衍生物處理的棉條吸收性材料進行治療，一種方法是將棉條的吸收性材料浸泡于含有α-MSH和/或其衍生物的溶液，然后予以干燥?？晒┻x擇的另一種方法，是將α-MSH以干燥粉末形式噴灑到棉條的吸收性材料上。
在本發(fā)明的另一方面，α-MSH和/或其衍生物可通過避孕工具轉(zhuǎn)運至感染部位，這些避孕工具包括避孕套、隔膜、海綿或其它用于防止懷孕或性傳播疾病的屏障型工具。α-MSH和/或其衍生物可溶于避孕套所用的潤滑劑以及與隔膜共同使用的膠質(zhì)或泡沫材料，或者溶于與避孕套、隔膜或海綿共用的任何類型的殺精子溶液。
在本發(fā)明的另一方面，α-MSH和/或其衍生物可溶于灌注用的液體。這些液體可以通過灌注被轉(zhuǎn)運至陰道以治療感染和/或炎癥。
下述實施例闡明了α-MSH和/或其衍生物抗感染的效力及其應(yīng)用。實施例中所用的微生物學(xué)、分子生物學(xué)以及細胞培養(yǎng)的方法沒有在文中詳細說明，但在科研文獻中有大量的報導(dǎo)。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知這些方法。
下述實施例中所用的肽類包括α-MSH(1-13)(序列號4號)、(4-10)(序列號002號)、(6-13)(序列號003號)、和(11-13)(序列號1號)，均有乙酰化的N末端和酰胺化的C末端，以及促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH(1-39)和(18-39)(CLIP)。這些肽類由固相肽合成方法制備，經(jīng)保留相的高效液相色普法純化。部分實施例還包括氨基酸序列CKPV(序列號8號)的二聚體(KPV二聚體)，此二聚體同樣也有乙?；腘末端和酰胺化的C末端。圖16顯示了KPV二聚體的化學(xué)結(jié)構(gòu)。在上述任意一種多肽的N末端加半胱氨酸，并使兩個多肽的半胱氨酸形成二硫鍵，即可得到二聚體。同源二聚體和異源二聚體均可由此方法獲得。
下述實施例中所闡述的統(tǒng)計學(xué)意義采用方差的單因素分析和斯氏t檢驗。概率大于0.05被認為是有顯著性差異的。實施例I本實施例目的在于闡明α-MSH和/或其衍生物的抗微生物特性，這里選取金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)為例。
金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物(ATCC 29213)由Ospedale Maggiore diMilano微生物學(xué)系提供。金黃色葡萄球菌(于Hank平衡鹽溶液中1×106/毫升)在α-MSH(1-13)(序列號4號)、α-MSH(11-13)(序列號1號)或KPV二聚體存在或缺如的情況下，37℃培養(yǎng)2小時，肽的濃度為10-15-10-4M。隨后細胞在冷蒸餾水中沖洗，并用HBSS稀釋至100個生物體/毫升。將一微升的等分試樣涂于血漿瓊脂板，37℃培養(yǎng)24小時。然后根據(jù)所形成的菌落評估微生物的生存力。另一實驗中是在細菌濃度為105/100毫升的培養(yǎng)液中加入不同的肽段和500單位的尿激酶(金黃色葡萄球菌的生長促進劑)，并且在37℃水浴中振蕩培養(yǎng)4小時。
圖1表明α-MSH(1-13)(序列號4號)、α-MSH(11-13)(序列號1號)和KPV二聚體均抑制金黃色葡萄球菌菌落的形成。此抑制效應(yīng)在很大濃度范圍內(nèi)均可發(fā)生，并在10-12-10-4M的濃度范圍內(nèi)有顯著性差異(p＞0.01)。圖2說明了濃度為10-6摩爾/升的α-MSH(1-13)(序列號4號)和α-MSH(11-13)(序列號1號)明顯抑制尿激酶的生長促進作用。這樣，α-MSH或其衍生物可以抑制金黃色葡萄球菌的生長，此細菌會引起中毒性休克綜合癥，該病征與月經(jīng)棉條使用、陰道炎、泌尿道感染、以及陰莖頭包皮炎有關(guān)。
白色念珠菌的臨床隔離株由Ospedale Maggiore di Milano微生物學(xué)系提供。白色念珠菌的培養(yǎng)在沙氏瓊脂斜面板上進行，并周期性地轉(zhuǎn)移到沙氏瓊脂板上，28℃培養(yǎng)48小時。為了制備靜止期酵母菌，從瓊脂板上挑取菌落，將其轉(zhuǎn)移到30毫升沙氏葡糖液體培養(yǎng)基中，32℃培養(yǎng)72小時。將所得細胞以1000xg離心10分鐘，用蒸餾水沖洗沉積細胞兩次。然后計數(shù)細胞個數(shù)，并懸浮于Hank平衡鹽溶液(HBSS)中至需要的濃度。通過0.01％的甲基藍外排實驗，以此確定細菌的生存力。結(jié)果顯示其生存能力大于98％。
在HBSS中密度為1×106/毫升時，這些真菌在α-MSH(1-13)(序列號4號)、α-MSH(11-13)(序列號1號)或KPV二聚體存在或缺如的情況下，37℃培養(yǎng)2小時，肽的濃度為10-15-10-4M。隨后用冷蒸餾水沖洗細胞，并用HBSS稀釋至100個生物體/毫升。將一毫升的等分樣品涂于血漿瓊脂板上，37℃培養(yǎng)48小時。微生物的生存力根據(jù)所形成的菌落估計。
圖3表明α-MSH(1-13)(序列號4號)、α-MSH(11-13)(序列號1號)和KPV二聚體在10-12-10-4M濃度范圍內(nèi)均抑制白色念珠菌菌落形成的能力(與對照相比p＜0.01)。此結(jié)果說明，α-MSH或其衍生物能夠抑制白色念珠菌的生長，此真菌是已知導(dǎo)致念珠菌病、陰道炎、尿道炎和陰莖頭包皮炎的因素。
