用于人類藥物致聾基因突變篩查的引物、探針及其使用方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了用于人類藥物致聾基因突變篩查的引物、探針及其使用方法，屬于基因檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明公開了32種用于人類藥物致聾基因突變篩查的引物和探針的組合，以及這32種用于人類藥物致聾基因突變篩查的引物和探針的組合在的應(yīng)用方法。本發(fā)明提供的引物和探針組合以及其使用方法，可以在同一次PCR反應(yīng)中檢測多個樣本，相比傳統(tǒng)的檢測方法具有準(zhǔn)確率高、步驟少，耗時少的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】用于人類藥物致聾基因突變篩查的引物、探針及其使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于基因檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及用于人類藥物致聾基因突變篩查的引物、探針及其使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002]耳聾是嚴(yán)重影響人類健康的一種常見疾病，也是臨床上最常見的遺傳性疾病之一，因其病因復(fù)雜、發(fā)生率高且治療困難，從而極大的影響著患者的人際交往與生活質(zhì)量。據(jù)統(tǒng)計，耳聾在新生兒中的發(fā)病率約為1%。~3%。，全世界約有7000萬人罹患不同程度的聽力缺損，而我國是世界上聽力障礙人口最多的國家，在全國各類殘疾人中，聽力殘疾約占總數(shù)的24%，累及全國數(shù)千萬個家庭。
[0003]耳聾的致病因素有很多，包括遺傳因素和環(huán)境因素等，其中約50%_60%由遺傳因素導(dǎo)致，即遺傳性耳聾。在大量遲發(fā)性聽力下降的患者中，許多也是由于自身基因缺陷或由于基因缺陷和多態(tài)性造成對環(huán)境因素的易感性增加而致病。根據(jù)是否伴有耳外組織的異?；虿∽儯z傳性耳聾分為綜合征性耳聾(SHL)和非綜合征性耳聾(NSHL)，其中NSHL占70%甚至更多。而根據(jù)遺傳方式的不同又可將遺傳性耳聾分為常染色體顯性遺傳(DFNA)、常染色體隱性遺傳(DFNB)、X連鎖遺傳、Y連鎖遺傳及線粒體遺傳五類，其中以DFNB最為常見，約占60%~75% ;其次為DFNA，約占20%~30%。一般情況下，DFNB多表現(xiàn)為語前聾或先天性耳聾，DFNA多表現(xiàn)為語后聾或漸進(jìn)性聽力下降。
[0004]隨著基因組學(xué)以 及分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，對于遺傳性耳聾相關(guān)基因及發(fā)病機(jī)制的研究已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)，在70%~80%的遺傳性耳聾患者中可發(fā)現(xiàn)致聾基因突變，已知有數(shù)百個基因與遺傳性耳聾有關(guān)，且絕大多數(shù)的遺傳性耳聾為單基因病，而耳聾相關(guān)的遺傳基因突變在正常群體中也并不少見，在我國現(xiàn)有人口中，攜帶遺傳性致聾基因的比例約為6%。研究結(jié)果還表明，遺傳性耳聾的致病基因及同一基因的突變位點(diǎn)在不同種族，甚至在同一種族的不同地區(qū)的人群中都不完全相同。目前，歐美發(fā)達(dá)國家列入耳聾致病基因臨床檢測的項目包括EYAl、TIMM8A、GJB2、GJB6、SLC26A4、USH2A、USH3A、P0U3F4、WFS1、COCH、OTOF, TECTA以及線粒體DNA (mtDNA)等，但最普遍也是最基本的檢測項目是GJB2、GJB6、SLC26A4、COCH和mtDNA基因的突變檢測。而國內(nèi)進(jìn)行的耳聾分子流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，我國大部分的遺傳性耳聾主要由GJB2、GJB3、SLC26A4以及mtDNA等為數(shù)不多的幾個基因突變引起，對這幾個基因進(jìn)行遺傳學(xué)檢測可以明確耳聾人群中40%的遺傳學(xué)病因，結(jié)合家族史分析和查體可以診斷95%以上的遺傳性耳聾，這為我國耳聾致病基因篩查以及臨床基因診斷工作的大規(guī)模開展提供了理論依據(jù)。
[0005]mtDNA是唯一存在于人細(xì)胞質(zhì)中的DNA分子，是獨(dú)立于細(xì)胞核染色體外的基因組，具有自我復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和編碼功能，但同時也受核DNA的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，mtDNA突變與遺傳性耳聾有著密切關(guān)系，線粒體12S rRNA (MT-RNR1)上C1494T和A1555G的點(diǎn)突變可通過改變mtDNA的空間結(jié)構(gòu)，使形成新的與氨基糖甙類抗生素結(jié)合的位點(diǎn)，從而導(dǎo)致突變攜帶者對此類藥物敏感，造成使用正常劑量甚至微量該類藥物即可導(dǎo)致突變攜帶者出現(xiàn)聽力損失。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，C1494T和A1555G突變在中國耳聾患者中的攜帶率分別為0.45%和3.34%。由于mtDNA遺傳屬于母系遺傳，mtDNA的突變可通過母親遺傳給后代，所以檢測到女性患者攜帶該基因突變時，需要提醒其本人及后代一定要禁止使用氨基糖甙類藥物。
[0006]綜上所述，對mtDNA的熱點(diǎn)突變進(jìn)行篩查，依據(jù)基因檢測結(jié)果指導(dǎo)臨床醫(yī)生及患者的疾病治療情況以規(guī)避耳聾風(fēng)險，對夫妻雙方均為遺傳性耳聾致病基因攜帶者的胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷，對于我國防治遺傳性耳聾、推進(jìn)優(yōu)生優(yōu)育、提高人口素質(zhì)具有重要意義。目前，對遺傳性耳聾致病基因進(jìn)行檢測的方法包括限制性片段長度多態(tài)性分析(RFLP)，變性高效液相色譜分析(DHPLC)，直接測序法等，這些方法或者不能定性，或者耗時費(fèi)力、所需設(shè)備和耗材昂貴，更重要的是這些方法難以同時對不同基因或同一基因的多個突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測。由于遺傳性耳聾具有遺傳異質(zhì)性強(qiáng)、突變位點(diǎn)多以及人群患病率及攜帶致病基因比例高等特點(diǎn)，因此有必要建立一種高通量、高效率的基因突變檢測方法，以實(shí)現(xiàn)臨床快速檢測或大規(guī)模的人群篩查。基因芯片技術(shù)用于遺傳性耳聾致病基因檢測，具有通量高、自動化程度高等優(yōu)點(diǎn)，但存在重復(fù)性差、易產(chǎn)生交叉污染從而造成假陽性結(jié)果等缺點(diǎn)。Real-TimePCR法在實(shí)時熒光定量PCR平臺上進(jìn)行閉管檢測，能夠有效克服PCR產(chǎn)物遺留污染的問題，且操作簡便、快捷，根據(jù)引物和探針的優(yōu)化設(shè)計，可同時檢測多個樣品不同基因或同一基因的多個突變位點(diǎn)，能夠有效的應(yīng)用于遺傳性耳聾致病基因檢測，是一種極具潛力的耳聾基因檢測工具。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為解決上述問題，本發(fā)明提出了一種用于人類藥物致聾基因突變篩查的引物、探針及其使用方法。
[0008]一種用于人類藥物致聾基因突變mtDNA-ΜΙ和mtDNA_M2篩查的引物和探針，所述的引物和探針如下:
[0009]所述的引物為Primer-F 和 Primer-R,所述的探針為 Probe ;Primer_F、Primer-R和Probe選自如下任意一種組合:
[0010]第I種組合:
[0011]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0012]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0013]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0014]第2種組合:
[0015]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0016]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0017]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0018]第3種組合:
[0019]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0020]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0021]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0022]第4種組合:[0023]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0024]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0025]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0026]第5種組合:
[0027]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0028]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0029]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0030]第6種組合:
[0031]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0032]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0033]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0034]第7種組合:
