專利名稱：從西藏靈菇中分離的一株嗜熱鏈球菌及分離方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)為革蘭氏陽性菌,通常與保加利亞乳桿菌共同用作酸奶的發(fā)酵劑，是酸奶發(fā)酵劑的重要組成菌株，它可通過發(fā)酵牛乳產(chǎn)生乳酸、胞外多糖以及特征性風(fēng)味物質(zhì)，賦予了酸奶產(chǎn)品獨特的質(zhì)地和風(fēng)味。嗜熱鏈球菌發(fā)酵特性的差異直接影響到酸奶產(chǎn)品的質(zhì)量，而且不同菌株的發(fā)酵特性也存在著顯著差異，所以篩選具有優(yōu)良特性的嗜熱鏈球菌是成功制備酸奶發(fā)酵劑的基礎(chǔ)。乳業(yè)發(fā)達(dá)的西方國家對嗜熱鏈球菌濃縮型乳酸菌發(fā)酵劑的研制，目前已實現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)。而國內(nèi)對嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑制備不完善、菌株活力差、生產(chǎn)發(fā)酵乳質(zhì)地差等問題導(dǎo)致產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用程度不高。隨著我國乳品工業(yè)化的發(fā)展，對嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑的需求將日漸增大，其應(yīng)用前景廣闊。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是:提供從西藏靈燕中分離的一株嗜熱鏈球菌(StreptococcusthermophiIus)HMR0705-117及分離方法及應(yīng)用，它為生產(chǎn)酸乳制品提供了一種高效、優(yōu)質(zhì)菌種。本發(fā)明的嗜熱鏈球菌HMR0705-117生物學(xué)特性是:在M17培養(yǎng)基平板上劃線分離，42°C培養(yǎng)48h，菌落為圓形，凸起，邊緣整齊，顏色乳白色，挑取能拉絲，不透明，表面濕潤光滑，菌體呈球狀，多排列成長短不一的鏈狀，不產(chǎn)芽孢。過氧化氫酶實驗陰性，革蘭氏染色陽性，硝酸鹽還原實驗陰 性，無運動性、需氧或兼性厭氧生長，不液化明膠，不產(chǎn)生硫化氫，吲哚實驗陰性。15°C不生長。最適生長溫度為37-45°C;最高和最低初始生長pH為9.0和
4.0，最適生長初始pH為6.5-7.0 ;在42°C條件下用M17培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)的延遲期相對較短，培養(yǎng)2小時即進(jìn)入對數(shù)生長期，10小時達(dá)到穩(wěn)定期。所述嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑中的所述嗜熱鏈球菌TIMR0705-117的含量為109-10lclcfu/mL。本發(fā)明的方法是:
將嗜熱鏈球菌TIMR0705-117接種于M17培養(yǎng)液中，在42°C條件下培養(yǎng)8_10小時進(jìn)行活化，連續(xù)活化兩代，獲得活化培養(yǎng)液；將所述活化培養(yǎng)液按體積百分含量為2% — 4%的量接種于M17培養(yǎng)液中，在42°C條件下培養(yǎng)8 —10小時，4°C條件下6000r/min離心IOminJf沉淀用無菌乳懸浮。本發(fā)明的應(yīng)用是:作為酸乳發(fā)酵劑。在作為酸乳發(fā)酵劑時，按體積百分含量為3—5%的量向原料乳中加入所述嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑，并按體積百分含量為3—5%的量向所述原料乳中加入與所述嗜熱鏈球菌共生的保加利亞乳桿菌發(fā)酵劑后進(jìn)行發(fā)酵，獲得滴定酸度以乳酸計0.6—0.7的發(fā)酵液即為所述發(fā)酵食品。嗜熱鏈球菌I1MR0705-117與所述保加利亞乳桿菌發(fā)酵劑中所述保加利亞乳桿菌加入所述原料乳中的體積比例為1:1。所述嗜熱鏈球菌共生的保加利亞乳桿菌發(fā)酵劑中的保加利亞乳桿菌具體為中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)的保藏編號為6047的德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus);其在所述保加利亞乳桿菌發(fā)酵劑中的活菌含量為101Qcfu/mL。