檢測α-MSH(1-13)(序列號4號)、(4-10)(序列號2號)、(6-13)(序列號3號)、(11-13)(序列號1號)和ACTH(1-39)、(18-39)以及氟康唑在10-6-10-4M濃度下的抗白色念珠菌的能力，方法同實施例II。圖4表明，與氟康唑相比，α-MSH(11-13)(序列號1號)、(4-10)(序列號2號)、(6-13)(序列號3號)和(1-13)(序列號4號)抗白色念珠菌是非常有效的，其抑制活性與等摩爾濃度的氟康唑是類似的。相比之下，具有行為效應(yīng)但極少抗炎活性的核心α-MSH序列(4-10)(序列號2號)產(chǎn)生了近50％的對菌落形成單位抑制效應(yīng)。雖然此抑制效應(yīng)具有顯著性(與對照相比p＜0.01)，但是明顯弱于含有KPV信號序列的α-MSH片斷，這些KPV信號序列包括α-MSH(6-13)(序列號3號)、(11-13)(序列號1號)(p＜0.01)，或者母體分子α-MSH(1-13)(p＜0.05)。圖4也表明ACTH(1-39)及其片斷(18-39)不能降低白色念珠菌的生存力。甚至在10-4M濃度下(圖中未顯示)，ACTH肽段也同樣無效。
由此本實施例說明α-MSH或其衍生物在抑制白色念珠菌生長方面與氟康唑同樣有效。
蒸餾水沖洗培養(yǎng)所得的靜止期白色念珠菌兩次，然后將菌體懸浮于HBSS中，密度為2×106/毫升。于此菌液中加入10％的滅活馬血清(由英國Paisley GIBCO/BRL提供)，37℃振蕩培養(yǎng)45分鐘，可以誘導(dǎo)白色念珠菌菌絲的生長。HBSS沖洗菌體兩次以去除馬血清，然后在濃度為10-6M的α-MSH(1-13)(序列號4號)、(6-13)(序列號3號)或(11-13)(序列號1號)存在的條件下，37℃繼續(xù)培養(yǎng)60分鐘，并不斷振蕩。采用血細胞計數(shù)器在光學(xué)顯微鏡下計算出絲狀菌體的百分比。此實驗以重復(fù)三次，至少計數(shù)了200個細胞。采用裝配在Axioskop Zeiss顯微鏡上的MC100相機拍攝顯微照片。
圖5A至5D表明α-MSH(1-13)(序列號4號)或(11-13)(序列號1號)可以抑制由馬血清誘導(dǎo)的白色念珠菌芽管形成。α-MSH(1-13)(序列號4號)使絲狀菌體數(shù)目降低28-32％，α-MSH(11-13)(序列號1號)導(dǎo)致絲狀菌體數(shù)目降低54-58％。雖然圖中未顯示，α-MSH(6-13)(序列號3號)同樣可以引起絲狀菌體數(shù)目降低近50％。由此說明α-MSH或其衍生物通過抑制芽管形成可以抑制念珠菌發(fā)病機理的一種模式。
來自健康志愿者的靜脈血(20毫升)肝素抗凝處理后，加入右旋糖苷沉淀劑并采用Ficoll-Hypaque(購于美國密蘇里州圣路易斯的Sigma化學(xué)制劑公司)離心機離心分離中性粒細胞。低滲休克下紅細胞溶解，中性粒細胞則至少占細胞懸浮液的97％。由胎盤蘭排除法得到的細胞生存力大于98％。中性粒細胞再懸浮于HBSS中，以用于實驗。
將白色念珠菌(1×106)與AB型血清置于37℃振蕩水浴中調(diào)理30分鐘。隨后，在單純培養(yǎng)基上或含有濃度為10-15-10-4M的α-MSH(1-13)(序列號4號)或α-MSH(11-13)(序列號1號)培養(yǎng)基上與中性粒細胞一起培養(yǎng)，于振蕩水浴中37℃培養(yǎng)2小時。2小時后，將培養(yǎng)管置于冰上以中斷生長，沖洗細胞外生物體兩次，并4℃離心(1000xg)。于懸浮液中加入2.5％的脫氧膽酸鈉溶液，振蕩試管5分鐘。然后加入冷蒸餾水得到密度為106個細胞/毫升的菌液，再在HBSS中按1/100地比例依次稀釋兩次，從而得到密度為100個細胞/毫升的菌液。從此菌液中取一毫升的等分樣品涂于血瓊脂板，37℃培養(yǎng)48小時。48小時后選取三分之一計數(shù)菌落形成單位，并采用五個不同個體來源的血漿重復(fù)計數(shù)。
圖6表明α-MSH(1-13)(序列號4號)和(11-13)(序列號1號)在10-12-10-4M濃度范圍內(nèi)(p＜0.01)確實能夠增強中性粒細胞對白色念珠菌的殺傷力。同時圖6表明它們在很大的濃度范圍內(nèi)都可以促進中性粒細胞的殺傷力，即使是在相當于人血漿α-MSH濃度的皮摩爾濃度條件下。
由此本實施例說明α-MSH或其衍生物可以同時抗感染和炎癥，此特性也適用于念珠菌病、陰道炎、尿道炎、陰莖頭包皮炎或痔瘡。實施例VI本實施例提示α-MSH和/或其衍生物的抗微生物特性的一般細胞機制，以及抗真菌特性的特殊機制。
經(jīng)甲苯/乙醇滲透作用的白色念珠菌(106/毫升)，在10-6M濃度的α-MSH(1-13)(序列號4號)、(11-13)(序列號1號)或毛喉萜(forskolin)(已知能夠增加細胞內(nèi)cAMP)存在或缺失的條件下，37℃下振蕩培養(yǎng)。三分鐘后加入用冰冷卻的乙醇以中止反應(yīng)。cAMP水平由市售酶免疫試劑盒(購于英國Amersham)測定兩次，在測定之前根據(jù)產(chǎn)品說明通過液相方法對反應(yīng)體系進行抽提。在另一個相關(guān)實驗中，白色念珠菌暴露于濃度為25、50和1×10-5M的雙脫氧腺苷(ddAdo，Sigma)2小時，再與α-MSH或其衍生物作用2小時。雙脫氧腺苷是蛋白抑制劑，抑制腺苷酸環(huán)化酶。采用與實施例II相同的方法測定毛喉萜和雙脫氧腺苷對白色念珠菌菌落形成的影響。
