專利名稱：可有效對(duì)抗c型肝炎病毒的巨環(huán)肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于治療C型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、組合物、這類化合物的制劑，以及方法。特別是，本發(fā)明提供新穎的肽類似物、含有這類類似物的藥物組合物，以及使用這些類似物治療HCV感染的方法。
發(fā)明的背景C型肝炎病毒(HCV)是遍及全世界的輸血后和社會(huì)-后天性非-A非-B型肝炎的主要病原。估計(jì)全世界超過1億7千萬的人被該病毒感染。高百分比的帶源者變成慢性感染，且有許多進(jìn)展至慢性肝病，所謂的慢性C型肝炎。這群轉(zhuǎn)而成為一嚴(yán)重肝病的高危險(xiǎn)群，如肝硬變、肝細(xì)胞癌，及導(dǎo)致死亡的最終的肝病。
尚未徹底闡明HCV形成病毒持久性并引起高比率的慢性肝病的機(jī)制。不知道HCV如何與宿主的免疫系統(tǒng)相互作用并回避它。此外，也未建立細(xì)胞和體液的免疫反應(yīng)在對(duì)抗HCV感染和疾病的保護(hù)作用中所起的作用。已有報(bào)導(dǎo)預(yù)防與輸血有關(guān)的病毒性肝炎的免疫球蛋白，然而，疾病控制中心(Center for Disease Control)目前并不建議適合該目的的免疫球蛋白治療。缺乏有效的保護(hù)性免疫反應(yīng)，阻礙了疫苗或適當(dāng)?shù)慕佑|后的預(yù)防措施的發(fā)展，所以在短期內(nèi)，希望堅(jiān)定地寄托在抗病毒的干涉上。
為了確認(rèn)能夠在患有慢性C型肝炎的患者中，有效地治療HCV感染的藥學(xué)制劑，已經(jīng)進(jìn)行了各種臨床的研究。這些研究涉及單獨(dú)和與其他的抗病毒制劑混合使用的干擾素-α。這類研究表明，相當(dāng)多的參與者對(duì)該治療沒有反應(yīng)，且產(chǎn)生有利反應(yīng)的那些，發(fā)現(xiàn)大部分在終止治療后有復(fù)發(fā)。
直到數(shù)年前，干擾素(IFN)是唯一證實(shí)有利并核準(zhǔn)在臨床上用于慢性C型肝炎患者的有用治療。然而，持續(xù)的反應(yīng)率低，且干擾素治療也引起嚴(yán)重的副作用(也就是視網(wǎng)膜病變、甲狀腺炎、急性胰腺炎、抑郁)，減少受治療的患者的生活品質(zhì)。最初對(duì)于對(duì)單獨(dú)干擾素?zé)o反應(yīng)的患者，核準(zhǔn)干擾素與三唑核苷(ribavirin)的組合。目前已經(jīng)核準(zhǔn)供先天患者使用，且目前被選定在HCV治療中的黃金標(biāo)準(zhǔn)。然而，使用該組合治療并未減輕由IFN引起的副作用。
因此，需要發(fā)展可用來治療HCV感染，并克服現(xiàn)有藥物治療的限制的有效的抗病毒制劑。
HCV是在黃熱病毒科中有被膜的正股RNA病毒。單股的HCVRNA基因的長(zhǎng)度約為9500個(gè)核苷酸，并具有單一的可讀框(ORF)，編碼一個(gè)約3000個(gè)氨基酸的單獨(dú)的大的多蛋白。在被感染的細(xì)胞中，該多蛋白在多處被細(xì)胞和病毒的蛋白酶切開，產(chǎn)生結(jié)構(gòu)和非-結(jié)構(gòu)(NS)的蛋白質(zhì)。在HCV的情況中，通過兩個(gè)病毒的蛋白酶完成成熟非結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)的產(chǎn)生。第一個(gè)，到現(xiàn)在為止尚未完全地表征，在NS2-NS3接合處切開；第二個(gè)包含在NS3的N-終端區(qū)內(nèi)的絲氨酸蛋白酶(下面稱為NS3蛋白酶)，并以順式，在NS3-NS4A切割位置，和反式，剩下的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位置，調(diào)節(jié)NS3下游所有后續(xù)的切開作用。NS4A蛋白質(zhì)似乎擔(dān)任多種功能，作為NS3蛋白酶的輔因子，并可能有助于NS3和其他病毒復(fù)制酶(replicase)成份在膜上定位。NS3蛋白質(zhì)與NS4A的復(fù)合物形成，似乎對(duì)于使事件進(jìn)行是必要的，在所有的位置上促進(jìn)了蛋白水解的效力。NS3蛋白質(zhì)也顯示出核苷三磷酸酶和RNA解旋酶的活性。NS5B是RNA-依賴性RNA聚合酶，它涉及HCV的復(fù)制。
專利申請(qǐng)案WO 97/06804描述核苷類似物胞嘧啶-1，3-噁噻烷(oxathiolane)(亦稱為3TC)的(-)對(duì)映體，具有對(duì)抗HCV的活性。雖然在先前對(duì)抗HIV和HBV的臨床試驗(yàn)中報(bào)導(dǎo)該化合物是安全的，但在臨床上尚未證實(shí)對(duì)HCV具有活性，且尚未報(bào)導(dǎo)其對(duì)抗病毒的作用機(jī)制。
發(fā)展抗病毒制劑的一般策略為使復(fù)制病毒所必需的病毒編碼的酶失活。
在這種性情下，極為努力地發(fā)現(xiàn)抑制HCV的NS3蛋白酶或RNA解旋酶的化合物，導(dǎo)致下列的發(fā)現(xiàn)美國專利5,633,388描述了具有對(duì)抗HCV的活性的雜環(huán)-取代的羧酰胺和類似物。這些化合物針對(duì)病毒的NS3蛋白質(zhì)的解旋酶活性，但尚未報(bào)導(dǎo)臨床測(cè)試。
已經(jīng)由Chu等人(Tet.Lett.，(1996)，7229-7232)報(bào)導(dǎo)了菲醌具有在體外對(duì)抗HCV NS3蛋白酶的活性。但并未報(bào)導(dǎo)該化合物的進(jìn)一步的發(fā)展。
在第九次抗病毒研究的國際會(huì)議(Ninth International Conference onAntiviral Research)，Urabandai，F(xiàn)ukyshima，日本(1996)(Antiviral Research，(1996)，30，1，A23(摘要19))中提供的論文，報(bào)導(dǎo)噻唑烷衍生物是HCV蛋白酶的抑制劑。
幾個(gè)研究已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了抑制其他絲氨酸蛋白酶的化合物，如人類白血球彈性蛋白酶。在WO 95/33764(Hoechst Marion Roussel，1995)中報(bào)導(dǎo)了一組這些化合物。在該申請(qǐng)案中公開的肽為嗎啉基羰基-苯甲?；?肽類似物，其在結(jié)構(gòu)上與本發(fā)明的肽不同。
得自Vertex Pharmaceuticals Inc.的WO 98/17679公開了絲氨酸蛋白酶的抑制劑，特別是對(duì)C型肝炎病毒NS3蛋白酶的抑制劑。
Hoffman LaRoche(WO 98/22496；美國專利5,866,684和美國專利6,018,020)亦已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了六肽，它可用于作為治療HCV感染的抗病毒劑的蛋白酶抑制劑。
Steinkuhler等人和Ingallinella等人已經(jīng)發(fā)表了對(duì)NS4A-4B產(chǎn)物的抑制作用(Biochemistry(1998)，37，8899-8905和8906-8914)。
Schering Corporation的WO 97/43310揭示了具有對(duì)抗HCV NS3蛋白酶的活性的20和21個(gè)氨基酸的肽序列。
Emory University的WO 98/46597揭示了在體外具有對(duì)抗絲氨酸蛋白酶的活性的肽和肽類似物。
Peptide Therapeutics Limited的WO 98/46630揭示縮肽(depsipeptide)基質(zhì)抑制了HCV NS3蛋白酶。
最后，美國專利5,869,253揭示抑制HCV NS3蛋白酶的酶促PNA分子。
上述的現(xiàn)有專利申請(qǐng)案中，沒有任何一個(gè)提出環(huán)肽具有對(duì)抗C型肝炎病毒NS3蛋白酶的活性和選擇性。
WO 99/07733、WO 99/07734、WO 00/09543和WO 00/09558揭示抑制NS3蛋白酶的六至四-肽和三肽類似物。然而，這些公開內(nèi)容并未提出或引導(dǎo)設(shè)計(jì)出本發(fā)明的巨環(huán)類似物。
Institute de Richerche di Biologia Moleculare(IRBM)在1999年8月5日發(fā)表的WO 99/38888，揭示HCV NS3蛋白酶的小肽抑制劑。在該公開內(nèi)容中并沒有提出或指出本發(fā)明的肽的環(huán)狀性質(zhì)。此外，該P(yáng)CT申請(qǐng)案在本發(fā)明的優(yōu)先日期之后發(fā)表。
IRBM的WO 99/64442也在本發(fā)明的優(yōu)先日期之后發(fā)表，揭示在PI處帶有酮酸的低聚肽。
Vertex Pharmaceuticals(在1999年10月7日發(fā)表)的WO 99/50230，也在本發(fā)明的優(yōu)先日期之后發(fā)表。甚至以后，該出版物并未輕微地暗示本發(fā)明的任何環(huán)肽。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)為其提供的巨環(huán)肽，可抑制C型肝炎病毒的NS3蛋白酶。
本發(fā)明的一個(gè)觀點(diǎn)的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，在于這些肽特異性地抑制NS3蛋白酶，且對(duì)其他的絲氨酸蛋白酶，如人類白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)、豬胰腺彈性蛋白酶(PPE)或牛胰腺胰凝乳蛋白酶，或半胱氨酸蛋白酶，如人類肝臟組織蛋白酶B(Cat B)，并未顯示明顯的抑制活性的事實(shí)。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)為其提供了低分子量的小肽，它能夠透過細(xì)胞膜，并在細(xì)胞培養(yǎng)中抑制NS3蛋白酶的活性。
此外，本發(fā)明化合物的再一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，在于在臨床分離物中發(fā)現(xiàn)其在兩種主要的基因型中是有活性的(1a&1b)的事實(shí)，強(qiáng)烈地提出這些化合物將具有對(duì)抗所有目前已知的HCV基因型的活性。
發(fā)明概述包含在本發(fā)明范圍內(nèi)的式(I)化合物 其中W為CH或N，R21為H、鹵素、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C3-6環(huán)烷氧基、羥基或N(R23)2，其中每個(gè)R23分別為H、C1-6烷基或C3-6環(huán)烷氧基；且R22為H、鹵素、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基；C1-6鹵代烷基、C1-6硫烷基、C1-6烷氧基、C3-6環(huán)烷氧基、C2-7烷氧烷基、C3-6環(huán)烷基、C6或10芳基或Het，其中Het為五-、六-或七-員、飽和或不飽和的雜環(huán)，含有一至四個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子；以R24取代該環(huán)烷基、芳基或Het，其中R24為H、鹵素、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C1-6烷氧基、C3-6環(huán)烷氧基、NO2、N(R25)2、NH-C(O)-R25；或NH-C(O)-NH-R25，其中每個(gè)R25分別為H、C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；或R24為NH-C(O)-OR26，其中R26為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；R3為羥基、NH2或式-NH-R31的基團(tuán)，其中R31為C6或C10芳基、雜芳基、-C(O)-R32、-C(O)-OR32或-C(O)-NHR32，其中R32為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；D為5至10個(gè)原子的飽和或不飽和的亞烷基鏈，可視需要含有一至三個(gè)雜原子，分別選自O(shè)、S或N-R41，其中R41為H、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或-C(O)-R42，其中R42為C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或C6或10芳基；R4為H或是在該鏈D的任一個(gè)碳原子上的一至三個(gè)取代基，該取代基分別選自C1-6烷基、C1-6鹵烷基、C1-6烷氧基、羥基、鹵素、氨基、橋氧基、硫代或C1-6硫烷基，且A為式-C(O)-NH-R5的酰胺，其中R5選自C1-8烷基、C3-6環(huán)烷基、C6或10芳基或C7-16芳烷基；或A為羧酸或其在藥物上可接受的鹽或酯。
包含有效對(duì)抗-C型肝炎病毒含量的式I化合物，或其在治療上可接受的鹽或酯，與在藥學(xué)上可接受的載劑介質(zhì)或助劑混合的藥物組合物，都包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的一項(xiàng)重要方面，涉及在哺乳動(dòng)物中，通過對(duì)該哺乳動(dòng)物給予有效對(duì)抗-C型肝炎病毒的含量的式I化合物，或其在治療上可接受的鹽或酯，或上述組合物，以治療C型肝炎感染的方法。
另一項(xiàng)重要方面，涉及通過使病毒暴露在抑制C型肝炎NS3蛋白酶的含量的式I化合物，或其在治療上可接受的鹽或酯，如上述的組合物之下，以抑制C型肝炎病毒復(fù)制的方法。
其他的方面則涉及在哺乳動(dòng)物中，通過對(duì)其給予有效對(duì)抗C型肝炎病毒的含量的式I化合物，或其在治療上可接受的鹽或酯的組合，來治療C型肝炎病毒感染的方法。根據(jù)一個(gè)具體實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物組合物包括另外的免疫調(diào)節(jié)劑。另外的免疫調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括但不限于α-、β-和δ-干擾素。
根據(jù)另一個(gè)具體實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物組合物也可另外包括抗病毒劑?？共《緞┑膶?shí)例包括三唑核苷和金剛胺。
根據(jù)另一個(gè)具體實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物組合物可另外包括其他的HCV蛋白酶抑制劑。
根據(jù)另一具體實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物組合物可另外包括對(duì)HCV生活循環(huán)中其他標(biāo)靶的抑制劑，像是解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶或IRES。
優(yōu)選的實(shí)施方案的詳細(xì)說明定義當(dāng)用于本文中時(shí)，除非另行提及，均適用下列的定義關(guān)于實(shí)例，其中使用(R)或(S)以指示取代基的絕對(duì)構(gòu)型，例如式I化合物的R4，在整個(gè)化合物的前后關(guān)聯(lián)中都表示，并非在單獨(dú)取代基的前后關(guān)聯(lián)中表示。
在本文中使用“P1、P2、P3等等”標(biāo)識(shí)時(shí)，意指從肽類似物的C-終端開始，并朝向N-終端延伸的氨基酸殘基的位置(也就是說，P1代表從C-終端開始的第1個(gè)位置，P2從C-終端開始的第2個(gè)位置，等等)(參見Berger A.&Schechter I.，Transactions ofthe Royal Society London series B257，249-264(1970))。
當(dāng)在本文中使用“1-氨基環(huán)丙基-羧酸”(ACCA)一詞時(shí)，意指式 的化合物。
當(dāng)在本文中使用“乙烯基-ACCA”一詞時(shí)，意指式 的化合物。
當(dāng)在本文中使用“同-烯丙基-ACCA”一詞時(shí)，意指式 的化合物。
當(dāng)在本文中使用“鹵素”一詞時(shí)，意指選自溴、氯、氟或碘的鹵素取代基。
本文中所使用的“C1-6鹵烷基”一詞，在本文中單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指非環(huán)狀的、直鏈或支鏈的烷基取代基，含有1至6個(gè)碳原子，具有一或多個(gè)選自溴、氯、氟或碘的鹵素取代的氫。
本文中所使用的“C1-6硫烷基”一詞，在本文中單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指非環(huán)狀的、直鏈或支鏈的烷基取代基，含有硫醇基團(tuán)，像如是硫丙基。
本文中所使用的“C1-6烷基”或“(低碳)烷基”一詞，單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指非環(huán)狀的、直鏈或支鏈的烷基取代基，含有1至6個(gè)碳原子，并包括例如甲基、乙基、丙基、丁基、己基、1-甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基、1，1-二甲乙基。
本文中所使用的“C3-6環(huán)烷基”一詞，單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指環(huán)烷基取代基，含有3至6個(gè)碳原子，并包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
“不飽和的環(huán)烷基”一詞包括例如取代基環(huán)己烯基 本文中所使用的“飽和或不飽和的亞烷基”一詞時(shí)，意指通過從飽和或不飽和的直鏈或支鏈的脂族烴的每一端中，移除一個(gè)氫原子而衍生的二價(jià)烷基取代基，并包括例如-CH2CH2C(CH3)2CH2CH2-、-CH2CH2CH＝CHCH2CH2-或-CH2C＝CCH2CH2-。該烷基鏈可視需要含有雜原子，如氧(例如CH3-CH2-O-CH2-)。
本文中所使用的“C1-6烷氧基”一詞時(shí)，單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指取代基-O-C1-6烷基，其中該烷基如同上文定義，含有高達(dá)6個(gè)碳原子。烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲乙氧基、丁氧基和1，1-二甲乙氧基。后者的取代通常稱為叔-丁氧基。
本文中所使用的“C3-6環(huán)烷氧基”一詞時(shí)，單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指取代基，含有3到6個(gè)碳原子的-O-C3-6環(huán)烷基。
本文中所使用的“C1-6烷氧烷基”一詞時(shí)，意指取代基C1-6烷基-O-C1-6烷基，其中該烷基如同上文的定義，含有高達(dá)6個(gè)碳原子。如甲氧甲基意指-CH2-O-CH3。
本文中所使用的“C2-7?；币辉~時(shí)，單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指通過羰基基團(tuán)連接的C1-6烷基，如-C(O)-C1-6烷基。
本文中所使用的“C6或C10芳基”一詞時(shí)，單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指含有6個(gè)碳原子的芳香族單環(huán)系統(tǒng)，或含有10個(gè)碳原子的芳香族雙環(huán)系統(tǒng)。例如，芳基包括苯基或萘基-環(huán)系統(tǒng)。
本文中所使用的“C7-16芳烷基”一詞時(shí)，單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指通過烷基基團(tuán)連接上文定義的芳基，其中該烷基如同上文的定義，含有1至6個(gè)碳原子。芳烷基包括例如芐基和丁苯基。
本文中所使用的“Het”一詞時(shí)，單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指通過從含有一至四個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子的五-、六-或七-員飽和或不飽和(包括芳香族)的雜環(huán)中，移除氫而衍生的單價(jià)取代基。適當(dāng)?shù)碾s環(huán)的實(shí)例包括四氫呋喃、噻吩、二氮雜、異噁唑、哌啶、二噁烷、嗎啉、嘧啶或
“Het”一詞也包括上文的定義的，與一或多個(gè)可以是雜環(huán)或任何其他環(huán)的其他環(huán)稠合的雜環(huán)。一個(gè)這類的實(shí)例包括噻唑并[4，5-b]-吡啶。
雖然通常包括在“Het”一詞之下，但在本文中所使用的“雜芳基”一詞時(shí)，精確地定義為不飽和的雜環(huán)，其雙鍵形成芳族系統(tǒng)。適當(dāng)?shù)碾s芳族系統(tǒng)的實(shí)例包括喹啉、吲哚、吡啶、 本文中所使用的“在藥物學(xué)上可接受的酯”一詞，單獨(dú)或與其他取代基混合使用時(shí)，意指式I化合物的酯，其中該分子的任何羧基官能基，優(yōu)選的是羧基終端，被烷氧羰基官能置換 其中該酯的R部分是選自烷基(如甲基、乙基、正-丙基、叔-丁基、正-丁基)；烷氧烷基(如甲氧甲基)；烷氧酰基(如乙酰氧基甲基)；芳烷基(如芐基)；芳氧烷基(如苯氧甲基)；芳基(如苯基)，可視需要以鹵素、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代。在Design ofprodurgs，Bundgaard，H.Ed.Elsevier(1985)中發(fā)現(xiàn)其他適當(dāng)?shù)那八庻ィ瑢⑵淞腥氡疚囊宰鲄⒖?。這類在藥學(xué)上可接受的酯類，通常在注射到哺乳動(dòng)物體內(nèi)時(shí)，在體內(nèi)被水解，并轉(zhuǎn)化成式I化合物的酸形式。
關(guān)于上述的酯類，除非另行指定，任何存在的烷基部分均有利地含有1至6個(gè)碳原子，特別是1至6個(gè)碳原子。任何存在于這類酯類中的芳基部分，均有利地包括苯基基團(tuán)。
特別是該酯可以是C1-16烷基酯、未經(jīng)取代的芐基酯，或以至少一個(gè)鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基或三氟甲基取代的芐基酯。
本文中所使用的“在藥學(xué)上可接受的鹽”一詞時(shí)，包括由在藥學(xué)上可接受的堿類衍生的那些。適當(dāng)?shù)膲A的實(shí)例包括膽堿、乙醇胺和乙二胺。也企圖將Na+、K+和Ca++鹽類包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)(亦參見Pharmaceutical salts，Birge，S.M.等人，J.Pharm.Sci.，(1977)，66，1-19，列入于本文以作為參考)。優(yōu)選的方案R1本發(fā)明的優(yōu)選方案包括上述的式I化合物，其中R1部分選自2個(gè)不同的非對(duì)映異構(gòu)體，其中具有R構(gòu)型的1-碳中心，具有以結(jié)構(gòu)(i)和(ii)表示的構(gòu)型 D與酰胺同側(cè)(i)或D與A同側(cè)(ii)。
更優(yōu)選的是，以結(jié)構(gòu)(ii)表示的以與A同側(cè)的構(gòu)型連接R1的連結(jié)基D。R2本發(fā)明的優(yōu)選方案包括上述的式I化合物，其中R2部分為 其中W優(yōu)選是N。
優(yōu)選的是，R21為H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羥基、氯或N(R23)2，其中R23優(yōu)選是H或C1-6烷基。更優(yōu)選的是，R21為H或C1-6烷氧基。最佳的是R21為甲氧基。
優(yōu)選的是，R22為H、C1-6硫烷基、C1-6烷氧基、苯基或選自下列的Het 的Het。
優(yōu)選的是，R24為H、C1-6烷基、NH-R25、NH-C(O)-R25或NH-C(O)-NH-R25或NH-C(O)-OR26。
更優(yōu)選的是，R22為C1-4烷氧基、苯基，或選自以下的Het 更優(yōu)選的是，R24為H、C1-6烷基、NH-R25、NH-C(O)-R25或NH-C(O)-OR26。
最優(yōu)選的是，R22為乙氧基或選自以下的Het， 最佳的是，R24a為NH-R25、NH-C(O)-R25或NH-C(O)-OR26。最佳的是，R24b為H或C1-6烷基。
優(yōu)選的是每個(gè)R25分別為H、C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基。更優(yōu)選的是，R25為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基。更佳的是R25為C1-6烷基。優(yōu)選的是，R26為C1-6烷基。R3本發(fā)明的優(yōu)選方案包括如上述的式I化合物，其中R3部分優(yōu)選是式NH-C(O)-R32的酰胺、式NH-C(O)-NH-R32的脲，或式NH-C(O)-OR32的氨基甲酸酯。更佳的是R3為氨基甲酸酯或脲。最佳的是R3為氨基甲酸酯。優(yōu)選的是R32為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基。更優(yōu)選的是R32為C1-6烷基或C4-6環(huán)烷基。最佳的是R32為叔-丁基、環(huán)丁基或環(huán)戊基。D本發(fā)明的優(yōu)選的方案包括式I化合物，其中交聯(lián)劑D為6至8個(gè)原子的飽和或不飽和的亞烷基鏈。更佳的是，連結(jié)基D為7個(gè)原子的鏈。
較優(yōu)選的是，D鏈含有一或兩個(gè)選自O(shè)、S、NH、N-C1-6烷基或N-C2-7?；碾s原子。更優(yōu)選的是，D鏈可視需要含有一個(gè)選自NH或N-C2-7酰基的雜原子，最佳的是N(Ac)，并位在該鏈的原子10處。最好是該鏈含有飽和的氮原子。
另外，D含有一個(gè)選自O(shè)或S的雜原子。優(yōu)選的是，當(dāng)D的長(zhǎng)度為7個(gè)原子時(shí)，該O或S原子位在該鏈的位置9處。較優(yōu)選的是以R4取代該鏈，其中R4為H或C1-6烷基。更優(yōu)選的是，R4為H或甲基。最佳的是R4為H或8-(S)-Me。再更佳的是，D為飽和的?；蛘?，D在位置11、12處含有一個(gè)雙鍵。優(yōu)選的是，該雙鍵為反式的。
另外，D為所有的碳均飽和的或不飽和的亞烷基鏈。在這種情況下，D優(yōu)選是飽和的，且長(zhǎng)度為7個(gè)原子。較佳的是，以R4取代D，其中R4為H、橋氧基、硫代、羥基、硫烷基、烷氧基或烷基。較優(yōu)選的是，R4為H或C1-6烷基。最佳的是，R4為H或甲基。R4最好是H或10-(S)-Me。
