扁平上皮癌預(yù)防劑、以及扁平上皮癌模型動物及其制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種對由念珠菌感染引起而發(fā)展的扁平上皮癌的預(yù)防有效的發(fā)酵物。本發(fā)明提供一種由念珠菌感染引起的扁平上皮癌模型動物及其制作方法，與以往的模型動物相比波動少，能更適當(dāng)?shù)剡M行藥效評價。一種由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，其以用保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得的發(fā)酵物作為有效成分。
【專利說明】扁平上皮癌預(yù)防劑、以及扁平上皮癌模型動物及其制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑、以及扁平上皮癌模型動物的制作方法、該扁平上皮癌模型動物及利用該模型動物的篩選方法。
【背景技術(shù)】
[0002]口腔癌、食道癌是源自復(fù)層扁平上皮的癌，特別地食道癌是難治性的癌，其死亡率高。另一方面，已知人白色念珠菌（C. albicans)是從健康人的口腔內(nèi)被檢測出的常見菌，但是其在臟器移植或大手術(shù)后的患者、肝硬化癥或糖尿病患者這樣的免疫機能衰退的患者中，常常會引起嚴(yán)重的口腔念珠菌病、食道念珠菌病。此外，伴隨臥床不起的老年人增加，陷于低營養(yǎng)狀態(tài)，免疫機能降低的同時感染的機會出現(xiàn)增加也成為問題。因此，在免疫機能降低的患者、老年人中，由于易于感染人白色念珠菌，會招致深部真菌癥，進而發(fā)展為惡性腫瘤的嚴(yán)重結(jié)果，其成為重大的問題。
[0003]因此，期望提供抑制從念珠菌病向扁平上皮癌的發(fā)展，預(yù)防扁平上皮癌發(fā)病的醫(yī)藥品、食品。
[0004]另一方面，已知含 有格氏乳桿菌（Lactobacillusgasseri)的發(fā)酵乳具有對幽門螺桿菌的除菌效果，具有基于此的胃炎、胃潰瘍的預(yù)防效果（專利文獻2和3)。但是，關(guān)于對念珠菌感染的效果完全不知道。
[0005]此外，通常在對疾病有效的醫(yī)藥品、食品的篩選中，制作疾病模型是有效的，關(guān)于扁平上皮癌的模型動物，報告了在Aldh2缺失哺乳動物（人除外）的皮內(nèi)或皮下給予乙醇和/或乙醒而制成的扁平上皮癌模型動物（專利文獻I)。但是，該扁平上皮癌模型動物，是以在與醇代謝相關(guān)的ALDH2基因為非活性型的人中高頻率發(fā)病的扁平上皮癌的發(fā)病機制的闡明、治療方法的開發(fā)為目的的動物模型，其與伴隨念珠菌感染的扁平上皮癌的發(fā)病是不同的動物模型。
[0006]本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)在通過給予阿脲誘發(fā)糖尿病的WBN/Kob大鼠的前胃中發(fā)生了伴隨重度感染性慢性炎癥的扁平上皮癌（非專利文獻I)。但是該模型中，對于阿脲誘發(fā)糖尿病大鼠的前胃增殖性病變的程度、發(fā)病率而言個體差異大，為了適當(dāng)?shù)剡M行抑制從念珠菌病向扁平上皮癌的發(fā)展的醫(yī)藥品、食品的篩選，需要確立波動更少的疾病模型。
[0007]現(xiàn)有技術(shù)文獻
[0008]專利文獻
[0009]專利文獻I:日本特開2005-110601號公報
[0010]專利文獻2:日本專利第4509250號
[0011]專利文獻3:日本專利第3046303號
[0012]非專利文獻
[0013]非專利文獻I:Sano T, Ozaki K, Kodama Y, Matsuura T, Narama I. , Toxicol.Pathol. , vol. 37,p.790-798 (2009).