圖7表明α-MSH(1-13)(序列號4號)和(11-13)(序列號1號)可提高白色念珠菌內(nèi)cAMP含量，其cAMP的增加量與等摩爾毛喉萜誘導(dǎo)的增加量的數(shù)量級相同。圖8顯示與α-MSH(1-13)(序列號4號)和(11-13)(序列號1號)一樣，毛喉萜也明顯抑制白色念珠菌生長(與對照相比p＜0.01)。圖9表明雙脫氧腺苷能過扭轉(zhuǎn)α-MSH(1-13)(序列號4號)和(11-13)(序列號1號)對白色念珠菌生長的影響。
本實施例說明α-MSH及其衍生物抑制白色念珠菌和其它微生物生長的作用最可能是通過增加cAMP水平實現(xiàn)的，cAMP含量的提高抑制mRNA和蛋白合成(參閱Bhattacharya A.等，《cAMP對白色念珠菌RNA和蛋白合成的作用》(Effect of Cyclic AMP on RNAand Protein Synthesis in Candida albicans)，《生化與生理研究通訊》(Biochem.Biophysics.Res.Commun.)771483-44(1997))。實施例VII本實施例闡明α-MSH或其衍生物抑制人體細胞內(nèi)病毒復(fù)制的能力，或者更確切地說，闡明α-MSH抑制慢性感染的人單核細胞內(nèi)HIV-1病毒的復(fù)制和表達。
HIV-1慢性感染的幼單核細胞U1細胞系是潛伏型單核細胞HIV感染的體外模型。這些細胞攜帶兩套整合的HIV原病毒拷貝，HIV的基本表達較低。但是，根據(jù)RNA轉(zhuǎn)錄、p24抗原或逆轉(zhuǎn)錄酶釋放等測定的病毒復(fù)制可以被不同的刺激活化，如TNF-α、IL-6、IL-10、PMA或細胞擁擠狀態(tài)。
上述細胞置于由完全培養(yǎng)基(含有10毫摩爾Hepes的RPMI1640培養(yǎng)基)、包含2毫摩爾L-谷氨酸(Sigma-Aldrich)、10％熱滅活的FCS(美國猶他州Logan的Hyclone實驗室提供)、100單位/毫升的青霉素和100微克/毫升的鏈霉素(紐約，Grand Island，Gibco實驗室提供)，組成的培養(yǎng)基中維持對數(shù)期生長，以觀察α-MSH和/或其衍生物對HIV復(fù)制的影響。首次的試驗性實驗用來確定上述培養(yǎng)條件下的最佳細胞密度、刺激物濃度HIV-1p24抗原生成的動力學(xué)。在使用前，用HBSS沖洗細胞三次以去除細胞外病毒。然后在濃度為10-15-10-4摩爾范圍的α-MSH(1-13)(序列號4號)或(11-13)(序列號1號)存在或缺乏的條件下，將細胞以2×105/毫升的密度(1毫升的最終體積)鋪于24孔的平底培養(yǎng)皿，培養(yǎng)皿中只有培養(yǎng)基或加入TNF-α(10毫微克/毫升)(英國英格蘭牛津R&D系統(tǒng)提供)。
在進一步的實驗中，U1細胞中單獨加入濃度為10-5M的α-MSH(11-13)(序列號1號)，這些細胞是經(jīng)過TNF-α(10毫微克/毫升)、IL-6(20毫微克/毫升)、IL-10(20毫微克/毫升)(英國英格蘭牛津的R&D系統(tǒng)提供)、PMA(1毫微克/毫升)(Sigma-Aldrich)或細胞擁擠刺激的。將密度為2×105/毫升的U1細胞在37℃、5％CO2的條件下不更換培養(yǎng)基培養(yǎng)7天，細胞即可達到擁擠狀態(tài)。由細胞因子或PMA激活的培養(yǎng)只能持續(xù)48小時。然后離心以分離上清液，采用市售ELISA試劑盒(美國紐約Buffalo的細胞實驗產(chǎn)品有限公司生產(chǎn))檢測p24抗原，采用市售逆轉(zhuǎn)錄酶ELISA反向分析試劑盒(瑞典Lund Innovagen生產(chǎn))檢測逆轉(zhuǎn)錄酶的釋放。對于所有這些實驗，在第一天加入α-MSH(11-13)(序列號1號)，每一種條件下的結(jié)果的測定均重復(fù)三次。
圖10表明α-MSH(1-13)(序列號4號)和(11-13)(序列號1號)在較大濃度范圍內(nèi)明顯抑制TNF-α刺激的U1細胞的p24抗原釋放。對于上述二種肽最有效的濃度均是10-5M，分別產(chǎn)生52.7％和56.0％的抑制效應(yīng)。圖11表明α-MSH(11-13)(序列號1號)也抑制IL-6、IL-10、PMA或細胞擁擠狀態(tài)誘導(dǎo)的U1細胞的p24抗原和逆轉(zhuǎn)錄酶釋放。此外，圖12表明，根據(jù)Northern印記分析的測定結(jié)果，α-MSH(11-13)(序列號1號)還可以抑制PMA刺激的U1細胞的剪切和未剪切HIV-1 RNA的轉(zhuǎn)錄。
由此本實施例說明α-MSH或其衍生物能夠抑制由TNF-α、IL-6和IL-10途徑誘導(dǎo)的病毒基因的轉(zhuǎn)錄。
U1細胞的培養(yǎng)方法與實施例VII中所述的類似。采用親和純化的兔抗α-MSH抗體(瑞典，Malmo，Euro-Diagnostica提供)阻斷U1細胞內(nèi)源性α-MSH的產(chǎn)生，此抗體對介質(zhì)以1∶250稀釋。對照抗體選用同等稀釋度的兔IgG?？功?MSH抗體和對照抗體處理的細胞(2×105/毫升)在培養(yǎng)基或PMA(1毫微克/毫升)中共同培養(yǎng)。37℃培養(yǎng)48小時后，分離上清液并檢測p24抗原的釋放。在擁擠狀態(tài)實驗中，U1細胞的培養(yǎng)同上述方法，抗α-MSH抗體和對照IgG在第一天加入，第七天收集上清液。
圖13表明在靜止狀態(tài)、PMA誘導(dǎo)狀態(tài)、或U1細胞擁擠狀態(tài)，阻斷α-MSH會明顯增加p24抗原的釋放。本實施例強有力地提示病毒復(fù)制受α-MSH的影響。