本發(fā)明的有益效果是:嗜熱鏈球菌在42 °C條件下用Ml7培養(yǎng)液發(fā)酵30h產(chǎn)胞外多糖的量達(dá)到最高值為lllmg/L ;在原料乳鮮奶中按體積百分含量為3 — 5%添加含109cfu/mL所述嗜熱鏈球菌HMR0705-117的工作發(fā)酵劑和相同量的含保加利亞乳桿菌101(lCfu/mL的發(fā)酵劑獲得的以乳酸計酸度為0.6—0.7的發(fā)酵酸乳，與對照樣(添加商品發(fā)酵劑)相比，在冷藏期間(第I天一第28天)，粘度和凝膠強(qiáng)度明顯提高，持水力在第21天以后也明顯提高。利用本發(fā)明所提供的菌株制備發(fā)酵酸乳可降低增稠劑和穩(wěn)定劑的用量，本發(fā)明在發(fā)酵食品領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實施例中所用培養(yǎng)基的制備方法如下:
還原脫脂乳培養(yǎng)基(RSM):將脫脂乳粉按照11% (W/V)用水還原制成脫脂乳培養(yǎng)基，115。。滅菌 15min。MRS培養(yǎng)基:蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，檸檬酸銨2.0g，葡萄糖20.0g,吐溫80 1.0mL,乙酸鈉5.0 g,磷酸氫二鉀2.0g,硫酸鎂0.5g,硫酸錳0.25g,蒸餾水1L。將各成分加入水中加熱溶解，調(diào)pH6.6，121°C滅菌15min，冷卻備用。純化增菌培養(yǎng)基(M17培養(yǎng)液):大豆蛋白胨5.0g，蛋白胨2.5g，酵母提取物5.0g，酪蛋白胨2.5g，抗壞血酸0.5g，牛肉浸膏5.0g, β -甘油磷酸二鈉19g，MgS04 -7H20 0.25g，蒸餾水1L。將各成分加入水中加熱溶解，調(diào)pH7.0,121°C滅菌15min，冷卻備用。純化培養(yǎng)基平板(M17培養(yǎng)基平板):上述IL的M17培養(yǎng)液中加入瓊脂15g后121 °C滅菌15min，冷卻備用。商品發(fā)酵劑:DaniscoYO-MIX 300。實施例1:
一、菌株的分離
本發(fā)明從中國傳統(tǒng)發(fā)酵制品西藏靈菇的微生物群落中分離篩選菌株。將西藏靈菇接種至RSM中，于42°C培養(yǎng)8h至牛乳凝固。取凝乳逐級稀釋涂布于M17培養(yǎng)基平板，42°C培養(yǎng)48-72h，待菌落形成后，用接種環(huán)或接種針挑取可疑菌落，接種于M17培養(yǎng)液中，置42°C培養(yǎng)8-10h。待分離菌株生長良好后，再次劃線接種于M17培養(yǎng)基平板，置42°C培養(yǎng)48-72h。將培養(yǎng)好的單菌落接種M17培養(yǎng)液純化增菌培養(yǎng)的同時進(jìn)行涂片，篩選出多株革蘭氏陽性、過氧化氫酶實驗陰性雙球狀或鏈狀排列的乳酸球菌。純 化后的菌株接種到M17培養(yǎng)液培養(yǎng)后，加入20%甘油，_80°C冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 二、菌株的鑒定
1、形態(tài)特征
將步驟一分離獲得的菌株TMR0705-117在M17培養(yǎng)基平板上劃線分離，42°C培養(yǎng)48h，菌株生長良好。菌落為圓形，凸起，邊緣整齊，顏色乳白色，挑取能拉絲，不透明，表面濕潤光滑。菌體呈球狀，多排列成長短不一的鏈狀，不產(chǎn)芽孢。2、生理生化試驗
步驟一分離獲得的菌株HMR0705-117為H202酶實驗陰性，革蘭氏染色陽性，硝酸鹽還原實驗陰性，無運動性、需氧或兼性厭氧生長，不液化明膠，不產(chǎn)生硫化氫，吲哚實驗陰性。3、培養(yǎng)特性
步驟一分離獲得的菌株TMR0705-117在45°C生長良好，15°C不生長。最適生長溫度為37— 42°C ;最高和最低初始生長pH為9.0和4.0，最適生長初始pH為6.5-7.0 ；菌株TIMR0705-117在42°C條件下用M17培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)的延遲期相對較短，培養(yǎng)2小時即進(jìn)入對數(shù)生長期，10小時達(dá)到穩(wěn)定期；產(chǎn)生的胞外多糖在42°C條件下用M17培養(yǎng)液發(fā)酵培養(yǎng)30小時達(dá)到最高值，為lllmg/L。4、糖發(fā)酵試驗鑒定菌株
