一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比。其特征是：(23±0.5)℃下培養(yǎng)190小時得孢懸液，孢懸液按2.5％接種量(24±0.5)℃搖瓶培養(yǎng)26小時得搖瓶種子液，搖瓶種子液按0.2％接種量(24±0.5)℃種子罐培養(yǎng)42小時得種子液，種子液按9.8％接種量(23±0.5)℃培養(yǎng)198小時得效價為13000～15000ug／ml麥考酚酸發(fā)酵液。由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)麥考酚酸發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比中的缺陷：發(fā)酵總周期在21天以上且動力消耗較大以及麥考酚酸效價不高。因此，本發(fā)明提供的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比具有較大的工業(yè)化應(yīng)用前景。
【專利說明】一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種工藝及配比，特別是一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比。
【背景技術(shù)】
[0002]麥考酚酸是由青霉屬菌株產(chǎn)生的抗真菌、抗腫瘤并具免疫抑制作用的抗生素。麥考酚酸的2-乙基酯類衍生物一嗎替麥考酚酯是瑞士羅氏公司開發(fā)的第三代免疫抑制劑。10年(1995年-2005年)來，全球范圍內(nèi)已有超過59.3萬例患者服用嗎替麥考酚酯。2004年9月15日的新版《國家基本醫(yī)療保險和工傷保險藥品目錄》中，器官移植中使用的主要免疫抑制劑嗎替麥考酚酯進(jìn)入乙類目錄。據(jù)IMS數(shù)據(jù)分析:2009年，嗎替麥考酚酯、他克莫司、環(huán)孢素占據(jù)中國免疫抑制劑市場87 %的份額。其中，嗎替麥考酚酯的市場份額高達(dá)40 %。麥考酚酸作為嗎替麥考酚酯的前體化合物，研究及創(chuàng)新麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比對于生產(chǎn)嗎替麥考酚酯的企業(yè)來說十分重要。
[0003]工業(yè)上麥考酚酸的發(fā)酵工藝采用二級種子罐培養(yǎng)而后移種發(fā)酵罐，發(fā)酵總周期在21天以上，時間較長且動力消耗較大。另外，采用這種發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，放罐所得麥考酹酸的效價不到1000Oug / ml,效價不高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的就是為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的麥考酚酸發(fā)酵時間較長、動力消耗較大、效價不高而提供的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比。
[0005]本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):
[0006](I)將冷凍管孢懸液接種于斜面培養(yǎng)基,在(23±0.5) °C下培養(yǎng)190小時后,取I支斜面加入無菌水，制得孢懸液；
[0007](2)將上述制得的孢懸液按搖瓶培養(yǎng)基2.5%的接種量接種于裝有搖瓶培養(yǎng)基的種子搖瓶中，在(24±0.5) °C下培養(yǎng)26小時后得搖瓶種子液；
[0008](3)將上述搖瓶種子液按種子罐培養(yǎng)基0.2%的接種量接種于裝有種子罐培養(yǎng)基的種子罐中，在(24±0.5) °C下培養(yǎng)42小時后得種子液；
[0009](4)將上述種子液按發(fā)酵罐培養(yǎng)基9.8%的接種量移入裝有發(fā)酵罐培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在(23±0.5) °C下培養(yǎng)198小時后放罐得麥考酚酸發(fā)酵液，所得麥考酚酸效價為13000 ~15000ug / ml ；
[0010](5)上述(I)中斜面培養(yǎng)基的組成及配比:葡萄糖1.5% (g / ml)、酵母浸出粉