另外，D為含有一個(gè)雙鍵的所有的碳亞烷基鏈，且長(zhǎng)度為7個(gè)原子。較優(yōu)選的是該雙鍵系位在該鏈的位置13、14處。最優(yōu)選的是，該雙鍵為順式的。優(yōu)選的是，以R4取代D鏈，其中R4為H、橋氧基、羥基、烷氧基或烷基。更優(yōu)選的是，R4為H或C1-6烷基。更優(yōu)選的是，R4為H或甲基。最佳的是，R4為H或10-(S)-Me。A本發(fā)明的優(yōu)選方案包括上述的式I化合物，其中A為羧酸。特定的具體方案本發(fā)明的優(yōu)選方案包括上述的式I化合物，其中R2為喹啉取代基(也就是W為N)；R3為式-NH-C(O)-NHR32或-NH-C(O)-OR32的基團(tuán)，其中R32為C1-4烷基或C4-6環(huán)烷基；D為6至8個(gè)原子的飽和或不飽和的亞烷基鏈，以與A同側(cè)的構(gòu)型與R1連接，可視需要含有一或兩個(gè)，分別選自O(shè)、S或N-R41的雜原子，其中R41為C2-7酰基；R4為H或一至三個(gè)分別選自羥基或C1-6烷基的取代基；且A為羧酸或其在藥學(xué)上可接受的鹽或酯。
更佳的是其中R1如同上文的定義；R21為H或甲氧基；R22為C1-6烷氧基，或選自以下的Het； 其中R24a為H、C1-6烷基、NH-R25、NH-C(O)-R25、NH-C(O)-MH-R25，其中R25為H、C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；或R24a為NH-C(O)-OR26，其中R26為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；且R24b為H或C1-6烷基；R3為式NH-C(O)-NHR32的脲，或式NH-C(O)-OR32的氨基甲酸酯，其中R32為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；D為C7-原子的飽和或不飽和的亞烷基鏈，可視需要在位置11、12或13、14處含有一個(gè)雙鍵；該D鏈可視需要含有一個(gè)選自O(shè)、S、NH、N(Me)或N(Ac)的雜原子；且R4為H或C1-6烷基。
最佳的是，其中R21為甲氧基，且R22為乙氧基或 其中R24a為NH-(C1-4烷基)、NH-C(O)-(C1-4烷基)或NH-C(O)-O-(C1-4烷基)；且D為飽和的，或在位置13、14處含有一個(gè)順式雙鍵的式I化合物。
最后，所有在表1至9中提供的式I化合物，均包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的藥物組合物可口服、非經(jīng)腸胃或通過植入的儲(chǔ)存器投藥。口服投藥或通過注射投藥是優(yōu)選的。本發(fā)明的藥物組合物可含有任何傳統(tǒng)上無毒性的在藥學(xué)上可接受的載劑、助劑或賦形劑。在一些情況下，可利用在藥學(xué)上可接受的酸、堿或緩沖溶液來調(diào)節(jié)調(diào)配物的pH值，以便促進(jìn)調(diào)配化合物或其遞送形式的穩(wěn)定性。本文中所用的腸胃外一詞，包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)和病灶內(nèi)注射或輸液技術(shù)。
藥物組合物可以是無菌的注射用制品的形式，例如無菌的注射用水性或油性的懸浮液?？筛鶕?jù)本領(lǐng)域的已知技術(shù)，使用適當(dāng)?shù)姆稚┗驖駶檮?如吐溫80)和懸浮劑來調(diào)配該懸浮液。
本發(fā)明的藥物組合物可以以任何口服可接受的劑型口服投藥，包括但不限于膠囊、片劑和水性懸浮液和溶液。在口服使用的片劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常也加入潤滑劑、如硬脂酸鎂。對(duì)以膠囊形式口服投藥，有用的稀釋劑包括乳糖和脫水的玉米淀粉。當(dāng)以水性懸浮液口服時(shí)，將活性成分與乳化劑和懸浮劑混合。如果需要，可加入一些甜味劑及/或香料及/或著色劑。
可供上文提及的調(diào)配物和組合物使用的其他適當(dāng)?shù)馁x形劑或載體，可在標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)教科書中找到，例如在“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，第19版，Mack Publishing Company，Easton，Penn.，1995中。為了預(yù)防和治療HCV引起的疾病，在單一治療中，在本文中描述的蛋白酶抑制劑化合物，在約0.01到約100毫克/公斤體重每天之間的劑量范圍是有用的，優(yōu)選的是在約0.5到約75毫克/公斤體重每天之間。通常，本發(fā)明的藥物組合物將每天給藥約1到約5次，或另外以連續(xù)的輸液。這類投藥可用作慢性或急性的治療?？膳c載體物質(zhì)混合，產(chǎn)生單一劑量形式的活性成分的含量，可根據(jù)待處理的宿主和給藥的特定模式而改變。代表性的制劑將含有約5％到約95％活性成分(重量/重量)。優(yōu)選的是，這類制劑含有約20％到約80％的活性化合物。
熟悉本領(lǐng)域者將理解可能需要比上文提及的量更低或更高的劑量。對(duì)任何特定患者的特定劑量和處理方式將依據(jù)各種因素而定，包括所使用的特定化合物的活性、年齡、體重、一般的健康狀態(tài)、性別、飲食、投藥的時(shí)間、排泄的速率、藥物的組合、感染的嚴(yán)重性和過程、患者對(duì)感染的傾向，以及處理醫(yī)師的判斷。一般而言，以實(shí)質(zhì)上低于該肽的最佳劑量的小劑量開始治療。隨后通過少量的增加而增加劑量，直到在該情況下達(dá)到最佳的效果為止。一般而言，要求以通常足以產(chǎn)生有效的抗病毒結(jié)果，但不引起任何有害或不利副作用的濃度含量來投予該化合物。
當(dāng)本發(fā)明的組合物包括式I化合物與一或多種另外的治療或預(yù)防劑組合時(shí)，該化合物與另外的制劑的存在量應(yīng)該以約10至100％之間的劑量含量提供，更優(yōu)選的是約10到80％的劑量，通常以單次治療法投予。
當(dāng)將這些化合物或其在藥學(xué)上可接受的鹽類與在藥學(xué)上可接受的載體一起調(diào)配時(shí)，可將所得的組合物在活體內(nèi)投予哺乳動(dòng)物，像是人類，以便抑制HCVNS3蛋白酶，或治療或預(yù)防HCV病毒感染。也可使用本發(fā)明化合物與下列制劑混合，來完成這類治療，包括但不限于免疫調(diào)節(jié)劑，如α-、β-或δ-干擾素；其他的抗病毒制劑，如三唑核苷、金剛胺；其他的HCV NS3蛋白酶抑制劑；對(duì)在HCV生活循環(huán)中其他標(biāo)的抑制劑，如解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶，或內(nèi)部的核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(IRES)；或其組合物。可將另外的制劑與本發(fā)明化合物混合，以產(chǎn)生單一的劑量形式。另外，也可將這類另外的制劑可分別投予哺乳動(dòng)物，成為多個(gè)劑量形式的一部分。因此，本發(fā)明其他的具體方案提供一種在哺乳動(dòng)物中，通過投予式I化合物，其中取代基如同上文定義，來抑制HCVNS3蛋白酶活性的方法。
在優(yōu)選的具體方案中，這些方法在哺乳動(dòng)物中有用于降低HCVNS3蛋白酶活性。如果藥物組合物僅包括作為活性成分的本發(fā)明化合物，這類方法可另外包括對(duì)該哺乳動(dòng)物投予選自免疫調(diào)節(jié)劑、抗病毒劑、HCV蛋白酶抑制劑、或?qū)υ贖CV生活循環(huán)中的其他標(biāo)的，像是解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶中一個(gè)制劑的抑制劑的步驟?？稍谕队璞景l(fā)明組合物之前、同時(shí)或之后，將這類另外的制劑投予哺乳動(dòng)物。
在另外的優(yōu)選方案中，這些方法在哺乳動(dòng)物中有用于抑制病毒復(fù)制。這類方法可用于治療或預(yù)防HCV疾病。如果藥物組合物僅包括本發(fā)明化合物作為活性成分，這類方法可能另外地包括對(duì)該哺乳動(dòng)物投予選自免疫調(diào)節(jié)劑、抗病毒劑、HCV蛋白酶抑制劑，或?qū)υ贖CV生活循環(huán)中其他標(biāo)的抑制劑的制劑的步驟?？稍谕队璞景l(fā)明的組合物之前、同時(shí)或之后，將這類另外的制劑投予哺乳動(dòng)物。
上述化合物也可用于作為實(shí)驗(yàn)室試劑。申請(qǐng)者第一次提供具有低分子量的化合物，其對(duì)HCVNS3蛋白酶具有高活性和特異性。一些本發(fā)明的化合物，對(duì)于提供用于設(shè)計(jì)病毒復(fù)制測(cè)定、動(dòng)物測(cè)定系統(tǒng)的批準(zhǔn)，以及進(jìn)一步增進(jìn)HCV疾病機(jī)制的知識(shí)的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究的研究工具是有幫助的。
本發(fā)明化合物也可用來處理或預(yù)防病毒污染的物質(zhì)，并藉此降低實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)療人員，或與這類物質(zhì)(例如血液、組織、外科器械和衣服、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和衣服，以及血液收集或輸血的裝置和材料)接觸的患者被病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。方法學(xué)。
在WO 00/09543和WO 00/09558中公開數(shù)種方式以完成式I化合物的非環(huán)狀中間物的合成。
根據(jù)在流程I、II和III中說明的普通程序來合成本發(fā)明化合物(其中PG為適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基)。[在所有下文提供的流程中，D′具有與D相同的定義，但較短，為2至5個(gè)原子]。
當(dāng)本發(fā)明包含其中A為N-取代的酰胺的式I化合物時(shí)，乙烯基-ACCA或同-烯丙基ACCA(R1)在偶聯(lián)至P2之前，先偶聯(lián)至適當(dāng)?shù)陌?。熟悉本技術(shù)者將理解這類偶聯(lián)。熟悉本技術(shù)者將承認(rèn)這類酰胺(A)并未被保護(hù)，但帶有任何如上文定義的有關(guān)取代基R5。
通過烯置換作用(流程I)，或在連結(jié)劑中含有氮原子時(shí)，通過還原性胺化作用(流程II)，或通過肽鍵結(jié)形成(流程III)，來完成閉環(huán)反應(yīng)(巨環(huán)化作用)。
在下文中提供這些方法的細(xì)節(jié)A.通過烯置換作用的巨環(huán)化作用流程I 流程I
熟悉本技術(shù)者可輕易地認(rèn)出數(shù)種可完成偶聯(lián)序列的方法。從4-(S)-羥基脯氨酸開始，可在巨環(huán)化作用之前或之后，通過由Mitsunobu反應(yīng)而在4-羥基處加入取代基(如同在Mitsunobu Synthesis 1981，January，1-28；Rano等人Tet.Lett.1994，36，377-3792；Krchnak等人Tet.Lett.1995，36，6193-6196中的描述)。另外，也可利用必需的4-(R)-羥基-取代的脯氨酸進(jìn)行組合，如在WO00/09543&WO 00/09558的普通程序中揭示的(參見下文關(guān)于這些片段的具體實(shí)例)。步驟A、B、C簡(jiǎn)言之，可通過已熟知的肽偶合技術(shù)和在WO 00/09543&WO00/09558中共同揭示的，將P1、P2和P3部分連接。步驟D可通過烯烴置換作用，使用以Ru-基的催化劑，如由Miller，S.J.；Blackwell，H.E.；Grubbs，R.H.J.Am.Chem.Soc.1996，118，9606-9614(a)；Kingsbury，J.S.；Harrity，J.P.A.；Boniatebus，P.J.；Hoveyda，A.H.J.Am.Chem.Soc.1999，121 791-799(b)和Huang，J.；Stevens，E.D.；Nolan，S.P.；Petersen，J.L.；J.Am.Chem.Soc.1999，121，2674-2678(c)所報(bào)導(dǎo)的催化劑，來完成巨環(huán)的形成。也將認(rèn)識(shí)該反應(yīng)可使用含有其他過渡金屬，如Mo的催化劑。 格魯伯斯(Grubbs′)哈維達(dá)(Horeyda′s)諾蘭(Nolan′s)催化劑催化劑催化劑步驟E視需要，通過本技術(shù)中已熟知的標(biāo)準(zhǔn)氫化法來還原雙鍵。當(dāng)A′為保護(hù)的羧酸時(shí)，也可適當(dāng)?shù)貙⑵涿摫Ｗo(hù)。B.通過還原性胺化作用的巨環(huán)化作用(連結(jié)劑含有N)當(dāng)連結(jié)劑含有氮原子時(shí)，可通過如同流程II中所示的還原性胺化作用，得到巨環(huán)化作用，獲得通用結(jié)構(gòu)II的抑制劑。
流程II 步驟A在布朗(Brown′s)程序后雙鍵的硼氫化反應(yīng)(H.C.Brown和B.C.SubbaRao，J.Am.Che.Soc.1959，81，6434-6437)，接著是所得醇的氧化作用(例如通過Dess-Martin Periodinate，J.Am.Chem.Soc.1991，113，7277-7287)得到相對(duì)應(yīng)的醛。步驟B在酸存在下的氫化作用，導(dǎo)致除去氨基保護(hù)基，接著通過還原性胺化作用的巨環(huán)化作用。在本合成中使用的P3單位，輕易地從各種胺基酸中獲得，如賴氨酸、鳥氨酸、谷氨酸胺(在霍夫曼(Hofmann)反應(yīng)之后Ber.1881，14，2725)及其他；這些合成的修改是本技術(shù)中已熟知的方法。步驟C可視需要使用本技術(shù)中已熟知的方法，利用烷基鹵將在連結(jié)劑D中的仲胺(在步驟D之后形成)烷基化，或利用烷基或芳基?；葘⑵湟阴；?，獲得通用結(jié)構(gòu)II的抑制劑。當(dāng)A′為保護(hù)的羧酸時(shí)，也可適當(dāng)?shù)貙⑵涿摫Ｗo(hù)。C.通過內(nèi)酰胺形成的巨環(huán)化作用另外，也明白具有通用結(jié)構(gòu)I和II的這些巨環(huán)化合物，可利用其他方式合成。例如，可先使P1和P3與連結(jié)基D連接，然后與P2偶聯(lián)，且該巨環(huán)化反應(yīng)以兩種可能的方式形成內(nèi)酰胺，將由熟悉本技術(shù)者認(rèn)可并如在方案III中所示。
流程III P1的合成帶有通用結(jié)構(gòu)I和II的抑制的合成，需要相同的P1片段a)乙烯基ACCA，在WO 00/09543&WO 00/09558中描述其合成和解離，或b)同烯丙基ACCA(實(shí)施例1，化合物1f)。P2的合成在WO 00/09543&WO 00/09558中描述了使用一些P2片段來合成式I化合物。
如下合成其他的P2片段a.合成2-“Het”-4-羥基-7-甲氧基喹啉衍生物(i)得自相應(yīng)的“Het”羧酸1Vb的途徑流程IV 根據(jù)在Li等人J.Med.Chem.1994，34，3400-3407中的修改程序，來完成合成作用。按照Brown等人J.Med.Chem.1989，32，807-826的描述，來制備其中R21＝OMe的中間物IVa(實(shí)施例7，化合物7b)。步驟A在堿性的條件下，利用POCl3活化羧酸鹽基團(tuán)，將中間物IVa與雜環(huán)羧酸IVb偶聯(lián)。抑制劑的制備，是使用各種具有通用結(jié)構(gòu)IVb的羧酸；這些是可購得的，按照在流程V、VI和VII中所示進(jìn)行合成，或使用在特定實(shí)例中描述的方法個(gè)別合成的。步驟B閉環(huán)，接著在堿性的條件下進(jìn)行脫水，以獲得通用結(jié)構(gòu)IVd的喹啉。(i.a.)合成通式IVb的“Het”-羧酸合成2-(取代的)-氨基-4-羧基-氨基噻唑衍生物(Vc)使用由Berdikhina等人Chem.Heterocycl.Compd.(Engl.Transl.)1991，4427-433中描述的修改程序。
流程V 使用在流程V中概述的普通合成方法，使用帶有不同的烷基取代基(R25＝烷基基團(tuán))的硫脲(Va)和3-溴丙酮酸，來制造通用結(jié)構(gòu)Vc的化合物，各種2-烷氨基噻唑基-4-羧酸。這類型的縮合反應(yīng)是本技術(shù)中已熟知的。另外，如在流程VI中所示，根據(jù)Unangst，P.C.；Connor，D.T.J.Heterocyc.Chem.29，5，1992，1097-1100的程序，從相應(yīng)的2-羧基衍生物來合成含有2-氨基-取代的-噻唑衍生物的P2片段。
流程VI 該方法的實(shí)例描述在WO 00/09543&WO 00/09558中。
合成2-羧基-4-取代的氨基噻唑衍生物VIId使用在流程VII中概述的普通合成方法，來制造通用結(jié)構(gòu)VIId的化合物，各種4-烷基噻唑基-2-羧酸。
流程VII 使用Janusz等人J.Med.Chem.1998，41，3515-3529描述的程序，并具有如下描述的修改硫代草胺酸(thiooxamate)乙酯(VIIa)與具有通用結(jié)構(gòu)VIIb(R24＝烷基基團(tuán))的不同的β-溴酮反應(yīng)，形成通用結(jié)構(gòu)VIId的噻唑羧酸。這類型的縮合反應(yīng)是本技術(shù)中已熟知的。
合成2-羧基-(取代的)-咪唑衍生物(VIIIb)使用在流程VIII中概述的普通合成方法，來制造通用結(jié)構(gòu)VIIIb的化合物，各種4-烷基咪唑基-2-羧酸。
流程VIII 使用由Baird等人J.Amer.Chem.Soc.1996，118，6141-6146描述的程序利用強(qiáng)酸(例如nBuLi)將烷基咪唑脫質(zhì)子，然后與CO2反應(yīng)，形成羧酸VIIIb。該類型的縮合反應(yīng)為本技術(shù)中已熟知的。b.合成4-羥基-7-甲氧基-2-(咪唑基或吡唑基)喹啉使用在方案IX中概述的方法，來制備在C2處具有咪唑或吡唑部分的4-羥基-7-R21喹啉基。
流程IX 在實(shí)例6中詳細(xì)描述關(guān)鍵中間物(其中R21＝OMe)的4-芐氧基-2-氯-7-甲氧基喹啉IXa的合成(化合物6e)。步驟A在高溫下，可使用各種咪唑、烷基取代的咪唑、吡唑或烷基取代的吡唑來置換化合物IXa中的2-氯部分，得到通用結(jié)構(gòu)IXb的化合物。步驟B當(dāng)通過標(biāo)準(zhǔn)氫化法從喹啉的4-羥基部分除去芐基保護(hù)基時(shí)，獲得通用結(jié)構(gòu)IXc的喹啉衍生物。P3的合成通過烯烴置換作用，合成含有延伸巨環(huán)化作用的適當(dāng)D連結(jié)基的各種P3片段。通常依據(jù)下述的普通流程(流程X、XI&XII)合成含有可供置換作用的終端烯烴的P3單位。合成A類型的連結(jié)劑用于制造連結(jié)劑的普通合成作用，完全以碳為基礎(chǔ)(無雜原子)(流程X)。
流程X 根據(jù)Evans等人J.Am.Chem.Soc.1990，112，4011-4030的程序來進(jìn)行合成。
起始的羧酸(Xa)是可購得的，或可通過熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的文獻(xiàn)程序來制備。步驟A以新戊酰氯活化羧酸Xa，然后依據(jù)已熟知的化學(xué)方法(查閱D.J.Ager等人Aldrichimica Acta 1997，30，3-11，以及在本文中的參考文獻(xiàn))，與Evens′的手性輔助劑4(S)-4-(苯甲基)-2-噁唑烷酮的陰離子反應(yīng)，得到通用結(jié)構(gòu)Xb的化合物。步驟B在堿的存在下，如KHMDS，利用三萊基疊氮化物(trizylazide)使手性酰亞胺烯醇鹽發(fā)生立體選擇性的α-疊氮化作用，這樣將形成帶有通用結(jié)構(gòu)Xb的化合物，該作用也是本技術(shù)中已熟知的(查閱D.J.Ager等人Aldrichimica Acta 1997，30，3-11，以及在本文中的參考文獻(xiàn))。步驟Cα-疊氮化物的還原作用，通過SnCl2催化，接著是胺的保護(hù)作用，形成其胺基甲酸叔-丁酯，得到具有通用結(jié)構(gòu)Xc的中間物。這些反應(yīng)也是本技術(shù)中已熟知的。步驟D最后，在堿性條件下將手性輔助劑水解，如H2O2與LiOH的混合物，產(chǎn)生具有通用結(jié)構(gòu)Xe的氨基酸類型的連結(jié)劑。
另外，也可依據(jù)在流程XI中所說明的，由M.J.Burk等人J.Am.Chem.Soc.1998，120，657-663描述的程序，合成具有相同的通用結(jié)構(gòu)Xe的P3部分。這些化合物隨著連結(jié)劑而在亞甲基(-CH2-)單位的數(shù)目(m＝1至5)，以及在R4處的烷基基團(tuán)的取代作用而有所改變，但不含有雜原子。
流程XI 步驟A在堿性的條件下，通過標(biāo)準(zhǔn)酯水解作用，從可購得的2-乙酰胺丙二酸二乙酯來制備單酸化合物XIb。步驟B在諸如吡啶之類的堿和乙酸酐的存在下，在通用結(jié)構(gòu)XIc的醛和化合物XIb之間的諾文葛耳型的縮合作用，導(dǎo)致形成烯酰胺中間物XId，其在如所示的新形成的雙鍵周圍，具有Z立體化學(xué)。步驟C使用Burk′s法，完成烯酰胺中間物XId至胺基酸中間物XIe的區(qū)域選擇性和對(duì)映選擇性的催化性氫化作用。步驟D利用在醋酸根基團(tuán)之前，加入氨基甲酸叔-丁酯取代基，將乙酰胺衍生物XIe的氮進(jìn)行-保護(hù)，并在標(biāo)準(zhǔn)堿性條件下水解該乙基酯，獲得通用結(jié)構(gòu)XIf的P3部分。合成B類型的連結(jié)劑B類型的連結(jié)劑的通用結(jié)構(gòu) X＝O或SR1＝H或CH3R2＝H或CH3這普通合成法用于制造含有氧或硫的連結(jié)劑。
流程XII R1＝H或CH3R2＝H或CH3，但不是R1＝R2＝CH3步驟A利用烯丙基碘，在Ag2O的存在下，將適當(dāng)經(jīng)保護(hù)的氨基酸，如Boc-(L)-絲氨酸甲基酯、Boc-(L)-蘇氨酸甲基酯或Boc-(L)-別蘇氨酸甲基酯烷基化，得到甲基酯XIIb。步驟B在標(biāo)準(zhǔn)堿性條件下甲基酯進(jìn)行水解作用，產(chǎn)生通用結(jié)構(gòu)XIIc的醚-型連結(jié)劑(X＝O)。步驟C從相同的起始氨基酸XIIa來制備硫類似物(如以前適當(dāng)?shù)丶右员Ｗo(hù))，并使用本技術(shù)中已熟知的標(biāo)準(zhǔn)方法，將其羥基基團(tuán)轉(zhuǎn)變?yōu)榱己玫碾x去基(如甲苯磺酸鹽中間物XIId)。步驟D接著以硫代乙酸鹽的陰離子置換甲苯磺酸基部分，通過轉(zhuǎn)化β-碳的手性中心，導(dǎo)致硫酯中間物XIIe的形成。步驟E在緩和的堿性條件下，使硫酯部分進(jìn)行水解作用，產(chǎn)生游離的硫醇XIIf。步驟F在堿性條件下，利用烯丙基碘易于進(jìn)行硫醇部分的烷基化作用。步驟G最后，在使用標(biāo)準(zhǔn)步驟的甲基酯的水解作用后，獲得硫化物類似物XIIc(X＝S)。R3片段的合成在WO 00/09543中揭示了合成其中R3為NH-RR31的片段的實(shí)例。實(shí)施例通過下列不受限制的實(shí)例，更詳細(xì)地說明本發(fā)明。其他特定的合成或離析的方法，可在WO 00/09543&WO 00/09558中找到。
以攝氏度數(shù)提供溫度。除非另行陳述，溶液百分比表示重量對(duì)體積的關(guān)系，且溶液比例表示體積對(duì)體積的關(guān)系。在Bruker 400MHz的分光計(jì)上記錄核磁共振(NMR)光譜；以百萬分之一(ppm)報(bào)告化學(xué)位移(δ)，并參考內(nèi)部的氘化溶劑。除非另行指定，以其TFA鹽的DMSO-d6記錄所有最終化合物(抑制劑)的NMR光譜。根據(jù)Still′s急驟色層技術(shù)(W.C.Still等人，J.Org.Chem.，1978，43，2923)，在硅膠(SiO2)上進(jìn)行急驟柱色層法。
