專利名稱：小鼠S₁₈₀肝癌動(dòng)物模型的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及疾病的動(dòng)物模型，具體地說(shuō)是小白鼠肝癌動(dòng)物模型的建立方法。
背景技術(shù)：
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當(dāng)前，肝癌動(dòng)物模型有誘發(fā)性肝癌模型、移植性肝癌模型及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物肝 癌模型。①自發(fā)性肝癌動(dòng)物模型多選用近交系小鼠，由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬、品系 的不同，腫瘤發(fā)生類型和發(fā)病率有很大差異，造模有一定的困難。②誘發(fā)性肝 癌動(dòng)物模型多選用敏感性高的純系大鼠。該模型特點(diǎn)為起病隱匿、病程較長(zhǎng)， 腫瘤多為彌漫結(jié)節(jié)型，誘導(dǎo)周期長(zhǎng)，在誘癌過(guò)程中動(dòng)物的死亡率相對(duì)較高。③
轉(zhuǎn)基因動(dòng)物肝癌模型多用CD1、 C57BL/6xDBA、 C57BL / 6xSJL等品系小鼠。 但因制作技術(shù)要求極高，價(jià)格昂貴，國(guó)內(nèi)開展的尚較少。上述肝癌動(dòng)物模型不 是理想的肝癌研究模型。
人類腫瘤轉(zhuǎn)移模型的原位種植或/移植是目前公認(rèn)的研究中藥及其有效成分 對(duì)人類癌腫生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移等機(jī)制研究不可缺少的主要手段。目前有關(guān)人腫 瘤轉(zhuǎn)移模型大多是用裸大鼠、裸小鼠，但技術(shù)要求高，且飼養(yǎng)困難、價(jià)格昂貴。 動(dòng)物腫瘤則多數(shù)是用Wistar或SD大鼠建立的。小鼠經(jīng)濟(jì)、易于飼養(yǎng)、易獲得， 是醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究的非常理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。目前，小鼠廣泛應(yīng)用于鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn) 痛、抗炎、糖尿病、抗腫瘤等方面的研究。在抗腫瘤研究方面，小鼠常用作腹 水癌和皮下實(shí)體瘤的動(dòng)物模型，也有用H22肝癌細(xì)胞接種小鼠肝臟制作BALB/c 小鼠肝癌模型的報(bào)道，但該模型未能切實(shí)應(yīng)用于肝癌研究。當(dāng)前，國(guó)內(nèi)外均未 見應(yīng)用S，細(xì)胞株建立小白鼠肝癌模型的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是公開一種簡(jiǎn)便易于復(fù)制，且周期短，成功率高的小白鼠肝 癌動(dòng)物模型及建立方法。
本發(fā)明目的通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn) 建立小鼠肝癌模型的方法包括如下步驟
①運(yùn)用S削細(xì)胞接種于昆明種(KM)小鼠腹腔，建立KM小鼠S!8o腹水癌動(dòng) 物模型；
② 無(wú)菌抽取S^腹水癌小鼠的腹水，離心，棄上清，用滅菌的生理鹽水洗2
③ 用生理鹽水制成5.0xl06 5,107細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液； 每只0.05 0.2 ml，種植于KM小鼠肝臟，3~4天后即見到種植肝葉變成腫瘤，灰白色，與肝組織間界線模糊的肝癌腫塊?？衫奂班徑稳~。該小鼠平 均壽命為1 2周。或?qū)⒓?xì)胞接種于KM小鼠皮下，制成小鼠皮下肉瘤模型。
