本發(fā)明涉及一種羅漢果苦味劑的制作方法，屬于天然產(chǎn)物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
2015年，廣西羅漢果種植面積超過6萬畝，年產(chǎn)鮮果3萬噸以上，全國羅漢果種植面積達(dá)到12萬畝，種植規(guī)模每年以15％～20％的速度增長。其中，由于受到種植產(chǎn)地土壤與氣候等條件的影響，有15％～30％的羅漢果無法正常成熟。這種無法正常成熟的羅漢果味道及其苦，但是總量卻非常大，總計(jì)達(dá)到萬噸以上?？墒橇_漢果提取物廠家也不愿加工苦果，因?yàn)榭喙烊胝９庸ず螅绊懥酥参锾崛∥锂a(chǎn)品的甜度和質(zhì)量，在正常的投料生產(chǎn)之前，需要把苦果篩選出去。通常，羅漢果種植戶都是無法處理這部分未成熟的苦果，干脆當(dāng)廢品爛在種植基地，或者以低價(jià)賣給干果加工企業(yè)，待烤成干果后，混入正品之中，但是這樣也給烤干果的企業(yè)帶來了產(chǎn)品質(zhì)量問題和信用問題。如何處理這些未成熟的羅漢果苦果，真真實(shí)實(shí)地變廢為寶，并給羅漢果種植農(nóng)戶帶來更多收益，就成了當(dāng)下急待解決的新課題。
徐位坤[1]等從未成熟的嫩苦味羅漢果出發(fā)，用乙醇提取,提取物再用正丁醇提取，再經(jīng)硅膠柱層析，分離出幾個(gè)苦味成分，其中一個(gè)苦味單體，收得率為0.029％，暫名為羅漢果苦貳A。羅漢果苦貳A，白色針狀結(jié)晶,熔點(diǎn)183～185℃。該成分為首次從天然產(chǎn)物中得到。
王磊[2]等采用乙烯利處理的方法對采收季節(jié)后期無法自然成熟的羅漢果苦果進(jìn)行采后處理研究，以實(shí)現(xiàn)對羅漢果苦果廢物利用。采摘20d、30d、40d果齡的羅漢果，進(jìn)行溫度、乙烯利用量、放置時(shí)間對羅漢果催熟的影響試驗(yàn),結(jié)果表明,羅漢果苦果催熟的最佳條件為:30日齡以上的羅漢果、0.1％～0.2％乙烯利浸泡2min、室溫15℃以上放置2～4周，70％的果實(shí)在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)表現(xiàn)出全面成熟。說明使用乙烯利催熟羅漢果苦果的方法是可行的，但也帶來乙烯利的殘留問題。
同樣，王磊[3]等研究通過酶催化糖基轉(zhuǎn)移反應(yīng)將新的葡萄糖基團(tuán)引入苦味的羅漢果皂苷Ⅱ中，可以延長其糖鏈，從而達(dá)到改善其口味的目的。該研究從原料選擇、糖源選擇以及反應(yīng)溫度等多方面考察了反應(yīng)條件，最終確定的反應(yīng)最佳條件為純度在50％以上的羅漢果皂苷Ⅱ、2倍于皂苷重量的淀粉、60U·g-1羅漢果苦味皂苷的酶、60～65℃反應(yīng)24h。經(jīng)實(shí)際羅漢果苦果樣品驗(yàn)證了方法的可行性,所獲得的產(chǎn)品可以完全消除苦味，并且?guī)в械奶鹞?經(jīng)HPLC-MS確定了所獲得的微甜產(chǎn)物為3～6個(gè)糖的皂苷混合物。該方法對于目前羅漢果生產(chǎn)中大量出現(xiàn)并被遺棄的嫩果、苦果以及脫苦工藝中產(chǎn)生的羅漢果皂苷Ⅱ而言,是一種潛在的實(shí)現(xiàn)廢物利用的方法。
上述研究或者是通過正丁醇萃取加硅膠反復(fù)柱層析獲得羅漢果苦甙，不適合工業(yè)規(guī)?；笊a(chǎn)；或者是通過加激素(乙烯利)轉(zhuǎn)化，壞果率較高，而且?guī)砑に貧埩?，操作比較麻煩，耗用人工和占用場地；或者是加酶轉(zhuǎn)化其中的羅漢果苦甙，以去除其中的大部分苦味物質(zhì)，但都未能夠完全轉(zhuǎn)化和去除，轉(zhuǎn)化后的羅漢果總甜甙為非天然成分，也沒有天然成熟羅漢果的甜度。
鑒于此，有必要開發(fā)一種新的羅漢果苦味劑的制備方法，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。如果能利用羅漢果苦果作為原料，分離出其中的苦味物質(zhì)，并直接應(yīng)用于食品飲料中，將會使羅漢果的應(yīng)用得到更廣泛的開發(fā)。
參考文獻(xiàn)：
[1]徐位坤,孟麗珊.羅漢果嫩果中一個(gè)苦味成分的分離和鑒定[J].廣西植物，1992,12(2):136-138.