【發(fā)明內(nèi)容】

[0014]本發(fā)明的課題在于提供對由念珠菌感染引起而發(fā)展的扁平上皮癌的預(yù)防有效的發(fā)酵物。進而本發(fā)明的課題在于提供由念珠菌感染引起的扁平上皮癌模型動物及其制作方法，與以往的模型動物相比波動少，能更適當(dāng)?shù)剡M行藥效評價。
[0015]本發(fā)明人等為了解決上述課題進行了認(rèn)真深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過對大鼠給予阿脲誘發(fā)糖尿病之后，立即強制經(jīng)口給予人白色念珠菌，從而在大鼠的前胃中，能夠在早期誘發(fā)由念珠菌感染引起的伴隨慢性炎癥的增殖性病變，制成該病變的個體差異小的扁平上皮癌模型動物。此外，發(fā)現(xiàn)用保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus)、嗜熱鏈球菌(S.thermophilus)和格氏乳桿菌(L.gasseri)將奶進行發(fā)酵的發(fā)酵物在抑制由人白色念珠菌感染引起的炎癥的同時，抑制增殖性病變的發(fā)展，對于由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防是有用的。
[0016]即,本發(fā)明包含以下內(nèi)容。
[0017][I] 一種由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，其特征在于，以用保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得的發(fā)酵物作為有效成分。
[0018][2]根據(jù)上述[I]記載的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，其中，發(fā)酵物是將保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌與奶配合進行發(fā)酵之后配合格氏乳桿菌而得的發(fā)酵乳。
[0019][3]根據(jù)上述[I]或[2]記載的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，其中，格氏乳桿菌是格氏乳桿菌0LL2716株(FERM BP-6999)。
[0020][4]根據(jù)上述[I]?[3]中任一項記載的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防齊U，其中，扁平上皮是口腔和/或食道的扁平上皮。
[0021][5]用保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得到的發(fā)酵物在制造由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑中的應(yīng)用。
[0022][6] 一種發(fā)酵物，其用于預(yù)防由念珠菌感染引起的扁平上皮癌，是用保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得到的。
[0023][7] 一種由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防方法，其特征在于，給予或攝取用保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得的發(fā)酵物。
[0024][8] 一種扁平上皮癌模型動物的制作方法，其特征在于，包含對糖尿病發(fā)病模型動物強制經(jīng)口給予人白色念珠菌的工序，所述糖尿病發(fā)病模型動物是通過給予糖尿病誘發(fā)物質(zhì)而誘發(fā)糖尿病的。
[0025][9]根據(jù)上述[8]記載的制作方法，其中，動物是大鼠。
[0026][10]通過上述[8]或[9]記載的方法而制作的扁平上皮癌模型動物。
[0027][11] 一種扁平上皮癌的預(yù)防劑和/或治療劑的篩選方法，其特征在于，包含對上述[10]記載的扁平上皮癌模型動物給予被檢物質(zhì)，觀察扁平上皮癌病變部位的變化的工序。
