一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，屬于微生物發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】。它包括：釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子的制備，黑曲霉種子的制備，菌渣培養(yǎng)基制備和酵母浸膏的制備幾個(gè)步驟，其中酵母浸膏的制備是將制備好的幾種菌進(jìn)行接種培養(yǎng)，然后再按質(zhì)量百分比為0.03％的量加入酵母抽提酶，水解16-24h，升溫到80℃使酶失活，待其冷卻后，4000r／min離心10min，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為15-20％，即為酵母浸膏。該方法生產(chǎn)成本低、制備工藝簡(jiǎn)單獨(dú)特、生產(chǎn)周期短，并且可使四環(huán)素菌渣得以高值轉(zhuǎn)化。
【專利說(shuō)明】—種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種微生物發(fā)酵領(lǐng)域，尤其是涉及一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]酵母浸膏是以酵母為原料，利用現(xiàn)代生物技術(shù)通過(guò)酵母細(xì)胞自溶破壁和酵母自身的酶系對(duì)酵母細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行水解或以酶制劑進(jìn)行水解，再經(jīng)一系列的抽提、濃縮等工序得到的粉狀或膏狀或液體的產(chǎn)品，含有豐富的氨基酸、功能性多肽、抗衰老活性因子、膳食纖維和甘露糖，還含有人體不可缺少的核酸、核苷酸和鈣，富含B族維生素及磷、鎂、錳、鋅、硒等多種微量元素。酵母浸膏被廣泛應(yīng)用于生物發(fā)酵、生物工程、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域，具體地說(shuō)，可廣泛用于發(fā)酵法生產(chǎn)抗生素、氨基酸、有機(jī)酸、酶制劑、生物防腐劑、生物材料、維生素、透明質(zhì)酸等的培養(yǎng)基配制以及生物工程、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。我國(guó)目前生產(chǎn)酵母浸膏的廠家較少，但市場(chǎng)需求量較大。由于酵母浸膏生產(chǎn)原料主要是以小麥等糧食作物為原料，價(jià)格偏高，因而造成酵母浸膏的生產(chǎn)成本還處在一個(gè)比較高的水平，難以達(dá)到實(shí)際且實(shí)惠的應(yīng)用。
[0003]四環(huán)素菌渣是發(fā)酵法生產(chǎn)四環(huán)素過(guò)程中，發(fā)酵醪液進(jìn)行固液分離時(shí)形成的菌餅部分，由于其蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)等養(yǎng)分含量豐富，是一種良好的可再用資源。目前還沒(méi)有一種能利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是:提供一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法。
[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是: [0006]一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于:包括如下步驟:
[0007]S1:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子的制備:
[0008]a.種子活化培養(yǎng):分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環(huán)，分別接入種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培養(yǎng)36~48h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ；
[0009]b.一級(jí)種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質(zhì)量百分比為I~5%的接種量，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培養(yǎng)36~48h,可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子;
[0010]C.二級(jí)種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子按質(zhì)量百分比為I~5%的接種量 ，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，30~35°C，100~140r/min下好氧培養(yǎng)36~48h,可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子。[0011]S2:黑曲霉種子的制備:
[0012](I)黑曲霉活化培養(yǎng):從黑曲霉保存管中挑取一環(huán)，在霉菌活化培養(yǎng)基制備的斜面上劃上斜線，在溫度30~35°C、濕度75~80%下好氧培養(yǎng)60_72h，可得到黑曲霉斜面孢子;
[0013](2)黑曲霉擴(kuò)大培養(yǎng):將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質(zhì)量百分比為1-5%的接種量，接種于霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基中，在溫度30-35°C、濕度75-80%下好氧培養(yǎng)96_120h，可得到黑曲霉種子。
[0014]S3:菌渣培養(yǎng)基制備:
[0015]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養(yǎng)基:水分含量為80~85%的降解處理四環(huán)素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸銨0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0016]水分含量為80-85%的降解處理四環(huán)素后的菌渣的制備方法如下:取四環(huán)素新鮮菌渣1001^，1211:濕熱滅菌20-301^11 ;然后加入質(zhì)量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢鐸h ;再加入草酸，充分?jǐn)嚢?0min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調(diào)節(jié)為80-85 %。
[0017]S4:酵母浸膏的制備:
[0018]將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子以及步驟S2(2)中制備的黑曲霉種子，分別按質(zhì)量百分比為I~10%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養(yǎng)基中，30~35°C，40-80r / min下好氧培養(yǎng)3~5d，然后調(diào)節(jié)pH為6.0~7.0，在55°C水浴中按質(zhì)量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解16-24h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r/min，離心lOmin，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為15_20%，即為酵母浸膏。
[0019]所述種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基、霉菌活`化培養(yǎng)基，霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基的制備方法分別是:
[0020]I)種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0021]2)霉菌活化培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養(yǎng)基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘,過(guò)濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可；
[0022]3)霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基:麩皮1000g,水 1000ml。
[0023]優(yōu)選的:所述步驟S4中的接種量為5%。
[0024]優(yōu)選的:所述步驟Slb中的接種量為3%。
[0025]優(yōu)選的:所述步驟Slc中的接種量為3%。
[0026]優(yōu)選的:所述步驟S2 (2)中的接種量為3%。
[0027]采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果為:
[0028]I)制備工藝簡(jiǎn)單獨(dú)特:本發(fā)明提供的一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，包括種子制備、菌渣培養(yǎng)基制備，然后將制備的種子，按質(zhì)量百分比為I~10%的接種量接種于菌渣培養(yǎng)基中，經(jīng)好氧發(fā)酵、酶解、離心、減壓濃縮等步驟，即可得酵母
浸膏；[0029]2)生產(chǎn)的酵母浸膏營(yíng)養(yǎng)豐富:利用本發(fā)明提供的方法制得的酵母浸膏具有較高的蛋白質(zhì)、氨基酸和核苷酸含量。本發(fā)明產(chǎn)品的真蛋白，氨基酸態(tài)氮及核苷酸含量相對(duì)較高，同時(shí)氨基酸種類較多，不僅適用于生物發(fā)酵行業(yè)，而且還適用于生物工程、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域；
[0030]3)提高菌渣的經(jīng)濟(jì)附加值:本發(fā)明在原料的選擇上主要是以降解處理四環(huán)素后的菌渣為主，一方面，消除了因殘留的四環(huán)素對(duì)發(fā)酵過(guò)程中微生物及其后續(xù)酵母浸膏產(chǎn)品質(zhì)量的影響，另一方面，可實(shí)現(xiàn)菌渣的高值轉(zhuǎn)化；
[0031]4)生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量高:本發(fā)明針對(duì)目前降解處理四環(huán)素后的菌渣的利用現(xiàn)狀，以選育優(yōu)化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母、EM原露為酵母浸膏生產(chǎn)菌株，所產(chǎn)生的酵母浸膏中蛋白質(zhì)、氨基酸與核苷酸含量較高，其中氨基酸種類較多，同時(shí)還提高菌渣資源化利用的經(jīng)濟(jì)附加值，本發(fā)明酵母浸膏中水分含量15~20%，銨鹽含量1.0~2.4%,pH6.0~7.0，真蛋白含量35~45 %，氨基酸態(tài)氮含量4.5~7.5 %，核苷酸含量8~14 μ g/g ;
[0032]5)采用本發(fā)明提供的方法得到的酵母浸膏，可以達(dá)到以下指標(biāo):
[0033]1.感官指標(biāo):棕黃色膏狀，有特殊的酵母香味。
[0034]2.衛(wèi)生指標(biāo):總菌落，酵母浸膏為陰性；重金屬未檢出。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0035]附圖1是本發(fā)明菌渣中殘留四環(huán)素降解處理前的高效液相色譜圖；
[0036]附圖2是本發(fā)明菌渣中殘留四環(huán)素降解處理后的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0037]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。
[0038]實(shí)施例1:
[0039]一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，包括如下步驟:
[0040]S1:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子的制備:
[0041]a.種子活化培養(yǎng):分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環(huán)，分別接入種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，30°C，IOOr / min下好氧培養(yǎng)48h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ；
[0042]b.一級(jí)種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質(zhì)量百分比為1%的接種量，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，30°C，100r / min下好氧培養(yǎng)48h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子；
[0043]c.二級(jí)種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子按質(zhì)量百分比為1%的接種量，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，30°C，100r / min下好氧培養(yǎng)48h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子；
[0044]S2:黑曲霉種子的制備:
[0045](I)黑曲霉活化培養(yǎng):從黑曲霉保存管中挑取一環(huán)，在霉菌活化培養(yǎng)基制備的斜面上劃上斜線，在溫度30°C、濕度75%下好氧培養(yǎng)72h，可得到黑曲霉斜面孢子；
[0046](2)黑曲霉擴(kuò)大培養(yǎng):將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質(zhì)量百分比為I %的接種量，接種于霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基中，在溫度30°C、濕度75%下好氧培養(yǎng)120h，可得到黑曲霉種子；
[0047]S3:菌渣培養(yǎng)基制備:
