用issr分子標(biāo)記法對(duì)甘薯品種真實(shí)性進(jìn)行鑒別的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用ISSR分子標(biāo)記法對(duì)甘薯品種真實(shí)性進(jìn)行鑒別的方法。本發(fā)明公開的一種用于輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性的引物組，由HBAAS-001引物、HBAAS-815引物和HBAAS-825引物組成；HBAAS-001引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示；HBAAS-815引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示；HBAAS-825引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示。本發(fā)明利用ISSR分子標(biāo)記成功構(gòu)建的甘薯品種單一引物的ISSR指紋圖譜，使得甘薯品種真實(shí)性的鑒定簡(jiǎn)便、快捷、重復(fù)性和穩(wěn)定性好，為ISSR分子標(biāo)記技術(shù)更廣泛地用于甘薯品種真實(shí)性鑒定打下良好的基礎(chǔ)。
【專利說明】用ISSR分子標(biāo)記法對(duì)甘薯品種真實(shí)性進(jìn)行鑒別的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用ISSR分子標(biāo)記法對(duì)甘薯品種真實(shí)性進(jìn)行鑒別的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]甘薯是一種重要的糧食、飼料、工業(yè)原料和能源作物。近些年，隨著全球石油供給形勢(shì)的日益嚴(yán)重，生物質(zhì)能源的開發(fā)和利用日益重要。甘薯單位面積淀粉產(chǎn)量高，被認(rèn)為是生產(chǎn)燃料乙醇的理想原料。甘薯作為新型的能源用植物，其市場(chǎng)潛力巨大，它將在我國能源安全中扮演重要的角色。
[0003]甘薯種薯的真實(shí)性和純度是衡量種薯質(zhì)量的重要指標(biāo)，直接影響甘薯的產(chǎn)量和品質(zhì)。生產(chǎn)上如何快速、準(zhǔn)確鑒定甘薯種薯真實(shí)性是一個(gè)突出的問題。傳統(tǒng)的形態(tài)鑒定法依賴于品種表型差異，而形態(tài)性狀的表現(xiàn)受環(huán)境影響較大，穩(wěn)定性差，誤鑒率較高。
[0004]分子標(biāo)記技術(shù)具有豐富的多態(tài)性和環(huán)境穩(wěn)定性，且操作簡(jiǎn)便，已開始廣泛應(yīng)用于作物品種鑒定與純度檢測(cè)中。ISSR分子標(biāo)記是在SSR標(biāo)記基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，其基本原理是在SSR的5’或3’端加錨1-4個(gè)嘌呤或嘧啶堿基，然后以此為引物，對(duì)兩側(cè)具有反向排列SSR的一段基因組DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增。ISSR兼具SSR、RAPD、RFLP、AFLP等分子標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)，與SSR相比，ISSR不需要預(yù)先獲知序列信息而使成本降低，且多態(tài)性更豐富；與RAH)相比，ISSR重復(fù)性高，穩(wěn)定性好，同時(shí)具備RAPD的簡(jiǎn)便、易操作等特點(diǎn)。目前，ISSR標(biāo)記技術(shù)在植物種質(zhì)資源遺傳多樣性和親緣關(guān)系、基因定位、分子標(biāo)記輔助選擇等研究中已廣泛的應(yīng)用。在甘薯中，應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記分析甘薯種質(zhì)資源遺傳多樣性已有報(bào)道，但應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行甘薯品種真實(shí)性鑒定的方法尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種用ISSR分子標(biāo)記法對(duì)甘薯品種真實(shí)性進(jìn)行快速鑒別的方法。
[0006]本發(fā)明提供的一種用于輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性的引物組，由HBAAS-001引物、HBAAS-815引物和HBAAS-825引物組成；
[0007]HBAAS-001引物的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示；
[0008]HBAAS-815引物的核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示；
[0009]HBAAS-825引物的核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示。
[0010]一種用于輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性的試劑盒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，該試劑盒由上述引物組、PCR擴(kuò)增緩沖液，dNTP, DNA聚合酶和ddH20組成。
[0011]一種指紋圖譜也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，分別以所述引物組的三條引物對(duì)16種甘薯品種的葉片的DNA分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，得到每條引物針對(duì)每個(gè)甘薯品種的譜帶，即為所述引物HBAAS-001對(duì)16種甘薯品種構(gòu)建的指紋圖譜、引物HBAAS-815對(duì)16種甘薯品種構(gòu)建的指紋圖譜和引物HBAAS-825對(duì)16種甘薯品種構(gòu)建的指紋圖譜；[0012]所述16種甘薯品種為廣薯菜2號(hào)、商薯19、尚志12、徐紫薯I號(hào)、魯薯3號(hào)、徐薯26、徐薯43-14、蘇薯10號(hào)、蘇薯3號(hào)、蘇薯11號(hào)、徐薯55_2、徐紫8008、莆薯53、臺(tái)農(nóng)71、徐22-5和臺(tái)農(nóng)66 ；