[0028]根據(jù)本發(fā)明的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，能夠有效抑制念珠菌病和從念珠菌病向扁平上皮癌的發(fā)展。此外，根據(jù)本發(fā)明，能夠制成扁平上皮癌模型動物，該模型動物能夠在病變的程度、發(fā)生率方面?zhèn)€體差異小地再現(xiàn)向由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的發(fā)展，通過使用該模型，能夠篩選對扁平上皮癌的治療有用的物質(zhì)、由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，此外，能夠用于由人白色念珠菌感染引起的扁平上皮癌發(fā)病機制的闡明、新的扁平上皮癌的治療和預(yù)防方法的研究。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029]圖1(a)是C組（對無處置大鼠給予人白色念珠菌的組）的前胃，和（b)是AC組(對阿脲誘發(fā)糖尿病大鼠給予人白色念珠菌的組）的前胃。對于扁平上皮增生而言AC組比C組高。在AC組的上皮表層部，發(fā)現(xiàn)伴隨人白色念珠菌感染的高度的化膿性炎癥。
[0030]圖2是確認(rèn)了最初期的扁平上皮癌的一個個體的病變部位。圖上方是增生部，從該部份的底部開始不規(guī)則的扁平上皮細胞索向下方擴張。用虛線包圍有箭頭的部位是浸潤到粘膜肌層的癌細胞的呈現(xiàn)部分（先進部分）。
[0031]圖3(a)是DC組（對阿脲誘發(fā)糖尿病大鼠給予人白色念珠菌的組）的前胃病變部位，和（b)是DC+LG21組（對阿脲誘發(fā)糖尿病大鼠給予人白色念珠菌和LG21的組）的前胃病變部位。對于扁平上皮增生而言，DC+LG21組比DC組輕。在DC組的上皮表層部發(fā)現(xiàn)伴隨人白色念珠菌感染的高度的化膿性炎癥，而在DC+LG21組中是輕度的。
[0032]圖4 (a)是DC組的細胞增殖標(biāo)記物Ki_67的免疫染色圖像，和（b)是DC+LG21組的細胞增殖標(biāo)記物Ki-67的免疫染色圖像。Ki-67在增殖的扁平上皮細胞的核內(nèi)是陽性，與DC組相比DC+LG21組 的陽性率低。
【具體實施方式】
[0033]以下，具體說明本發(fā)明，但本發(fā)明不局限于以下敘述的各個方式。
[0034](由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑）
[0035]作為本發(fā)明的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑的有效成分的發(fā)酵物是用保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得的發(fā)酵物。
[0036]該發(fā)酵物除了將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌配合（添加）到奶進行發(fā)酵之外，也可以是將保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌配合（添加）到奶進行發(fā)酵之后配合（添加）格氏乳桿菌進一步發(fā)酵而得的發(fā)酵物。
[0037]其中，作為發(fā)酵原料的奶，沒有特別限制，通?？墒褂脛游锬蹋ㄔ醋耘Ｄ獭⒀蚰?、山羊奶、水牛奶等哺乳類的奶）等。應(yīng)予說明，該奶并非僅由生奶、殺菌奶構(gòu)成，在不阻礙發(fā)酵的范圍內(nèi)，也可以配合（添加）還原奶原料（黃油、奶油、脫脂奶、全脂濃縮奶、脫脂濃縮奶、全脂奶粉、脫脂奶粉、煉乳等）、根據(jù)需要使用的其它食品、食品添加劑。
[0038]作為保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌，可優(yōu)選使用發(fā)酵乳制造中通常使用的、以用CODEX標(biāo)準(zhǔn)將酸奶發(fā)酵劑標(biāo)準(zhǔn)化的保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的混合發(fā)酵劑為基礎(chǔ)的發(fā)酵劑。例如，可舉出德氏乳桿菌保加利亞種（L. delbrueckii subsp. Bulgaricus) JCM1002T和嗜熱鏈球菌ATCC19258等。此外，也可以添加鏈球菌屬（Str印tococcus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)、片球菌屬（Pediococcus)等乳酸菌、雙歧桿菌、酵母等。