在實(shí)施例中所使用的縮寫包括Bn芐基；Boc叔-丁氧羰基[Me3COC(O)]；BSA牛血清白蛋白；Cbz芐氧羰基；CHAPS3-[(3-膽酰氨基丙基)-二甲基氨(ammonio)]-1-丙烷磺酸鹽；DBU1，8-二氮二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯；CH2Cl2＝CDM；二氯甲烷；DEAD；偶氮二羧基二乙酯；DIAD偶氮二羧酸二異丙酯；DIPEA二異丙基乙胺；DMAP二甲氨基吡啶；DCC1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺；DME1，2-二甲氧基乙烷；DMF二甲基甲酰胺；DMSO二甲亞砜；DTT二硫蘇糖醇或蘇-1，4-二巰基-2，3-丁二醇；DPPA二苯基磷酰基疊氮化物；EDTA乙二氨四乙酸；Et乙基；EtOH乙醇；EtOAc醋酸乙酯；Et2O二乙醚；ESMS電噴霧質(zhì)譜分析HATUO-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸鹽；HPLC高效液體色層法；MS質(zhì)譜分析；MALDI-TOF矩陣參考的激光吸收離子化(Matrix Assisted LaserDisorption Ionization)作用-飛行時(shí)間，F(xiàn)AB快速原子撞擊；LAH氫化鋁鋰；Me甲基；MeOH甲醇；MES(2-[N-嗎啉]乙烷-磺酸)；NaHMDS雙(三甲基硅烷基)酰胺化鈉；NMMN-甲基嗎啉；NMMON-甲基嗎啉氧化物；NMPN-甲基吡咯烷；Pr丙基；Succ3-羧基丙?；籔NA4-硝苯氨基或?qū)?硝基苯氨；TBAF氟化四-正-丁基銨；TBME叔-丁基-甲基醚；tBuOK叔-丁醇鉀；TBTU2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基四氟硼酸鹽；TCEP三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽；TFA三氟乙酸鹽；THF四氫呋喃；TIS三異丙基硅烷；TLC薄層層析法；TMSE三甲基硅烷基乙基；Tris/HCl三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽。P1部分實(shí)施例1合成羧酸叔-丁基-(1R，2R)/(1S，2S)-1-氨基-2-同烯丙基環(huán)丙酯(1f) A.相繼將1，2-二溴-5-己烯(1b，8.10克，33.46毫摩爾)和丙二酸二-叔-丁酯(1a，4.82克，22.30毫摩爾)加至在50％NaOH水溶液(50毫升)中的氯化芐基三乙銨(5.08克，22.3毫摩爾)的懸浮液中。在室溫下劇烈地?cái)嚢柙摶旌衔?6小時(shí)，然后以H2O稀釋并以CH2Cl2(3×50毫升)萃取。進(jìn)一步以H2O(2×50毫升)、鹽水/H2O(2/1，2×50毫升)沖洗有機(jī)層，并以MgSO4干燥并蒸發(fā)。通過急驟柱色層法在硅膠上純化粗制的殘余物，使用3至5％在己烷中的EtOAc作為洗脫液，獲得38％的化合物1c(2.48克)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.19(bd，J＝7.9Hz，2H)，1.25-1.33(m，1H)，1.46(s，9H)，1.48(s，9H)，1.47-1.60(m，1H)，1.75-1.82(m，1H)，2.14-2.22(m，2H)，4.93-5.50(m，2H)，4.96(dm，J＝10.2Hz，1H)，5.18(dm，J＝17.2Hz，1H)。ES(+)MS m/z 297(M+H)-。B.在0℃下，將H2O(203微升，11.27毫摩爾)加至在無水二乙醚(150毫升)中的叔-丁醇鉀(5.75克，51.25毫摩爾)的懸浮液中，并在0℃下攪拌該反應(yīng)混合物10分鐘。加入化合物1c的醚溶液(2.48克在10毫升二乙醚中，10.25毫摩爾)，并在室溫下攪拌該混合物5小時(shí)。以冰冷的H2O稀釋該混合物，并以二乙醚萃取(3×200毫升)。以冰冷的10％檸檬酸水溶液將水層酸化至pH3.5-4，并再度以EtOAc(3×200毫升)萃取。以H2O(2×100毫升)和鹽水(100毫升)沖洗EtOAc層，再以MgSO4干燥并蒸發(fā)，基于回收的起始物質(zhì)的含量，得到產(chǎn)量85％的化合物1d。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.51(s，9H)，1.64-1.68(m，1H)，1.68-1.75(m，1H)，1.77-1.88(m，1H)，1.96-2.01(m，1H)，2.03-2.22(m，3H)，5.01(dm，J＝6.4Hz，1H)，5.03(dm，J＝14.9Hz，1H)，5.72-5.83(m，1H)。ES(+)MS m/z 241(M+H)-。C.將Et3N(800微升，5.68毫摩爾)加至在無水苯中的酸1d的溶液(1.14克在25毫升苯中，4.74毫摩爾)中，接著加入二苯基磷?；B氮化物(1.13毫升，5.21毫摩爾)，并將該混合物加熱至回流3.5小時(shí)。接著，加入三甲基硅烷基乙醇(1.36毫升，9.48毫摩爾)，并在回流下再繼續(xù)攪拌4小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，蒸發(fā)至其原始體積的一半，以二乙醚(30毫升)稀釋，并以5％的NaHCO3水溶液(2×30毫升)、鹽水(50毫升)沖洗，再以MgSO4干燥并蒸發(fā)。在硅膠上色層分離殘余的油，使用10％在己烷中的EtOAc作為洗脫液，得到產(chǎn)量88％純的化合物1e(1.49克)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.03(s，9H)，0.91-0.99(m，2H)，1.18-1.29(m，2H)，1.45(bs，11H)，1.56-1.72(m，2H)，2.02-2.18(m，2H)，4.12(t，J＝8.3Hz，2H)，4.93(dm，J＝10.2Hz，1H)，4.98(dm，J＝17.2Hz，1H)，5.07(bs，1H)，5.71-5.83(m，1H)。D.將t-Bu4NF(6.7毫升在THF中的1M溶液，6.7毫摩爾)加至環(huán)丙基衍生物1e的溶液(1.19克，3.35毫摩爾，在30毫升THF中)中，并先在室溫下攪拌該混合物16小時(shí)，并接著加熱以回流15分鐘。在低壓之下小心地蒸發(fā)溶劑(因?yàn)橛坞x胺1f的高揮發(fā)性，在溶劑的蒸發(fā)期間應(yīng)該謹(jǐn)慎小心)。將粗制的殘余物再溶解于EtOAc(100毫升)中，并以H2O(2×50毫升)、鹽水(50毫升)沖洗，再以MgSO4干燥，并再度小心地蒸發(fā)溶劑。使用粗產(chǎn)物1f(為兩種對(duì)映體1f和1f′的混合物)與P2脯氨酸衍生物偶聯(lián)，不需進(jìn)一步純化。在該階段，使用急驟色層法，可易于完成在P1處具有想要的立體化學(xué)的P1P2片段的分離(實(shí)例21，片段21b)。P2部分實(shí)施例2合成Boc-4(R)-[(7-甲氧基-4-喹啉基)氧基]脯氨酸(2c) 根據(jù)Chun，M.W.；Olmstead，K.K.； Choi，Y.S.；Lee，C.O.； Lee，C.-K.；Kim.J.H.；Lee，J.Bioorg.Med.Chem.Lett.1997，7，789描述的方法制備4-羥基-7-甲氧基喹啉(2b)。在N2下，將在無水THF中的化合物2b(1.88克，10.73毫摩爾)和DEAD(3.4毫升，21.46毫摩爾)的溶液，加至0℃、在無水THF(160毫升)中的經(jīng)保護(hù)的順-羥基脯氨酸2a(2.63克，10.73毫摩爾)和三苯膦(5.63克，21.46毫摩爾)的攪拌溶液中。容許將該反應(yīng)混合物加溫至室溫，并攪拌14小時(shí)。然后蒸發(fā)THF，并在使用5％在EtOAc中的MeOH作為洗脫液的急驟柱色層法后，分離純的產(chǎn)物2c，產(chǎn)量35％(1.5克)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.44(s，9H)，1.65(2，1H)，2.34-2.43(m，1H)，2.63-2.76(m，1H)，3.78(s，3H)，3.75-3.85&3.89-3.99(2m，1H，2個(gè)螺旋異構(gòu)體)，3.95(s，3H)，4.51&4.60(2t，J＝8Hz，1H，2個(gè)螺旋異構(gòu)體)，5.15(bs，1H)，6.53-6.59(m，1H)，7.12-7.18(dd，J＝8.9&2.2Hz，1H)，7.36(d，J＝2.6Hz，1H)，8.03(bd，J＝9.2Hz，1H)，8.65(bs，J＝5.1Hz，1H)。實(shí)例3合成2-乙氧基-4-羥基-7-甲氧基喹啉基(3c) 按照在Katz等人，J.Org.Chem.，1953，18，1380-1400中的描述，進(jìn)行對(duì)-甲氧基氨茴酰甲酯3a的合成。
喹啉衍生物3c的普通合成法，是修飾Baccar等人Indian Joumal ofChemistry，1995，Sat.B，330-332的程序。A.將對(duì)-甲氧基氨茴酰甲酯3a(3.069克，16.96毫摩爾)溶解于原乙酸三乙酯(4.7毫升，25.4毫摩爾)中，然后加入無水的HCl溶液(4N/二噁烷，50微升，0.6毫摩爾)。將所得的混合物加熱回流19小時(shí)。然后在真空下蒸發(fā)揮發(fā)物，得到產(chǎn)物3b(4.92克，琥珀色的油，定量產(chǎn)量)，這樣便可使用在下一個(gè)步驟中。B.在-78℃在氮?dú)庀?，將LiHMDS(1M/THF，22毫升，1.3當(dāng)量)加至在THF(34毫升)中的基質(zhì)3b(16.96毫摩爾)的溶液中。在加入之后不久便移開冷溫浴，并將該混合物置于周圍溫度空氣下攪拌1小時(shí)，隨后加入其他部分的LiHMDS(16毫升)。然后攪拌所得的混合物，直到由TLC(100％EtOAc，酰亞胺酸鹽(imidate)Rf＝0.7，產(chǎn)物Rf＝0.2)得知起始物質(zhì)完全消失為止(1小時(shí))。然后加入HCl(4N/二噁烷，10毫升)，并在真空下濃縮該混合物。從EtOAc(10毫升)與NaH2PO4水溶液(1M，10毫升)的混合物中，將所得糊狀物研制，并以聲波震蕩。形成豐富的沉淀物，通過過濾收集，以水沖洗并脫水，得到灰色固體狀的所要求的產(chǎn)物3c(3.117克，2個(gè)步驟產(chǎn)量84％，由HPLC得知純度＞99％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ(ppm)7.88(d，J＝8.9Hz，1H)，6.98(br.s，1H)，6.89(br.d，J＝8.6Hz，1H)，5.94(br.s，1H)，4.30(br.s，2H)，3.84(s，3H)，1.34(t，J＝7.0Hz，3H)。實(shí)施例4合成4-羥基-7-甲氧基-2-(3-甲基-1，2，4-噁二唑-5-基)喹啉基(4d) A.在氮?dú)庀?，將NaH(60％在礦物油中，190毫克，4.98毫摩爾)加至在DMF(10毫升)中的2-甲氧甲酰基-4-羥基-7-甲氧基喹啉4a(其制備方法描述在WO00/09543和WO 00/09558中)(1克，4.29毫摩爾)的溶液中。在周圍溫度下攪拌所得的混合物1小時(shí)，然后逐滴加入MEM氯化物(455微升，4.98毫摩爾)，并在周圍溫度下再攪拌所得的混合物19.5小時(shí)。以EtOAc(100毫升)稀釋該反應(yīng)混合物，以H2O(50毫升)、鹽水(50毫升)沖洗，用MgSO4干燥，在真空下濃縮，得到粗制反應(yīng)分離物(1.37克)。通過急驟柱色層法純化，得到無色油狀的產(chǎn)物4b(1.04克，75％產(chǎn)量)。B.將THF(3毫升)加至新近活化的4A分子篩(500毫克)和乙酰氨基肟(248毫克，3.35毫摩爾)的混合物中。在氮?dú)夂椭車鷾囟认?，攪拌所得的混合?5分鐘，然后分批加入NaH(60％在礦物油中，124毫克，3.24毫摩爾)。在周圍溫度下攪拌所得的懸浮液1小時(shí)。然后加入在THF(5毫升)中的酯4b(500毫克，1.56毫摩爾)的溶液。將所得的混合物加熱回流1小時(shí)，然后在硅藻土上過濾，以EtOAc沖洗(3份20毫升)，并在真空下濃縮。通過急驟柱色層法(100％EtOAc)，純化所得的粗制混合物，得到白色固體狀的產(chǎn)物4c(352毫克，65％產(chǎn)量)。C.將HCl水溶液(1N，1毫升)加至在THF(4毫升)中的MEM醚4c(170毫克，0.493毫摩爾)中。在周圍溫度下攪拌所得的混合物1小時(shí)，然后以NaH2PO4水溶液(1M，50毫升)稀釋。過濾所形成的固體，與EtOAc一起研制，過濾并干燥后得到白色固體狀的想要產(chǎn)物(4d)(90毫克，71％產(chǎn)量)。MS(ES+)258(M+1)，(ES-)256(M-1)。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ(ppm)8.03(d，J＝9.2Hz，1H)，7.38(d，J＝2.2Hz，1H)，7.06(d.J＝8.6Hz，1H)，6.85(br.s，1H)，3.88(s，3H)，2.64(s，3H)。實(shí)施例5合成4-羥基-7-甲氧基-2-(5-甲基-1，3，4-噁二唑-5-基)喹啉(5e) A.將無水的肼(57微升，1.8毫摩爾)加至在乙醇(5毫升)中的基質(zhì)4b(465毫克，1.45毫摩爾)中。將所得的溶液加熱回流4小時(shí)，然后在真空下濃縮，得到黃色固體狀的產(chǎn)物5a(704毫克，定量的粗產(chǎn)量)，這樣便可在下一個(gè)步驟中使用。B.在氮?dú)庀?，將在原乙酸三乙?5毫升)中的化合物5a(假設(shè)為1.45毫摩爾)加熱至100-110℃。然后以EtOAc(100毫升)稀釋所得的混合物，以飽和NaHCO3水溶液(50毫升)、鹽水(50毫升)沖洗，利用MgSO4脫水，在真空下濃縮，并通過急驟柱色層法純化(100％EtOAc)。獲得黃色油狀的化合物5b(359毫克，兩個(gè)步驟的產(chǎn)量為61％)。MS(ES+)392(m+1)，(ES-)390(m-1)。C.在高度真空下將化合物5b(333毫克，0.852毫摩爾)加熱至140℃8.5小時(shí)，并通過急驟柱色層法純化(100％EtOAc)，得到5b(116毫克，35％，Rf0.5)和5c(138毫克，修正的產(chǎn)量72％，Rf0.3)的混合物。將HCl水溶液(1N，1毫升)加至化合物5c(138毫克，0.4毫摩爾)的THF(4毫升)溶液中，并攪拌所得的混合物直到完全為止(30分鐘)。在真空下蒸發(fā)THF，并加入NaH2PO4水溶液(1M，2毫升)。以聲波震蕩所得的懸浮液，過濾并在高度真空下使固體脫水，得到灰色固體狀的想要產(chǎn)物5d(75毫克，73％)。MS(ES+)258(m+1)，(ES-)256(m-1)。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ8.03(d，J＝9.2Hz，1H)，7.39(d.J＝2.2Hz，1H)，7.06(br.d，J＝8.6Hz，1H)，6.85(br.s，1H)，3.88(s，3H)，2.46(s，3H)。實(shí)施例6合成4-芐氧基-2-(氯)-7-甲氧喹啉(6e) A.將在二噁烷(80毫升)中的可購得的間-氨基苯甲醚(25克，0.20摩爾)冷卻至0℃，并加入無水的HCl(4N/二噁烷，75毫升，0.30摩爾)。然后加入Et2O(500毫升)，并持續(xù)攪拌1小時(shí)。然后過濾灰色的固體，并在真空下干燥，得到鹽6a(31.88克，98％產(chǎn)量)。B.在該鹽中加入氰基乙酸乙酯(21.3毫升，0.20毫摩爾)，并在裝有蒸餾頭和收集燒瓶的燒瓶中，將該混合物加熱至280-300℃。收集產(chǎn)生的乙醇以監(jiān)視反應(yīng)的進(jìn)程。在收集9毫升乙醇時(shí)(理論上的含量為11.7毫升)，停止加熱，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，以水(200毫升)-EtOAc(200毫升)稀釋，然后攪拌并加入NaH2PO4水溶液(300毫升)。在再攪拌1小時(shí)后，過濾并干燥，獲得黃色固體狀的6b(19.06克，84.5％純度，大約50％產(chǎn)量)，這樣就可在下一個(gè)反應(yīng)中使用。C.將在0℃，在DMF(100毫升)中的化合物6b(11.0克，57.8毫摩爾)加至NaH(60％在礦物油中，2.78克，115.6毫摩爾)中。然后移開冰浴，并在周圍溫度下攪拌該混合物1小時(shí)，然后加入芐基溴(7.6毫升，63.6毫摩爾)，并攪拌該反應(yīng)混合物16小時(shí)。然后以EtOAc(220毫升)-己烷(220毫升)稀釋該溶液，并過濾所形成的固體，與飽和NaHCO3水溶液(110毫升)一起研制，以水、己烷-EtOAc(1∶1的比例，100毫升)沖洗，并在高度真空下干燥。這樣獲得黃色固體狀的產(chǎn)物6c(5.6克，91％純度，35％產(chǎn)量)。將亞硝酸異戊酯(3.8毫升，28.6毫摩爾)加至在醋酸(21毫升)中的化合物6c(2.67克，9.52毫摩爾)中，并在周圍溫度下攪拌所得的混合物，并通過HPLC監(jiān)測(cè)。在2小時(shí)后加入更多的亞硝酸異戊酯(1.3毫升，9.52毫摩爾)，并在90小時(shí)內(nèi)保持?jǐn)嚢柙摶旌衔?HPLC 81％產(chǎn)物，3％基質(zhì))。在所得的懸浮液中加入水(100毫升)，然后過濾。在高度真空下使所收集的棕色固體干燥，得到產(chǎn)物6d(2.35克，92％純度，72％產(chǎn)量)。D.在化合物6d(1.5克，4.39毫摩爾)中加入磷酰氯(13毫升，141毫摩爾)，并將所得的混合物加熱回流1小時(shí)，然后以EtOAc(150毫升)稀釋，并在0℃下慢慢地以NaOH水溶液(1N，150毫升)使其驟冷至pH9。分離出兩層，并利用MgSO4使有機(jī)層干燥，并在真空下濃縮，得到棕色的固體，通過急驟柱色層法純化(15％EtOAc/己烷)。獲得黃色固體狀的產(chǎn)物6e(819毫克，純度＞9％，62％產(chǎn)量)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.07(d，J＝9.2Hz，1H)，7.50-7.40(m，5H)，7.29(d，J＝2.5Hz，1H)，7.12(dd，J＝9.2，2.5Hz，1H)，6.73(s，1H)，5.26(s，2H)，3.92(s，3H)。實(shí)施例7合成4-羥基-2-(1-咪唑基)-7-甲氧基喹啉(7b)；4-羥基-2-(4-甲基-1-咪唑基)-7-甲氧基喹啉(7d)；4-羥基-7-甲氧基-2-(1-吡唑基)喹啉(7f)；以及4-羥基-2-(3-甲基-1-吡唑基)-7-甲氧基喹啉(7h)。 A.將化合物6e(423毫克，1.41毫摩爾)和咪唑(400毫克，5.88毫摩爾)加熱至110℃20小時(shí)。以EtOAc稀釋該混合物，然后以水和鹽水沖洗，用MgSO4干燥，在減低的壓力下濃縮，得到黃色固狀的化合物7a(422毫克，96％純度，90％產(chǎn)量)。吹掃在乙醇(5毫升)和THF(5毫升)的混合物中的化合物7a(319毫克，0.963毫莫耳)與Pd(5％/C，64毫克)，并放在一大氣壓的氫氣下。在周圍溫度下攪拌7.5小時(shí)后，過濾該反應(yīng)混合物，以氯仿-甲醇混合物沖洗并濃縮后，得到黃色固狀的7b(130毫克，97.7％純度，56％產(chǎn)量)。MS(ES+)242(m+1)，(ES-)240(m-1)。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ8.51(s，1H)，8.03(d，J＝8.9Hz，1H)，7.93(s，1H)，7.23(d，J＝1.9Hz，1H)，7.15(s，1H)，7.12(dd，J＝9.2，2.2Hz，1H)，6.92(br.s，1H)，3.91(s，3H)。B.將化合物6e(251毫克，0.837毫摩爾)和4-甲基咪唑(344毫克，4.19毫摩爾)加熱至110℃20小時(shí)。然后以EtOAc稀釋該混合物，以水和鹽水沖洗，用MgSO4干燥，并在減壓下濃縮，得到分別含有4-甲基和5-甲基咪唑基異構(gòu)物的10∶1混合物的粗產(chǎn)物。通過急驟柱色層法(100％EtOAc)，從含有4-和5-甲基咪唑基異構(gòu)物的第二個(gè)更具極性的餾份(76毫克，23％產(chǎn)量)中分離出主要假設(shè)想要的異構(gòu)物11c，白色固體(166毫克，99％純度，57％產(chǎn)量)。吹掃在乙醇(2.4毫升)和THF(5毫升)的混合物中的化合物7c(163毫克，0.472毫摩爾)和Pd(5％/C，33毫克)，并放置在一大氣壓的氫氣下。在周圍溫度下攪拌18小時(shí)之后，過濾該反應(yīng)混合物，以氯仿-甲醇混合物沖洗，并濃縮后得到白色固體的7d(118毫克，99％純度，98％產(chǎn)量)。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ8.42(br.s，1H)，8.01(d，J＝9.2Hz，1H)，7.64(br.s，1H)，7.21(br.s，1H)，7.10(d，J＝8.9Hz，1H)，6.89(br.s，1H)，3.90(s，3H)，2.20(s，3H)。C.將化合物6e(184毫克，0.614毫摩爾)和吡唑(209毫克，3.07毫摩爾)在110℃加熱17小時(shí)。然后以EtOAc稀釋該混合物，并以NaOH水溶液(1N)和鹽水沖洗，用MgSO4干燥，在減壓下濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過急驟柱色層法純化(2∶1己烷-EtOAc)，得到淡黃色固體狀的7e(103毫克，50％產(chǎn)量)。吹掃在乙醇(2毫升)和THF(2毫升)中的化合物7e(103毫克，0.311毫摩爾)和Pd(5％/C，20毫克)，并放置在一大氣壓的氫氣下。在周圍溫度下攪拌5.5小時(shí)后，過濾該反應(yīng)混合物，以氯仿-甲醇混合物沖洗，并濃縮得到黃色固體狀的7f(77毫克，99％純度，99％產(chǎn)量)。MS(ES+)242(m+1)，(ES-)240(m-1)。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ8.82(d，J＝2.5Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.00(d，J＝8.9Hz，1H)，7.83(br.s，1H)，7.43(br.s，1H)，7.24(br.s，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，6.59(br.s，1H)，3.90(s，3H)。D.將化合物6e(217毫克，0.724毫摩爾)和4-甲基咪唑(594毫克，7.24毫摩爾)在110℃加熱23小時(shí)。顯示該混合物為脫芐基的化合物7h和芐基化的化合物7g的1∶1混合物，然后以EtOAc(2-3毫升)稀釋，并過濾后得到純的脫芐基化的白色固體狀的產(chǎn)物7h(111毫克，95％純度，54％產(chǎn)量)。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ8.58(d，J＝2.6Hz，1H)，7.98(d，J＝9.2Hz，1H)，7.25(br.s，1H)，7.20(s，1H)，7.04(br.d，J＝9.2Hz，1H)，6.38(s，1H)，3.89(s，3H)，2.30(s，3H)。實(shí)施例8合成4-羥基-7-甲氧基-2-[4-(2-異丙氨基噻唑基)]喹啉(8f)注意[使用相同的合成流程，其中通過其他的烷基硫脲以置換化合物8b，制造各種2-烷氨基噻唑基取代基]。 A.用于轉(zhuǎn)化間-氨基苯甲醚為8a的方案，與文獻(xiàn)E.J.Brown等人J.Med.Chem.1989，32，807-826中描述的相同。然而，修改純化程序，以避免通過色層法純化。利用MgSO4、活性碳和5％重量/重量(基于預(yù)期的質(zhì)量)硅膠的混合物來處理含有想要產(chǎn)物的EtOAc相。在硅藻土上過濾之后，將產(chǎn)物與乙醚一起研制。獲得純度＞99％的淡棕色固體狀的化合物8a(通過HPLC證實(shí))。B.將在二噁烷(300毫升，0.1M)中的異丙基硫脲(8b，3.55克，30毫摩爾)和3-溴丙酮酸(8c，5克，1當(dāng)量)的懸浮液加熱至80℃。當(dāng)?shù)竭_(dá)80℃時(shí)，該溶液變成澄清的，并不久便沉淀出白色固體狀的產(chǎn)物。在加熱2小時(shí)后，將該溶液冷卻至室溫，并過濾白色的沉淀物，得到高純度的化合物8d(＞98％，由NMR證實(shí)其純度)和94％的產(chǎn)量(7.51克)。C.將在吡啶(150毫升，0.12M)中的羧酸8d(4.85克，18.2毫摩爾)和苯胺衍生物8a(3克，1當(dāng)量)的混合物冷卻至-30℃(在冷卻時(shí)，澄清溶液中部分變成懸浮液)。在5分鐘內(nèi)慢慢地加入磷酰氯(3.56毫升，2.1當(dāng)量)。在-30℃下攪拌該反應(yīng)物1小時(shí)，移開冰浴并容許該反應(yīng)混合物回溫至室溫。在1.5小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物倒入冰中，利用3NNaOH水溶液將pH值調(diào)整到11，以CH2Cl2萃取，再以MgSO4干燥，過濾并在真空下濃縮。然后通過急驟色層法純化灰色的固體(45％在己烷中的EtOAc)，得到產(chǎn)量73％的淡黃色固體狀的化合物8e(6.07克)。D.將在無水tBuOH(40毫升，0.14M，從Mg金屬蒸餾)中的tBuOK(2.42克，21.6毫摩爾)的溶液加熱回流。在5分鐘內(nèi)分批加入化合物8e(1.8克，5.4毫摩爾)，并在回流下再攪拌所形成的暗紅色溶液20分鐘(通過HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)的完成)。將該混合物冷卻至室溫，并加入HCl(4N在二噁烷中，1.5當(dāng)量)。然后在真空下濃縮該混合物，以確保除去所有的HCl和二噁烷，并將產(chǎn)物再溶解于CH2Cl2中兩次，在真空下干燒，最后獲得灰色固體狀的化合物8f的HCl鹽(1.62克，由HPLC得知純度為93％)。然后將產(chǎn)物倒入磷酸緩沖溶液(1NNaH2PO4，pH＝～4.5)中，并以聲波震蕩。過濾灰色固體，并在真空下干燥，得到灰色固體狀的化合物8f(1.38克，81％產(chǎn)量)(由HPLC得知純度為91％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ8.27(s，1H)，8.12(d，1H，J＝9.2Hz)，7.97(br.s，1H)，7.94(s，1H)，7.43(s，1H)，7.24(dd，1H，J＝9.2，2.2Hz)，3.97(m，1H)，3.94(s，3H)，1.24(d，2H，J＝6.4Hz)。實(shí)施例9合成4-羥基-7-甲氧基-2-[2-(4-異丙基噻唑基)]喹啉(9f)注使用同樣的合成流程，其中，9b化合物用其它2-溴酮代替而制備各種2-(4-烷基)-噻唑取代基。 A.將Br2(4.79nl，93mmel，1當(dāng)量)在45分鐘期間，在30℃滴加到在MeOH(100ml)中的3-甲基-丁-2-酮(8克，93mmol)。在室溫?cái)嚢杷没旌衔?0分鐘。加入戊烷并用5％NaHCO3水溶液洗滌該溶液，有機(jī)相在無水NaSO4上干燥，過濾并真空下濃縮，所得粗制黃色油，化合物9b，可不用純化而用于下一步驟。將硫代氨酸乙酯(9a，1.8g，13.5mmol)和溴酮衍生物9b(13.5mmol)在70℃攪拌15小時(shí)。然后真空下濃縮并接著通過急驟柱色層法純化，使用15％在己烷中的EtOAc作為洗脫液，得到化合物9c(740毫克，28％產(chǎn)量)。B.在室溫下以LiOH.H2O(148毫克，3.5毫摩爾，1當(dāng)量)處理在THF/MeOH/H2O(3∶1∶1的比例，13毫升)中的化合物9c(700毫克，3.5毫摩爾)的溶液5小時(shí)。然后以0.1N HCl將pH值調(diào)到6，并在真空下濃縮該混合物至干燥，得到13d，其可直接使用在下一個(gè)步驟，不需進(jìn)一步純化。C.將在吡啶(30毫升)中的4-甲氧基-2-氨基-乙酰苯(中間物8a，570毫克，3.45毫摩爾)和羧酸衍生物9d(590毫克，3.45毫摩爾，1當(dāng)量)的溶液冷卻至-20℃。然后在5分鐘內(nèi)滴加POCl3(0.35毫升，3.79毫摩爾，1.1當(dāng)量)。在-10℃下攪拌所得溶液2小時(shí)。利用加入另外的H2O使該反應(yīng)驟冷，并在真空下濃縮該混合物。將殘余物倒入飽和的NaHCO3水溶液中，并以EtOAc萃取。將有機(jī)層以MgSO4干燥，過濾并在真空下濃縮。通過急驟柱色層法純化粗產(chǎn)物，使用25％在己烷中的EtOAc作為洗脫液，得到白色固體狀的化合物9e(740毫克，67％產(chǎn)量)。D.將tBuOH(518毫克，2.1當(dāng)量)加至在無水tBuOK(11毫升)中的化合物9e(700毫克，2.2毫摩爾)的懸浮液中。將所得的混合物加熱至75℃7.5小時(shí)，然后將該溶液冷卻至室溫，并加入HCl(4N，HCl，在二噁烷中，2.5毫升)酸化。在真空下濃縮該混合物，并將所得的殘余物倒入1N NaH2PO4的溶液并過濾。然后將固體物質(zhì)與少量的EtOAc一起研制，過濾并在真空下脫水，得到淡灰色固體狀的化合物9f(270毫克，41％產(chǎn)量)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(br.s，1H)，7.60(br.s，1H)，7.51(br.s，1H)，7.43(br.s，1H)，7.29(br.s，1H)，7.14(br.s，1H)，6.95(br.s，1H)，3.90(s，3H)，3.15(m，1H)，1.33(d，J＝5.4Hz，6H)。實(shí)施例10合成4-羥基-2-(1-甲基-2-咪唑基)-7-甲氧基喹啉(10d) A.將在100毫升THF中的N-甲基咪唑10a(5克，61毫摩爾)的溶液冷卻至-78℃。在15分鐘內(nèi)逐滴加入n-BuLi(24.4毫升的2.5M/Et2O溶液，1當(dāng)量)。在-78℃下攪拌所得的混合物90分鐘，然后分批倒在過量的固體CO2上。攪拌該不均勻的混合物2小時(shí)，并容許其達(dá)到室溫。加入1N HCl至pH5，分離出水層并冷凍干燥。以EtOAc萃取這樣獲得的殘余物(除去鹽類)，干燥(Na2SO4)，過濾并在低壓下濃縮。獲得6.2克(80％產(chǎn)量)的白色固體10b。B.將在吡啶(10毫升)中的4-甲氧基-2-氨基-乙酰苯8a(394毫克，2.39毫摩爾)和羧酸衍生物10b(301毫克，1當(dāng)量)的溶液冷卻至-20℃。在5分鐘內(nèi)逐滴加入POCl3(244微升，1.1當(dāng)量)。在-10℃下攪拌所得的溶液2.5小時(shí)。然后加入水，并在減壓下濃縮該混合物。將殘余物倒入飽和的NaHCO3溶液中，并以EtOAc萃取。將有機(jī)相干燥(MgSO4)，過濾并在減壓下濃縮。通過色層法純化產(chǎn)物，使用硅膠(25％EtOAc/Hex)，得到530毫克的淡黃色固體10c(81％產(chǎn)量)。C.將tBuOK(431毫克，2.1當(dāng)量)加至在8毫升tBuOH中的基質(zhì)10c(500毫克，1.8毫摩爾)的懸浮液中。然后將所得的混合物在75℃加熱7小時(shí)，容許該溶液到達(dá)室溫過夜，并加入2.5毫升HCl(4N/二噁烷)。