[2]王磊,盧鳳來,劉金磊等.羅漢果苦果的采后處理研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2014,27(1):344-348.
[3]王磊,劉金磊,盧鳳來.酶催化糖基轉(zhuǎn)移反應(yīng)在改善羅漢果苦味皂苷口味中的應(yīng)用[J].廣西植物,2015,35(6):782-785.
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種羅漢果苦味劑的制作方法。本發(fā)明的方法，可以將棄用資源羅漢果苦果綜合利用起來，變廢為寶，切實(shí)增加羅漢果種植戶的收入。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種羅漢果苦味劑的制作方法，包括如下步驟：
(1)原料前處理及滲漉提?。喝∥闯墒斓牧_漢果苦果，清洗、破碎后，加入上述羅漢果苦果重量10～30倍的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1‰～1％的食品級醋酸水，浸泡1min～600min，然后裝入層析柱，滲漉1～30小時(shí)，得到滲漉液；
(2)柱層析：將步驟(1)得到的滲漉液進(jìn)行柱層析，先用柱體積1-3倍量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2‰～5‰的氫氧化鈉/鉀乙醇水洗脫，再水洗至中性，然后用柱體積2～4倍量的體積百分?jǐn)?shù)為45％～60％乙醇水洗脫，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液；
(3)脫色：將步驟(2)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液進(jìn)脫色柱進(jìn)行脫色，收集流出液，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液；
(4)脫色液濃縮、干燥：將步驟(3)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液濃縮，回收乙醇，干燥，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉；
(5)結(jié)晶與重結(jié)晶：在步驟(4)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉中，加入所述含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉2～8倍重量的體積百分?jǐn)?shù)為75％～95％乙醇，40～70℃溶解，放置12～72小時(shí)結(jié)晶，得到晶體，晶體干燥后再用2～8倍晶體重量的體積百分?jǐn)?shù)為75％～100％甲醇或乙醇重結(jié)晶，重結(jié)晶操作參數(shù)與結(jié)晶操作參數(shù)相同，重結(jié)晶晶體干燥后，即得到所述羅漢果苦味劑。
本發(fā)明采用加酸滲漉提取羅漢果苦果中的羅漢果苦甙，得到一種羅漢果苦味劑，具有如下優(yōu)點(diǎn)：(1)無需加熱提取耗用大量蒸汽，既減少了二氧化碳排放，又大大降低了能耗，提高了產(chǎn)能，有效降低了生產(chǎn)成本；(2)大大減少了提出物中的雜質(zhì)和色素等，增大了柱層析步驟中樹脂對有效成分的吸附量，增大了脫色柱對原料的處理量。
本發(fā)明步驟(2)的柱層析過程中采用低濃度堿性醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，可以進(jìn)一步除雜，有效提高了羅漢果苦味劑中的羅漢果甙ⅡE的的含量。
本發(fā)明不采用硅膠柱及中低壓制備柱等費(fèi)時(shí)的分離制備方法，不使用有機(jī)氯仿和昂貴填料的層析方法，首次獲得了含有高含量羅漢果甙ⅡE物質(zhì)的羅漢果苦味劑，且可以實(shí)現(xiàn)工廠大規(guī)?；慨a(chǎn)。
在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。
進(jìn)一步，步驟(1)所述未成熟的羅漢果苦果，指的是生長期25～40日齡，羅漢果甜甙的含量為鮮果重量的0.15％～0.28％。
市面上對苦果的定義就是經(jīng)口品嘗，苦口就認(rèn)為是苦果，學(xué)術(shù)上未做統(tǒng)一，一般是指羅漢果從點(diǎn)花結(jié)果開始40天果實(shí)生長期內(nèi)含有比較多的羅漢果甙ⅡE這一苦味成分，或者由于地理位置氣候變冷等原因?qū)е碌臒o法完全成熟的帶有苦味的羅漢果。