取20×106個U1細胞(在完整培養(yǎng)基中密度為2×105/毫升)制備核提取物，以測定NF-κB活性水平，其中U1細胞先在濃度為10-5M的α-MSH(11-13)(序列號1號)存在或缺失的條件下用TNF-α(20毫微克/毫升)刺激4小時。用冷PBS沖洗細胞一次，緩沖液A(10毫摩爾Hepes(pH7.9)，1.5毫摩爾MgCl2，10毫摩爾KCl，0.5毫摩爾PMSF和0.5毫摩爾DTT)沖洗兩次，離心，置于冰上，在加入0.1％NP-40的緩沖液A中培養(yǎng)10分鐘。隨后，棄去上清液，核碎片懸浮于15微升的緩沖液C(20毫摩爾Hepes(pH7.9)，1.5毫摩爾MgCl2，0.42摩爾KCl，0.2毫摩爾EDTA，25％甘油，0.5毫摩爾PMSF和0.5毫摩爾DTT)中，冰上培養(yǎng)15分鐘，混勻，離心。用75微升標定的緩沖液D(20毫摩爾Hepes(pH7.9)，0.05毫摩爾KCl，0.2毫摩爾EDTA，20％甘油，0.5毫摩爾PMSF和0.5毫摩爾DTT)稀釋上清液，-80℃保存。結(jié)合反應(yīng)于室溫下進行10分鐘，反應(yīng)體系中含有10微克核提取蛋白和0.5毫微克32P標記的NF-κB(30,000cpm/微升)或者AP1混合于緩沖液A(12毫摩爾Tris-HCl(pH7.8)，60毫摩爾KCl，0.2毫摩爾EDTA和0.3毫摩爾DTT)，再加入10％甘油、2微克/毫升牛血清白蛋白和1微克/毫升單鏈DNA(Pharmacia Biotech)。此研究中用于NF-κB的寡核苷酸有+GAT CCA AGG GGA CTT TCC GCTGGG GAC TTT CCA TG，和-GAT CCA TGG AAA GTC CCC AGCGGA AAG TCC CCT TG。每一個寡核苷酸退火與其互補結(jié)合，并且用多聚核苷酸酶在末端標記32P-γ-ATP。為了確定特定鏈，在與標記探針溫浴之前，核提取物先與100倍過量的未標記探針溫浴五分鐘。然后，混合物在1x TBE條件下，于5％(30∶1)聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳，再將凝膠干燥，進行放射自顯影。
圖14表明TNF-α明顯增強NF-κB的結(jié)合活性，但是與濃度為10-5M的α-MSH(11-13)(序列號1號)共同培養(yǎng)明顯降低NF-κB的活化。但是α-MSH(11-13)(序列號1號)并不改變靜止細胞NF-κB的活化。此現(xiàn)象說明α-MSH和/或其衍生物通過調(diào)控NF-κB的結(jié)合而抑制病毒復(fù)制和表達。
病毒物質(zhì)的復(fù)制通常依賴被感染細胞的活化狀態(tài)，受病毒和宿主的相互作用調(diào)控。這些宿主因素可能包括TNF-α和其它細胞因子，如白介素。與HIV-1感染和活化類似，單純皰疹病毒(HSV)在宿主細胞因子作用下也可以從潛伏狀態(tài)活化。例如，TNF-α和IL-6，但不包括IL-1和IL-3，已經(jīng)確定可以活化HSV感染。用抗IL-6抗體中和IL-6可明顯抑制HSV的活化，相比之下中和α或β干擾素卻沒有影響。(參閱Baker，M.等，《白介素-6和單純皰疹病毒1型的關(guān)系對行為和免疫病理的提示》(The Relationshipbetween Interleukin-6 and Herpes Simple virus Type-1Implications forBehavior and Immunopathology)，《大腦行為免疫》(BrainBehav.Immunol.)13(3)201-11(1999)；Noisakran S.等，《體外移植的潛伏感染的三叉神經(jīng)節(jié)中HSV-1活化過程中淋巴細胞延遲動力學(xué)》(Lymphocytes Delay Kinetics of HSV-1 Reactivation fromin vitro Explanes of Latent Infected Trigeminal Ganglia)，《神經(jīng)免疫學(xué)雜志》(J.Neuroimmunol.)95(1-2)126-35(1999)；Walev，I.等，《TNF-α對小鼠三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)潛伏單純皰疹病毒的復(fù)活和復(fù)制的增強作用》(Enhancement by TNF-α of Reactivation andReplication of Latent Herpes Simplex Virus from Trigeminal Ganglia ofMice)，《病毒學(xué)文獻》(Arch.Virol.)140(6)987-92(1995)；Domk-Optize，I.等，《內(nèi)源性毒素刺激巨噬細胞導(dǎo)致持續(xù)單純皰疹病毒感染的復(fù)活》(Stimulation of Macrophages by Endotoxin Results inthe Reactivation of a Persistent Herpes Simplex Virus Infection)，《斯堪的納維亞免疫雜志》(Scand.J.Immunol.)32(2)69-75(1990)；Fauci，A.S.，《HIV所致疾病發(fā)病機理中宿主因子的作用》(HostFactors in the Pathogenesis of HIV-induced Disease)，《自然》(Nature)384529(1996))。