[0048]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養(yǎng)基:水分含量為80~85%的降解處理四環(huán)素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸銨0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0049]水分含量為80~85%的降解處理四環(huán)素后的菌渣的制備方法如下:取四環(huán)素新鮮菌渣100kg，121°C濕熱滅菌20~30min;然后加入質(zhì)量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢鐸h ;再加入草酸，充分?jǐn)嚢?0min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調(diào)節(jié)為80-85% ;對(duì)菌渣中殘留四環(huán)素降解處理前后進(jìn)行高效液相色譜分析可知，降解處理四環(huán)素后的菌渣，經(jīng)高效液相色譜法未檢出殘留四環(huán)素的存在；如附圖1和2所示。
[0050]S4:酵母浸膏的制備:
[0051]將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子以及步驟S2(2)中制備的黑曲霉種子，分別按質(zhì)量百分比為2%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養(yǎng)基中，30°C，40r / min下好氧培養(yǎng)5d，然后調(diào)節(jié)pH為6.0，在55°C水浴中按質(zhì)量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解16h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r / min,離心lOmin，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為15-20%，即為酵母浸膏。
[0052]經(jīng)測(cè)定:酵母浸膏中水分含量19%，銨鹽含量2.2%，pH6.4，真蛋白含量41.8%，氨基酸態(tài)氮含量6.5%，核苷酸含量10.2 ng/g。
[0053]其中:
[0054]1)種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0055]2)霉菌活化培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養(yǎng)基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘，過(guò)濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可；
[0056]3)霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基:麩皮1000g,水 1000ml。
[0057]實(shí)施例2:
[0058]一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，包括如下步驟:
[0059]S1:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子的制備:
[0060]a.種子活化培養(yǎng):分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環(huán)，分別接入種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，33°C，120r / min下好氧培養(yǎng)42h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ；
[0061]b.一級(jí)種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質(zhì)量百分比為3%的接種量，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，33°C，120r / min下好氧培養(yǎng)42h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子；
[0062]c.二級(jí)種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子按質(zhì)量百分比為3%的接種量，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，33°C，120r / min下好氧培養(yǎng)42h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子；
[0063]S2:黑曲霉種子的制備:[0064](I)黑曲霉活化培養(yǎng):從黑曲霉保存管中挑取一環(huán)，在霉菌活化培養(yǎng)基制備的斜面上劃上斜線，在溫度33°C、濕度78%下好氧培養(yǎng)66h，可得到黑曲霉斜面孢子；
[0065](2)黑曲霉擴(kuò)大培養(yǎng):將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質(zhì)量百分比為3%的接種量，接種于霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基中，在溫度33°C、濕度78%下好氧培養(yǎng)108h，可得到黑曲霉種子；
[0066]S3:菌渣培養(yǎng)基制備:[0067]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養(yǎng)基:水分含量為80-85%的降解處理四環(huán)素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸銨0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0068]水分含量為80-85%的降解處理四環(huán)素后的菌渣的制備方法如下:取四環(huán)素新鮮菌渣100kg，12rC濕熱滅菌20-30min ;然后加入質(zhì)量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢鐸h ;再加入草酸，充分?jǐn)嚢?0min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調(diào)節(jié)為80-85% ;對(duì)菌渣中殘留四環(huán)素降解處理前后進(jìn)行高效液相色譜分析可知，降解處理四環(huán)素后的菌渣，經(jīng)高效液相色譜法未檢出殘留四環(huán)素的存在；如附圖1和2所示。
[0069]S4:酵母浸膏的制備:
[0070]將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子以及步驟
S2(2)中制備的黑曲霉種子，分別按質(zhì)量百分比為5%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養(yǎng)基中，33°C，60r / min下好氧培養(yǎng)4d，然后調(diào)節(jié)pH為6.5，在55°C水浴中按質(zhì)量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解20h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r / min,離心lOmin，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為15-20%，即為酵母浸膏。
