用于鑒定小麥面粉色澤相關(guān)基因的pcr體系的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于鑒定或輔助鑒定面粉色澤相關(guān)基因的PCR體系及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的PCR體系中的引物對(duì)組為如下任一：1）引物對(duì)組A、引物對(duì)組B和引物對(duì)組C；2）引物對(duì)組A和引物對(duì)組C；3）引物對(duì)組C；引物對(duì)組A由引物對(duì)1（序列1和序列2）、引物對(duì)2（序列3和序列4）和引物對(duì)3（序列5和序列6）組成；引物對(duì)組B由引物對(duì)4（序列7和序列8）和引物對(duì)5（序列9和序列10）組成；引物對(duì)組C由引物對(duì)6（序列11和序列12）、引物對(duì)7（序列13和序列14）和引物對(duì)8（序列15和序列16）組成。這些引物對(duì)組各引物間不存在抑制和錯(cuò)配，實(shí)現(xiàn)同一溫度一次PCR完成一組基因的鑒別，且結(jié)果可靠、特異性強(qiáng)。本發(fā)明為小麥色澤品質(zhì)育種提供參考。
【專利說(shuō)明】用于鑒定小麥面粉色澤相關(guān)基因的PCR體系【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于鑒定或輔助鑒定面粉色澤相關(guān)基因的PCR體系及其應(yīng)用，特別涉及一種用于鑒定或輔助鑒定待測(cè)新疆冬小麥的面粉色澤相關(guān)基因如Psy-AUTaLox-Bl和Ppo-Dl的多重PCR引物對(duì)組、試劑盒及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]小麥面制食品作為我國(guó)人民最重要的主食之一，為我國(guó)以面食為主地區(qū)的人民提供50-80%以上的能量來(lái)源。隨著社會(huì)生活水平不斷提高，人們對(duì)小麥面制品品質(zhì)的要求越來(lái)越高，品質(zhì)育種也越來(lái)越受到重視。中國(guó)作為小麥最大的生產(chǎn)國(guó)和消費(fèi)國(guó)，每年僅用來(lái)生產(chǎn)面條的小麥量約占小麥總消費(fèi)量的40%。而面條、饅頭、餃子等我國(guó)傳統(tǒng)的蒸煮類面制食品，色澤越白越受到我國(guó)消費(fèi)者青睞。因此，在我國(guó)傳統(tǒng)面制品的感官評(píng)價(jià)體系中，面制品的色澤占很大的比例，越白評(píng)分越高。然而，目前我國(guó)主栽小麥品種的面粉平均白度較低(74.8)，不能滿足市場(chǎng)和消費(fèi)者對(duì)面粉白度(80.0以上)的要求。在2005年前，大多數(shù)面粉廠為滿足消費(fèi)者對(duì)面粉白度的要求，向面粉中添加過(guò)氧化苯甲酰(ΒΡ0)。但BPO會(huì)破壞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)且對(duì)人類健康構(gòu)成威脅，在國(guó)家最新修訂的小麥粉標(biāo)準(zhǔn)中，已明確規(guī)定禁止使用ΒΡ0。因此制訂育種目標(biāo)，選育出自然白的小麥具有重要意義。同時(shí)，亮黃色的面粉也有一定的消費(fèi)量，如黃堿面條、烏冬面、意大利面等也很受歡迎。因此，根據(jù)不同的加工目的，分別需要選育適合加工高白度或亮黃色面粉的小麥新品種。
[0003]除了環(huán)境、增白劑、加工方式和栽培措施等外，小麥面粉及面制品顏色的形成主要受色素類物質(zhì)和氧化還原酶類等遺傳物質(zhì)的影響。色素類物質(zhì)主要包括黃色素(Yellowpigment, YP)和棕色素(Brown pigment),黃色素主要由類胡蘿卜素(Carotenoid)和類黃酮(Flavonoid)組成,面粉中的氧化酶類主要包括多酹氧化酶(Polyphenol oxidase, ΡΡ0)、脂肪氧化酶(Lipoxygenase, L0X)和過(guò)氧化物酶(Peroxidase, POD)。YP 含量、LOX 及 PPO活性對(duì)面粉及面制品的色澤有重要影響。YP含量與面團(tuán)黃度的相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.8-0.9 ；L0X可催化多不飽和脂肪酸加氧形成過(guò)氧化物，反應(yīng)所釋放的氧自由基進(jìn)一步氧化色素分子，使面粉變白；ΡΡ0在氧分子的參與下可催化單酚類物質(zhì)最終變?yōu)檠鹾硝珊稚镔|(zhì)，決定面粉及面制品加工和貯存過(guò)程中色澤褐變的50-70%。當(dāng)需要自然白小麥時(shí)，應(yīng)選擇含低YP含量基因型、高LOX活性基因型及低PPO活性基因型的小麥品種(系)。
[0004]多重PCR是一種高效、低成本的檢測(cè)方法，已成為研究的熱點(diǎn)。雖然已經(jīng)報(bào)道了數(shù)套與小麥面粉色澤基因相關(guān)的多重PCR體系，但僅涉及到PPO活性基因的Ppo-Al和Ppo-Dl位點(diǎn)，或PSY活性基因的Psy-Al位點(diǎn)，還未見(jiàn)到檢測(cè)PSY活性基因的Psy-Bl位點(diǎn)、ZDS活性基因的TaZds-Al和TaZds-Dl位點(diǎn)，以及LOX活性基因TaLox-Bl位點(diǎn)的多重PCR體系的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種用于鑒定或輔助鑒定面粉色澤相關(guān)基因的PCR體系及其應(yīng)用，特別涉及一種用于鑒定或輔助鑒定待測(cè)新疆冬小麥的面粉色澤相關(guān)基因如Psy-Al、TaLox-Bl和Ppo-Dl的多重PCR引物對(duì)組、試劑盒及其應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明所提供的用于鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥拉面品質(zhì)性狀相關(guān)基因的多重PCR引物對(duì)組為如下al)或a2)或a3)的引物對(duì)組:
[0007]a I)由引物對(duì)組A、引物對(duì)組B和引物對(duì)組C組成的引物對(duì)組；
[0008]a2 )由引物對(duì)組A和引物對(duì)C組成的弓丨物對(duì)組；
[0009]a3)引物對(duì)組C;
[0010]所述面粉色澤相關(guān)基因?yàn)镻sy-Bl基因、TaZds-Al基因、TaZds-Dl基因、Ppo-Al基因、Psy-Al基因、TaLox-Bl基因和Ρρο-Dl基因。
[0011]所述引物對(duì)組A由特異于所述Psy-Bl基因的兩個(gè)引物對(duì)，和特異于所述TaZds-Al基因的一個(gè)引物對(duì)組成；具體的，所述特異于所述Psy-Bl基因的兩個(gè)引物對(duì)分別為序列表中序列I和序列2所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)1，以及序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)2 ;所述特異于所述TaZds-Al基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)3 ；
