專(zhuān)利名稱(chēng)：對(duì)酒精性肝損傷具有防護(hù)作用的活性多糖肽制備方法及復(fù)配的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及涉及一種生物制品，特別是一種對(duì)酒精性肝損傷具有防護(hù)作用的活性多糖肽的制備方法及復(fù)配。
背景技術(shù)：
酒精性肝損傷引起的酒精性肝病(Alcoholic liver Disease, ALD)高發(fā)于歐美等國(guó)，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人們生活方式的改變，我國(guó)ALD發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。在我國(guó)的飲食文化中，有宴必飲酒，飲酒則常醉，過(guò)量飲酒造成肝損傷。酒精性肝病原為發(fā)達(dá)國(guó)家的常見(jiàn)病，但近年來(lái)在我國(guó)也達(dá)到了不容忽視的程度。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)酒民中酒精性肝損傷發(fā)病率在20%左右，酒精性肝病己經(jīng)成為僅次于甲肝、乙肝等病毒性肝炎肝病之后的第二號(hào)角色。目前西方國(guó)家解酒藥物的開(kāi)發(fā)仍以合成藥物為主，而用藥物治療酒精性肝損傷周期長(zhǎng)，而且合成類(lèi)藥物本身具有毒副作用，在肝中代謝又會(huì)進(jìn)一步損傷肝臟，所以多年來(lái)通過(guò)合成方法研制的解酒藥物并未取得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。而中、日、韓等國(guó)在繼承傳統(tǒng)醫(yī)藥的基礎(chǔ)上大力發(fā)掘天然產(chǎn)物中的活性物質(zhì)，在某些方面已取得了一些重要進(jìn)展，為研制醒酒保肝的功能食品開(kāi)辟了廣闊的前景。
急性酒精中毒會(huì)導(dǎo)致肝損傷，其損傷機(jī)制之一是通過(guò)激活氧分子產(chǎn)生大量超氧陰離子自由基、羥自由基等過(guò)氧化物，且超出細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)，過(guò)氧化物酶(CAT)，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH2px)，谷胱甘肽(GSH)與維生素E等機(jī)體自衛(wèi)解毒系統(tǒng)的解毒能力，必然對(duì)線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和溶酶體等細(xì)胞器造成嚴(yán)重?fù)p害，導(dǎo)致肝細(xì)胞變性、壞死。針對(duì)急性酒精肝損傷的致病機(jī)理，解酒藥物的研發(fā)多以抗氧化特性為切入點(diǎn)。更深層次的研究表明，超氧陰離子是自由基反應(yīng)的啟動(dòng)者，在過(guò)渡元素存在下，迅速轉(zhuǎn)化為羥自由基。羥自由基可直接參與線粒體膜脂層多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化的鏈鎖反應(yīng)，破壞膜脂的結(jié)構(gòu)，其終產(chǎn)物是小分子醛類(lèi)、氫過(guò)氧化物和烷烴氣等。上述產(chǎn)物又可誘發(fā)線粒體膨脹，改變膜的流動(dòng)性和ATP酶活性，這些變化都是破壞肝線粒體結(jié)構(gòu)與功能完整的因素。因此，羥自由基是危害肝線粒體結(jié)構(gòu)和功能核心因素。
傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)最具代表性的解酒藥物主要有葛花、葛根、人參、刺五加等，多為我國(guó)名貴中藥材。這些解酒藥物在制取工藝上多采用浸提法、浸潰法、滲漉法、回流法、蒸溜法等，其成分為混合物，有效成分不明確，更沒(méi)有以羥自由基作為靶點(diǎn)而篩選保肝因子的解酒藥物問(wèn)世。
隨著食品生物技術(shù)的快速發(fā)展，通過(guò)生物酶解技術(shù)從藥食同源的食材或農(nóng)作物加工副產(chǎn)品中獲得有醒酒生理活性的物質(zhì)，用以促進(jìn)肝臟酒精代謝的研究逐漸成為熱點(diǎn)。玉米肽能激活乙醇代謝酶，是近年來(lái)報(bào)道的較多的醒酒生物活性肽，日本學(xué)者Yamaguchi指出，玉米肽是通過(guò)提高血液中丙氨酸和亮氨酸的濃度產(chǎn)生穩(wěn)定的NAD+而有效的降低血液中乙醇的濃度，且玉米肽具有較強(qiáng)的抗氧化力，特別是其對(duì)羥自由基的抑制率可達(dá)50%，若能在玉米肽中添加協(xié)同效應(yīng)劑，在刺激組織內(nèi)乙醇代謝酶活性增加的同時(shí)促進(jìn)其抗氧化作用，則會(huì)大幅度提高其預(yù)防急性酒精肝損傷的效果。
多糖是一類(lèi)天然的大分子物質(zhì)，幾乎存在于所有的有機(jī)體中，包括動(dòng)物、植物(主要是高等植物)、微生物(細(xì)菌和真菌)及海藻?；钚远嗵鞘侵复嬖谟谏矬w中，能促進(jìn)或增強(qiáng)機(jī)體健康，具有控制細(xì)胞分化，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)衰老的一類(lèi)非特異性廣譜免疫調(diào)節(jié)劑，是一類(lèi)重要的生命物質(zhì)材料，是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和食品功能化學(xué)共同關(guān)注的焦點(diǎn)。研究表明，多糖可清除自由基，進(jìn)而防止肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化，對(duì)肝臟具有保護(hù)作用。通常功能性食品中的活性成分都是單因子的，我們的研究表明，將玉米抗氧化肽與多糖進(jìn)行復(fù)配，其對(duì)羥自由基的的抑制率可達(dá)100%。將二者提取工藝進(jìn)行有機(jī)結(jié)合，摸索出一套多糖-肽復(fù)合飲品的新工藝及其衍生的新產(chǎn)品，則能對(duì)玉米肽促進(jìn)酒精代謝產(chǎn)生一種補(bǔ)償性的效應(yīng)，國(guó)內(nèi)外尚未有此方面研究報(bào)道
發(fā)明內(nèi)容
: 本發(fā)明的目的是提供一種對(duì)酒精性肝損傷具有防護(hù)作用的活性多糖肽制備方法及復(fù)配， 即以苦瓜、玉米黃粉為原料，經(jīng)酶解、醇沉、離心分離、復(fù)配等工藝步驟制成，工藝簡(jiǎn)單，易于操作，提取含量高，易于吸收，功能性強(qiáng)，成本低，無(wú)任何化學(xué)添加劑。
本發(fā)明提供一種對(duì)酒精性肝損傷具有防護(hù)作用的活性多糖肽的制備方法，其特征在于步驟如下: A.多糖制備:將新鮮苦瓜洗凈去瓤，切片并放入50°C烘箱烘干，將烘干的苦瓜片粉碎成干粉，取苦瓜干粉，按照料液重量比1:40加入胞壁降解酶溶液，胞壁降解酶溶液內(nèi)含纖維素酶0.5%，果膠酶0.8%，余量為0.05mol/L、pH4.5的檸檬酸緩沖液；于50°C水浴浸提3h，提取液經(jīng)4500r/min離心IOmin后取上清液，將上清液減壓濃縮后用無(wú)水乙醇沉淀，將混合液7000r/min離心lOmin，收集沉淀復(fù)溶，加入活性炭澄清； B.