TNF-α或包括HSV在內(nèi)的病毒感染可以導(dǎo)致IκB的靶向損害，后者又可活化NF-κB的核轉(zhuǎn)位。核轉(zhuǎn)位促進NF-κB與DNA操縱子的結(jié)合，從而促進大量炎癥因子的轉(zhuǎn)錄，包括TNF-α、IL-6和其它細胞因子。這些細胞因子的表達又進一步復(fù)活其它HSV感染的細胞以產(chǎn)生HSV病毒(參閱Patel，A.等，《單純皰疹病毒I型對持續(xù)NF-κB核轉(zhuǎn)位的誘導(dǎo)提高病毒復(fù)制的效率》(HerpesSimplex Virus Type-1 Induction of Persistent NF-κB NuclearTranlocation Increases the Efficiency of Virus Replication)，《病毒學(xué)》(Virology)247(2)212-22(1998))。
因此，α-MSH和/或其衍生物通過阻斷NF-κB的結(jié)合抑制更多活化HSV的炎癥性細胞因子的表達。本實施例以及實施例VII-VIII表明α-MSH和/或其衍生物抑制病毒復(fù)制、表達和復(fù)活，此作用是通過抑制機體細胞因子或其它病毒感染誘發(fā)的NF-κB的結(jié)合而實現(xiàn)的。實施例X本實施例闡明α-MSH和/或其衍生物抑制急性感染人體細胞內(nèi)病毒復(fù)制的能力，或者更確切地說，闡明α-MSH抑制實際感染的人外周血單核細胞(PBMCs)內(nèi)HIV-1復(fù)制和表達的能力。
采用Ficoll-Hypaque密度梯度離心分離來自正常個體的PBMCs。單核細胞由Percoll梯度分離，然后選取24孔組織培養(yǎng)板，在加入20％FCS的RPMI完全培養(yǎng)基內(nèi)使其分化7天，成為巨噬細胞(MDM)，細胞密度為106/毫升。用嗜單核細胞的HIVB α-1株(1∶10)感染MDM，過夜。未稀釋的病毒群包含107個感染單位/毫升。24小時后，沖洗MDM并將其重新懸浮于完整介質(zhì)中。一周更換三次，連續(xù)三周。采用市售ELISA Retrosys RT試劑盒(瑞典lund Innovagen生產(chǎn))，感染后每周測定反轉(zhuǎn)錄酶的釋放量。HIV感染時及其后的每一天加入10-5M的α-MSH(11-13)(序列號1號)，直到最后采樣。
圖15表明α-MSH明顯抑制急性感染的MDM中逆轉(zhuǎn)錄酶的釋放。此抑制效應(yīng)在第6天更顯著，但第21天仍有統(tǒng)計學(xué)意義。
由此本實施例說明感染部位的病毒復(fù)制可以被α-MSH和/或其衍生物抑制。所以，通常性傳播疾病，尤其是HIV，可以通過α-MSH和/或其衍生物與避孕工具的結(jié)合運用而被抑制，避孕工具如用于性交的避孕套、隔膜、海綿和/或性交后所用的含α-MSH和/或其衍生物的栓劑、油脂、油膏、凝膠或氣溶膠泡沫。實施例XI本實施例闡明α-MSH和/或其衍生物的生物學(xué)功能相當物。
雖然這里所述特定氨基酸序列是有效的，但對于熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員來說，很容易做到替換或去除氨基酸而不改變肽類的有效性。進一步來說，α-MSH序列的穩(wěn)定可以大幅度提高肽類活性，替換D-氨基酸構(gòu)型為L型可以提高或降低肽類活性。例如，α-MSH的穩(wěn)定類似物，[Nle4，D-Phe7]-α-MSH，其解熱作用是母體肽分子大約10倍有余。此物質(zhì)已知對黑素細胞和黑素瘤細胞有明顯的生物學(xué)活性。確切地說，在α-MSH(11-13)(序列號1號)的C-末端加入氨基酸能夠降低或加強解熱效應(yīng)。加入甘氨酸形成10-13序列(序列號5號)，可以略微減弱其效應(yīng)；形成9-13序列(序列號6號)，幾乎無解熱作用；而8-13序列(序列號7號)的解熱效應(yīng)強于11-13序列(序列號1號)。已知Ac-[D-K11]-α-MSH11-13-NH2具有和α-MSH(11-13)(序列號1號)的L型三肽相同的總體效應(yīng)。但是在三肽的12位以D-脯氨酸替換將導(dǎo)致其活性的喪失(參閱Holdeman，M.等，《一種有效α-MSH類似物的解熱活性》(Antipyretic Activity of a Potent α-MSH Analog)，《肽物質(zhì)》(Peptides)6,273-5(1985)；Deeter，L.B.等，《兔中樞給予α-MSH片斷的解熱特性》(Antipyretic Properties of centrally Administered α-MSH Fragments in the Rabbit)，《肽物質(zhì)》(Peptides)9,1285-8(1989)；Hiltz，M.E.，《α-MSH(11-13)類似物的抗炎活性立體化學(xué)改變的影響》(Anti-inflammatory Activity of α-MSH(11-13)AnalogsInfluences of Alterations in Stereochemistry)，《肽物質(zhì)》(Peptides)12,767-71(1991))。
生物學(xué)功能相當物也可通過替換具有近似親水值的氨基酸來獲得。例如，異亮氨酸和亮氨酸(親水指數(shù)分別是+4.5和+3.8)可以用來替換纈氨酸(親水指數(shù)為+4.2)，這樣仍可得到具有相似生物學(xué)功能的蛋白?？晒┻x擇的另一種方法針對親水指數(shù)為負值的氨基酸，如賴氨酸(-3.9)可用精氨酸(-4.5)替換，等等。一般而言，和被替換氨基酸親水指數(shù)差別在單位+/-1范圍內(nèi)的氨基酸能夠成功地進行替換。