在減壓下濃縮該混合物，并以EtOAc稀釋所得的殘余物。加入1N NaOH，直到pH值為7。分離有機(jī)相，并干燥(MgSO4)和過濾，在減壓下濃縮，得到145毫克淡灰色固體狀的10d(31％產(chǎn)量)。1HNMR(400MHz，DMSO-d)δ7.99(d，J＝8.9Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.37(s，1H)，7.1 8(s，1H)，6.92(d，J＝8.9Hz，1H)，6.3 1(s，1H)，3.87(s，3H)，3.84(s，3H)。實(shí)施例11合成4-羥基-2-(1-吡咯基)-7-甲氧基喹啉(11b) A.使在冰醋酸中的基質(zhì)11a(在乙醇-THF中用5％Pd/C氫解芐基之后，從化合物6c中獲得)(1克，5.25毫摩爾)和2，5-二甲氧基四氫呋喃(0.68毫升，1當(dāng)量)的溶液回流4.5小時(shí)，并容許達(dá)到室溫。然后在低壓下濃縮該混合物。以甲醇稀釋殘余物，并加入NaOH(水溶液)1N，直到pH為7。通過色層析法純化產(chǎn)物，使用硅膠(3％MeOH/CH2Cl2，將殘余物先吸附在硅膠上)。獲得140毫克(13％產(chǎn)量)白色固體狀的11b。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ7.98(d，J＝9.2Hz，1H)，7.64(s，2H)，7.18(d，J＝2.5Hz，1H)，7.05(br.d，J＝7.9Hz，1H)，6.88(br.s，1H)，6.32(s，2H)，3.90(s，3H)。實(shí)施例12合成4-羥基-7-甲氧基-2-(6-甲基-2-吡啶基)喹啉(12d) A.在苯(5毫升)中回流6-甲基吡啶甲酸12a(411毫克，3.0毫摩爾)和SOCl2(0.520毫升，7.2毫摩爾，2.4當(dāng)量)2小時(shí)。在真空下從該反應(yīng)混合物中除去溶劑和過量的SOCl2，并將殘余物與戊烷一起研制。濾掉所形成的固體物質(zhì)，并濃縮濾液，得到酰基氯12b(500毫克，2.6毫摩爾)。B.將在CH2Cl2(10毫升)中的苯胺8a(344毫克，2.08毫摩爾)、DIPEA(1.45毫升，8.35毫摩爾)和DMAP(61毫克，0.5毫摩爾)的溶液，加至0℃下在CH2Cl2(5毫升)中的粗制?；?2b的溶液中。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物16小時(shí)。在真空下除去揮發(fā)性的成分，將殘余物溶解于EtOAc中，并以5％NaHCO3(2x)、H2O和鹽水沖洗該溶液。然后將有機(jī)層，以MgSO4干燥，并在真空下濃縮。通過急驟柱色層法純化該混合物，使用EtOAc/己烷(1∶2)作為洗脫液，得到酰胺12c(490毫克，82％)。C.將tBuOK(410毫克，3.43毫摩爾)加至在t-BuOH(10毫升)中的酰胺12c(490毫克，1.71毫摩爾)的懸浮液中，并在75℃下攪拌該混合物6小時(shí)，然后在室溫下攪拌16小時(shí)。然后將該混合物倒入磷酸緩沖溶液(175毫升，pH＝7)中，并攪拌30分鐘。將固體與醋酸乙酯一起研制兩次。以鹽水沖洗有機(jī)相，以MgSO4脫水，并在真空下濃縮。將所得的固體與EtOAc一起研制，得到喹啉衍生物12d(263毫克，58％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.68(s，3H)，3.94(s，3H)，6.85-6.88(2d，J＝8.6&9.5Hz，2H)，6.94(dd，J＝8.9&2.2Hz，1H)，7.27(dd，J＝6.7&1.9Hz，1H)，7.73-7.79(m，2H)，8.28(d，J＝8.9Hz，1H)，10.3(br.s，1H)。實(shí)施例13合成4-羥基-7-甲氧基-2-(5-甲氧基-2-吡啶基)喹啉(13d) A.將NaOH(2M，4.70毫升)加至在MeOH中的化合物13a(623毫克，3.73毫摩爾)的溶液中，并在室溫下攪拌該混合物2小時(shí)。然后以HCl(6N，2.2毫升)酸化該溶液，并濃縮后得到化合物13b，其直接使用在下一個(gè)步驟，不需純化。B.將苯胺8a(500毫克，3.03毫摩爾)加至在吡啶(25毫升)中的粗制化合物13b(大約3.73毫摩爾)的溶液中，并在加入POCl3(0.35毫升，3.73毫摩爾)之前，將該溶液冷卻至-25℃。在-10℃下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)，然后在0℃下攪拌2小時(shí)。然后將該混合物倒入H2O中，并以EtOAc萃取(2-3x)。以5％NaHCO3和鹽水沖洗合并的有機(jī)層，以MgSO4干燥，并在真空下濃縮。通過急驟柱色層法純化粗制的物質(zhì)，使用EtOAc/己烷(1∶2)作為洗脫液，得到酰胺13c(617毫克，55％)。C.將tBuOK(490毫克，4.11毫摩爾)加至在無水t-BuOH(10毫升)中的酰胺13c(617毫克，2.05毫摩爾)的懸浮液中，并在75℃下攪拌該混合物6小時(shí)，然后在室溫下16小時(shí)。將該反應(yīng)混合物倒入磷酸緩沖溶液(175毫升，pH＝7)中，并攪拌30分鐘。過濾所形成的固體物質(zhì)，并與EtOAc一起研制，得到喹啉衍生物13d(250毫克，43％)。1HNMR(DMSO，400MHz)δ3.86(s，3H)，3.94(s，3H)，6.72(bs，1H)，6.91(dd，J＝8.9&1.9Hz，1H)，7.54(d，J＝1.9Hz，1H)，7.60(dd，J＝8.9&2.9Hz，1H)，7.97(d，J＝8.9Hz，1H)，8.21(d，J＝8.6Hz，1H)，8.48(d，J＝1.9Hz，1H)。實(shí)施例14合成4-羥基-7-甲氧基-2-(噁唑-5-基)喹啉(14c) A.將得自實(shí)施例4的經(jīng)保護(hù)的喹啉衍生物4b(3.8克，11.8毫摩爾)溶解于CH2Cl2(60毫升)中，并在于15分鐘內(nèi)極慢地加入氫化二異丁基鋁(7.9毫升，1當(dāng)量，1.5M在甲苯中)之前，冷卻至-78℃。在攪拌80分鐘之后，加入另外量的DIBAL(5.5毫升，0.7當(dāng)量，1.5M在甲苯中)。在-78℃下再攪拌2小時(shí)后，在-78℃下用甲醇(4毫升)小心地使該反應(yīng)驟冷，然后倒入羅謝爾(Rochelle)鹽(1N酒石酸K-Na)的水溶液中。將粘稠的糊狀物與CH2Cl2(300毫升)一起攪拌2小時(shí)，直到澄清為止。分離相，并將有機(jī)相干燥(MgSO4)，過濾并濃縮后得到白色的固體。通過急驟柱色層法純化(SiO2，230-400日)，利用50％EtOAc/己烷，得到白色固體狀的醛14a(2.5克，73％)。B.將甲苯磺?；谆惽杷?66毫克，0.34毫摩爾)加至在MeOH(7毫升)中的K2CO3(48毫克，0.34毫摩爾)攪拌的懸浮液中。反應(yīng)混合物在80℃加熱16小時(shí)并在真空下濃縮至干。通過急驟色層法(SiO2，230-400目)純化，得到所要求的噁唑14b(0.089g，80％)MS331.0(M+H)+。C.將MEM保護(hù)的氫醌14b溶于THF(3ml)并用HCl水溶液(1N，1ml)處理。反應(yīng)物在真空下濃縮到干燥前在室溫下攪拌30分鐘。殘留物用磷酸鹽緩沖液(3ml，1N溶液，pH4.5)處理，并在產(chǎn)物過濾前攪拌，用蒸餾水洗滌并在高真空下干燥過夜(60℃，16小時(shí))。得到棕黃色固體的所要求的羥基喹啉14c.(0.065g，100％)MS242.9(M+H)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.65(s，1H)，8.02(bs，1H)，7.97(d，J＝8.9Hz，1H)，7.19(s，1H)，6.93(d，J＝7.9Hz，1H)，6.42(bs，1H)，3.87(s，3H)，ES(+)MSm/z242.9(M+H)+肽連接劑部分(P3)實(shí)施例15(2S)-N-Boc-氨基-壬-8-烯酸(15g) A.在30至45分鐘內(nèi)，將氫氧化鈉水溶液(1M，1當(dāng)量，460毫升)逐滴加至在二噁烷(500毫升)中的可購得的2-乙酰氨基丙二酸乙二酯15a(100克，0.46摩爾)的溶液中。持續(xù)攪拌所得的混合物16.5小時(shí)，然后在真空中蒸發(fā)二噁烷，并以三份300毫升醋酸乙酯萃取水溶液，并以濃HCl酸化至pH1。靜置該溶液，使其在冰水浴中形成結(jié)晶。在少量結(jié)晶出現(xiàn)之后，以聲波震蕩該混合物，并出現(xiàn)豐富的沉淀物。過濾并在真空下濃縮，得到白色固體狀的化合物15b(62.52克，72％)產(chǎn)量。B.在20分鐘的期間內(nèi)，將過碘酸鈉的水溶液(40.7克，0.190摩爾，1.1當(dāng)量，在475毫升H2O中)加至在1升圓底燒瓶中的以磁力攪拌的可購得的7-辛烯-1，2-二醇15c(25克，0.173摩爾)和H2O(100毫升)的乳液中(輕微放熱的)。在室溫下再攪拌所得的混合物1小時(shí)(通過TLC證實(shí)反應(yīng)完成)。然后將該混合物倒入分液漏斗中，并從有機(jī)層中分離出水層。以NaCl飽和水溶液，再從有機(jī)部分中倒出并分離。合并兩個(gè)有機(jī)份，利用硫酸鈉干燒，并在棉塞上過濾(在巴斯德吸液管中)，得到化合物15d(15.135克，無色的油，78％產(chǎn)量)。以CH2Cl2萃取水溶液，用無水的MgSO4干燥，并在真空下濃縮(不需加熱，庚醛沸點(diǎn)153℃)，得到另外的化合物15d(1.957克，無色的油，10％產(chǎn)量)?？偖a(chǎn)量88％。C.在1分鐘內(nèi)，在固體2-乙酰氨基丙二酸乙酯15b(7.57克，40毫摩爾)中加入在吡啶(32毫升，10當(dāng)量)中的6-庚醛15d(4.48克，40毫摩爾)溶液。在10℃浴中冷卻所得的溶液，并在4分鐘內(nèi)加入乙酸酐(12毫升，3.2當(dāng)量)。在室溫下攪拌所得的有機(jī)溶液，并加入另一部分的2-乙酰氨基丙二酸乙酯15b(2.27克)。在室溫下再攪拌所得的混合物11小時(shí)。然后加入冰(60毫升)，并攪拌該溶液1.5小時(shí)，然后以250毫升的水稀釋該混合物，并以兩份乙醚萃取。以1NHCl、飽和的NaHCO3沖洗醚的溶液，以Na2SO4干燥，濃縮，并通過急驟色層法純化(EtOAc40％/己烷)，得到淡黃色油狀的化合物15e(4.8克，50產(chǎn)量)。D.將(S，S)-Et-DUPHOS Rh(COD)OTf(51毫克，S/C＝496)加至在無水乙醇(70毫升)中的脫氣的(使氬氣鼓泡30分鐘)2-乙酰氨基-2，8-壬二烯酸Z-乙酯15e(8.38克，35毫摩爾)的溶液中。將該混合物放在30磅/平方英寸的氫氣下(在4次真空-H2循環(huán)后)，并在帕爾(Parr)震蕩器上攪拌2小時(shí)。將所得的混合物蒸發(fā)至干，獲得粗制的化合物15f，將其使用在下一個(gè)步驟中，不需純化。E.將Boc2O(13.2克，2當(dāng)量)和DMAP(740毫克，0.2當(dāng)量)加至在THF(100毫升)中的粗制的2-乙酰氨基-8-壬烯酸(S)-乙酯15f(7.3克，30.3毫摩爾)的溶液中，并將該反應(yīng)混合物加熱回流2.5小時(shí)。接著，蒸發(fā)大部分的THF溶劑，以CH2Cl2稀釋粗混合物，并以1NHCl沖洗，以便除去DMAP。進(jìn)一步以飽和NaHCO3水溶液萃取有機(jī)層，用無水的Na2SO4干燥，并在真空下濃縮。然后以THF(50毫升)和水(30毫升)稀釋粗產(chǎn)物，加入LiOH·H2O(2.54克，2當(dāng)量)，并在室溫下攪拌所得的混合物25小時(shí)(通過TLC證實(shí)水解作用的完成)。在真空下濃縮該反應(yīng)混合物，除去大部分的THF溶劑，并以CH2Cl2稀釋。以1NHCl沖洗所得的溶液，用無水的NaSO4干燥，并在真空下濃縮。為了除去少量的不純物和過量的Boc2O，通過急驟色層法純化粗產(chǎn)物(使用從100％己烷-100％EtOAc的溶液梯度作為洗脫液)。獲得淡黃色油狀的高純度的標(biāo)題化合物15g(5.82克，71％產(chǎn)量)。1H NMR(DMSO，400MHz)δ7.01(d，J＝8Hz，1H)，5.79(tdd，Jt＝6.7Hz，Jd＝17.0，10.2Hz，1H)，5.00(md，Jd＝17.0Hz，1H)，4.93(md，Jd＝10.2Hz，1H)，3.83(m，1H)，2.00(q，J＝6.9Hz，2H)，1.65-1.5(m，2H)，1.38(s，9H)，1.35-1.21(m，6H)。實(shí)施例15A另一種(2S)-N-Boc-氨基壬-8-烯酸的合成方法(15g) A.在15分鐘的期間內(nèi)，將8-溴-1-辛烯(15h，2.52毫升，15毫摩爾)逐滴加至在含有二溴乙烷(0.1毫升)的無水THF(30毫升)中的細(xì)細(xì)切開的Mg帶(0.55克，22.5毫摩爾)攪拌的懸浮液中[該反應(yīng)為輕微放熱的]。在30分鐘后，將該混合物加熱至38℃1小時(shí)，然后在通過插管將其加至過量的固體CO2中之前，冷卻至-78℃。以二乙醚(100毫升)稀釋該混合物，并以鹽水(2×50毫升)沖洗該溶液，以MgSO4干燥并蒸發(fā)。獲得粗制的油，通過色層法在硅膠上純化，使用15％在己烷中的EtOAc作為洗脫液，得到產(chǎn)量62％的化合物15i(1.44克)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.31-1.42(m，6H)，1.60-1.69(m，2H)，2.02-2.09(m，2H)，2.35(t，J＝8.3Hz，2H)，4.99(dm，J＝10.0Hz，1H)，5.04(dm，J＝17.0Hz，1H)，5.75-5.86(m，1H)。B.將新近蒸餾的Et3N(1.6毫升，11.3毫摩爾)和新戊?；?1.18毫升，9.58毫摩爾)通過注射器在無水的條件下加至在-78℃，在無水THF(70毫升)中的羧酸15i(1.36克，8.7毫摩爾)的劇烈攪拌的溶液中。在-78℃下攪拌該混合物15分鐘，然后在0℃下攪拌45分鐘。再將該混合物冷卻至-78℃，然后通過套管送至-78℃、在THF中的4(S)-4-(苯甲基)-2-噁唑烷酮鋰鹽的無水溶液中，噁唑烷酮試劑的鋰鹽是先通過將n-BuLI(2.00M在己烷中，7.85毫升，15.7毫摩爾)慢慢地加至在-78℃，在THF中的噁唑烷酮(2.78克，15.7毫摩爾)的THF(20毫升)溶液中來制備。在-78℃下攪拌該反應(yīng)混合物15分鐘，然后在室溫下攪拌1.5小時(shí)。最后，用硫酸氫鈉的水溶液(100毫升1M)使其驟冷，并蒸發(fā)THF至其原始體積的3/4。以EtOAc(2×150毫升)萃取殘余物，并以5％NaHCO3(3×50毫升)、鹽水(2×50毫升)沖洗混合的有機(jī)層，以MgSO4干燥并蒸發(fā)。在硅膠上層析所得的粗制的油，使用15％在己烷中的EtOAc，得到產(chǎn)量68％的化合物15j(1.88克)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.35-1.47(m，6H)，1.67-1.74(m，2H)，2.02-2.09(m，2H)，2.65(dd，J＝13.4&9.9Hz，1H)，2.84-3.02(m，2H)，3.31(dd，J＝13.4&3.2Hz，1H)，4.13-4.22(m，2H)，4.62-4.71(m，1H)，4.93(d，J＝10.2Hz，1H)，5.00(dd，J＝17.2&1.6Hz，1H)，5.75-5.84(m，1H)，7.18-7.38(m，5H)。C.將在-78℃，在無水THF(40毫升)中的酸衍生物15j(3.25克，10.30毫摩爾)的溶液以插管注入-78℃，在無水THF(50毫升)中的KHMDS(0.8M THF，22毫升，17.5毫摩爾)攪拌的溶液中。在-78℃下攪拌該混合物45分鐘。將-78℃，在無水THF(40毫升)中的三菜基疊氮化物(trizylazide)(3.67克，11.85毫摩爾)的溶液加至該混合物中。在-78℃下攪拌該混合物3分鐘，然后以醋酸(5毫升)使其驟冷。接著，在室溫下攪拌1小時(shí)45分鐘，最后在40℃下攪拌15分鐘。蒸發(fā)大部分的THF。將殘余物溶解于EtOAc(100毫升)中，以H2O(50毫升)、5％NaHCO3(3×50毫升)和鹽水(50毫升)沖洗有機(jī)溶液，(MgSO4)并蒸發(fā)。在硅膠上層析所獲得的油，使用己烷/CH2Cl2(1/1)作為洗脫液，得到化合物15k(2.47克，產(chǎn)量67％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.32-1.45(m，6H)，1.45-1.6(m，1H)，1.75-1.88(2，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)，2.01-2.11(m，2H)，2.82-2.87(m，1H)，3.33(dd，J＝13.4&3.2Hz，1H)，4.10-4.28(m，2H)，4.62-4.72(m，1H)，4.90-5.05(m，3H)，5.73-5.88(m，1H)，7.17-7.38(m，5H)。D.將在無水MeOH(20毫升)中，0℃的疊氮化物15k(2.45克，6.9毫摩爾)的溶液，以插管注入在無水MeOH(80毫升)中的無水SnCl2(2.61克，13.8毫摩爾)的攪拌的溶液中。在室溫下攪拌該混合物4小時(shí)。蒸發(fā)MeOH，并將所獲得的泡沫狀物質(zhì)溶解于二噁烷/H2O(100微升/20微升)中，并以Boc2O(3.0克，13.8毫摩爾)和NaHCO3(2.89克，34.5毫摩爾)處理(如有需要以較多的NaHCO3將pH值調(diào)整到8)，并在室溫下攪拌該混合物16小時(shí)。蒸發(fā)二噁烷的部分(～50％)，并以EtOAc萃取殘余物兩次。以鹽水(2×50毫升)沖洗有機(jī)溶液，干燥并蒸發(fā)。在硅膠上層析所得的殘余物，使用20-25％在己烷中的EtOAc作為洗脫液，得到化合物151(1.75克，產(chǎn)量60％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.27-1.53(m，6H)，1.46(s，9H)，1.80(m，1H)，2.00-2.08(m，1H)，2.80(t，J＝12.1Hz，1H)，3.34(d，14.3Hz，1H)，4.17-4.23(m，2H)，4.60-4.66(m，1H)，4.93(d，J＝10.2Hz，1H)，5.05(dd，J＝17.2&1.9Hz，1H)，5.13(bs，1H)，5.38-5.43(m，1H)，5.74-5.84(m，1H)，7.22-7.36(m，5H)。E.將H2O2(30％體積/重量，2.05毫升，16.2毫摩爾)和LiOH·H2O(0.34克，8.1毫摩爾)加至90℃，在THF/H2O(75毫升/15毫升)中的N-Boc衍生物151(1.74克，4.04毫摩爾)的攪拌的溶液中，并在0℃下攪拌該溶液1小時(shí)。以Na2SO3(2.24克，H2O在中，15毫升，17.8毫摩爾)使該反應(yīng)驟冷。利用10％檸檬酸水溶液將pH值調(diào)整到4-5，并以EtOAc稀釋該混合物。以EtOAc再萃取水溶液部分一次，并以鹽水沖洗有機(jī)溶液兩次，干燥并蒸發(fā)。在硅膠上層析殘余物，使用20％在EtOAc中的己烷作為洗脫液，得到游離的羧酸15g(0.76克，產(chǎn)量70％)。該化合物在各方面與在實(shí)施例15中所獲得的相同。實(shí)施例16合成(2S)-N-Boc-氨基-5-氧代-壬-8-烯酸甲酯(16d)
該合成是以T.Tsuda等人，J.Am.Chem.Soc.1980，102，6381-6384的方法為基礎(chǔ)。A.在-78℃的N2下，在5分鐘的期間內(nèi)將n-Bu2Mg(0.9M/己烷，5.8毫升，5.2毫摩爾)逐滴加至在無水THF(20毫升)中的丙二酸單烯丙基酯(1.50克，10.4毫摩爾)的徹底攪拌的溶液中。然后在室溫下攪拌粘稠的懸浮液1小時(shí)，并蒸發(fā)至干(在N2下真空釋放)。在真空下將固體Mg鹽16b干燥1小時(shí)。
首先在無水的THF中將谷氨酸衍生物16a與1，1′-羰基二咪唑(1.65克，10.21毫摩爾)混合，并在室溫下攪拌該混合物1小時(shí)，以活化游離酸的部分。接著，以插管將已經(jīng)活化的谷氨酸衍生物注入Mg鹽16b的溶液中，并在室溫下攪拌所得的反應(yīng)混合物16小時(shí)。然后以EtOAc稀釋，并以0.5N冰冷的HCl、鹽水沖洗有機(jī)溶液，干燥并蒸發(fā)。在硅膠上層析所得的殘余物，使用35-40％在己烷中的EtOAc作為洗脫液，得到化合物16c(1.85克，產(chǎn)量53％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.44(s，9H)，1.85-1.95(m，1H)，2.12-2.22(m，1H)，2.58-2.74(m，2H)，3，48(s，2H)，3.74(s，3H)，4.24-4.34(m，1H)，4.52(dm，J＝5.7Hz，2H)，5.09(m，1H)，5.25(dm，J＝10.2Hz，1H)，5.34(m，J＝17.2Hz，1H)，5.91(m，1H)。B.將在無水DMF(3毫升)中的二酯16c(0.687g 2毫摩爾)(通過注射器并在N2下)，加至在無水DMF(7毫升)中的四(三苯膦)Pd(0)(0.116克，5摩爾％，0.1毫摩爾)的經(jīng)過攪拌的溶液中。在室溫下攪拌該混合物3.5小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)DMF，并以EtOAc(20毫升)稀釋殘余物。以0.5N冰冷的HCl(5毫升)、鹽水(10毫升)沖洗該EtOAc溶液，干燥并蒸發(fā)。在硅膠上層析殘余物，使用15-20％在己烷中的EtOAc作為洗脫液，得到化合物16d(0.253克，產(chǎn)量42％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.44(s，9H)，1.84-1.94(m，1H)，2.08-2.22(m，1H)，2.33(dd，J＝14.0&7.3Hz，2H)，2.45-2.55(m，4H)，3.74(s，3H)，4.28(bm，1H)，4.98(dm，J＝10.2Hz，1H)，5.03(dm，J＝17.2Hz，1H)，5.00-5.10(m，1H)，5.74-5.85(m，1H)。實(shí)施例17合成(2S，5R)-N-Boc氨基-5-甲基-壬-8-烯酸(17f) A，B，C，D首先依據(jù)與上面在實(shí)例15中，有關(guān)將醛15d轉(zhuǎn)化為氨基酸中間物15f所述相同的合成步驟，將可購得的(R)-(+)-香茅醛17a轉(zhuǎn)化為氨基酸衍生物17b。E.將化合物17b(0.675克，5.6毫摩爾)溶解于tBuOH/丙酮/H2O(1∶1∶1，18毫升)的混合物中，并放在冰浴(0℃)中。相繼加入NMMO(0.789克，6.74毫摩爾，1.2當(dāng)量)和OsO4(2.5重量/重量，在tBuOH中，0.7毫升，0.067毫摩爾，0.012當(dāng)量)，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物4小時(shí)。通過在真空下蒸發(fā)除去大部分的丙酮，然后以EtOAc萃取該混合物。以H2O和鹽水進(jìn)一步?jīng)_洗有機(jī)層，以無水的MgSO4干燥，并蒸發(fā)至干。在使用1％在EtOAc中的EtOH作為洗脫液的急驟柱色層法后，獲得高純度的二元醇17c，產(chǎn)量為77％(0.575克)。F.在0℃下將NaIO4(0.48克，2.25毫摩爾，1.3當(dāng)量)加至在THF/H2O(1∶1，20毫升)中的二元醇17c(0.575克，1.73毫摩爾)的溶液中，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物3.5小時(shí)。接著通過在真空下蒸發(fā)除去大部分的THF溶劑，并以EtOAc(2×100毫升)萃取剩下的混合物。以5％檸檬酸水溶液(2×20毫升)、5％NaHCO3水溶液(20毫升)和鹽水(2×50毫升)進(jìn)一步?jīng)_洗混合的有機(jī)層，然后將EtOAc溶液以無水的MgSO4干燥，并在真空下蒸發(fā)至干。該醛中間物17d(0.47克粗產(chǎn)物)可直接使用在下一個(gè)步驟中，不需進(jìn)一步純化。G.將KHMDS(0.5M在甲苯中，5.2毫升，2.6毫摩爾)加至在無水甲苯(15毫升)中的Ph3PCH3Br(925毫克，2.6毫摩爾)的溶液中，并在室溫、N2下攪拌所形成的黃色懸浮液30分鐘。在這段期間之后，首先將該懸浮液冷卻至0℃，通過注射器加入醛17d(0.47克，1.73毫摩爾，溶解于15毫升無水的THF中)，并容許將該混合物加溫至室溫。在室溫下攪拌1小時(shí)之后，通過真空蒸發(fā)除去大部分的THF，將EtOAc(100毫升)加至該混合物中，并以H2O(30毫升)、5％NaHCO3水溶液(30毫升)和鹽水(30毫升)沖洗有機(jī)層。然后將該EtOAc溶液以無水的MgSO4干燥，并在真空下蒸發(fā)至干，在通過急驟柱色層法在硅膠上純化，使用己烷EtOAc(3∶2)作為洗脫液后，分離出純的化合物17e，后兩個(gè)步驟的產(chǎn)量為63％(0.29克)。