[0012]所述引物對(duì)組B由特異于所述TaZds-Dl基因的一個(gè)引物對(duì)，和特異于所述Ppo-Al基因的一個(gè)引物對(duì)組成；具體的，所述特異于所述TaZds-Dl基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)4 ;所述特異于所述Ppo-Al基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)5 ；
[0013]所述引物對(duì)組C由特異于所述Psy-Al基因的一個(gè)引物對(duì)、特異于所述TaLox-Bl基因的一個(gè)引物對(duì)，和特異于所述Ppo-Dl基因的一個(gè)引物對(duì)組成；具體的，所述特異于所述Psy-Al基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列11和序列12所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)6 ;所述特異于所述TaLox-Bl基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列13和序列14所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)7 ;所述特異于所述Ppo-Dl基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列15和序列16所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)8。
[0014]其中，序列I由21個(gè)核苷酸組成；序列2由20個(gè)核苷酸組成；序列3由21個(gè)核苷酸組成；序列4由20個(gè)核苷酸組成；序列5由21個(gè)核苷酸組成；序列6由24個(gè)核苷酸組成；序列7由21個(gè)核苷酸組成；序列8由23個(gè)核苷酸組成；序列9由21個(gè)核苷酸組成；序列10由20個(gè)核苷酸組成；序列11由20個(gè)核苷酸組成；序列12由22個(gè)核苷酸組成；序列13由23個(gè)核苷酸組成；序列14由16個(gè)核苷酸組成；序列15由18個(gè)核苷酸組成；序列16由20個(gè)核苷酸組成。
[0015]本發(fā)明中，所述Psy-Bl基因涉及三個(gè)等位基因，分別是Psy-Bla、Psy-Blb和Psy-Blc ;所述TaZds-Al基因涉及兩個(gè)等位基因，分別是TaZds-Ala和TaZds-Alb ;所述TaZds-Dl基因涉及兩個(gè)等位基因，分別是TaZds-Dla和TaZds-Dlb ;所述Ppo-Al基因涉及兩個(gè)等位基因，分別是Ppo-Ala和Ppo-Alb ;所述Psy-Al基因涉及三個(gè)等位基因，分別是Psy-Ala,Psy-Alb和Psy-Alc ;所述TaLox-Bl基因涉及兩個(gè)等位基因，分別是TaLox-Bla和TaLox-Blb ;所述Ppo-Dl基因涉及兩個(gè)等位基因，分別是Ppo-Dla和Ppo-Dlb。
[0016]所述引物對(duì)組A中每個(gè)引物對(duì)的兩條引物在PCR反應(yīng)體系中等量使用，且所述引物對(duì)I，所述引物對(duì)2和所述引物對(duì)3在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為6:6:5 ;所述引物對(duì)組B中每個(gè)引物對(duì)的兩條引物在PCR反應(yīng)體系中等量使用，且所述引物對(duì)4和所述引物對(duì)5在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為12:6 ;所述引物對(duì)組C中每個(gè)引物對(duì)的兩條引物在PCR反應(yīng)體系中等量使用，且所述引物對(duì)6、所述引物對(duì)7和所述引物對(duì)8在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為 5:10:10。
[0017]具體的，所述引物對(duì)組A中，所述引物對(duì)I中的序列I和序列2所示的兩條DNA單鏈在所述PCR反應(yīng)體系中的終濃度均為0.3 μ M ;所述引物對(duì)2中的序列3和序列4所不的兩條DNA單鏈在所述PCR反應(yīng)體系中的終濃度均為0.3 μ M ;所述引物對(duì)3中的序列5和序列6所示的兩條DNA單鏈在所述PCR反應(yīng)體系中的終濃度均為0.25 μ Μ。所述引物對(duì)組B中，所述引物對(duì)4中的序列7和序列8所不的兩條DNA單鏈在所述PCR反應(yīng)體系中的終濃度均為0.6 μ M ;所述引物對(duì)5中的序列9和序列10所示的兩條DNA單鏈在所述PCR反應(yīng)體系中的終濃度均為0.3μ M ;所述引物對(duì)組C中，所述引物對(duì)6中的序列11和序列12所示的兩條DNA單鏈在所述PCR反應(yīng)體系中的終濃度均為0.25 μ M ;所述引物對(duì)7中的序列13和序列14所示的兩條DNA單鏈在所述PCR反應(yīng)體系中的終濃度均為0.5μ M ;所述引物對(duì)8中的序列15和序列16所示的兩條DNA單鏈在所述PCR反應(yīng)體系中的終濃度均為0.5 μ Μ。
[0018]含有所述引物對(duì)組的試劑盒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0019]所述引物對(duì)組的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0020]所述引物對(duì)組的制備方法，具體可包括將所述引物對(duì)組中各引物對(duì)的所述兩條單鏈DNA分別單獨(dú)包裝的步驟。
[0021]所述試劑盒的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0022]所述試劑盒的制備方法，具體可包括如下步驟:將所述引物對(duì)組中各引物對(duì)的所述兩條單鏈DNA分別單獨(dú)包裝后,與下述物質(zhì)中的至少一種包裝在同一試劑盒內(nèi):PCR反應(yīng)緩沖液、DNA聚合酶和4種dNTP。
[0023]下述al)或a2)或a3)的方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍:
[0024]al)鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥含有Psy-Bla、Psy_Blb和Psy-Blc這三種基因中哪一種，含有TaZds-Ala和TaZds-Alb這兩種基因中哪一種，含有TaZds-Dla和TaZds-Dlb這兩種基因中哪一種，含有Ppo-Ala基因和Ppo-Alb基因這兩種基因中哪一種；含有Psy-Ala或Psy-Alc基因還是含有Psy-Alb基因，含有TaLox-Bla和TaLox-Blb這兩種基因中哪一種，以及含有Ppo-Dla和Ppo-Dlb這兩種基因中哪一種；