此外，這些經(jīng)修飾的α-MSH和/或其衍生物的類似物也能夠象圖16中所描述的KPV二聚體一樣形成二聚體。
本實施例在醫(yī)生的判斷下適用，也可應(yīng)用于有陰莖、睪丸和/或尿道不適的男性病人。此外，α-MSH和/或其衍生物的局部治療也可不在醫(yī)生的指導(dǎo)下進行，而以非處方藥物形式使用。
上述實施例I-XII闡明了α-MSH和/或其衍生物的抗感染活性和應(yīng)用。其中引用數(shù)據(jù)的目的只是便于說明實施例，并不是把本發(fā)明局限于這些實施例范圍內(nèi)。應(yīng)該明了的是，對上述實施例的修改并不偏離本發(fā)明的精神。而且，這些實施例可單獨或聯(lián)合進行。
權(quán)利要求
1.一種泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)包括一種載體；至少一種多肽，包括選自KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)、或者前述任何生物學(xué)功能相當物的氨基酸序列；以及其中所述載體攜帶至少一種所述的多肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中至少一種多肽包括由權(quán)利要求1所述的任意氨基酸序列所形成的二聚體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述二聚體是KPV二聚體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、HFRWGKPV(序列號3號)、或者SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)位于至少一種多肽的C-末端。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)，包括至少一種D型氨基酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中至少一種多肽具有乙?；疦端、或酰胺化C端、或者二者兼有。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)進一步包括將所述載體涂敷于泌尿生殖系統(tǒng)疾病部位的敷料器。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的敷料器的一部分插入陰道、尿道、或直腸。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病為感染、炎癥，或二者兼有。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病包括泌尿生殖區(qū)域存在細菌或真菌所引起的疾病。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病包括泌尿生殖區(qū)域存在病毒在細菌或真菌所引起的疾病。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述泌尿生殖系統(tǒng)疾病由細菌感染、或真菌感染、或者二者混合感染引起。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病由病毒感染、細菌感染、真菌感染、或者三者的任意混合感染引起。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的細菌為革蘭氏染色陽性細菌。
15.根據(jù)權(quán)利要求10所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的細菌來自葡萄球菌屬。
16.根據(jù)權(quán)利要求10所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的細菌為金黃色葡萄球菌。
17.根據(jù)權(quán)利要求10所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的真菌為念珠菌屬。
18.根據(jù)權(quán)利要求10所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的真菌為白色念珠菌。
19.根據(jù)權(quán)利要求11所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的病毒為HIV。
20.根據(jù)權(quán)利要求10所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的病毒為HSV。
21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的發(fā)病部位在女性的生殖腔、或生殖器、或二者兼有。
22.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的發(fā)病部位在尿道。
23.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的發(fā)病部位在陰莖。
24.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的發(fā)病部位在直腸腸腔、或直腸區(qū)域，或二者兼有。