[0035]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0036]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0037]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0038]第8種組合:
[0039]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0040]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0041]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0042]第9種組合:
[0043]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0044]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0045]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0046]第10種組合:
[0047]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0048]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0049]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0050]第11種組合:
[0051]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0052]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0053]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0054]第12種組合:
[0055]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0056]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0057]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0058]第13種組合:
[0059]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0060]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0061]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；[0062]第14種組合:
[0063]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0064]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0065]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0066]第15種組合:
[0067]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0068]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0069]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0070]第16種組合:
[0071]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.1 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列； [0072]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0073]Probe 為序 列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0074]第17種組合:
[0075]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0076]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0077]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0078]第18種組合:
[0079]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0080]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0081]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0082]第19種組合:
[0083]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0084]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0085]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0086]第20種組合:
[0087]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0088]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0089]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0090]第21種組合:
[0091]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0092]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0093]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0094]第22種組合:
[0095]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0096]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0097]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0098]第23種組合:
[0099]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0100]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；[0101]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0102]第24種組合:
[0103]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0104]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0105]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.8 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0106]第25種組合:
[0107]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0108]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0109]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0110]第26種組合:
[0111]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0112]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0113]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0114]第27種組合:
[0115]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0116]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0117]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0118]第28種組合:
[0119]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.4 所示的 DNA 序列；
[0120]Primer-R 為序 列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0121]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0122]第29種組合:
[0123]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0124]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0125]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0126]第30種組合:
[0127]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0128]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.6 所示的 DNA 序列；
[0129]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0130]第31種組合:
[0131]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0132]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0133]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.10 所示的 DNA 序列；