進(jìn)一步，步驟(2)所述柱層析的樹脂為DM58、LX-18、LX-T28LX-20B中的一種。
采用上述進(jìn)一步的有益效果是：上述樹脂均為大孔型樹脂，流速與滲漉速度同步相匹配，相比D101等常規(guī)大孔樹脂對羅漢果成分的吸附量大，針對性強(qiáng)。采用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2‰-5‰的氫氧化鈉/鉀乙醇水(屬于低濃度堿性乙醇水)洗脫，可先除去部分黃酮、色素，蛋白、有機(jī)酸等雜質(zhì)和少部分羅漢果甜味甜甙。
進(jìn)一步，步驟(3)所述脫色柱的填料為氧化鋁、700B、D941、LX-T5樹脂中的一種。
進(jìn)一步，步驟(4)所述干燥的方式為真空干燥或噴霧干燥。
本發(fā)明的有益效果是：
(1)本發(fā)明采用加酸滲漉提取，省去了加熱提取耗用大量蒸汽，減少了二氧化碳排放，同時(shí)大大減少了提出物中的雜質(zhì)和色素等，增大了柱層析步驟中樹脂對有效成分的吸附量，增大了脫色柱對原料的處理量，能耗大幅度降低，產(chǎn)能效率提高明顯，有效降低成本。
(2)柱層析過程中采用低濃度堿性醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫進(jìn)一步除雜，有效提高了目標(biāo)成分的含量。本發(fā)明首次采用不通過硅膠制備等費(fèi)時(shí)及使用有機(jī)氯仿和昂貴填料的層析方法，獲得高含量的羅漢果苦甙物質(zhì)，且可以實(shí)現(xiàn)工廠大規(guī)?；慨a(chǎn)。
(3)本發(fā)明的制備方法簡單，市場前景廣闊，適合規(guī)?；茝V應(yīng)用。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1
本實(shí)施例的羅漢果苦味劑的制作方法，包括如下步驟：
(1)原料前處理及滲漉提取：取35日齡未成熟的羅漢果苦果10kg，其中羅漢果甜甙的含量為鮮果重量的0.15％，清洗、破碎后，加入上述羅漢果苦果重量13倍的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3‰的食品級醋酸水，浸泡30min，然后裝入層析柱，滲漉13小時(shí)，得到滲漉液；
(2)柱層析：將步驟(1)得到的滲漉液進(jìn)行柱層析，所用樹脂為大孔型樹脂DM58，先用柱體積1倍量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5‰的氫氧化鈉乙醇水洗脫，再水洗至中性，然后用柱體積2倍量的體積百分?jǐn)?shù)為50％乙醇水洗脫，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液；
(3)脫色：將步驟(2)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液進(jìn)氧化鋁脫色柱進(jìn)行脫色，收集流出液，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液；
(4)脫色液濃縮、干燥：將步驟(3)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液濃縮，回收乙醇，真空干燥，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉；
(5)結(jié)晶與重結(jié)晶：在步驟(4)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉中，加入所述含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉3.5倍重量的體積百分?jǐn)?shù)為80％乙醇，40℃溶解，放置24小時(shí)結(jié)晶，得到晶體，晶體干燥后再用4倍晶體重量的體積百分?jǐn)?shù)為100％甲醇重結(jié)晶，重結(jié)晶操作參數(shù)與結(jié)晶操作參數(shù)相同，重結(jié)晶晶體干燥后，即得到所述25g羅漢果苦味劑，其中，羅漢果苦甙ⅡE含量93.8％。
實(shí)施例2
本實(shí)施例的羅漢果苦味劑的制作方法，包括如下步驟：