25.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病包括陰道炎。
26.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病包括膀胱炎或尿道炎。
27.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病包括陰莖頭包皮炎。
28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng)，其中所述的載體為油脂、藥膏、止痛香膏、氣溶膠泡沫、氣溶膠噴霧、或可溶性藥丸。
29.一種棉條包括吸收性材料；至少一種多肽，包括選自KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)、或者前述任意生物學(xué)功能相當物的氨基酸序列；以及其中吸收性材料與至少一種多肽相結(jié)合。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的棉條，其中至少一種多肽包含由權(quán)利要求29所述的任意氨基酸序列所形成的二聚體。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的棉條，其中所述的二聚體是KPV二聚體。
32.根據(jù)權(quán)利要求29所述的棉條，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、HFRWGKPV(序列號3號)、或者SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)位于至少一種所述的多肽的C-末端。
33.根據(jù)權(quán)利要求29所述的棉條，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)包括至少一種D型氨基酸。
34.根據(jù)權(quán)利要求29所述的棉條，其中至少一種多肽具有乙酰化N端、或酰胺化C端、或者二者兼有。
35.一種避孕工具包括屏障；與屏障相連的載體；至少一種多肽，包括選自KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)、或者前述任何生物學(xué)功能相當物的氨基酸序列；以及其中所述載體攜帶至少一種多肽。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的避孕工具，其中至少一種多肽包含權(quán)利要求35所述的任意氨基酸序列所形成的二聚體。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的避孕工具，其中所述的二聚體是KPV二聚體。
38.根據(jù)權(quán)利要求35所述的避孕工具，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、HFRWGKPV(序列號3號)、或SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)位于所述的至少一種多肽的C-末端。
39.根據(jù)權(quán)利要求35所述的避孕工具，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)包含至少一種D型氨基酸。
40.根據(jù)權(quán)利要求35所述的避孕工具，其中至少一種多肽具有乙?；疦端或酰胺化C端、或者二者兼有。
41.根據(jù)權(quán)利要求35所述的避孕工具，其中所述的屏障為避孕套、隔膜、或海綿。
42.一種栓劑包括載體；至少一種多肽，包括選自KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)、或者前述任何生物學(xué)功能相當物氨基酸序列；以及其中所述載體攜帶所述的至少一種多肽。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的栓劑，其中所述的至少一種多肽包含由權(quán)利要求42所述的任意氨基酸序列所形成的二聚體。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的栓劑，其中所述的二聚體是KPV二聚體。
45.根據(jù)權(quán)利要求42所述的栓劑，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、HFRWGKPV(序列號3號)、或者SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)位于至少一種多肽的C-末端。
46.根據(jù)權(quán)利要求42所述的栓劑，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)包含至少一種D型氨基酸。
47.根據(jù)權(quán)利要求42所述的栓劑，其中至少一種多肽具有乙?；疦端、或酰胺化C端、或者二者兼有。
48.治療泌尿生殖系統(tǒng)疾病的一種方法包括使用至少一種多肽，包括一種選自KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)、或者前述任何生物學(xué)功能相當物的氨基酸序列。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法進一步包括在泌尿生殖系統(tǒng)疾病的發(fā)病部位局部應(yīng)用至少一種多肽。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述的局部應(yīng)用通過栓劑、棉條或避孕工具實現(xiàn)。