⑤無(wú)菌取出上述肝腫瘤小鼠的腫瘤肝葉或皮下肉瘤，切成1 2mmxl 2mm 的小塊，打開受試小鼠腹腔，種植于肝臟，l周后即可出現(xiàn)黃豆粒大小(直徑為 0.5 mm 0.9 mm)的與正常肝組織界限清晰的肝腫塊。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于應(yīng)用移植法制作小鼠肝癌，周期短，成本低，可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均帶有同樣的 腫瘤，其生長(zhǎng)速度也較為一致，個(gè)體差異較小，成功率高達(dá)95%以上。較異位 移植模型能夠更好地模仿人肝癌在體內(nèi)的血供和生長(zhǎng)環(huán)境，未發(fā)現(xiàn)自發(fā)性消退， 適用于對(duì)肝癌的實(shí)驗(yàn)性治療及侵襲與轉(zhuǎn)移等機(jī)制方面的研究。
具體實(shí)施例方式
先運(yùn)用S180細(xì)胞接種于昆明種(KM)小鼠腹腔，建立KM小鼠S哪腹水癌動(dòng) 物模型，然后無(wú)菌抽取S哪腹水癌小鼠的腹水，離心，5分鐘，每分鐘1000轉(zhuǎn)， 后棄上清，用滅菌的生理鹽水洗2次，再用生理鹽水制成5.0x(10)6細(xì)胞/ml的細(xì) 胞懸液，種植于小鼠肝臟，0.1 m1/只，1 2周后即見到種植肝葉變成腫瘤，灰 白色，與肝組織間界線模糊的肝癌腫塊?？衫奂班徑稳~?；?qū)⒓?xì)胞接種于KM 小鼠皮下，制成小鼠皮下肉瘤模型。無(wú)菌取出上述小鼠腫瘤肝葉或皮下肉瘤， 切成l 2mmxl 2mm的小塊，打開受試小鼠腹腔，種植于肝臟。1周后出現(xiàn)黃 豆粒大小(直徑為0.5cm 0.9cm)的與正常肝組織界限清晰的肝腫塊。
實(shí)驗(yàn)表明，小鼠原位移植性肝癌模型是一種較好的腫瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀Ｔ?模型具有簡(jiǎn)便而易于復(fù)制、周期短、成功率高等特點(diǎn)，是一種理想的肝癌動(dòng)物模型。
權(quán)利要求
1.小鼠S180肝癌動(dòng)物模型的建立方法，其特征是建立方法包括如下步驟(1)先運(yùn)用S180細(xì)胞接種于昆明種(KM)小鼠腹腔，建立KM小鼠S180腹水癌動(dòng)物模型；(2)無(wú)菌抽取S180腹水癌小鼠的腹水，離心，收集S180細(xì)胞，用滅菌的生理鹽水洗2次；(3)用生理鹽水制成5.0×106～5.0×107細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液；(4)每只0.05～0.2ml，種植于KM小鼠肝臟，3～4天后即見到與肝組織間界線模糊的肝癌腫塊，或?qū)⒓?xì)胞接種于KM小鼠皮下，制成小鼠皮下肉瘤模型；(5)無(wú)菌取出上述腫瘤肝葉或皮下肉瘤，切成小塊，種植于受試小鼠肝臟，1周后出現(xiàn)黃豆粒大小與正常肝組織界限清晰的肝腫塊。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠S，肝癌動(dòng)物模型的建立方法，其特征是 步驟(5)所述的腫瘤肝葉或皮下肉瘤小塊為1 2mmxl 2mm大小。
3. 權(quán)利要求1-2所述的建立方法建立的小鼠S，肝癌動(dòng)物模型。
全文摘要
本發(fā)明公開了小鼠S₁₈₀肝癌模型的建立方法，其特征是運(yùn)用S₁₈₀細(xì)胞接種于昆明種(KM)小鼠腹腔或皮下，建立KM小鼠腹水癌動(dòng)物模型，再抽取腹水癌小鼠的腹水，離心棄上清，用生理鹽水洗2次，然后用生理鹽水制成1.0×10⁶～5.0×10⁷細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液，種植于小鼠肝臟，3～4天后即可見到與肝組織間界線模糊的肝癌腫塊，或?qū)⒓?xì)胞接種于KM小鼠皮下，制成小鼠皮下肉瘤模型，無(wú)菌取出上述小鼠腫瘤肝葉和肉瘤，切成小塊，種植于受試小鼠肝臟，1周后出現(xiàn)黃豆粒大小與正常肝組織界限清晰的肝腫塊。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于模型具有簡(jiǎn)便而又易于復(fù)制，周期短，成功率高，為肝癌的深入研究提供了良好的研究平臺(tái)。
文檔編號(hào)C12N5/06GK101343621SQ20071004955
公開日2009年1月14日 申請(qǐng)日期2007年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月12日
發(fā)明者慶 徐, 戴支凱, 李利亞, 梁榮感 申請(qǐng)人:桂林醫(yī)學(xué)院