[0025]a2)鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥含有Psy-Bla、Psy_Blb和Psy-Blc這三種基因中哪一種，以及含有TaZds-Ala和TaZds-Alb這兩種基因中哪一種；含有Psy-Ala或Psy-Alc基因還是含有Psy-Alb基因，含有TaLox-Bla和TaLox-Blb這兩種基因中哪一種，以及含有Ppo-Dla和Ppo-Dlb這兩種基因中哪一種；
[0026]a3)鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥含有Psy-Ala或Psy-Alc基因還是含有Psy-Alb基因，含有TaLox-Bla和TaLox-Blb這兩種基因中哪一種，以及含有Ρρο-Dla和Ρρο-Dlb這兩種基因中哪一種；
[0027]所述al)的方法包括下述(I)和(2)的步驟:
[0028]所述(I)為如下bl)、b2)和 b3):
[0029]bl)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)組中的所述引物對(duì)組A進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為59°C ；
[0030]在本發(fā)明中，所述PCR反應(yīng)的程序具體為:95°C預(yù)變性5min ;95°C變性45s，59°C退火45s，72°C延伸30s，擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin ;4°C，保溫結(jié)束。
[0031]b2)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)組中所述引物對(duì)組B進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為62°C ；
[0032]在本發(fā)明中，所述PCR反應(yīng)的程序具體為:95°C預(yù)變性5min ;95°C變性30s，62°C退火30s，72°C延伸70s，擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行34個(gè)循環(huán)；72°C延伸5min ;4°C，保溫結(jié)束。
[0033]b3)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)組中所述引物對(duì)組C進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為64°C ；
[0034]在本發(fā)明中，所述PCR反應(yīng)的程序具體為:95°C預(yù)變性5min ;94°C變性lmin，64°C退火lmin，72°C延伸90s，擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行36個(gè)循環(huán)；72°C延伸8min ;4°C，保溫結(jié)束。
[0035](2)檢測(cè)步驟(1)得到的PCR產(chǎn)物的大小，按照如下方法根據(jù)PCR產(chǎn)物確定所述待測(cè)小麥含有Psy-Bla、Psy-Blb和Psy-Blc這三種基因中哪一種，含有TaZds-Ala和TaZds-Alb這兩種基因中哪一種，含有TaZds-Dla和TaZds-Dlb這兩種基因中哪一種，以及含有Ppo-Ala基因和Ppo-Alb基因這兩種基因中哪一種，含有Psy-Ala或Psy-Alc基因還是含有Psy-Alb基因，含有TaLox-Bla和TaLox-Blb這兩種基因中哪一種，以及含有Ppo-Dla和Ppo-Dlb這兩種基因中哪一種:
[0036]以所述引物對(duì)組A進(jìn)行PCR反應(yīng)的產(chǎn)物中，若含有大小為151bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Bla基因或候選含有Psy-Bla基因；若含有大小為156bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Blb基因或候選含有Psy-Blb基因；若含有大小為428bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Blc基因或候選含有Psy-Blc基因；若含有大小為183bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaZd s-Ala基因或候選含有TaZds-Ala基因；若含有大小為179bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaZds-Alb基因或候選含有TaZds-Alb基因；
[0037]以所述引物對(duì)組B的進(jìn)行PCR反應(yīng)的產(chǎn)物中，若不含有大小為981bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaZds-Dla基因或候選含有TaZds-Dla基因；若含有大小為981bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaZds-Dlb基因或候選含有TaZds-Dlb基因；若含有大小為685bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Ppo-Ala基因或候選含有Pp0-Ala基因；若含有大小為876bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Ppo-Alb基因或候選含有Pp0-Alb基因；
[0038]以所述引物對(duì)組C的進(jìn)行PCR反應(yīng)的產(chǎn)物中，若含有大小為194bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Ala或Psy-Alc基因或候選含有Psy-Ala或Psy-Alc基因(Psy-Alc基因極少)；若含有大小為231bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Alb基因或候選含有Psy-Alb基因；若不含有大小為791bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaLox-Bla基因或候選含有TaLox-Bla基因；若含有大小為791bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaLox-Blb基因或候選含有TaLox-Blb基因；若含有大小為571bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Ppo-Dla基因或候選含有Ρρο-Dla基因；若不含有大小為571bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Ppo-Dlb基因或候選含有Ρρο-Dlb基因。
[0039]所述a2)的方法包括下述(3)和(4)的步驟:
[0040]所述(3)為如下Cl)和c2):