乙基酯的水解作用，并同時(shí)以N-乙?；Ｗo(hù)基交換在中間物中的Boc，得到化合物17f，是使用與將化合物15f轉(zhuǎn)變?yōu)?5g所報(bào)導(dǎo)的相同的程序來完成(17f，310毫克，定量的)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.88(d，J＝6.4Hz，3H)，1.18-1.28(m，2H)，1.35-1.48(m，3H)，1.45(s，9H)，1.64-1.74(m，1H)，1.81-1.89(m，1H)，1.94-2.12(m，2H)，4.28(bd，J＝～3.2Hz，1H)，4.83(dm，J＝11.1Hz，1H)，5.00(dm，J＝16.8Hz，1H)，5.74-5.84(m，1H)。實(shí)施例18合成N-Boc-O-烯丙基-(L)-蘇氨酸(18d) A.在0℃下將Boc-(L)-蘇氨酸18a(500毫克，2.28毫摩爾)部分地溶解于CH2Cl2/MeOH(分別為8毫升/0.5毫升)中。慢慢地加入在二乙醚中的重氮甲烷的溶液，直到保留黃色為止，表示過量重氮甲烷的出現(xiàn)。蒸發(fā)溶劑時(shí)，獲得混濁白色油狀的粗制的甲基酯18b(0.534克)。B.然后將中間物18b(311毫克，1.33毫摩爾)溶解于無水的二乙醚(8毫升)中，加入Ag2O(341毫克，1.47毫摩爾)和新活化的4分子篩(1克)。最后，在反應(yīng)燒瓶中加入烯丙基碘(134微升，1.47毫摩爾)，并在回流下攪拌該混合物。在20小時(shí)和30小時(shí)之后，加入兩份另外的烯丙基碘(每次45微升，0.50毫摩爾)，并繼續(xù)攪拌，總共36小時(shí)。然后通過硅藻土過濾該混合物，并通過急驟柱色層法在硅膠上純化，使用EtOAc/己烷(1∶4)作為洗脫液，得到73毫克(27％產(chǎn)量)澄清油狀的化合物18c。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.21(d，J＝6.0Hz，3H)，1.45(s，9H)，3.75(s，3H)，3.82-3.87(m，1H)，3.99-4.07(m，2H)，4.29(dd，J＝9.5&2.5Hz，1H)，5.14(dm，J＝10.5Hz，1H)，5.21(dm，J＝17.2Hz，1H)，5.75-5.84(m，1H)。C.將酯化合物18c(99毫克，0.362毫摩爾)溶解于THF/MeOH/H2O(2∶1∶1，4毫升)混合物中，并加入LiOH·H2O(61毫克，1.45毫摩爾)。在室溫下攪拌該溶液2小時(shí)，然后在真空下除去溶劑前，以1N HCl酸化至pH～3。使用如此所得的油，化合物18d以合成巨環(huán)抑制劑。實(shí)施例19合成(2S，3S)-N-Boc-2-氨基-3-(巰基烯丙基)丁酸(19e) A.將化合物19a(9.1毫摩爾)溶解于吡啶(5毫升)中，并在冰浴中將該溶液冷卻至0℃，分成小部分加入甲苯磺酰氯(2.3克，11.8毫摩爾，1.3當(dāng)量)，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物24小時(shí)。在這段期間之后，使該反應(yīng)混合物分布在二乙醚(300毫升)和H2O(100毫升)之間。進(jìn)一步以0.2MHCl(6×100毫升)和鹽水(100毫升)沖洗醚層，以無水的MgSO4干燥，過濾并在真空下濃縮至干。通過急驟柱色層析法純化粗制的物質(zhì)，使用己烷/EtOAc(梯度從8∶2到7∶3的比例)作為洗脫液，導(dǎo)致分離甲苯磺?；苌?9b，產(chǎn)量85％(3.05克)。B.將硫代乙酸鉀(365毫克，3.2毫摩爾，1.6當(dāng)量)加至在無水DMF(2.5毫升)中的中間物19b(7.75毫克，2毫摩爾)的溶液中，并在室溫下攪拌該混合物24小時(shí)。然后在真空下蒸發(fā)大部分的DMF，并使剩下的混合物分布在EtOAc和H2O之間。再以EtOAc萃取水層，以鹽水沖洗合并的有機(jī)層，以無水的MgSO4干燥，并蒸發(fā)至干。通過急驟柱色層法純化粗制的物質(zhì)，使用己烷/EtOAc(4∶1的比例)作為洗脫液，導(dǎo)致分離化合物19c，產(chǎn)量80％(465毫克)。C.將0.2M NaOH(2.4毫升)的水溶液加至在H2O/EtOH(3∶5比例，8毫升)中的硫酯19c(465毫克)的溶液中，并在室溫下攪拌該混合物1.5小時(shí)。然后加入烯丙基碘(0.292毫升，3.2毫摩爾，2當(dāng)量)，并在室溫下持續(xù)攪拌另外的30分鐘。將該反應(yīng)混合物濃縮至其原始體積的一半，然后以EtOAc萃取。以冷卻的0.5N HCl水溶液將液層酸化至pH＝～3，并以EtOAc反萃取。以鹽水沖洗混合的有機(jī)層，以無水的MgSO4干燥，并在真空下蒸發(fā)至干。該粗反應(yīng)混合物含有至少四種產(chǎn)物在硅膠上，通過使用己烷/EtOAc(梯度從9∶1到3∶1的比例)的急驟柱色層法后，分離出全部的產(chǎn)物。極性最低的化合物的結(jié)構(gòu)(TLC Rf＝0.68，在己烷/EtOAc 4∶1中)，符合想要的產(chǎn)物19d(83毫克，18％產(chǎn)量)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.24(d，J＝7Hz，3H)，1.46(s，9H)，3.13-3.19(m，2H)，3.24-3.29(m，1H)，3.77(s，3H)，4.50(dd，J＝8.6&3.8Hz，1H)，5.12(d，J＝12.4Hz，1H)，5.15(dd，J＝18.4&1.3Hz，1H)，5.22(bd，J＝7.6Hz，1H)，5.75-5.85(m，1H)。D.在室溫下將在MeOH/H2O(3∶1，4毫升)中的甲基酯19d(83毫克，0.287毫摩爾)的溶液與NaOH水溶液(0.2N，1.3毫升，0.26毫摩爾)混合24小時(shí)，并在40℃下1小時(shí)。以冷卻的HCl水溶液(0.5NHCl，在0℃下，pH＝4-5)將該反應(yīng)混合物酸化，在真空下除去MeOH，并以EtOAc萃取剩下的含水混合物。將有機(jī)溶液以MgSO4干燥，并蒸發(fā)至干，以獲得化合物19e。最后使用化合物19e來合成抑制劑，不需任何進(jìn)一步的純化作用。實(shí)施例20(S)-N-Boc-2-氨基-3-甲基-3-(1-巰基-4-丁烯基)丁酸(20c) A.將L-青霉胺20a(448毫克，3毫摩爾)溶解于DMF/DMSO(5∶1比例，6毫升)中，加入4-溴戊烯(0.46毫升，4.5毫摩爾，1.5當(dāng)量)和CsOH·H2O(1.0克，6毫升，2當(dāng)量)，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物。在24小時(shí)之后，將Boc2O(820毫克，3.75毫摩爾，1.25當(dāng)量)加至該混合物中，并再繼續(xù)攪拌12小時(shí)。接著在真空下除去DMF，以冷卻的0.5N HCl水溶液稀釋剩下的混合物，調(diào)整到pH＝～4-5，然后以EtOAc(2×50毫升)萃取。以鹽水(2x)沖洗有機(jī)層，以無水的MgSO4干燥，并蒸發(fā)至干，得到粗制的羧酸20b。B.進(jìn)行20b的純化作用是困難的，因此首先以重氮甲烷處理粗產(chǎn)物，形成相應(yīng)的甲基酯20c，然后通過急驟柱色層法純化，使用己烷/EtOAc(9∶1)作為洗脫液，獲得190毫克(20％產(chǎn)量)純的甲基酯20c。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.35(s，3H)，1.37(s，3H)，1.44(s，9H)，1.59-1.67(m，2H)，2.11-2.17(m，2H)，2.51-2.60(m，2H)，3.74(s，3H)，4.29(d，J＝8.6Hz，1H)，4.98(dm，J＝10.5Hz，1H)，5.03(dm，J＝19Hz，1H)，5.35(bd，J＝7Hz，1H)，5.72-5.83(m，1H)。C.接著將酯溶解于THF/MeOH/H2O(2∶2∶1，5毫升)中，加入LiOH·H2O(50毫克，2.0毫摩爾，2當(dāng)量)，并在40℃下攪拌該反應(yīng)混合物4小時(shí)，將酯20c水解回到酸20b。以0.5N HCl將該反應(yīng)混合物酸化至pH＝4-5，蒸發(fā)THF和MeOH至干，并以EtOAc萃取剩下的含水溶液。將EtOAc層以無水的MgSO4干燥，并蒸發(fā)至干，得到化合物20b，將其使用在后續(xù)的巨環(huán)抑制劑合成作用中，不需進(jìn)一步純化。非環(huán)狀的二肽和三肽中間物在溶液中進(jìn)行的偶聯(lián)反應(yīng)的普通程序，及其特定的實(shí)例描述在WO00/09543和WO 00/09558中。
已經(jīng)使用這些程序來合成中間物二肽26c、30a和三肽23a、24a、31a、32a和33a。實(shí)施例21合成非環(huán)狀的三肽21e A.將NMM(1.21毫升，10.05毫摩爾)和HATU(1.53毫升，4.02毫摩爾)相繼加至在CH2Cl2(10毫升)中的脯氨酸衍生物21a(從可購得的Boc-4(R)-羥基脯氨酸和4-氯-喹啉，按照在WO 00/09543和WO 00/09558中的描述來制備)(1.32克，3.68毫摩爾)和粗制同烯丙基ACCA1f(～3.35毫摩爾)的溶液中，并在室溫下攪拌該懸浮液18小時(shí)。在這段期間之后，蒸發(fā)溶劑，并將粗制的反應(yīng)混合物再溶解于EtOAc(30毫升)中。以5％NaHCO3水溶液(2×10毫升)、鹽水(10毫升)沖洗該溶液，以MgSO4干燥并蒸發(fā)之。通過色層法在硅膠上純化粗產(chǎn)物，使用8％在EtOAc中的二乙醚作洗脫液，得到想要的化合物21b的非對(duì)映異構(gòu)物，產(chǎn)量20％(未定出絕對(duì)立體化學(xué))。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.93&1.01(t，J＝8.3Hz，1H，比例3∶7的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)，1.14-1.35(m，2H)，1.44(s，9H)，1.45(s，9H)，1.50-1.82(m，4H)，2.08-2.24(m，2H)，2.32(bs 0.7H)，2.63(bs，0.75H)，2.93(bs，0.75H)，3.16(m，0.25H)，3.77(bs，1.5H)，3.88(bs，0.5H)，4.4-4.55(m，1H)，4.98(d，J＝10.2Hz，1H)，5.03(dd，J＝17.2&1.6Hz，1H)，5.24(bs，1H)，5.75-5.88(m，1H)，6.57&6.78(2bs，1H，2個(gè)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)，7.42-7.58(m，3H)，7.63-7.73(m，2H)，8.04(d，J＝8.3Hz，1H)，8.11(d，J＝8.3Hz，1H)，8.74(d，J＝5.1Hz，1H)。B.將HCl在二噁烷中的溶液(4M，4毫升)加至在無水CH2Cl2中的二肽21b(137毫克，0.248毫摩爾)的溶液中，并在室溫下攪拌該混合物1.5小時(shí)。然后蒸發(fā)溶劑，并在高度真空下使殘余物干燥，得到游離的氨基酸。將該混合物溶解于二乙醚/MeOH(3微升/2微升)中，并以溶解于二乙醚中稍微過量的重氮甲烷處理。在30分鐘之后，利用加入HCl(4M在二噁烷中)破壞過量的重氮甲烷，并將該混合物蒸發(fā)至干，得到化合物21c的HCl鹽，它可在下一個(gè)步驟中使用，不需任何純化。C.將(2S)-N-Boc-氨基-庚-6-烯酸21d(0.151克，0.62毫摩爾)、NMM(210微升，1.91毫摩爾)和HATU(0.236克，0.62毫摩爾)相繼加至在CH2Cl2(25毫升)中的粗制的二肽21c(0.23克，0.48毫摩爾)攪拌的懸浮液中，并在室溫下攪拌該混合物16小時(shí)(如有需要，在1小時(shí)后用NNM將pH值調(diào)整到～8)。蒸發(fā)CH2Cl2，將殘余物溶解于EtOAc(50毫升)中，并以5％NaHCO3(2×20毫升)、鹽水(2×20毫升)沖洗有機(jī)溶液，干燥并蒸發(fā)。通過在硅膠上層析所獲得的粗產(chǎn)物(50毫升，2％EtOH/EtOAc)，得到化合物21e(0.139克，產(chǎn)量46％)。1HNMR(CDCl3，400MHz，6∶1的比例的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物的化學(xué)位移δ1.21-1.27(m，1H)，1.36(s，9H)，1.45-1.81(4m，7H)，2.20-2.22(m，4H)，2.28-2.37(m，1H)，2.90-2.99(m，1H)，3.66(s，3H)，3.94-3.98(m，1H)，4.29(bdJ＝9.9Hz，1H，4.46-4.50(m，1H)，4.81(dd，J＝8.3&5.4Hz，1H)，4.92-5.06(m，4H)，5.16(d，J＝8.3Hz，1H)，5.37(m，1H)，5.70-5.84(m，2H)，6.82(d，J＝5.1Hz，1H)，7.47-7.55(m，2H)，7.71(dt，J＝7.0&1.3Hz，1H)，8.03(d，J＝8.6Hz，1H)，8.17(d，J＝8.0Hz，1H)，8.78(d，J＝5.1Hz，1H)。巨環(huán)的肽類實(shí)施例22通過烯烴復(fù)分解作用的巨環(huán)化作用的一般程序在所有情況下，以0.01M的濃度將三肽二烯溶解在CH2Cl2中，并通過氬氣鼓泡將該溶液脫氧后(體積500毫升大約1小時(shí))。加入催化劑的溶液(5-30摩爾％，溶解于少量的脫氣的CH2Cl2中)，并使該反應(yīng)混合物回流，直到通過TLC和HPLC指出所有的起始物質(zhì)均轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物為止。接著將粗制反應(yīng)混合物濃縮至近干，并通過硅膠短墊塞過濾，先以CH2Cl2洗脫，除去大部分催化劑，然后以EtOAc洗脫，以洗脫全部的巨環(huán)產(chǎn)物(們)(大部分時(shí)候是單一的非對(duì)映異構(gòu)體)。通過手性HPLC，在CHIRALCEL OJ-R柱(購自ChiralTechnologies Inc.，0.46×15cm)上，在205毫微米處使用70％H2O+0.06％TFA-30％CH3CN+0.06％TFA的恒溶劑混合物，分析得自每個(gè)反應(yīng)的粗產(chǎn)物。通過1H，COSY，TOCSY和ROESY NMR數(shù)據(jù)，可完全定出主要巨環(huán)產(chǎn)物的特征，以便證實(shí)其結(jié)構(gòu)和立體化學(xué)。實(shí)施例23合成巨環(huán)的中間物(23b) 通過使Ar鼓泡2小時(shí)，將在無水CH2Cl2(800毫升，Aldrich-無水的)中的二烯23a(4.0克，7.88毫摩爾)的溶液脫氧后。加入固體狀的哈維達(dá)氏(Hoveyda′s)催化劑(262毫克，0.434毫摩爾，5.5摩爾％)，并在Ar氣球形瓶下回流。在28小時(shí)后，蒸發(fā)紅-橙色的溶液，成為非晶形的固體，然后通過急驟柱色層法在硅膠上純化。最初的溶劑系統(tǒng)為10％在CH2Cl2中的EtOAc。一旦從該柱中洗脫催化劑，便將溶劑改為純的EtOAc。從其顏色證明從柱中洗脫的催化劑。分離出無色泡沫體的巨環(huán)產(chǎn)物23b，將其再溶解于CH2Cl2/己烷(～1∶2)中。蒸發(fā)溶劑，得到白色的粉末(3.362克，89％產(chǎn)量)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.20-1.50(m，6H)，1.43(s，9H)，1.53(dd，J＝9.5&5.4，1H)，1.61-1.70(m，1H)，1.76-1.90(m，2H)，2.05-2.26(m，4H)，2.45(d，J＝14.3，1H)，3.67(s，3H)，3.71(d，J＝11.1，1H)，3.90(dd，J＝11.1&4.3，1H)，4.43-4.53(m，2H)，4.76(d，J＝8.6，1H)，4.86(bd，J＝9.8，1H)，5.20-523(m，2H)，5.57(dt，J＝7.0&9.8，1H)，7.32(bs，1H)。實(shí)施例24合成巨環(huán)的中間物(24b)
通過Ar鼓泡2小時(shí)，將在無水CH2Cl2(600毫升，無水的)中的二烯24a(2.76克，3.82毫摩爾)的溶液脫氧。經(jīng)插管加入在無水并脫氣的CH2Cl2(8毫升)中的哈維達(dá)催化劑(117毫克，0.19毫摩爾，0.05當(dāng)量)的溶液，并在Ar氣球形瓶下，回流攪拌該反應(yīng)。在20小時(shí)之后，該反應(yīng)混合物大約完成50％，在此時(shí)加入第二份催化劑(117毫克)，并再繼續(xù)攪拌16小時(shí)。然后將該溶液濃縮至約100毫升，施加到硅膠墊(6×10公分)的上方，并先通過以CH2Cl2洗脫回收催化劑。利用3％在EtOAc中的MeOH將化合物26b洗出硅膠墊，并通過急驟柱色層法再純化，使用EtOAc/己烷(2∶1)，獲得70％產(chǎn)量的稍帶橄欖色的白色固體(1.85克，由HPLC得知純度為94％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ8.69(s，1H)，8.13(d，J＝9.2Hz，1H)，7.50-7.44(m，2H)，7.17(dd，J＝9.2，2.2Hz，1H)，7.04(d，J＝6.4Hz，1H)，5.60-5.56(m，1H)，5.52(dd，J＝9.2Hz，1H)，5.25(dd，J＝9.2Hz，1H)，4.59(d，J＝1 1Hz，1H)，4.44(dd，J＝9.2Hz，1H)，4.05-3.98(m，1H)，3.94(s，3H)，3.92(s，3H)，3.89-3.82(m，1H)，3.55(s，3H)，2.64-2.53(m，1H)，2.46(d，J＝7.3Hz，1H)，2.40-2.31(m，1H)，2.21(dd，J＝8.9Hz，1H)，1.78-1.65(m，2H)，1.55(dd，J＝4.8Hz，1H)，1.485(dd，J＝4.8Hz，1H)，1.41-1.30(m，7H)，1.16(s，9H)。MSes-795.4(M+H)-。實(shí)施例25合成化合物202&203(表2) A.在回流下，使用在CH2Cl2(毫升)中的催化含量的雙-(三環(huán)己基膦)二氯甲基苯釕IV(格魯布斯催化劑，上述)(52毫克，0064毫摩爾)，將二烯化合物21e(0.130克，0.205毫摩爾)環(huán)化2小時(shí)，在硅膠上層析(50毫升，3％EtOH/EtOAc)后，得到化合物25a(60.1毫克，產(chǎn)量48％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.22-1.30(m，2H)，1.35(2，9H)，1.44-2.35(m，13H)，3.07-3.14&31.6-3.24(2m，1H，比例1∶3的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)，3.69(s，3H)，3.96-4.04(m，1H)，4.42-4.50(m，1H)，4.95-5.04(m，1H)，5.05-5.15(m，1H)，5.20-5.30(m，1H)，5.55-5.65(m，1H)，6.75-6.79(2d，J＝5.4Hz，1H，比例1∶3的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)，7.36(s，1H)，7.46-7.50(m，1H)，8.03(d，J＝8.3Hz，1H)，8.13&8.17(2d，J＝8.0Hz，1H，比例1∶3的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)，8.77(d，J＝5.1Hz，1H)。B.用在THF/MeOH/H2O(4毫升/2毫升/2毫升)中的LiOH·H2O(8.7毫克，0.206毫摩爾)將巨環(huán)化合物25a(0.0156克，0.026毫摩爾)的酯部分水解。通過C18反相HPLC，在Whatman(Partisil 10，0DS3)50/2.4cm的柱上，使用從5％CH3CN水溶液到100％CH3CN的溶劑梯度純化粗產(chǎn)物，獲得非晶形的白色固體的純化合物202(11.8毫克)。1H NMR(DMSO，400MHz)δ1.12(s，9H)，1.20-1.24(m，2H)，1.32-1.40(m，3H)，1.58-1.62(m，2H)，1.68-1.78(m，3H)，1.95-2.02(m，1H)，2.08-2.18(m，2H)，2.42-2.59(m，2H)，3.97-4.00(bd，J＝9.8Hz，2H)，4.47(t，J＝8.6Hz，1H)，4.58(d，J＝11.8Hz，1H)，5.22-5.29(m，1H)，5.46-5.54(m，1H)，5.66(s，1H)，7.12(d，J＝6.0Hz，1H)，7.49(d，J＝3.5Hz，1H)，7.68(dd，J＝7.3Hz，1H)，7.98(dd，J＝7.0Hz，1H)，8.08(d，J＝8.3Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.35(d，J＝8.3Hz，1H)，9.08(d，J＝5Hz，1H)。C.在4M HCl/二噁烷(5毫升)的存在下，攪拌在無水CH2Cl2(1毫升)中的巨環(huán)化合物25a(20毫克，0.033毫摩爾)1小時(shí)。蒸發(fā)該混合物。并小心地干燥。將殘余物再溶解于CH2Cl2/DMF(3毫升/1毫升)中，并以NMM(14.5微升，0.132毫摩爾)和醋酸酐(7.0微升，0.073毫摩爾)處理，并在室溫下攪拌14小時(shí)。蒸發(fā)該混合物，并在高度真空下干燥。然后將殘余物溶解于THF/MeOH/H2O(4毫升/2毫升/2毫升)的混合物中，并與LiOH·2H2O(11毫克，0.264毫摩爾)一起攪拌過夜。在利用1N冰冷的HCl酸化至pH＝3后分離殘余物，通過C18反相HPLC純化，使用從0-40％CH3CN水溶液(0.06％TFA)的溶劑梯度，以便分離非晶形白色固體的純化合物203(12毫克)。1H NMR(50mM Na2PO4緩沖溶液，pH＝6.0，600MHz)δ1.22-1.27(m，2H)，1.38-1.43(m，2H)，1.58-1.64(m，2H)，1.67-1.76(m，2H)，1.77-1.84(m，1H)，1.92-1.99(m，1H)，2.22-2.08(m，1H)，2.12-2.27(m，1H)，2.22-2.27(m，1H)，2.60-2.67(m，1H，Pro-β′)，2.83-2.89(m，1H，Pro-β)，4.32(dd，J＝12.1&3.5Hz，1H，Pro-δ′)，4.41(dd，J＝12.1&7.3Hz，1H)，4.56(bd，J＝8.0Hz，1H，Pro-δ)，4.62(dd，J＝8.9Hz，1H，Pro-α)，5.40-5.46(m，1H)，5.55-5.61(m，1H)，5.73(bs，1H，Pro-γ)，7.41(d，J＝6.3Hz，1H)，7.64(bs，1H，Acca-NH)，7.80(dd，J＝7.9Hz，1H)，8.03(dd，J＝8.0Hz，1H)，8.07(d，J＝9.5Hz，1H)，8.16(d，J＝7Hz，1H，AcNH)，8.36(d，J＝8.3Hz，1H)，8.90(d，J＝6.0Hz，1H)。實(shí)施例26合成化合物508(表5) A.在16℃下攪拌在EtOAc/CH3/CN/H2O(2∶2∶1，60毫升)中的Boc-保護(hù)的L-谷氨酰胺26a(4.93克，20毫摩爾)二乙酸碘苯酯(7.73克，24毫摩爾1.2當(dāng)量)的溶液1小時(shí)，并在20℃下攪拌3小時(shí)。然后以H2O(20毫升)稀釋該反應(yīng)混合物，在真空下除去EtOAc和CH3CN溶劑，并以二乙醚(3×50毫升)和EtOAc(50毫升)萃取剩下的含水混合物，以便除去大部分的雜質(zhì)。然后將水層(含有胺中間物)濃縮至干，將剩下的物質(zhì)再溶解于10％Na2CO3(30毫升)中，在冰浴中冷卻至0℃，并慢慢地加入(～10分鐘)氯甲酸芐酯(3.3毫升，20.4毫摩爾，1.02當(dāng)量)二噁烷(40毫升)的溶液。在0℃下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)，并在室溫下攪拌2小時(shí)。然后以H2O(50毫升)稀釋該混合物，以冷的(～5℃)二乙醚(3×50毫升)萃取，以4N HCl酸化至pH＝3-4，并以EtOAc(3×50毫升)萃取。將合并的有機(jī)層以無水的MgSO4干燥，并在真空下蒸發(fā)至干。通過急驟柱色層法純化粗制的物質(zhì)，使用EtOAc/己烷/AcOH(7∶2.9∶0.1)，獲得總產(chǎn)量43％的化合物26b(3.04克)。B.將二肽中間物26c(250毫克，0.41毫摩爾)、化合物26b(171毫克，0.49毫摩爾，1.2當(dāng)量)和HATU(185毫克，0.49毫摩爾，1.2當(dāng)量)溶解于CH2Cl2(6毫升)中，并加入DIPEA(0.29毫升，1.62毫摩爾，4當(dāng)量)。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物14小時(shí)，然后在真空下蒸發(fā)CH2Cl2，并將粗制的物質(zhì)再溶解于EtOAc中。以5％NaHCO3水溶液和鹽水沖洗該EtOAc溶液，以無水MgSO4干燥，并蒸發(fā)至干。在通過急驟柱色層法純化粗制物質(zhì)，使用EtOAc/己烷(4∶1)作為脫液后，獲得98％產(chǎn)量的化合物26d(338毫克)。C.將在THF(5毫升)中的化合物26d(335毫克，0.394毫摩爾)的溶液冷卻至0℃，并加入在二甲硫中的BH3的溶液(0.12毫升的10M溶液，1.2毫摩爾，3當(dāng)量)。容許該反應(yīng)混合物加溫至室溫，并攪拌1小時(shí)。然后再將其冷卻至0℃，之后在15分鐘的期間內(nèi)，慢慢地加入NaOH的水溶液(0.8毫升的2.5M溶液，1.97毫摩爾，5當(dāng)量)，接著慢慢地(～15分鐘)加入H2O2的水溶液(0.8毫升的8.8M溶液，6.9毫摩爾，17.5當(dāng)量)。容許將該反應(yīng)混合物加溫至室溫，并攪拌1小時(shí)。在這段期間后，將該反應(yīng)混合物酸化至pH～4，以便使過量的BH3驟冷，然后加入NaHCO3水溶液，調(diào)整到pH＝9-10，在真空下除去THF，并使粗制的物質(zhì)分布在H2O2和EtOAc之間。以EtOAc再萃取水層，以鹽水沖洗合并的有機(jī)層，以無水的MgSO4干燥，并在在真空下蒸發(fā)至干。通過急驟柱色層法純化粗制的物質(zhì)，使用EtOAc/己烷/NH4OH(8∶2∶0.5)作為洗脫液，得到產(chǎn)量57％的純化合物26e(192毫克)。D.將迪斯-馬丁(Dess-Martin)高碘酸鹽(195毫克，97％，0.33毫摩爾，1.5當(dāng)量)加至在CH2Cl2(8毫升)中的化合物26e的溶液中，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。利用加入Na2S2O3水溶液(3毫升的5％溶液)使該反應(yīng)驟冷，然后加入飽和的NaHCO3水溶液(5毫升)，并在室溫下攪拌該混合物15分鐘。最后，以EtOAc萃取該反應(yīng)粗產(chǎn)物，以5％NaHCO3水溶液和鹽水沖洗有機(jī)層，以無水的MgSO4脫水，并在真空下蒸發(fā)，得到188毫克醛28f，將其使用在下一個(gè)步驟中，不需進(jìn)一步純化。E.在H2下，在大氣壓下，攪拌在乙醇(5毫升)中的化合物26f(188毫克，0.22毫摩爾)、CH3CO2H(38微升)和Pd(OH)2(25毫克)的溶液至室溫16小時(shí)。在這段期間后，在燒瓶中加入更多的H2氣體、Pd(OH)2(180毫克)和CH3CO2H(154微升)，并再繼續(xù)攪拌24小時(shí)。然后過濾該混合物，并將溶劑蒸發(fā)至干，通過急驟柱色層法純化粗制的巨環(huán)產(chǎn)物，使用CHCl3/MeOH/AcOH(10∶2∶1)，獲得～30％產(chǎn)量的化合物26g(48毫克)。F.在室溫下攪拌在CH2Cl2(5毫升)中的化合物26g(22毫克，0.031毫摩爾)、DIPEA(27微升，0.155毫摩爾，5當(dāng)量)和醋酸酐(8.7微升，0.093毫摩爾，3當(dāng)量)的混合物16小時(shí)。然后在真空下除去CH2Cl2，加入THF/MeOH/H2O(2∶2∶1，5毫升)和LiOH·2H2O(13毫克，0.31毫摩爾，10當(dāng)量)的混合物，并容許該水解反應(yīng)在室溫下進(jìn)行68小時(shí)，并在50℃下2小時(shí)。然后酸化該反應(yīng)混合物(pH＝～4)，并通過反相HPLC純化，獲得終產(chǎn)物508(～6毫克，最后兩個(gè)步驟產(chǎn)量為～26％)。508的1H NMR(DMSO，400MHz)(通過COSY、TOCSY和ROESY NMR數(shù)據(jù)證實(shí)為旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物的混合物)δ1.18(s，9H)，1.09-1.85(重疊的m，11H)，1.95(s，3H)，2.30(m，1H)，2.63(m，1H)，3.18-4，14(重疊的m，6H)，3.96(m，3H)，4.44(m，1H)，4.62&4.69(2d，J＝11.8Hz，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)，5.82(bs，1H)，7.20(m，2H)，7.53(bs，1H)，7.67(bs，4H)，8.19(bs，3H)，8.61(s，1H)。實(shí)施例27合成飽和的巨環(huán)中間物(27a) A.將不飽和的巨環(huán)中間物23b(3.50克，7.30毫摩爾)溶解于EtOAc(30毫升)中，并加入700毫克(20％重量/重量)5％在礬土上的Rh。在大氣壓和室溫下，在H2氣下攪拌該混合物1.5小時(shí)。在這期間之后，HPLC分析證實(shí)起始物質(zhì)完全轉(zhuǎn)變?yōu)閮煞N產(chǎn)物，想要的產(chǎn)物27a和次要的產(chǎn)物(總質(zhì)量的8％)，稍后證實(shí)其為化合物27b，由環(huán)丙烷環(huán)的打開而形成。過濾該反應(yīng)混合物，并濃縮后，得到淡綠色的固體(3.47克)。將該固體與EtOH共同蒸發(fā)兩次，除去所有的EtOAc(EtOAc的存在會(huì)干擾下一個(gè)步驟)。通過層析法證明分離化合物27a和27b，是非常困難的，因此設(shè)計(jì)另一種基于個(gè)別的甲基酯部分的水解作用的相對(duì)比率的方法。B.將化合物27a和27b的粗制混合物(3.47克)溶解于THF∶MeOH(1∶1，20毫升)中，加入LiOH·H2O的水溶液(24毫克在5毫升H2O中，8％當(dāng)量)，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物16小時(shí)(通過HPLC證實(shí)副產(chǎn)物27b完全水解成其對(duì)應(yīng)的酸27c)。在真空下濃縮該反應(yīng)混合物，以便除去大部分的THF和MeOH，并分布在H2O(100毫升)和EtOAc(300毫升)之間，以0.5N NaOH(3×100毫升)、鹽水(100毫升)、10％檸檬酸水溶液(2×100毫升)、鹽水(100毫升)沖洗有機(jī)層，以無水的MgSO4干燥，過濾并濃縮至干。獲得淡綠色泡沫體的高純度的想要產(chǎn)物27a(通過HPLC得知＞90％)，在兩個(gè)步驟中的總產(chǎn)量為93％(3.28克)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.1-1.38(m，13H)，1.42(s，9H)，1.51-1.57(m，1H)，1.63-1.67(dd，J＝8.0&5.1Hz，1H)，1.81-1.87(m，1H)，1.92-1.99(m，1H)，2.02-2.08(m，1H)，2.62(d，J＝14Hz，1H)，3.4(d，J＝8.3Hz，1H)，3.65(s，3H)，4.01(dd，J＝10.8&4.1Hz，1H)，4.42-4.48(m，1H)，4.51-4.55(m，1H)，4.87(d，J＝8.6Hz，1H)，5.14(d，J＝8.6Hz，1H)，7.97(br s，1H)。實(shí)施例28合成化合物#741(表7) 通過Mitsunobu反應(yīng)，使喹啉衍生物8f連接到預(yù)先-形成的巨環(huán)化合物23b上。使喹啉衍生物8f(30毫克，0.095毫摩爾)溶解于THF中，然后加入巨環(huán)23b(45.6毫克，1當(dāng)量)和PPh3(49.8毫克，2當(dāng)量)。將所得的混合物冷卻至0℃。然后逐滴加入DIAD(37.4微升，2當(dāng)量)。在0℃下攪拌該溶液1小時(shí)，然后在室溫下攪拌過夜。然后以EtOAc(15毫升)稀釋該混合物，以飽和的NaHCO3溶液(15毫升)沖洗，接著以鹽水沖洗。用MgSO4干燥該溶液，過濾并在真空中濃縮。獲得202毫克黃色的油。通過急驟層析法在硅膠上純化產(chǎn)物(100％EtOAc)。在純化后，該產(chǎn)物仍含有DIAD副產(chǎn)物。所得的產(chǎn)物含有55％重量/重量的想要產(chǎn)物，所以宣布產(chǎn)量為62％。
