褐飛虱Nlcdc2基因及其編碼產(chǎn)物與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】褐飛虱Nlcdc2基因及其編碼產(chǎn)物與應(yīng)用，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明一方面公開(kāi)了褐飛虱Nlcdc2基因序列和褐飛虱Nlcdc2基因的編碼蛋白氨基酸序列，另一方面公開(kāi)了褐飛虱Nlcdc2基因在控制褐飛虱存活率和繁殖力中的應(yīng)用。本發(fā)明主要針對(duì)與褐飛虱生殖相關(guān)的細(xì)胞分裂周期基因Nlcdc2進(jìn)行研究，探明了該基因在褐飛虱生殖發(fā)育中的表達(dá)規(guī)律和相關(guān)功能，明確了其作為害蟲(chóng)防治新靶標(biāo)的潛力，為發(fā)展基于Nlcdc2的害蟲(chóng)防治新策略奠定了基礎(chǔ)。
【專利說(shuō)明】褐飛虱基因及其編碼產(chǎn)物與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及褐飛虱細(xì)胞分裂周期基因犯《/以及其編碼 產(chǎn)物與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 褐飛風(fēng)(Ai7學(xué)arraia /嘆6?5· St&l)是一種繁殖力強(qiáng)且為害嚴(yán)重的水稻害蟲(chóng)，主 要以刺吸韌皮部汁液和傳播水稻病毒的方式為害水稻植株。近年來(lái)，褐飛虱頻頻爆發(fā)成災(zāi)， 已發(fā)展成為亞洲稻區(qū)的重要害蟲(chóng)。目前，褐飛虱的防治主要依賴于噴施化學(xué)農(nóng)藥和推廣水 稻抗性品種等措施。但實(shí)踐表明，褐飛虱會(huì)對(duì)農(nóng)藥產(chǎn)生很強(qiáng)的抗藥性，致使化學(xué)防治變得防 不勝防；與此類似，褐飛虱在與水稻抗蟲(chóng)品種相互作用的過(guò)程中，可以逐漸發(fā)展為能夠適應(yīng) 水稻品種抗性的新種群，致使推廣的抗蟲(chóng)品種逐漸喪失其原有的抗性。褐飛虱防治工作因 缺乏理想的靶標(biāo)信息而難以采取針對(duì)性的策略。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供褐飛虱犯《/以基因及其 編碼產(chǎn)物與應(yīng)用的技術(shù)方案。
[0004] 所述的褐飛虱基因，其特征在于含有SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
[0005] 所述的褐飛虱yV/cifcJ?基因的編碼蛋白，其特征在于含有SEQ ID No. 2所示的氨基 酸序列。
[0006] 所述的褐飛虱基因在控制褐飛虱存活率中的應(yīng)用。
[0007] 所述的褐飛風(fēng)基因在控制褐飛風(fēng)繁殖力中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明主要針對(duì)與褐飛虱生殖相關(guān)的細(xì)胞分裂周期基因進(jìn)行研究，探明 了該基因在褐飛虱生殖發(fā)育中的表達(dá)規(guī)律和相關(guān)功能，明確了其作為害蟲(chóng)防治新靶標(biāo)的潛 力，為發(fā)展基于的害蟲(chóng)防治新策略奠定了基礎(chǔ)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009] 圖1為褐飛虱RACE產(chǎn)物及核心序列的PCR擴(kuò)增電泳圖； 圖1 中：M: DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) DL2000 marker;l: 3'RACE產(chǎn)物-250bp左右；2: 5'RACE 產(chǎn)物-750bp左右；3、4 :已知核心片段序列-500bp左右； 圖2為褐飛虱全長(zhǎng)cDNA序列及氨基酸序列分析圖； 圖3為褐飛虱及其他昆蟲(chóng)的CDK1的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)； 圖4為褐飛風(fēng)和的擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)曲線； 