[0013]所述PCR的體系如下:
[0014]模板DNAl μ L，濃度為10 μ M的弓丨物2 μ L，10 XPCR擴(kuò)增緩沖液5 μ L，濃度為2.5mM的 dNTPs4 μ L, DNA 聚合酶 0.5 μ L, dd H2O 補(bǔ)充體系至 50 μ L ；
[0015]DNA聚合酶的商品名稱為Easy Taq DNA Polymerase,購自北京全式金生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為APlll ；
[0016]所述模板DNA為下述16種甘薯品種的葉片的DNA:廣薯菜2號(hào)、商薯19、尚志12、徐紫薯I號(hào)、魯薯3號(hào)、徐薯26、徐薯43-14、蘇薯10號(hào)、蘇薯3號(hào)、蘇薯11號(hào)、徐薯55_2、徐紫8008、莆薯53、臺(tái)農(nóng)71、徐22-5和臺(tái)農(nóng)66 ；
[0017]所述引物分別為所述引物組的三種引物；
[0018]所述PCR的程序如下:
[0019]94°C變性 5min ;94°C變性 30s，60°C復(fù)性 lmin，72°C延伸 3min，共 40 個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin, 10°C保存；
[0020]所述16種甘薯品種為廣薯菜2號(hào)、商薯19、尚志12、徐紫薯I號(hào)、魯薯3號(hào)、徐薯26、徐薯43-14、蘇薯10號(hào)、蘇薯3號(hào)、蘇薯11號(hào)、徐薯55_2、徐紫8008、莆薯53、臺(tái)農(nóng)71、徐22-5和臺(tái)農(nóng)66 ；
[0021 ] 所述瓊脂糖凝膠的濃度為4%，瓊脂糖與電泳緩沖液的比例為4g: 100ml。
[0022]一種用于輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性的方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，分別以上述引物組的三條引物對(duì)待測(cè)甘薯種薯進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，得到PCR產(chǎn)物條帶；
[0023]PCR產(chǎn)物條帶X由如下(I) - (3)所示的PCR產(chǎn)物條帶組成:
[0024](I)以待測(cè)甘薯種薯的葉片的DNA為模板，用上述HBAAS-OOI引物擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物條帶，記作PCR產(chǎn)物條帶Xa ；
[0025](2)以待測(cè)甘薯種薯的葉片的DNA為模板，用上述HBAAS-815引物擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物條帶，記作PCR產(chǎn)物條帶Xb ；
[0026](3)以待測(cè)甘薯種薯的葉片的DNA為模板，用上述HBAAS-825引物擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物條帶，記作PCR產(chǎn)物條帶Xe ；
[0027]若PCR產(chǎn)物條帶Xa與以所述的HBAAS-001為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種的PCR產(chǎn)物條帶均不相同，則所述待測(cè)甘薯種薯不屬于16種甘薯品種的任一種；
[0028]若PCR產(chǎn)物條帶Xb與以所述的HBAAS-815為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種的PCR產(chǎn)物條帶均不相同，則所述待測(cè)甘薯種薯不屬于16種甘薯品種的任一種；
[0029]若PCR產(chǎn)物條帶Xe與以所述的HBAAS-825為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種的PCR產(chǎn)物條帶均不相同，則所述待測(cè)甘薯種薯不屬于16種甘薯品種的任一種；
[0030]若PCR產(chǎn)物條帶Xa與以所述的HBAAS-001為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種中的A種甘薯的PCR產(chǎn)物條帶完全相同，PCR產(chǎn)物條帶Xb與以所述的HBAAS-815為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種中的A種甘薯的PCR產(chǎn)物條帶完全相同，PCR產(chǎn)物條帶Xe與以所述的HBAAS-825為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種中的A種甘薯的PCR產(chǎn)物條帶完全相同，則所述待測(cè)甘薯種薯為A種甘薯；
[0031]所述PCR的體系如下:
[0032]模板DNAl μ L，濃度為10 μ M的引物2 μ L，10 XPCR擴(kuò)增緩沖液5 μ L，濃度為2.5mM的 dNTPs4 μ L, DNA 聚合酶 0.5 μ L, dd H2O 補(bǔ)充體系至 50 μ L ；
[0033]DNA聚合酶的商品名稱為Easy Taq DNA Polymerase，購自北京全式金生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為APlll ；
[0034]所述PCR的程序如下:
[0035]94°C變性 5min ;94°C變性 30s，60°C復(fù)性 lmin，72°C延伸 3min，共 40 個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin, 10°C保存；
[0036]所述模板DNA為下述16種甘薯品種的葉片的DNA:廣薯菜2號(hào)、商薯19、尚志12、徐紫薯I號(hào)、魯薯3號(hào)、徐薯26、徐薯43-14、蘇薯10號(hào)、蘇薯3號(hào)、蘇薯11號(hào)、徐薯55_2、徐紫8008、莆薯53、臺(tái)農(nóng)71、徐22-5和臺(tái)農(nóng)66 ；