將酯中間物(46毫克，0.06毫摩爾)溶解于THF/MeOH/H2O的混合物(2∶1∶1，2毫升)中，加入LiOH·H2O(20毫克，0.48毫摩爾)，并在室溫下攪拌該溶液。在16小時(shí)后，通過HPLC分析該反應(yīng)混合物，指出水解作用已經(jīng)完成。在真空下除去有機(jī)溶劑，并將剩下的粗制物質(zhì)溶解于DMSO中，通過C18反相HPLC純化，得到純的抑制劑741。1H NMR(400MHz，DMSO-d)δ(ppm)8.67(s，1H)，8.29-8.14(m，2H)，8.08-7.97(m，1H)，7.91-7.78(m，1H)，7.74(s，1H)，7.31-7.20(m，1H)，7.10(d，J＝5.7Hz，1H)，5.82-5.71(m，1H)，5.58-5.47(m，1H)，5.32-5.23(m，1H)，4.74-4.64(m，1H)，4.55-4.47(m，1H)，4.23-4.06(m，1H)，4.04-3.94(m，1H)，3.97(s，3H)，3.92-3.85(m，1H)，2.70-2.55(m，2H)，2.53-2.36(m，2H)，2.20-2.09(m，1H)，1.80-1.62(m，2H)，1.56-1.43(m，2H)，14.2-1.29(m，6H)，1.27(d，J＝3.2Hz，3H)，1.25(d，J＝2.9Hz，3H)，1.12(s，9H)。MS763.1(M+1)，761.1(M-1)。實(shí)施例29合成化合物205(表2) 在℃下，將在叔-丁醇中的OsO4的溶液(0.36毫升的35％重量/體積，0.035毫摩爾)加至在叔-丁醇/H2O(1.5毫升/1.5毫升)中的巨環(huán)化合物25a(21毫克，0.035毫摩爾)的溶液中，并在室溫下攪拌該混合物1小時(shí)。以EtOAc(20毫升)稀釋該混合物，并以5％NaHCO3水溶液(2×10毫升)、鹽水(2×10毫升)沖洗有機(jī)溶液，脫水并蒸發(fā)至干。將粗制的化合物溶解于THF/MeOH/H2O(3毫升/1.5毫升/1.5毫升)中，并在LiOH·H2O(13毫克，0.28毫摩爾)的存在下攪拌16小時(shí)。以0.5N冰冷的HCl將該混合物酸化至pH4，蒸發(fā)并通過C18反相HPLC純化，使用從H2O(0.06％TFA)至40％CH3CN水溶液(0.06％TFA)的溶劑梯度。分離出高純度，非晶形白色固體的順式二元醇205?；衔?2051H NMR(DMSO，400MHz)δ1.01(s，9H)，1.06-1.30(m，9H)，1.48-1.68(m，3H)，1.78-1.88(m，1H)，≈2.2-2.5(2m，2H)，3.78-3.82(m，1H)，3.86-3.90(m，1H)，4.39(t，J＝8.9Hz，1H)，4.61(d，J＝11.4Hz，1H)，5.60(bs，1H，Pro-γ)，7.03(d，J＝6.0Hz，1H)，7.40(bs，1H)，7.58-7.62(m，1H)，7.87-7.91(m，1H)，8.00(d，J＝8.3Hz，1H)，8.24(d，J＝8.6Hz，1H)，8.60(s，1H)，8.99(bs，1H)。EMS(負(fù)離子化模式)m/z 625(M-H)-。實(shí)施例30合成化合物214&218(表2) A.在LiOH·H2O(50毫克，1.2毫摩爾)的存在下，在室溫下攪拌在MeOH/H2O(5毫升/2毫升)中的酮-壬烯酸酯16d(0.180克，0.6毫摩爾)的溶液1小時(shí)。以0.5N冰冷的HCl將該溶液酸化至pH6，并蒸發(fā)大部分的MeOH。然后將殘余物溶解于EtOAc(30毫升)中，并以0.5N冰冷的HCl(10毫升)，鹽水(10毫升)沖洗該溶液，干燥并蒸發(fā)。然后將粗制的是殘余物再溶解于CH2Cl2(10毫升)中，并在16小時(shí)的期間，在室溫下，在HATU(233毫克，0.612毫摩爾)和DIPEA(420微升，2.4毫摩爾)的存在下，與P1-P2片段30a(0.337克，0.6毫摩爾)反應(yīng)。在硅膠層上層析該反應(yīng)混合物，使用EtOAc/己烷(1/1)作為洗脫液，分離出純的化合物30b(0.370克，產(chǎn)量83％，通過HPLC得知純度＞95％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.41(s，9H)，1.45-1.54(m，1H)，1.58-1.62(m，1H)，1.73-1.77(m，1H)，1.86-1.91(m，1H)，2.16(dd，J＝17.8&8.6Hz，1H)，2.26-2.43(2m，2H)，2.46-2.58(m，2H)，2.64-2.81(m，1H)，2.85-2.92&2.95-3.03(2m，1H，1∶3的比例的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)，3.67(s，3H)，3.95(s，3H)，4.10-4.18(m，1H)，4.20-4.30(m，1H)，4.40-4.55(m，1H)，4.80-4.88(m，1H)，4.92-5.10(m，2H)，5.14(dd，J＝10.2&1.6Hz，1H)，5.24-5.38(m，4H)，5.42-5.54(m，1H)，5.68-5.86(m，2H)，7.04-7.14(m，2H)，7.42-7.64(m，5H)，7.92-8.12(m，3H)。B.在2小時(shí)的期間內(nèi)，在回流下，在CH2Cl2(從CaH2蒸餾，并以氬氣脫氣30分鐘)中的雙-(三環(huán)己基膦)二氯甲基苯釕IV(催化劑(0.125毫克，0.15毫摩爾)的存在下，將二烯30b(0.370克，0.49毫摩爾)環(huán)化。在硅膠上使用EtOAc/己烷(3/1)的急驟柱色層法后，獲得立體異構(gòu)物的混合物形式的化合物(30c和30d，1∶1的比例)，產(chǎn)量35％(0.124克)?；旌衔?0c&30d的1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.44(s，4H)，1.37(s，4H)，1.60(m，2H)，1.83(m，0.5H)，2.01(m，1H)，2.09(m，1H)，2.42(m，5H)，2.73(m，2H)，3.26(m，0.5H)，3.69(s，1.5H)，3.76(s，1.5H)，3.96(s，3H)，4.10(m，1H)，4.24(m，0.5H)，4.10(m，0.5H)，4.58(m，1H)，4.73(m，1H)，4.89(m，0.5H)，4.97(m，0.5H)，5.30(m，0.5H)，5.44(m，2H)，5.64(m，1H)，7.1-7.0(m，3H)，7.47(m，4H)，8.08-7.98(m，3H)。C，D.在室溫下，在16小時(shí)的期間，在有LiOH·H2O(11毫克，0.246毫摩爾)的HTF/MeOH/H2O(1毫升/0.5毫升/0.5毫升)中進(jìn)行甲基酯30c和30d(24毫克，0.033毫摩爾)的水解作用。在這段期間后，將該反應(yīng)混合物酸化至pH4-5，并在C18反相HPLC柱上層析，使用從H2O(0.06％TFA)至50％的CH3CN水溶液(0.06％TFA)的溶劑梯度。以高純度(通過HPLC得知純度為94％)從兩種化合物的混合物中，分離出想要的化合物214和218，產(chǎn)量15％(3毫克)?；衔?141H NMR(DMSO，400MHz)δ1.15(s，9H)，1.48-1.54(m，2H)，1.65-1.74(m，1H)，1.77-1.85(m，1H)，2.12-2.25(m，4H)，2.27-2.34(m，1H)，2.61-2.68(m，1H)，2.87(bt，J＝11.5Hz，1H)，3.92(dd，J＝9.2&1.5Hz，1H，Pro-δ)，3.97(s，3H，-OCH3)，4.14-4.20(m，1H)，4.52(t，J＝7.8Hz，1H，Pro-α)，4.66(d，J＝11.8Hz，1H，Pro-δ)，5.45(t，J＝9.9Hz，1H)，5.51-5.58(m，1H)，5.82(bs，1H，Pro-γ)，7.09(d，J＝6.0Hz，1H，BocNH)，7.26(bs，1H)，7.53(s，1H)，7.67(bs，3H)，8.16(d，J＝2Hz，1H)，8.18(s，1H)，8.83(s，1H，ACCA-NH)?；衔?181H NMR(DMSO，400MHz)δ1.06-1.10(m，1H)，1.18(s，9H)，1.52-1.55(m，1H)，1.62-1.80(m，1H)，2.10-2.68(重疊的，9H)，3.90(bd，J＝8.3Hz，1H)，3.96(s，3H，OCH3)，4.20-4.27(m，1H)，4.58-4.63(m，1H，Pro-δ)，4.66(dd，J＝8.3Hz，1H，Pro-α)，4.88(dd，J＝10.2Hz，1H)，5.18-5.26(m，1H)，5.73-5.79(m，1H，Pro-γ)，7.01(d，J＝6.4Hz，1H)，7.23(bs，1H)，7.50(bs，1H)，7.66(bs，3H)，8.20(bs，2H)，8.53(s，1H)。實(shí)施例31合成化合物209(表2) A.將二烯31a(249毫克，0.330毫摩爾)溶解于30毫升無水的CH2Cl2中，并用氫氣將該溶液脫氣15分鐘。將催化劑雙-(三環(huán)己基膦)二氯甲基苯釕IV(82毫克，0.100毫摩爾)溶解于3毫升無水并脫氣的CH2Cl2中，并加至該二烯的溶液中。在N2下使該反應(yīng)混合物回流2小時(shí)。濃縮該溶液，并通過急驟柱色層法純化，獲得棕色固體的化合物31b，產(chǎn)量71％(171毫克)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.22-1.44(m，10H)，1.42(s，9H)，1.66-1.74(m，1H)，1.87-1.97(m，2H)，2.13-2.38(m，3H)，2.32-2.39(m，1H)，3.08-3.16(m，1H)，3.41(s，3H)，4.07-4.22(m，3H)，4.28-4.34(m，1H)，4.58-4.64(m，1H)，4.95-4.99(m，1H)，5.22-5.29(m，2H)，5.38-5.43(m，1H)，5.48-5.56(m，1H)，7.00-7.12(m，3H)，7.43-7.55(m，4H)，7.97-8.11(m，3H)。ES(+)MSm/z 727.4(M+H)+。B.在HCl的溶液(1毫升在二噁烷中的4N)中，攪拌化合物31b(0.117毫摩爾)30分鐘，并濃縮至干。將固體溶解于CH2Cl2(2毫升)中，相繼加入Et3N(82微升，0.585毫摩爾)和異氰酸叔-丁酯(35毫克，0.351毫摩爾)。在室溫下攪拌20小時(shí)后，將該混合物濃縮至干，并將粗制的化合物31c用于最后的水解步驟，不需進(jìn)一步純化。D.將化合物31c(85毫克，0.117毫摩爾)溶解于THF/MeOH/H2O(2毫升/1毫升/1毫升)中，加入LiOH·H2O(39毫克，0.936毫摩爾)，并在室溫下攪拌該溶液20小時(shí)。在這期間后，加入醋酸(1毫升)，并濃縮該溶液以除去MeOH和THF。在通過C18反相HPLC純化粗制品后，分離出純的化合物209(25毫克，～31產(chǎn)量)。1H NMR(MDSO，400MHz)δ1.04(s，9H)，1.15-1.24(m，2H)，1.30-1.40(m，5H)，1.44-1.51(m，2H)，1.54-1.68(m，1H)，1.75-1.88(m，1H)，2.18(dd，J＝17.2&8.5Hz，1H)2.32-2.45(m，1H，Pro-β)，2.54-2.62(m，1H)，2.65-2.68(m，1H，Pro-β)，3.91(dd，J＝11.1&3.5Hz，1H，Pro-δ)，3.96(s，3H，-OCH3)，4.17-4.23(m，1H)，4.47(dd，J＝8.6，1H，Pro-α)，4.67(bd，J＝7.9Hz，1H，Pro-δ)，5.30(dd，J＝9.5Hz，1H)，5.52(bdd，J＝19&8.3，1H)，5.68(s，1H)，5.78(bs，1H，Pro-γ)，5.94(bs，1H)，7.21(bs，1H)，7.51(bs，1H)，7.66(bs，4H)，8.19(s，2H)，8.40(d，J＝7Hz，1H)，8.61(s，1H，ACCA-NH)。ES(+)(MSm/z 698.3(M+H)-。實(shí)施例32合成化合物#404和#407(表4) A.將二烯32a(84毫克，0.11毫摩爾)溶解于無水的CH2Cl2(11毫升)中，并在15分鐘期間用氬氣流將該溶液脫氣。首先將雙-(三環(huán)己基膦)二氯甲基苯釕IV催化劑(19毫克，0.023毫摩爾)溶解于1毫升脫氣的CH2Cl2中，然后經(jīng)由插管將其輸送至反應(yīng)燒瓶中。在回流下攪拌該反應(yīng)混合物2小時(shí)。然后在真空下除去溶劑，并通過急驟柱色層法，在硅膠上純化該反應(yīng)混合物，使用EtOAc/己烷(1∶1)作為洗脫液，得到黃色油狀的巨環(huán)化合物32b(33毫克，41％產(chǎn)量)。B.將酯中間物32b(33毫克，0.045毫摩爾)溶解于THF/MeOH/H2O(2∶1∶1的比例，2毫升)的混合物中，加入LiOH·H2O(8毫克，0.18毫摩爾)，并在室溫下攪拌該溶液。16小時(shí)后，通過HPLC分析該反應(yīng)混合物，指出水解作用未完成。因此加入另外量的LiOH·H2O(4毫克，0.09毫摩爾)，并在室溫下攪拌該溶液，總共36小時(shí)。最后，以小等份的醋酸將該溶液酸化，在真空下除去有機(jī)溶劑，并通過C18反相HPLC純化剩下的粗制物質(zhì)，得到純的抑制劑404。1H NMR(DMSO，400MHz)δ1.21(d，J＝6.0Hz，3H，Me)，1.36(s，9H，Boc)，1.1-1.4(3m，3H)，1.66(m，1H)，1.80(m，1H)，2.10(m，2H)，2.57(m，2H)，3.90(m，4H)，4.47(bd，J＝12.7Hz，1H)，4.58(bd，J＝7.3Hz，1H)，4.66(dd，J＝8.0Hz，1H)，5.57(m，1H)，5.66(m，1H)，5.83(bs，1H)，6.18(bd，J＝6.9Hz，1H)，7.25(bd，J＝7.3Hz，1H)，7.56(bs，1H)，7.70(m，4H)，8.22(bd，J＝2.9Hz，2H)，8.29(bs，9.2Hz，1H)。C.將抑制劑404(15毫克，0.021毫摩爾)溶解于乙醇(2毫升)中，并加入Pd10％/C(2毫克)。在室溫下，在氫氣下攪拌該混合物16小時(shí)。過濾后，通過C18反相HPLC純化該混合物，得到白色固體的抑制劑407(10毫克，66％產(chǎn)量)。1H NMR(DMSO，400MHz)δ1.04(m，1H)，1.17(d，J＝6.0Hz，3H)，1.35(s，9H)，1.25-1.75(m，12H)，2.32-2.45(m，1H)，3.40-3.50(m，2H)，3.74-3.83(m，1H)，3.85-3.93(m，1H)，3.97(s，3H)，4.27-4.36(dd，J＝21.1&8.6Hz，1H)，4.54(dd，J＝7.95&7.95Hz，1H)，5.64(d，J＝8.3Hz，1H)，5.82(br s，1H)，7.27-7.33(m，1H)，7.53-7.57(bs，1H)，7.60-7.74(m，4H)，8.13-8.27(m，3H)，8.30-8.35(br，s，1H)。實(shí)施例33合成化合物#824(表8) A.將化合物33a(～0.55毫摩爾)溶解于CH2Cl2(100毫升)中，并在加入哈維達(dá)催化劑的試樣(17毫克，0.028毫摩爾，0.05當(dāng)量)前，先小心地脫氣。然后在回流下攪拌該溶液5小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，并通過急驟柱色層法純化，使用CH2Cl2/EtOAc(從3∶2到2∶3的比例)的溶劑梯度，得到化合物33b，產(chǎn)量72％(194毫克)。B.在20分鐘的期間，將DIAD(140微升，0.71毫摩爾，5當(dāng)量)慢慢地加至在無水THF(15毫升)中的化合物33b(70毫克，0.142毫摩爾)、2-乙氧基-4-羥基-7-甲氧基喹啉3c(63毫克，0.284毫摩爾，2當(dāng)量)和Ph3P(186毫克，0.71毫摩爾，5當(dāng)量)的溶液中。容許將該反應(yīng)混合物加溫至室溫，并在室溫下攪拌2.5小時(shí)。接著，在真空下蒸發(fā)THF，并通過急驟柱色層法純化粗產(chǎn)物，使用己烷/EtOAc(從7∶3到1∶1的比例)的溶劑梯度。以73％的產(chǎn)量分離出化合物33c(72毫克)。C.將化合物33c(72毫克，0.104毫摩爾)與CH2Cl2(5毫升)和4M在二噁烷中的HCl(5毫升)混合，并容許在室溫下攪拌該混合物1.5小時(shí)，以裂開Boc保護(hù)基，獲得中間物的HCl鹽33d。在真空下將粗制反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，在真空下干燥，確保除去全部的HCl，并可使用于下一個(gè)步驟中，不需純化。D.將在甲苯中的光氣的溶液(1.93M，274微升，0.528毫摩爾)，逐滴加至在THF(10毫升)中的環(huán)戊醇(29微升，0.32毫摩爾)的溶液中，并在室溫下攪拌該混合物2小時(shí)以形成氯甲酸環(huán)戊酯試劑。在這期間后，通過在真空下蒸發(fā)除去約一半的溶劑，通過加入CH2Cl2(5毫升)稀釋剩下的淡黃色溶液，并再濃縮至其原始體積的一半，以確保除去所有的過量光氣。進(jìn)一步以THF(10毫升)稀釋上述氯甲酸環(huán)戊酯試劑溶液，冷卻至0℃，并加入0℃的固體化合物33d(0.104毫摩爾)。在該反應(yīng)混合物中加入Et3N(75微升，0.534毫摩爾，5.2當(dāng)量)，并在0℃下繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)。在真空下除去溶劑，并通過急驟柱層析法純化粗制的物質(zhì)，使用EtOAc/己烷(1∶1)作為洗脫液，獲得幾乎定量產(chǎn)量的化合物33e(75毫克)。E.通過在50℃下，使化合物33e(75毫克，0.11毫摩爾)與LiOH·H2O(35毫克，0.84毫摩爾，8當(dāng)量)，在THF/MeOH/H2O(2∶2∶1的比例，7.5毫升)的溶劑混合物中反應(yīng)2.5小時(shí)。當(dāng)完成水解作用時(shí)，將該混合物酸化至pH＝4.5，并在真空下將溶劑蒸發(fā)至干。通過C18反相制備HPLC純化粗產(chǎn)物，使用H2O至58％CH3CN水溶液的溶劑梯度(有0.06％TFA)，得到白色非晶形固體的抑制劑#824(45毫克，65％產(chǎn)量)。#824的Na+鹽的1H NMR(DMSO，400MHz)δ0.88(d，J＝7.6Hz，3H)，0.95-1.70(重疊的共振，17H)，1.37(t，J＝7Hz，3H)，2.00-2.10(m，1H)，2.10-2.33(m，3H)，2.38-2.44(m，1H)，3.80-3.85(m，1H)，3.85(s，3H)，4.02-4.08(m，1H)，4.42(q，J＝7Hz，2H)，4.35-4.44(m，1H)，4.50(d，J＝10.8Hz，1H)，4.63(bs，1H)，5.28(dd，J＝9.5Hz，1H)，5.38(bs，1H)，5.42-5.49(m，1H)，6.37(s，1H)，6.87(dd，J＝8.9&2.2Hz，1H)，7.07(d，J＝2.2Hz，1H)，7.28(d，J＝7.0Hz，1H)，7.90(d，J＝8.9Hz，1H)，8.57(s，1H)。實(shí)施例34合成化合物#812(表8) A.在15分鐘期間，將DIAD(10.75毫升，54.6毫摩爾，2.0當(dāng)量)逐滴加至0℃，在THF(450毫升)中的巨環(huán)中間物23b(13.05克，27.2毫摩爾，1.0當(dāng)量)、Ph3P(14.28克，54.5毫摩爾，2.0當(dāng)量)和2-羧基甲氧基-4-羥基-7-甲氧基喹啉(WO 00/09543 & WO 00/09558)(6.67克，28.6毫摩爾，1.05當(dāng)量)的溶液中，然后移開冰浴，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物3小時(shí)。在起始物質(zhì)完全轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物后，在真空下蒸發(fā)溶劑，以EtOAc稀釋剩下的混合物，以飽和的NaHCO3(2x)和鹽水(1x)沖洗，將有機(jī)層以無水的MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)至干。在急驟柱色層法后，獲得純的化合物34a該柱首先以己烷/EtOAc(50∶50)洗脫，接著以CHCl3/EtOAc(95∶5)洗脫，以除去Ph3PO和DIAD副產(chǎn)物，并通過TLC監(jiān)測(cè)雜質(zhì)的洗脫。最后，用CHCl3/EtOAc(70∶30)從柱中洗脫想要的產(chǎn)物34a。通常，層析步驟在分離高純度的白色固體化合物34a之前重復(fù)2-3次，總產(chǎn)量為68％(12.8克，由HPLC得知純度為99.5％)。B.將在二噁烷中的4N HCl(12毫升)加至在CH2Cl2(15毫升)中的Boc-保護(hù)的中間物34a(1.567克)的溶液中，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)[結(jié)果在反應(yīng)期間的中途形成粘稠的凝膠，加入另外10毫升的CH2Cl2]。當(dāng)脫保護(hù)作用完成時(shí)，將溶劑蒸發(fā)至干，獲得黃色的固體，和類似膏狀的物質(zhì)。將該混合物再溶解于在CH2Cl2中的約5％MeOH中，并在真空下再蒸發(fā)至干，得到黃色固體的化合物34b，將其使用在下一個(gè)步驟中，不需任何純化作用。C.將在甲苯中的光氣的溶液(1.93M，5.96毫升，11.502毫摩爾)，逐滴加至在THF(15毫升)中的環(huán)戊醇(614微升，6.76毫摩爾)的溶液中，并在室溫下攪拌該混合物2小時(shí)，以形成氯甲酸環(huán)戊酯試劑(z)。在這期間后，通過在真空下蒸發(fā)除去約一半的溶劑，以另外的CH2Cl2(5毫升)稀釋剩下的淡黃色溶液，并濃縮至其原始體積的一半，以確保除去所有過量的光氣。以THF(15毫升)進(jìn)一步稀釋上述氯甲酸環(huán)戊酯試劑的溶液，并加至胺-2HCl鹽34b中。在冰浴中將該混合物冷卻至0℃，用Et3N(逐滴加入)的加入將pH值調(diào)整到～8.5-9，并在0℃下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)。在這期間后，以EtOAc稀釋該混合物，以水(1x)、飽和的NaHCO3(2x)、H2O(2x)和鹽水(1x)沖洗。將有機(jī)層以無水的MgSO4干燥，過濾并在真空下蒸發(fā)，獲得黃-琥珀色的泡沫體。在通過急驟柱色層法純化(使用在EtOAc中的從30％己烷到20％己烷的溶劑梯度作為洗脫液)后，獲得化合物34c，產(chǎn)量80％(1.27克)，且純度＞93％。D.將二甲基酯34c(1.17克)溶解于THF/MeOH/H2O的混合物(20毫升，2∶1∶1的比例)中，加入NaOH的水溶液(1.8毫升，1N，1當(dāng)量)中。在將其蒸發(fā)至干前，先在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)，獲得白色固體的鈉鹽34d(～1.66毫摩爾)。將化合物34d使用在下一個(gè)步驟中，不需純化。E.將粗制鈉鹽34d(1.66毫摩爾)溶解于THF(17毫升)中，加入Et3N，并在冰浴中將該混合物冷卻至0℃。逐滴加入氯甲酸異丁酯(322微升，2.5毫摩爾)，并在0℃下攪拌該混合物75分鐘。在這期間后，加入重氮甲烷(15毫升)，并繼續(xù)在0℃下攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌1小時(shí)。在真空下將大部分的溶劑蒸發(fā)至干，以EtOAc稀釋剩下的混合物，以飽和的NaHCO3(2x)、H2O(2x)和鹽水(1x)沖洗，以無水的MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)至干，獲得淡黃色泡沫狀的化合物34e(1.2克，～1.66毫摩爾)。將重氮酮中間物34e使用于下一個(gè)步驟中，不需純化。F.將重氮酮34e(1.2克，1.66毫摩爾)溶解于THF(17毫升)中，并在冰浴中冷卻至0℃。逐滴加入HBr水溶液(48％，1.24毫升)，并在0℃下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)。然后以EtOAc稀釋該混合物，以飽和的NaHCO3(2x)、H2O(2x)和鹽水(1x)沖洗，將有機(jī)層以無水的MgSO4干燥，過濾并蒸發(fā)至干，獲得淡黃色泡沫狀的β-溴酮中間物34f(～1.657毫摩爾)。G.將硫脲(118毫克，1.55毫摩爾)加至在異丙醇(5毫升)中的溴酮34f(600毫克，0.779毫摩爾)的溶液中，并將該反應(yīng)混合物置于預(yù)先-加熱至75℃的油浴中，容許在該處攪拌1小時(shí)。