圖5為褐飛虱#^^和，的熔解曲線； 圖6為褐飛虱不同發(fā)育時(shí)期Nlcdc2的表達(dá)量變化圖； 圖6中：Nl: 1齡若蟲(chóng)；N2: 2齡若蟲(chóng)；N3: 3齡若蟲(chóng)；N4: 4齡若蟲(chóng)；N5: 5齡若蟲(chóng)；F1: 羽化第1 d;F3:羽化第3d; F5:羽化第5 d;F7:羽化第7 d; 圖7為dsRNA干擾片段電泳圖； 圖 7 中：M: DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn) DL2000 marker;l:合成的 dsNlcdc2 (500 bp) 2:合 成的 dsGFP (350 bp); 圖8為yV/cifcJ?干擾后存活率的變化圖； 圖9為褐飛虱取食dsRNA后#人^^表達(dá)量變化圖； 圖9中：1:詞喂后1 d ;2:詞喂后2 d ; 4:詞喂后4 d ;6:詞喂后6 d ;圖中數(shù)值 為平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤（N=3, n=10) 表示統(tǒng)計(jì)分析表明飼喂dsGFP與飼喂dsNlcdc2 0. 1 存在顯著差異（T檢驗(yàn)，P〈0. 05) ; 表示統(tǒng)計(jì)分析表明飼喂dsGFP與飼喂dsNlcdc2 0. 5存在極顯著差異（T檢驗(yàn)，P〈0.01); 圖10為干擾后褐飛風(fēng)卵巢發(fā)育圖； 圖10中：A圖為對(duì)照組(喂食dsGFP)褐飛虱解剖后卵巢；B圖為實(shí)驗(yàn)組(喂食dsNlcdc2) 褐飛虱解剖后卵巢； 圖11為褐飛風(fēng)RNAi后代個(gè)體數(shù)量圖。

【具體實(shí)施方式】
[0010] 以下結(jié)合實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
[0011] 實(shí)施例1 :褐飛風(fēng)基因的克隆與序列分析 RACE PCR及核心片斷的PCR擴(kuò)增 以褐飛虱cDNA為模板，以引物Nlcdc2-Fl和Nlcdc2-Rl(表1)進(jìn)行核心序列PCR擴(kuò)增， 獲得預(yù)期大小的目標(biāo)片段，測(cè)序結(jié)果表明該片段大小為500 bp左右，經(jīng)比對(duì)與轉(zhuǎn)錄組提供 序列一致（圖1)。經(jīng)NCBI Blastp分析發(fā)現(xiàn)，該基因推導(dǎo)的氨基酸序列與黑脈金斑蝶 (EHJ71170)同源基因編碼的氨基酸序列同源性達(dá)71%，如表2所示。根據(jù)核心 序列測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)RACE引物(表1)進(jìn)行全長(zhǎng)cDNA的克隆，5' RACE獲得750 bp左右的特異 性序列，3' RACE獲得250 bp左右的特異性序列（圖1)。這3段序列經(jīng)過(guò)DNAMAN拼接得到 的細(xì)胞分裂周期基因cDNA序列的全長(zhǎng)為1215 bp，該基因的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所 /_J、1 ο
[0012] 表I克隆、熒光定量PCR及合成dsRNA所涉及到的引物

【權(quán)利要求】
1. 褐飛虱基因，其特征在于含有SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
2. 如權(quán)利要求1所述的褐飛虱基因的編碼蛋白，其特征在于含有SEQ ID No. 2 所示的氨基酸序列。
3. 如權(quán)利要求1所述的褐飛虱#人^^基因在控制褐飛虱存活率中的應(yīng)用。
4. 如權(quán)利要求1所述的褐飛風(fēng)基因在控制褐飛風(fēng)繁殖力中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N15/12GK104232651SQ201410342832
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月18日
【發(fā)明者】俞曉平, 郝培應(yīng), 馬艷, 申屠旭萍, 陸潮峰 申請(qǐng)人:中國(guó)計(jì)量學(xué)院