0.5% (g / ml)、麥芽浸出粉 I % (g / ml)、碳酸?丐 0.2% (g / ml)、瓊脂 2% (g / ml)、微量元素0.1% (ml / ml),溶劑為蒸懼水，pH值為6.8 ;
[0011](6)上述(2)中搖瓶培養(yǎng)基的組成及配比:蔗糖2% (g / ml)、生豆粉0.95% (g /ml)、玉米漿粉0.8% (g / ml)、酵母浸出粉0.5% (g / ml)、磷酸二氫鉀0.1 % (g / ml),硫酸鎂0.1% (g / ml)，溶劑為蒸餾水，pH值為6.5 ;
[0012](7)上述(3)中種子罐培養(yǎng)基的組成及配比:蔗糖3.5% (g / ml)、生米粉3%(g / ml)、酵母浸出粉 0.96% (g / ml)、磷酸二氫鉀 0.1 % (g / ml),硫酸鎂 0.1% (g /ml)，溶劑為飲用水，pH值為6.5 ;
[0013](8)上述(4)中發(fā)酵罐培養(yǎng)基的組成及配比:蔗糖21% (g / ml)、氨基乙酸1.26%(g / ml)、甲硫氨酸 0.045% (g / 1111)、磷酸二氫鉀0.6(% (g / ml)、微量元素 0.1 % (ml /ml)，溶劑為飲用水，pH值為4.5 ;
[0014](9)上述(5)和(8)中微量元素的組成及配比=FeSO4.7H203.52 % (g / ml)、CuSO4.5Η204.8% (g / ml), ZnSO4.7Η2038.4% (g / ml)、MnSO4.H2Ol.92% (g / ml)，溶劑為蒸懼水，pH值為自然。
[0015]本發(fā)明提供的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，與現(xiàn)有技術(shù)相比，主要具有如下優(yōu)點和有益成果:
[0016](1)與現(xiàn)有技術(shù)麥考酚酸的發(fā)酵工藝采用二級種子罐培養(yǎng)使發(fā)酵總周期在21天以上相比，本發(fā)明經(jīng)種子罐培養(yǎng)后直接進(jìn)發(fā)酵罐培養(yǎng)得麥考酚酸發(fā)酵液，將發(fā)酵總周期縮短至19天，同時動力消耗降低30%左右；
[0017](2)與現(xiàn)有技術(shù)麥考酚酸的培養(yǎng)基配比相比，在現(xiàn)有技術(shù)麥考酚酸的發(fā)酵工藝下，所得麥考酚酸的效價不到lOOOOug/ml，本發(fā)明采用的麥考酚酸發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比所得麥考酚酸效價為13000~15000ug / ml ；
[0018](3)與現(xiàn)有技術(shù)麥考酚酸發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比相比，本發(fā)明采用的麥考酚酸發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比可使麥考酚酸的批產(chǎn)量提高20%~40%。
[0019]麥考酚酸發(fā)酵總周期的縮短、動力消耗的降低、效價的提高以及麥考酚酸批產(chǎn)量的提高，極大地降低了麥考酚酸的生產(chǎn)成本，提高了企業(yè)的經(jīng)濟效益，同時也為患者帶來更實惠的用藥。因此，本發(fā)明提供的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比具有較大的工業(yè)化應(yīng)用前景。
【具體實施方式】
[0020]下面通過實施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明的保護范圍。
[0021](I)將I支冷凍管孢懸液接種于3支斜面培養(yǎng)基，在23°C下培養(yǎng)190小時后，取I支斜面加入35ml無菌水,制得孢懸液；
[0022](2)將上述制得的孢懸液2.5ml接種于裝有100ml搖瓶培養(yǎng)基的種子搖瓶中，在24°C下培養(yǎng)26小時后得搖瓶種子液；
[0023](3)將上述搖瓶種子液全部(100ml左右)接種于裝有50L種子培養(yǎng)基的種子罐中，在24 C下培養(yǎng)42小時后得種子液；
[0024](4)將上述種子液全部(50L左右)移入裝有510L發(fā)酵罐培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在23°C下培養(yǎng)198小時后放罐得麥考酚酸發(fā)酵液，所得麥考酚酸效價為14536ug / ml。
【權(quán)利要求】