然后在真空下除去異丙醇，并將產(chǎn)物溶解于EtOAc(100毫升)中。以飽和的NaHCO3和鹽水沖洗該溶液，將有機(jī)層以無水的Na2SO4干燥，過濾并蒸發(fā)，獲得紅-棕色固體的粗產(chǎn)物34g(522毫克)。將該物質(zhì)使用在最后的步驟中，不需任何進(jìn)一步的純化作用。H.將粗制的甲基酯34g(122毫克，0.163毫摩爾)溶解于THF/MeOH/H2O的溶液(2∶1∶1的比例，4毫升)，使用LiOH·H2O(89毫克，2.14毫摩爾)將其皂化。在室溫下，在12-15小時(shí)的期間內(nèi)進(jìn)行水解反應(yīng)。然后在真空下除去溶劑，并通過C18反相HPLC純化粗產(chǎn)物，使用從10％在H2O中的CH3CN到100％CH3CN的溶劑梯度，得到黃色固體的HCV蛋白酶抑制劑#812(24毫克，中間物34f轉(zhuǎn)化為抑制劑#812的總產(chǎn)量為20％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.63(s，1H)，8.26-8.15(m，2H)，7.79(bs，1H)，7.72(bs，1H)，7.50(bs，2H)，7.33-7.25(m，2H)，5.77(bs，1H)，5.52(dd，J＝8.3Hz，1H)，5.27(dd，J＝9.2Hz，1H)，4.64(d，J＝10.8Hz，1H)，4.50(dd，J＝8.3Hz，1H)，4.39-4.31(m，1H)，4.08-3.99(m，2H)，3.94(s，3H)，3.87(d，J＝9.5Hz，2H)，2.65-2.53(m，2H)，2.46-2.36(m，2H)，2.20-2.12(dd，J＝8.6Hz，1H)，1.80-1.64(m，2H)，1.63-1.06(m，14H)。MSes+733.2(M+H)+，es-731.2(M-H)-。實(shí)施例34A使用與在實(shí)例34中所述相同的程序，但使溴酮34f與可購得的N-甲基硫脲反應(yīng)，得到#811(表8) 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.63(s，1H)，8.20(s，1H)，8.18(s，1H)，8.12-7.93(m，1H)，7.88-7.69(m，2H)，7.32-7.24(m，2H)，5.82-5.75(m，1H)，5.52(ddd，J＝8.1Hz，1H)，5.28(d，J＝9.9Hz，1H)，4.67-4.61(m，1H)，4.51(dd，J＝8.8Hz，1H)，4.44-4.37(m，1H)，4.08-4.00(m，1H)，3.96(s，3H)，3.89(m，1H)，3.04(d，J＝4.1Hz，3H)，2.65-2.37(m，3H)，2.16(m，1H)，1.77-1.65(m，2H)，1.63-1.11(m，17H)。MS；es+747.2(M+H)+，es-745.3(M-H)-。實(shí)施例34B使用與在實(shí)例34中所述相同的程序，但使溴酮34f與可購得的N-乙基硫脲反應(yīng)，得到#810(表8)。 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.63(s，1H)，8.27(bs，1H)，8.20(d，J＝9.0Hz，1H)，8.13-8.07(m，1H)，7.86(bs，1H)，7.78(s，1H)，7.33-7.25(m，2H)，5.81(bs，1H)，5.54(dd，J＝8.8Hz，1H)，5.28(dd，J＝9.7Hz，1H)，4.65(d，J＝12.4Hz，1H)，4.51(dd，J＝8.8Hz，1H)，4.38(bs，1H)，4.03(m，1H)，3.97(s，3H)，3.92-3.87(m，1H)，3.54-3.46(m，2H)，2.68-2.65(m，2H)，2.47-2.38(m，1H)，2.15(dd，J＝8.6Hz，1H)，1.78-1.65(m，2H)，1.60-1.12(m，17H)，1.25(t，J＝7.3Hz，3H)。MS；es+783.2(M+Na)+，es-761.2(M+H)-。實(shí)施例34C使用與在實(shí)例34中所述相同的程序，但使溴酮34f與可購得的N-異-丙基硫脲反應(yīng)，得到#822。 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.63(s，1H)，8.33-8.23(bs，1H)，8.21(d，J＝9.2Hz，1H)，8.04(d，J＝8.3Hz，1H)，7.86(bs，1H)，7.77(s，1H)，7.35-7.23(m，2H)，5.81(bs，1H)，5.52(dd，J＝8.5Hz，1H)，5.27(dd，J＝9.2Hz，1H)，4.65(d，J＝11.8Hz，1H)，4.51(dd，J＝7.6Hz，1H)，4.37(bs，1H)，4.15(bs，1H)，4.07-3.98(m，2H)，3.97(s，3H)，3.88(d，J＝8.9Hz，1H)m 2.60-2.53(m，2H)，2.47-2.37(m，2H)，2.19-2.10(dd，J＝9.2Hz，1H)，1.80-1.64(m，2H)，1.63-1.29(m，13H)，1.27和1.25(2xd，J＝6.5Hz，6H)，1.23-1.09(m，2H)，MSes-775.0(M+H)+，es-772.9(M-H)-。實(shí)施例34D使用與在實(shí)例34中所述相同的程序，但使溴酮34f與可購得的N-乙?；螂宸磻?yīng)，得到#809 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.62(s，1H)，8.30(bs，1H)，8.17(d，J＝8.9Hz，1H)，7.62(bs，1H)，7.52(bs，1H)，7.28(d，J＝6.4Hz，1H)，7.21(bs，1H)，5.63(bs，1H)，5.54(dd，J＝8.1Hz，1H)，5.28(dd，J＝9.5Hz，1H)，4.62(d，J＝12.1Hz，1H)，4.56-4.46(m，2H)，4.11-4.04(m，1H)，3.95(s，3H)，3.93-3.88(m，1H)，2.62-2.54(m，1H)，2.45-2.36(m，1H)，2.22(s，3H)，2.21-2.13(m，1H)，1.79-1.69(m，2H)，1.65-1.30(m，16H)，1.26-1.12(m，2H)。MS；esu775.3(M+H)+，es-773.3(M-H)-。實(shí)施例34E將DIPEA(0.55毫升，3.18毫摩爾，10當(dāng)量)和氯甲酰甲酯(0.13毫升，1.6毫摩爾，5當(dāng)量)加至在室溫下，在CH2Cl2(5毫升)中的2-氨基-4-噻唑基中間物34g(0.24克，0.32毫摩爾)攪拌的溶液中。在真空下濃縮前，先攪拌該反應(yīng)混合物6.5小時(shí)。然后按照在實(shí)例34中的描述，將粗制的分離產(chǎn)物水解成想要的羧酸，得到化合物#818。 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.61(s，1H)，8.21-8.07(m，2H)，7.61-6.38(m，2H)，7.26(d，J＝6.4Hz，1H)，7.19-7.10(m，1H)，5.60-5.47(m，2H)，5.27(dd，J＝9.2Hz，1H)，4.63-4.53(m，1H)，4.47(d，J＝7.9Hz，1H)，4.13-4.04(m，1H)，3.93(s，3H)，3.92-3.87(m，2H)，3.79(s，3H)，4.42-2.30(m，2H)，2.17(dd，J＝9.3Hz，1H)，1.81-1.68(m，2H)，1.63-1.29(m，16H)，1.23-1.10(m，2H)。MS；es+791.1(M+H)+，es-789.1(M-H)-。實(shí)施例34F依據(jù)上述在實(shí)施例34中的條件，但使用氯甲酸異丁酯，得到類似的取代的氨基甲酸酯中間物。然后將粗制的分雜物質(zhì)水解成想要的化合物#819。 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.62(s，1H)，8.47-8.27(bs，1H)，8.18(d，J＝8.6Hz，1H)，7.69-7.60(m，1H)，7.60-7.51(m，1H)，7.28(d，J＝6.7Hz，1H)，7.28-7.19(m，1H)，5.70-5.60(m，1H)，5.52(dd，J＝8.3Hz，1H)，5.27(dd，J＝9.8Hz，1H)，4.63(d，J＝11.8Hz，1H)，4.53-4.44(m，2H)，4.10-3.99(m，1H)，4.04(d，J＝6.7Hz，2H)，3.95(s，3H)，3.94-3.87(m，1H)，2.65-2.53(m，1H)，2.46-2.34(m，1H)，2.16(dd，J＝8.1Hz，1H)，2.03-1.91(m，1H)，1.79-1.09(m，20H)，0.95(d，J＝6.7Hz，6H)。MSes+833.2(M+H)+，es-831.2(M-H)-。實(shí)施例35合成化合物#908從衍生物27a開始，使用與在實(shí)例34中所述相同的化學(xué)方法，獲得下列的飽和巨環(huán)，化合物#908(表9) 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.47(s，1H)，8.16(d，J＝10Hz，1H)，8.15-8.07(m，1H)，7.82-7.63(m，2H)，7.53-7.43(m，2H)，7.33-7.22(m，1H)，7.13(d，J＝7Hz，1H)，5.77-5.65(m，1H)，4.62-4.52(m，2H)，4.50-4.4(m，1H)，4.20-4.10(m，1H)，3.94(s，3H)，3.89-3.83(m，1H)，2.59-2.53(m，1H)，2.48-2.40(m，1H)，1.79-1.0(m，25H)。MSes+735.2(M+H)+，es-733.2(M-H)-。實(shí)施例35A合成化合物#909使用與在實(shí)例35中所述相同的程序，但使用可購得的N-乙?；螂?，得到化合物#909(表9) 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.53-8.41(m，2H)，8.20(d，J＝9.2Hz，1H)，7.68(bs，1H)，7.27(dd，J＝9.2Hz，1H)，7.15(d，J＝6.4Hz，1H)，5.67(bs，1H)，4.65-4.50(m，3H)，4.44-4.37(m，1H)，4.21-4.13(m，1H)，3.96(s，3H)，3.99-3.86(m，1H)，2.62-2.39(m，2H)，2.24(s，3H)，1.78-1.67(m，3H)，1.67-1.01(m，22H)。MSes+798.0(M+Na)+，es-777.0(M+H)+。實(shí)施例35B合成化合物#910使用與在實(shí)例35中所述相同的程序，但使用可購得的N-乙基硫脲，得到化合物#910(表9) 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.47(s，1H)，8.29(bs，1H)，8.20(d，J＝9.2Hz，1H)，8.09(bs，1H)，7.87(s，1H)，7.77(s，1H)，7.32(dd，J＝9.2Hz，1H)，7.14(dd，J＝6.7Hz，1H)，5.78(bs，1H)，4.58(dd，J＝8.1Hz，2H)，4.43(bs，1H)，4.18-4.12(m，1H)，3.97(s，3H)，3.87(d，J＝8.9Hz，1H)，3.55-3.46(m，2H)，2.63-2.53(m，1H)，2.47-2.41(m，1H)，1.78-1.00(m，25H)，1.25(t，J＝7.3Hz，3H)。MSes+763.1(M+H)+，es-761.1(M-H)-。實(shí)施例35C合成化合物#911使用與在實(shí)例35中所述相同的程序，但使用可購得的N-異丙基硫脲，得到化合物#911(表9) 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.47(s，1H)，8.29-8.19(m，1H)，8.19(d，J＝9.2Hz，1H)，8.09-8.0(m，1H)，7.83(bs，1H)，7.74(bs，1H)，7.31(d，J＝8Hz，1H)，7.14(d，J＝6.4Hz，1H)，5.76(bs，1H)，4.64-4.53(m，2H)，4.44(bs，1H)，4.22-4.09(m，3H)，3.97(s，3H)，3.87(d，J＝8.6Hz，1H)，2.63-2.58(m，1H)，2.46-2.41(m，1H)，1.79-1.10(m，24H)，1.27和1.26(2xd，J＝6.5Hz，6H)。MSes+777.0(M+H)+，es-775.0(M-H)-。實(shí)施例36合成化合物#716 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.62(s，1H)，8.13(d，J＝9.2Hz，1H)，7.64-7.54(m，2H)，7.47(d，J＝2.6Hz，1H)，7.16(dd，J＝9.2，2.2Hz，1H)，7.03(d，J＝6.0Hz，1H)，5.63(s，1H)，5.52(q，J＝9.9Hz，1H)，5.26(t，J＝8.9Hz，1H)，4.62(d，J＝11.45Hz，1H)，4.45(dd，J＝9.2，8.27Hz，1H)，4.02(m，1H)，3.93(s，3H)，3.7(dd，J＝7.6，1.0Hz，1H)，2.66(s，3H)，2.55-2.65(m，1H)，2.35-2.45(m，1H)，2.17(q，J＝8.6Hz，1H)，1.65-1.75(m，2H)，1.5-1.35(m，7)，1.15(s，9H)。MS705(M+1)，703(M-1)實(shí)施例37合成化合物#717 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.62(s，1H)，8.15(d，J＝8.9Hz，1H)，7.62(s，1H)，7.49(s，1H)，7.19(dd，J＝9.2，2.2Hz，1H)，7.02(d，J＝5.4Hz，1H)，5.64(s，1H)，5.52(q，J＝9.9Hz，1H)，5.26(t，J＝9.2Hz，1H)，4.63(d，J＝11.44Hz，1H)，4.45(t，J＝9.2Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.9-3.8(m，1H)，2.7-2.55(m，1H)，2.4-2.3(m，1H)，2.18(q，J＝8.9Hz，1H)，1.75-1.65(m，2H)，1.5-1.2(m，7H)，1.14(s，9H)。MS705(M+1)，703(M-1)實(shí)施例38合成化合物#718 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.55(s，1H)，8.63(s，1H)，8.43(s，1H)，8.13(d，J＝9.2Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.46(s，1H)，7.32(d，J＝2.6Hz，1H)，7.10-7.07(m，2H)，5.64-5.54(m，1H)，5.59-5.48(m，1H)，5.33-5.23(m，1H)，4.73-4.61(m，1H)，4.45(dd，J＝7.5，9.1Hz，1H)，4.09-4.00(m，1H)，3.92(s，3H)，3.93-3.83(m，1H)，2.67-2.55(m，2H)，2.53-2.43(m，1H)，2.42-2.31(m，1H)，2.23-2.12(m，1H)，1.81-1.66(m，2H)，1.52-1.52(m，2H)，1.42-1.25(m，6H)，1.21(s，1H)。MS689.3(M+1)，687.3(M-1)實(shí)施例39合成化合物#722 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.70(s，1H)，8.64(s，1H)，8.26(s，1H)，8.14(d，J＝9.2Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.30(d，J＝2.5Hz，1H)，7.14-7.06(m，2H)，5.60-5.54(m，1H)，5.58-5.48(m，1H)，5，31-5.23(m，1H)，4.71-4.62(m，1H)，4.49-4.40(m，1H)，4.08-3.99(m，1H)，3.92(s，3H)，3.92-3.84(m，1H)，2.69-2.54(m，2H)，2.53-2.46(m，1H)，2.42-2.31(m，1H)，2.37(s，3H)，2.22-2.13(m，1H)，1.81-1.64(m，2H)，1.54-1.42(m，2H)，1.42-1.27(m，6H)，1.22(s，9H)。實(shí)施例40合成化合物#733 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.75(m，1H)，8.62(s，1H)，8.06(d，J＝9.2Hz，1H)，7.88-7.87(m，1H)，7.48(s，1H)，7.28(d，J＝2.6Hz，1H)，7.05-7.00(m，2H)，6.64-6.63(m，1H)，5.62-5.58(m，1H)，5.55-5.49(m，1H)，5.28-5.24(m，1H)，4.64-4.61(m，1H)，4.48-4.44(m，1H)，4.07-4.03(m，1H)，3.91(s，3H)，3.92-3.85(m，1H)，2.67-2.54(m，2H)，2.53-2.45(m，1H)，2.41-2.34(m，1H)，2.20-2.14(m，1H)，1.75-1.69(m，2H)，1.50-1.43(m，2H)，1.41-1.32(m，6H)，1.17(s，9H)。MS689.3(M+1)，687.2(M-1)實(shí)施例41合成化合物#703 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.50(s，1H)，8.19(s，1H)，8.17(s，1H)，8.11-8.00(m，1H)，7.88-7.77(m，1H)，7.73(s，1H)，7.25(d，J＝8.6Hz，1H)，6.93(d，J＝6Hz，1H)，5.89-5.68(m，1H)，4.62(d，J＝11Hz，1H)，4.53(dd，J＝8.3Hz，1H)，4.16-4.07(m，1H)，3.96(s，3H)，3.88(bd，J＝9.5Hz，1H)，3.53-3.43(m，2H)，2.63-2.51(m，1H)，2.46-2.36(m，1H)，1.81-1.62(m，2H)，1.60-1.01(m，15H)，1.24(t，J＝7.4Hz，3H)，1.17(s，9H)。MSes+751.1(M+H)+，es-749.1-(M-H)-。實(shí)施例42合成化合物#734 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.62(s，1H)，8.54(s，1H)，8.04(d，J＝9.2Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.43(s，1H)，7.24(d，J＝2.6Hz，1H)，7.05-6.98(m，2H)，5.57-5.54(m，1H)，5.55-5.48(m，1H)，5.28-5.24(m，1H)，4.63-4.59(m，1H)，4.47-4.43(m，1H)，4.13-3.99(m，1H)，3.09(s，3H)，3.92-3.83(m，1H)，2.67-2.55(m，2H)，2.53-2.46(m，1H)，2.43-2.31(m，1H)，2.22-2.15(m，1H)，2.15(3H)，1.75-1.70(m，2H)，1.51-1.42(m，2H)，1.41-1.28(m，6H)，1.17(s，9H)。MS703.2(M+1)，701.3(M-1)。實(shí)施例43合成化合物#738 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.64(d，J＝2.5Hz，1H)，8.62(s，1H)，8.04(d，J＝9.2Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.24(d，J＝2.5Hz，1H)，7.04(d，J＝6.0Hz，1H)，6.99(dd，J＝2.2，9.2Hz，1H)，6.43(d，J＝2.2Hz，1H)，5.62-5.57(m，1H)，5.56-5.47(m，1H)，5.31-5.22(m，1H)，4.65-4.56(m，1H)，4.45(dd，J＝7.6，8.9Hz，1H)，4.07-4.00(m，1H)，3.90(s，3H)，3.88-3.84(m，1H)，2.68-2.56(m，2H)，2.54-2.43(m，1H)，2.24-2.31(m，1H)，2.34(s，3H)，2.24-2.14(m，1H)，1.80-1.64(m，2H)，1.52-1.43(m，2H)，1.43-1.27(m，6H)，1.18(s，9H)。MS703.2(M+1)，701.2(M-1)。實(shí)施例44合成化合物#725 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.62(s，1H)，8.10(d，J＝9.2Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.49(s，1H)，7.35(d，J＝2.2Hz，1H)，7.09-7.03(m，2H)，5.65-5.61(m，1H)，5.55-5.49(m，1H)，5.28-5.24(m，1H)，4.62-4.57(m，1H)，4.49-4.45(m，1H)，4.08-4.01(m，1H)，3.93(s，3H)，3.92-3.86(m，1H)，3.20-3.14(m，1H)，2.65-2.56(s，1H)，2.53-2.47(m，1H)，2.42-2.35(m，1H)，2.22-2.15(m，1H)，1.79-1.68(m，2H)，1.50-1.43(m，2H)，1.41-1.28(m，12H)，1，18(s，9H)。MS748.2(M+1)，746.2(M-1)。實(shí)施例45合成化合物#726 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.64(s，1H)，8.10(d，J＝9.5Hz，1H)，7.83-7.76(m，2H)，7.60(s，1H)，7.44-7.42(m，1H)，7.18-7.01(m，2H)，5.56-5.49(m，2H)，5.29-5.24(m，1H)，4.66-4.63(m，1H)，4.47-4.42(m，1H)，4.28(s，3H)，4.06-4.02(m，2H)，3.94(s，3H)，3.93-3.86(m，1H)，2.66-2.55(m，2H)，2.42-2.31(m，2H)，2.22-2.14(m，1H)，1.79-1.65(m，2H)，1.52-1.27(m，7H)，1.22(s，9H)。MS703.2(M+1)，701.3(M-1)。實(shí)施例46合成化合物#906 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.46(s，1H)，8.06(d，J＝9.2Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.49(s，1H)，7.34(m，1H)，7.14-7.05(m，2H)，5.63-5.58(m，1H)，4.66-4.61(m，1H)，4.54-4.44(m，2H)，4.23-4.18(m，1H)，3.93(s，3H)，3.92-3.88(m，1H)，3.21-3.14(m，1H)，2.44-2.33(m，1H)，1.35(d，J＝7Hz，6H)，1.73-1.01(m，26H)。MS762.0(M+1)，759.9(M-1)。實(shí)施例47合成化合物#907 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.46(s，1H)，7.98(d，J＝8.9Hz，1H)，7.91-7.89(m，2H)，7.23-7.21(m，2H)，7.07-7.00(m，2H)，6.35-6.32(m，2H)，5.64-5.58(m，1H)，4.65-4.61(m，1H)，4.53-4.47(m，2H)，4.24-4.19(m，1H)，3.90(s，3H)，3.86-3.84(m，1H)，2.40-2.33(m，1H)，1.73-1.01(m，26H)。MS702.0(M+1)，699.9(M-1)。實(shí)施例48全長(zhǎng)NS3-NS4異種二聚體蛋白質(zhì)的螢光基因(fluorogenic)測(cè)定使用從HCV基因型1b感染的個(gè)體的血清中萃取出的RNA(由Dr.Bemard Wilems，Hopital St-Luc，Montreal，Quebec，Canada提供)，通過RT-PCR將NS2-NS5B-3′非編碼區(qū)克隆到pCR3載體(Invitrogen)內(nèi)。然后通過PCR將NS3-NS4區(qū)(NS3-NS4AFL)亞克隆到pFastBacTMHTa桿狀病毒表達(dá)載體(Gibco/BRL)內(nèi)。載體序列包括編碼28-殘基N-終端序列的區(qū)域，其含有六組氨酸標(biāo)志。使用Bac-to-BacTM桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Gibco/BRL)以產(chǎn)生重組桿狀病毒。在27℃下以0.1-0.2的感染多重性，通過以重組的桿狀病毒感染106Sf21細(xì)胞/毫升來表達(dá)His-NS3-NS4AFL。在表達(dá)期間發(fā)生真實(shí)的自體-蛋白水解作用，產(chǎn)生非共價(jià)和穩(wěn)定的NS3-NS4A蛋白質(zhì)復(fù)合物(稱為全長(zhǎng)“FL”)。在48至64小時(shí)后，通過在4℃下離心收獲被感染的培養(yǎng)物。在50mM NaPO4，pH7.5，40％甘油(重量/體積)，2mMβ-巰基乙醇中，在蛋白酶抑制劑的混合物存在下，使細(xì)胞丸均質(zhì)化。然后用1.5％NP-40，0.5％TritonX-100，0.5MNaCl和DNA酶處理從細(xì)胞溶胞產(chǎn)物中萃取的His-NS3-NS4AFL。在超離心后，將可溶的萃取物稀釋四倍，并結(jié)合在Pharmacia Hi-Trap Ni-螯合柱上。使用50至400mM咪唑梯度，洗脫出＞90％純度形式的His-NS3-NS4AFL(由SDS-PAGE判斷)。將His-NS3-NS4AFL儲(chǔ)存在-80℃的50mM磷酸鈉，pH7.5，10％(重量/體積)甘油，0.5M NaCl，0.25M咪唑和0.1％NP-40中。在使用之前才在冰上融化并稀釋。
在50mM Tris-HCl，pH8.0，0.25M檸檬酸鈉，0.01％(重量/體積)正-十二烷基-β-D-麥芽糖苷，1mM TECP中測(cè)定His-NS3-NS4AFL的蛋白酶活性。在各種濃度的抑制劑的存在下，在23℃下將五(5)μM內(nèi)部驟冷的基質(zhì)鄰氨基苯甲?；?anthranily)-DDIVPAbu[C(O)-O]-AMY(3-NO2)TW-OH和1.5nM His-NS3-NS4AFL一起培養(yǎng)45分鐘。終DMSO濃度未超過5.25％。用加入1MMES，pH5.8使該反應(yīng)中止。在配有96-孔培養(yǎng)盤讀取器的Perkin-Elmer LS-50B螢光計(jì)上監(jiān)視N-終端產(chǎn)物的螢光(激發(fā)波長(zhǎng)325毫微米；發(fā)射波長(zhǎng)423毫微米)。