[0037]所述瓊脂糖凝膠的濃度為4%，瓊脂糖與電泳緩沖液的比例為4g: 100ml ；
[0038]所述16種甘薯品種為廣薯菜2號(hào)、商薯19、尚志12、徐紫薯I號(hào)、魯薯3號(hào)、徐薯26、徐薯43-14、蘇薯10號(hào)、蘇薯3號(hào)、蘇薯11號(hào)、徐薯55_2、徐紫8008、莆薯53、臺(tái)農(nóng)71、徐22-5和臺(tái)農(nóng)66。
[0039]上述引物組在輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性中的應(yīng)用或在輔助鑒定甘薯品種真實(shí)性中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0040]上述試劑盒在輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性中的應(yīng)用或在輔助鑒定甘薯品種真實(shí)性中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0041]上述指紋圖譜在輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性中的應(yīng)用或在輔助鑒定甘薯品種真實(shí)性中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0042]上述方法在輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性中的應(yīng)用或在輔助鑒定甘薯品種真實(shí)性中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0043]所述甘薯種薯是留下來做種用的甘薯。
[0044]本發(fā)明利用ISSR分子標(biāo)記成功構(gòu)建了甘薯品種單一引物的ISSR指紋圖譜表，使得甘薯品種真實(shí)性的鑒定簡(jiǎn)便、快捷、重復(fù)性和穩(wěn)定性好，為ISSR分子標(biāo)記技術(shù)更廣泛地用于甘薯品種真實(shí)性鑒定打下良好的基礎(chǔ)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0045]圖1為引物HBAAS-OOI對(duì)16個(gè)甘薯品種的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖。
[0046]圖2為引物HBAAS-815對(duì)16個(gè)甘薯品種的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖。
[0047]圖3為引物HBAAS-825對(duì)16個(gè)甘薯品種的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖。
【具體實(shí)施方式】[0048]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0049]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0050]Easy Taq DNA Polymerase購自北京全式金生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為APlllo
[0051]16種甘薯，廣薯菜2號(hào)、商薯19、尚志12、徐紫薯I號(hào)、魯薯3號(hào)、徐薯26、徐薯43-14、蘇薯10號(hào)、蘇薯3號(hào)、蘇薯11號(hào)、徐薯55-2、徐紫8008、莆薯53、臺(tái)農(nóng)71、徐22_5、臺(tái)農(nóng)66，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0052]廣薯菜2號(hào)在文獻(xiàn)“宋付平，黃潔，劉國道，等.2008.8份葉菜型甘薯種質(zhì)在海南的試驗(yàn)評(píng)價(jià).中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，24 (9),421-424.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0053]商薯19在文獻(xiàn)“楊愛梅，王家才，記允安，等.2008.高淀粉甘薯新品種商薯19高產(chǎn)栽培措施研究.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，7，41-42.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0054]尚志12在文獻(xiàn)“甘學(xué)德，黃潔.2009.菜用型甘薯的研究概況及發(fā)展對(duì)策.熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，29 (9)，29-33.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0055]徐紫薯I號(hào)在文獻(xiàn)“馬代夫，李秀英，李洪民，等.2004.甘薯新品種徐紫薯I號(hào)的特征特性及栽培要點(diǎn).江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，6，53-54.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0056]魯薯3號(hào)在文獻(xiàn)“史新敏，唐君，張?jiān)蕜?，?2008.葉柄菜用甘薯品種資源的篩選與應(yīng)用.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) ，36 (6)，2299-2300.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0057]徐薯26在文獻(xiàn)“李強(qiáng)，李秀英，謝逸萍，等.2010.抗病高淀粉甘薯品種徐薯26的選育及產(chǎn)量形成特點(diǎn).植物遺傳資源學(xué)報(bào)，11 (5) , 654-658.”中公開過,公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0058]徐薯43-14在文獻(xiàn)“周忠，王欣，馬代夫，等.2005.