(1)原料前處理及滲漉提?。喝?0日齡未成熟的羅漢果苦果100kg，其中羅漢果甜甙的含量為鮮果重量的0.21％，清洗、破碎后，加入上述羅漢果苦果重量13倍的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3‰的食品級醋酸水，浸泡60min，然后裝入層析柱，滲漉20小時(shí)，得到滲漉液；
(2)柱層析：將步驟(1)得到的滲漉液進(jìn)行柱層析，所用樹脂為大孔型樹脂LX-18，先用柱體積3倍量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為3‰的氫氧化鈉乙醇水洗脫，再水洗至中性，然后用柱體積4倍量的體積百分?jǐn)?shù)為55％乙醇水洗脫，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液；
(3)脫色：將步驟(2)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液進(jìn)700B脫色柱進(jìn)行脫色，收集流出液，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液；
(4)脫色液濃縮、干燥：將步驟(3)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液濃縮，回收乙醇，噴霧干燥，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉；
(5)結(jié)晶與重結(jié)晶：在步驟(4)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉中，加入所述含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉4倍重量的體積百分?jǐn)?shù)為90％乙醇，55℃溶解，放置24小時(shí)結(jié)晶，得到晶體，晶體干燥后再用4倍晶體重量的體積百分?jǐn)?shù)為95％甲醇重結(jié)晶，重結(jié)晶操作參數(shù)與結(jié)晶操作參數(shù)相同，重結(jié)晶晶體干燥后，即得到所述280g羅漢果苦味劑，其中，羅漢果苦甙ⅡE含量94.3％。
實(shí)施例3
本實(shí)施例的羅漢果苦味劑的制作方法，包括如下步驟：
(1)原料前處理及滲漉提?。喝?0日齡未成熟的羅漢果苦果1000kg，其中羅漢果甜甙的含量為鮮果重量的0.28％，清洗、破碎后，加入上述羅漢果苦果重量23倍的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為6‰的食品級醋酸水，浸泡100min，然后裝入層析柱，滲漉25小時(shí)，得到滲漉液；
(2)柱層析：將步驟(1)得到的滲漉液進(jìn)行柱層析，所用樹脂為大孔型樹脂LX-28B，先用柱體積2倍量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2‰的氫氧化鉀乙醇水洗脫，再水洗至中性，然后用柱體積3倍量的體積百分?jǐn)?shù)為40％乙醇水洗脫，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液；
(3)脫色：將步驟(2)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液進(jìn)D941脫色柱進(jìn)行脫色，收集流出液，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液；
(4)脫色液濃縮、干燥：將步驟(3)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液濃縮，回收乙醇，噴霧干燥，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉；
(5)結(jié)晶與重結(jié)晶：在步驟(4)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉中，加入所述含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉5倍重量的體積百分?jǐn)?shù)為92％乙醇，70℃溶解，放置24小時(shí)結(jié)晶，得到晶體，晶體干燥后再用4倍晶體重量的體積百分?jǐn)?shù)為98％甲醇重結(jié)晶，重結(jié)晶操作參數(shù)與結(jié)晶操作參數(shù)相同，重結(jié)晶晶體干燥后，即得到所述2.95kg羅漢果苦味劑，其中，羅漢果苦甙ⅡE含量95.6％。
實(shí)施例4