[0039]此外，作為格氏乳桿菌，沒有特別限制，例如可舉出格氏乳桿菌0LL2716株。應(yīng)予說明，格氏乳桿菌0LL2716株，如上述專利文獻3記載所示，在1999年5月24日（原保藏日)以保藏編號FERM BP-6999基于布達佩斯條約國際保藏于獨立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心（日本國茨城縣筑波市東1-1-1筑波中心中央第6)。該保藏株由1999年5月24日的微工研菌寄第P-17399號的國內(nèi)保藏(原保藏)，于2000年I月14日移管為基于布達佩斯條約的國際保藏。
[0040]本發(fā)明的發(fā)酵物，如后文實施例所示，抑制由人白色念珠菌感染引起的炎癥，有意義地抑制扁平上皮細胞的癌化。因此，本發(fā)明的發(fā)酵物能夠作為由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑使用。
[0041]應(yīng)予說明，該使用是在人或者非人動物中的使用，此外可以是治療性使用也可以是非治療性使用。其中，“非治療性”是指不包括醫(yī)療行為的概念，即不包括對人進行手術(shù)、治療或診斷的方法的概念，更具體的，是指不包括醫(yī)師或接受醫(yī)師指示的人對人實施手術(shù)、治療或診斷的方法的概念。
[0042]本發(fā)明中，“由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防”是指，抑制由感染念珠菌優(yōu)選人白色念珠菌的扁平上皮細胞構(gòu)成的組織的癌化而預(yù)防扁平上皮癌的發(fā)病，即抑制從念珠菌病向扁平上皮癌的發(fā)展，而且是指抑制(預(yù)防)或治療扁平上皮細胞癌化之前的前癌病變、即由念珠菌感染引起的炎癥(念珠菌病)。其中，由扁平上皮細胞構(gòu)成的組織可舉出口腔、食道、咽喉、喉頭、肛門、皮膚等，本發(fā)明中優(yōu)選舉出作為上部消化道的口腔、食道、咽喉、喉頭。
[0043]應(yīng)予說明，本發(fā)明中“扁平上皮癌”除形態(tài)學(xué)上能夠識別的典型的扁平上皮癌之夕卜，還包括扁平上皮的增生病變。
[0044]因此，本發(fā)明的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防中，例如除了 口腔癌、咽喉癌、喉頭癌、食道癌的預(yù)防之外，還包含急性口腔念珠菌病、急性假膜性念珠菌病、鵝口瘡、急性萎縮性念珠菌病、慢性口腔念珠菌病、慢性萎縮性口內(nèi)炎、慢性肥厚性念珠菌病、慢性粘膜皮膚念珠菌病、正中菱形舌炎等口腔內(nèi)真菌病、食道念珠菌病等的抑制(預(yù)防)或治療。
[0045]本發(fā)明的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，可以是將其自身對包括人的動物進行攝取或給予時發(fā)揮抑制感染念珠菌的扁平上皮細胞的癌化、抑制從念珠菌病向扁平上皮癌的發(fā)展的效果的人或者動物用的醫(yī)藥品、食品，或者也可以是與該醫(yī)藥品或食品配合而使用的材料或制劑。其中，該食品中包含以由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防、念珠菌病的預(yù)防或治療為宗旨、根據(jù)需要表示其主旨的功能性食品、患者用食品、特定保健用食品。
[0046]作為含有本發(fā)明的發(fā)酵物的上述醫(yī)藥品的給予形式，可以根據(jù)預(yù)防目的、改善目的、給予途徑等選擇劑型，例如可舉出片劑、包衣片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑、注射劑、栓劑、浸膏劑、煎劑、酊劑等。這些各種制劑，可按照常規(guī)方法根據(jù)需要對主藥使用填充劑、增量劑、賦形劑、粘合劑、保濕劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑、著色劑、矯味矯臭劑、溶解輔助劑、混懸劑、包衣劑等醫(yī)藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】通常使用的已知的輔料進行制劑化。此外，該醫(yī)藥制劑中也可以含有著色劑、保藏劑、香料、風(fēng)味劑、甜味劑等、其它醫(yī)藥品。