[0134]第32種組合:
[0135]Primer-F 為序列表中 SEQ ID N0.2 和 SEQ ID N0.5 所示的 DNA 序列；
[0136]Primer-R 為序列表中 SEQ ID N0.3 和 SEQ ID N0.7 所示的 DNA 序列；
[0137]Probe 為序列表中 SEQ ID N0.9 和 SEQ ID N0.11 所示的 DNA 序列；
[0138]其中，所述的人類藥物致聾基因突變mtDNA-ΜΙ為線粒體DNA的1494C>T突變；所述的人類藥物致聾基因突變mtDNA-M2為線粒體DNA的1555A>G突變。[0139]含有上述的用于人類藥物致聾基因突變mtDNA-ΜΙ和mtDNA_M2篩查的引物和探針的試劑盒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0140]一種用于人類藥物致聾基因突變mtDNA-ΜΙ和mtDNA_M2篩查的引物和探針的使用方法，包括如下步驟:
[0141]步驟1:樣品的DNA提??；
[0142]步驟2:熒光PCR擴(kuò)增:
[0143]PCR體系如下:
[0144]
【權(quán)利要求】
1.一種用于人類藥物致聾基因突變HitDNA-Ml和mtDNA_M2篩查的引物和探針，其特征在于，所述的引物和探針如下: 所述的引物為Primer-F和Primer-R,所述的探針為Probe ;Primer_F、Primer-R和Probe選自如下任意一種組合: 第I種組合: Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.4所示的DNA序列； Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列； Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.10所示的DNA序列； 第2種組合: Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.4所示的DNA序列； Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列； Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.11所示的DNA序列； 第3種組合: Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.4所示的DNA序列； Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.7所示的DNA序列； Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.10所示的DNA序列； 第4種組合: Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.4所示的DNA序列； Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.7所示的DNA序列； Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.11所示的DNA序列； 第5種組合: Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.5所示的DNA序列； Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列； Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.10所示的DNA序列； 第6種組合: Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.5所示的DNA序列； Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列； Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.11所示的DNA序列； 第7種組合: Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.5所示的DNA序列； Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.7所示的DNA序列； Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.10所示的DNA序列； 第8種組合: Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.5所示的DNA序列； Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.7所示的DNA序列； Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.11所示的DNA序列； 第9種組合: Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.4所示的DNA序列； Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.9和SEQ IDN0.10所示的DNA序列；第10種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.4所示的DNA序列；Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.9和SEQ IDN0.11所示的DNA序列；第11種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.4所示的DNA序列；Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.7所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.9和SEQ IDN0.10所示的DNA序列；第12種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.4所示的DNA序列；Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.7所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.9和SEQ IDN0.11所示的DNA序列；第13種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.5所示的DNA序列；Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.9和SEQ IDN0.10所示的DNA序列；第14種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.5所示的DNA序列；Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.9和SEQ IDN0.11所示的DNA序列；第15種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.5所示的DNA序列；Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.7所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.9和SEQ IDN0.10所示的DNA序列；第16種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.5所示的DNA序列；Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.7所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.9和SEQ IDN0.11所示的DNA序列；第17種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4所示的DNA序列；Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ IDN0.10所示的DNA序列；第18種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4所示的DNA序列；Primer-R為序列表中SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.6所示的DNA序列；Probe為序列表中SEQ ID N0.8和SEQ IDN0.11所示的DNA序列；第19種組合:Primer-F為序列表中SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.4所示的DNA序列；
2.用于人類藥物致聾基因突變mtDNA-Ml和mtDNA-M2篩查的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒含有權(quán)利要求1所述的用于人類藥物致聾基因突變mtDNA-Ml和mtDNA-M2篩查的引物和探針； 其中，所述的人類藥物致聾基因突變mtDNA-Ml為線粒體DNA的1494C>T突變；所述的人類藥物致聾基因突變mtDNA-M2為線粒體DNA的1555A>G突變。
3.一種用于人類藥物致聾基因突變mtDNA-Ml和mtDNA-M2篩查的引物和探針的使用方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟1:樣品的DNA提取； 步驟2:熒光PCR擴(kuò)增: PCR體系如下:
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于人類藥物致聾基因突變mtDNA-ΜΙ和mtDNA_M2篩查的引物和探針的使用方法，其特征在于，步驟I中所述的樣品為人全血樣品。
【文檔編號】C12Q1/68GK103937875SQ201410026187
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年1月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月21日
【發(fā)明者】曾驥孟, 莊建立, 劉斌, 賴金嬌 申請人:芮寶生物醫(yī)藥科技（廈門）有限公司