玉米醇溶蛋白改性:將玉米黃粉顆粒用粉碎機(jī)粉碎，100目過(guò)篩，得到玉米醇溶蛋白粉，按料液重量比I: 12加入質(zhì)量濃度為40g/L的碳酸氫鈉溶液，于搖床上恒溫40°C進(jìn)行脫脂處理20分鐘，將玉米黃粉蛋白混合溶液于7000r/min離心lOmin，取上清液，減壓濃縮后的玉米醇溶蛋白利用0.0lmol/L、pH9.0的硼酸緩沖液進(jìn)行第一次酶解，水解條件為:溫度為37°C，乙醇體積比濃度為70%，胰蛋白酶質(zhì)量濃度為8%，水解時(shí)間為3h ； C.多糖肽制備:將蛋白水解液中的乙醇加熱完全蒸出，按3: I的重量比例取蛋白水解液及澄清后的多糖溶液混勻，利用中性蛋白酶進(jìn)行第二次酶解，水解條件為:55°C，pH為7.5，加酶量與蛋白的重量比為100:4 ;在此條件下水解50min，即獲得具有抗氧化活性的多糖肽復(fù)合液。
本發(fā)明提供一種多糖肽口服液的復(fù)配，其特征在于:在多糖肽復(fù)合液中加入蘋(píng)果酸、木糖醇或蜂蜜，三者重量比例為100:0.1:6，即可肽復(fù)合功能飲品。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn): 1、功能性食品中的功能因子通常比較單一，本發(fā)明以天然植物資源為原料，利用酶工程技術(shù)制備具有協(xié)同作用的多糖及肽雙功能因子，并進(jìn)行復(fù)配工藝優(yōu)化，增進(jìn)其抗氧化和促進(jìn)酒精代謝作用，是一種能醒酒保肝的功能性食品。
2、醒酒保肝活性成分大都來(lái)源于名貴中藥材如人參、葛根等，本發(fā)明從藥食同源的植物材料中制備多糖-肽復(fù)合物，成本低，無(wú)任何化學(xué)添加劑，功能特性強(qiáng)，更有市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，可帶動(dòng)苦瓜及玉米資源深加工利用。
具體實(shí)施方式
: 活性多糖肽的制備: 1、將新鮮苦瓜洗凈去瓤，切片并放入50°c烘箱烘干；將烘干的苦瓜片粉碎成干粉(過(guò)100目篩)。稱(chēng)取苦瓜干粉100克，按照料液比為1:40的比例加入胞壁降解酶溶液(內(nèi)含纖維素酶0.5%，果膠酶0.8%，余量為0.05mol/L、pH4.5的檸檬酸緩沖液)4L于50°C水浴浸提3h，提取液經(jīng)4500r/min離心IOmin后得上清液3.5L，將上清液減壓濃縮至350ml，用3倍體積無(wú)水乙醇沉淀后于7000r/min離心lOmin，收集沉淀復(fù)溶得多糖溶液100ml，向其中加入活性碳15g,脫色I(xiàn)Omin后再以10000r/min離心3min,可使多糖溶液澄清。
2、稱(chēng)取IOOg玉米醇溶蛋白粉，加入1.2L質(zhì)量濃度為40g/L的碳酸氫鈉溶液，于搖床上恒溫40°C進(jìn)行脫脂處理20分鐘，將玉米黃粉蛋白混合溶液于7000r/min離心lOmin，取上清液，減壓濃縮，稱(chēng)重。脫脂后獲得玉米醇溶蛋白粉，取玉米醇溶蛋白50克加入IOOOml0.lmol/L、pH 9.0的硼酸緩沖液進(jìn)行第一次醇相酶解，水解溫度為37°C，乙醇體積比濃度為70%，胰蛋白酶質(zhì)量濃度為8%，水解時(shí)間為3h。在此條件下，水解度可達(dá)到18.84%，蛋白降解率也可達(dá)到80%。經(jīng)過(guò)第一步水解，改性后玉米醇溶蛋白可變?yōu)樗苄浴?br> 3、將蛋白水解液加熱至70°C至乙醇完全蒸出，取蛋白水解液90 ml及澄清后的多糖溶液30 ml混勻，利用中性蛋白酶進(jìn)行第二次酶解，水解條件為:55°C，pH為7.5的條件下，加酶量與蛋白的重量比為100:4 ;在此條件下水解50min，此時(shí)蛋白降解率可達(dá)到95.55%。將水解液于4000rpm離心lOmin，即獲得具有抗氧化活性的多糖肽復(fù)合液。