[0047]作為含有本發(fā)明的發(fā)酵物的上述食品的形式可以是牛奶、清涼飲料、發(fā)酵乳、酸奶、奶酪、面包、餅干、薄脆餅干、匹薩、調(diào)制奶粉、流食、患者用食品、幼兒用奶粉等食品、哺乳女性用奶粉等食品、營養(yǎng)食品等任一形式，關(guān)于其性狀，可以是通常使用的飲料食品的狀態(tài)例如固體狀(粉末、顆粒狀或其它)、糊狀、液狀或混懸狀的任一種。[0048]上述食品，可以直接使用本發(fā)明的發(fā)酵物，或者與其它食品或食品成分混合等按照通常的飲料食品組合物的常規(guī)方法制造。
[0049]作為其它食品成分，沒有特別是限制，例如可舉出水、蛋白質(zhì)、糖質(zhì)、脂質(zhì)、維生素類、礦物質(zhì)類、有機酸、有機堿、果汁、調(diào)味劑類等。其中，作為蛋白質(zhì)，例如可舉出全脂奶粉、脫脂奶粉、部分脫脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白質(zhì)、乳清蛋白質(zhì)濃縮物、乳清蛋白質(zhì)分離物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、K-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白、乳鐵蛋白、大豆蛋白質(zhì)、雞蛋蛋白質(zhì)、肉蛋白質(zhì)等動植物性蛋白質(zhì)、它們的水解物；黃油、乳清礦物質(zhì)、奶油、乳清、非蛋白態(tài)氮、唾液酸、磷脂類、乳糖等各種源自奶的成分等。作為糖質(zhì)，可舉出糖類、加工淀粉（除了糊精之外，可溶性淀粉、英國淀粉、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等）、食物纖維等。作為脂質(zhì)，例如可舉出豬油、魚油等、它們的分提油、氫化油、酯交換油等動物性油脂；棕櫚油、紅花油、玉米油、菜籽油、椰子油、它們的分提油、氫化油、酯交換油等植物性油脂等。作為維生素類，例如可列舉出維生素Α、胡蘿卜素類、維生素B群、維生素C、維生素D群、維生素Ε、維生素K群、維生素P、維生素Q、煙酸（niacin)、煙酸（nicotinic acid)、泛酸、生物素、肌醇、膽堿、葉酸等，作為礦物質(zhì)類，例如可舉出鈣、鉀、鎂、鈉、銅、鐵、錳、鋅、硒、乳清礦物質(zhì)等。作為有機酸，例如可舉出蘋果酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸等?？梢詫⑦@些成分組合2種以上進行使用，也可以使用合成品和/或大量含有它們的食品。
[0050]上述醫(yī)藥品或食品中本發(fā)明的發(fā)酵物的含量，根據(jù)其目的、用途可以任意確定。例如，以干燥品換算，相對于總量通常以0.001~100重量％的含量配合，優(yōu)選以0.01~100重量％、進一步優(yōu)選以O(shè). I~100重量％的含量配合。此外，作為發(fā)酵物中的保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的菌數(shù)，優(yōu)選二者的乳酸菌數(shù)總計為每ImL是1000萬（I X IO7個）以上。此外，優(yōu)選格氏乳桿菌為每ImL是100萬（I X IO6個）以上，更優(yōu)選格氏乳桿菌為每ImL是1000萬（I X IO7個）以上。
[0051]上述醫(yī)藥品或食品的給予或攝取量因被檢樣本的生物種類、年齡、體重、給予或攝取次數(shù)等不同而不同，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員的裁量可在大范圍內(nèi)進行變更。例如，作為本發(fā)明的發(fā)酵物（干燥物換算），可以是0.01~10000mg/kg體重/day，優(yōu)選為0. 05~6000mg/kg體重/day,進一步優(yōu)選為0. 3~5000mg/kg體重/day。此外,給予或攝取次數(shù)可以是單次也可以是反復(fù)，優(yōu)選反復(fù)給予或攝取。