用下式來計(jì)算抑制％100-[(螢光inh-螢光blank)/(螢光ctl-螢光blank)×100]將適合Hill模式的非線性曲線應(yīng)用于該抑制-濃度數(shù)據(jù)上，并通過使用SAS軟件(Statistical Software SystemSAS Institute，Inc.Cary，N.C.)來計(jì)算50％有效濃度(IC50)。實(shí)施例49重組的HCVNS3蛋白酶的放射性測(cè)定HCV NS3蛋白酶的放射性測(cè)定使用的基質(zhì)，DDIVPC-SMSYTW，在半胱氨酸和絲氨酸殘基之間通過酶切開。序列DDIVPC-SMSYTW相當(dāng)于NS5A/NS5B的天然切開位置，其中已經(jīng)以脯氨酸取代在P2中的半胱氨酸殘基。在抑制劑的存在或缺乏之下，將肽基質(zhì)DDIVPC-SMSYTW和示蹤物生物素DDIVPC-SMS[125I-Y]TW與重組體NS3蛋白酶一起培養(yǎng)。通過加入抗生物素蛋白-涂覆的瓊脂糖小珠于試樣混合物，接著過濾該分析混合物，完成從產(chǎn)物中分離基質(zhì)。容許以在(有或無抑制劑的)濾液中發(fā)現(xiàn)的SMS[125I-Y]TW產(chǎn)物的含量，來計(jì)算基質(zhì)轉(zhuǎn)化的百分比和抑制作用的百分比。A.試劑Tris和Tris-HCl(超純的)得自Life Technologies。甘油(超純的)、MES和BSA購自Sigma。TCEP得自Pierce，DMSO得自Aldrich，且NaOH得自Anachemia。測(cè)定緩沖溶液50mM Tris-HCl，pH7.5，30％(重量/體積)甘油，2％(重量/體積)CHAPS，1毫克/毫升BSA，1mM TCEP(在使用前才加入TCEP，得自1M在水中的母液)?；|(zhì)DDIVPC-SMSYTW，25微升終濃度(得自在DMSO中的2mM母液，儲(chǔ)存在-20℃下以避免氧化作用)。示蹤物還原的單-碘化的基質(zhì)(生物素-DDIVPC-SMS[125I-Y]TW)(≈1nM終濃度)。HCVNS3蛋白酶型1b，終濃度25nM(來自50mM磷酸鈉，pH為7.5，10％甘油，300mM NaCl，5mM DTT，0.01％NP-40)。B.草案在96-孔聚丙烯盤中進(jìn)行測(cè)定。每孔含有20微升基質(zhì)/示蹤物，在測(cè)定緩沖溶液中；10微升±抑制劑，在20％DMSO/測(cè)定緩沖溶液；10微升NS3蛋白酶1b。
在相同的測(cè)定盤上制備空白(無抑制劑且無酶)和對(duì)照組(無抑制劑)。
通過加入酶溶液，并在溫和的攪動(dòng)下，在23℃下培養(yǎng)該測(cè)定混合物60分鐘，開始該酶反應(yīng)。加入二十(20)微升0.025 NaOH，使該酶反應(yīng)驟冷。
在MilliporeMADP N65過濾盤中加入二十(20)微升抗生物素蛋白-涂覆的瓊脂糖小珠(購自Pierce)。將驟冷的測(cè)定混合物移至該過濾盤上，并在溫和的攪動(dòng)下在23℃下培養(yǎng)60分鐘。
使用MilliporeMultiScreen Vacuum Manifold Filtration裝置過濾該盤，并將40微升的濾液轉(zhuǎn)移至每孔含有60微升閃爍液體的不透明96-孔培養(yǎng)盤中。
在PackardTopCount設(shè)備上，使用125I-液體程序(protocol)1分鐘，來計(jì)算濾液。
利用下式計(jì)算抑制％100-[(計(jì)數(shù)inh-計(jì)數(shù)blank)/(計(jì)數(shù)ctl-計(jì)數(shù)blank)×100]將適合Hill模式的非線性曲線應(yīng)用于該抑制-濃度數(shù)據(jù)上，并通過使用SAS軟件(Statistical Software SystemSAS Institute，Inc.Cary，N.C.)來計(jì)算50％有效濃度(IC50)。實(shí)施例50特定性測(cè)定測(cè)定化合物對(duì)抗各種絲氨酸蛋白酶的特異性人類白細(xì)胞彈性蛋白酶、豬胰腺彈性蛋白酶和牛胰腺α-胰凝乳蛋白酶和一個(gè)半胱氨酸蛋白酶人類肝組織蛋白酶B。在所有的情況下，96-孔培養(yǎng)盤格式程序是使用對(duì)每種酶具有特異性的色原基質(zhì)。每種測(cè)定包括酶-抑制劑在室溫下預(yù)先培養(yǎng)1小時(shí)，接著加入基質(zhì)并水解到約30％的轉(zhuǎn)化，通過在UV Thermomax微量滴定盤讀取器或螢光Perkin-ElmerLS50B培養(yǎng)盤讀取器上測(cè)量。保持基質(zhì)濃度盡可能像KM一樣低，以便減少基質(zhì)的競(jìng)爭(zhēng)作用?；衔镆罁?jù)其效力從300變化至0.06uM。
每種測(cè)定的最終條件如下50mM Tris-HCl pH8，0.5M Na2SO4，50mM NaCl，0.1mM EDTA，3％DMSO，0.01％吐溫，含有[100μM Succ-AAPF-pNA和250pMα-胰凝乳蛋白酶]、[133μM Succ-AAA-pNA和8nM豬彈性蛋白酶]、[133μM Succ-AAV-pNA和8nM白細(xì)胞彈性蛋白酶]；或[100mM NaHPO4pH6，ImM EDTA，3％DMSO，1mM TCEP，0.01％吐溫20，4μM Z-FR-AMC(7-氨基-4-甲基香豆素)和0.5nM組織蛋白酶B(在使用前才在含有20mM TCEP緩沖溶液中活化原料酶)]。
在下文中摘述豬胰腺彈性蛋白酶的代表性實(shí)例使用Biomek液體操作器(Beckman)，將下列物質(zhì)加至聚苯乙烯的平底96-孔的培養(yǎng)盤(Cellwells，Corning)中40微升測(cè)定緩沖溶液(50mM Tris-HCl，pH8，1M Na2SO4，50mM NaCl，0.1mMEDTA)；20微升酶溶液(50mM Tris-HCl，pH8，50mM NaCl，0.1mM EDTA，0.02％吐溫-20，40nM豬胰腺彈性蛋白酶)；以及20微升抑制劑溶液(50mM Tris-HCl，pH8，50mM NaCl，0.1mM EDTA，0.02％吐溫-20，1.5mM-0.3μM抑制劑，15％體積/體積DMSO)。在室溫下預(yù)先培養(yǎng)60分鐘后，在每孔中加入20微升基質(zhì)溶液(50mM Tris-HClpH8，0.5M Na2SO4，50mM NaCl，0.1mM EDTA，665μM Succ-AAA-pNA)，并在室溫下進(jìn)一步培養(yǎng)該反應(yīng)60分鐘，之后在UV Thermomax培養(yǎng)盤讀取器上讀取吸光度。有一排孔是對(duì)照組(無抑制劑)和空白(無抑制劑且無酶)。在不同的培養(yǎng)盤上，通過液體操作器，使用50mM Tris-HCl pH8，50mM NaCl，0.1mM EDTA，0.02％吐溫-20，15％(體積/體積)DMSO來完成抑制劑溶液的連續(xù)2-倍稀釋。以類似方式完成所有其他的特異性測(cè)定。
利用下式計(jì)算抑制％[1-((UVinh-UVblank)/(UVctl-UVblank))]×100將適合Hill模式的非線性曲線應(yīng)用于該抑制-濃度數(shù)據(jù)上，并通過使用SAS軟件(Statistical Software SystemSAS Institute，Inc.Cary，N.C.)來計(jì)算50％有效濃度(IC50)。實(shí)施例51NS3蛋白酶以細(xì)胞為基礎(chǔ)的測(cè)定用Huh-7細(xì)胞，從肝癌衍生的人類細(xì)胞株進(jìn)行本測(cè)定，以2個(gè)DNA構(gòu)建體共轉(zhuǎn)染一個(gè)(稱為NS3)表達(dá)部分HCV非-結(jié)構(gòu)性的多蛋白，以下列順序通過NS5A-NS5B切割位點(diǎn)與tTA蛋白質(zhì)融合；NS3-NS4A-NS4B-NS5A-(NS5B)-tTA，其中(NS5B)代表NS5B的前6個(gè)氨基酸。在CMV啟動(dòng)子的控制之下，表達(dá)該多蛋白，另一個(gè)(稱為SEAP)在tTA-應(yīng)答性啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)下，表達(dá)報(bào)告基因蛋白，分泌的堿性磷酸酶(SEAP)。
第一個(gè)構(gòu)建導(dǎo)致多蛋白的表達(dá)，通過NS3蛋白酶的切割，從其中釋放出不同的成熟蛋白質(zhì)?？上嘈旁摮墒斓牟《镜鞍踪|(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的膜上形成復(fù)合物。tTA為融合蛋白質(zhì)，由Gossen和Buiard(Proc.Natl.Acad.Sci.USA89(1992)；5547-5551)描述，其含有一個(gè)DNA結(jié)合區(qū)和轉(zhuǎn)錄活化劑。tTA蛋白質(zhì)的釋放，需要在NS5A和它自己之間的NS5A-NS5B切割位點(diǎn)處的NS3-依賴性切割作用。最后的切割容許tTA移動(dòng)至核，并反式激活SEAP基因。因此，減少NS3蛋白水解活性，導(dǎo)致將tTA限制在細(xì)胞質(zhì)中，并伴隨著降低SEAP的活性。
要控制由該化合物引起的NS3蛋白酶的抑制作用以外的細(xì)胞活性，用單獨(dú)表達(dá)tTA的構(gòu)建，以及相同的報(bào)告基因構(gòu)建，進(jìn)行平行的共-轉(zhuǎn)染，得以使SEAP活性不依賴于NS3蛋白酶。
測(cè)定的方案以兩種DNA構(gòu)建，以下列的比例來共轉(zhuǎn)染在CHO-SFMII(Life Technologies)+10％FCS(胎牛血清)中生長(zhǎng)的Huh-7細(xì)胞；每4×106個(gè)Huh-7細(xì)胞用7微克NS3-500毫微克SEAP+800微升FuGENE(Boehringer Mannheim)。在37℃5小時(shí)之后，沖洗細(xì)胞，以胰蛋白酶消化，并(以80,000個(gè)細(xì)胞/孔)平鋪在含有受試化合物的濃度范圍的96-孔培養(yǎng)盤上。在24小時(shí)培養(yǎng)后，用Phospha-Light工具合(Tropix)測(cè)量培養(yǎng)基中的SEAP活性。
用SAS軟件進(jìn)行有關(guān)化合物濃度的SEAP活性抑制％的分析，獲得EC50?；衔锏谋硐铝辛信e本發(fā)明的代表性化合物。
發(fā)現(xiàn)列于表1至9中的所有化合物，在實(shí)施例48中提供的酶測(cè)定中都是有活性的。有星號(hào)(*)的數(shù)字代表用實(shí)施例49中提供的放射性測(cè)定而獲得的酶活性，具有在50μM下的IC50。在這些酶測(cè)定中，使用下列的分級(jí)A≥1μM；1μM＞B＞0.1μM；且C≤0.1μM。
在實(shí)施例50中提供的特異性測(cè)定中測(cè)試數(shù)個(gè)化合物，并發(fā)現(xiàn)其對(duì)NS3蛋白酶有特異性。一般而言，得自不同特異性測(cè)定的結(jié)果如下HLE＞300μM；PPE＞300μM；α-Chym＞300μM；Cat.B＞300μM；表示這些化合物對(duì)HCVNS3蛋白酶是具有高度特異性而并未預(yù)期顯示嚴(yán)重的副作用。此外，以在實(shí)例51所述的細(xì)胞-基的測(cè)定測(cè)試這些化合物中的某些，發(fā)現(xiàn)其具有低于10μM的EC50，強(qiáng)烈地表示這些化合物可跨越細(xì)胞膜。特別是表7、8和9的化合物，已經(jīng)在細(xì)胞測(cè)定中進(jìn)行了評(píng)估，并在最后的一欄中指出其結(jié)果。在細(xì)胞測(cè)定中，使用下列的編碼A＞1μM；B≤1μM。
在下表中使用下列的縮寫MS電噴霧質(zhì)譜數(shù)據(jù)m/zMH+除非另有以星號(hào)*指示＝m/zMH-Ac；乙?；籅n芐基；Boc叔-丁氧羰基；Ph苯基；Pr丙基。
表1
在R1處的單一立體異構(gòu)體
表2
在R1處的單一立體異構(gòu)體

表3 在R1處的單一立體異構(gòu)物 表4 D-R1鍵與酸同側(cè)
表5
D-R1鍵與酸同側(cè)
表6 D-R1鍵結(jié)與酸同側(cè)
表7 D-R1鍵與酸同側(cè) 表8 D-R1鍵與酸同側(cè)，雙鍵13，14順式
表9 D-R1鍵與酸同側(cè)
權(quán)利要求
1.一種式(I)化合物 其中W為CH或N；R21為H、鹵素、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6烷氧基、C3-6環(huán)烷氧基、羥基或N(R23)2，其中每個(gè)R23分別為H、C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基，R22為H、鹵素、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C1-6鹵烷基、C1-6硫烷基、C1-6烷氧基、C3-6環(huán)烷氧基、C2-7烷氧烷基、C3-6環(huán)烷基、C6或10芳基或Het，其中Het為五-、六-或七-員的飽和或不飽和的雜環(huán)，含有一至四個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子；以R24取代該環(huán)烷基、芳氧基或Het，其中R24為H、鹵素、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C1-6烷氧基、C3-6環(huán)烷氧基、NO2、N(R25)2、NH-C(O)-R25；或NH-C(O)-NH-R25，其中每個(gè)R25分別為H、C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；或R24為NH-C(O)-OR26，其中R26為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；R3為羥基、NH2或式-NH-R31的基團(tuán)，其中R31為C6或10芳基、雜芳基、-C(O)-R32、-C(O)-NHR32或-C(O)-OR32，其中R32為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；D為5至10-原子的飽和或不飽和的亞烷基鏈，可視需要含有一至三個(gè)雜原子，分別選自O(shè)、S或N-R41，其中R41為H、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或-C(O)-R42，其中R42為C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或C6或10芳基；R4為H或是在該鏈D任一個(gè)碳原子上的一至三個(gè)取代基，該取代基分別選自C1-6烷基、C1-6鹵烷基、C1-6烷氧基、羥基、鹵素、氨基、氧代、硫代或C1-6硫烷基，且A為式-C(O)-NH-R5的酰胺，其中R5選自C1-8烷基、C3-6環(huán)烷基、C6或10芳基或C7-16芳烷基；或A為羧酸或其在藥學(xué)上可接受的鹽或酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，其中該R1部分選自2種不同的非對(duì)映異構(gòu)體，以結(jié)構(gòu)(i)和(ii)表示 D與酰胺同側(cè)(i)或D與A同側(cè)(ii)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的式I化合物，其中D與A同側(cè)連接，如同由結(jié)構(gòu)(ii)表示的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，其中W為N；R21為H、C1-6烷基、C3-6烷氧基、羥基、氯或N(R23)2，其中R23為H或C1-6烷基；R22為H、C1-6硫烷基、C1-6烷氧基、苯基或選自以下的Het 其中R24為H、C1-6烷基、NH-R25、NH-C(O)-R25、NH-C(O)-NH-R25，其中每個(gè)R25分別為H、C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；或NH-C(O)-OR26，其中R26為C1-6烷基。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的式I化合物，其中R21為H或C1-6烷氧基。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的式I化合物，其中R22為C1-4烷氧基、苯基，或選自以下的Het 其中R24為H、C1-6烷基、NH-R25或NH-C(O)-R25；其中每個(gè)R25分別為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基，或NH-C(O)-OR26，其中R26如權(quán)利要求4中的定義。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的式I化合物，其中R21為甲氧基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的式I化合物，其中R22為乙氧基或選自以下的Het 其中R24a為NH-R25或NH-C(O)-R25，其中R25為C1-6烷基；或R24a為NH-C(O)-OR26，其中R26為C1-6烷基，且R24b為H或C1-6烷基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，其中R3為式NH-C(O)-R32的酰胺、或式NH-C(O)-NH-R32的脲，或式NH-C(O)-OR32的氨基甲酸酯，其中R32為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的式I化合物，其中R3為脲或氨基甲酸酯，其中R32為C1-6烷基或C4-6環(huán)烷基。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的式I化合物，其中R3為氨基甲酸酯，且R32為叔-丁基、環(huán)丁基或環(huán)戊基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，其中D為6至8個(gè)原子的飽和或不飽和的亞烷基鏈，可視需要含有一或兩個(gè)雜原子，分別選自O(shè)、S或N-R41，其中R41為H、C1-6烷基或C2-7?；?br> 13.根據(jù)權(quán)利要求12的式I化合物，其中D可視需要含有一個(gè)選自NH或N-C2-7酰基的雜原子。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中該雜原子選自NH或N(Ac)。
15.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中該D鏈含有7個(gè)原子。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的化合物，其中該雜原子位于該D鏈的10位置處。
17.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中該D鏈?zhǔn)秋柡偷摹?br> 18.根據(jù)權(quán)利要求12的式I化合物，其中D為6至8個(gè)原子的飽和或不飽和的亞烷基鏈，可視需要含有一個(gè)選自O(shè)或S的雜原子。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中該D鏈含有7個(gè)原子。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的化合物，其中該雜原子位于該D鏈的位置9處。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的化合物，其中該D鏈在位置8處以R4取代，其中R4為H或C1-6烷基。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的化合物，其中該R4為H或甲基。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的化合物，其中該R4為H或8-(S)-Me。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的化合物，其中該D鏈?zhǔn)秋柡偷摹?br> 25.根據(jù)權(quán)利要求19的化合物，其中該D鏈在位置11，12處含有一個(gè)雙鍵。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的化合物，其中該雙鍵為反式。
27.根據(jù)權(quán)利要求12的式I化合物，其中D為6至8個(gè)原子的飽和或不飽和的全碳亞烷基鏈。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的式I化合物，其中該D鏈含有7個(gè)原子。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的式I化合物，其中該D鏈為飽和的。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的化合物，其中以R4取代該D鏈，其中R4為H、氧代、羥基、烷氧基或烷基。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的化合物，其中該R4為H或C1-6烷基。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的化合物，其中該R4為H或甲基。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的化合物，其中該R4為H或10-(S)-Me。
34.根據(jù)權(quán)利要求28的式I化合物，其中D含有一個(gè)雙鍵。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的式I化合物，其中該雙鍵在該D鏈的位置13，14處。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的式I化合物，其中該雙鍵為順式。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的化合物，其中以R4取代該D鏈，其中R4為H、橋氧基、羥基、C1-6烷氧基或C1-6烷基。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的化合物，其中該R4為H或C1-6烷基。
39.根據(jù)權(quán)利要求38的化合物，其中該R4為H或甲基。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的化合物，其中該R4為H或10-(S)-Me。
41.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，其中A為羧酸。
42.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，其中W為NR3為式-NH-C(O)-NHR32或NH-C(O)-OR32的基團(tuán)，其中R32為C1-4烷基或C4-6環(huán)烷基；D為6至8個(gè)原子的飽和或不飽和的亞烷基鏈，連接到R1與A同側(cè)，可視需要含有一或兩個(gè)雜原子，分別選自O(shè)、S或N-R41，其中R41為H或C2-7?；?；R4為H或一～三個(gè)取代基，分別選自羥基或C1-6烷基；且A為羧酸，或其在藥學(xué)上可接受的鹽或酯。
43.根據(jù)權(quán)利要求42的式I化合物，其中R21為H或甲氧基；R22為C1-6烷基或選自以下的Het 其中R24a為H、C1-6烷基、NH-R25、NH-C(O)-R25或NH-C(O)-NH-R25，其中R25為H，C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；或R24a為NH-C(O)-OR26，其中R26為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；且R24b為H或C1-6烷基；R3為式-N-C(O)-NHR32的脲，或式N-C(O)-OR32的氨基甲酸酯，其中R32為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基；D為7-個(gè)原子的亞烷基鏈，可視需要在位置11，12或13，14處含有一個(gè)雙鍵；該D鏈可視需要含有一個(gè)雜原子，分別選自O(shè)、S、NH、N(Me)或N(Ac)；且R4為H或C1-6烷基。
44.根據(jù)權(quán)利要求43的式I化合物，其中R21為甲氧基，且R22為乙氧基或
其中R24a為NH-(C1-4烷基)、NH-C(O)-(C1-4烷基)、NH-C(O)-O-(C1-4烷基)或NH-C(O)-NH-(C1-4烷基)；D為C7全碳鏈，飽和的或在位置13，14處含有一個(gè)順式雙鍵。
45.一種下式化合物
它含有在R1的單一立體異構(gòu)體，其中所述雙鍵，D-R1鍵立體化學(xué)和R22限定如下
46.一種下式化合物
它含有在R1的單一立體異構(gòu)體，其中R3、R4，所述雙鍵位置、D-R1鍵立體化學(xué)、R21和R22都限定如下
47.一種下式化合物 它含有在R1的單立體異構(gòu)體，其中R3、D、D-R1鍵立體化學(xué)、R21和R22限定如下
48.一種下式化合物 其中，所述D-R1鍵是與酸同側(cè)、R4、X9和所述11，12雙鍵限定如下
50.一種下式化合物 其中所述D-R1鍵是與酸同側(cè)、R21和R22限定如下
51.一種下式化合物 其中所述D-R1鍵是與酸同側(cè)，R4、X9、X10、X11、所述13，14雙鍵和R22限定如下
52.一種下式化合物 其中所述D-R1鍵與酸同側(cè)，所述13，14雙鍵是順式，R32、R4和R22限定如下
53.一種下式化合物 其中所述D-R1鍵與酸同側(cè)，R32、R4和R22限定如下
54.一種抑制C型肝炎病毒復(fù)制的方法，是通過將該病毒暴露在對(duì)C型肝炎病毒NS3蛋白酶的抑制量的權(quán)利要求1的式I化合物之下。
55.一種藥物組合物，包括具有抗-C型肝炎病毒有效量的權(quán)利要求1的式I化合物，或其在治療上可接受的鹽或酯，與在藥學(xué)上可接受的載體介質(zhì)或助劑混合。
56.根據(jù)權(quán)利要求55的藥物組合物，還包括另外的免疫調(diào)節(jié)劑。
57.根據(jù)權(quán)利要求56的藥物組合物，其中所述另外的免疫調(diào)節(jié)劑選自α-、β-和δ-干擾素。
58.根據(jù)權(quán)利要求55的藥物組合物，還包括抗病毒制劑。
59.根據(jù)權(quán)利要求58的藥物組合物，其中所述抗病毒制劑選自三唑核苷(ribavirin)和金剛胺。
60.根據(jù)權(quán)利要求55的藥物組合物，還包括其他的HCV蛋白酶抑制劑。
61.根據(jù)權(quán)利要求55的藥物組合物，還包括在HCV生活循環(huán)中其他標(biāo)的抑制劑，如解旋酶、聚合酶或金屬蛋白酶。
62.根據(jù)權(quán)利要求55的藥物組合物，其用于制造供治療哺乳動(dòng)物的C型肝炎病毒感染的藥品。
全文摘要
本發(fā)明包括式I的巨環(huán)化合物,其在體外和細(xì)胞測(cè)定中,對(duì)抗C型肝炎病毒的NS3蛋白酶。其中W為CH或N,R
文檔編號(hào)A61P31/14GK1346365SQ00806046
公開日2002年4月24日 申請(qǐng)日期2000年4月3日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月6日
發(fā)明者尤拉·S·桑特里佐斯, 戴爾·R·卡梅倫, 安妮-瑪麗·福徹, 埃莉斯·吉羅, 納撒利·古德魯, 特迪·哈爾莫斯, 蒙西·利納斯－布魯內(nèi)特 申請(qǐng)人:貝林格爾.英格海姆加拿大有限公司