[0071]經(jīng)測(cè)定:酵母浸膏中水分含量18%，銨鹽含量2.1%, pH6.5，真蛋白含量42.6%，氨基酸態(tài)氮含量6.9%,核苷酸含量11.3 μ g / go
[0072]其中:
[0073]I)種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0074]2)霉菌活化培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養(yǎng)基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘,過(guò)濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可；
[0075]3)霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基:麩皮1000g,水 1000ml。
[0076]實(shí)施例3:
[0077]一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，包括如下步驟:
[0078]S1:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子的制備:
[0079]a.種子活化培養(yǎng):分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環(huán)，分別接入種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，35°C，140r/min下好氧培養(yǎng)36h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ；
[0080]b.一級(jí)種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質(zhì)量百分比為5%的接種量，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，35°C，140r / min下好氧培養(yǎng)36h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子；[0081]c.二級(jí)種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子按質(zhì)量百分比為5%的接種量，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，35°C，140r / min下好氧培養(yǎng)36h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子；
[0082]S2:黑曲霉種子的制備:
[0083](1)黑曲霉活化培養(yǎng):從黑曲霉保存管中挑取一環(huán)，在霉菌活化培養(yǎng)基制備的斜面上劃上斜線，在溫度35°C、濕度80%下好氧培養(yǎng)60h，可得到黑曲霉斜面孢子；
[0084](2)黑曲霉擴(kuò)大培養(yǎng):將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用PH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質(zhì)量百分比為5%的接種量，接種于霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基中，在溫度35°C、濕度80%下好氧培養(yǎng)96h，可得到黑曲霉種子；
[0085]S3:菌渣培養(yǎng)基制備:
[0086]按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養(yǎng)基:水分含量為80-85%的降解處理四環(huán)素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸銨0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；
[0087]水分含量為80-85%的降解處理四環(huán)素后的菌渣的制備方法如下:取四環(huán)素新鮮菌渣100kg，12rC濕熱滅菌20-30min ;然后加入質(zhì)量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢鐸h ;再加入草酸，充分?jǐn)嚢?0min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調(diào)節(jié)為80-85% ;對(duì)菌渣中殘留四環(huán)素降解處理前后進(jìn)行高效液相色譜分析可知，降解處理四環(huán)素后的菌渣，經(jīng)高效液相色譜法未檢出殘留四環(huán)素的存在；如附圖1和2所示。
[0088]S4:酵母浸膏的制備:
[0089]將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子以及步驟S2(2)中制備的黑曲霉種子，分別按質(zhì)量百分比為8%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養(yǎng)基中，35°C，80r / min下好氧培養(yǎng)3d，然后調(diào)節(jié)pH為7.0，在55°C水浴中按質(zhì)量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解24h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r / min,離心lOmin，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為15-20%，即為酵母浸膏。
[0090]經(jīng)測(cè)定:酵母浸膏中水分含量17%，銨鹽含量2.0%，pH6.5，真蛋白含量40.2%，氨基酸態(tài)氮含量6.2%，核苷酸含量9.6 μ g/g。
[0091]其中:
[0092]I)種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ；
[0093]2)霉菌活化培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養(yǎng)基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘,過(guò)濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可；
[0094]3)霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基:麩皮1000g,水 1000ml。
[0095]上述酵母抽提酶是由木瓜蛋白酶和5’ -磷酸二酯酶組成，其中木瓜蛋白酶活力900000U / g，5，-磷酸二酯酶活力 120U/g。
[0096]采用本發(fā)明提供的方法得到的酵母浸膏，可以達(dá)到以下指標(biāo):
[0097]1.感官指標(biāo):棕黃色膏狀，有特殊的酵母香味。