[0041]cl)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)組中的所述引物對(duì)組A進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為59°C ；
[0042]在本發(fā)明中，所述PCR反應(yīng)的程序具體為:95°C預(yù)變性5min ;95°C變性45s，59°C退火45s，72°C延伸30s，擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin ;4°C，保溫結(jié)束。
[0043]c2)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)組中所述引物對(duì)組C進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為64°C ；
[0044]在本發(fā)明中，所述PCR反應(yīng)的程序具體為:95°C預(yù)變性5min ;94°C變性lmin，64°C退火lmin，72°C延伸90s，擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行36個(gè)循環(huán)；72°C延伸8min ;4°C，保溫結(jié)束；
[0045](4)檢測(cè)步驟(3 )得到的PCR產(chǎn)物的大小，所述檢測(cè)步驟(3 )得到的PCR產(chǎn)物的大小的方法同步驟(2)。
[0046]所述a3)的方法包括下述 (5)和(6)的步驟:
[0047](5)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)組中所述引物對(duì)組C進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為64°C ；
[0048]在本發(fā)明中，所述PCR反應(yīng)的程序具體為:95°C預(yù)變性5min ;94°C變性lmin，64°C退火lmin，72°C延伸90s，擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行36個(gè)循環(huán)；72°C延伸8min ;4°C，保溫結(jié)束；
[0049](6)檢測(cè)步驟(5)得到的PCR產(chǎn)物的大小，所述檢測(cè)步驟(5)得到的PCR產(chǎn)物的大小的方法同步驟(2)。
[0050]在上述方法中，所述大小為151bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列17所示；所述大小為156bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列18所示；所述大小為428bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列19所示；所述大小為183bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列20所示；所述大小為179bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列21所示；所述大小為981bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列22所示；所述大小為685bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列23所示；所述大小為876bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列24所示；所述大小為194bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列25所示；所述大小為231bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列26所示；所述大小為791bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列27所示；所述大小為571bp的DNA片段的核苷酸序列具體如序列表中序列28所示。
[0051]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，用所述引物對(duì)組中的所述引物對(duì)組A進(jìn)行PCR反應(yīng)的反應(yīng)體系中，作為模板的所述待測(cè)小麥的基因組DNA的量為100-200ng，dNTPs的終濃度為200 μ M，DNA聚合酶的量為1.5U。PCR反應(yīng)程序具體為:95°C預(yù)變性5min ;95°C變性45s，59°C退火45s，72°C延伸30s，擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin ;4°C，保溫結(jié)束。
[0052]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，用所述引物對(duì)組中的所述引物對(duì)組B進(jìn)行PCR反應(yīng)的反應(yīng)體系中，作為模板的所述待測(cè)小麥的基因組DNA的量為100-200ng，dNTPs的終濃度為200 μ M0 PCR反應(yīng)程序具體為:95°C預(yù)變性5min ;95°C變性30s，62 °C退火30s，72 °C延伸70s，擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行34個(gè)循環(huán)；72°C延伸5min ;4°C，保溫結(jié)束。
[0053]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，用所述引物對(duì)組中的所述引物對(duì)組C進(jìn)行PCR反應(yīng)的反應(yīng)體系中，作為模板的所述待測(cè)小麥的基因組DNA的量為100-200ng，dNTPs的終濃度為225 μ M，DNA聚合酶的量為1.5U。PCR反應(yīng)程序具體為:95°C預(yù)變性5min ;94°C變性lmin，64°C退火lmin，72°C延伸90s，擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行36個(gè)循環(huán)；72°C延伸8min ;4°C，保溫結(jié)束。
[0054]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種培育面粉白度提高的小麥品種的方法。
[0055]本發(fā)明所提供的培育面粉白度提高的小麥品種的方法，包括采用如下a) -g)中至少一種的小麥作為親本進(jìn)行育種的步驟:
[0056]a)含有或候選含有Psy-Blb基因；
[0057]b)含有或候選含有TaZds-Ala基因；
[0058]c)含有或候選含有TaZds-Dlb基因；
[0059]d)含有或候選含有Ppo-Alb基因；
[0060]e)含有或候選含有Psy-Alb基因；
[0061 ] f )含有或候選含有TaLox-Bla基因 ；
[0062]g)含有或候選含有Ppo-Dla基因。