本實(shí)施例的羅漢果苦味劑的制作方法，包括如下步驟：
(1)原料前處理及滲漉提?。喝?5日齡未成熟的羅漢果苦果500kg，其中羅漢果甜甙的含量為鮮果重量的0.25％，清洗、破碎后，加入上述羅漢果苦果重量10倍的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1‰的食品級醋酸水，浸泡600min，然后裝入層析柱，滲漉30小時(shí)，得到滲漉液；
(2)柱層析：將步驟(1)得到的滲漉液進(jìn)行柱層析，所用樹脂為大孔型樹脂LX-20B，先用柱體積3倍量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5‰的氫氧化鈉乙醇水洗脫，再水洗至中性，然后用柱體積4倍量的體積百分?jǐn)?shù)為60％乙醇水洗脫，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液；
(3)脫色：將步驟(2)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液進(jìn)LX-T5脫色柱進(jìn)行脫色，收集流出液，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液；
(4)脫色液濃縮、干燥：將步驟(3)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液濃縮，回收乙醇，噴霧干燥，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉；
(5)結(jié)晶與重結(jié)晶：在步驟(4)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉中，加入所述含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉8倍重量的體積百分?jǐn)?shù)為75％乙醇，50℃溶解，放置72小時(shí)結(jié)晶，得到晶體，晶體干燥后再用2倍晶體重量的體積百分?jǐn)?shù)為75％乙醇重結(jié)晶，重結(jié)晶操作參數(shù)與結(jié)晶操作參數(shù)相同，重結(jié)晶晶體干燥后，即得到所述1.28kg羅漢果苦味劑，其中，羅漢果苦甙ⅡE含量95.7％。
實(shí)施例5
本實(shí)施例的羅漢果苦味劑的制作方法，包括如下步驟：
(1)原料前處理及滲漉提?。喝?0日齡未成熟的羅漢果苦果100kg，其中羅漢果甜甙的含量為鮮果重量的0.18％，清洗、破碎后，加入上述羅漢果苦果重量10倍的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1‰的食品級醋酸水，浸泡1min，然后裝入層析柱，滲漉1小時(shí)，得到滲漉液；
(2)柱層析：將步驟(1)得到的滲漉液進(jìn)行柱層析，所用樹脂為大孔型樹脂LX-18，先用柱體積2.5倍量的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2‰的氫氧化鉀乙醇水洗脫，再水洗至中性，然后用柱體積3.5倍量的體積百分?jǐn)?shù)為45％乙醇水洗脫，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液；
(3)脫色：將步驟(2)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的洗脫液進(jìn)D941脫色柱進(jìn)行脫色，收集流出液，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液；
(4)脫色液濃縮、干燥：將步驟(3)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色液濃縮，回收乙醇，真空干燥，得到含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉；
(5)結(jié)晶與重結(jié)晶：在步驟(4)得到的含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉中，加入所述含有羅漢果苦味物質(zhì)的脫色干粉2倍重量的體積百分?jǐn)?shù)為95％乙醇，60℃溶解，放置12小時(shí)結(jié)晶，得到晶體，晶體干燥后再用8倍晶體重量的體積百分?jǐn)?shù)為90％甲醇重結(jié)晶，重結(jié)晶操作參數(shù)與結(jié)晶操作參數(shù)相同，重結(jié)晶晶體干燥后，即得到所述198g羅漢果苦味劑，其中，羅漢果苦甙ⅡE含量93.2％。