甘薯抗莖線蟲病基因的RAI3D標(biāo)記.農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，13 (5),549-522.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0059]蘇薯3號(hào)在文獻(xiàn)“縱瑞收.1990.蘇薯3號(hào)的特征特性和栽培技術(shù).江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，6，21-22.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0060]蘇薯11號(hào)在文獻(xiàn)“謝一芝，郭小丁，尹晴紅，等.2007.甘薯新品種蘇薯11號(hào)的選育和栽培技術(shù).江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，5, 62-63.”中公開過,公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0061]徐薯55-2在文獻(xiàn)“周開芳，左明玉，鄭明強(qiáng)，等.2011.不同脫毒紅薯品種對(duì)產(chǎn)量及其品質(zhì)的影響.新品種選育與推廣，30 (1),115-117.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0062]莆薯53在文獻(xiàn)“劉文滔，劉金文，鄭光武，等.2004.菜用甘薯“莆薯53”的生物學(xué)特性及其栽培技術(shù).福建農(nóng)業(yè)科技，2，18-19.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0063]臺(tái)農(nóng)71在文獻(xiàn)“周杰，曹清河，周志林，等.2012.菜用型甘薯不同品種組織培養(yǎng)差異研究.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，40 (1),60-62.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物
研究所獲得。
[0064]徐22-5在文獻(xiàn)“馬代夫，李強(qiáng)，李秀英，等.2009.甘薯高胡蘿卜素食用品種的親本篩選.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，42 (3),789-808.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0065]臺(tái)農(nóng)66在文獻(xiàn)“吳文明，蘇秋芹.2004.甘薯新品種豐產(chǎn)性和穩(wěn)產(chǎn)性分析.雜糧作物，24 (6)，326-328.”中公開過，公眾可從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所獲得。
[0066]實(shí)施例1、用于甘薯品種鑒定的ISSR指紋圖譜表的構(gòu)建
[0067]一、DNA 提取
[0068]以表1所示的16種不同甘薯品種生長出來的葉片為材料，分別采用SDS法提取DNA，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)各品種甘薯的總DNA純度、質(zhì)量以及完整性。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定提取的DNA在260nm和280nm處的吸光值，確定DNA的純度及濃度。將各品種甘薯的DNA稀釋至50-100ng/ μ L，于_20°C保存?zhèn)溆谩?br> [0069]二、引物合成
[0070]合成如下3種引物:
[0071]HBAAS-001:序列為 5，-ACACACACACACACACCG-3，(SEQ ID N0.1)
[0072]HBAAS-815:序列為 5，-CTCTCTCTCTCTCTCTG-3，(SEQ ID N0.2)
[0073]HBAAS-825:序列 為 5，-ACACACACACACACACT-3，(SEQ ID N0.3)
[0074]三、ISSR-PCR擴(kuò)增及電泳檢測(cè)
[0075](一 )以提取的各品種甘薯的DNA為模板，分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
[0076]PCR采用50 μ L反應(yīng)體系:
[0077]模板DNAlyL，引物 2yL (10 μ M)，IOXEasy Taq Buffer, dNTPs4 μ L (2.5mM),Easy Taq DNA Polymerase0.5 μ L, dd H2O 補(bǔ)充體系至 50 μ L。
[0078]其中模板DNA為步驟一得到的16種不同甘薯品種的DNA，引物為HBAAS-001。
[0079]PCR 程序:
[0080]94°C變性 5min ;94°C變性 30s，60°C復(fù)性 lmin，72°C延伸 3min，共 40 個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin, 10°C保存。
[0081]用4%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)ISSR-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，在紫外燈下拍照。
[0082]結(jié)果如圖1所示，圖1中1-16代表甘薯的編號(hào)，M為Marker。
[0083]表1甘薯品種
【權(quán)利要求】
1.一種用于輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性的引物組，由HBAAS-001引物、HBAAS-815引物和HBAAS-825引物組成； HBAAS-OOI引物的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示； HBAAS-815引物的核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示； HBAAS-825引物的核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示。