挑取少許菌株HMR0705-117培養(yǎng)物劃線于M17培養(yǎng)基平板是上42°C培養(yǎng)48-72小時。從平板上挑取單菌落，接入API 50CH液體培養(yǎng)基(生物梅里埃中國有限公司，API 50CHMedium)中制成菌懸液，接入API 50 CH鑒定試劑條(生物梅里埃中國有限公司)，42°C培養(yǎng)48-72小時，記錄菌株對49種碳水化合物的發(fā)酵結(jié)果，將其輸入梅里埃公司的鑒定軟件API LAB PLUS，反應(yīng)結(jié)果如表I所示。經(jīng)數(shù)據(jù)庫查詢，菌株HMR0705-117與嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)具有 99.9% 的相似性，因此，將菌株 I1MR0705-117 初步鑒定為嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)。表1.菌株 I1MR0705-117 API 鑒定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種西藏靈燕中分離的一株嗜熱鏈球菌，其特征是:在M17培養(yǎng)基平板上劃線分離，42°C培養(yǎng)48h，菌落為圓形，凸起，邊緣整齊，顏色乳白色，挑取能拉絲，不透明，表面濕潤光滑，菌體呈球狀，多排列成長短不一的鏈狀，不產(chǎn)芽孢；過氧化氫酶實驗陰性，革蘭氏染色陽性，硝酸鹽還原實驗陰性，無運動性、需氧或兼性厭氧生長，不液化明膠，不產(chǎn)生硫化氫，吲哚實驗陰性；15°C不生長；生長溫度為37-45°C ;最高和最低初始生長pH為9.0和4.0,生長初始PH為6.5-7.0。
2.—種西藏靈燕中分離的一株嗜熱鏈球菌分離方法，其方法是:將嗜熱鏈球菌TMR0705-117接種于M17培養(yǎng)液中，在42°C條件下培養(yǎng)8_10小時進(jìn)行活化，連續(xù)活化兩代，獲得活化培養(yǎng)液；將所述活化培養(yǎng)液按體積百分含量為2% — 4%的量接種于M17培養(yǎng)液中，在42°C條件下培養(yǎng) 8—10小時，4°C條件下6000r/min離心IOmin,將沉淀用無菌乳懸浮。
3.如權(quán)利要求1所述的一種西藏靈菇中分離的一株嗜熱鏈球菌應(yīng)用:其應(yīng)用是:作為酸乳發(fā)酵劑。
4.如權(quán)利要求1所述的一種西藏靈菇中分離的一株嗜熱鏈球菌，其特征是:在42°C條件下用M17培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)2小時即進(jìn)入對數(shù)生長期，10小時達(dá)到穩(wěn)定期。
全文摘要
一種從西藏靈菇中分離的一株嗜熱鏈球菌及分離方法及應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，其特征是在M17培養(yǎng)基平板上劃線分離，42℃培養(yǎng)48h，菌落為圓形，凸起，邊緣整齊，顏色乳白色，挑取能拉絲，不透明，表面濕潤光滑，菌體呈球狀，多排列成長短不一的鏈狀，不產(chǎn)芽孢；過氧化氫酶實驗陰性，革蘭氏染色陽性，硝酸鹽還原實驗陰性，無運動性、需氧或兼性厭氧生長，不液化明膠，不產(chǎn)生硫化氫，吲哚實驗陰性；15℃不生長；生長溫度為37-45℃；最高和最低初始生長pH為9.0和4.0，生長初始pH為6.5-7.0。有益效果是嗜熱鏈球菌在42℃條件下用M17培養(yǎng)液發(fā)酵30h產(chǎn)胞外多糖的量達(dá)到最高值為111mg/L；利用本發(fā)明所提供的菌株制備發(fā)酵酸乳可降低增稠劑和穩(wěn)定劑的用量。
文檔編號C12N1/02GK103173388SQ20131008279
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月15日
發(fā)明者南喜平, 李盛鈺, 李達(dá), 張雪, 趙玉娟, 張莉, 張健, 牛春華 申請人:吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院