[0098]2.衛(wèi)生指標(biāo):總菌落，酵母浸膏為陰性；重金屬未檢出。[0099]本發(fā)明生產(chǎn)酵母浸膏所用菌種是釀酒酵母(Saccharomyces CerevisiaeCGMCC2.1418)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis CGMCC2.587)、EM 原露、黑曲霉(Aspergillus niger CGMCC3.4628),均保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。
[0100]本發(fā)明不局限于上述具體的實(shí)施方式，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員從上述構(gòu)思出發(fā)，不經(jīng)過(guò)創(chuàng)造性的勞動(dòng)，所做出的種種變換，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于:包括如下步驟: 51:釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子的制備: a.種子活化培養(yǎng):分別從釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露保存管中挑取一環(huán)，分別接入種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培養(yǎng)36~48h，可分別得到活化的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子；所述種子濃度為IO7CFU / mL ； b.一級(jí)種子制備:將上述步驟a制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露種子按質(zhì)量百分比為1-5%的接種量，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，30~35°C，100~140r /min下好氧培養(yǎng)36~48h，可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子； c.二級(jí)種子制備:將上述步驟b制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露一級(jí)種子按質(zhì)量百分比為I~5%的接種量，分別接種于種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基中，30~35°C，100~140r / min下好氧培養(yǎng)36~48h,可分別得到釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子。 52:黑曲霉種子的制備: (1)黑曲霉活化培養(yǎng):從黑曲霉保存管中挑取一環(huán)，在霉菌活化培養(yǎng)基制備的斜面上劃上斜線，在溫度30~35°C、濕度75~80%下好氧培養(yǎng)60~72h，可得到黑曲霉斜面孢子; (2)黑曲霉擴(kuò)大培養(yǎng):將上述步驟(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用pH7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗下，取孢子懸液按質(zhì)量百分比為I~5%的接種量，接種于霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基中，在溫度30~35°C、濕度75~80%下好氧培養(yǎng)96~120h，可得到黑曲霉種子。 53:菌渣培養(yǎng)基制備: 按下述重量比的原料混合即可得菌渣培養(yǎng)基:水分含量為80~85%的降解處理四環(huán)素后的菌洛100kg,玉米淀粉1.4kg,硫酸銨0.6kg,葡萄糖0.5kg,充分混合； 水分含量為80~85%的降解處理四環(huán)素后的菌渣的制備方法如下:取四環(huán)素新鮮菌渣100kg，12rC濕熱滅菌20~30min;然后加入質(zhì)量百分比為I %的有效氯為10%的次氯酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢鐸h ;再加入草酸，充分?jǐn)嚢?0min ;所述次氯酸鈉與草酸的摩爾比為1:1，最后將水分含量調(diào)節(jié)為80-85 %。 54:酵母浸膏的制備: 將上述步驟Slc中制備的釀酒酵母、熱帶假絲酵母和EM原露二級(jí)種子以及步驟S2 (2)中制備的黑曲霉種子，分別按質(zhì)量百分比為I~10%接種量接入上述步驟S3制備的菌渣培養(yǎng)基中，30~35°C，40~80r / min下好氧培養(yǎng)3~5d，然后調(diào)節(jié)pH為6.0-7.0，在55°C水浴中按質(zhì)量百分比為0.03%的量加入酵母抽提酶，水解16~24h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，4000r / min，離心lOmin，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為15~20%，即為酵母浸膏。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于: 所述種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基、霉菌活化培養(yǎng)基，霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基的制備方法分別是: 1)種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料混合即可得種子活化擴(kuò)大培養(yǎng)基:蛋白胨20g，酵母浸膏IOg,葡萄糖20g,水1000ml ； 2)霉菌活化培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培養(yǎng)基:取新鮮去皮土豆200g,切碎至粒度小于5mmX5mmX5mm,加1000ml水煮沸20分鐘,過(guò)濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，瓊脂20g即可； 3)霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基制備:按下述重量比的原料配制即可得霉菌擴(kuò)大培養(yǎng)基:麩皮1000g,水 1000ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步驟S4中的接種量為5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步驟Slb中的接種量為3 %。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步驟Slc中的接種量為3%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用降解處理四環(huán)素后的菌渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于:所述步驟S2(2)中的接種量為3%。
【文檔編號(hào)】C12R1/865GK103555583SQ201310525034
【公開(kāi)日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月22日
【發(fā)明者】馬玉龍, 馬凌, 王敏, 馬琳 申請(qǐng)人:寧夏大學(xué)