2.一種用于輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性的試劑盒，該試劑盒由權(quán)利要求1所述的引物組、PCR擴(kuò)增緩沖液，dNTP，DNA聚合酶和ddH20組成。
3.一種指紋圖譜，分別以權(quán)利要求1所述引物組的三條引物對(duì)16種甘薯品種的葉片的DNA分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，得到每條引物針對(duì)每個(gè)甘薯品種的譜帶，即為權(quán)利要求1所述引物HBAAS-001對(duì)16種甘薯品種構(gòu)建的指紋圖譜、引物HBAAS-815對(duì)16種甘薯品種構(gòu)建的指紋圖譜和引物HBAAS-825對(duì)16種甘薯品種構(gòu)建的指紋圖譜； 所述16種甘薯品種為廣薯菜2號(hào)、商薯19、尚志12、徐紫薯I號(hào)、魯薯3號(hào)、徐薯26、徐薯43-14、蘇薯10號(hào)、蘇薯3號(hào)、蘇薯11號(hào)、徐薯55-2、徐紫8008、莆薯53、臺(tái)農(nóng)71、徐22_5和臺(tái)農(nóng)66 ； 所述瓊脂糖凝膠的濃度為4%，瓊脂糖與電泳緩沖液的比例為4g:100ml。
4.一種用于輔助鑒定甘 薯種薯真實(shí)性的方法，分別以權(quán)利要求1所述引物組的三條引物對(duì)待測(cè)甘薯種薯進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，得到PCR產(chǎn)物條帶； PCR產(chǎn)物條帶X由如下(I) - (3)所示的PCR產(chǎn)物條帶組成: (1)以待測(cè)甘薯種薯的葉片的DNA為模板，用權(quán)利要求1所述的HBAAS-001擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物條帶，記作PCR產(chǎn)物條帶Xa ； (2)以待測(cè)甘薯種薯的葉片的DNA為模板，用權(quán)利要求1所述的HBAAS-815擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物條帶，記作PCR產(chǎn)物條帶Xb ； (3)以待測(cè)甘薯種薯的葉片的DNA為模板，用權(quán)利要求1所述的HBAAS-825擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物條帶，記作PCR產(chǎn)物條帶Xe ； 若PCR產(chǎn)物條帶Xa與以權(quán)利要求1所述的HBAAS-001為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種的PCR產(chǎn)物條帶均不相同，則所述待測(cè)甘薯種薯不屬于16種甘薯品種的任一種； 若PCR產(chǎn)物條帶Xb與以權(quán)利要求1所述的HBAAS-815為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種的PCR產(chǎn)物條帶均不相同，則所述待測(cè)甘薯種薯不屬于16種甘薯品種的任一種； 若PCR產(chǎn)物條帶Xe與以權(quán)利要求1所述的HBAAS-825為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種的PCR產(chǎn)物條帶均不相同，則所述待測(cè)甘薯種薯不屬于16種甘薯品種的任一種； 若PCR產(chǎn)物條帶Xa與以權(quán)利要求1所述的HBAAS-001為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種中的A種甘薯的PCR產(chǎn)物條帶完全相同，PCR產(chǎn)物條帶Xb與以權(quán)利要求1所述的HBAAS-815為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種中的A種甘薯的PCR產(chǎn)物條帶完全相同，PCR產(chǎn)物條帶Xe與以權(quán)利要求1所述的HBAAS-825為引物，分別以16種甘薯品種的葉片的DNA為模板得到的16種甘薯品種中的A種甘薯的PCR產(chǎn)物條帶完全相同，則所述待測(cè)甘薯種薯為A種甘薯； 所述瓊脂糖凝膠的濃度為4%，瓊脂糖與電泳緩沖液的比例為4g:100ml ； 所述16種甘薯品種為廣薯菜2號(hào)、商薯19、尚志12、徐紫薯I號(hào)、魯薯3號(hào)、徐薯26、徐薯43-14、蘇薯10號(hào)、蘇薯3號(hào)、蘇薯11號(hào)、徐薯55-2、徐紫8008、莆薯53、臺(tái)農(nóng)71、徐22-5、臺(tái)農(nóng)66。
5.權(quán)利要求1所述的引物組在輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性中的應(yīng)用或在輔助鑒定甘薯品種真實(shí)性中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求2所述的試劑盒在輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性中的應(yīng)用或在輔助鑒定甘薯品種真實(shí)性中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求3所述的指紋圖譜在輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性中的應(yīng)用或在輔助鑒定甘薯品種真實(shí)性中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求4所述的方法在輔助鑒定甘薯種薯真實(shí)性中的應(yīng)用或在輔助鑒定甘薯品種真實(shí)性中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK103484555SQ201310478265
【公開日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月14日
【發(fā)明者】楊新筍, 王連軍, 蘇文瑾, 雷劍, 柴沙沙 申請(qǐng)人:湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所