1.一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，包括以下步驟: (1)將冷凍管孢懸液接種于斜面培養(yǎng)基，在(23±0.5) °C下培養(yǎng)190小時后，取I支斜面加入無菌水，制得孢懸液； (2)將上述制得的孢懸液按搖瓶培養(yǎng)基一定比例的接種量接種于裝有搖瓶培養(yǎng)基的種子搖瓶中，在(24±0.5) °C下培養(yǎng)26小時后得搖瓶種子液； (3)將上述搖瓶種子液按種子罐培養(yǎng)基一定比例的接種量接種于裝有種子罐培養(yǎng)基的種子罐中，在(24 ± 0.5) °C下培養(yǎng)42小時后得種子液； (4)將上述種子液按發(fā)酵罐培養(yǎng)基一定比例的接種量移入裝有發(fā)酵罐培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在(23±0.5) °C下培養(yǎng)198小時后放罐得麥考酚酸發(fā)酵液，所得麥考酚酸效價為13000 ~15000ug / ml。
2.如權(quán)利要求書I所述的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，其特征在于，所述步驟(1)中斜面培養(yǎng)基的組成及配比:葡萄糖1.5% (g / ml)、酵母浸出粉0.5% (g /ml)、麥芽浸出粉I % (g / ml)、碳酸鈣0.2% (g / ml)、瓊脂2% (g / ml)、微量元素0.1%(ml / ml),溶劑為蒸懼水，pH值為6.8。
3.如權(quán)利要求書I所述的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，其特征在于，所述步驟(2)中一定比例的接種量為:2.5%的接種量。
4.如權(quán)利要求書I所述的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，其特征在于，所述步驟(2)中搖瓶培養(yǎng)基的組成及 配比:蔗糖2% (g / ml)、生豆粉0.95% (g / ml)、玉米漿粉0.8% (g / ml)、酵母浸出粉0.5% (g / ml)、磷酸二氫鉀0.1 % (g / ml)，硫酸鎂0.1%(g / ml)，溶劑為蒸餾水，pH值為6.5。
5.如權(quán)利要求書I所述的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，其特征在于，所述步驟(3)中一定比例的接種量為:0.2%的接種量。
6.如權(quán)利要求書I所述的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，其特征在于，所述步驟(3)中種子罐培養(yǎng)基的組成及配比:蔗糖3.5% (g / ml)、生米粉3% (g / ml)、酵母浸出粉0.96% (g / ml)、磷酸二氫鉀0.1 % (g / ml)，硫酸鎂0.1% (g / ml)，溶劑為飲用水，pH值為6.5。
7.如權(quán)利要求書I所述的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，其特征在于，所述步驟(4)中一定比例的接種量為:9.8%的接種量。
8.如權(quán)利要求書I所述的一種麥考酚酸的發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基配比，其特征在于，所述步驟(4)中發(fā)酵罐培養(yǎng)基的組成及配比:蔗糖21% (g / ml)、氨基乙酸1.26% (g / ml)、甲硫氨酸0.045% ^/!!^、磷酸二氫鉀。^1^ (g / ml)、微量元素0.1 % (ml / ml)，溶劑為飲用水，pH值為4.5。
9.如權(quán)利要求書2和8所述的微量元素0.1% (ml / ml)，其特征在于，所述的微量元素的組成及配比=FeSO4.7Η203.52% (g/ml)、CuSO4.5Η204.8% (g / ml)、ZnSO4.7Η2038.4%(g/ml)、MnSO4.H2Ol.92% (g / ml)，溶劑為蒸餾水，pH 值為自然。
【文檔編號】C12P17/04GK103834701SQ201410095794
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月12日
【發(fā)明者】王勇, 白騰飛, 徐強如, 李軍, 郭紹定, 傅立峰, 蘇永明, 陳軍, 明國軍, 伊?xí)蚤? 趙金起, 馬智勇 申請人:江蘇九陽生物制藥有限公司