[0063]從眾多小麥品種中選擇滿足a) -g)中至少一項(xiàng)的小麥的方法，即為上述“鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥含有Psy-Bla、Psy_Blb和Psy-Blc這三種基因中哪一種，含有TaZds-Ala和TaZds-Alb這兩種基因中哪一種，含有TaZds-Dla和TaZds-Dlb這兩種基因中哪一種，含有Ppo-Ala基因和Ppo-Alb基因這兩種基因中哪一種；含有Psy-Ala或Psy-Alc基因還是含有Psy-Alb基因，含有TaLox-Bla和TaLox-Blb這兩種基因中哪一種，以及含有Ppo-Dla和Pp0-Dlb這兩種基因中哪一種”的方法。所選擇的小麥滿足上述a)-g)七項(xiàng)中的項(xiàng)數(shù)越多，表示所選擇的小麥越適合作為培育面粉白度提高的小麥品種時(shí)采用的親本，并且在同等條件下，對(duì)于d)和g)優(yōu)先選擇含有或候選含有Ppo-Alb基因的小麥品種作為親本。
[0064]在本發(fā)明中，所述待測(cè)小麥具體為如下小麥品種(系)中的至少一種:寧冬6號(hào)、周麥16、周麥17、西農(nóng)979、西農(nóng)88、陜354、小偃54、徐州25、西農(nóng)6028、西農(nóng)8727和西峰27。
[0065]本發(fā)明所提供的引物對(duì)組A或引物對(duì)組B或引物對(duì)組C的各引物對(duì)之間不存在相互抑制作用和錯(cuò)配，檢測(cè)品種(系)的結(jié)果可靠、重復(fù)性好，成本低。本發(fā)明所提供的引物對(duì)組A或引物對(duì)組B或引物對(duì)組C均選用同樣的退火溫度，實(shí)現(xiàn)了相同溫度一次PCR完成一組基因的鑒別，且特異性強(qiáng)，檢測(cè)過(guò)程耗時(shí)短。本發(fā)明提供一種更全面的快速評(píng)價(jià)小麥色澤品質(zhì)的方法，并為小麥色澤品質(zhì)育種提供參考。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0066]圖1為實(shí)施例1中11份小麥品種(系)面粉色澤相關(guān)基因Psy-Bl和TaZds-Al的多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。其中，Al和A2 (兩次重復(fù))為T(mén)aZds-Al基因的基因型單一 PCR檢測(cè)結(jié)果；BI和B2 (兩次重復(fù))及B3和B4 (兩次重復(fù))為Psy-Bl基因的基因型單一 PCR檢測(cè)結(jié)果；C為多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。其中，1:寧冬6號(hào)；2:周麥16 ；3:周麥17 ；4:西農(nóng)979 ；5:西農(nóng)88 ；6:陜 354 ；7:小偃 54 ；8:徐州 25 ；9:西農(nóng) 6028 ；10:西農(nóng) 8727 ；11:西峰 27。
[0067]圖2為實(shí)施例2中11份小麥品種(系)面粉色澤相關(guān)基因TaZds-Dl和Pp0-Al的多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。其中，Al和A2 (兩次重復(fù))為T(mén)aZds-Dl基因的基因型單一 PCR檢測(cè)結(jié)果；B1和B2 (兩次重復(fù))為Ppo-Al基因的基因型單一 PCR檢測(cè)結(jié)果；C為多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。其中，M:標(biāo)準(zhǔn)分子量DL2000 ；1:寧冬6號(hào)；2:周麥16 ；3:周麥17 ；4:西農(nóng)979 ；5:西農(nóng)88 ；6:陜 354 ；7:小偃 54 ；8:徐州 25 ；9:西農(nóng) 6028 ；10:西農(nóng) 8727 ；11:西峰 27。
[0068]圖3為實(shí)施例3中11份小麥品種(系)面粉色澤相關(guān)基因Psy-Al、TaLox-Bl和Ppo-Dl的多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。其中，Al和A2 (兩次重復(fù))為Psy-Al基因的基因型單一 PCR檢測(cè)結(jié)果；B1和B2 (兩次重復(fù))為Ppo-Dl基因的基因型單一 PCR檢測(cè)結(jié)果；C1和C2 (兩次重復(fù))為T(mén)aLox-Bl基因的基因型單一 PCR檢測(cè)結(jié)果；D為多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。其中，M:標(biāo)準(zhǔn)分子量DL2000 ；1:寧冬6號(hào)；2:周麥16 ；3:周麥17 ；4:西農(nóng)979 ；5:西農(nóng)88 ；6:陜354 ；7:小偃54 ；8:徐州25 ；9:西農(nóng)6028 ；10:西農(nóng)8727 ；11:西峰27。
[0069]圖4為對(duì)比例I中7份已知基因型小麥品種(系)面粉色澤相關(guān)基因Psy-Bl和TaZds-Al的多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。其中，1、8:周麥17 ；2:周麥16 ；3:寧冬6號(hào)；4:西農(nóng)88 ；
5:小偃54 ；6:西農(nóng)979 ；7:西農(nóng)6028。
[0070]圖5為對(duì)比例2中7份已知基因型小麥品種(系)面粉色澤相關(guān)基因TaZds-Dl和Ppo-Al的多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。其中，1、3:寧冬6號(hào)；2:西農(nóng)979 ；4:西農(nóng)88 ；5:周麥16 ；6:周麥 17 ；7:陜 354 ;8、9:徐州 25。
[0071]圖6為對(duì)比例3中5份已知基因型小麥品種(系)面粉色澤相關(guān)基因Ppo-Al、TaLox-Bl和Ppo-Dl的多重PCR擴(kuò)增結(jié)果。其中，1:寧冬6號(hào)；2:陜354 ；3:西峰27 ；4:西農(nóng) 6028 ；5:西農(nóng) 979。
【具體實(shí)施方式】
[0072]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0073]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0074]實(shí)施例1、小麥面粉色澤相關(guān)基因Psy-Bl和TaZds-Al的多重PCR檢測(cè)
[0075]本實(shí)施例的多重PCR引物對(duì)組由特異于Psy-Bl基因的兩個(gè)引物對(duì)，和特異于TaZds-Al基因的一個(gè)引物對(duì)組成；其中，所述特異于Psy-Bl基因的兩個(gè)引物對(duì)分別為序列表中序列I和序列2所示的兩條單鏈 DNA組成的引物對(duì)1，以及序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)2 ;所述特異于TaZds-Al基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)3。