[0052]此外，作為給予或攝取對象，只要是需要其的人即可，沒有特別限制，例如可舉出口腔念珠菌病、食道念珠菌病等患者、或其后備軍等。
[0053](扁平上皮癌模型動物）
[0054]本發(fā)明的扁平上皮癌模型動物的制作中使用的“動物”是指，例如小鼠、大鼠，關(guān)于動物的性別、周齡、體重等，只要能夠應(yīng)用于作為目的的篩選則可沒有特別限制。已知人的口腔、舌、食道由復(fù)層扁平上皮覆蓋，人·猴·狗中僅有一部分發(fā)生角質(zhì)化，但小鼠·大鼠中直至前胃的全部區(qū)域內(nèi)完全角質(zhì)化（日藥理志，131，373-377，2008)。本發(fā)明的特征在于在小鼠、大鼠的前胃形成病變。作為該“動物”，例如可舉出WBN/Kob大鼠、F344大鼠等。
[0055] 本發(fā)明的扁平上皮癌模型動物的制作，其特征在于對糖尿病動物強制經(jīng)口給予人白色念珠菌。作為糖尿病動物，例如除了對大鼠（正常大鼠）、小鼠（正常小鼠）給予阿脲、鏈脲佐菌素等藥物誘發(fā)糖尿病的動物以外，也可以使用遺傳性糖尿病動物，但由于給予糖尿病誘發(fā)物質(zhì)而發(fā)病的能夠?qū)l(fā)病時期、重癥度均一化，因此優(yōu)選，由于使用利用作為糖尿病誘發(fā)物質(zhì)的阿脲而發(fā)病的糖尿病大鼠不是遺傳毒性致癌物質(zhì)，因此優(yōu)選。糖尿病是否發(fā)病的確認(rèn)，可用測定動物的血糖、尿糖等通常的方法進行確認(rèn)。
[0056]本發(fā)明其特征在于，誘發(fā)糖尿病之后，強制經(jīng)口給予人白色念珠菌。優(yōu)選將人白色念珠菌的樣品混懸于生理食鹽水進行經(jīng)口給予。本發(fā)明中對于強制經(jīng)口給予的人白色念珠菌的菌數(shù)、給予頻率、給予間隔而言只要是人白色念珠菌固定于動物的扁平上皮細胞即可，因使用的動物的生物種類、年齡、體重、給予途徑、給予次數(shù)等不同而不同，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員的裁量能夠大范圍進行變更。例如，對10周齡的WBN/Kob大鼠給予時，可舉出將IX 16個/mL以上、優(yōu)選I X 17個/mL以上的菌數(shù)以每周I次~每周4次的頻率進行強制經(jīng)口給予等。
[0057]本發(fā)明的扁平上皮癌模型動物的制作中，通常從給予開始起3個月，優(yōu)選6個月左右形成大鼠前胃的扁平上皮增生。本發(fā)明中“扁平上皮癌”這一術(shù)語除了形態(tài)學(xué)上可識別的典型的扁平上皮癌之外還包括扁平上皮的增生病變。
[0058]本發(fā)明的模型動物發(fā)生病變之后，可采取該病變部位的一部分來判定病理組織學(xué)上的前癌病變。例如，如果將組織進行蘇木精-伊紅染色(HE染色)發(fā)現(xiàn)扁平上皮有乳頭狀增殖的表現(xiàn)，則能夠證明在病變部位形成增生。另外，發(fā)現(xiàn)從增生向連續(xù)性浸潤增殖的病變，證明結(jié)構(gòu)異型性或核異型性也能夠確認(rèn)癌細胞的存在。
[0059]通過本發(fā)明的方法制作的載有扁平上皮癌的模型動物可用于扁平上皮癌的治療藥的篩選。對模型動物經(jīng)口給予或非經(jīng)口給予被檢物質(zhì)，例如通過觀察癌病變部位的縮小、癌的發(fā)展抑制等治療效果，能夠篩選對扁平上皮癌的治療有用的物質(zhì)。模型動物制作時，可以預(yù)先給予被檢 物質(zhì)，然后強制經(jīng)口給予人白色念珠菌，也能夠進行扁平上皮癌的預(yù)防藥的篩選。
[0060]此外，本發(fā)明的模型動物，對于由人白色念珠菌的感染引起的扁平上皮癌發(fā)病的機制的闡明、扁平上皮癌的治療方法和預(yù)防方法的研究也是有用的。
[0061]實施例
[0062]以下，舉出實施例更詳細地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不局限于此。應(yīng)予說明，實施例中“ ％ ”的表示除特別規(guī)定的情況外表示重量％。
[0063][實施例1]疾病模型的確立
[0064]用阿脲誘發(fā)糖尿病之后立即實驗性給予人白色念珠菌，嘗試早期炎癥和增殖性病變的誘發(fā)。