多糖肽口服液的復(fù)配: 在IOOml多糖肽復(fù)合液中，加入蘋(píng)果酸0.1克、木糖醇/蜂蜜6克，即可獲得解酒保肝多糖肽復(fù)合功能飲品。
工藝實(shí)施結(jié)果 本發(fā)明獲得的多糖口服液，蛋白降解率可達(dá)到95.55%，多糖與抗氧化肽的濃度比為I: 3，對(duì)羥自由基的抑制率可達(dá)100%，可促進(jìn)酒精代謝及防治肝細(xì)胞線粒體氧化損傷。
權(quán)利要求
1.一種對(duì)酒精性肝損傷具有防護(hù)作用的活性多糖肽的制備方法，其特征在于步驟如下: A.多糖制備:將新鮮苦瓜洗凈去瓤，切片并放入50°C烘箱烘干，將烘干的苦瓜片粉碎成干粉，取苦瓜干粉，按照料液重量比1: 40加入胞壁降解酶溶液，胞壁降解酶溶液內(nèi)含纖維素酶0.5%，果膠酶0.8%，余量為0.05mol/L、pH4.5的檸檬酸緩沖液；于50°C水浴浸提3h，提取液經(jīng)4500r/min離心IOmin后取上清液，將上清液減壓濃縮后用無(wú)水乙醇沉淀，將混合液7000r/min離心lOmin，收集沉淀復(fù)溶，加入活性炭澄清； B.玉米醇溶蛋白改性:將玉米黃粉顆粒用粉碎機(jī)粉碎，100目過(guò)篩，得到玉米醇溶蛋白粉，按料液重量比1: 12加入質(zhì)量濃度為40g/L的碳酸氫鈉溶液，于搖床上恒溫40°C進(jìn)行脫脂處理20分鐘,將玉米黃粉蛋白混合溶液于7000r/min離心IOmin,取上清液,減壓濃縮后的玉米醇溶蛋白利用0.0lmol/L、pH9.0的硼酸緩沖液進(jìn)行第一次酶解，水解條件為:溫度為37°C，乙醇體積比濃度為70%，胰蛋白酶質(zhì)量濃度為8%，水解時(shí)間為3h ； C.多糖肽制備:將蛋白水解液中的乙醇加熱完全蒸出，按3: I的重量比例取蛋白水解液及澄清后的多糖溶液混勻，利用中性蛋白酶進(jìn)行第二次酶解，水解條件為:55°C，pH為7.5，加酶量與蛋白的重量比為100:4 ;在此條件下水解50min，即獲得具有抗氧化活性的多糖肽復(fù)合液。
2.一種多糖肽口服液的復(fù)配，其特征在于:在多糖肽復(fù)合液中加入蘋(píng)果酸、木糖醇或蜂蜜，三者重量比例為100:0.1:6，即可肽復(fù)合功能飲品。
全文摘要
本發(fā)明提供一種對(duì)酒精性肝損傷具有防護(hù)作用的活性多糖肽的制備方法及復(fù)配，其特征是以新鮮苦瓜和玉米黃粉經(jīng)粉碎、醇沉、脫脂、離心、復(fù)合酶解、離心分離等工藝制備多糖肽，其中多糖與玉米肽的比例為1∶3，再經(jīng)蘋(píng)果酸及木糖醇口味調(diào)配即可獲得多糖肽解酒保肝口服液，在提高血液中丙氨酸和亮氨酸濃度進(jìn)而產(chǎn)生穩(wěn)定的NAD+，從而有效降低血液中乙醇濃度基礎(chǔ)上，對(duì)羥自由基抑制率達(dá)100%，可防治肝細(xì)胞線粒體氧化損傷。具有工藝簡(jiǎn)單、易于操作、提取含量高、易于吸收、功能性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，具有較好的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)A23L1/09GK103211145SQ20131010798
公開(kāi)日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月1日
發(fā)明者陳紅漫, 涂年影, 周銳, 叢咪, 闞國(guó)仕, 任大明 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)