[0076]本實(shí)施例的多重PCR引物對(duì)組可同時(shí)檢測(cè)Psy-Bl和TaZds-Al兩個(gè)基因位點(diǎn)的5種基因型 Psy-Bla、Psy-Blb、Psy-Blc、TaZds_Ala 和 TaZds-Alb。含有 Psy-Bla 基因的材料，PCR擴(kuò)增出151bp (序列17)的一個(gè)條帶；含有Psy-Blb基因的材料，PCR擴(kuò)增出156bp (序列18)的一個(gè)條帶；含有Psy-Blc基因的材料，PCR擴(kuò)增出428bp (序列19)的一個(gè)條帶；含有TaZds-Ala基因的材料，PCR擴(kuò)增出183bp (序列20)的一條帶；含有TaZds-Alb基因的材料，PCR擴(kuò)增出179bp (序列21)的一個(gè)條帶。
[0077]—、小麥基因組的制備
[0078]采用CTAB法對(duì)11份小麥品種(系)進(jìn)行基因組DNA的提取，得到對(duì)應(yīng)于11份小麥品種(系)的基因組DNA，作為拉面色澤相關(guān)基因Psy-Bl和TaZds-Al多重PCR擴(kuò)增的模板。其中，11份小麥品種(系)為寧冬6號(hào)、周麥16、周麥17、西農(nóng)979、西農(nóng)88、陜354、小偃54、徐州25、西農(nóng)6028、西農(nóng)8727和西峰27。這11個(gè)小麥品種(系)的Psy-Bl和TaZds-Al基因的基因型詳見(jiàn)表1。
[0079]其中，西農(nóng)979、西農(nóng)88、陜354、小偃54、徐州25、西農(nóng)6028和西農(nóng)8727的Psy-Bl基因的基因型參見(jiàn)“葉石.陜西小麥籽粒PPO活性基因和YP含量基因的等位變異檢測(cè)和分布分析.西北農(nóng)林科技大學(xué)，2010年，碩士論文”一文；陜354、小偃54、徐州25的TaZds-Al基因的基因型參見(jiàn)“董長(zhǎng)海.普通小麥籽粒黃色素含量相關(guān)基因的克隆與功能標(biāo)記開(kāi)發(fā).河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011年，碩士論文” 一文。
[0080]同時(shí)，本發(fā)明的發(fā)明人對(duì)以上11個(gè)小麥品種(系)的Psy-Bl和TaZds-Al基因的基因型均經(jīng)過(guò)至少兩次各個(gè)位點(diǎn)的單一 PCR鑒定，具體如下:
[0081](I)以上11個(gè)小麥品種(系)的TaZds-Al基因的基因型檢測(cè)參見(jiàn)“董長(zhǎng)海.普通小麥籽粒黃色素含量相關(guān)基因的克隆與功能標(biāo)記開(kāi)發(fā).河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011年，碩士論文”一文進(jìn)行。以小麥基因組DNA為模板，采用YP2A-1標(biāo)記引物(表2中序列5/序列6)進(jìn)行單一PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示:小麥品種(系)寧冬6號(hào)、周麥16、西農(nóng)88、徐州25、西農(nóng)8727和西峰27經(jīng)PCR擴(kuò)增得到大小為179bp的目的條帶，表明其TaZds-Al基因的基因型為T(mén)aZds-Alb ；周麥17、西農(nóng)979、陜354、小偃54和西農(nóng)6028經(jīng)PCR擴(kuò)增得到大小為183bp的目的條帶，表明其TaZds-Al基因的基因型為T(mén)aZds-Ala。實(shí)驗(yàn)重復(fù)至少兩次，結(jié)果一致。見(jiàn)圖1中Al和A2。
[0082](2)以上11個(gè)小麥品種(系)的Psy-Bl基因的基因型檢測(cè)參見(jiàn)“葉石.陜西小麥籽粒PPO活性基因和YP含量基因的等位變異檢測(cè)和分布分析.西北農(nóng)林科技大學(xué)，2010年，碩士論文”一文進(jìn)行。以小麥基因組DNA為模板，分別采用YP7B-1標(biāo)記引物(表2中序列I/序列2)、YP7B-2標(biāo)記引物(表2中序列3/序列4)進(jìn)行單一 PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示:小麥品種(系)寧冬6號(hào)、周麥17、西農(nóng)6028和西峰27采用序列I/序列2進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到大小為151bp的目的條帶，表明其Psy-Bl基因的基因型為Psy-Bla ;小麥品種(系)周麥16、西農(nóng)979、西農(nóng)88、小偃54和西農(nóng)8727采用序列I/序列2進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到大小為156bp的目的條帶，表明其Psy-Bl基因的基因型為Psy-Blb ;小麥品種(系)陜354和徐州25采用序列3/序列4進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到大小為428bp的目的條帶，表明其Psy-Bl基因的基因型為Psy-Blc。實(shí)驗(yàn)重復(fù)至少兩次，結(jié)果一致。見(jiàn)圖1中BI和B2及B3和B4。
[0083]表111份小麥品種(系)面粉色澤相關(guān)基因Psy-Bl和TaZds-Al的基因型
【權(quán)利要求】
1.用于鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥面粉色澤相關(guān)基因的多重PCR引物對(duì)組，所述面粉色澤相關(guān)基因?yàn)镻sy-Bl基因、TaZds-Al基因、TaZds-Dl基因、Ppo-Al基因、Psy-Al基因、TaLox-Bl基因和Ppo-Dl基因，其特征在于:所述多重PCR引物對(duì)組由引物對(duì)組A、引物對(duì)組B和引物對(duì)組C組成；所述引物對(duì)組A由特異于所述Psy-Bl基因的兩個(gè)引物對(duì)，和特異于所述TaZds-Al基因的一個(gè)引物對(duì)組成；所述引物對(duì)組B由特異于所述TaZds-Dl基因的一個(gè)引物對(duì)，和特異于所述Ppo-Al基因的一個(gè)引物對(duì)組成；所述引物對(duì)組C由特異于所述Psy-Al基因的一個(gè)引物對(duì)、特異于所述TaLox-Bl基因的一個(gè)引物對(duì)，和特異于所述Ppo-Dl基因的一個(gè)引物對(duì)組成； 所述引物對(duì)組A中，所述特異于所述Psy-Bl基因的兩個(gè)引物對(duì)分別為序列表中序列I和序列2所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)1，以及序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)2 ;所述特異于所述TaZds-Al基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)3 ； 所述引物對(duì)組B中，所述特異于所述TaZds-Dl基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)4 ;所述特異于所述Ppo-Al基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列9和序列10所不的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)5 ； 所述引物對(duì)組C中，所述特異于所述Psy-Al基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列11和序列12所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)6 ;所述特異于所述TaLox-Bl基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列13和序列14所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)7 ;所述特異于所述Ppo-Dl基因的一個(gè)引物對(duì)為序列表中序列15和序列16所不的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)8。
2.用于鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥面粉色澤相關(guān)基因的多重PCR引物對(duì)組，為下述I)或 2): O由權(quán)利要求1中的所述引物對(duì)組A和所述引物對(duì)組C組成的引物對(duì)組； 2)為權(quán)利要求1中的所述引物對(duì)組C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的引物對(duì)組，其特征在于:所述引物對(duì)組A中每個(gè)引物對(duì)的兩條引物在PCR反應(yīng)體系中等量使用，且所述引物對(duì)1，所述引物對(duì)2和所述引物對(duì)3在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為6:6:5 ;所述特異引物對(duì)組B中每個(gè)弓丨物對(duì)的兩條引物在PCR反應(yīng)體系中等量使用，且所述引物對(duì)4和所述引物對(duì)5在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為12:6 ;所述引物對(duì)組C中每個(gè)引物對(duì)的兩條引物在PCR反應(yīng)體系中等量使用，且所述引物對(duì)6、所述引物對(duì)7和所述引物對(duì)8在PCR反應(yīng)體系中的摩爾比為5:10:10。
4.含有權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組的試劑盒。
5.權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組的制備方法，其特征在于:所述制備方法包括將權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組中各引物對(duì)的所述兩條單鏈DNA分別單獨(dú)包裝的步驟。
6.權(quán)利要求4所述試劑盒的制備方法，包括如下步驟:將權(quán)利要求1-3中任一所述的引物對(duì)組中各引物對(duì)的所述兩條單鏈DNA分別單獨(dú)包裝后，與下述物質(zhì)中的至少一種包裝在同一試劑盒內(nèi)=PCR反應(yīng)緩沖液、DNA聚合酶和4種dNTP。
7.下述al)或a2)或a3)的方法: al)鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥含有Psy-Bla、Psy_Blb和Psy-Blc這三種基因中哪一種，含有TaZds-Ala和TaZds-Alb這兩種基因中哪一種，含有TaZds-Dla和TaZds-Dlb這兩種基因中哪一種，含有Ppo-Ala基因和Ppo-Alb基因這兩種基因中哪一種；含有Psy-Ala或Psy-Alc基因還是含有Psy-Alb基因，含有TaLox-Bla和TaLox-Blb這兩種基因中哪一種，以及含有Ppo-Dla和Ppo-Dlb這兩種基因中哪一種； a2)鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥含有Psy-Bla、Psy_Blb和Psy-Blc這三種基因中哪一種，以及含有TaZds-Ala和TaZds-Alb這兩種基因中哪一種；含有Psy-Ala或Psy-Alc基因還是含有Psy-Alb基因，含有TaLox-Bla和TaLox-Blb這兩種基因中哪一種，以及含有Ppo-Dla和Ppo-Dlb這兩種基因中哪一種； a3)鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥含有Psy-Ala或Psy-Alc基因還是含有Psy-Alb基因，含有TaLox-Bla和TaLox-Blb這兩種基因中哪一種，以及含有Ρρο-Dla和Ρρο-Dlb這兩種基因中哪一種； 其特征在于:所述al)的方法包括下述(I)和(2)的步驟: 所述(I)為如下bl)和b2): bl) 以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組中的所述引物對(duì)組A進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為59°C ； b2)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求1或3所述引物對(duì)組中所述引物對(duì)組B進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為62°C ； b3)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組中所述引物對(duì)組C進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為64°C ； (2)檢測(cè)步驟(1)得到的PCR產(chǎn)物的大小，按照如下方法根據(jù)PCR產(chǎn)物確定所述待測(cè)小麥含有Psy-Bla、Psy-Blb和Psy-Blc這三種基因中哪一種，含有TaZds-Ala和TaZds-Alb這兩種基因中哪一種，含有TaZds-Dla和TaZds-Dlb這兩種基因中哪一種，含有Ppo-Ala基因和Ppo-Alb基因這兩種基因中哪一種，含有Psy-Ala或Psy-Alc基因還是含有Psy-Alb基因，含有TaLox-Bla和TaLox-Blb這兩種基因中哪一種，以及含有Ρρο-Dla和Ρρο-Dlb這兩種基因中哪一種: 