對比試驗(yàn)
(1)現(xiàn)有常規(guī)提取方法與本發(fā)明所述加酸滲漉提取方法對提出物的影響試驗(yàn)
取2000g 30日齡未成熟羅漢果苦果，每個(gè)苦果對半切開分成兩份，每份1000g。一份用10倍量60％乙醇提取2次，每次2小時(shí)，提取液合并過濾，濃縮回收乙醇后得浸膏，浸膏經(jīng)常規(guī)D101大孔樹脂層析，3倍量65％乙醇洗脫樹脂柱，濃縮液經(jīng)濃縮干燥得到初步產(chǎn)品13.2g，顏色黑綠；另一份按本專利所述方法滲漉提取，滲漉液同樣經(jīng)常規(guī)D101大孔樹脂層析，3倍量65％乙醇洗脫樹脂柱，濃縮液經(jīng)濃縮干燥得到初步產(chǎn)品8.4g，顏色淡黃色。兩種提取方法的渣再用常規(guī)乙醇提取的方法提取，提出物經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)檢測,均未檢出羅漢果苦甙ⅡE及羅漢果苦甙V，說明提取完全，但是常規(guī)提取方法多了至少是57％的雜質(zhì)，給后續(xù)的進(jìn)一步純化脫色帶來困難和麻煩。
(2)本發(fā)明所用的提取方法不使用加熱設(shè)備，并節(jié)省了蒸汽和電力，降低了能耗和二氧化碳排放。羅漢果提取物生產(chǎn)加工如果采用常規(guī)加熱提取方式，按每天投料100-150噸羅漢果原料計(jì)算，每天需要耗費(fèi)150噸蒸汽，燒鍋爐需燃燒30-50噸木糠谷殼或者10-20噸煤，產(chǎn)生了14-28噸二氧化碳的排放。如果采用本專利工藝，每天節(jié)約蒸汽成本約2萬多元，并少排放二氧化碳
(3)樹脂吸附量對比試驗(yàn)
取2000g 30日齡未成熟羅漢果苦果，每個(gè)苦果對半切開分成兩份，每份1000g。一份用10倍量60％乙醇提取2次，每次2小時(shí)，提取液合并過濾，濃縮回收乙醇后得浸膏，浸膏加水分成10等份，每等份逐一經(jīng)200g常規(guī)D101大孔樹脂層析，HPLC監(jiān)測流出液中羅漢果甙的含量，等到第5等份進(jìn)柱完畢時(shí)，流出液經(jīng)HPLC檢測有羅漢果苦甙ⅡE及羅漢果苦甙V成分被檢測出來，說明已經(jīng)過載；另一份按本專利所述方法滲漉提取，滲漉液同樣分成10等份，經(jīng)LX-18樹脂層析，等到第10等份進(jìn)柱完畢時(shí)，流出液中才有羅漢果苦甙ⅡE及羅漢果苦甙V成分被HPLC檢測出來，這說明本發(fā)明所述樹脂對羅漢果甙的吸附量比常規(guī)D101樹脂高80％。
(4)現(xiàn)有常規(guī)脫色方法與本發(fā)明所述加酸滲漉提取后脫色方法對提出物的顏色及含量影響對比試驗(yàn)
常規(guī)脫色方法用陰、陽離子交換樹脂進(jìn)行脫色或者活性炭脫色，本發(fā)明采用LX-T5等樹脂作為脫色材料。取2000g 30日齡未成熟羅漢果苦果，每個(gè)苦果對半切開分成兩份，每份1000g。一份用10倍量60％乙醇提取2次，每次2小時(shí)，提取液合并過濾，濃縮回收乙醇后得浸膏，浸膏經(jīng)常規(guī)D101大孔樹脂層析，3倍量65％乙醇洗脫樹脂柱，流出液經(jīng)濃縮回收乙醇，得到黑色浸膏，黑色浸膏進(jìn)陽離子和陽離子交換樹脂，流出液黃色，流出液經(jīng)濃縮干燥后得黃色樣品，羅漢果苦甙ⅡE含量低于45％，該樣品由于含量低，用結(jié)晶和重結(jié)晶工藝無法達(dá)到晶體析出的效果；另一份按本專利所述方法滲漉提取，滲漉液同樣經(jīng)LX-18樹脂層析，3倍量60％乙醇洗脫樹脂柱，流出液呈淺黃色，流出液經(jīng)濃縮回收乙醇得淡黃色浸膏，淡黃色浸膏經(jīng)LX-T5脫色，脫色液顏色非常淺且透亮，濃縮干燥后得淺白色樣品，羅漢果苦甙ⅡE含量大于75％，該樣品經(jīng)結(jié)晶和重結(jié)晶工藝獲得米白色晶體樣品，羅漢果苦甙ⅡE含量大于90％。
由此可見，本發(fā)明工藝簡單，采用加酸滲漉提取,節(jié)省了加熱提取耗用大量蒸汽，也節(jié)省了為獲取動力熱蒸汽而燃燒的煤或者電以及木屑的用量，從而減少了二氧化碳排放，節(jié)能減排優(yōu)勢突顯；同時(shí)大大減少了提出物中的雜質(zhì)和色素等，增大了柱層析步驟中樹脂對有效成分的吸附量，增大了脫色柱對原料的處理量，產(chǎn)能效率提高明顯，有效降低成本，適合工廠規(guī)?；罅可a(chǎn)。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。