51.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述的局部應(yīng)用通過油脂、藥膏、止痛香膏、膠體、氣溶膠泡沫、氣溶膠噴霧、或可溶性藥丸實現(xiàn)。
52.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中至少一種多肽包括由權(quán)利要求48所述的任意氨基酸序列所形成的二聚體。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，其中所述的二聚體是KPV二聚體。
54.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、HFRWGKPV(序列號3號)、或者SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)位于至少一種多肽的C-末端。
55.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述的氨基酸序列KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)包含至少一種D型氨基酸。
56.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中至少一種多肽具有乙?；疦端、或酰胺化C端、或者二者兼有。
57.預(yù)防中毒性休克綜合征的方法包括使用至少一種多肽，包括選自KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)、或者前述任意生物學(xué)功能相當物的氨基酸序列。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述的中毒性休克綜合征與金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的中毒性休克綜合征毒素-1有關(guān)。
59.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法進一步包括在陰道局部應(yīng)用至少一種多肽。
60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的方法，其中所述的局部應(yīng)用通過棉條實現(xiàn)。
61.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中至少一種所述的多肽與棉條結(jié)合。
62.一種預(yù)防性傳播疾病引發(fā)感染的方法包括使用與至少一種多肽結(jié)合的避孕工具，其中多肽包括選自KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)、或者前述任意生物學(xué)功能相當物的氨基酸序列。
63.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中所述避孕工具為避孕套、隔膜、或海綿。
64.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述至少一種多肽由所述的避孕套上所用的潤滑劑攜載。
65.處理耐抗生素微生物的方法包括使用至少一種多肽，包括選自KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)、或者前述任意生物學(xué)功能相當物的氨基酸序列。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療泌尿生殖系統(tǒng)疾病的方法。一方面涉及由一種或多種多肽組成的、用于泌尿生殖系統(tǒng)疾病的治療系統(tǒng),其中多肽的氨基酸序列包括KPV(序列號1號)、MEHFRWG(序列號2號)、HFRWGKPV(序列號3號)、SYSMEHFRWGKPV(序列號4號)。一種或多種多肽也可以通過上述氨基酸序列形成二聚體。泌尿生殖系統(tǒng)疾病包括感染、炎癥、或者二者兼有。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中,泌尿生殖系統(tǒng)疾病包括陰道、外陰、尿道、陰莖、和/或直腸的感染、和/或炎癥。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施例中,一種或多種多肽溶于載體內(nèi)。而另一個優(yōu)選實施例中,一種或多種多肽與棉條結(jié)合,用來預(yù)防中毒性休克綜合征。在另一個優(yōu)選實施例中,一種或多種多肽與避孕工具結(jié)合,以防止性傳播疾病或感染。在一個優(yōu)選實施例中,一種或多種多肽與栓劑結(jié)合,以便于插入陰道或肛門。
文檔編號A61P31/00GK1359300SQ00807953
公開日2002年7月17日 申請日期2000年3月23日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月24日
發(fā)明者詹姆斯·利普頓, 安娜·卡塔尼亞 申請人:曾根公司