以所述引物對(duì)組A進(jìn)行PCR反應(yīng)的產(chǎn)物中，若含有大小為151bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Bla基因或候選含有Psy-Bla基因；若含有大小為156bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Blb基因或候選含有Psy-Blb基因；若含有大小為428bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Blc基因或候選含有Psy-Blc基因；若含有大小為183bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaZds-Ala基因或候選含有TaZds-Ala基因；若含有大小為179bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaZds-Alb基因或候選含有TaZds-Alb基因； 以所述引物對(duì)組B的進(jìn)行PCR反應(yīng)的產(chǎn)物中，若不含有大小為981bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaZds-D I a基因或候選含有TaZds-D I a基因；若含有大小為98 Ibp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaZds-Dlb基因或候選含有TaZds-Dlb基因；若含有大小為685bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Ppo-Ala基因或候選含有Pp0-Ala基因；若含有大小為876bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Ppo-Alb基因或候選含有Ppo-Alb基因； 以所述引物對(duì)組C的進(jìn)行PCR反應(yīng)的產(chǎn)物中，若含有大小為194bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Ala或Psy-Alc基因或候選含有Psy-Ala或Psy-Alc基因；若含有大小為231bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Psy-Alb基因或候選含有Psy-Alb基因；若不含有大小為791bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaLox-Bla基因或候選含有TaLox-Bla基因；若含有大小為791bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有TaLox-Blb基因或候選含有TaLox-Blb基因；若含有大小為571bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Pp0-Dla基因或候選含有Ppo-Dla基因；若不含有大小為571bp的DNA片段，則所述待測(cè)小麥含有Pp0-Dlb基因或候選含有Ppo-Dlb基因； 所述a2)的方法包括下述(3)和(4)的步驟: 所述(3)為如下Cl)和c2): Cl)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組中的所述引物對(duì)組A進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為59°C ； c2)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用權(quán)利要求1-3中任一所述引物對(duì)組中所述引物對(duì)組C進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為64°C ； (4)檢測(cè)步驟(3)得到的PCR產(chǎn)物的大小，所述檢測(cè)步驟(3)得到的PCR產(chǎn)物的大小的方法同步驟(2); 所述a3)的方法包括下述(5)和(6)的步驟: (5)以待測(cè)小麥的基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)組中所述引物對(duì)組C進(jìn)行PCR反應(yīng)，所述PCR反應(yīng)的退火溫度為64°C ； (6)檢測(cè)步驟(5)得到的PCR產(chǎn)物的大小，所述檢測(cè)步驟(5)得到的PCR產(chǎn)物的大小的方法同步驟(2)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于:所述大小為151bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列17所示；所述大小為156bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列18所示；所述大小為428bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列19所示；所述大小為183bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列20所示；所述大小為179bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列21所示；所述大小為981bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列22所示；所述大小為685bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列23所示；所述大小為876bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列24所示；所述大小為194bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列25所示；所述大小為231bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列26所示；所述大小為791bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列27所示；所述大小為571bp的DNA片段的核苷酸序列如序列表中序列28所示。
9.一種培育面粉白度提高的小麥品種的方法，包括采用通過(guò)權(quán)利要求7的方法鑒定得到的如下a) -g)中至少一種的小麥作為親本進(jìn)行育種的步驟: a)含有或候選含有Psy-Blb基因； b)含有或候選含有TaZds-Ala基因； c)含有或候選含有TaZds-Dlb基因； d)含有或候選含有Ppo-Alb基因； e)含有或候選含有Psy-Alb基因； f)含有或候選含有TaLox-Bla基因； g)含有或候選含有Ppo-Dla基因。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103525937SQ201310509511
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月24日
【發(fā)明者】穆培源, 張曉科, 相吉山, 徐紅軍, 張鈺玉, 桑偉, 韓新年, 聶迎彬, 崔鳳娟, 鄒波 申請(qǐng)人:新疆農(nóng)墾科學(xué)院