[0065]對10周齡的雌WBN/Kob大鼠,將阿脲(Sigma公司)以40mg/kg的給予量通過尾靜脈進行單次給予，經(jīng)過2周時間確認(rèn)糖尿病的狀態(tài)。對沒有糖尿病發(fā)病的動物，再次給予阿脲，使糖尿病發(fā)病。分組構(gòu)成如表1所示，使用以下分組:誘發(fā)糖尿病之后強制經(jīng)口給予人白色念珠菌^XlO7個/mL)的組(AC組、15只)，誘發(fā)糖尿病之后沒有強制經(jīng)口給予人白色念珠菌的組(A組、14只)，以及沒有給予阿脲僅進行人白色念珠菌的強制經(jīng)口給予的組(C組、10只)。AC組中，給予阿脲后2周內(nèi)，將用生理鹽水將人白色念珠菌稀釋為6 X 17個/mL而得的被檢測物質(zhì)以每只lmL、每周3次進行強制經(jīng)口給予。然后，以每周I次的頻率給予8周，總計10周，強制經(jīng)口給予14次。所有的組均在人白色念珠菌給予后25周實施剖檢，對上部消化道進行病理組織學(xué)的觀察。應(yīng)予說明，人白色念珠菌使用了從于2008年2月解剖的F344阿脲雄1896的具有增殖性病變的胃中采取并在攝南大學(xué)藥學(xué)部病理學(xué)研究室培養(yǎng).保管的活菌。
[0066][表1]
[0067]
【權(quán)利要求】
1.一種由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，其特征在于，以用保加利亞乳桿菌、 嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得的發(fā)酵物作為有效成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，其中，發(fā)酵物是 將保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌與奶配合進行發(fā)酵之后配合格氏乳桿菌而得的發(fā)酵乳。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑，其中，格氏乳 桿菌是格氏乳桿菌0LL2716株，保藏號為FERM BP-6999。
4.根據(jù)權(quán)利要求I?3中的任一項所述的由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑， 其中，扁平上皮是口腔和/或食道的扁平上皮。
5.用保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得的發(fā)酵物在制造由 念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防劑中的應(yīng)用。
6.一種發(fā)酵物，其用于預(yù)防由念珠菌感染引起的扁平上皮癌，是用保加利亞乳桿菌、嗜 熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得到的。
7.一種由念珠菌感染引起的扁平上皮癌的預(yù)防方法，其特征在于，給予或攝取發(fā)酵物， 該發(fā)酵物是用保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和格氏乳桿菌將奶進行發(fā)酵而得到的。
8.一種扁平上皮癌模型動物的制作方法，其特征在于，包含對糖尿病發(fā)病模型動物強 制經(jīng)口給予人白色念珠菌的工序，所述糖尿病發(fā)病模型動物是通過給予糖尿病誘發(fā)物質(zhì)而 誘發(fā)糖尿病的。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制作方法，其中，動物是大鼠。
10.一種扁平上皮癌模型動物，是利用權(quán)利要求8或9所述的方法而制作的。
11.一種扁平上皮癌的預(yù)防劑和/或治療劑的篩選方法，其特征在于，包含對權(quán)利要求 10所述的扁平上皮癌模型動物給予被檢物質(zhì)，觀察扁平上皮癌病變部位的變化的工序。
【文檔編號】A23L1/30GK104023546SQ201280064271
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月26日
【發(fā)明者】尾崎清和, 內(nèi)田勝幸, 松浦哲郎 申請人:株式會社明治, 學(xué)校法人常翔學(xué)園